CN114807084A - 突变型Tn5转座酶及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种突变型Tn5转座酶及试剂盒，属于生物技术领域。本发明在野生型Tn5转座酶的基础上，具有下述五个氨基酸位点突变：R26W、E54K、R62P、D156K和L372P，以及S19R、N204K、S267T三个突变点中至少2个突变点，所述野生型Tn5转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还涉及所述突变型Tn5转座酶在文库构建中的应用。与野生型Tn5酶相比，本发明所提供的突变型Tn5转座酶的活性显著提高，对DNA序列的偏好性显著降低，可以无偏好识别dsDNA及DNA/RNA杂交链，2.5h左右可以实现任意(0.1ng～50ng)投入量建库，可以满足多种高通量测序建库的需求。
Description
技术领域
本发明涉及一种突变型Tn5转座酶及试剂盒，属于生物技术领域。
背景技术
随着生命科学的发展，我们需要分析多物种的遗传信息，NGS又称高通量测序，可以一次性读取几十万到几百万条DNA分子的序列，能提供丰富的遗传学信息。而NGS的首要步骤是文库制备，文库制备对于NGS工作流程至关重要。该步骤会制备出兼容测序仪的DNA或RNA样本。通常会先对DNA进行片段化处理，然后再向两端添加特定的接头来构建测序文库。
目前DNA片段化的方法主要分为物理打断或酶切打断法。而酶切打断法因其高效、便捷、经济越来越成为NGS建库的首选方法。而转座酶能同时完成DNA片段化和接头的添加，从而减少样品处理步骤，节约时间。
转座子是存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。由转座子编码的执行转座功能的酶叫转座酶，可以识别转座子两端的特异序列，能把转座子从相邻序列中脱离出来，再插入到新的DNA靶位点，无同源性要求。Tn5转座子是众多转座子中的一种，由编码三个抗生素：新霉素、博莱霉素、链霉素的核心序列和两条倒置的IS50序列：IS50L和IS50R组成。IS50具有19bp的倒置末端(外末端outside end，OE和内末端inside end，IE)，两倒置末端有7个bp不同，此倒置末端是转座酶(Tnp)的作用位点。IS50基因编码的转座酶(Tnp)结合到Tn5转座子的OE末端，形成两个Tnp-OE复合体，随后两个复合体联会，末端相互作用而二聚体化，形成由一个二聚体蛋白质和两分子DNA组成的联会复合体，此时的Tnp才具有剪切活性。将测序接头序列加入末端核心序列中，可简捷地引入测序接头，完成文库构建。
然而野生型Tn5转座酶反应效率低并存在显著的偏好性，在高通量测序建库时会造成大量目标产物损失，降低测序覆盖度。现有Tn5转座酶建库对核酸样本投入量有较为严格的要求，都是固定投入量建库。因此筛选一种高效的、低偏好性的Tn5转座酶对于NGS建库尤为重要。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效的突变型Tn5转座酶，降低对DNA序列的偏好性、提高建库的均一性和覆盖度。
本发明采用的技术方案为：一种突变型Tn5转座酶，在野生型Tn5转座酶的基础上，具有下述五个氨基酸位点突变：R26W(第26位的精氨酸突变为色氨酸)、E54K(第54位谷氨酸突变为赖氨酸)、R62P(第62位的精氨酸突变为脯氨酸)、D156K(第156位的天冬氨酸突变为赖氨酸)和L372P(第372位的亮氨酸突变为脯氨酸)，以及下述三个氨基酸位点突变点中至少两个突变点：S19R(第19位的丝氨酸突变为精氨酸)、N204K(第204位的天冬酰胺突变为赖氨酸)、S267T(第267位的丝氨酸突变为苏氨酸)；所述野生型Tn5转座酶的氨基酸序列如SEQID NO：1所示。所述突变型Tn5转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：4或SEQ ID NO：5所示。
优选的，所述突变型Tn5转座酶为：在野生型Tn5转座酶的基础上，具有下述的氨基酸位点突变：S19R、R26W、E54K、R62P、D156K、N204K、S267T和L372P，其氨基酸序列如SEQ IDNO：5所示，其编码DNA序列如SEQ ID NO：6所示。
本发明还公开了所述突变型Tn5转座酶在文库构建中的应用。
本发明还公开了一种快速核酸建库试剂盒，包含上述突变型Tn5转座酶。
优选的，本发明所述快速核酸建库试剂盒包括如下试剂组分：
第一链cDNA合成的逆转录酶、反应缓冲液和随机引物；
上述突变型Tn5转座酶和片段化反应缓冲液；
文库扩增的酶和引物。
进一步的，所述第一链cDNA合成的逆转录酶的使用量为100～300U，优选200U。
进一步的，所述第一链cDNA合成的随机引物是4～10个核苷酸的寡核苷酸片段。
进一步的，所述突变型Tn5转座酶的使用量为1U～3U，优选2U。
进一步的，所述片段化反应缓冲液为每个反应：15～25mM pH8.0的Tris-HCl，20～25mM MgCl2；优选20mM pH8.0的Tris-HCl，20mM MgCl2。
本发明提供的突变型Tn5转座酶显著降低了对DNA/RNA杂交链识别的偏好性、提高了建库的均一性和覆盖度，可以无偏好地识别dsDNA及DNA/RNA杂交链。本发明的快速核酸建库试剂盒，2.5h左右可以实现任意(0.1ng～50ng)投入量建库，相比于现有技术采用固定投入量建库，建库更高效，可满足多种高通量测序建库的需求。
附图说明
图1本发明的建库流程。
图2本发明的利用突变型Tn5转座酶8的不同投入量的RNA建库文库质检。
图3本发明的利用野生型Tn5转座酶的不同投入量的RNA建库文库质检。
图4本发明的DNA/RNA共建库文库质检。
图5本发明的不同投入量的病原微生物DNA建库文库质检。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式做进一步说明，此处表述的具体实施例仅适用于解释本发明，而不是对本发明内容的限定。以下实施例中使用的实验方法如无特殊说明，均为常规实验方法；所涉及的原料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1：突变型Tn5转座酶的获得
野生型Tn5转座酶，反应效率低并存在显著的偏好性，在高通量测序建库时会造成大量目标产物损失，降低测序覆盖度。
本申请在野生型Tn5转座酶的基础上进行位点突变，氨基酸突变位点为：R26W、E54K、R62P、D156K和L372P，以及S19R和/或N204K和/或S267T。所述野生型Tn5转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成了表1所示突变体1-8及野生型Tn5转座酶的编码DNA，将突变体1-8、野生型Tn5转座酶的编码基因进行蛋白表达，得到突变型Tn5转座酶1-8和野生型Tn5转座酶。将在55℃条件下，1h完全片段化1μg小牛gDNA所需的Tn5转座酶的酶量定义为一个酶活力单位(U)。
其中，突变体5-8的氨基酸序列如SEQ ID NO:2-SEQ ID NO:5所示，突变体8编码基因DNA序列如SEQ ID NO:6所示。利用突变型Tn5转座酶1-8及野生型Tn5转座酶进行RNA文库构建，建库结果如表1所示。
与野生型Tn5转座酶相比，突变型Tn5转座酶的RNA建库效率更高；在得到相同文库产量的前提下，在突变体1的基础上，还含有S19R、N204K、S267T三个氨基酸位点突变的任意两种或三种组合的Tn5转座酶需要更少的文库扩增循环数，其中，以同时包含了S19R、N204K、S267T三个氨基酸位点突变的突变体8效果尤其显著。
表1：不同Tn5转座酶突变体及野生型Tn5转座酶RNA建库文库产量
实施例2：突变型Tn5转座酶8在RNA建库中的应用
本实施案例是利用293细胞系(购于武汉普诺赛生命科技有限公司)提取的RNA进行如下所示的建库流程分析。
先进行RNA变性处理，变性体系及变性条件见表2；再合成第一链cDNA，合成条件见表3；然后参照翌圣生物科技(上海)股份有限公司的
Fast TagmentDNALibrary Prep Kit for
(Cat#12207)建库试剂盒(以下简称：12207建库试剂盒)说明书进行总RNA的建库。利用实施例1记载的突变体8即突变型Tn5转座酶8及野生型Tn5转座酶进行建库测试，快速RNA建库流程参照图1，具体如下：
1)取0.1ng、1ng、10ng、50ng总RNA进行RNA变性处理：
表2：RNA变性体系及变性条件
2)第一链cDNA的合成：
表3：第一链cDNA合成的反应体系及反应条件
表3中所述第一链cDNA合成的反应缓冲液为：150mM Tris-HClpH 8.3，12mMMgCl2，200mM KCl，15mM DTT，1.5mM dNTPs；第一链cDNA合成的逆转录酶Mix为：200U第一链cDNA合成的逆转录酶(Hifair V Reverse Transcriptase,Yeasen Cat#11300)和第一链cDNA合成的抑制剂：40U Murine RNase Inhibitor(Yeasen Cat#10603)。
3)利用突变型Tn5转座酶8及野生型Tn5转座酶进行cDNA片段化及接头添加，其中，突变型Tn5转座酶8和野生型Tn5转座酶的使用量均是2U每个反应；
反应体系和条件如表4：
表4：cDNA片段化及接头添加的反应体系及反应条件
5x片段化反应缓冲液为：100mM pH8.0的Tris-HCl，100mM MgCl2。
4)参照12207建库试剂盒的片段化产物纯化步骤，进行1.0×的磁珠纯化，磁珠来自于翌圣生物科技(上海)股份有限公司的Hieff
DNA Selection Beads分选磁珠(Cat#12601)，最后使用22μL的ddH2O进行洗脱，最后取20μL进行文库的扩增反应。
5)参照12207建库试剂盒的文库扩增体系，进行文库扩增反应，其中：N5xx和N7xx来源：Hieff
Tagment Index Kit for
(96Index)，货号：Cat#12610，选择任意N5xx和N7xx；文库扩增的酶使用2×Hieff
ⅡHigh-Fidelity Mix for LibraryAmplification(Cat#12620)，反应体系和反应条件见表5：
表5：文库扩增反应体系及反应条件
表6：PCR Primer Mix序列
| Primer名称 | 序列(5'to3') |
| PrimerA: | 5'-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-NH3-3' |
| PrimerB: | 5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′ |
| PrimerC: | 5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′ |
6)扩增完成进行1.0×磁珠(Cat#12601)纯化，使用25μL ddH2O进行洗脱，取20μL进行文库质检，如图2，图3所示，野生型Tn5转座酶的RNA建库存在接头残留。利用突变型Tn5转座酶8进行的不同投入量的RNA建库文库产量及测序数据分析如表7所示，表6中1#和2#、3#和4#、5#和6#、7#和8#是平行实验。利用野生型Tn5转座酶进行的不同投入量的RNA建库文库及测序数据分析如表8所示，表7中1#和2#、3#和4#、5#和6#、7#和8#是平行实验。根据表7和表8的建库及测序数据分析发现，突变型Tn5转座酶8相比野生型利用RNA/DNA杂交链的建库效率更高，相同投入量的RNA建库，文库扩增循环数降低了5～6个，测序质量好，基因检出数目较多；并且，本发明可以在2.5h左右实现任意(0.1ng～50ng)投入量建库，使得本发明所提供的试剂盒使用更简便，简化建库流程。所以，本发明的高效的突变型Tn5转座酶8对RNA的建库效率更高，测序质量更好，对RNA/DNA杂交链的作用效果更好。
表7：不同投入量的RNA建库文库产量
表8：不同投入量的RNA建库文库产量
实施例3：突变型Tn5转座酶8在DNA/RNA共建库中的应用
本实施例是利用293细胞系总293细胞系(购于武汉普诺赛生命科技有限公司)提取的RNA和小牛gDNA(195129-Deoxyribonucleic acid,sodium salt,from calf thymus-50mg-MP-1)进行如下所示的建库流程分析。
先进行RNA变性处理，变性体系及变性条件见表9；再合成第一链cDNA，合成条件见表10；然后参照翌圣生物科技(上海)股份有限公司的Hieff
Fast Tagment DNALibrary Prep Kit for
(Cat.12207)建库试剂盒说明书进行DNA/RNA共建库。利用实施例1记载的突变型Tn5转座酶8及野生型Tn5转座酶，进行快速DNA/RNA共建库，建库流程参照图1，进行建库测试：
1)在0ng、0.1ng、1ng、10ng 293细胞总RNA中各加入10ng小牛gDNA进行RNA变性处理：
表9：RNA变性体系及变性条件
2)1st cDNA合成：
表10：1st cDNA合成的反应体系及反应条件
表10中所用第一链cDNA合成的反应缓冲液和第一链cDNA合成的逆转录酶Mix与实施例2相同。
3)利用突变型Tn5转座酶8及野生型Tn5转座酶进行cDNA和DNA片段化及接头添加：
表11：cDNA和DNA片段化及接头添加的反应体系及反应条件
其中，5x片段化反应缓冲液为：100mM pH8.0的Tris-HCl，100mM MgCl2。
4)参照12207建库试剂盒的片段化产物纯化步骤，进行1.0×的磁珠(Cat#12601)纯化，再使用22μL的ddH2O进行洗脱，最后取20μL进行文库的扩增反应。
5)参照12207建库试剂盒的文库扩增体系，进行文库扩增反应：
表12：文库扩增反应体系及反应条件
扩增完成进行1.0×磁珠(Cat#12601)纯化，使用30μL ddH2O进行洗脱，取25μL进行文库质检，如图4所示。利用突变型Tn5转座酶8及野生型Tn5转座酶进行不同投入量的DNA/RNA共建库文库产量及测序数据分析如表13所示，1#～4#是利用突变型Tn5转座酶8建库，5#～8#是利用野生型Tn5转座酶的建库。根据表13的建库数据及测序数据对比分析发现，突变型Tn5转座酶8的人源数据量占比基本符合核酸投入比，但是野生型人源数据量占比都较低，说明突变型Tn5转座酶8对dsDNA及DNA/RNA杂交链的识别偏好性较低。
表13：不同投入量的DNA/RNA共建库文库产量
实施例4：突变型Tn5转座酶8在病原微生物检测中的应用
本实施例是利用突变型Tn5转座酶8对病原微生物的全基因组进行建库。
1)利用天根生化科技(北京)有限公司的磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒(cat#DP703)进行病原微生物DNA提取。病原微生物提取样本来源于实验室工作人员的口腔。具体为，随机采集三名工作人员口腔拭子，用天根生化科技(北京)有限公司的磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒(cat#DP703)提取DNA样本之后，将三份样本进行混合，然后测定浓度之后进行后续建库实验。
2)利用突变型Tn5转座酶8进行DNA片段化及接头添加：
表14：DNA片段化及接头添加的反应体系及反应条件
其中，5x片段化反应缓冲液为：100mM pH8.0的Tris-HCl，100mM MgCl2。
3)参照12207建库试剂盒的片段化产物纯化步骤，进行1.0×的磁珠(Cat#12601)纯化，最后使用22μL的ddH2O进行洗脱，最后取20μL进行文库的扩增反应。
4)参照12207建库试剂盒的文库扩增体系，进行文库扩增反应：
表15：文库扩增反应体系及反应条件
5)扩增完成进行1.0×磁珠(Cat#12601)纯化，使用30μL ddH2O进行洗脱，取25μL进行文库质检，图5所示。不同投入量的病原微生物DNA建库文库产量及测序数据分析如表16所示，病原检出情况如表16所示，不同投入量建库，相近测序数据量，病原检出一致性较高。以上案例说明本专利的建库方法是可以用于病原的快速检测领域。
表16：不同投入量的病原微生物DNA建库文库产量及测序数据分析
| 实验编号 | 1# | 2# | 3# |
| Input DNA | 1ng | 10ng | 50ng |
| 文库扩增循环数 | 11 cc | 8cc | 7cc |
| 文库浓度(ng/μL) | 48.2 | 51.6 | 44.8 |
| 文库产量(ng) | 1446 | 1548 | 1344 |
| 测序数据量(G) | 1.5799 | 1.6745 | 1.7811 |
| 原始数据Q30 | 92.4592 | 92.3517 | 92.6639 |
| 基因比对比 | 98.92 | 98.71 | 97.29 |
| 基因数目 | 16036 | 15662 | 16680 |
| 测序数据量(G) | 1.5799 | 1.0745 | 1.7811 |
| 口腔链球菌(Reads) | 30 | 31 | 33 |
| 轻型链球菌(Reads) | 4 | 5 | 4 |
| 葡萄球菌(Reads) | 150 | 144 | 151 |
| 链球菌属(Reads) | 1001 | 1008 | 975 |
| 丙酸棒杆菌(Reads) | 10 | 9 | 9 |
序列表
<110> 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
<120> 突变型Tn5转座酶及试剂盒
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 476
<212> PRT
<213> 野生型(Tn5转座酶)
<400> 1
Met Ile Thr Ser Ala Leu His Arg Ala Ala Asp Trp Ala Lys Ser Val
1 5 10 15
Phe Ser Ser Ala Ala Leu Gly Asp Pro Arg Arg Thr Ala Arg Leu Val
20 25 30
Asn Val Ala Ala Gln Leu Ala Lys Tyr Ser Gly Lys Ser Ile Thr Ile
35 40 45
Ser Ser Glu Gly Ser Glu Ala Ala Gln Glu Gly Ala Tyr Arg Phe Ile
50 55 60
Arg Asn Pro Asn Val Ser Ala Glu Ala Ile Arg Lys Ala Gly Ala Met
65 70 75 80
Gln Thr Val Lys Leu Ala Gln Glu Phe Pro Glu Leu Leu Ala Ile Glu
85 90 95
Asp Thr Thr Ser Leu Ser Tyr Arg His Gln Val Ala Glu Glu Leu Gly
100 105 110
Lys Leu Gly Ser Ile Gln Asp Lys Ser Arg Gly Trp Trp Val His Ser
115 120 125
Val Leu Leu Leu Glu Ala Thr Thr Phe Arg Thr Val Gly Leu Leu His
130 135 140
Gln Glu Trp Trp Met Arg Pro Asp Asp Pro Ala Asp Ala Asp Glu Lys
145 150 155 160
Glu Ser Gly Lys Trp Leu Ala Ala Ala Ala Thr Ser Arg Leu Arg Met
165 170 175
Gly Ser Met Met Ser Asn Val Ile Ala Val Cys Asp Arg Glu Ala Asp
180 185 190
Ile His Ala Tyr Leu Gln Asp Lys Leu Ala His Asn Glu Arg Phe Val
195 200 205
Val Arg Ser Lys His Pro Arg Lys Asp Val Glu Ser Gly Leu Tyr Leu
210 215 220
Tyr Asp His Leu Lys Asn Gln Pro Glu Leu Gly Gly Tyr Gln Ile Ser
225 230 235 240
Ile Pro Gln Lys Gly Val Val Asp Lys Arg Gly Lys Arg Lys Asn Arg
245 250 255
Pro Ala Arg Lys Ala Ser Leu Ser Leu Arg Ser Gly Arg Ile Thr Leu
260 265 270
Lys Gln Gly Asn Ile Thr Leu Asn Ala Val Leu Ala Glu Glu Ile Asn
275 280 285
Pro Pro Lys Gly Glu Thr Pro Leu Lys Trp Leu Leu Leu Thr Ser Glu
290 295 300
Pro Val Glu Ser Leu Ala Gln Ala Leu Arg Val Ile Asp Ile Tyr Thr
305 310 315 320
His Arg Trp Arg Ile Glu Glu Phe His Lys Ala Trp Lys Thr Gly Ala
325 330 335
Gly Ala Glu Arg Gln Arg Met Glu Glu Pro Asp Asn Leu Glu Arg Met
340 345 350
Val Ser Ile Leu Ser Phe Val Ala Val Arg Leu Leu Gln Leu Arg Glu
355 360 365
Ser Phe Thr Leu Pro Gln Ala Leu Arg Ala Gln Gly Leu Leu Lys Glu
370 375 380
Ala Glu His Val Glu Ser Gln Ser Ala Glu Thr Val Leu Thr Pro Asp
385 390 395 400
Glu Cys Gln Leu Leu Gly Tyr Leu Asp Lys Gly Lys Arg Lys Arg Lys
405 410 415
Glu Lys Ala Gly Ser Leu Gln Trp Ala Tyr Met Ala Ile Ala Arg Leu
420 425 430
Gly Gly Phe Met Asp Ser Lys Arg Thr Gly Ile Ala Ser Trp Gly Ala
435 440 445
Leu Trp Glu Gly Trp Glu Ala Leu Gln Ser Lys Leu Asp Gly Phe Leu
450 455 460
Ala Ala Lys Asp Leu Met Ala Gln Gly Ile Lys Ile
465 470 475
<210> 2
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Ile Thr Ser Ala Leu His Arg Ala Ala Asp Trp Ala Lys Ser Val
1 5 10 15
Phe Ser Arg Ala Ala Leu Gly Asp Pro Trp Arg Thr Ala Arg Leu Val
20 25 30
Asn Val Ala Ala Gln Leu Ala Lys Tyr Ser Gly Lys Ser Ile Thr Ile
35 40 45
Ser Ser Glu Gly Ser Lys Ala Ala Gln Glu Gly Ala Tyr Pro Phe Ile
50 55 60
Arg Asn Pro Asn Val Ser Ala Glu Ala Ile Arg Lys Ala Gly Ala Met
65 70 75 80
Gln Thr Val Lys Leu Ala Gln Glu Phe Pro Glu Leu Leu Ala Ile Glu
85 90 95
Asp Thr Thr Ser Leu Ser Tyr Arg His Gln Val Ala Glu Glu Leu Gly
100 105 110
Lys Leu Gly Ser Ile Gln Asp Lys Ser Arg Gly Trp Trp Val His Ser
115 120 125
Val Leu Leu Leu Glu Ala Thr Thr Phe Arg Thr Val Gly Leu Leu His
130 135 140
Gln Glu Trp Trp Met Arg Pro Asp Asp Pro Ala Lys Ala Asp Glu Lys
145 150 155 160
Glu Ser Gly Lys Trp Leu Ala Ala Ala Ala Thr Ser Arg Leu Arg Met
165 170 175
Gly Ser Met Met Ser Asn Val Ile Ala Val Cys Asp Arg Glu Ala Asp
180 185 190
Ile His Ala Tyr Leu Gln Asp Lys Leu Ala His Lys Glu Arg Phe Val
195 200 205
Val Arg Ser Lys His Pro Arg Lys Asp Val Glu Ser Gly Leu Tyr Leu
210 215 220
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<211> 1431
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
atgatcacga gtgccttaca tcgcgcggcc gattgggcca aaagtgtgtt ttcaagagct 60
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tatagcggca aaagtattac aatctctagt gaaggtagta aagctgcgca ggaaggtgcc 180
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ttaagttatc gtcatcaggt tgccgaagaa ctgggcaaat taggtagtat ccaggataaa 360
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gccgtgttag cggaagaaat taatcctcct aaaggcgaaa caccactgaa atggctgctg 900
ctgacaagtg aaccagttga atctttagca caggcactgc gcgtgatcga tatatataca 960
catcgttggc gtatcgaaga atttcataaa gcatggaaaa ccggcgcggg cgcggaacgt 1020
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gaatgtcagt tattaggtta tttagataaa ggcaaacgca aacgcaaaga aaaagccggc 1260
tcattacagt gggcctatat ggcgattgca cgcttaggcg gttttatgga ttctaaacga 1320
acgggcattg cctcttgggg tgccctgtgg gaaggttggg aagcactcca gagcaaactg 1380
gatggctttc tggccgccaa agatttaatg gcccagggta tcaaaatcta a 1431
Claims (9)
1.一种突变型Tn5转座酶，其特征为：在野生型Tn5转座酶的基础上，具有下述五个氨基酸位点突变：R26W、E54K、R62P、D156K和L372P，以及S19R、N204K、S267T三个突变点中至少2个突变点；所述野生型Tn5转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.根据权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征为：所述突变型Tn5转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5所示。
3.根据权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征为：所述突变型Tn5转座酶的编码DNA序列如SEQ ID NO：6所示。
4.权利要求1所述的突变型Tn5转座酶在文库构建中的应用。
5.一种快速核酸建库试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的突变型Tn5转座酶。
6.根据权利要求5所述的快速核酸建库试剂盒，其特征在于，试剂组分还包括：
第一链cDNA合成的逆转录酶、反应缓冲液和随机引物；
片段化反应缓冲液；
文库扩增的酶和引物。
7.根据权利要求6所述的快速核酸建库试剂盒，其特征在于，所述第一链cDNA合成的逆转录酶的使用量是100～300U。
8.根据权利要求6所述的快速核酸建库试剂盒，其特征在于，所述第一链cDNA合成的随机引物是4～10个核苷酸的寡核苷酸片段；所述突变型Tn5转座酶的使用量是每个反应1U～3U。
9.根据权利要求6所述的快速核酸建库试剂盒，其特征在于，所述片段化反应缓冲液为每个反应：20mM pH8.0的Tris-HCl，20～25mM MgCl2。
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