CN114793898A - 一种铁皮石斛原球茎的播种方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及兰科石斛属植物种植技术领域，具体涉及一种铁皮石斛原球茎的播种方法。具体技术方案为：一种铁皮石斛原球茎的播种方法，将成熟未开裂的铁皮石斛蒴果消毒杀菌后将其切开，并将种子放入到萌发培养基中进行培养；将培养后的种子与羧甲基纤维素钠和新高脂膜混匀，获得原球茎悬浮液；再将原球茎悬浮液播种至基质上进行培养。本发明根据铁皮石斛的生长特性和形态特征，充分利用并结合铁皮石斛在大棚栽培和林下栽培的生长特点，优化铁皮石斛的栽培模式，增加收益。

Description

一种铁皮石斛原球茎的播种方法

技术领域

本发明涉及兰科石斛属植物种植技术领域，具体涉及一种铁皮石斛原球茎的播种方法。

背景技术

铁皮石斛是我国传统的名贵中药材，性微寒、味甘，中医将其归为肾、胃、肺经，清热滋阴、益胃生津、名目强腰，可治口干食少、阴伤虚热等证候，具有养阴生津、润喉护嗓、温胃明目、补肾益力、延年益寿等功效。现有的研究表明，铁皮石斛具有提高机体免疫力、抗肿瘤活性及降血糖作用。鲜铁皮石斛提取液可减轻脂质过氧化造成的肝损伤。铁皮石斛中8种黄酮碳苷类成分具有抗氧化的功能，能清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼。铁皮石斛多糖可以增强NK细胞和巨噬细胞的活性，促进脾细胞的增殖。

由于铁皮石斛独特的药用价值，市场对于铁皮石斛的需求量也逐年增加。目前我国药用铁皮石斛主要依赖人工栽培的方式进行生产，栽培方式主要有组织培养和林下栽培两种方式。

大棚栽培配备有通风设施和降温设施。大棚通常选用玻璃温室、塑料薄膜连拱大棚，棚内配置喷淋系统、水墙和风机，用以降低夏季铁皮石斛的生长温度。大棚栽培的优点体现在温度、湿度、光照均可人工调控，管理方便，产量稳定，还能减少野生铁皮石斛资源消耗；与林下栽培模式相比，鲜条产量也最高。其主要缺点是经济投入较高，占用土地资源，塑料大棚对环境有一定的负面影响。

林下栽培是一种新兴的栽培方式，常见的种植方式有树干捆绑栽培、吊盆栽培、苗厢栽培等。其中，石斛的林下栽培模式大多以树干捆绑栽培为主。林下栽培铁皮石斛的优点体现在：与传统的大棚栽培相比，林下栽培可以极大地减少栽培成本。农药和化肥使用量减少，林地环境锻炼了铁皮石斛的生理抗性，可以显著提高铁皮石斛的有效药用成分。树干捆绑栽培铁皮石斛还可以减少土地占用面积，是一种对环境友好的栽培方式。其缺点为人工捆绑费用高、捆绑效率低、捆绑至高处的铁皮石斛栽培管理困难、铁皮石斛鲜条的产量低于传统的大棚栽培等等。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种铁皮石斛原球茎的播种方法，根据铁皮石斛的生长特性和形态特征，充分利用并结合铁皮石斛在大棚栽培和林下栽培的生长特点，优化铁皮石斛的栽培模式，增加收益。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

本发明公开了一种铁皮石斛原球茎的播种方法，将成熟未开裂的铁皮石斛蒴果消毒杀菌后将其切开，并将种子放入到萌发培养基中进行培养；将培养后的种子与羧甲基纤维素钠和新高脂膜混匀，获得原球茎悬浮液；再将原球茎悬浮液播种至基质上进行培养。

优选的，铁皮石斛蒴果为已授粉120～150d的蒴果，果皮呈黄绿色，蒴果内的种子呈黄色且分散。

优选的，铁皮石斛蒴果消毒杀菌的过程为：用75％酒精消毒15～30s，10％NaClO灭菌10～20min，用无菌水清洗3～5次。

优选的，种子在萌发培养基中的培养条件为：22～25℃、12h/d光照、光强2000lux、摇床转速80～110r/min，培养7～30d，培养至种子的直径≤3mm。

优选的，所述萌发培养基为1/2MS 2.47g/L，蔗糖30g/L，NAA 0.5mg/L，6-BA1.0mg/L，pH＝5.8。

优选的，在播种时，在原球茎悬浮液中加入保护剂，所述保护剂为羧甲基纤维素钠，加入量为1～3％，w/v。

优选的，所述新高脂膜的浓度为0.05～0.2％，所述羧甲基纤维素钠的浓度为1～3％。

优选的，所述基质包括树皮碎屑、水苔、森林中的树干。

优选的，所述原球茎在基质上生长的环境条件为湿度大于70％，温度20～30℃，光照强度2000～8000lux。

本发明具备以下有益效果：

本发明根据铁皮石斛种子的大小及生长特点，将铁皮石斛原球茎用培养基进行培养后，与羧甲基纤维素钠和新高脂膜混匀后，以直播的方式进行播种，极大的节省了人工劳动力，降低生产成本，提高生产效率。

附图说明

图1为实施例1培养8个月的铁皮石斛幼苗图；

图2为实施例2培养8个月的铁皮石斛幼苗图；

图3为实施例3培养7个月的铁皮石斛幼苗图；

图4为不同处理条件下铁皮石斛幼苗的存活率。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

若未特别指明，实施举例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

本发明公开了一种铁皮石斛原球茎的播种方法，将成熟未开裂的铁皮石斛蒴果消毒杀菌后将其切开，并将种子放入到萌发培养基中进行培养；将培养后的种子与羧甲基纤维素钠和新高脂膜混匀，获得原球茎悬浮液；再将原球茎悬浮液播种至基质上进行培养。具体播种过程为：

1.原球茎的培养

铁皮石斛蒴果为已授粉120～150d的蒴果，果皮呈黄绿色，蒴果内的种子呈黄色且分散。铁皮石斛蒴果消毒杀菌的过程为：用75％酒精消毒15～30s，10％NaClO灭菌10～20min，用无菌水清洗3～5次。消毒杀菌完成后将其切开，把种子撒入含有30mL萌发培养基中的锥形瓶中，种子和培养基的比例密度根据实际需要进行设置，种子在萌发培养基中的培养条件为：22～25℃、12h/d光照、光强2000lux、摇床转速80～110r/min，培养7～30d，培养至种子的直径≤3mm。萌发培养基为1/2MS 2.47g/L，蔗糖30g/L，NAA 0.5mg/L，6-BA1.0mg/L，pH＝5.8。

2.原球茎悬浮液的配制

把绿色原球茎与羧甲基纤维素钠和新高脂膜混匀，获得原球茎悬浮液。其中，新高脂膜的浓度为0.05～0.2％，羧甲基纤维素钠的浓度为1～3％。新高脂膜和羧甲基纤维素钠均为固体，溶剂均为水，两者混配是作为播种前稀释原球茎的溶液，与原球茎的比例不作要求。

3.原球茎悬浮液的直播

将制备的原球茎悬浮液装入电动打药箱中，把原球茎直接喷洒在含有共生真菌的基质上。基质包括树皮碎屑、水苔、森林中的树干等。原球茎在基质上生长的环境条件为湿度大于70％，温度20～30℃，光照强度2000～8000lux。具体的：播种后，根据基质的湿度，控制每天的浇水量，浇水时间为早上8：00之前和下午17:00之后。每周施用氨基酸叶面肥。

在播种前对基质进行处理：以杉树皮(15cm×20cm)，水苔为基质，在水中浸泡24h，使基质充分湿润；把湿润的水苔铺在育苗托盘并压实，再把杉树皮放置在水苔上；最后在树皮表面放置水苔。

进一步的，可在播种前一天，加入植物生长调节剂，在原来摇床上培养24h。

进一步的，在播种时，可在原球茎悬浮液中加入保护剂，保护剂可以是羧甲基纤维素钠，也可以是其他试剂，也可以不加，加入量为1～3％，即1L水中加入10～30g保护剂。

下面结合具体的实施例对本发明进行进一步的阐述。

实施例1

一种铁皮石斛种子的直播方法，包括如下步骤：

1.铁皮石斛种子的萌发培养：成熟未开裂的铁皮石斛蒴果，经75％酒精灭菌30s，10％NaClO灭菌15min后在超净工作台上切开，把黄色且分散的种子撒入液体种子萌发培养基中，在常温下以110r/min的速度振荡培养7d，12h/d光照、光强2000lux，培养至种子的大小≤3mm即可。

2.培养至第7d后，加入5μmoLABA(脱落酸)，在摇床上继续培养24h。

3.培养好的铁皮石斛种子与1％羧甲基纤维素钠和0.2％新高脂膜混合后播撒至基质表面。培养4～8个月可获得分化出叶片和根的幼苗，每10cm²的幼苗数量为3棵。培养至8个月后铁皮石斛幼苗的附图见图1所示，附图标尺为1cm。

幼苗生长的环境条件为光照强度2000～8000lux，湿度75％～90％，温度20～30℃。播种后，每周施用氨基酸叶面肥3～4次，待幼苗分化出叶片和根系，根据幼苗的密度对铁皮石斛幼苗进行移栽。其中光照强度、湿度和温度的范围值是根据一天气候变化而呈现出来的，光照强度可根据实际光照强度通过对培育地进行搭棚遮阳的方式保证光照强度在2000～8000lux内，以下实施例也是如此。

实施例2

一种铁皮石斛种子的直播方法，包括如下步骤：

1.铁皮石斛种子的萌发培养：成熟未开裂的铁皮石斛蒴果，经75％酒精灭菌30s，10％NaClO灭菌15min后在超净工作台上切开，把黄色且分散的种子撒入液体种子萌发培养基中，在常温下以100r/min的速度振荡培养7d，12h/d光照、光强2000lux。

2.培养至第7d，加入10μmoL ABA，在摇床上继续培养24h。

3.培养好的铁皮石斛种子与羧甲基纤维素钠和新高脂膜混合后播撒至基质表面。培养4～8个月可获得分化出叶片和根的幼苗，每10cm²的幼苗数量为1棵。培养至8个月后铁皮石斛幼苗的附图见图2所示，附图标尺为1cm。

幼苗生长的环境条件为光照强度2000～8000lux，湿度75％～90％，温度20～30℃。播种后，每周施用氨基酸叶面肥3～4次，待幼苗分化出叶片和根系，根据幼苗的密度对铁皮石斛幼苗进行移栽。

实施例3

一种铁皮石斛种子的直播方法，包括如下步骤：

1.铁皮石斛种子的萌发培养：成熟未开裂的铁皮石斛蒴果，经75％酒精灭菌30s，10％NaClO灭菌15min后在超净工作台上切开，把黄色且分散的种子撒入液体种子萌发培养基中，在常温下以90r/min的速度振荡培养21d，12h/d光照、光强2000lux。

2.共生真菌(Nemania sp.)在PDB培养基中培养7d，用破壁机把菌丝团打碎，比种子提前一天喷洒至基质表面。PDB培养基为：土豆200g，葡萄糖20g，蒸馏水1L，pH自然。

3.培养好的铁皮石斛种子与羧甲基纤维素钠混合后播撒至基质表面。培养4～8个月可获得分化出叶片和根的幼苗，每10cm²的幼苗数量为4棵。培养至7个月后铁皮石斛幼苗的附图见图3所示，附图标尺为1cm。

幼苗生长的环境条件为光照强度2000～8000lux，湿度75％～90％，温度20～30℃。播种后，每周施用氨基酸叶面肥3～4次，待幼苗分化出叶片和根系，根据幼苗的密度对铁皮石斛幼苗进行移栽。

实施例4

一种铁皮石斛种子的直播方法，包括如下步骤：

1.铁皮石斛种子的萌发培养：成熟未开裂的铁皮石斛蒴果，经75％酒精灭菌30s，10％NaClO灭菌15min后在超净工作台上切开，把黄色且分散的种子撒入液体种子萌发培养基中，在常温下以110r/min的速度振荡培养7d，12h/d光照、光强2000lux，培养至种子的大小≤3mm即可。

2.培养时间为8d。

3.培养好的铁皮石斛种子用1/2MS稀释后播撒至基质表面。

播种后的生长环境条件为光照强度2000～8000lux，湿度75％～90％，温度20～30℃。播种后，每周施用氨基酸叶面肥3～4次，待幼苗分化出叶片和根系，根据幼苗的密度对铁皮石斛幼苗进行移栽。结果显示，培养4～8个月未见幼苗形成。

实施例1-4生长的铁皮石斛幼苗的存活率如图4所示。图中，A处理为培养7d的铁皮石斛种子，加入5μmoL ABA(实施例1)；B处理为培养7d的铁皮石斛种子，加入10μmoL ABA(实施例2)；C处理为培养21d的铁皮石斛种子，在基质上与真菌共生(实施例3)；D处理为培养8天后的铁皮石斛的种子，未见幼苗形成(实施例4)。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (9)

1.一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：将成熟未开裂的铁皮石斛蒴果消毒杀菌后将其切开，并将种子放入到萌发培养基中进行培养；将培养后的种子与羧甲基纤维素钠和新高脂膜混匀，获得原球茎悬浮液；再将原球茎悬浮液播种至基质上进行培养。

2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：铁皮石斛蒴果为已授粉120～150d的蒴果，果皮呈黄绿色，蒴果内的种子呈黄色且分散。

3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：铁皮石斛蒴果消毒杀菌的过程为：用75％酒精消毒15～30s，10％NaClO灭菌10～20min，用无菌水清洗3～5次。

4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：种子在萌发培养基中的培养条件为：22～25℃、12h/d光照、光强2000lux、摇床转速80～110r/min，培养7～30d，培养至种子的大小≤3mm。

5.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：所述萌发培养基为1/2MS 2.47g/L，蔗糖30g/L，NAA 0.5mg/L，6-BA 1.0mg/L，pH＝5.8。

6.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：在播种时，在原球茎悬浮液中加入保护剂，所述保护剂为羧甲基纤维素钠，加入量为1～3％，w/v。

7.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：所述新高脂膜的浓度为0.05～0.2％，所述羧甲基纤维素钠的浓度为1～3％。

8.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：所述基质包括树皮碎屑、水苔、森林中的树干。

9.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛原球茎的播种方法，其特征在于：所述原球茎在基质上生长的环境条件为湿度大于70％，温度20～30℃，光照强度2000～8000lux。

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