CN114787196A - 修饰的n-810及其方法 - Google Patents

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Abstract

用于多特异性蛋白复合物的组合物和方法，这些多特异性蛋白复合物包含：包含N72D突变的白介素‑15(IL‑15)结构域(IL‑15N72D)、IL‑15受体αsushi‑结合结构域(IL‑15RαSu)、免疫球蛋白Fc结构域和突变的转化生长因子‑β受体2型(TGFβRII)结构域，其中该突变的TGFβRII结构域分别在位置47、71和131具有N‑＞Q突变。该IL‑15RαSu结构域、该Fc结构域和该突变的TGFβRII结构域通过酰胺键依次连接。优选地，所考虑的复合物进一步包括特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域。

Description

修饰的N-810及其方法
本申请要求我们于2019年8月29日提交的序列号为62/893,662的共同未决的美国临时专利申请的优先权，并且将其通过援引并入本文。
序列表
名称为102719.0021PCT_ST25、大小为134kb的序列表的ASCII文本文件的内容于2020年8月20日创建，并经由EFS-Web与本申请一起以电子方式提交，且通过援引以其全文并入本文。
技术领域
本发明的领域是可用于治疗肿瘤或感染性疾病的多特异性蛋白复合物。
背景技术
背景描述包括可用于理解本发明的信息。并不承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的发明相关，也不承认具体地或隐含地引用的任何出版物是现有技术。
本文中的所有出版物和专利申请都通过援引并入，其程度如同每个单独的出版物或专利申请被具体地且单独地指明通过援引并入一样。在并入的参考文献中的术语的定义或用法与本文提供的该术语的定义不一致或相反时，适用本文提供的该术语的定义，而不适用该术语在该参考文献中的定义。
TxM修饰是基于N-803的IL-15支架的有希望的修饰。这些修饰包括在体内优先将IL-15活性转运至所需位点或组织的抗体/配体序列的融合。最近对TxM支架的改进包括使用TGF-β受体的细胞外结构域(例如“TGF-β陷阱”)以进一步使所得蛋白官能化以在所需位点与天然TGF-β受体竞争。然而，尽管在体外证明了此方法的有效性，但所得蛋白的生物化学分析证明了最终产物中存在大量的糖基化和不均匀性，使得工业商业化和对这种生物化学品的监管批准会冒不必要的风险。
因此，仍然需要用于开发不具有上述糖基化缺点的新治疗分子的组合物和方法。
发明内容
本文披露了包含重组蛋白复合物的各种组合物和方法。该重组蛋白复合物包含含有N72D突变的白介素-15(IL-15)结构域(IL-15N72D)、IL-15受体αsushi-结合结构域(IL-15RαSu)、免疫球蛋白Fc结构域和突变的转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域。考虑该突变的TGFβRII结构域具有突变的糖基化位点，优选以下三种突变：分别为N47Q、N71Q和N131Q。此外，该IL-15RαSu结构域、该Fc结构域和该突变的TGFβRII结构域通过酰胺键依次连接。该IL-15结构域和/或该IL-15RαSu结构域可包含特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域。该IL-15结构域结合到该IL-15RαSu结构域以形成该重组蛋白复合物。
优选地，该结合结构域特异性结合到程序性死亡配体1(PD-L1)。
在一个实施例中，该免疫球蛋白Fc结构域经由接头分子连接到该突变的TGFβRII结构域。考虑该TGFβRII结构域结合到转化因子β(TGFβ)。该突变的TGFβRII结构域包含SEQID NO：2。
此外，本发明人还考虑了治疗有需要的受试者的肿瘤和/或感染性疾病的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的包含如上披露的重组蛋白复合物的药物组合物。该肿瘤包含：胶质母细胞瘤、前列腺癌、血液癌、B细胞肿瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、皮肤T细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、实体瘤、尿路上皮/膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌、乳腺癌、胃癌和食道癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、或鳞状细胞头颈癌。任选地，可以向该受试者施用第二治疗剂，例如化疗剂。
在一个实施例中，本文披露了在有需要的受试者中诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文披露的重组蛋白复合物。
另一方面，本文披露了编码该重组蛋白复合物的表达载体。该表达载体可以是病毒载体、细菌载体或酵母载体。优选地，该病毒载体是腺病毒载体。在特别优选的实施例中，该腺病毒载体缺失了E1和E2b基因。
在一个实施例中，本文披露了病毒表达载体用于治疗有需要的受试者的肿瘤和/或感染性疾病的用途，该病毒表达载体包含第一区段和第二区段，该第一区段编码包含N72D突变的白介素-15(IL-15)结构域(IL-15N72D)；该第二区段编码包含特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域的多肽，其中该结合结构域连接到IL-15受体αsushi-结合结构域(IL-15RαSu)，该IL-15RαSu连接到免疫球蛋白Fc结构域，该免疫球蛋白Fc结构域连接到突变的转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域，其中该突变的TGFβRII结构域分别在位置47、71和131具有N-＞Q突变。在优选的实施例中，该载体是病毒载体，例如病毒载体腺病毒载体。该腺病毒可以缺失了E1和E2b基因。在其他实施例中，该载体也可以是酵母表达载体或细菌表达载体。在一个实施例中，该免疫球蛋白Fc结构域经由接头分子连接到转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域。在一个实施例中，该结合结构域特异性结合到一个或多个分子，该分子包括：程序性死亡配体1(PD-L1)。在一些实施例中，该结合结构域特异性结合到一个或多个分子，该分子包括：程序性死亡配体1(PD-L1)、程序性死亡1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、分化簇33(CD33)、分化簇47(CD47)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族相关基因(GITR)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、组织因子(TF)、δ样蛋白4(DLL4)、单链DNA或T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子-3(T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3，Tim-3)。在一些实施例中，该TGFβRII结构域结合到转化因子β(TGFβ)和/或该突变的TGFβRII结构域包含SEQ ID NO：2。
根据优选实施例的以下详细描述以及附图(其中相同的附图标记表示相同的组件)，本发明主题的各种目的、特征、方面和优点将变得更加清楚。
附图说明
图1示出了TGFβRII中有3个可能的N-糖基化位点，huPD-L1/TxM/TGFβRII中总共有6个额外的N-糖基化位点。
图2示出了异质性huPD-L1/TxM/TGFβRII可能展现不同的糖基化模式和各种占用率。
图3描绘了野生型Rsbc6/TxM/TGFβRII(WT)蛋白复合物及其N47Q变体(其中N47Q突变在TGFβRII上)均由于在TGFβRII上的糖基化而具有多个峰。
图4描绘了用于本研究和披露内容中的各种蛋白构建体。
图5示出了设计为在位置47、71和131具有N→Q突变的无糖基化TGFβRII导致与N-809A相同的糖基化模式并产生均质产物。
具体实施方式
本发明人现已发现，虽然基于IL-15的多特异性蛋白复合物，例如N-803、TxM、修饰的N-803或修饰的TxM(如通过援引并入本文的美国公开号US 20200002425A1中所披露)增强免疫细胞的活性并促进其针对疾病细胞的活性，从而导致疾病的减少或预防，然而却面临缺点。本整个本披露中，“TxM”是指包含连接到结合结构域的IL-15N72D：IL-15RαSu/Fc支架的复合物。示例性TxM是IL-15N72D：IL-15RαSu/Fc复合物，该复合物包含与特异性识别PD-L1的结合结构域(PD-L1TxM)的融合体。
美国公开号US 20200002425 A1披露了一种TxM支架，该支架包括TGF-β受体的细胞外结构域(例如“TGF-β陷阱”)以进一步使所得蛋白官能化以在所需位点与天然TGF-β受体竞争。然而，尽管在体外证明了此方法的有效性，但所得蛋白的生物化学分析证明了最终产物中存在大量的糖基化和不均匀性，使得工业商业化和对这种生物化学品的监管批准存在问题。
如本文所披露的，本发明人通过遗传修饰蛋白的TGF-β陷阱部分以产生在体外和体内保留生物活性的这些蛋白的无糖基化型式克服了这些复杂的问题。在一个实施例中，无糖基化细胞因子受体陷阱的工程化可应用于其他TGF-β系统或其他细胞因子受体融合体(例如TNF-α竞争剂，如依那西普(Etanercept)等)。
本披露的一个方面提供了一种重组蛋白复合物，该重组蛋白复合物包含：包含N72D突变的白介素-15(IL-15)结构域(IL-15N72D)、IL-15受体αsushi-结合结构域(IL-15RαSu)、免疫球蛋白Fc结构域和突变的转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域，其中该突变的TGFβRII结构域分别在位置47、71和131具有N-＞Q突变。考虑IL-15RαSu结构域、Fc结构域和突变的TGFβRII结构域通过酰胺键依次连接以形成单条多肽链。优选地，IL-15RαSu结构域进一步连接到抗PD-L1 scFv。进一步考虑IL-15结构域和/或IL-15RαSu结构域包含特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域，并且其中IL-15结构域结合到IL-15RαSu结构域以形成重组蛋白复合物。
本文披露的蛋白复合物显示与疾病抗原和靶抗原的结合增加。此类蛋白复合物可用于治疗受试者的瘤形成、感染性疾病或自身免疫病的方法中。因此，本文提供了特征在于抗PD-L1/TGFβRII/TxM的组合物，和使用此类组合物来增强针对肿瘤(实体瘤和血液肿瘤)的免疫应答的方法。
在某些实施例中，免疫球蛋白Fc结构域经由接头分子连接到转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域。接头序列应该是柔性的并且允许免疫球蛋白Fc结构域相对于TGFβRII的有效定位从而允许两个结构域的功能活性。此外，重组蛋白复合物还可以在IL-15或IL-15Rα结构域与生物活性多肽之间具有接头。如前所述，接头序列应允许生物活性多肽相对于IL-15或IL-15Rα结构域的有效定位，以允许两个结构域的功能活性。优选地，接头序列包含从约7至20个氨基酸，更优选从约10至20个氨基酸。接头序列优选地是柔性的，以便不将连接的两个生物活性分子保持在单一的不希望的构象。
在各种实施例中，重组蛋白复合物的结合结构域特异性结合到一个或多个分子，该分子包括：程序性死亡配体1(PD-L1)、程序性死亡1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、分化簇33(CD33)、分化簇47(CD47)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族相关基因(GITR)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、组织因子(TF)、δ样蛋白4(DLL4)、单链DNA或T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子-3(Tim-3)。在这些实施例中，结合结构域分别包含抗PD-L1、抗PD-1、抗CTLA-4、抗CD33、抗CD4、抗TNFR家族相关基因(GITR)、抗LFA-1、抗TF和抗DLL4、抗tim-3。
在特别优选的实施例中，结合结构域包含抗PD-L1抗体。在该特定实施例中，重组蛋白复合物的结合结构域特异性结合程序性死亡配体1(PD-L1)的一个或多个分子。
考虑重组蛋白复合物的TGFβRII结构域突变以防止糖基化。如图2所示，在抗huPD-L1/TxM/TGFβRII中使用野生型TGFβRII结构域导致异质性，这可能是由于不同的糖基化模式和各种占用率。如在天然和还原的CS-SDS凝胶中所示，对于IL-15和Rsbc6-SuFc-TGFβ观察到多个峰。这些多个峰显示出最终产物的不均匀性，这很可能是由于大量的糖基化所致。这种不均匀性使得这种生物化学品的工业商业化和监管批准会冒不必要的风险。
本发明人通过制备突变的TGFβRII构建体解决了此问题。TGFβRII结构域的野生型和突变的多肽序列分别以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2示出。如图1所示，TGFβRII中有三个可能的N-糖基化位点，抗huPD-L1/TxM/TGFβRII中总共有六个额外的N-糖基化位点。此外，TGFβRII中还存在六个二硫键。已知复杂的糖基化和二硫化物模式会影响产量和聚集水平。本发明人寻求在TGFβRII多肽中产生突变，这些突变不抑制或降低多肽的生物活性，但确保使糖基化位点发生突变以产生均一的最终产物。
对于N47P突变，如图3所示，由于TGFβRII上的糖基化，野生型(Rsbc6/TxM/TGFβRII)和N47P突变构建体都具有多个峰。此外，由于第3个完整的N-糖基化位点，重量大小向右移动(较大的质量)。由于这种突变是不成功的，本发明人设计了另外几种突变构建体，其中一些在图4中示出。
对于TGFβRII多肽上的N47Q、N71Q和N131Q突变，本发明人发现Rsbc6/TxM/TGFβRII突变构建体导致单一同质产物，如图5所示。
如本文描述，具有靶向疾病细胞的能力的蛋白用于宿主免疫识别和应答的用途是用于治疗癌症、感染性疾病和自身免疫病的有效策略。如在美国专利号8,507,222(通过引用并入本文)中描述，包含IL-15和IL-15受体α结构域的蛋白支架已经用于产生能够识别疾病细胞上的抗原和免疫细胞上的受体的多特异性蛋白。
在一些情况下，这些复合物还包含识别在疾病细胞上表达的抗原(例如PD-L1、ssDNA、CD20、HER2、EGFR、CD19、CD38、CD52、GD2、CD33、Notch1、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、组织因子、HIV包膜或其他肿瘤抗原)的结合结构域。
在一些情况下，多特异性重组蛋白复合物进一步包含用于蛋白二聚化和识别免疫细胞上的CD16受体的IgG Fc结构域。这样一个结构域介导针对靶细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)的刺激。在一些实例中，有用的是采用具有增强的或减少的CD16结合活性的Fc结构域。在一个方面，Fc结构域包含降低ADCC活性但保留形成二硫键二聚体的能力的氨基酸取代L234A和L235A(LALA)(基于Fc共有序列的编号)。
因此，在某些实施例中，重组蛋白复合物包含至少两种蛋白复合物，第一蛋白复合物包含白介素-15(IL-15或IL15突变体诸如N72D)多肽结构域，并且第二蛋白包含与免疫球蛋白Fc结构域融合的可溶性IL-15受体αsushi-结合结构域(IL-15RαSu)，其中免疫球蛋白Fc结构域与转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域融合或连接；第一可溶性蛋白和/或第二可溶性蛋白进一步包含特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域，并且第一蛋白的IL-15结构域结合到第二可溶性蛋白的IL-15RαSu结构域，从而形成融合蛋白复合物。在某些方面，免疫球蛋白Fc结构域经由接头分子连接到转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域。
在某些实施例中，第一可溶性蛋白或第二可溶性蛋白之一进一步包含特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的第二结合结构域(优选地不同于第一结合结构域)。
本文还披露了治疗有需要的受试者的肿瘤和/或感染性疾病的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的包含重组蛋白复合物的药物组合物。肿瘤可以包括胶质母细胞瘤、前列腺癌、血液癌、B细胞肿瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、皮肤T细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、实体瘤、尿路上皮/膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌、乳腺癌、胃癌和食道癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、或鳞状细胞头颈癌。
包含重组蛋白复合物的药物组合物以有效量施用。例如，药物组合物的有效量在约1μg/kg和100μg/kg之间，例如，1μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg、25μg/kg、30μg/kg、35μg/kg、40μg/kg、45μg/kg、50μg/kg、55μg/kg、60μg/kg、65μg/kg、70μg/kg、75μg/kg、80μg/kg、85μg/kg、90μg/kg、95μg/kg、或100μg/kg。替代性地，突变的TxM复合物以固定剂量或基于体表面积(即，每m2)施用。
将包含重组蛋白复合物的药物组合物每月施用至少一次，例如，每月两次、每周一次、每周两次、每天一次、每天两次、每8小时一次、每4小时一次、每2小时一次或每小时一次。针对药物组合物的适合的施用模式包括全身施用、静脉内施用、局部施用、皮下施用、肌内施用、瘤内施用、吸入、和腹膜内施用。
本文考虑的治疗方法可进一步任选地包括向受试者施用一种或多种化疗剂。本文考虑的化疗剂的一些非限制性实例是长春地辛、长春新碱、长春碱、甲氨蝶呤、阿霉素、博来霉素或顺铂。
在另一方面，本文考虑了编码本文披露的重组蛋白复合物的表达载体。表达载体可以是病毒表达载体或酵母表达载体。在此上下文中，应当认识到，表达载体可用于按照常规重组表达方案在体外表达和生产蛋白复合物，或者载体可用于体内生产，其中向待治疗的个体提供导致蛋白复合物的体内表达的载体(例如，重组病毒中的病毒载体)。
载体将通常包含编码蛋白复合物的重组核酸，该蛋白复合物包含含有N72D突变的白介素-15(IL-15)结构域(IL-15N72D)和连接到免疫球蛋白Fc结构域的IL-15受体αsushi-结合结构域(IL-15RαSu)，该免疫球蛋白Fc结构域连接到突变的转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域，其中突变的TGFβRII结构域具有以下三个突变：N47Q、N71Q和N131Q。IL-15结构域和/或IL-15RαSu结构域包括特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域。IL-15结构域结合到IL-15RαSu结构域以形成重组蛋白复合物。在特别优选的实施例中，结合结构域是抗PD-L1，并且抗PD-L1共价连接到IL-15RαSu结构域。
关于重组病毒，考虑所有已知的制备重组病毒的方式均被认为适用于本文，然而，特别优选的病毒是已经在治疗中确立的那些，包括腺病毒、腺相关病毒、甲病毒、疱疹病毒、慢病毒等。在其他适当的选择中，腺病毒是特别优选的。
此外，通常进一步优选的是，病毒是复制缺陷型且非免疫原性病毒。例如，适合的病毒包括经遗传修饰的α病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、慢病毒等。然而，腺病毒是特别优选的。例如，遗传修饰的复制缺陷型腺病毒是优选的，其不仅适用于多次接种，而且适用于对腺病毒具有预先存在的免疫力的个体中的接种(参见例如WO 2009/006479和WO2014/031178，这些专利通过援引以其全文并入本文)。在一些实施例中，复制缺陷型腺病毒载体包括复制缺陷型腺病毒5载体。在一些实施例中，复制缺陷型腺病毒载体在E2b区域中包含缺失。在一些实施例中，复制缺陷型腺病毒载体进一步在E1区域中包含缺失。在这方面，应该注意的是，在遗传修饰的复制缺陷型腺病毒中缺失E2b基因和其他晚期蛋白以降低免疫原性。而且，由于这些特定的缺失，此类经遗传修饰的病毒是复制缺陷的，并允许用于相对较大的重组货物。
例如，WO 2014/031178描述了使用此类经遗传修饰的病毒以表达CEA(结肠直肠胚胎抗原)，从而提供针对结肠癌的免疫反应。而且，如已报道的，使用经遗传修饰的人293细胞可以实现相对高滴度的重组病毒(例如，J Virol.[病毒学杂志]1998年2月；72(2)：926-933)。
构建E1缺失的腺病毒载体Ad5[E1-]，使得转基因仅替换基因的E1区。一般而言，约90％的野生型Ad5基因组保留在载体中。Ad5[E1-]载体具有降低的复制能力，并且在感染不表达Ad5E1基因的细胞后不能产生感染性病毒。重组Ad5[E1-]载体在人细胞中繁殖，从而允许Ad5[E1-]载体复制和包装。Ad5[E1-]载体具有许多积极属性；其中最重要的一项是它们相对易于扩展规模和生产cGMP。目前，超过220项人类临床试验使用了Ad5[E1-]载体，超过两千名受试者接受了sc、im或iv病毒。此外，Ad5载体没有整合；它们的基因组保持游离状态。一般而言，对于没有整合到宿主基因组中的载体，插入诱变和/或种系传递的风险非常低。传统的Ad5[E1-]载体具有接近7kb的携带能力。
使用第一代(E1缺失的)基于Ad5的载体的一个障碍是预先存在的抗腺病毒5型中和抗体的高频率。在WO 2014/031178中描述了克服这种免疫的尝试，该专利通过援引并入本文。具体而言，已描述了一种新型重组Ad5平台，该平台在早期1(E1)基因区域具有缺失，并且在早期2b(E2b)基因区域(Ad5[E1-，E2b-])具有其他缺失。E2b区域(编码DNA聚合酶和前末端蛋白)的缺失导致病毒DNA复制减少和后期病毒蛋白表达降低。E2b缺失的腺病毒载体提供了比第一代腺病毒载体更安全、更有效且更通用的改进的基于Ad的载体。
在又一个实施例中，考虑用于本披露的腺病毒载体包括在Ad基因组的E2b区域中具有缺失，任选地在E1、E3区域中具有缺失，还任选地E4区域被部分或完整移除的腺病毒载体。在又一个实施例中，用于本文的腺病毒载体缺失了E1和/或缺失了E2b区域的前末端蛋白功能。在一些情况下，这种载体没有其他缺失。在另一个实施例中，用于本文的腺病毒载体缺失了E1、DNA聚合酶和/或前末端蛋白功能。
因此，无论重组病毒的类型如何，均考虑可以使用病毒来离体地或在体内感染患者(或非患者)细胞。例如，病毒可以皮下地或静脉内地注射，或者可以鼻内地或经由吸入施用，以如此感染患者细胞并且尤其是抗原呈递细胞。替代性地，可以在体外感染患者的(或来自同种异体来源的)免疫感受态细胞(例如，NK细胞、T细胞、巨噬细胞、树突状细胞等)，并且然后输注给患者。替代性地，免疫疗法不必依赖病毒，但是可以通过核酸转染或使用RNA或DNA、或导致新表位(例如，作为单一肽、串联小基因等)在所需细胞尤其是免疫感受态细胞中表达的其他重组载体进行接种来实现。
如上所述，所希望的核酸序列(用于从病毒感染的细胞中表达)在本领域熟知的合适的调节元件的控制下。例如，合适的启动子元件包括组成型强启动子(例如，SV40、CMV、UBC、EF1A、PGK、CAGG启动子)，但是诱导型启动子也被认为适用于本文，特别是在对于肿瘤微环境典型的诱导条件下。例如，诱导型启动子包括对低氧敏感的那些启动子和对TGF-β或IL-8敏感的启动子(例如，经由TRAF、JNK、Erk或其他应答元件启动子)。在其他实例中，合适的诱导型启动子包括四环素诱导型启动子、黏病毒耐药蛋白1(Mx1)启动子等。
包含E1基因区域缺失、E2b基因区域缺失和编码如本文所述的重组蛋白复合物的核酸的复制缺陷型腺病毒可施用给需要诱导抗肿瘤免疫的患者。本文所述的治疗性组合物的施用途径和频率以及剂量可以随个体和疾病的严重程度而变化，并且可以使用标准技术容易地确立。在一些实施例中，施用包括递送4.8-5.2×1011个复制缺陷型腺病毒颗粒，或4.9-5.1×1011个复制缺陷型腺病毒颗粒，或4.95-5.05×1011个复制缺陷型腺病毒颗粒，或4.99-5.01×1011个复制缺陷型腺病毒颗粒。
病毒颗粒的施用可以通过多种合适的递送途径进行。本文考虑的一种优选的途径是通过注射，诸如瘤内注射、肌内注射、静脉内注射或皮下注射。在一些实施例中，皮下递送可能是优选的。
关于酵母表达和疫苗接种系统，考虑所有已知的酵母菌株均被认为适用于本文。然而，优选的是，酵母是重组酵母属菌株，该菌株用编码如本文所述的蛋白复合物的核酸构建体进行遗传修饰，从而引发针对肿瘤的免疫应答。在上文或本文其他地方描述的本披露的任何实施例的一个方面，酵母媒介物是完整酵母。在一个方面，该完整酵母被杀死。在一个方面，该完整酵母被热灭活。在一个优选的实施例中，酵母是来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的完整的、热灭活的酵母。
本领域披露了基于酵母的治疗组合物的用途。例如，WO 2012/109404披露了用于治疗慢性乙型肝炎感染的酵母组合物。
应注意，任何酵母菌株均可用于产生本披露的酵母媒介物。酵母是属于以下三个纲之一的单细胞微生物：子囊菌纲(Ascomycetes)、担子菌纲(Basidiomycetes)和不完全菌纲(Fungi Imperfecti)。关于选择用作免疫调节剂的酵母类型的一个考虑因素是酵母的致病性。在优选的实施例中，酵母是非致病性菌株(例如酿酒酵母)，因为非致病性酵母菌株使对施用酵母媒介物的个体的任何不利影响最小化。然而，如果可以通过药物干预消除酵母的致病性，则可以使用致病酵母。
例如，合适的酵母菌株属包括酿酒酵母、假丝酵母、隐球菌，汉逊酵母、克鲁维酵母、毕赤酵母、红酵母、裂殖酵母和亚罗酵母。在一方面，酵母属选自酿酒酵母、假丝酵母、汉逊酵母、毕赤酵母或裂殖酵母，并且在优选的方面，使用酿酒酵母。可以使用的酵母菌株的种包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、卡尔酵母(Saccharomycescarlsbergensis)、白色假丝酵母(Candida albicans)、乳酒假丝酵母(Candida kefyr)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、异常汉逊酵母(Hansenula anomala)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、马克斯克鲁维酵母乳变种(Kluyveromyces marxianusvar.lactis)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、深红酵母(Rhodotorula rubra)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)和解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)。
根据本公开将核酸分子转染到酵母细胞中可以通过将核酸分子施用到细胞中的任何方法实现，该方法包括扩散、主动转运、浴超声处理、电穿孔、微注射、脂质转染、吸附和原生质体融合。可以使用本领域技术人员已知的技术将转染的核酸分子整合到酵母染色体中，或维持在染色体外载体上。如上所讨论的，还可以通过用所希望的核酸分子转染完整的酵母微生物或酵母原生质球，在其中产生抗原，并然后使用对于本领域技术人员已知的技术进一步处理这些微生物或原生质球，以产生包含所希望的抗原或其他蛋白的细胞质、菌壳或亚细胞酵母膜提取物或其级分，重组产生酵母细胞质、酵母菌壳和酵母膜颗粒或细胞壁制剂。适合在本文中使用的另外的示例性酵母表达系统、方法和条件描述于US20100196411 A1、US 2017/0246276、或US 2017/0224794和US 2012/0107347中。
如此产生的重组病毒和酵母然后可以单独地或组合地用作药物组合物中的治疗性疫苗，典型地与每剂量单位104-1013个病毒或酵母颗粒，或更优选地每剂量单位109-1012个病毒或酵母颗粒一起配制成无菌可注射组合物。替代性地，可以采用病毒或酵母离体感染患者细胞，然后将如此感染的细胞输给患者。然而，替代性配制品也被认为适用于本文，并且本文预期了所有已知的施用途径和方式。
序列
修饰的N-810重组蛋白复合物的各种示例性序列如下所示。
N-810A：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含人αPDL1/TxM/TGFβRII(M4变体)。在此实施例中，SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成N-810A重组蛋白复合物。SEQ ID NO：3以顺序方式包含前导肽、人αPDL1scFv、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII。SEQ ID NO：4以顺序方式包含前导肽和IL15N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：3-4具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810B：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含人(TGFβRII二聚体/人αPDL1/TxM)。在此实施例中，SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成N-810B重组蛋白复合物。SEQ ID NO：5以顺序方式包含前导肽、人αPDL1scFv和IL15Rα-Fc。SEQ ID NO：6以顺序方式包含前导肽、人TGFβRII二聚体和IL15(N72D)。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：5-6具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810C：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含人αPDL1/TGFβRII二聚体/TxM。在此实施例中，SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成N-810C重组蛋白复合物。SEQ ID NO：7以顺序方式包含前导肽、人TGFβRII二聚体和IL15Rα-Fc。SEQ ID NO：8以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv和IL15(N72D)。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：7-8具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810D：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810(h2*αPDL1/TxM/TGFβRII-WT)。在此实施例中，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：9以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII。SEQ ID NO：10以顺序方式包含前导肽和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：9-10具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810E：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含人αPDL1/TGFβRII/TxM。在此实施例中，SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：11以顺序方式包含前导肽、人TGFβRII和IL15Rα-Fc。SEQ ID NO：12以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：11-12具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810AδC：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810AδC。在此实施例中，SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：13以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv、IL15Rα-Fc-C312S、(G4S)4接头和人TGFβRII。SEQ ID NO：4以顺序方式包含前导肽和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：13-14具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810AδC(TGFβRII-无糖基化)：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810AδC(TGFβRII-无糖基化)。在此实施例中，SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：15以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv、IL15Rα-Fc-C312S和人TGFβRII-N607Q、N631Q、N691Q。SEQ ID NO：16以顺序方式包含前导肽和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：15-16具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810D：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810D。在此实施例中，SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：17以顺序方式包含前导肽、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII。SEQID NO：18以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：17-18具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810A(h2*αPDL1/TxM/TGRβRII-无糖基化)：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810A(h2*αPDL1/TxM/TGRβRII-无糖基化)。在此实施例中，SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ IDNO：19以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII-N607Q、N631Q、N691Q。SEQ ID NO：20以顺序方式包含前导肽和IL15N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：19-20具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N810Aδ铰链：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N810Aδ铰链。在此实施例中，SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：21以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII。SEQ ID NO：22以顺序方式包含前导肽和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：21-22具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N810A(IL15-M38)：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N810A(IL15-M38)。在此实施例中，SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：23以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII。SEQ ID NO：24以顺序方式包含前导肽和IL15(N72D+M38-K41Q，L45S，I67T，N79Y，E93A)。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：23-24具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810A(TGRβRII-无糖基化)：
在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810A(TGRβRII-无糖基化)。在此实施例中，SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：25以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII-N607Q，N631Q。SEQ ID NO：26以顺序方式包含前导肽和IL15N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：25-26具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810A(IL15-L45S)：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810A(IL15-L45S)。在此实施例中，SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：27以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII。SEQ ID NO：28以顺序方式包含前导肽和IL15N72D-L45S。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：27-28具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810B(TGFβRII二聚体-无糖基化/人αPD-L1/TxM)：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含TGFβRII二聚体-无糖基化/人αPD-L1/TxM。在此实施例中，SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQID NO：29以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv和IL15Rα-Fc。SEQ ID NO：30以顺序方式包含前导肽、人TGFβRII二聚体-N47Q，N71Q，N131Q，N198Q，N222Q，N282Q和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：29-30具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810C(αPD-L1/TGFβRII二聚体-无糖基化/TxM)：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810C(αPD-L1/TGFβRII二聚体-无糖基化/TxM)。在此实施例中，SEQ IDNO：31和SEQ ID NO：32的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：31以顺序方式包含前导肽、人TGFβRII二聚体-N47Q，N71Q，N131Q，N198Q，N222Q，N282Q和IL15Rα-Fc。SEQ ID NO：32以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：31-32具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810E(人αPD-L 1/TGFβRII-无糖基化/TxM)：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810E(人αPD-L1/TGFβRII-无糖基化/TxM)。在此实施例中，SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ IDNO：33以顺序方式包含前导肽、人TGFβRII-N47Q，N71Q，N131Q和IL15Rα-Fc。SEQ ID NO：34以顺序方式包含前导肽、人αPDL1 scFv和IL15 N72D。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQID NO：33-34具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
N-810D(IL15-N72D，L45S)：在一个实施例中，本文披露的重组蛋白复合物包含N-810D(IL15-N72D，L45S)。在此实施例中，SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：36的多肽序列通过疏水或亲水相互作用稳定以形成重组蛋白复合物。SEQ ID NO：35以顺序方式包含前导肽、IL15Rα-Fc、(G4S)4接头和人TGFβRII。SEQ ID NO：36以顺序方式包含前导肽、人αPDL1scFv/IL15(N72D-L45S)。因此，本文披露的重组蛋白复合物与SEQ ID NO：35-36具有优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％且最优选100％的序列同一性。
在一些实施例中，用于描述和要求保护本发明某些实施例的表达成分、特性(如浓度)、反应条件等的量的数字应被理解为在一些情况下由术语“约”来修饰。因此，在一些实施例中，书面说明书和所附权利要求中列出的数值参数是近似值，其可以根据特定实施例试图获得的所需特性而变化。在一些实施例中，数值参数应当按照报告的有效数字的数量以及通过应用普通的舍入技术来解释。虽然阐述本发明一些实施例的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是在具体实例中阐述的数值被尽可行地精确地报告。在本发明的一些实施例中呈现的数值可以含有必然由其各自测试测量中所发现的标准偏差引起的某些误差。除非上下文指示相反，否则本文所列出的所有范围应被解释为包括其端点，并且开放式范围应被解释为包括商业实用值。类似地，除非上下文指明相反，否则应将所有值的列表视为包含中间值。
如本文的说明书和随后的整个权利要求中所使用，“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”以及“该/这些(the)”的含义包括复数参照物，除非上下文清楚地另外指明。而且，如本文的说明书中所使用，“在......中(in)”的含义包括“在......中(in)”和“在......上(on)”，除非上下文另有明确说明。而且，并且除非上下文另有指示，否则术语“偶联至”旨在包括直接偶联(其中两个彼此偶联的元件彼此接触)和间接偶联(其中至少一个另外的元件位于两个元件之间)。因此，术语“偶联到”和“与......偶联”同义使用。
此外，如本文所使用，短语“A和B中的至少一个”旨在指‘A’和/或‘B’，而与‘A’和‘B’的性质无关。例如，在一些实施例中，‘A’可以是单一不同物种，而在其他实施例中，‘A’可以表示称为‘A’的属内的单一物种。同样地，在一些实施例中，‘B’可以是单一不同物种，而在其他实施例中，‘B’可以表示称为‘B’的属内的单一物种。
对于本领域技术人员应当清楚的是，在不脱离本文的发明构思的情况下，除了已经描述的那些之外的更多修改是可能的。因此，本发明主题仅受限于所附权利要求的范围。此外，在解释本说明书和权利要求时，所有术语都应当以与上下文一致的尽可能广泛的方式来解释。特别地，术语“包含/包括”(“comprises”和“comprising”)应当被解释为以非排他性方式提及要素、组分或步骤，从而指示所提及的要素、组分或步骤可以与未明确提及的其他要素、组分或步骤一起存在、或使用、或组合。在本说明书的权利要求提及选自由A、B、C......和N组成的组的某物中的至少一种的情况下，该文本应当被解释为仅需要该组中的一种要素，而不是A加N或B加N等。
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Claims (36)

1.一种重组蛋白复合物，该重组蛋白复合物包含：
包含N72D突变的白介素-15(IL-15)结构域(IL-15N72D)、IL-15受体αsushi-结合结构域(IL-15RαSu)、免疫球蛋白Fc结构域和突变的转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域，其中该突变的TGFβRII结构域在位置47、71和131包含至少N-＞Q突变；
该IL-15RαSu结构域、该Fc结构域和该突变的TGFβRII结构域通过酰胺键依次连接，
该IL-15结构域和/或该IL-15RαSu结构域包含特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域，并且
其中该IL-15结构域结合到该IL-15RαSu结构域以形成该重组蛋白复合物。
2.如权利要求1所述的重组蛋白复合物，其中该免疫球蛋白Fc结构域经由接头分子连接到转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域。
3.如权利要求1-2中任一项所述的重组蛋白复合物，其中该结合结构域包含抗程序性死亡配体1(抗PD-L1)，并且其中该结合结构域特异性结合到PD-L1。
4.如权利要求1-3中任一项所述的重组蛋白复合物，其中该结合结构域特异性结合到包括以下的一个或多个分子：程序性死亡配体1(PD-L1)、程序性死亡1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、分化簇33(CD33)、分化簇47(CD47)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族相关基因(GITR)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、组织因子(TF)、δ样蛋白4(DLL4)、单链DNA或T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子-3(Tim-3)。
5.如权利要求1-4中任一项所述的重组蛋白复合物，其中该TGFβRII结构域结合到转化因子β(TGFβ)。
6.如权利要求1所述的重组蛋白复合物，其中该突变的TGFβRII结构域包含SEQ ID NO：2。
7.一种治疗有需要的受试者的肿瘤和/或感染性疾病的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的包含如权利要求1-6中任一项所述的重组蛋白复合物的药物组合物，从而治疗该肿瘤或感染性疾病。
8.如权利要求7所述的方法，其中该肿瘤包含：胶质母细胞瘤、前列腺癌、血液癌、B细胞肿瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、皮肤T细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、实体瘤、尿路上皮/膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌、乳腺癌、胃癌和食道癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、或鳞状细胞头颈癌。
9.如权利要求7所述的方法，该方法任选地包括向该受试者施用一种或多种化疗剂。
10.一种在有需要的受试者中诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的如权利要求1所述的重组蛋白复合物。
11.一种表达载体，该表达载体包含：
第一区段，该第一区段编码包含N72D突变的白介素-15(IL-15)结构域(IL-15N72D)；
第二区段，该第二区段编码包含特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域的多肽，其中该结合结构域连接到IL-15受体αsushi-结合结构域(IL-15RαSu)，该IL-15RαSu连接到免疫球蛋白Fc结构域，该免疫球蛋白Fc结构域连接到突变的转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域，其中该突变的TGFβRII结构域在位置47、71和131包含至少N-＞Q突变。
12.如权利要求11所述的表达载体，其中该载体是病毒载体。
13.如权利要求12所述的表达载体，其中该病毒载体是病毒载体腺病毒载体。
14.如权利要求13所述的表达载体，其中该腺病毒缺失了E1和E2b基因。
15.如权利要求11所述的表达载体，其中该载体是酵母表达载体。
16.如权利要求11所述的表达载体，其中该载体是细菌表达载体。
17.如权利要求11所述的表达载体，其中该免疫球蛋白Fc结构域经由接头分子连接到转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域。
18.如权利要求11所述的表达载体，其中该结合结构域包含抗程序性死亡配体1(抗PD-L1)，并且其中该结合结构域特异性结合到PD-L1。
19.如权利要求11所述的表达载体，其中该结合结构域特异性结合到包括以下的一个或多个分子：程序性死亡配体1(PD-L1)、程序性死亡1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、分化簇33(CD33)、分化簇47(CD47)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族相关基因(GITR)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、组织因子(TF)、δ样蛋白4(DLL4)、单链DNA或T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子-3(Tim-3)。
20.如权利要求11所述的表达载体，其中该TGFβRII结构域结合到转化因子β(TGFβ)。
21.如权利要求11所述的表达载体，其中该突变的TGFβRII结构域包含SEQ ID NO：2。
22.一种治疗有需要的受试者的肿瘤和/或感染性疾病的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的包含如权利要求11-21所述的病毒表达载体的药物组合物。
23.如权利要求22所述的方法，其中该肿瘤包含：胶质母细胞瘤、前列腺癌、血液癌、B细胞肿瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、皮肤T细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、实体瘤、尿路上皮/膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌、乳腺癌、胃癌和食道癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、或鳞状细胞头颈癌。
24.如权利要求22所述的方法，该方法任选地包括向该受试者施用一种或多种化疗剂。
25.一种在有需要的受试者中诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的如权利要求11所述的病毒表达载体。
26.病毒表达载体用于治疗有需要的受试者的肿瘤和/或感染性疾病的用途，该病毒表达载体包含：
第一区段，该第一区段编码包含N72D突变的白介素-15(IL-15)结构域(IL-15N72D)；
第二区段，该第二区段编码包含特异性结合到疾病抗原、免疫检查点分子或免疫信号传导分子的结合结构域，
其中该结合结构域连接到IL-15受体αsushi-结合结构域(IL-15RαSu)，该IL-15RαSu连接到免疫球蛋白Fc结构域，该免疫球蛋白Fc结构域连接到突变的转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域，
其中该突变的TGFβRII结构域分别在位置47、71和131具有N-＞Q突变。
27.如权利要求26所述的用途，其中该载体是病毒载体。
28.如权利要求27所述的用途，其中该病毒载体是病毒载体腺病毒载体。
29.如权利要求28所述的用途，其中该腺病毒缺失了E1和E2b基因。
30.如权利要求26所述的用途，其中该载体是酵母表达载体。
31.如权利要求26所述的用途，其中该载体是细菌表达载体。
32.如权利要求26所述的用途，其中该免疫球蛋白Fc结构域经由接头分子连接到转化生长因子-β受体2型(TGFβRII)结构域。
33.如权利要求26所述的用途，其中该结合结构域包含特异性结合到PD-L1的抗程序性死亡配体1(抗PD-L1)。
34.如权利要求26所述的用途，其中该结合结构域特异性结合到包括以下的一个或多个分子：程序性死亡配体1(PD-L1)、程序性死亡1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、分化簇33(CD33)、分化簇47(CD47)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族相关基因(GITR)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、组织因子(TF)、δ样蛋白4(DLL4)、单链DNA或T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子-3(Tim-3)。
35.如权利要求11所述的用途，其中该TGFβRII结构域结合到转化因子β(TGFβ)。
36.如权利要求11所述的用途，其中该突变的TGFβRII结构域包含SEQ ID NO：2。
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