CN114791411A - 评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法 - Google Patents

评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114791411A
CN114791411A CN202210423794.7A CN202210423794A CN114791411A CN 114791411 A CN114791411 A CN 114791411A CN 202210423794 A CN202210423794 A CN 202210423794A CN 114791411 A CN114791411 A CN 114791411A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cells
immune
human
lymphocytes
reference value
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210423794.7A
Other languages
English (en)
Inventor
高东
谢佳琦
卢瑞珊
甘丽晶
金建秋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Xiankangda Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Guangzhou Xiankangda Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Xiankangda Biotechnology Co ltd filed Critical Guangzhou Xiankangda Biotechnology Co ltd
Priority to CN202210423794.7A priority Critical patent/CN114791411A/zh
Publication of CN114791411A publication Critical patent/CN114791411A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本申请提供评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法，该评估人体免疫功能的指标组合，首次将免疫细胞的数量指标和免疫细胞的增殖能力和活力指标与免疫细胞的杀伤能力指标结合来评估人体免疫功能状态，该指标组合的评估效果更全面，更准确，可以综合评价人体免疫细胞对癌细胞的杀伤能力以及防癌“逃逸”能力，进而对癌细胞清零能力做到精准监视。

Description

评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法
技术领域
本申请涉及医疗保健领域，尤其涉及评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法。
背景技术
癌症早发现、早治疗、早治愈已经成为共识，但现有检测评估癌症的方法，大部分集中在癌细胞的检测上，针对人体对抗癌症的免疫功能评估较少。随着我国经济的发展和人民生活水平的提高，对健康保健的投入也随之增加。基因测序、多层CT、PET、肿瘤标志物微流式芯片和ctDNA检测等项目逐渐出现在一些高端体检机构的服务项目中。众所周知，肿瘤和一些慢性疾病虽然有遗传相关性，但遗传因素并不是唯一的决定性因素。然而，一些患者身上并没有可感知的症状，甚至肿瘤标记物检测因为个体差异性的原因也无法作为确定性的诊断依据。
免疫系统作为机体抵抗病原体的防线，往往在疾病刚发生，和器官出现恶性转变的早期就会产生响应，与正常情况相比会产生免疫细胞亚群和活力的变化。如果能及时分析免疫系统各类免疫细胞亚群的分布和活力变化，并结合基因测序和肿瘤标志物检测，就能极大的提高肿瘤和许多慢性疾病以及病毒感染的检出效率，为疾病的早期发现和有效诊断提供有力依据。
发明内容
本申请的目的在于提供一种评估人体免疫功能的指标组合，用于评估人体免疫功能状态。
为实现以上目的，本申请提供评估人体免疫功能的指标组合，包括：免疫细胞图谱数据、免疫细胞的增殖能力和活力数据、免疫细胞的杀伤能力数据；
所述免疫细胞图谱包括：总白细胞分型检测、T淋巴细胞专项检查、T淋巴细胞活化功能专项分析和树突状细胞专项分析；
所述免疫细胞的增殖能力包括增殖指数和复制指数；
所述免疫细胞的活力参考值为80％～95％；
所述免疫细胞的杀伤能力小于60％为低，大于等于60％小于80％为中，大于等于80％为高。
优选地，所述总白细胞分型检测包括：外周造血干细胞、淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、NK-T细胞和γδT细胞；
所述T淋巴细胞专项检查包括：辅助性T细胞、杀伤性T细胞、辅助性T细胞/杀伤性T细胞和Treg细胞；
所述T淋巴细胞活化功能专项分析包括：CD4+初始T细胞、CD4+记忆和效应T细胞、CD8+初始T细胞、CD8+记忆和效应T细胞、活化早期T细胞、活化中期T细胞和活化晚期T细胞；
所述树突状细胞专项分析包括：CD62L和HLA-DR。
优选地，所述外周造血干细胞在所述总白细胞中的占比参考值为0.03％-0.70％，所述淋巴细胞在所述总白细胞中的占比参考值为20％-40％，所述单核细胞在所述总白细胞中的占比参考值为3％-8％，所述粒细胞在所述总白细胞中的占比参考值为55％-70％；
所述T淋巴细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为50％-84％，所述B淋巴细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为5％-18％，所述NK细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为7％-40％，所述NK-T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为0％-8％，所述γδT细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为1％-10％；
所述辅助性T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为27％-51％，所述杀伤性T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为15％-44％，且所述辅助性T细胞/所述杀伤性T细胞的比值为0.71-2.78，所述Treg细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为2％-10％；
所述CD4+初始T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-20％，所述CD4+记忆和效应T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为8％-25％，所述CD8+初始T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-20％，所述CD8+记忆和效应T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为2％-15％，所述活化早期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为0.1％-3.5％，所述活化中期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-30％，所述活化晚期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为15％-25％；
所述T淋巴细胞活化功能参考值为28％～35％；
所述CD62L在所述单核细胞中的占比参考值为2％～98％，所述HLA-DR在所述单核细胞中的占比参考值为5％～95％。
优选地，所述外周造血干细胞的检测标记为CD34+，所述单核细胞的检测标记为CD45+CD14+SSC-L，所述T淋巴细胞的检测标记为CD3+，所述B淋巴细胞的检测标记为CD3-CD19+，所述NK细胞的检测标记为CD3-CD56+，所述NK-T细胞的检测标记为CD3+CD56+，所述γδT细胞的检测标记为CD3+TCRγδ+，所述辅助性T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD8-，所述杀伤性T细胞的检测标记为CD3+CD4-CD8+，所述辅助性T细胞/所述杀伤性T细胞的比值的检测标记为CD4+/CD8+，所述Treg细胞的检测标记为CD4+CD25+；
所述CD4+初始T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD45RA+，所述CD4+记忆和效应T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD45RO+，所述CD8+初始T细胞的检测标记为CD3+CD8+CD45RA+，所述CD8+记忆和效应T细胞的检测标记为CD3+CD8+CD45RO+，所述活化早期T细胞的检测标记为CD3+CD69+，所述活化中期T细胞的检测标记为CD3+CD25+，所述活化晚期T细胞的检测标记为CD3+HLA-DR+。
本申请提供一种用于检测评估人体免疫功能的试剂盒，包括有检测生物样本中如上述的评估人体免疫功能的指标组合的试剂。
优选地，包括：用于检测所述免疫细胞图谱的第一试剂，用于检测所述免疫细胞的增殖能力和活力的第二试剂，用于检测所述免疫细胞的杀伤能力的第三试剂；
所述第一试剂包括抗人CD3抗体，抗人CD4抗体，抗人CD8抗体，抗人CD14抗体，抗人CD19抗体，抗人CD25抗体，抗人CD28抗体，抗人CD34抗体，抗人CD45抗体，抗人CD56抗体，抗人CD62L抗体，抗人CD69抗体，抗人HLA-DR抗体和抗人TCRγδ抗体；
所述第二试剂和所述第三试剂包括荧光染料和细胞因子。
本申请还提供一种用于非诊断治疗目的的人体免疫功能的检测评估方法，检测生物样本中如上述的评估人体免疫功能的指标组合，包括：
免疫细胞图谱分析：检测外周血中的总白细胞分型数据、T淋巴细胞专项数据、T淋巴细胞活化功能专项数据和树突状细胞专项数据；
免疫细胞的增殖能力和活力分析：荧光标记免疫细胞，并用细胞因子组合刺激免疫细胞增殖，用流式细胞技术检测细胞的增殖情况，计算增殖指数和复制指数；
免疫细胞的杀伤能力分析：分离外周血中的淋巴细胞并培养，建立体外杀伤体系模拟肿瘤浸润淋巴细胞在炎性反应条件下对肿瘤杀伤的过程。
本申请还提供人体免疫功能检测评估仪，检测生物样本中如上述的评估人体免疫功能的指标组合，包括：
免疫细胞图谱分析模块，用于进行免疫细胞图谱分析；
免疫细胞的增殖能力和活力分析模块，用于进行免疫细胞的增殖能力和活力分析；
免疫细胞的杀伤能力分析模块，用于进行免疫细胞的杀伤能力分析。
与现有技术相比，本申请的有益效果包括：
本申请提供的评估人体免疫功能的指标组合，首次将免疫细胞的数量指标和免疫细胞的增殖能力和活力指标与免疫细胞的杀伤能力指标结合来评估人体免疫功能状态，该指标组合的评估效果更全面，更准确，可以综合评价人体免疫细胞对癌细胞的杀伤能力以及防癌“逃逸”能力，进而对癌细胞清零能力做到精准监视。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对本申请范围的限定。
图1为外周造血干细胞的流式图谱；
图2a和图2b为单核细胞的流式图谱；
图3为B淋巴细胞的流式图谱；
图4为辅助性T细胞、杀伤性T细胞以及辅助性T细胞/杀伤性T细胞的比值的流式图谱；
图5为γδT细胞的流式图谱；
图6为Treg细胞的流式图谱；
图7为CD4+的流式图谱；
图8为CD45RA+的流式图谱；
图9为CD45RO+的流式图谱；
图10为CD8+的流式图谱；
图11为CD45RA+的流式图谱；
图12为CD45RO+的流式图谱；
图13和图14为CD3+CD28+的流式图谱；
图15为活化早期T细胞的流式图谱；
图16为活化中期T细胞的流式图谱；
图17为活化晚期T细胞的流式图谱；
图18为NK细胞和NK-T细胞的流式图谱；
图19为CD62L的流式图谱；
图20为HLA-DR的流式图谱；
图21为免疫细胞的增殖情况示意图；
图22为免疫细胞培养72h后的染色结果。
具体实施方式
如本文所用之术语：
“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
在这些实施例中，除非另有指明，所述的份和百分比均按质量计。
“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。
本申请第一方面提供评估人体免疫功能的指标组合，包括：免疫细胞图谱数据、免疫细胞的增殖能力和活力数据、免疫细胞的杀伤能力数据。本申请首次将免疫细胞的数量指标和免疫细胞的增殖能力和活力指标与免疫细胞的杀伤能力指标结合来评估人体免疫功能状态，该指标组合的评估效果更全面，更准确，比常规体检更精准，可以综合评价人体免疫细胞对癌细胞的杀伤能力以及防癌“逃逸”能力，进而对癌细胞清零能力做到精准监视。
具体的，所述免疫细胞图谱包括：总白细胞分型检测、T淋巴细胞专项检查、T淋巴细胞活化功能专项分析和树突状细胞专项分析。
更具体的，所述总白细胞分型检测包括：外周造血干细胞、淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、NK-T细胞和γδT细胞；所述T淋巴细胞专项检查包括：辅助性T细胞、杀伤性T细胞、辅助性T细胞/杀伤性T细胞和Treg细胞；所述T淋巴细胞活化功能专项分析包括：CD4+初始T细胞、CD4+记忆和效应T细胞、CD8+初始T细胞、CD8+记忆和效应T细胞、活化早期T细胞、活化中期T细胞和活化晚期T细胞；所述树突状细胞专项分析包括：CD62L和HLA-DR。
其中，外周造血干细胞指外周血中具有自我更新能力的原始细胞。该细胞具有强大的自我更新和多系分化的能力，能分化为各种其他免疫细胞、血细胞，是进行造血组织移植后重建长期造血和免疫功能的关键成分。造血干细胞较多以CD34作为标记。该细胞比例低则不利于维持机体正常代谢的补充和损伤后的修复；而突发的CD34+细胞异常增生则提示可能有血液系统疾病的发生。
其中，单核细胞是由骨髓前单核细胞发展来的细胞总称，进入外周组织后分化为巨噬细胞。单核细胞具有递呈抗原功能：当外来抗原进入机体后，首先由单核-巨噬细胞进行吞噬、消化。然后，将有效的抗原决定簇和MHCII类分子结合成复合物，表达于其表面，行使抗原呈递功能。最后，这种复合物将被T细胞识别，从而激发免疫应答。
其中，淋巴细胞分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞三类。
其中，T淋巴细胞属于适应性免疫(细胞免疫)，可介导细胞免疫。T淋巴细胞主要有以下类型：CD8+杀伤性T细胞、CD4+辅助性T细胞、调节性T细胞(Treg)、γδT细胞。
其中，CD8+T细胞主要作用是特异性的杀伤靶细胞，如被病毒感染的细胞、肿瘤细胞等。
CD4+T细胞可以增强吞噬细胞介导的抗感染免疫，特别是胞内病原体感染。此细胞通过分泌细胞因子，促进吞噬细胞的吞噬能力，增强NK细胞的杀伤能力以及协同IL-2和IFN-γ特异性的CD8+T细胞杀伤病毒感染的细胞及肿瘤细胞，直接诱导靶细胞凋亡，促进炎症反应。其分泌的细胞因子还可以促进B细胞增殖、分化与抗体生成。
Treg(CD4+CD25+)细胞的比例代表免疫调节能力，主要功能是抑制CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化和增殖，达到免疫负调控的作用，使免疫反应不要无限扩大。Treg细胞决定着机体能否正常识别外来病原体及内在肿瘤等。若CD4+CD25+细胞的比例过高，则身体易受感染、易发肿瘤，过低则易患自身免疫疾病。
γδT细胞是T细胞的一种，其功能的发挥不依赖于抗原的MHC限制，而且无需经过抗原处理和呈递识别过程。当机体出现异常变化时，γδT细胞可作出比其它T细胞更迅速的反应。γδT细胞免疫监视功能具有广泛性，可同时发挥细胞毒和分泌细胞因子的功能。
其中，B淋巴细胞属于体液免疫，是参与适应性免疫应答中的主要细胞之一，主要介导特异性体液免疫。它能产生中和抗体，针对病毒、胞内细菌感染和细菌外毒素；激活补体，促进吞噬细胞吞噬病原体、溶解细菌及受感染细胞；参与抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)；在一些情况下还可以释放细胞因子参与调节巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞以及T细胞的功能。
其中，NK细胞是与T、B细胞并列的第三类淋巴细胞，又名自然杀伤细胞。因其无需抗原预先致敏，即可直接杀伤某些肿瘤细胞和病毒感染的细胞，故在机体抗肿瘤、早期感染的免疫应答中发挥重要的作用。这种既不需要预先由抗原致敏，也不需要抗体参与，且无MHC限制的天然杀伤活性使NK细胞具有非特异直接杀伤靶细胞的能力。NK细胞杀伤的靶细胞包括但不限于肿瘤细胞、病毒感染细胞、较大的病原体如真菌和寄生虫、同种异体移植的器官、组织等。
其中，NK-T细胞具有T细胞和NK细胞的双重特性，在免疫调节系统中占有重要位置。因与自身免疫疾病的发病机制、变态反应的调节、抗肿瘤作用、及抑制寄生虫感染等有关，NK-T细胞与疾病有诸多关联。同时，NK-T细胞在TCR和NKR介导下，可产生大量对肿瘤细胞有细胞杀伤作用的IL-4及INF-γ。
其中，CD3+CD28+是T淋巴细胞活化共刺激能力的标志，决定了T细胞对病原体及肿瘤的反应与杀伤能力：过强易出现过敏等症状，过弱则预示着免疫力低下。
其中，CD69抗原，即早期激活抗原，是T细胞激活后早期出现的表面抗原，用于检测活化早期T细胞。CD69出现之后，T细胞快速分泌细胞因子从而激活NK和中性粒细胞参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。CD69在静止的T细胞上不表达，在被病毒或肿瘤抗原刺激激活的淋巴细胞表面可能表达。
CD25抗原，是T细胞活化中期的标志，用来检测活化中期T细胞。在CD69之后出现，静止时表达很少，活化后大量诱导表达。CD25是IL-2R的α亚基，参与构成高亲和力的IL-2R，以供IL-2结合并选择性支持经抗原刺激而活化的T细胞进行扩增。
HLA-DR属于主要组织相容复合体MHCII类分子，是免疫反应中重要的参与者，在抗原呈递中起作用，通常表达于免疫细胞中，如淋巴细胞和巨噬细胞。HLA-DR在抗原刺激24小时后表达升高，持续数周。MHC限制性是免疫细胞间相互识别和协作的前提，是淋巴细胞激活的晚期标志，用于检测活化晚期T细胞。
检测外周血T细胞早期、中期、晚期的活化状态能全面了解T细胞的活化状态，从而了解机体的免疫状态，判断是否存在感染以及免疫排斥反应。与此同时，在治疗中监测这些指标的变化可帮助评价疗效。
其中，树突状细胞(Dendriticcell，DC)的主要功能是处理病原体，并且将抗原呈递给T细胞，是固有免疫和适应性免疫之间的桥梁。一旦DC接受抗原，它们就会迁回到淋巴结中，在淋巴结中激活T淋巴细胞和B淋巴细胞，形成适应性免疫应答。DC的状态决定了免疫系统对外来病原体及内在细胞突变，如病毒感染(外在)、肿瘤(内在细胞突变)的反应状况，也是维持健康的重要因素。树突状细胞通过检测其标记物CD62L和HLA-DR来反应。
在一优选实施例中，所述外周造血干细胞在所述总白细胞中的占比参考值为0.03％-0.70％，所述淋巴细胞在所述总白细胞中的占比参考值为20％-40％，所述单核细胞在所述总白细胞中的占比参考值为3％-8％，所述粒细胞在所述总白细胞中的占比参考值为55％-70％。
所述T淋巴细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为50％-84％，所述B淋巴细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为5％-18％，所述NK细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为7％-40％，所述NK-T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为0％-8％，所述γδT细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为1％-10％。
所述辅助性T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为27％-51％，所述杀伤性T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为15％-44％，且所述辅助性T细胞/所述杀伤性T细胞的比值为0.71-2.78，所述Treg细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为2％-10％。
所述CD4+初始T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-20％，所述CD4+记忆和效应T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为8％-25％，所述CD8+初始T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-20％，所述CD8+记忆和效应T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为2％-15％，所述活化早期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为0.1％-3.5％，所述活化中期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-30％，所述活化晚期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为15％-25％。
所述T淋巴细胞活化功能参考值为28％～35％。
所述CD62L在所述单核细胞中的占比参考值为2％～98％，所述HLA-DR在所述单核细胞中的占比参考值为5％～95％。
具体的，所述外周造血干细胞的检测标记为CD34+，所述单核细胞的检测标记为CD45+CD14+SSC-L，所述T淋巴细胞的检测标记为CD3+，所述B淋巴细胞的检测标记为CD3-CD19+，所述NK细胞的检测标记为CD3-CD56+，所述NK-T细胞的检测标记为CD3+CD56+，所述γδT细胞的检测标记为CD3+TCRγδ+，所述辅助性T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD8-，所述杀伤性T细胞的检测标记为CD3+CD4-CD8+，所述辅助性T细胞/所述杀伤性T细胞的比值的检测标记为CD4+/CD8+，所述Treg细胞的检测标记为CD4+CD25+。
所述CD4+初始T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD45RA+，所述CD4+记忆和效应T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD45RO+，所述CD8+初始T细胞的检测标记为CD3+CD8+CD45RA+，所述CD8+记忆和效应T细胞的检测标记为CD3+CD8+CD45RO+，所述活化早期T细胞的检测标记为CD3+CD69+，所述活化中期T细胞的检测标记为CD3+CD25+，所述活化晚期T细胞的检测标记为CD3+HLA-DR+。
生命活力是细胞活力的整体表现，因此，细胞活力决定了人体健康程度。通过激发细胞潜能，唤醒潜藏于人体内、与生俱来的“细胞自我修复与再生的超级力量”，令人体器官自我修复与重生的同时，延缓衰老。亚健康是指人体处于健康和疾病之间的一种状态。处于亚健康状态者，其免疫细胞的活力不能达到健康的标准，表现为一定时间内的免疫细胞活力降低，同时功能和适应能力减退。免疫细胞的生长能力意味着生命机器的核心动力。免疫细胞健康系数与增殖能力决定人的生命质量，因此，免疫细胞功能健全与否也就决定人的寿命。免疫细胞生长能力的强弱包括增殖复制的能力和呼吸链活力，是免疫细胞活力评估的主要指标。
其中，免疫细胞的增殖情况的检测方法为：采取荧光染色法标记受试者的免疫细胞。模拟人体内发生免疫反应时的微环境，并用特殊的细胞因子组合刺激免疫细胞发生增殖。随着细胞增殖分裂，子代细胞的荧光强度会出现逐级递减。此时，用流式细胞技术可以方便地检测细胞的增殖情况。通过这些数据，经由计算可得出受试者免疫细胞的增殖指数(ProliferationIndex)和复制指数(DivisionIndex)，反映受试者免疫细胞增殖能力的指标，同时也是免疫细胞相应刺激参与免疫反应的重要指标，因此也可以部分反映出受试者免疫能力的强弱。
具体的，免疫细胞的增殖指数在培养72h后为2～4倍，复制指数为3～5。所述免疫细胞的活力参考值为80％～95％。
机体的免疫监视能力主要表现为外周血中的淋巴细胞对肿瘤或者突变细胞的识别和杀伤作用。外周血中执行此种功能的淋巴细胞主要有自然杀伤细胞(NK，NaturalKiller)、自然杀伤T细胞(NKT)和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxiclymphocyte，CTL)等。这些细胞对肿瘤细胞的杀伤作用能够客观反映机体免疫监视能力，有效评估机体患癌风险，为癌症的预测和辅助诊断提供科学依据。
免疫细胞的杀伤能力检测方法：分离出受试者外周血中的淋巴细胞，将其在体外活化培养48小时，建立体外杀伤体系模拟肿瘤浸润淋巴细胞(TIL,TumorInfiltratingLymphocyte)在炎性反应条件下对肿瘤杀伤的过程，其杀伤效率在一定程度上反映了受试者免疫系统对可能发生的癌变的抵抗能力。检测受试者的淋巴细胞对肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、前列腺癌(男性)和乳腺癌(女性)细胞株的杀伤效率。通过比较，可以推测该血液样本的个体对这几种癌症的易感性强弱，便于后续进行有针对性的预防和保健。
具体的，所述免疫细胞的杀伤能力小于60％为低，大于等于60％小于80％为中，大于等于80％为高。
本申请提供一种用于检测评估人体免疫功能的试剂盒，包括有检测生物样本中如上述的评估人体免疫功能的指标组合的试剂。
优选地，包括：用于检测所述免疫细胞图谱的第一试剂，用于检测所述免疫细胞的增殖能力和活力的第二试剂，用于检测所述免疫细胞的杀伤能力的第三试剂；
所述第一试剂包括抗人CD3抗体，抗人CD4抗体，抗人CD8抗体，抗人CD14抗体，抗人CD19抗体，抗人CD25抗体，抗人CD28抗体，抗人CD34抗体，抗人CD45抗体，抗人CD56抗体，抗人CD62L抗体，抗人CD69抗体，抗人HLA-DR抗体和抗人TCRγδ抗体；
所述第二试剂和所述第三试剂包括荧光染料和细胞因子。
本申请还提供一种用于非诊断治疗目的的人体免疫功能的检测评估方法，检测生物样本中如上述的评估人体免疫功能的指标组合，包括：
免疫细胞图谱分析：检测外周血中的总白细胞分型数据、T淋巴细胞专项数据、T淋巴细胞活化功能专项数据和树突状细胞专项数据；
免疫细胞的增殖能力和活力分析：荧光标记免疫细胞，并用细胞因子组合刺激免疫细胞增殖，用流式细胞技术检测细胞的增殖情况，计算增殖指数和复制指数；
免疫细胞的杀伤能力分析：分离外周血中的淋巴细胞并培养，建立体外杀伤体系模拟肿瘤浸润淋巴细胞在炎性反应条件下对肿瘤杀伤的过程。
本申请还提供人体免疫功能检测评估仪，检测生物样本中如上述的评估人体免疫功能的指标组合，包括：
免疫细胞图谱分析模块，用于进行免疫细胞图谱分析；
免疫细胞的增殖能力和活力分析模块，用于进行免疫细胞的增殖能力和活力分析；
免疫细胞的杀伤能力分析模块，用于进行免疫细胞的杀伤能力分析。
下面将结合具体实施例对本申请的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1免疫细胞图谱分析
一、CS&T research Beads质控
流式细胞仪为BD FACSAria IIU，先向流式管中加入500μL PBS，再加入3滴上下颠倒混合均匀的CS&T research Beads，涡旋震荡10秒；
打开Diva软件，选择Cytometer→CS&T→选择相应的lot，选择“checkpreformance”，点击“Run”；
等待检测完毕，待报告显示“Successfully”后，出具CS&T检测报告，关闭CS&T系统，准备检测样品。
二、试剂配制
溶血素(工作液)：取BD 10×FACS lysing Solution，加入去离子水稀释10倍。即，1mL BD 10×FACS lysing Solution，加入至9mL去离子水中，混合均匀，配置成溶血素工作液。
三、样本制备
1、取1mL全血，按照100μL/支分装至流式管中，按照表1所示在每管中加入相应的抗体或ISOtype，室温避光孵育30分钟，表1中抗体及ISOtype购买自美国BD公司，ISOtype作为同型对照，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色，确保抗体的结合是特异性的，而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用；
2、在每管中加入900μL溶血素工作液，用枪头吹打混匀，避光孵育10分钟；
3、400×g，5分钟离心；
4、弃上层红细胞碎片，用500μL PBS重悬，400×g，5分钟离心；
5、弃上层，重复上述4的操作一次；
6、弃上层，用500μL PBS重悬，上机检测。
四、上机检测
4.1按照《BD FACS Aria IIU操作规程操作》
4.2选择Immunity Evaluation文件夹，双击相应实验；
4.3新建Specimen，并输入采血时间及样品码-输注细胞次数，如输注干细胞2次的客户2016年12月1日采血，则名Specimen命名为“20161201”，tube名为样品码-S2。
表1.样品分类和对应荧光抗体种类
Figure BDA0003607627290000161
Figure BDA0003607627290000171
五、实验结果
外周造血干细胞的流式图谱如图1所示，检测结果为0.08％，检测结果在参考值范围内，外周造血干细胞的数量正常。
单核细胞的流式图谱如图2a和图2b所示，检测结果为4％，检测结果在参考值范围内，单核细胞的数量正常。
B淋巴细胞的流式图谱如图3所示，检测结果为13.8％，检测结果在参考值范围内，B淋巴细胞的数量正常。
辅助性T细胞、杀伤性T细胞以及辅助性T细胞/杀伤性T细胞的比值的流式图谱如图4所示，辅助性T细胞检测结果为34.5％，杀伤性T细胞为19.0％，辅助性T细胞/杀伤性T细胞的比值在1.8，检测结果在参考值范围内，辅助性T细胞、杀伤性T细胞以及辅助性T细胞/杀伤性T细胞的比值的数量正常。
γδT细胞的流式图谱如图5所示，检测结果为4.4％，检测结果在参考值范围内，γδT细胞的数量正常。
Treg细胞的流式图谱如图6所示，检测结果为0％，检测结果低于参考值范围，Treg细胞的数量偏低。
CD4+初始T细胞的流式图谱如图7和图8所示，检测结果为6.3％，检测结果低于参考值范围，CD4+初始T细胞的数量偏低。
CD4+记忆和效应T细胞的流式图谱如图7和图9所示，检测结果为25.1％，检测结果在参考值范围，CD4+记忆和效应T细胞的数量正常。
CD8+初始T细胞的流式图谱如图10和图11所示，检测结果为10.5％，检测结果在参考值范围，CD8+初始T细胞的数量正常。
CD8+记忆和效应T细胞的流式图谱如图10和图12所示，检测结果为10.6％，检测结果在参考值范围，CD8+记忆和效应T细胞的数量正常。
CD3+CD28+流式图谱如图13和图14所示，检测结果为3.8％，检测结果低于参考值范围，T细胞活化功能偏低。
活化早期T细胞的流式图谱如图15所示，检测结果为21.2％，检测结果高于参考值范围，活化早期T细胞的数量偏高。
活化中期T细胞的流式图谱如图16所示，检测结果为0.03％，检测结果低于参考值范围，活化中期T细胞的数量偏低。
活化晚期T细胞的流式图谱如图17所示，检测结果为0.6％，检测结果低于参考值范围，活化晚期T细胞的数量偏低。
NK细胞和NK-T细胞的流式图谱如图18所示，NK细胞的检测结果为0.1％，检测结果低于参考值范围，NK细胞的数量偏低；NK-T细胞的检测结果为0.01％，检测结果在参考值范围，NK-T细胞的数量正常。
CD62L的流式图谱如图19所示，检测结果为59.5％，检测结果在参考值范围内，CD62L的数量正常。
HLA-DR的流式图谱如图20所示，检测结果为6.9％，检测结果在参考值范围内，HLA-DR的数量正常。
实施例2免疫细胞的增殖能力和活力分析
正常免疫细胞形态为：胞体直径12～20μm，呈圆或不规则形，透亮；胞核形态不规则并有明显的扭曲折叠；核染色质较细致，疏松呈丝网状或条索状；胞质量多，可见细小的、分散均匀的灰尘样颗粒；培养后形成集落。
一、免疫细胞的增殖能力检测方法
D0准备细胞
1、分离PBMC用因子刺激过夜
(1)肝素抗凝管采血25ml，轻轻摇匀。配平，400×g，10min离心。
(2)用移液管吸取上层血浆于新离心管中，56℃，30min灭活，然后1000×g，15min高速离心，收集上层血清与新离心管中，放于4℃备用。
(3)“(1)”中下层血细胞用生理盐水1:1稀释，从离心管边缘轻轻加于淋巴细胞分离液上面(blood：ficoll＝2:1)，室温离心(680×g，20min)，吸取白膜层细胞于离心管中，用NS或PBS洗3遍，离心，2遍离心条件依次为1800r/min，15min；1500r/min，1min。
(4)培养CIK上述PBMC用CIK培养基重悬，取样计数，计算收率。放于37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。
2、CFSE检测细胞增殖能力
(1)取1mL密度为1-2×106/mL的上述PBMCs于无菌的1.5mL Ep管中；
(2)300×g 5分钟离心；
(3)弃上清，加入终浓度为5μM的荧光染料CFSE，于37℃避光孵育10分钟；
(4)300×g，5分钟离心；
(5)弃上清，用200μL无血清的CST AIM-V培养基洗一次；
(6)300×g，5分钟离心；
(7)加入1mL的基础培养基，均分到两孔(24孔板培养)，补加培养基到1ml(1ml/孔)，同时加入培养体积10％的自体血浆，然后其中一孔加入以下因子：D0加1％的CIK1(INF-Γ1000U/ml)、D1加入1％的CIKq(anti-D3McAb终浓度50ng/ml)和1000IU/mL IL-2后培养72hrs。
3、悬浮细胞24h和72h进行悬浮细胞拍照，以及D0 AOPI染色后的照片。
D3上样检测
1、收集细胞
(1)用移液器从24孔板中将细胞取出，加至1.5mL Ep管中，400×g，5分钟离心；
(2)弃上清，用500μL PBS重悬，上机检测；
2、上机检测
(1)按照《BD Canto II操作规程操作》
(2)选择Immunity Evaluation文件夹，双击CFSE实验；
(3)新建Specimen，并输入采血时间及姓名简写，如2016年12月1日采血，则名Specimen命名为“20161201-D3”，tube名为“客户全拼大写”；
(4)双击tube，收集样品。
结果如图21所示，免疫细胞在体外培养72小时内增殖少于2代，增殖指数为1.67，复制指数为3.63，增殖能力偏低。
二、免疫细胞的活力分析检测方法
1、初始细胞活率检测(Day 0)
(1)取0.5-1×106个PBMCs，加入终浓度为10μg/mL PI，避光孵育15分钟；
(2)400×g，5分钟离心；
(3)用300μL PBS重悬；
(4)上机检测，并记录PBMCs的初始活率。
2、72小时培养后活率(Day 3)
(1)取1-2×106个PBMCs，加入1mL含有CIK1(INF-Γ1000U/ml)、CIKq(anti-D3McAb50ng/ml)10％自体血浆(如若自体血浆出现浑浊状态，可换成10％FBS)、1000IU/mL IL-2的AIM-V培养基到24孔板中培养72hrs；
(2)将24孔板内细胞吹打均匀，用移液器从24孔板中将细胞取出，加至1.5mL Ep管中，400×g，5分钟离心；
(3)用400μL PBS重悬，留100μL用于台盼蓝染色及拍照，其余300×g，5分钟离心；
(4)用500μL PBS重悬，再加入1μL 5mg/mL PI，避光孵育10分钟；
(5)400×g，5分钟离心；
(6)用300μL PBS重悬；
(7)上机检测，并记录72小时细胞活率。
3、台盼蓝染色
取D3预留的100μL细胞，按照10:1加入10μL台盼蓝染色，混合均匀，取50μL加入96孔板内，进行拍照，并记录，结果如图22所示。
细胞活力为94.9％，在参考值范围内，免疫细胞活力正常。
实施例3免疫细胞的杀伤能力分析
D0：分离PBMC用因子刺激过夜
(1)肝素抗凝管采血25ml，轻轻摇匀。配平，400×g，10min离心。
(2)用移液管吸取上层血浆于新离心管中，56℃，30min灭活，然后1000×g，15min高速离心，收集上层血清与新离心管中，放于4℃备用。
(3)“(1)”中下层血细胞用生理盐水1:1稀释，从离心管边缘轻轻加于淋巴细胞分离液上面(blood：ficoll＝2:1)，室温离心(680×g，20min)，吸取白膜层细胞于离心管中，用NS或PBS洗3遍，离心，3遍离心条件依次为1800r/min，5min；1500r/min，5min；1200r/min，8min。
(4)上述PBMC用CIK培养基(1000IU/mL IL-2的AIM-V培养基)重悬，D0加入1％培养体积的CIK1(终浓度INF-Γ1000U/ml)；D1加入1％培养体积的CIKq(终浓度anti-D3McAb50ng/ml)和IL-2(IL-2终浓度1000IU/mL)，取样计数，计算收率。放于37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。
D1：靶细胞制备过夜
(1)从培养箱中取出靶细胞各一瓶，用胰酶消化后计数。计数结果如下：
(2)根据计数结果，用血清减半的原靶细胞培养基调整细胞浓度为5×105/ml，铺板，每孔100μl，即每孔50000个细胞。每个靶细胞铺6孔。放于37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。板布局如表2所示，其中打钩的是加入相应物质的孔。
表2靶细胞铺板格式
Figure BDA0003607627290000221
D2：效应细胞和靶细胞混合孵育6h后检测结果
1、靶细胞荧光标记(Calcein-AM终浓度为5μg/ml)
(1)用含5％FBS的RPMI1640培养基将Calcein-AM稀释成15μg/ml。
(2)从培养箱中取出铺有靶细胞的96孔板，每孔加Calcein-AM稀释液50μl，Calcein-AM终浓度为5μg/ml，37℃孵育30min。
2、效-靶细胞作用(效：靶＝20:1)
(1)从培养箱中取出效应细胞PBMC，吹打均匀，用移液管吸取细胞悬液于15ml离心管，取样计数，计数结果如下：
400×g，10min离心，用含5％FBS，20IU/ml IL-2的RPMI1640培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×107/ml，备用。
(2)取出96孔板，用排枪小心吸出上清弃掉，再向每孔沿壁轻轻加入200μlRPMI1640基础培养基清洗。
(3)靶细胞实验组每孔加重悬的效应细胞100μl，对照组加含5％FBS和20IU/mlIL-2的RPMI1640培养基100μl，边沿没有加靶细胞的孔为空白组。300×g，3min甩板。37℃孵育6h。效应细胞加入情况如表3所示，其中打钩为在该孔加入相应物质。
表3效应细胞加入情况
Figure BDA0003607627290000231
3、荧光读板
(1)从培养箱中取出96孔板，斜向下轻拍出培养上清，用NS小心洗三遍。
(2)每孔加入200μl NS用荧光读扳机读板，Ex＝452nm，Em＝513nm。
4、数据处理
杀伤率＝1-(实验组荧光平均值-空白组荧光平均值)/(对照组荧光平均值-空白组荧光平均值)×100％。
杀伤率实验结果如表4所示，提示该样本的免疫细胞的杀伤能力偏低。
表4杀伤率实验结果
靶细胞名称 杀伤率 提示
肝癌HepG2 26.8％ 低
肺癌NCI-H23 26.1％ 低
胃癌NCI-N87 36.1％ 低
肠癌HT-29 51.1％ 低
乳腺癌SK-BR-3 27.4％ 低
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的范围。
此外，本领域的技术人员能够理解，尽管在此的一些实施例包括其它实施例中所包括的某些特征而不是其它特征，但是不同实施例的特征的组合意味着处于本申请的范围之内并且形成不同的实施例。例如，在上面的权利要求书中，所要求保护的实施例的任意之一都可以以任意的组合方式来使用。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本申请的总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

Claims (8)

1.评估人体免疫功能的指标组合，其特征在于，包括：免疫细胞图谱数据、免疫细胞的增殖能力和活力数据、免疫细胞的杀伤能力数据；
所述免疫细胞图谱包括：总白细胞分型检测、T淋巴细胞专项检查、T淋巴细胞活化功能专项分析和树突状细胞专项分析；
所述免疫细胞的增殖能力包括增殖指数和复制指数；
所述免疫细胞的活力参考值为80％～95％；
所述免疫细胞的杀伤能力小于60％为低，大于等于60％小于80％为中，大于等于80％为高。
2.根据权利要求1所述的评估人体免疫功能的指标组合，其特征在于，所述总白细胞分型检测包括：外周造血干细胞、淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、NK-T细胞和γδT细胞；
所述T淋巴细胞专项检查包括：辅助性T细胞、杀伤性T细胞、辅助性T细胞/杀伤性T细胞和Treg细胞；
所述T淋巴细胞活化功能专项分析包括：CD4+初始T细胞、CD4+记忆和效应T细胞、CD8+初始T细胞、CD8+记忆和效应T细胞、活化早期T细胞、活化中期T细胞和活化晚期T细胞；
所述树突状细胞专项分析包括：CD62L和HLA-DR。
3.根据权利要求2所述的评估人体免疫功能的指标组合，其特征在于，所述外周造血干细胞在所述总白细胞中的占比参考值为0.03％-0.70％，所述淋巴细胞在所述总白细胞中的占比参考值为20％-40％，所述单核细胞在所述总白细胞中的占比参考值为3％-8％，所述粒细胞在所述总白细胞中的占比参考值为55％-70％；
所述T淋巴细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为50％-84％，所述B淋巴细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为5％-18％，所述NK细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为7％-40％，所述NK-T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为0％-8％，所述γδT细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为1％-10％；
所述辅助性T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为27％-51％，所述杀伤性T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为15％-44％，且所述辅助性T细胞/所述杀伤性T细胞的比值为0.71-2.78，所述Treg细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为2％-10％；
所述CD4+初始T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-20％，所述CD4+记忆和效应T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为8％-25％，所述CD8+初始T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-20％，所述CD8+记忆和效应T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为2％-15％，所述活化早期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为0.1％-3.5％，所述活化中期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为10％-30％，所述活化晚期T细胞在所述淋巴细胞中的占比参考值为15％-25％；
所述T淋巴细胞活化功能参考值为28％～35％；
所述CD62L在所述单核细胞中的占比参考值为2％～98％，所述HLA-DR在所述单核细胞中的占比参考值为5％～95％。
4.根据权利要求3所述的评估人体免疫功能的指标组合，其特征在于，所述外周造血干细胞的检测标记为CD34+，所述单核细胞的检测标记为CD45+CD14+SSC-L，所述T淋巴细胞的检测标记为CD3+，所述B淋巴细胞的检测标记为CD3-CD19+，所述NK细胞的检测标记为CD3-CD56+，所述NK-T细胞的检测标记为CD3+CD56+，所述γδT细胞的检测标记为CD3+TCRγδ+，所述辅助性T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD8-，所述杀伤性T细胞的检测标记为CD3+CD4-CD8+，所述辅助性T细胞/所述杀伤性T细胞的比值的检测标记为CD4+/CD8+，所述Treg细胞的检测标记为CD4+CD25+；
所述CD4+初始T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD45RA+，所述CD4+记忆和效应T细胞的检测标记为CD3+CD4+CD45RO+，所述CD8+初始T细胞的检测标记为CD3+CD8+CD45RA+，所述CD8+记忆和效应T细胞的检测标记为CD3+CD8+CD45RO+，所述活化早期T细胞的检测标记为CD3+CD69+，所述活化中期T细胞的检测标记为CD3+CD25+，所述活化晚期T细胞的检测标记为CD3+HLA-DR+。
5.一种用于检测评估人体免疫功能的试剂盒，其特征在于，包括有检测生物样本中权利要求1-4任一项所述的评估人体免疫功能的指标组合的试剂。
6.根据权利要求5所述的用于检测评估人体免疫功能的试剂盒，其特征在于，包括：用于检测所述免疫细胞图谱的第一试剂，用于检测所述免疫细胞的增殖能力和活力的第二试剂，用于检测所述免疫细胞的杀伤能力的第三试剂；
所述第一试剂包括抗人CD3抗体，抗人CD4抗体，抗人CD8抗体，抗人CD14抗体，抗人CD19抗体，抗人CD25抗体，抗人CD28抗体，抗人CD34抗体，抗人CD45抗体，抗人CD56抗体，抗人CD62L抗体，抗人CD69抗体，抗人HLA-DR抗体和抗人TCRγδ抗体；
所述第二试剂和所述第三试剂包括荧光染料和细胞因子。
7.一种用于非诊断治疗目的的人体免疫功能的检测评估方法，其特征在于，检测生物样本中权利要求1-4任一项所述的评估人体免疫功能的指标组合，包括：
免疫细胞图谱分析：检测外周血中的总白细胞分型数据、T淋巴细胞专项数据、T淋巴细胞活化功能专项数据和树突状细胞专项数据；
免疫细胞的增殖能力和活力分析：荧光标记免疫细胞，并用细胞因子组合刺激免疫细胞增殖，用流式细胞技术检测细胞的增殖情况，计算增殖指数和复制指数；
免疫细胞的杀伤能力分析：分离外周血中的淋巴细胞并培养，建立体外杀伤体系模拟肿瘤浸润淋巴细胞在炎性反应条件下对肿瘤杀伤的过程。
8.人体免疫功能检测评估仪，其特征在于，检测生物样本中权利要求1-4任一项所述的评估人体免疫功能的指标组合，包括：
免疫细胞图谱分析模块，用于进行免疫细胞图谱分析；
免疫细胞的增殖能力和活力分析模块，用于进行免疫细胞的增殖能力和活力分析；
免疫细胞的杀伤能力分析模块，用于进行免疫细胞的杀伤能力分析。
CN202210423794.7A 2022-04-21 2022-04-21 评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法 Pending CN114791411A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210423794.7A CN114791411A (zh) 2022-04-21 2022-04-21 评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210423794.7A CN114791411A (zh) 2022-04-21 2022-04-21 评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114791411A true CN114791411A (zh) 2022-07-26

Family

ID=82461863

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210423794.7A Pending CN114791411A (zh) 2022-04-21 2022-04-21 评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114791411A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116183933A (zh) * 2023-02-21 2023-05-30 上海市第一人民医院 生物标志物组合物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109254147A (zh) * 2018-10-12 2019-01-22 东莞暨南大学研究院 人体外周血免疫细胞功能全面评估试剂盒及评估方法
CN109270265A (zh) * 2018-10-12 2019-01-25 东莞暨南大学研究院 人体外周血杀伤性免疫细胞功能评估试剂盒及评估方法
CN110716051A (zh) * 2018-07-13 2020-01-21 迈健医药科技无锡有限公司 一种免疫细胞全维分析方法
CN111454903A (zh) * 2020-05-06 2020-07-28 青岛瑞思德生物科技有限公司 免疫细胞体外培养、诱导、激活、冻存方法及其细胞库建立
CN111912973A (zh) * 2020-06-15 2020-11-10 上海焕一生物科技有限公司 用于预测胸部肿瘤患者放射治疗后肺损伤临床进展的试剂盒
CN112903634A (zh) * 2019-11-19 2021-06-04 华东理工大学 对免疫细胞进行细胞数、活力或凋亡测定的高精密度方法
CN113970633A (zh) * 2020-07-24 2022-01-25 沈阳康为医学检验实验室有限公司 一种综合评价人体免疫功能的检测方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110716051A (zh) * 2018-07-13 2020-01-21 迈健医药科技无锡有限公司 一种免疫细胞全维分析方法
CN109254147A (zh) * 2018-10-12 2019-01-22 东莞暨南大学研究院 人体外周血免疫细胞功能全面评估试剂盒及评估方法
CN109270265A (zh) * 2018-10-12 2019-01-25 东莞暨南大学研究院 人体外周血杀伤性免疫细胞功能评估试剂盒及评估方法
CN112903634A (zh) * 2019-11-19 2021-06-04 华东理工大学 对免疫细胞进行细胞数、活力或凋亡测定的高精密度方法
CN111454903A (zh) * 2020-05-06 2020-07-28 青岛瑞思德生物科技有限公司 免疫细胞体外培养、诱导、激活、冻存方法及其细胞库建立
CN111912973A (zh) * 2020-06-15 2020-11-10 上海焕一生物科技有限公司 用于预测胸部肿瘤患者放射治疗后肺损伤临床进展的试剂盒
CN113970633A (zh) * 2020-07-24 2022-01-25 沈阳康为医学检验实验室有限公司 一种综合评价人体免疫功能的检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
环境保护部化学品登记中心, 中国农业大学出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116183933A (zh) * 2023-02-21 2023-05-30 上海市第一人民医院 生物标志物组合物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wambre et al. A phenotypically and functionally distinct human TH2 cell subpopulation is associated with allergic disorders
Merchant et al. Adjuvant immunotherapy to improve outcome in high-risk pediatric sarcomas
Mathew et al. The anergic state in sarcoidosis is associated with diminished dendritic cell function
Risdon et al. Proliferative and cytotoxic responses of human cord blood T lymphocytes following allogeneic stimulation
Li et al. Decrease of CD4+ CD25+ regulatory T cells and TGF-β at early immune reconstitution is associated to the onset and severity of graft-versus-host disease following allogeneic haematogenesis stem cell transplantation
Soboslay et al. Ivermectin-facilitated immunity in onchocerciasis. Reversal of lymphocytopenia, cellular anergy and deficient cytokine production after single treatment
CN109666640A (zh) 自然杀伤细胞体外纯培养的方法
US10408848B2 (en) Skin model
US9891213B2 (en) Granulocyte-based methods for detecting and monitoring immune system disorders
WO2004059319A1 (fr) Procedes individuels de mesure d'une fonction lymphocytaire specifique
Jin et al. Peripheral immune cells exhaustion and functional impairment in patients with chronic hepatitis b
EP1233058A1 (en) Method of proliferating natural killer cells
CN114791411A (zh) 评估人体免疫功能的指标组合、试剂盒和方法
Jin et al. APC dysfunction is correlated with defective suppression of T cell proliferation in human type 1 diabetes
WO2023216799A1 (zh) 一种人nkt细胞系及其应用
KR20170110297A (ko) 천연물 소재의 면역증강 검사법 및 상기 검사법을 활용한 맞춤형 식단 제공방법
CN111690606B (zh) 体外激活扩增人体自然杀伤细胞及杀伤率检测方法
Marino et al. Differential IL-7 responses in developing human thymocytes
Bergerson et al. Fewer circulating natural killer cells 28 days after double cord blood transplantation predicts inferior survival and IL-15 response
Pang et al. Peripheral blood Th9 cells reconstitution and its relationship with acute graft-versus-host disease after matched-sibling peripheral blood hematopoietic stem cell transplantation
Kwan et al. Studies on human monocytes with a multiparameter cell sorter.
Kurnick et al. Culture and characterization of lymphocytic infiltrates from endomyocardial biopsies of patients with idiopathic myocarditis
CN105823882B (zh) Atp作为生物标志物用于评价免疫能力的用途及评价方法
Urdaneta et al. Characterization of Local Memory Cells in Stage‐Classified Pulmonary Tuberculosis: Preliminary Observations
CN111537733A (zh) Ccr1在作为copd诊断标志物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20220726

RJ01 Rejection of invention patent application after publication