CN114767728B - 一种预防和治疗帕金森氏病的组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种预防和治疗帕金森氏病的组合物及其制备方法，属于发酵工程技术领域，将蓝莓提取物加入培养基后，用于第一次发酵培养丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR‑190，然后加入蝉衣、山茱萸、羚羊角的酶解产物，进行第二次发酵培养，得到的益生菌发酵中药组合物与抗氧化组合物、益生元、短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。本发明制备的预防和治疗帕金森氏病的组合物能明显改善帕金森病患者的肠道菌群环境，促进肠道有益菌增殖，防止体内氧化反应的发生，抑制炎症因子的分泌，从而起到很好的预防和治疗神经退行性疾病的效果。

Description

一种预防和治疗帕金森氏病的组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及发酵工程技术领域，具体涉及一种预防和治疗帕金森氏病的组合物及其制备方法。
背景技术
帕金森病是一种常见的神经退行性疾病，临床表现包括静止性震颤、肌强直、运动迟缓、姿势平衡障碍等运动症状，以及睡眠障碍、感觉障碍、自主神经功能障碍、精神和认知障碍等非运动症状，帕金森病发病机制复杂，与氧化应激、遗传、线粒体断裂、炎症反应等过程均有关系，但尚无统一定论。目前的治疗方法以缓解症状为主，但复发率高预后并不理想，往往需要终身治疗，给人类带来了严重的社会和经济负担，目前帕金森病仍以西药治疗改善症状为主，但无法延缓疾病进展，所以迫切需求寻找预防和治疗帕金森氏病有效的组合物。
目前，市场上尚无治疗帕金森病的有效中成药。帕金森病的治疗主要是手术治疗和药物治疗两大类。由于手术和多巴替代性治疗存在严重的破坏性和副作用，寻找能够预防和延缓疾病进程的治疗方法成为迫切需要。帕金森病是老年疾病，是人体老化状态下神经内分泌诸多因素失调共同作用的结果，中医药是通过调节机体整体状况而起作用，药性平和，毒副作用小。如果单纯用中医药能有效控制早期帕金森病症状，从而避免西药的毒副作用，大大增强患者服药的依从性，同时，中药在保护神经细胞，抑制氧化应激反应，抗兴奋性毒性等方面研究成果为长期治疗帕金森病，有效控制帕金森病进程奠定了良好的基础，这或许是中医药治疗帕金森病的发展方向。近年来研究发现，肠道可能是帕金森病病理过程的起源，肠道菌群失调可通过多种途径直接或间接参与帕金森病的发生和发展。
肠道菌群失调可能通过以下途径参与帕金森病的发生和发展：(1)损伤肠上皮屏障，增加肠通透性，促炎细菌及其产物和炎症介质暴露于肠神经系统，并通过肠黏膜侵入血液及对先天免疫系统进行刺激，触发肠道炎症和全身炎症反应以及肠神经胶质细胞活化，导致肠神经系统α-突触核蛋白(α-Synuclei，α-Syn)病理性聚集，进而通过迷走神经扩散至中枢神经系统；(2)肠源性细菌产物(如脂多糖)或外周炎症反应(如细胞因子产生)导致血脑屏障破坏，引起中枢神经系统炎症和α-Syn病理性聚集，激活小胶质细胞并最终导致多巴胺能神经元凋亡；(3)导致短链脂肪酸浓度降低，内源性神经保护因子产生减少，引起多巴胺能神经元凋亡；(4)影响多巴胺、5-羟色胺等神经递质的合成和生长激素释放肽的水平等。
中国发明专利CN100409867B公开了一种熄风止颤胶囊，由当归、白芍和钩藤等组成中药复方，其中钩藤27份、当归18份、白芍55份。该中药复方改善震颤症状、肌强直、运动不能症状，能使PD大鼠脑内DA的代谢产物DOPAC含量上升，MOA-B和MDA含量下降，小鼠震颤持续时间缩短，震幅降低，增加小鼠血虚后红细胞计数，有效率76.7％，无明显副作用。
中国发明专利CN103157018A公开了一种治疗帕金森病的溶剂，主要包含天麻、钩藤、丹参、木瓜、全蝎、地龙、天南星等十味中药和麝香注射液、左旋多巴针剂和美金刚注射液等，再辅以白酒组成的一种外用溶剂。利用美金刚注射液起到直接激动多巴胺受体和促进多巴胺释放的功能，以治疗帕金森病。
中国发明专利CN102872429A公开了一种治疗痰火动风所致震颤麻痹的中药方，以钩藤、黄连、滑石、木瓜、僵蚕、胆南星、瓜蒌和生姜为原料制成。但其所称的疗效好，见效快，治愈率高和不刺激胃等是否确已实现难以确定。
中国发明专利CN102283920B公开了一种治疗帕金森氏病的药物组合物，其将三种药材分别用乙醇提取，得到的浸膏干燥粉碎后，按比例混合，得到以刺五加总苷、钩藤总碱和芍药总苷为有效组分的组合物。细胞实验和动物实验表明，该组合物可对PD实现较好的临床疗效，未发现对心、肝、肾功能及血液系统有损害。
中国发明专利CN101730706B公开了一种作为N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)和黑皮质素(MC)受体拮抗剂的治疗活性化合物和组合物，这些化合物可治疗哺乳动物的神经变性疾病或神经病理学病症，这些疾病选自肌萎缩性侧索硬化症、阿尔茨海默病、帕金森氏病和亨廷顿舞蹈病。
发明内容
本发明的目的在于提出一种预防和治疗帕金森氏病的组合物及其制备方法，能明显改善帕金森病患者的肠道菌群环境，促进肠道有益菌增殖，防止体内氧化反应的发生，抑制炎症因子的分泌，从而起到很好的预防和治疗神经退行性疾病的效果。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备方法，将蓝莓提取物加入培养基后，用于第一次发酵培养丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR-190，然后加入蝉衣、山茱萸、羚羊角的酶解产物，进行第二次发酵培养，得到的益生菌发酵中药组合物与抗氧化组合物、益生元、短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
作为本发明的进一步改进，包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，微波加热提取，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将步骤S1制得的蓝莓提取物、碳源、可溶性氮源、维生素、无机盐用无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值，灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中进行第一次发酵培养，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将蝉衣、山茱萸、羚羊角分别洗净，干燥，打粉后，加入水中，加入复合酶酶解，灭酶，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；
S6.第二次发酵：向步骤S4中的发酵组合物中加入步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，进行第二次发酵培养，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将姜黄素和维生素C混合后，研细，过筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将阿拉伯糖和菊粉混合后，研细，过筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将α-硫辛酸和丁酸盐混合后，研细，过筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、步骤S7制得的抗氧化组合物、步骤S8制得的益生元、步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中所述微波加热提取的条件为1000-2000W功率下，加热至70-90℃，提取2-4h；步骤S2中所述蓝莓提取物、碳源、可溶性氮源、维生素、无机盐和无菌水的质量比为(5-7)：(7-12)：(2-5)：(0.5-1)：(0.1-2)：100；所述pH值调节至6.7-7.2。
作为本发明的进一步改进，所述碳源选自菊粉、糖蜜、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、水溶性淀粉中的至少一种；所述可溶性氮源选自硝酸盐、铵盐、尿素、氨基酸中的至少一种；所述氨基酸选自苯丙氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸中的至少一种；所述硝酸盐选自硝酸钠、硝酸钾、硝酸钙中的至少一种；所述铵盐选自氯化钠、硫酸钠、硝酸铵中的至少一种；所述维生素选自泛酸、叶酸、维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素A、维生素K、维生素B12、维生素D、维生素E中的至一种；所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸钾、硫酸钠、氯化钙、氯化镁、硫酸镁、硫酸铁、氯化铁、氯化亚铁、硫酸亚铁、氯化锌、硫酸锌、氯化铜、硫酸铜、氯化锰、硫酸锰中的至少一种。
作为本发明的进一步改进，步骤S3中所述丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR-190的质量比为(3-5)：(1-2)：(2-3)：(2-4)；所述培养的条件为35-40℃，培养时间为18-24h；所述菌种种子液中含菌量为108-109cfu/mL；步骤S4中所述各种菌种种子液的接种量均为3-5％；所述第一次发酵培养的条件为36-38℃，培养36-60h。
作为本发明的进一步改进，步骤S5中所述蝉衣、山茱萸、羚羊角的质量比为(5-7)：(2-4)：(3-5)；所述复合酶为纤维素酶和蛋白酶的组合物，质量比为(2-5)：7；所述蛋白酶选自木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶中的至一种；步骤S6中所述发酵组合物和中药酶解组合物的质量比为10：(3-5)；所述第二次发酵培养的条件为36-38℃，培养48-72h。
作为本发明的进一步改进，步骤S7中所述姜黄素和维生素C的质量比为(3-5)：2；步骤S8中所述阿拉伯糖和菊粉的质量比为(5-7)：3；步骤S9中所述α-硫辛酸和丁酸盐的质量比为(1-3)：5；所述丁酸盐选自丁酸钠、丁酸钾、丁酸钙中的至少一种。
作为本发明的进一步改进，步骤S10中所述益生菌发酵中药组合物、抗氧化组合物、益生元、短链脂肪酸的质量比为(10-15)：(2-5)：(1-4)：(2-5)。
作为本发明的进一步改进，具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1000-2000W功率下，微波加热至70-90℃，提取2-4h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将5-7重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、7-12重量份碳源、2-5重量份可溶性氮源、0.5-1重量份维生素、0.1-2重量份无机盐用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至6.7-7.2，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将3-5重量份丁酸梭菌、1-2重量份嗜酸乳杆菌、2-3重量份发酵乳杆菌和2-4重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为108-109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为3-5％，36-38℃温度下进行第一次发酵培养36-60h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将5-7重量份蝉衣、2-4重量份山茱萸、3-5重量份羚羊角分别洗净，干燥，打粉后，加入水中，加入复合酶酶解，105-110℃灭酶15-20min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和蛋白酶的组合物，质量比为(2-5)：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入3-5重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，36-38℃温度下，进行第二次发酵培养48-72h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将3-5重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将5-7重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将1-3重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸盐混合后，研细，过筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将10-15重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、2-5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、1-4重量份步骤S8制得的益生元、2-5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物。
本发明具有如下有益效果：
本发明加入的蝉衣具有息风通络之功效，山茱萸能滋阴熄风，羚羊角具有平肝熄风定惊止颤的功效，三者经过复合酶酶解后，复合酶包括纤维素酶和蛋白酶，酶解将大部分药效物质溶出，并酶解得到大量容易吸收的小分子短肽、氨基酸等物质，从而进一步提高了中药组合物的药效，后续中药酶解组合物进一步在益生菌存在下发酵，产生大量有益小分子，有助于患者吸收，能明显改善帕金森患者的震颤症状，三者的添加具有协同增效的作用；
本发明添加的益生菌，包括嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR-190，可以恢复患者肠道营养不良，改善胃肠功能，减少ENS神经炎症和减少肠道渗漏；益生菌通过有效调节炎症和与肠道菌群来改善中枢神经系统活动。由于肠内毒素(脂多糖)的通透性增强，帕金森病患者的肠道菌群富含促炎细胞因子。益生菌能够减少帕金森病患者的氧化应激和促炎细胞因子并抑制病原性细菌过度繁殖。乳双歧杆菌JYBR-190益生菌菌株可以抑制病原体并产生酪氨酸脱羧酶。即使存在竞争性底物的情况下，该酶也会在肠内将左旋多巴转化为多巴胺，体内酪氨酸脱羧酶的含量提高有助于降低了左旋多巴的水平，而多巴胺的含量提高有助于神经元的恢复和生长，从而有助于帕金森病的预防和治疗；通过摄入合适的益生菌，调节肠道菌群，从而使肠通透性下降，提高肠免疫能力，减少肠内炎症、肠神经功能异常以及肠道α-syn的异常积聚等的发生，进而能通过脑肠轴改变肠道菌群，介导不同的通路如神经、激素、免疫、炎症和抗氧化信号的传导等，对中枢神经系统疾病产生积极影响。
小胶质细胞被称为中枢神经系统的“巨噬细胞”，在重塑突触、清除病原体、维持脑组织形态与功能稳态等方面有着至关重要的作用，益生菌能通过调节肠道菌群从而改善中枢神经系统小胶质细胞的发育、成熟与功能，完善中枢神经系统的组织形态和功能稳态，进而改善神经元功能，起到很好的预防和治疗帕金森病的效果。
同时，通过摄入益生菌，增加肠道菌群中有益菌的比重，抑制有害菌群如促炎性的肠埃希菌/志贺菌属的增殖、促进抗炎性的直肠真杆菌属、普雷沃氏菌科、拟杆菌属的生长，进而减少脑内淀粉样蛋白的沉积以及神经炎症的发生；
另外，通过加入丁酸梭菌，是一种产丁酸的肠道菌群，从而能够促进肠道中丁酸的产生和积累，降低血清与肠道中促炎因子IL-17的含量，从而对神经退行性疾病，包括帕金森病、阿尔茨海默病等产生积极的影响。同时，丁酸梭菌还能够促进有益的双歧杆菌、乳酸菌、拟杆菌的增殖，进一步提高肠道有益菌群的丰度，有效的抑制引起疾病的葡萄球菌、念珠菌、克雷伯菌、弯曲杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和伤寒沙门菌以及腐败菌等有害菌群的繁殖，减少炎症因子的产生；
本发明通过添加益生元，包括阿拉伯糖和菊粉，能提高碳酸化合物含量，能选择性促进肠道有益菌增殖，提高丁酸盐的合成，减少蛋白水解发酵和有害氨基酸代谢产物增加，从而减少了胺类、吲哚类和硫化氢等有害物质的产生，具有协同增效的作用；
氧化还原稳态、氧化应激和炎症是大脑衰老和神经退行性疾病的特点。本发明另外添加了抗氧化组合物，包括姜黄素和维生素C，能进一步防止体内氧化反应的发生，抑制炎症因子的分泌，从而起到很好的预防和治疗神经退行性疾病的效果，具有协同增效的作用；
本发明短链脂肪酸，包括α-硫辛酸和丁酸盐，可以改善无菌动物的运动障碍，减轻神经炎症，刺激BDNF和神经可塑性突触蛋白来改善神经退行性疾病患者的肠道菌群和大脑运动发展，使人体的肠道的环境呈酸性，进而促进人体内有益细菌的生长，从而改善肠道菌群失调，对帕金森病的预防和治疗起到积极的效果，另外，α-硫辛酸还能够促进细胞清除自由基，增加谷胱甘肽的合成，调控转录因子活性，起到很好的抗氧化调节的效果。
另外，本发明添加的蓝莓提取物中富含多酚类化合物，作为原料之一加入益生菌培养基中，不仅可以促进益生菌增殖发酵，同时，加入本发明组合物中，可以改善老年大鼠的空间记忆和运动表现，促进神经干细胞增殖，增加胰岛素样生长因子-1水平，该因子是海马神经增生的关键分子，从而改善神经退行性疾病的病症，起到很好的防护效果。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明测试例2中对帕金森病大鼠脑组织中氧化应激水平的影响对比图；
图2为本发明测试例2中对帕金森病大鼠脑组织中炎症因子水平的影响对比图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
丁酸梭菌，有效物质含量>99％，购于山东百牧药业实力有限公司；嗜酸乳杆菌，有效物质含量>99％，购于山东思扬生物科技有限公司；发酵乳杆菌，100亿cfu/g，乳双歧杆菌JYBR-190，均购于山东中科嘉亿生物工程有限公司；纤维素酶，酶活力5000U/g，型号夏盛FDG-2226，木瓜蛋白酶，酶活力100000U/g，型号夏盛FDG-2203，菠萝蛋白酶，酶活力100000U/g，型号夏盛，购于夏盛(北京)生物科技开发有限公司；无花果蛋白酶，有效物质含量>99％，购于深圳乐芙生物科技有限公司。
实施例1
本实施例提供一种预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1000W功率下，微波加热至70℃，提取2h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将5重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、5重量份葡萄糖、1重量份蔗糖、1重量份麦芽糖、1重量份氯化铵、1重量份尿素、0.2重量份叶酸、0.2重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至6.7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将3重量份丁酸梭菌、1重量份嗜酸乳杆菌、2重量份发酵乳杆菌和2重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为108cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为3％，36℃温度下进行第一次发酵培养36h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将5重量份蝉衣、2重量份山茱萸、3重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，105℃灭酶15min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶的组合物，质量比为2：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入3重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，36℃温度下，进行第二次发酵培养48h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将3重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将5重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将1重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将10重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、2重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、1重量份步骤S8制得的益生元、2重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
实施例2
本实施例提供一种预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，2000W功率下，微波加热至90℃，提取4h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将7重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、10重量份麦芽糖、2重量份乳糖、2重量份尿素、1重量份丝氨酸、1重量份赖氨酸、1重量份苏氨酸、0.5重量份维生素C、0.5重量份维生素B1、1重量份氯化钠、0.2重量份硫酸镁、0.2重量份硫酸铁、0.3重量份硫酸锌、0.3重量份氯化铜用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7.2，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将5重量份丁酸梭菌、2重量份嗜酸乳杆菌、3重量份发酵乳杆菌和4重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为5％，38℃温度下进行第一次发酵培养60h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将7重量份蝉衣、4重量份山茱萸、5重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶20min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和菠萝蛋白酶的组合物，质量比为5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入5重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，38℃温度下，进行第二次发酵培养72h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将5重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将7重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将3重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钾混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将15重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、4重量份步骤S8制得的益生元、5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
实施例3
本实施例提供一种预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
实施例4
与实施例3相比，复合酶为单一的纤维素酶，其他条件均不改变。
实施例5
与实施例3相比，复合酶为单一的无花果蛋白酶，其他条件均不改变。
对比例1
与实施例3相比，步骤S2中未添加蓝莓提取物，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.培养基的制备：将12重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S2.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S3.发酵组合物的制备：将步骤S2制得的菌种种子液分别接种到步骤S1制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S4.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S5.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S4中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S6.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S7.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S8.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S9.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S5制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S6制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S7制得的益生元、3.5重量份步骤S8制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例2
与实施例3相比，未添加丁酸梭菌，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和7重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例3
与实施例3相比，未添加乳双歧杆菌JYBR-190，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将7重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例4
与实施例3相比，未添加蝉衣，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将3重量份山茱萸、10重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例5
与实施例3相比，未添加羚羊角，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将10重量份蝉衣、3重量份山茱萸分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例6
与实施例3相比，未进行步骤S5、S6，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S6.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S7.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S8.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S4制得的发酵组合物、3.5重量份步骤S5制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S6制得的益生元、3.5重量份步骤S7制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例7
与实施例3相比，未添加抗氧化组合物，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S8.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S9.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、2.5重量份步骤S7制得的益生元、3.5重量份步骤S8制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例8
与实施例3相比，未添加姜黄素，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化物的制备：将姜黄素研细，过100目筛，得到抗氧化物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例9
与实施例3相比，未添加维生素C，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化物的制备：将维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将2重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸钠混合后，研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例10
与实施例3相比，未添加短链脂肪酸，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S8制得的益生元混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例11
与实施例3相比，未添加α-硫辛酸，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将丁酸钠研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
对比例12
与实施例3相比，未添加丁酸钠，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1500W功率下，微波加热至80℃，提取3h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将6重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、6重量份葡萄糖、2重量份蔗糖、1重量份果糖、1重量份硝酸铵、2重量份尿素、0.5重量份半胱氨酸、0.3重量份泛酸、0.2重量份维生素C、0.2重量份维生素B12、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份氯化锰、0.1重量份硫酸锌、0.1重量份氯化铜、0.6重量份氯化钠用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至7，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将4重量份丁酸梭菌、1.5重量份嗜酸乳杆菌、2.5重量份发酵乳杆菌和3重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为4％，37℃温度下进行第一次发酵培养48h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将6重量份蝉衣、3重量份山茱萸、4重量份羚羊角分别洗净，70℃干燥2h，打粉后，加入水中，加入1重量份复合酶酶解，110℃灭酶17min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的组合物，质量比为3.5：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入4重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，37℃温度下，进行第二次发酵培养56h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将4重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过100目筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将6重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过100目筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将α-硫辛酸研细，过100目筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将12重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、3.5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、2.5重量份步骤S8制得的益生元、3.5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。
测试例1动物急性毒性研究
选择健康昆明种小白鼠，通过灌胃的方式给药，观察实施例1-3和对比例1-12制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物的急性毒性反应。
结果：给药的最大耐受量＞30g/kg，相当于临床用药量的600倍。空白对照组给予同等剂量的生理盐水，连续服药7d。通过观察各组小鼠，各组小鼠的一般健康状况良好，毛色光滑，食欲正常，大小便正常，给药期间未出现动物死亡案例，实验结束后，各给药组小鼠平均体重增长率与空白对照组相近，表面本发明制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物没有毒性。
测试例2
1、试验方法
1.1分组与给药：随机选取7-9周龄，清洁级，雄性健康SD大鼠，体重在190-220g，总计200只，分成20组，每组10只，分别为空白组、模型组、阳性组、实施例1-5组和对比例1-12组，实施例1-5和对比例1-12组灌胃给予0.4g/kg的实施例1-5和对比例1-12制备的预防和治疗帕金森氏病的组合物，模型组和对照组给予等量的生理盐水，阳性组给予1.67mg/kg左旋多巴。
1.2造模：将模型组、阳性组、实施例1-5组和对比例1-12组的小鼠适应性喂养7d后，经腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉，固定并切开颅顶皮肤，定位纹状体，确定前囟前1.0mm、中线右3.0mm作为第一注药点，确定前囟后0.2mm、中线右2.7mm、硬膜下5.0mm作为第二注药点，于上述两个注药点分别注入5μL含0.2wt％抗坏血酸的6-OHDA，术后缝合伤口，并预防伤口感染。术后喂养7d，静脉注射0.5mg/kg阿扑吗啡，观察大鼠旋转行为。当大鼠出现在30min内，向左旋转圈数多于210圈时，说明帕金森病大鼠建模成功。
1.3行为学检测：
1.3.1旋转转圈：分别于干预前、后统计各组大鼠30min内的旋转圈数，每只大鼠测量3次，取平均值为最终结果。
1.3.2爬杆实验：准备若干个等长的竹竿，将各组小鼠引导爬杆，记录各组大鼠掉头时间以及爬完全程所用时间，每只大鼠测试3次，取平均值为最终结果。
1.4 ELISA检测脑组织中氧化应激、炎症因子水平：取各组小鼠脑组织，经过匀浆、离心处理后，将上清液按照ELISA试剂盒操作说明书检测脑组织中TNF-α、NO、GSH、SOD的含量。
1.5统计下方法
采用SPSS 22.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差
Figure BDA0003613435520000271
表示，多组数据采用单因素方差分析，或双因素方差分析；以P＜0.05为差异具有统计学意义。
2、试验结果
对帕金森病大鼠转圈数的影响结果见表1。
表1对帕金森病大鼠转圈数的影响(单位：圈，
Figure BDA0003613435520000272
n＝10)
组别 干预前 干预后
空白组 0 0
模型组 <![CDATA[302.4±22.1<sup>*</sup>]]> <![CDATA[315.2±19.5<sup>*</sup>]]>
阳性组 <![CDATA[305.7±18.6<sup>#</sup>]]> <![CDATA[224.5±12.4<sup>#</sup>]]>
实施例1 <![CDATA[307.4±21.4<sup>#</sup>]]> <![CDATA[239.4±14.5<sup>#</sup>]]>
实施例2 <![CDATA[308.6±22.4<sup>#</sup>]]> <![CDATA[235.2±15.2<sup>#</sup>]]>
实施例3 <![CDATA[306.1±19.2<sup>#</sup>]]> <![CDATA[232.9±16.7<sup>#</sup>]]>
实施例4 304.2±24.1 265.2±15.5
实施例5 305.5±23.2 261.1±13.9
对比例1 303.7±24.6 277.2±14.1
对比例2 306.2±21.0 285.7±13.6
对比例3 304.9±20.5 284.4±17.6
对比例4 307.8±20.4 257.2±15.7
对比例5 306.1±21.8 260.1±16.3
对比例6 302.6±22.3 272.3±18.2
对比例7 303.9±23.7 282.2±15.2
对比例8 304.8±19.4 274.5±12.5
对比例9 303.5±18.5 276.1±13.5
对比例10 306.7±22.1 290.2±12.1
对比例11 307.4±21.6 278.3±14.9
对比例12 308.2±20.1 275.7±15.4
注释：*为与正常组比较，P<0.05；#为与模型组比较，P<0.05。
由上表可知，与空白组相比，模型组大鼠转圈数增加，本发明实施例1-3制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物能明显减少帕金森病大鼠转圈数。
对帕金森病大鼠转头和爬杆总时间的影响结果见表2。
表2对帕金森病大鼠转头和爬杆总时间的影响(单位：s，
Figure BDA0003613435520000281
n＝10)
组别 转头时间 爬杆总时间
空白组 2.2±0.8 9.7±2.2
模型组 <![CDATA[7.8±2.1<sup>*</sup>]]> <![CDATA[28.5±7.3<sup>*</sup>]]>
阳性组 <![CDATA[3.7±0.9<sup>#</sup>]]> <![CDATA[11.2±4.2<sup>#</sup>]]>
实施例1 <![CDATA[4.7±1.1<sup>#</sup>]]> <![CDATA[13.1±3.5<sup>#</sup>]]>
实施例2 <![CDATA[4.4±1.2<sup>#</sup>]]> <![CDATA[12.8±3.7<sup>#</sup>]]>
实施例3 <![CDATA[4.1±1.3<sup>#</sup>]]> <![CDATA[12.5±3.1<sup>#</sup>]]>
实施例4 5.2±0.9 14.5±2.9
实施例5 5.4±0.8 14.9±3.0
对比例1 6.1±1.4 17.2±2.8
对比例2 6.7±1.2 18.7±2.5
对比例3 6.5±1.4 18.5±2.6
对比例4 5.8±0.9 15.2±3.3
对比例5 5.6±0.8 15.0±2.4
对比例6 6.5±1.4 18.3±3.1
对比例7 6.9±1.3 20.2±2.9
对比例8 6.3±1.5 18.0±3.0
对比例9 6.1±1.6 17.8±2.6
对比例10 7.0±1.4 22.4±2.5
对比例11 6.5±1.2 18.5±2.1
对比例12 6.3±1.4 17.8±2.3
注释：*为与正常组比较，P<0.05；#为与模型组比较，P<0.05。
由上表可知，与空白组相比，模型组大鼠转头和爬杆总时间明显延长。本发明实施例1-3制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物能明显降低帕金森病大鼠转头和爬杆总时间。
对帕金森病大鼠脑组织中氧化应激水平的影响结果见图1，对帕金森病大鼠脑组织中炎症因子水平的影响结果见图2。由于图片版面限制，将实施例1-5组坐标改成实例1-5，对比例1-12组坐标改成对比1-12，用以示意。
注释：*为与正常组比较，P<0.05；#为与模型组比较，P<0.05。
由图1可知，与空白组相比，模型组大鼠GSH、SOD含量明显降低。本发明实施例1-3制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物能明显提高帕金森病大鼠GSH、SOD含量。
由图2可知，与空白组相比，模型组大鼠TNF-α和NO含量明显提高。本发明实施例1-3制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物能明显降低帕金森病大鼠TNF-α和NO含量。
3、结论
采用西药药物治疗帕金森病，虽然也有一定的疗效，但长期治疗带来的副作用，引发的并发症以及经济负担都会引起患者的心理失衡。炎症因子包括TNF-α和NO，其中，TNF-α是一种重要的细胞因子，在帕金森病发病中会起到破坏作用。NO小分子化合物在神经细胞内会生成，具有广泛的生物学效应，一旦含量超标，便会造成细胞损伤，引发炎症，从而加剧帕金森病的症状。另外，氧化应激是致使神经退行性疾病发生的潜在发病机制。SOD、GSH是两种体内广泛存在的抗氧化剂，可以阻止超氧自由基、羟自由基产生，避免体内氧化应激产生。本实验发现，本发明实施例1-3制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物能通过提高SOD、GSH等抗氧化剂的含量，减少体内氧化应激，降低炎症因子TNF-α和NO含量，减少体内炎症反应，从而改善帕金森大鼠的症状，具体表现为明显减少帕金森病大鼠转圈数、明显降低帕金森病大鼠转头和爬杆总时间，起到很好的预防和治疗帕金森病的效果。
实施例4、5与实施例3相比，复合酶为单一的纤维素酶或无花果蛋白酶，对帕金森大鼠干预后转圈数升高，爬杆时间和转头时间延长，而炎症因子含量提高，氧化应激水平升高；本发明酶解中药组合物的复合酶包括纤维素酶和蛋白酶，酶解将大部分药效物质溶出，并酶解得到大量容易吸收的小分子短肽、氨基酸等物质，从而进一步提高了中药组合物的药效。
实施例4、5与实施例3相比，复合酶为单一的纤维素酶或无花果蛋白酶，帕金森大鼠干预后转圈数升高，爬杆时间和转头时间延长，而炎症因子含量提高，GSH和SOD含量下降；本发明酶解中药组合物的复合酶包括纤维素酶和蛋白酶，酶解将大部分药效物质溶出，并酶解得到大量容易吸收的小分子短肽、氨基酸等物质，从而进一步提高了中药组合物的药效。
对比例1与实施例3相比，步骤S2中未添加蓝莓提取物，炎症因子含量提高，GSH和SOD含量下降，对帕金森大鼠的干预治疗作用下降。本发明添加的蓝莓提取物中富含多酚类化合物，作为原料之一加入益生菌培养基中，不仅可以促进益生菌增殖发酵，同时，加入本发明组合物中，可以改善老年大鼠的空间记忆和运动表现，促进神经干细胞增殖，增加胰岛素样生长因子-1水平，该因子是海马神经增生的关键分子，从而改善神经退行性疾病的病症，起到很好的防护效果。
对比例2与实施例3相比，未添加丁酸梭菌，帕金森大鼠干预后转圈数升高，爬杆时间和转头时间延长，炎症因子含量明显提高。本发明通过加入丁酸梭菌，是一种产丁酸的肠道菌群，从而能够促进肠道中丁酸的产生和积累，降低血清与肠道中促炎因子IL-17的含量，从而对神经退行性疾病，包括帕金森病、阿尔茨海默病等产生积极的影响。同时，丁酸梭菌还能够促进有益的双歧杆菌、乳酸菌、拟杆菌的增殖，进一步提高肠道有益菌群的丰度，有效的抑制引起疾病的葡萄球菌、念珠菌、克雷伯菌、弯曲杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和伤寒沙门菌以及腐败菌等有害菌群的繁殖，减少炎症因子的产生；
对比例3与实施例3相比，未添加乳双歧杆菌JYBR-190，帕金森大鼠干预后转圈数明显升高，爬杆时间和转头时间明显延长，而炎症因子含量提高，GSH和SOD含量下降。本发明添加的益生菌可以恢复患者肠道营养不良，改善胃肠功能，减少ENS神经炎症和减少肠道渗漏；益生菌通过有效调节炎症和与肠道菌群来改善中枢神经系统活动，减少帕金森病患者的氧化应激和促炎细胞因子并抑制病原性细菌过度繁殖。乳双歧杆菌JYBR-190益生菌菌株可以抑制病原体并产生酪氨酸脱羧酶。即使存在竞争性底物的情况下，该酶也会在肠内将左旋多巴转化为多巴胺，体内酪氨酸脱羧酶的含量提高有助于降低了左旋多巴的水平，而多巴胺的含量提高有助于神经元的恢复和生长，从而有助于帕金森病的预防和治疗；通过摄入合适的益生菌，调节肠道菌群，从而使肠通透性下降，提高肠免疫能力，减少肠内炎症、肠神经功能异常以及肠道α-syn的异常积聚等的发生，进而能通过脑肠轴改变肠道菌群，介导不同的通路如神经、激素、免疫、炎症和抗氧化信号的传导等，对中枢神经系统疾病产生积极影响。
对比例4、5与实施例3相比，未添加蝉衣或羚羊角；帕金森大鼠干预后转圈数升高，爬杆时间和转头时间明显延长，而炎症因子含量提高，GSH和SOD含量下降，对比例6与实施例3相比，未进行步骤S5、S6，帕金森大鼠干预后转圈数明显升高，爬杆时间和转头时间明显延长，而炎症因子含量明显提高，GSH和SOD含量明显下降，本发明加入的蝉衣具有息风通络之功效，羚羊角具有平肝熄风定惊止颤的功效，经过复合酶酶解后，中药酶解组合物进一步在益生菌存在下发酵，产生大量有益小分子，有助于患者吸收，能明显改善帕金森患者的震颤症状，两者的添加具有协同增效的作用。
对比例7与实施例3相比，未添加抗氧化组合物，而炎症因子含量明显提高，GSH和SOD含量下降，对比例8、9与实施例3相比，未添加姜黄素或维生素C，炎症因子含量提高，氧化应激水平升高，本发明另外添加了抗氧化组合物，包括姜黄素和维生素C，能进一步防止体内氧化反应的发生，抑制炎症因子的分泌，从而起到很好的预防和治疗神经退行性疾病的效果，具有协同增效的作用。
对比例10与实施例3相比，未添加短链脂肪酸，帕金森大鼠干预后转圈数明显升高，爬杆时间和转头时间明显延长，而炎症因子含量明显提高，GSH和SOD含量明显下降，对比例11、12与实施例3相比，未添加α-硫辛酸或丁酸钠，炎症因子含量提高，GSH和SOD含量下降。本发明短链脂肪酸，包括α-硫辛酸和丁酸盐，可以改善无菌动物的运动障碍，减轻神经炎症，刺激BDNF和神经可塑性突触蛋白来改善神经退行性疾病患者的肠道菌群和大脑运动发展，使人体的肠道的环境呈酸性，进而促进人体内有益细菌的生长，从而改善肠道菌群失调，对帕金森病的预防和治疗起到积极的效果，另外，α-硫辛酸还能够促进细胞清除自由基，增加谷胱甘肽的合成，调控转录因子活性，起到很好的抗氧化调节的效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种预防和治疗帕金森氏病的药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，微波加热提取，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将步骤S1制得的蓝莓提取物、碳源、可溶性氮源、维生素、无机盐用无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值，灭菌备用；所述蓝莓提取物、碳源、可溶性氮源、维生素、无机盐和无菌水的质量比为（5-7）：（7-12）：（2-5）：（0.5-1）：（0.1-2）：100；所述pH值调节至6.7-7.2；
S3.菌种种子液的制备：将丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液；所述丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR-190的质量比为（3-5）：（1-2）：（2-3）：（2-4）；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中进行第一次发酵培养，得到发酵组合物；所述各种菌种种子液的接种量均为3-5%；
S5.中药酶解组合物的制备：将蝉衣、山茱萸、羚羊角分别洗净，干燥，打粉后，加入水中，加入复合酶酶解，灭酶，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述蝉衣、山茱萸、羚羊角的质量比为（5-7）：（2-4）：（3-5）；所述复合酶为纤维素酶和蛋白酶的组合物，质量比为（2-5）：7；
S6.第二次发酵：向步骤S4中的发酵组合物中加入步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，进行第二次发酵培养，得到益生菌发酵中药组合物；所述发酵组合物和中药酶解组合物的质量比为10：（3-5）；
S7.抗氧化组合物的制备：将姜黄素和维生素C混合后，研细，过筛，得到抗氧化组合物；所述姜黄素和维生素C的质量比为（3-5）：2；
S8.益生元的制备：将阿拉伯糖和菊粉混合后，研细，过筛，得到益生元；所述阿拉伯糖和菊粉的质量比为（5-7）：3；
S9.短链脂肪酸的制备：将α-硫辛酸和丁酸盐混合后，研细，过筛，得到短链脂肪酸；所述α-硫辛酸和丁酸盐的质量比为（1-3）：5；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、步骤S7制得的抗氧化组合物、步骤S8制得的益生元、步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的药物；所述益生菌发酵中药组合物、抗氧化组合物、益生元、短链脂肪酸的质量比为（10-15）：（2-5）：（1-4）：（2-5）。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述微波加热提取的条件为1000-2000W功率下，加热至70-90℃，提取2-4h。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述碳源选自菊粉、糖蜜、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、水溶性淀粉中的至少一种；所述可溶性氮源选自硝酸盐、铵盐、尿素、氨基酸中的至少一种；所述氨基酸选自苯丙氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸中的至少一种；所述硝酸盐选自硝酸钠、硝酸钾、硝酸钙中的至少一种；所述维生素选自泛酸、叶酸、维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素A、维生素K、维生素B12、维生素D、维生素E中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸钾、硫酸钠、氯化钙、氯化镁、硫酸镁、硫酸铁、氯化铁、氯化亚铁、硫酸亚铁、氯化锌、硫酸锌、氯化铜、硫酸铜、氯化锰、硫酸锰中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述培养的条件为35-40℃，培养时间为18-24h；所述菌种种子液中含菌量为108-109cfu/mL；步骤S4中所述第一次发酵培养的条件为36-38℃，培养36-60h。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述蛋白酶选自木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶中的至少一种；步骤S6中所述第二次发酵培养的条件为36-38℃，培养48-72h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S9中所述丁酸盐选自丁酸钠、丁酸钾、丁酸钙中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1.蓝莓提取物的制备：将蓝莓洗净，干燥至足干后，粉碎，加入水中，1000-2000W功率下，微波加热至70-90℃，提取2-4h，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到蓝莓提取物；
S2.培养基的制备：将5-7重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、7-12重量份碳源、2-5重量份可溶性氮源、0.5-1重量份维生素、0.1-2重量份无机盐用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值至6.7-7.2，紫外线灭菌备用；
S3.菌种种子液的制备：将3-5重量份丁酸梭菌、1-2重量份嗜酸乳杆菌、2-3重量份发酵乳杆菌和2-4重量份乳双歧杆菌JYBR-190分别接种到高氏培养基中，分别培养成菌种种子液，所述菌种种子液中含菌量为108-109cfu/mL；
S4.发酵组合物的制备：将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中，各种菌种种子液的接种量均为3-5%，36-38℃温度下进行第一次发酵培养36-60h，得到发酵组合物；
S5.中药酶解组合物的制备：将5-7重量份蝉衣、2-4重量份山茱萸、3-5重量份羚羊角分别洗净，干燥，打粉后，加入水中，加入复合酶酶解，105-110℃灭酶15-20min，过滤，滤液冷冻干燥，得到中药酶解组合物；所述复合酶为纤维素酶和蛋白酶的组合物，质量比为（2-5）：7；
S6.第二次发酵：向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入3-5重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物，搅拌混合均匀后，36-38℃温度下，进行第二次发酵培养48-72h，得到益生菌发酵中药组合物；
S7.抗氧化组合物的制备：将3-5重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后，研细，过筛，得到抗氧化组合物；
S8.益生元的制备：将5-7重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后，研细，过筛，得到益生元；
S9.短链脂肪酸的制备：将1-3重量份重量份α-硫辛酸和5重量份丁酸盐混合后，研细，过筛，得到短链脂肪酸；
S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备：将10-15重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、2-5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、1-4重量份步骤S8制得的益生元、2-5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀，得到预防和治疗帕金森氏病的药物。
8.一种如权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的预防和治疗帕金森氏病的药物。
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