CN114761567A

CN114761567A - 用于修饰真核细胞的组合物和方法

Info

Publication number: CN114761567A
Application number: CN202080080112.6A
Authority: CN
Inventors: J·L·沃尔夫; P·萨古
Original assignee: Ochard Therapy Europe Ltd
Current assignee: Ochard Therapy Europe Ltd
Priority date: 2019-10-16
Filing date: 2020-10-16
Publication date: 2022-07-15
Also published as: AU2020365133A1; EP4045666A1; CA3157966A1; JP2022553938A; WO2021076993A1; EP4045666A4

Abstract

本文描述了用于修饰真核细胞的组合物和方法，例如以离体表达所关注的转基因和/或产生扩增的细胞群。使用本公开的组合物和方法，真核细胞群，诸如多能细胞群(例如，CD34+造血干细胞或祖细胞)可以通过使所述细胞与病毒载体诸如慢病毒载体和二嵌段共聚物，诸如由亲水性区域和疏水性区域组成的二嵌段共聚物接触来转导，以表达所关注的基因。例如，所述二嵌段共聚物可以由聚氧乙烯(PEO)亚基和聚氧丙烯(PRO)亚基组成。另外，本文所述的组合物和方法可以用于例如通过使所述细胞与二嵌段共聚物接触来促进离体多能细胞群(例如，CD34+造血干细胞或祖细胞)的增殖或存活。

Description

用于修饰真核细胞的组合物和方法

技术领域

本公开涉及用于修饰真核细胞，诸如用于遗传修饰真核细胞以表达所关注的转基因，以及用于促进细胞增殖和存活的组合物和方法。

序列表

本申请包含已经以ASCII格式电子提交并据此以引用的方式整体并入的序列表。所述ASCII副本创建于2020年10月16日，被命名为51139-023WO2_Sequence_Listing_10_16_20_ST25，并且大小为2,292字节。

背景技术

与蛋白质缺乏和功能丧失突变相关的遗传疾病代表一类过去难以治疗的具有挑战性的疾患。基于细胞的疗法代表一条有希望的前进道路，允许所关注的基因以稳定的方式在患者体内进行功能表达。为这种形式的疗法制备细胞通常需要对细胞进行遗传修饰以表达所期望的基因。需要增强真核细胞的遗传修饰的改进的方法。

发明内容

本公开涉及用于修饰真核细胞，诸如多能细胞，包括造血干细胞(HSC)和造血祖细胞(HPC)的组合物和方法。本文所述的组合物和方法可以用于遗传修饰此类细胞，例如，以促进所关注的转基因在所述细胞中的表达。例如，使用本公开的组合物和方法，可以使多能细胞群，诸如HSC和/或HPC群，接触编码所关注的转基因的病毒载体，以转导所述细胞从而表达所期望的基因。所述病毒载体可以是逆转录病毒，诸如慢病毒。为了刺激靶细胞的病毒转导，可以使所述细胞与所述病毒载体以及包含亲水性组分和疏水性组分的二嵌段共聚物接触。例如，所述二嵌段共聚物可以包含聚氧乙烯(PEO)亚基和聚氧丙烯(PPO)亚基。本公开的组合物和方法提供了一系列重要的医学有益效果，因为根据本文所述的程序制备的所述细胞可以提供给具有与所关注的基因的内源性缺陷相关的病理的受试者(例如，哺乳动物受试者，诸如人类患者)。通过将经修饰的细胞施用于所述受试者，所述受试者可以经历缺陷基因的恢复表达。不受机制的限制，这种治疗方法代表一种可以治疗患有遗传病症的受试者的模式，以及一种减轻所述病症的症状的方法。

本公开的组合物和方法部分基于以下发现：当与靶细胞接触时，包含亲水性组分(例如，PEO亚基)和疏水性组分(例如，PPO亚基)的二嵌段共聚物能够促进病毒转导。这些二嵌段共聚物可以用于实现靶细胞的转导，同时仍然维持稳健的遗传修饰。

在第一方面，本公开的特征在于一种转导真核细胞以表达转基因的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)编码所述转基因的病毒载体和(ii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在另一个方面，本公开的特征在于一种在真核细胞中表达转基因的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)编码所述转基因的病毒载体和(ii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在另一个方面，本公开的特征在于一种促进编码转基因的病毒载体迁移至真核细胞的细胞核的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)所述病毒载体和(ii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在本公开的三个前述方面中的任一个的一些实施方案中，所述方法还包括使所述细胞接触降低蛋白激酶C(PKC)的活性和/或表达的物质。

在另一个方面，本公开的特征在于一种转导真核细胞以表达转基因的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)编码所述转基因的病毒载体、(ii)降低PKC的活性和/或表达的物质和(iii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在另一个方面，本公开的特征在于一种在真核细胞中表达转基因的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)编码所述转基因的病毒载体、(ii)降低PKC的活性和/或表达的物质和(iii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在另一个方面，本公开的特征在于一种促进编码转基因的病毒载体迁移至真核细胞的细胞核的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)所述病毒载体、(ii)降低PKC的活性和/或表达的物质和(iii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在又一个方面，本公开的特征在于一种促进真核细胞中的肌动蛋白解聚的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)降低PKC的活性和/或表达的物质和(ii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在另一个方面，本公开的特征在于一种抑制真核细胞中的丝切蛋白磷酸化的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)降低PKC的活性和/或表达的物质和(ii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在另一个方面，本公开的特征在于一种增加真核细胞中的脱磷酸化丝切蛋白的浓度的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)降低PKC的活性和/或表达的物质和(ii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

测量真核细胞中的肌动蛋白解聚、丝切蛋白磷酸化和脱磷酸化丝切蛋白的量的方法是本领域已知的并且包括例如以下文献中描述的那些：Yoder等人，Cell 134:782-792(2008)，该文献的公开内容以引用方式整体并入本文。

在另一个方面，本公开的特征在于一种促进真核细胞的存活和/或增殖的方法，所述方法通过使所述细胞接触(i)降低PKC的活性和/或表达的物质和(ii)二嵌段共聚物诸如包含PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物来进行。

在本公开的三个前述方面中的任一个的一些实施方案中，所述方法还包括使所述细胞接触编码转基因的病毒载体，从而转导所述细胞以表达所述转基因。

在上述方面中的任一者的一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有以下结构：

X₁—[PEO]_m—L—[PPO]_n—X₂

其中m和n是整数；

L不存在或者是化学接头；并且

X₁和X₂各自独立地表示任选存在的化学取代基。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有以下结构：

X₁—[PEO]_m—[PPO]_n—X₂

其中m和n是整数；并且

X₁和X₂各自独立地表示任选存在的化学取代基。

在一些实施方案中，X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、任选取代的烷氧基、任选取代的酰基氧基、任选取代的氨基、任选取代的烷基氨基、任选取代的酰氨基、卤素、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_2-6炔基、任选取代的酰基、任选取代的烷氧基羰基、氧代基、硫代羰基、任选取代的羧基或脲基。在一些实施方案中，X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_1-6烷氧基或任选取代的C_1-6烷基氨基。例如，在一些实施方案中，X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、H₂N、H₃CO、乙基-O、正丁基-O、叔丁基-O、正丁基或叔丁基。

在上述方面中的任一者的一些实施方案中，所述二嵌段共聚物的所述PEO亚基具有的数均分子量(Mn)为约5,000g/mol至约25,000g/mol(例如，所述二嵌段共聚物的所述PEO亚基具有的Mn为约5,500g/mol、6,000g/mol、6,500g/mol、7,000g/mol、7,500g/mol、8,000g/mol、8,5000g/mol、9,000g/mol、9,500g/mol、10,000g/mol、10,500g/mol、11,000g/mol、11,500g/mol、12,000g/mol、12,500g/mol、13,000g/mol、13,500g/mol、14,000g/mol、14,500g/mol、15,000g/mol、15,500g/mol、16,000g/mol、16,500g/mol、17,000g/mol、17,500g/mol、18,000g/mol、18,500g/mol、19,000g/mol、19,500g/mol、20,000g/mol、20,500g/mol、21,000g/mol、21,500g/mol、22,000g/mol、22,500g/mol、23,000g/mol、23,500g/mol、24,000g/mol、24,500g/mol、或25,000g/mol)。例如，在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物的所述PEO亚基具有的Mn为约9,000g/mol至约19,000g/mol。在一些特定实施方案中，所述二嵌段共聚物的所述PEO亚基具有的Mn为约9,000g/mol、9,500g/mol、13,800g/mol、15,500g/mol、18,000g/mol、或19,000g/mol。

在上述方面中的任一者的一些实施方案中，所述二嵌段共聚物的所述PPO亚基具有的Mn为约2,000g/mol至约10,000g/mol(例如，所述二嵌段共聚物的所述PPO亚基可以具有的Mn为约2,000g/mol、2,500g/mol、3,000g/mol、3,500g/mol、4,000g/mol、4,500g/mol、5,000g/mol、5,500g/mol、6,000g/mol、6,500g/mol、7,000g/mol、7,500g/mol、8,000g/mol、8,500g/mol、9,000g/mol、9,500g/mol、或10,000g/mol)。例如，在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物的所述PPO亚基具有的Mn为约3,500g/mol至约5,500g/mol。在一些特定实施方案中，所述二嵌段共聚物的所述PPO亚基具有的Mn为约3,500g/mol或5,500g/mol。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于40质量％(例如，约41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、或更大)。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于50质量％(例如，约50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、或更大)。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于60质量％(例如，约60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、或更大)。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于70质量％(例如，约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、或更大)。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量为约40％至约90％(例如，约40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、或90％)。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量为约50％至约85％(例如，约50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、或85％)。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量为约60％至约80％(例如，约60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％)。

在上述方面中的任一者的一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的Mn大于约8,000g/mol。例如，所述二嵌段共聚物可以具有的Mn大于约10,000g/mol(例如，所述二嵌段共聚物具有的Mn大于10,500g/mol、11,000g/mol、11,500g/mol、12,000g/mol、12,500g/mol、13,000g/mol、13,500g/mol、14,000g/mol、14,500g/mol、15,000g/mol、15,500g/mol、16,000g/mol、16,500g/mol、17,000g/mol、17,500g/mol、18,000g/mol、18,500g/mol、19,000g/mol、19,500g/mol、20,000g/mol、20,500g/mol、21,000g/mol、21,500g/mol、22,000g/mol、22,500g/mol、23,000g/mol、23,500g/mol、24,000g/mol、24,500g/mol、25,000g/mol、25,000g/mol、26,000g/mol、26,500g/mol、27,000g/mol、27,500g/mol、28,000g/mol、28,500g/mol、29,000g/mol、29,500g/mol、30,000g/mol、或更大)。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的Mn为约10,000g/mol至约30,000g/mol(例如，所述二嵌段共聚物具有的Mn为约10,500g/mol、11,000g/mol、11,500g/mol、12,000g/mol、12,500g/mol、13,000g/mol、13,500g/mol、14,000g/mol、14,500g/mol、15,000g/mol、15,500g/mol、16,000g/mol、16,500g/mol、17,000g/mol、17,500g/mol、18,000g/mol、18,500g/mol、19,000g/mol、19,500g/mol、20,000g/mol、20,500g/mol、21,000g/mol、21,500g/mol、22,000g/mol、22,500g/mol、23,000g/mol、23,500g/mol、24,000g/mol、24,500g/mol、25,000g/mol、25,000g/mol、26,000g/mol、26,500g/mol、27,000g/mol、27,500g/mol、28,000g/mol、28,500g/mol、29,000g/mol、29,500g/mol、或30,000g/mol)。例如，在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的Mn为约12,000g/mol至约25,000g/mol(例如，约12,500g/mol至约23,500g/mol)。在一些特定实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的Mn为约12,500g/mol、13,000g/mol、17,300g/mol、19,000g/mol、22,500g/mol、或23,500g/mol。

在上述方面中的任一者的一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的多分散指数(Mw/Mn)为约1至约1.2(例如，所述二嵌段共聚物具有的多分散指数为约1、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09、1.10、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、1.17、1.18、1.19、或1.20)。例如，在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的多分散指数为约1.06至约1.17。在一些特定实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的多分散指数为约1.06、1.07、1.08、1.09、1.10、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、或1.17。

在所述二嵌段共聚物的一些实施方案中，m是约100至约500。例如，在一些实施方案中，m是约200至约450，诸如约205至约432。在一些实施方案中，m是162至486(例如，323)。在一些实施方案中，m是159至477(例如，318)。在一些实施方案中，m是108至324(例如，216)。在一些实施方案中，m是103至309(例如，205)。在一些实施方案中，m是148至444(例如，295)。在一些实施方案中，m是171至513(例如，341)。在一些实施方案中，m是142至426(例如，284)。在一些实施方案中，m是100至300(例如，200)。在一些实施方案中，m是113至339(例如，225)。在一些实施方案中，m是109至327(例如，217)。在一些实施方案中，m是115至345(例如，230)。在一些实施方案中，m是120至360(例如，240)。

在一些特定实施方案中，m是200、205、216、217、225、230、240、284、314、318、323、352、409、或432。

在所述二嵌段共聚物的一些实施方案中，n是约10至约200。例如，在一些实施方案中，n是约40至约100，诸如约50至约95。在一些实施方案中，n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，n是28至84(例如，55)。

在一些特定实施方案中，n是50、53、55、57、60、65、70、86、或95。

在所述二嵌段共聚物的一些实施方案中，m是约100至约500，并且n是约10至约200，诸如约40至100或50至约95。例如，在一些实施方案中，m是约200至约450，诸如约205至约432，并且n是约10至约200，诸如约40至100或50至约95。

在一些实施方案中，m是162至486(例如，323)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是162至486(例如，323)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是162至486(例如，323)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是162至486(例如，323)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是162至486(例如，323)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是162至486(例如，323)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是162至486(例如，323)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是159至477(例如，318)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是159至477(例如，318)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是159至477(例如，318)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是159至477(例如，318)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是159至477(例如，318)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是159至477(例如，318)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是159至477(例如，318)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是108至324(例如，216)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是108至324(例如，216)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是108至324(例如，216)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是108至324(例如，216)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是108至324(例如，216)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是108至324(例如，216)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是108至324(例如，216)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是103至309(例如，205)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是103至309(例如，205)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是103至309(例如，205)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是103至309(例如，205)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是103至309(例如，205)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是103至309(例如，205)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是103至309(例如，205)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是148至444(例如，295)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是148至444(例如，295)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是148至444(例如，295)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是148至444(例如，295)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是148至444(例如，295)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是148至444(例如，295)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是148至444(例如，295)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是171至513(例如，341)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是171至513(例如，341)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是171至513(例如，341)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是171至513(例如，341)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是171至513(例如，341)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是171至513(例如，341)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是171至513(例如，341)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是142至426(例如，284)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是142至426(例如，284)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是142至426(例如，284)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是142至426(例如，284)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是142至426(例如，284)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是142至426(例如，284)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是142至426(例如，284)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是100至300(例如，200)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是100至300(例如，200)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是100至300(例如，200)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是100至300(例如，200)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是100至300(例如，200)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是100至300(例如，200)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是100至300(例如，200)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是113至339(例如，225)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是113至339(例如，225)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是113至339(例如，225)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是113至339(例如，225)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是113至339(例如，225)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是113至339(例如，225)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是113至339(例如，225)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是109至327(例如，217)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是109至327(例如，217)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是109至327(例如，217)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是109至327(例如，217)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是109至327(例如，217)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是109至327(例如，217)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是109至327(例如，217)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是115至345(例如，230)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是115至345(例如，230)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是115至345(例如，230)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是115至345(例如，230)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是115至345(例如，230)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是115至345(例如，230)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是115至345(例如，230)，并且n是28至84(例如，55)。

在一些实施方案中，m是120至360(例如，240)，并且n是43至129(例如，86)。在一些实施方案中，m是120至360(例如，240)，并且n是27至81(例如，53)。在一些实施方案中，m是120至360(例如，240)，并且n是29至87(例如，57)。在一些实施方案中，m是120至360(例如，240)，并且n是28至84(例如，55)。在一些实施方案中，m是120至360(例如，240)，并且n是30至90(例如，60)。在一些实施方案中，m是120至360(例如，240)，并且n是33至99(例如，65)。在一些实施方案中，m是120至360(例如，240)，并且n是28至84(例如，55)。

在所述二嵌段聚合物的一些实施方案中，m是205、216、314、352、409、或432，并且n是50、60、70、或95。在一些实施方案中，m是205，并且n是60。在一些实施方案中，m是216，并且n是60。在一些实施方案中，m是216，并且n是50。在一些实施方案中，m是216，并且n是70。在一些实施方案中，m是314，并且n是60。在一些实施方案中，m是352，并且n是60。在一些实施方案中，m是409，并且n是95。在一些实施方案中，m是432，并且n是60。

由于在包含PPO和PEO亚基的二嵌段共聚物的合成过程中发生的变化，本领域的技术人员将理解m和n的值可以变化，例如，大于引述值最多2倍和小于引述值最多2倍。因此，n＝50的值表示二嵌段共聚物的非均相混合物，其中n可以是25至100，诸如值为25至75、26至74、27至73、28至72、29至71，30至70、31至69、32至68、33至67、34至66、35至65、36至64、37至63、38至62、39至61、40至60、41至59、42至58、43至57、44至56、45至55等等。类似地，n＝60的值表示二嵌段共聚物的非均相混合物，其中n可以是30至120，诸如30至90。类似地，n＝70的值表示二嵌段共聚物的非均相混合物，其中n可以是35至140，诸如35至105。

在所述二嵌段共聚物的一些实施方案中，m:n的比率为约1至约12。例如，在一些实施方案中，m:n的比率为约2至约8，诸如约3.4至约7.2。在一些实施方案中，m:n的比率为约2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、9.5、9.6、8.7、8.8、8.9、9、或更大。在一些特定实施方案中，m:n的比率为约2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、或更大。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有以下结构：

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有选自以下种类的结构。在每个结构中，应当理解，n和m的指定值表示二嵌段共聚物的非均相混合物，其中n和m可以从小于指定值最多2倍至大于指定值最多2倍变化：

[PEO]₃₂₃—[PPO]₈₆—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₂₃—[PPO]₈₆—O-正丁基、

[PEO]₃₁₈—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₁₈—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₉₅—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₉₅—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₃₄₁—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₄₁—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₂₈₄—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₈₄—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₂₀₀—[PPO]₅₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₀—[PPO]₅₅—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₁₇—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₇—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₃₀—[PPO]₆₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₃₀—[PPO]₆₅—O-正丁基、

[PEO]₂₄₀—[PPO]₅₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₄₀—[PPO]₅₅—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—O-正丁基、

[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—正丁基、

HO—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₇₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₇₀—OH、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—OH。

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—O-正丁基。

[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—OH。

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—O-正丁基。

[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—OH。

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—O-正丁基。

[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—OH。

HOCH₂CH₂—[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—O-正丁基。

[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—OH。

HOCH₂CH₂—[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH。

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—正丁基。

HO—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—正丁基。

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₀—O-正丁基。

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₀—OH。

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—O-正丁基。

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH。

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₇₀—O-正丁基。

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₇₀—OH。

在一些实施方案中，可以与本文所述的组合物和方法结合使用的二嵌段共聚物包括，例如，聚(乙二醇)-聚(γ-苄基L-谷氨酸)PEG-PBLA、聚(乙二醇)-聚(D,L-乳酸)PEG-PDLLA、聚(乙二醇)-聚(L-乳酸)PEG-PLLA、聚(乙二醇)-聚(ε-己内酯)PEG-PCL、聚(乙二醇)-聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)PEG-PLGA、聚(乙二醇)-聚(γ-苄基L-谷氨酸)PEG-PBLG、聚(乙二醇)-聚(β-苄基L-天冬氨酸)PEG-PBLA、聚(乙二醇)-聚(α-甲酸苄酯-ε-己内酯)PEG-PBCL、和聚(乙二醇)-聚(δ-戊内酯)PEG-PVL。此类二嵌段共聚物包含例如PEG₅₀₀₀-PCL₅₀₀₀、PEG₂₀₀₀-PCL₁₄₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₅₀₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₁₃₀₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₂₄₀₀₀、PEG₂₀₀₀-PCL₂₀₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₂₅₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₅₀₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₈₅₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₂₄₇₀₀、MPEG₂₀₀₀-PCL₁₂₀₀、MPEG2000-PCL₂₇₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₃₈₀₀、MPEG₅₀₀₀-PCL₁₈₀₀₀、PEG₅₀₀₀-PCL₄₀₀₀、PEG₂₀₀₀-PCL₉₀₀、PEG₁₉₈₀-PCL₁₃₆₈、PEG₁₉₈₀-PCL₂₆₂₂、PEG₁₉₈₀-PCL₁₇₃₂₈、PEG₂₀₀₀-PCL₂₂₈₀、PEG₅₀₀₀-PCL₅₀₀₀、PEG₅₀₀₀-PCL₂₄₀₀₀、PEG₅₀₀₀-PCL₅₀₀₀、PEG₅₀₀₀-PCL₂₄₀₀₀、PEG₅₀₀₀-PCL₄₇₉₀、PEG₅₀₀₀-PCL₁₀₀₀₀、MPEG₅₃₃₃-PCL₂₆₃₈、MPEG₅₃₃₃-PCL₄₉₈₄、MPEG₅₃₃₃-PCL₈₀₃₄、MPEG₅₃₃₃-PCL₉₀₆₈、MPEG₅₀₀₀-PCL₂₁₆₆、MPEG₂₀₀₀-PCL₁₃₂₀、MPEG₂₀₀₀-PCL₈₅₂、MPEG₇₅₀-PCL₄₆₄、MPEG₇₅₀-PCL₃₂₃、MPEG₇₅₀-PCL₁₉₇、MPEG-PCL、PEG₅₀₀₀-PDLLA₄₂₀₀、PEG₅₀₀₀-PDLLA₄₅₀₀₀、MPEG₂₀₀₀-PDLLA₂₀₀₀、MPEG₂₀₀₀-PDLLA₁₃₃₃、MPEG₅₀₀₀-PDLLA₂₁₄₃、PEG₅₂₀₀₀-PDLLA₅₆₀₀₀、PEG₉₁₀₀₀-PDLLA₅₆₀₀₀、PEG₄₁₀₀-PDLLA₁₂₀₀、PEG₆₀₀₀-PDLLA₃₀₀₀、PEG₅₇₀₀-PDLLA₅₄₀₀、PEG₆₁₀₀-PDLLA₇₈₀₀、PEG₅₀₀₀-PBCL₄₇₀₀、PEG₅₀₀₀-PBCL₄₄₇₀、PEG₁₂₀₀₀-PBLA₅₀₀₀、PEG₁₂₀₀₀-PBLA₃₀₀₀、PEG-PBLA、PEG₁₂₀₀₀-PBLA₅₀₀₀、MPEG₂₀₀₀-PVL₁₀₀₀、MPEG₂₀₀₀-PVL₂₀₀₀、MPEG₅₀₀₀-PVL₂₆₀₀、和MPEG₅₀₀₀-PVL₄₉₀₀。这些二嵌段共聚物例如在Hussein等人Materials 11:1-26,2018中有所描述，该文献的公开内容据此整体并入。

在本公开的上述方面中的任一个的一些实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞，诸如人类细胞。在一些实施方案中，所述细胞是多能细胞。所述细胞可以是CD34+细胞。在一些实施方案中，所述细胞是胚胎干细胞或诱导性多能干细胞。在一些实施方案中，所述细胞是HSC或HPC。

在一些实施方案中，所述降低PKC的活性和/或表达的物质活化Akt信号转导。所述降低PKC的活性和/或表达的物质可以是PKC抑制剂或降低编码PKC的核糖核酸(RNA)转录物(即，编码PKC的信使RNA转录物)的翻译的剂。

在一些实施方案中，所述降低PKC的活性和/或表达的物质是降低编码PKC的RNA转录物的翻译的剂。在一些实施方案中，所述剂含有核酸。所述核酸可以含有干扰RNA，诸如短干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)或微RNA(miRNA)。在一些实施方案中，所述核酸含有反义寡核苷酸。

在一些实施方案中，所述核酸与编码PKC的内源性RNA转录物退火。所述核酸可以例如与编码PKC的内源性RNA转录物的区域至少85％互补(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％互补)。

在一些实施方案中，所述降低PKC的活性和/或表达的物质是PKC抑制剂。所述PKC抑制剂可以是星形孢菌素或其变体。例如，所述PKC抑制剂可以是以式(I)表示的化合物

其中R₁是H、OH、任选取代的烷氧基、任选取代的酰基氧基、任选取代的氨基、任选取代的烷基氨基、任选取代的酰氨基、卤素、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_2-6炔基、任选取代的酰基、任选取代的烷氧基羰基、氧代基、硫代羰基、任选取代的羧基或脲基；

R₂是H、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_2-6炔基或任选取代的酰基；

R_a和R_b各自独立地是H、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基或任选取代的C_2-6炔基、任选取代的和任选稠合的芳基、任选取代的和任选稠合的杂芳基、任选取代的和任选稠合的环烷基、或任选取代的和任选稠合的杂环烷基，或者R_a和R_b与它们结合的原子一起连接形成任选取代的和任选稠合的杂环烷基环；

R_c是O、NR_d或S；

R_d是H、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基或任选取代的C_2-6炔基；

每个X独立地是卤素、任选取代的卤代烷基、氰基、任选取代的氨基、羟基、硫醇、任选取代的烷氧基、任选取代的烷硫基、任选取代的酰基氧基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的羧基、脲基、任选取代的烷基磺酰基、任选取代的芳基磺酰基、任选取代的杂芳基磺酰基、任选取代的环烷基磺酰基、任选取代的杂环烷基磺酰基、任选取代的烷基氢硫基、任选取代的芳基氢硫基、任选取代的杂芳基氢硫基、任选取代的环烷基氢硫基、任选取代的杂环烷基氢硫基、任选取代的烷基亚磺酰基、任选取代的芳基亚磺酰基、任选取代的杂芳基亚磺酰基、任选取代的环烷基亚磺酰基、任选取代的杂环烷基亚磺酰基、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的和任选稠合的芳基、任选取代的和任选稠合的杂芳基、任选取代的和任选稠合的环烷基、或任选取代的和任选稠合的杂环烷基；

每个Y独立地是卤素、任选取代的卤代烷基、氰基、任选取代的氨基、羟基、硫醇、任选取代的烷氧基、任选取代的烷硫基、任选取代的酰基氧基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的羧基、脲基、任选取代的烷基磺酰基、任选取代的芳基磺酰基、任选取代的杂芳基磺酰基、任选取代的环烷基磺酰基、任选取代的杂环烷基磺酰基、任选取代的烷基氢硫基、任选取代的芳基氢硫基、任选取代的杂芳基氢硫基、任选取代的环烷基氢硫基、任选取代的杂环烷基氢硫基、任选取代的烷基亚磺酰基、任选取代的芳基亚磺酰基、任选取代的杂芳基亚磺酰基、任选取代的环烷基亚磺酰基、任选取代的杂环烷基亚磺酰基、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的和任选稠合的芳基、任选取代的和任选稠合的杂芳基、任选取代的和任选稠合的环烷基、或任选取代的和任选稠合的杂环烷基；

---表示任选存在的键；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(II)表示的化合物

其中R₁是H、OH、任选取代的烷氧基、任选取代的酰基氧基、任选取代的氨基、任选取代的烷基氨基、任选取代的酰氨基、卤素、氧代基或硫代羰基；

R_a和R_b与它们结合的原子一起连接形成任选取代的和任选稠合的杂环烷基环；

R_c是O或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(III)表示的化合物

其中R₁是H、OH、氧代基或硫代羰基；

环A是任选取代的和任选稠合的杂环烷基环；

R_c是O或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(IV)表示的化合物

其中R₁是H、OH或氧代基；

环B是任选取代的杂芳基或杂环烷基环；

R_c是O或S；

W是O、NH或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(V)表示的化合物

其中R₁是H、OH或氧代基；

R_c是O或S；

W是O、NH或S；

每个Z独立地是卤素、任选取代的卤代烷基、氰基、任选取代的氨基、羟基、硫醇、任选取代的烷氧基、任选取代的烷硫基、任选取代的酰基氧基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的羧基、脲基、任选取代的烷基磺酰基、任选取代的芳基磺酰基、任选取代的杂芳基磺酰基、任选取代的环烷基磺酰基、任选取代的杂环烷基磺酰基、任选取代的烷基氢硫基、任选取代的芳基氢硫基、任选取代的杂芳基氢硫基、任选取代的环烷基氢硫基、任选取代的杂环烷基氢硫基、任选取代的烷基亚磺酰基、任选取代的芳基亚磺酰基、任选取代的杂芳基亚磺酰基、任选取代的环烷基亚磺酰基、任选取代的杂环烷基亚磺酰基、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的和任选稠合的芳基、任选取代的和任选稠合的杂芳基、任选取代的和任选稠合的环烷基、或任选取代的和任选稠合的杂环烷基；并且

p是0或1；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(VI)表示的化合物

其中R₁是H、OH或氧代基；

s是0-8的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(VII)表示的化合物

其中R₁是H、OH或氧代基；

R₂是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；并且

R₃是H、OH、任选取代的烷氧基、任选取代的酰基氧基、任选取代的氨基或任选取代的酰氨基

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(VIII)表示的化合物

其中R₁是H、OH或氧代基；

R₂是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；并且

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(IX)表示的化合物

其中每个X独立地是卤素、任选取代的卤代烷基、氰基、任选取代的氨基、羟基、硫醇、任选取代的烷氧基、任选取代的烷硫基、任选取代的酰基氧基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的羧基、脲基、任选取代的烷基磺酰基、任选取代的芳基磺酰基、任选取代的杂芳基磺酰基、任选取代的环烷基磺酰基、任选取代的杂环烷基磺酰基、任选取代的烷基氢硫基、任选取代的芳基氢硫基、任选取代的杂芳基氢硫基、任选取代的环烷基氢硫基、任选取代的杂环烷基氢硫基、任选取代的烷基亚磺酰基、任选取代的芳基亚磺酰基、任选取代的杂芳基亚磺酰基、任选取代的环烷基亚磺酰基、任选取代的杂环烷基亚磺酰基、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的和任选稠合的芳基、任选取代的和任选稠合的杂芳基、任选取代的和任选稠合的环烷基、或任选取代的和任选稠合的杂环烷基；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(1)表示的化合物

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(2)表示的星形孢菌素，即(2S,3R,4R,6R)-3-甲氧基-2-甲基-4-(甲基氨基)-29-氧杂-1,7,17-三氮杂八环[12.12.2.12,6.07,28.08,13.015,19.020,27.021,26]二十九-8,10,12,14,19,21,23,25,27-壬-16-酮

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(X)表示的化合物

其中R₁是H、OH或氧代基；

t是0-6的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XI)表示的化合物

其中R₁是H、OH或氧代基；并且

R₄是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XII)表示的化合物

其中R₁是H、OH或氧代基；并且

R₄是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XIII)表示的化合物

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(3)表示的化合物

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(4)表示的化合物

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(128)表示的化合物

或其盐。该化合物也称为K252a。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是选自以下的化合物：

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XIV)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XV)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是选自以下的化合物：

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XVI)表示的化合物

其中R是H、任选取代的烷基、任选取代的酰基、任选取代的磺酰基、任选取代的亚磺酰基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基和任选取代的杂环烷基；

或者其盐或季铵化变体。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XVII)表示的化合物

或者其盐或季铵化变体。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是选自以下的化合物：

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XVIII)表示的化合物

其中R是H、OH、C_1-6烷氧基或氧代基；并且

R₂是

任选地其中糖部分的构型来源于D-葡萄糖、D-半乳糖或D-甘露糖；

R₃是H、OH、C_1-6烷酰氧基、C_1-6烷氧基、苄氧基、苯甲酰氧基或苯氧基，它们中的每个在所述苯基部分中任选地被卤素、羟基、三氟甲基、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基取代；

R₄是OH、C_1-6烷酰氧基、苯甲酰氧基、苄氧基、氨基、C_1-6烷基氨基、二-C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基羰基氨基、C_2-20烷酰氨基、苯甲酰氨基、苄氧基羰基氨基、或苯氧基羰基氨基，它们中的每个在所述苯基部分中任选地被卤素、羟基、三氟甲基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；

R₅是H或C_1-6烷基；

R₆是游离的羟基、或被脂族C_2-22羧酸酯化的羟基，或者是C_1-6烷氧基羰基氧基、C_1-6烷基磺酰基氧基、游离的氨基、或被脂族C_2-22羧酸酰化的氨基、C_1-6烷氧基羰基氨基、叠氮基、苯甲酰氧基、苄氧基羰基氧基、苯甲酰氨基、苄氧基羰基氨基或苯基磺酰基氧基，它们中的每个在所述苯基部分中任选地被卤素、羟基、三氟甲基、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基取代；并且

R₇是游离的OH、或被脂族C_2-22羧酸酯化的OH、C_1-6烷氧基羰基氧基、C_1-6烷基磺酰基氧基、叠氮基、游离的氨基、或被脂族C_2-22羧酸酰化的氨基、C_1-6烷基氨基、二-C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基羰基氨基、氨基甲酰氨基、苯甲酰氧基、苄氧基羰基氧基、苯基磺酰基氧基、苯甲酰氨基、苄基氨基或苄氧基羰基氨基，它们中的每个在所述苯基部分中任选地被卤素、羟基、三氟甲基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基或C_1-6烷氧基羰基取代；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XIX)表示的化合物

其中R是H、OH、C_1-6烷氧基或氧代基；并且

R₂是

R₄是OH、C_1-6烷酰氧基、苯甲酰氧基、苄氧基、氨基、C_1-6烷基氨基、二-C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基羰基氨基、C_2-20烷酰氨基、苯甲酰氨基、苄氧基羰基氨基或苯氧基羰基氨基，它们中的每个在所述苯基部分中任选地被卤素、羟基、三氟甲基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；

R₅是H或C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是选自以下的化合物：N-(1-α-O-苄基-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(2-N-乙酰-胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-0-甲磺酰-1-α-O-苄基-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-叠氮基-1-α-O-苄基-2-N-乙酰-6-脱氧胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-氨基-1-α-O-苄基-2-N-乙酰-6-脱氧胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-氨基-6-脱氧-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-O-甲磺酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(2-N-乙酰-脱甲基胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-α-O-苄基-2-N-乙酰同胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-α-O-苄基-2-N-乙酰-L-同胞壁酰基)星形孢菌素、N-(2-N-乙酰-L-同胞壁酰基)星形孢菌素的1-α-异头物、N-(1-α-O-苄基-4,6-O-二乙酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-α-O-苄基-4-O-乙酰-6-O-硬脂酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(4-O-乙酰-6-O-硬脂酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素的1-α-异头物、N-(4,6-O-二乙酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素的1-α-异头物、N-(1-α,4-O-二乙酰-6-O-硬脂酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-α,4,6-O-三乙酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-6-O-乙酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-6-O-甲磺酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-6-O-甲苯磺酰基-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-6-叠氮基-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、和N-(1-脱氧-6-O-甲磺酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XX)表示的化合物

其中Z₁是H或OH；

Z₂是H或OH；

R₁是H、卤素或任选取代的烷基；

R₂是H或卤素；

R是OH或任选取代的烷氧基；并且

X是任选取代的烷基或任选取代的酰基，任选地其中X是CH₂-NH-丝氨酸、CO₂CH₃、CH₂NHCO₂C₆H₅、CONHC₆H₅或CH₂NHCO₂CH3，其中C₆H₅表示苯基部分；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXI)表示的化合物

其中Z₁是H或OH；

Z₂是H或OH；

R₁是H、卤素或任选取代的烷基；

R₂是H或卤素；

R是OH或任选取代的烷氧基；并且

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXII)、(XXIII)、(XXIV)或(XXV)表示的化合物

其中每个R₁独立地是任选取代的烷基、氢、卤素、羟基、醚化的或酯化的羟基、氨基、单取代的或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代的或N,N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨基磺酰基、或者N-单取代的或N,N-二取代的氨基磺酰基；

每个R₂独立地是任选取代的烷基、氢、卤素、羟基、醚化的或酯化的羟基、氨基、单取代的或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代的或N,N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨基磺酰基、或者N-单取代的或N,N-二取代的氨基磺酰基；

每个R₅独立地是H，在每种情况下具有最多29个碳原子的脂族、碳环或碳环-脂族基团，或者在每种情况下具有最多20个碳原子并且在每种情况下具有最多9个杂原子的杂环或杂环-脂族基团，或者具有最多30个碳原子的酰基；并且

每个X独立地是O、OH和H，或一对氢原子；

每个Q独立地是H、OH、卤素、醚化的或酯化的羟基、氨基、单取代的或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代的或N,N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨基磺酰基、或者N-单取代的或N,N-二取代的氨基磺酰基；

每个Q’独立地是H、OH、卤素、醚化的或酯化的羟基、氨基、单取代的或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代的或N,N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨基磺酰基、或者N-单取代的或N,N-二取代的氨基磺酰基；

每个n独立地是0-4的整数；并且

每个m独立地是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXVI)或(XXVII)表示的化合物

每个R₅独立地是H，在每种情况下具有最多29个碳原子的脂族、碳环或碳环-脂族基团，或者在每种情况下具有最多20个碳原子并且在每种情况下具有最多9个杂原子的杂环或杂环-脂族基团，或者具有最多30个碳原子的酰基；

每个R₈独立地是具有最多30个碳原子的酰基，在每种情况下具有最多29个碳原子的脂族、碳环或碳环-脂族基团，在每种情况下具有最多20个碳原子并且在每种情况下具有最多9个杂原子的杂环或杂环-脂族基团；

每个R₉独立地是任选取代的酰基、任选取代的烷基、氢、卤素、羟基、醚化的或酯化的羟基、氨基、单取代的或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、羰基、羰基二氧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代的或N,N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨基磺酰基、或者N-单取代的或N,N-二取代的氨基磺酰基；

每个R₁₀独立地是具有最多30个碳原子的酰基，在每种情况下具有最多29个碳原子的脂族、碳环或碳环-脂族基团，在每种情况下具有最多20个碳原子并且在每种情况下具有最多9个杂原子的杂环或杂环-脂族基团；

每个X独立地是O、OH和H，或一对氢原子；

每个n独立地是0-4的整数；

每个m独立地是0-4的整数；

每个n’独立地是0-4的整数；并且

每个m’独立地是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXVIII)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXIX)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXX)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXXI)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是选自以下的化合物：

在一些实施方案中，细胞另外与斯他普胺(stauprimide)接触，例如，如Caravatti等人Bioorg.Medic.Chem.Letters 4:199-404,1994所述，该文献的公开内容据此以引用的方式整体并入。

在本公开的上述方面或实施方案中的任一个的一些实施方案中，当与所述细胞接触时，所述降低PKC的活性和/或表达的物质的浓度为约100μM至约1mM(例如，约100μM、105μM、110μM、115μM、120μM、125μM、130μM、135μM、140μM、145μM、150μM、155μM、160μM、165μM、170μM、175μM、180μM、185μM、190μM、195μM、200μM、205μM、210μM、215μM、220μM、225μM、230μM、235μM、240μM、245μM、250μM、255μM、260μM、265μM、270μM、275μM、280μM、285μM、290μM、295μM、300μM、305μM、310μM、315μM、320μM、325μM、330μM、335μM、340μM、345μM、350μM、355μM、360μM、365μM、370μM、375μM、380μM、385μM、390μM、395μM、400μM、405μM、410μM、415μM、420μM、425μM、430μM、435μM、440μM、445μM、450μM、455μM、460μM、465μM、470μM、475μM、480μM、485μM、490μM、495μM、500μM、505μM、510μM、515μM、520μM、525μM、530μM、535μM、540μM、545μM、550μM、555μM、560μM、565μM、570μM、575μM、580μM、585μM、590μM、595μM、600μM、605μM、610μM、615μM、620μM、625μM、630μM、635μM、640μM、645μM、650μM、655μM、660μM、665μM、670μM、675μM、680μM、685μM、690μM、695μM、700μM、705μM、710μM、715μM、720μM、725μM、730μM、735μM、740μM、745μM、750μM、755μM、760μM、765μM、770μM、775μM、780μM、785μM、790μM、795μM、800μM、805μM、810μM、815μM、820μM、825μM、830μM、835μM、840μM、845μM、850μM、855μM、860μM、865μM、870μM、875μM、880μM、885μM、890μM、895μM、900μM、905μM、910μM、915μM、920μM、925μM、930μM、935μM、940μM、945μM、950μM、955μM、960μM、965μM、970μM、975μM、980μM、985μM、990μM、995μM或1mM)。在一些实施方案中，当与所述细胞接触时，所述降低PKC的活性和/或表达的物质的浓度为约200μM至约600μM(例如，约200μM、205μM、210μM、215μM、220μM、225μM、230μM、235μM、240μM、245μM、250μM、255μM、260μM、265μM、270μM、275μM、280μM、285μM、290μM、295μM、300μM、305μM、310μM、315μM、320μM、325μM、330μM、335μM、340μM、345μM、350μM、355μM、360μM、365μM、370μM、375μM、380μM、385μM、390μM、395μM、400μM、405μM、410μM、415μM、420μM、425μM、430μM、435μM、440μM、445μM、450μM、455μM、460μM、465μM、470μM、475μM、480μM、485μM、490μM、495μM、500μM、505μM、510μM、515μM、520μM、525μM、530μM、535μM、540μM、545μM、550μM、555μM、560μM、565μM、570μM、575μM、580μM、585μM、590μM、595μM、或600μM)。在一些实施方案中，当与所述细胞接触时，所述降低PKC的活性和/或表达的物质的浓度为约400μM。

在上述方面中的任一者的一些实施方案中，所述方法另外包括使所述细胞与组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂接触。

在一些实施方案中，所述HDAC抑制剂选自：

在一些实施方案中，所述HDAC抑制剂是

所述细胞可以同时与所述二嵌段共聚物和所述HDAC抑制剂接触。或者，所述细胞可以在与所述HDAC抑制剂接触之前与所述二嵌段共聚物接触。在一些实施方案中，所述细胞在与所述二嵌段共聚物接触之前与所述HDAC抑制剂接触。

在一些实施方案中，所述病毒载体选自由以下各项组成的组：逆转录病毒科家族病毒、腺相关病毒、腺病毒、细小病毒、冠状病毒、弹状病毒、副粘病毒、小RNA病毒、甲病毒、疱疹病毒、和痘病毒。所述病毒载体可以是例如逆转录病毒科家族病毒载体，诸如慢病毒载体、α逆转录病毒载体或γ逆转录病毒载体。在一些实施方案中，所述逆转录病毒科家族病毒载体包括中央多嘌呤区、土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件、5'-LTR、HIV信号序列、HIVPsi信号5'-剪接位点、δ-GAG元件、3'-剪接位点、和3'-自失活LTR。

在一些实施方案中，所述病毒载体是假型病毒载体，所述假型病毒载体含有来源于一种类型病毒的病毒基因组和来源于另一种类型病毒的一种或多种病毒衣壳或包膜蛋白。所述假型病毒载体可以含有例如一种或多种来自病毒的病毒包膜蛋白，所述病毒选自由以下各项组成的组：水泡性口膜炎病毒(VSV)、RD114病毒、鼠白血病病毒(MLV)、猫白血病病毒(FeLV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEE)、人泡沫病毒(HFV)、大眼梭鲈真皮肉瘤病毒(WDSV)、塞姆利基森林病毒(SFV)、狂犬病病毒、禽造白细胞组织增生病毒(ALV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、牛白血病病毒(BLV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)、辛诺柏病毒(SNV)、樱桃扭叶病毒(ChTLV)、猿猴T细胞白血病病毒(STLV)、梅森-辉瑞猴病毒(MPMV)、松鼠猴逆转录病毒(SMRV)、劳斯相关病毒(RAV)、藤浪肉瘤病毒(FuSV)、禽癌病毒(MH2)、禽脑脊髓炎病毒(AEV)、苜蓿花叶病病毒(AMV)、禽肉瘤病毒CT10和马传染性贫血病病毒(EIAV)。

在一些实施方案中，所述细胞与上文或本文所述的一种或多种剂的接触离体发生。所述细胞可以在接触之前已经新鲜培养，或者可以在接触之前已经冷冻保存和解冻。

在一些实施方案中，在所述细胞与所述二嵌段共聚物接触之前，所述细胞与所述降低PKC的活性和/或表达的物质首先接触。例如，在所述细胞与所述二嵌段共聚物接触之前约30分钟至约6小时(例如，在所述细胞与所述二嵌段共聚物接触之前约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、或6小时)，所述细胞可以与所述降低PKC的活性和/或表达的物质首先接触。在一些实施方案中，在所述细胞与所述二嵌段共聚物接触之前约1小时至约3小时(例如，在所述细胞与所述二嵌段共聚物接触之前约1小时、2小时、或3小时)，所述细胞与所述降低PKC的活性和/或表达的物质首先接触。在一些实施方案中，在所述细胞与所述二嵌段共聚物接触之前约2小时，所述细胞与所述降低PKC的活性和/或表达的物质首先接触。

在一些实施方案中，当在所述细胞与所述二嵌段共聚物接触之前所述细胞与所述降低PKC活性和/或表达的物质首先接触时，洗涤所述细胞，以在所述细胞与所述二嵌段共聚物接触之前除去所述降低PKC的活性和/或表达的物质。

在一些实施方案中，所述细胞同时与所述降低PKC的活性和/或表达的物质和所述二嵌段共聚物接触。例如，所述细胞可以同时与所述降低PKC的活性和/或表达的物质、所述二嵌段共聚物和所述病毒载体接触。

在一些实施方案中，所述细胞在暴露于所述降低PKC的活性和/或表达的物质之后与所述病毒载体接触。在这些情况下，所述细胞可以同时与所述病毒载体和所述二嵌段共聚物接触。或者，所述细胞可以在与所述病毒载体接触之前与所述二嵌段共聚物接触。在一些实施方案中，所述细胞在与所述二嵌段共聚物接触之前与所述病毒载体接触。

因此，在本公开的一些实施方案中，所述细胞与所述降低PKC的活性和/或表达的物质首先接触，然后与所述二嵌段共聚物接触，随后与所述病毒载体接触。在一些实施方案中，所述细胞与所述降低PKC的活性和/或表达的物质首先接触，然后与所述病毒载体接触，随后与所述二嵌段共聚物接触。

在一些实施方案中，所述细胞还与环孢菌素，诸如环孢菌素A(CsA)或环孢菌素H(CsH)接触。所述细胞可以同时与所述二嵌段共聚物和所述环孢菌素接触。或者，所述细胞可以在与所述环孢菌素接触之前与所述二嵌段共聚物接触。在一些实施方案中，所述细胞在与所述环孢菌素接触之前与所述环孢菌素接触。

在一些实施方案中，所述环孢菌素是CsH。

在一些实施方案中，当与所述细胞接触时，所述环孢菌素的浓度为约1μM至约10μM(例如，约1μM、1.1μM、1.2μM、1.3μM、1.4μM、1.5μM、1.6μM、1.7μM、1.8μM、1.9μM、2μM、2.1μM、2.2μM、2.3μM、2.4μM、2.5μM、2.6μM、2.7μM、2.8μM、2.9μM、3μM、3.1μM、3.2μM、3.3μM、3.4μM、3.5μM、3.6μM、3.7μM、3.8μM、3.9μM、4μM、4.1μM、4.2μM、4.3μM、4.4μM、4.5μM、4.6μM、4.7μM、4.8μM、4.9μM、5μM、5.1μM、5.2μM、5.3μM、5.4μM、5.5μM、5.6μM、5.7μM、5.8μM、5.9μM、6μM、6.1μM、6.2μM、6.3μM、6.4μM、6.5μM、6.6μM、6.7μM、6.8μM、6.9μM、7μM、7.1μM、7.2μM、7.3μM、7.4μM、7.5μM、7.6μM、7.7μM、7.8μM、7.9μM、8μM、8.1μM、8.2μM、8.3μM、8.4μM、8.5μM、8.6μM、8.7μM、8.8μM、8.9μM、9μM、9.1μM、9.2μM、9.3μM、9.4μM、9.5μM、9.6μM、9.7μM、9.8μM、9.9μM、或10μM)。在一些实施方案中，所述环孢菌素是CsA，并且当与所述细胞接触时，所述环孢菌素的浓度为约6μM。在一些实施方案中，所述环孢菌素是CsH，并且当与所述细胞接触时，所述环孢菌素的浓度为约8μM。

在一些实施方案中，所述细胞还与前列腺素E受体信号传导的活化剂接触。所述细胞可以同时与所述二嵌段共聚物和所述前列腺素E受体信号传导的活化剂接触。或者，所述细胞可以在与所述前列腺素E受体信号传导的活化剂接触之前与所述二嵌段共聚物接触。在一些实施方案中，所述细胞在与所述二嵌段共聚物接触之前与所述前列腺素E受体信号传导的活化剂接触。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是小分子，诸如WO2007/112084或WO 2010/108028中描述的化合物，由于这些专利涉及前列腺素E受体信号传导的活化剂，因此它们中的每个的公开内容以引用的方式并入本文。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是小分子，诸如有机小分子、前列腺素、Wnt通路激动剂、cAMP/PI3K/AKT通路激动剂、Ca²⁺第二信使通路激动剂、一氧化氮(NO)/血管紧张素信号传导激动剂，或另一种已知刺激所述前列腺素信号传导通路的化合物，诸如选自以下的化合物：美贝维林、氟脲内酯、阿替洛尔、吲哚洛尔、加波沙朵、犬尿烯酸、肼苯哒嗪、噻苯哒唑、荷包牡丹碱、维沙米考、秘鲁苷、丙咪嗪、氯丙酰胺、1,5-五亚甲基四唑、4-氨基吡啶、二氮嗪、苯磷硫胺、12-甲氧基十二碳烯酸、N-甲酰基-Met-Leu-Phe、加拉明、IAA 94、氯三烯和/或这些化合物中的任一者的衍生物。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是天然存在的或合成的化学分子或多肽，它们与前列腺素E受体结合和/或相互作用，通常以活化或增加与前列腺素E受体相关的下游信号传导通路中的一者或多者。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂选自由以下各项组成的组：前列腺素(PG)A2(PGA2)、PGB2、PGD2、PGE1(前列地尔)、PGE2、PGF2、PGI2(依前列醇)、PGH2、PGJ2、以及它们的衍生物和类似物。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是PGE2。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是15d-PGJ2、δ2-PGJ2、2-羟基十七碳三烯酸(HHT)、血栓素(TXA2和TXB2)、PGI2类似物(例如，伊洛前列素和曲前列素)、PGF2类似物(例如，曲伏前列素、卡前列素氨丁三醇、他氟前列素、拉坦前列素、比马前列素、异丙基乌诺前列酮、氯前列醇、雌二醇和苏帕潘)、PGE1类似物(例如，11-脱氧PGE1、米索前列醇和布塔前列素)、以及科里醇-A([3aa,4a,5,6aa]-(-)-[六氢-4-(羟甲基)-2-氧代基-2H-环戊二烯并/b/呋喃-5-基][1,1'-联苯]-4-甲酸酯)、科里醇-B(2H-环戊二烯并[b]呋喃-2-酮,5-(苯酰氧基)六氢-4-(羟甲基)[3aR-(3aa,4a,5,6aa)])和科里二醇((3aR,4S,5R,6aS)-六氢-5-羟基-4-(羟甲基)-2H-环戊二烯并[b]呋喃-2-酮)。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是前列腺素E受体配体，诸如前列腺素E2(PGE2)或者它们的类似物或衍生物。前列腺素通常是指衍生自含有20个碳原子包括5-碳环的脂肪酸的激素样分子，如本文所述和本领域已知的。PGE2“类似物”或“衍生物”的示例性实例包括但不限于16,16-二甲基PGE2、16-16二甲基PGE2对-(对乙酰酰氨基苯甲酰氨基)苯基酯、l l-脱氧-16,16-二甲基PGE2、9-脱氧-9-亚甲基-16,16-二甲基PGE2、9-脱氧-9-亚甲基PGE2、9-酮氟前列醇、5-反式PGE2、17-苯基-ω-三去甲PGE2、PGE2丝氨醇酰胺、PGE2甲酯、16-苯基四去甲PGE2、15(S)-15-甲基PGE2、15(R)-15-甲基PGE2、8-异-15-酮PGE2、8-异PGE2异丙酯、20-羟基PGE2、诺氯前列素、舒前列酮、布前列素、15-酮PGE2和19(R)羟基PGE2。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是在9-位被卤素取代的具有与PGE2相似结构的前列腺素类似物或衍生物(参见例如WO 2001/12596，该专利以引用的方式整体并入本文)，以及2-脱羧基-2-磷酸亚基前列腺素衍生物(诸如US 2006/0247214中描述的那些，该专利以引用的方式整体并入本文)。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是非基于PGE2的配体。在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是CAY10399、ONO_8815Ly、ONO-AE1-259或CP-533,536。非基于PGE2的EP2激动剂的其他实例包括WO 2007/071456中公开的咔唑和芴，关于此类剂的公开内容以引用的方式并入本文。非基于PGE2的EP₃激动剂的示例性实例包括但不限于AE5-599、MB28767、GR 63799X、ONO-NT012和ONO-AE-248。非基于PGE₂的EP₄激动剂的示例性实例包括但不限于ONO-4819、APS-999Na、AH23848和ONO-AE 1-329。基于非PGE2的EP4激动剂的另外的实例可见于WO 2000/038663；美国专利号6,747,037；和美国专利号6,610,719，它们中的每个关于此类激动剂的公开内容均以引用的方式并入。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是Wnt激动剂。Wnt激动剂的示例性实例包括但不限于Wnt多肽和糖原合酶激酶3(GSK3)抑制剂。适合用作刺激前列腺EP受体信号传导通路的化合物的Wnt多肽的示例性实例包括但不限于Wnt1、Wnt2、Wnt2b/13、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt7c、Wnt8、Wnt8a、Wnt8b、Wnt8c、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、Wnt14、Wnt15或它们的生物活性片段。适合用作刺激前列腺素EP受体信号传导通路的剂的GSK3抑制剂结合至GSK3a或GSK3或者降低它们的活性。GSK3抑制剂的示例性实例包括但不限于BIO(6-溴靛玉红3’-肟)、LiCl、Li₂CO₃或其他GSK-3抑制剂，如美国专利号6,057,117和6,608,063以及US 2004/0092535和US 2004/0209878所示例，以及ATP竞争性、选择性GSK-3抑制剂CHIR-911和CHIR-837(分别另外称为CT-99021/CHIR-99021和CT-98023/CHIR-98023)(Chiron Corporation(Emeryville,CA))。CHIR-99021的结构是

或其盐。

CHIR-98023的结构是

或其盐。

在一些实施方案中，方法另外包括使所述细胞与GSK3抑制剂接触。

在一些实施方案中，所述GSK3抑制剂是CHIR-99021。

在一些实施方案中，所述GSK3抑制剂是Li₂CO₃。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是通过cAMP/P13K/AKT第二信使通路增加信号传导的剂，诸如选自由以下各项组成的组的剂：二丁酰cAMP(DBcAMP)、佛波酯、毛喉素、紫苏灵、8-溴-cAMP、霍乱毒素(CTx)、氨茶碱、2,4二硝基苯酚(DNP)、去甲肾上腺素、肾上腺素、异丙肾上腺素、异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)、咖啡因、茶碱(二甲基黄嘌呤)、多巴胺、咯利普兰、伊洛前列素、垂体腺苷酸环化酶活化多肽(PACAP)和血管活性肠多肽(VIP)、以及这些剂的衍生物。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是通过Ca²⁺第二信使通路增加信号传导的剂，诸如选自由以下各项组成的组的剂：Bapta-AM、芬地林、尼卡地平和这些剂的衍生物。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是通过NO/血管紧张素信号传导增加信号传导的剂，诸如选自由以下各项组成的组的剂：L-Arg、硝普钠、钒酸钠、缓激肽以及它们的衍生物。

在一些实施方案中，所述细胞还与聚阳离子聚合物接触。所述细胞可以同时与所述二嵌段共聚物和所述聚阳离子聚合物接触。或者，所述细胞可以在与所述聚阳离子聚合物接触之前与所述二嵌段共聚物接触。在一些实施方案中，所述细胞在与所述二嵌段共聚物接触之前与所述聚阳离子聚合物接触。

在一些实施方案中，所述聚阳离子聚合物是聚凝胺、硫酸鱼精蛋白、聚乙烯亚胺或聚乙二醇/聚-L-赖氨酸嵌段共聚物。

在一些实施方案中，所述聚阳离子聚合物是硫酸鱼精蛋白。

在一些实施方案中，除所述二嵌段共聚物之外，所述细胞另外与剂的组合接触。例如，在一些实施方案中，所述细胞与Li₂CO₃和硫酸鱼精蛋白接触。在一些实施方案中，所述细胞与CHIR-99021和硫酸鱼精蛋白接触。在一些实施方案中，所述细胞与环孢菌素H和硫酸鱼精蛋白接触。

在一些实施方案中，所述细胞在转导过程中还与扩增剂接触。所述细胞可以是例如造血干细胞，并且所述扩增剂可以是造血干细胞扩增剂，诸如本领域已知的或本文所述的造血干细胞扩增剂。

在一些实施方案中，在转导过程中，所述细胞还与抑制mTor信号传导的剂接触。所述抑制mTor信号传导的剂可以是例如雷帕霉素，以及其他mTor信号传导的抑制剂。

在本文所述方法的一些实施方案中，在转导过程中，所述细胞另外与增强转导的剂接触，例如，除所述二嵌段共聚物之外。另外的转导增强剂包括例如他克莫司和维克福新(vectorfusin)。在一些实施方案中，所述另外的转导增强剂是他克莫司。在一些实施方案中，所述另外的转导增强剂是维克福新。

在一些实施方案中，将所述细胞与所述病毒载体(例如，与上文所述的一种或多种剂组合)一起温育约6小时至约48小时(例如，约6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时、25小时、26小时、27小时、28小时、29小时、30小时、31小时、32小时、33小时、34小时、35小时、36小时、37小时、38小时、39小时、40小时、41小时、42小时、43小时、44小时、45小时、46小时、47小时、或48小时)的时间。在一些实施方案中，将所述细胞与所述病毒载体(例如，与上文所述的一种或多种剂组合)一起温育约12小时至约24小时(例如，约12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、或24小时)的时间。在一些实施方案中，将所述细胞与所述病毒载体(例如，与上文所述的一种或多种剂组合)一起温育约16小时至约22小时(例如，约16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、或22小时)的时间。在一些实施方案中，将所述细胞与所述病毒载体(例如，与上文所述的一种或多种剂组合)一起温育约17小时至约19小时(例如，约17小时、18小时、或19小时)的时间。在一些实施方案中，将所述细胞与所述病毒载体(例如，与上文所述的一种或多种剂组合)一起温育约18小时的时间。

在一些实施方案中，所述细胞在与所述病毒载体接触(例如，与上文所述的一种或多种剂组合)时旋转(例如，通过离心过程，即“离心”)。该过程，在本文中称为“旋转”，可以以例如约200xg至约2,000xg的向心力进行。在一些实施方案中，所述细胞在与所述病毒载体接触(例如，与上文所述的一种或多种剂组合)时以约300xg至约1,200xg的向心力旋转。例如，所述细胞可以在与所述病毒载体接触(例如，与上文所述的一种或多种剂组合)时以约300xg、400xg、500xg、600xg、700xg、800xg、900xg、1,000xg、1,100xg或1,200xg的向心力旋转。在一些实施方案中，将所述细胞旋转约10分钟至约3小时(例如，约10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、65分钟、70分钟、75分钟、80分钟、85分钟、90分钟、95分钟、100分钟、105分钟、110分钟、115分钟、120分钟、125分钟、130分钟、135分钟、140分钟、145分钟、150分钟、155分钟、160分钟、165分钟、170分钟、175分钟、180分钟或更长)。在一些实施方案中，所述细胞在室温下，诸如在约25℃的温度下旋转。

在另一个方面，本公开的特征在于一种在受试者(例如，哺乳动物受试者，诸如人类)中表达转基因的方法，所述方法通过将已经根据本公开的上述方面或实施方案中的任一者所述的方法修饰的细胞群或其子代施用于所述受试者来进行。

在另一个方面，本公开的特征在于一种将经遗传修饰的细胞群递送给受试者(例如，哺乳动物受试者，诸如人类)的方法，所述方法通过将已经根据本公开的上述方面或实施方案中的任一者所述的方法修饰的细胞群或其子代施用于所述受试者来进行。

在又一个方面，本公开的特征在于一种将细胞疗法提供给有需要的受试者(例如，哺乳动物受试者，诸如人类)的方法，所述方法通过将已经根据本公开的上述方面或实施方案中的任一者所述的方法修饰的细胞群或其子代施用于所述受试者来进行。

在本公开的三个前述方面的一些实施方案中，所述细胞对于所述受试者是同种异体的。在一些实施方案中，所述细胞与所述受试者HLA匹配。在一些实施方案中，所述细胞对于所述受试者是自体的。

在一些实施方案中，在使所述细胞与上述或本文所述的一种或多种剂接触之前，从所述受试者(例如，在自体细胞群的情况下)或供体(例如，在同种异体细胞群的情况下)分离前体细胞群。然后所述前体细胞可以离体扩增，例如，通过将所述前体细胞与一种或多种本文所述的或本领域已知的细胞扩增物质一起温育以促进细胞增殖，从而产生施用于所述受试者的所述细胞群。例如，所述扩增剂可以是StemRegenin 1，在本领域中也称为化合物SR1，以下式(110)表示。

SR1和其他扩增剂例如在美国专利号8,927,281和9,580,426中有所描述，这些专利中的每个的公开内容以引用的方式整体并入本文。

可以与本公开的组合物和方法结合使用的另外的扩增剂包括化合物UM-171，它在美国专利号9,409,906中有所描述，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。可以用于本文的扩增剂还包括化合物UM-171的结构或立体异构变体，诸如US 2017/0037047中描述的化合物，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。化合物UM-171的结构以下式(111)表示。

在一些实施方案中，所述扩增剂是化合物(111)的溴化物盐，诸如以下式(112)表示的化合物。

可以与本公开的组合物和方法结合使用的另外的扩增剂包括组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂，如例如在WO 2000/023567中所述，该专利的公开内容以引用的方式并入本文。可以用于扩增如本文所述的前体细胞群的示例性剂是曲古抑菌素A、环磷酰胺、环磷酰胺A、衣藻菌素、丁酸钠、二甲基亚砜、辛二羟肟酸、间羧基肉桂酸双异羟肟酸、HC-毒素、Cyl-2、WF-3161、德布地欣和根赤壳菌素等等。

在一些实施方案中，所述前体细胞是CD34+HSC。使用本文所述的和本领域已知的HSC扩增剂，可以在不损失HSC功能潜力的情况下扩增所述前体细胞。

在一些实施方案中，在从所述受试者(例如，在自体细胞群的情况下)或供体(例如，在同种异体细胞群的情况下)分离所述前体细胞之前，给所述受试者或供体施用一种或多种刺激多能细胞(例如，CD34+HSC和HPC)从干细胞龛(诸如骨髓)迁移到外周循环的动员剂。可以与本公开的组合物和方法结合使用的示例性细胞动员剂是本文所述和本领域已知的。例如，所述动员剂可以是C-X-C基序趋化因子受体(CXCR)2(CXCR2)激动剂。CXCR2激动剂可以是Gro-β或其截短变体。Gro-β及其变体例如在美国专利号6,080,398；6,447,766；和6,399,053中有所描述，这些专利中的每个的公开内容均以引用的方式整体并入本文。另外地或可替代地，所述动员剂可以包括CXCR4拮抗剂，诸如普乐沙福或其变体。普乐沙福(Plerixafor)和结构相似的化合物例如在美国专利号6,987,102；7,935,692；和7,897,590中有所描述，这些专利中的每个的公开内容均以引用的方式并入本文。另外地或可替代地，所述动员剂可以包括粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。例如，使用G-CSF作为诱导多能细胞(例如，CD34+HSC和/或HPC)从干细胞龛动员到外周循环的剂在US 2010/0178271中有所描述，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。

在一些实施方案中，在将所述细胞群施用于所述受试者之前，通过将一种或多种调理剂施用于所述受试者在所述受试者中消融内源性多能细胞群(例如，内源性CD34+HSC或HPC群)。在一些实施方案中，所述方法包括通过在将所述细胞群施用于所述受试者之前将一种或多种调理剂施用于所述受试者来消融所述受试者中的内源性多能细胞群(例如，内源性CD34+HSC或HPC群)。所述一种或多种调理剂可以是清髓性调理剂，它消耗来自所述受试者骨髓的多种造血细胞。在一些实施方案中，所述一种或多种调理剂是非清髓性调理剂，它选择性靶向和消融特定的内源性多能细胞群，诸如内源性CD34+HSC或HPC群。

在一些实施方案中，在将所述细胞群施用于所述受试者后，所施用的细胞或其子代分化为一种或多种选自以下的细胞类型：巨核细胞、血小板细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成肌细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞。

在一些实施方案中，所述受试者已经被诊断为缺乏由所述转基因编码的内源性蛋白质。例如，所述受试者可以已经被诊断为患有表3中所列的疾病。在一些实施方案中，所述受试者已经被诊断为患有β地中海贫血。

在本公开的上述方面或实施方案中的任一者的一些实施方案中，所述转基因编码β-珠蛋白蛋白。所述转基因可以含有例如与SEQ ID NO:1的核酸序列具有至少85％序列同一性(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性)的核酸。在一些实施方案中，所述转基因含有与SEQ IDNO:1的核酸序列具有至少90％序列同一性(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性)的核酸。在一些实施方案中，所述转基因含有与SEQID NO:1的核酸序列具有至少95％序列同一性(例如，95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性)的核酸。在一些实施方案中，所述转基因含有具有SEQ ID NO:1的核酸序列的核酸。

在一些实施方案中，所述β-珠蛋白蛋白具有与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少85％同一性(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述β-珠蛋白蛋白具有与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少90％同一性(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述β-珠蛋白蛋白具有与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少95％同一性(例如，95％、96％、97％、98％、99％、或100％同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述β-珠蛋白蛋白SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述β-珠蛋白蛋白具有通过一个或多个氨基酸置换、插入和/或缺失而与SEQ ID NO:2不同的氨基酸序列。例如，所述β-珠蛋白蛋白可以具有通过一个或多个保守氨基酸置换或非保守氨基酸置换而与SEQ ID NO:2不同的氨基酸序列。所述β-珠蛋白蛋白可以具有通过例如1至50个保守氨基酸置换、1至40个保守氨基酸置换、1至30个保守氨基酸置换、1至20个保守氨基酸置换，或1至10个保守氨基酸置换，任选地与一个或多个非保守氨基酸置换组合，而与SEQ ID NO:2不同的氨基酸序列。

在另一个方面，本公开的特征在于一种含有混合物的组合物，所述混合物通过根据本公开的上述方面或实施方案中的任一者所述的方法修饰真核细胞来形成。

在另一个方面，本公开的特征在于一种含有如前述方面所述的组合物的细胞培养基。

在又一个方面，本公开的特征在于一种已经根据本公开的上述方面或实施方案中的任一者所述的方法修饰的真核细胞群。

在另一个方面，本公开的特征在于一种含有如前述方面所述的细胞群的药物组合物。所述药物组合物还可以含有一种或多种赋形剂、稀释剂和/或载剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于诸如通过静脉内输注施用于受试者，诸如哺乳动物受试者(例如，人类)。

在另一个方面，本公开的特征在于一种包括含有混合物的组合物的试剂盒，所述混合物通过根据本公开的上述方面或实施方案中的任一者所述的方法修饰真核细胞来形成。另外地或可替代地，所述试剂盒可以包括含有所述组合物的细胞培养基。所述试剂盒可以另外包括包装插页，所述包装插页包括使用所述试剂盒内容物来转导靶细胞的说明。

在另一个方面，本公开的特征在于一种包括真核细胞群的试剂盒，所述真核细胞群已经根据本公开的上述方面或实施方案中的任一者所述的方法修饰。另外地或可替代地，所述试剂盒可以包括含有真核细胞群的药物组合物，所述真核细胞群已经根据本公开的上述方面或实施方案中的任一者所述的方法修饰。所述试剂盒可以另外包括指导使用根据上文或本文所述的细胞施用方法中的任一者将所述细胞群施用于受试者的包装插页。

定义

如本文所用，术语“消融(ablate、ablating、ablation等等)”是指体内或离体细胞群中一种或多种细胞的消耗。在本公开的一些实施方案中，可以需要在向患者施用治疗组合物(诸如治疗性细胞群)之前消融患者(例如，接受本文所述疾病治疗的患者)内的内源性细胞。这可以是有益的，例如，为新施用的细胞提供可移植细胞的环境。内源性细胞群的消融可以以选择性靶向特定细胞类型的方式进行，例如，使用抗体或抗体-药物缀合物，其结合靶细胞上表达的抗原并随后导致靶细胞的杀伤。另外地或可替代地，可以使用不定位于特定细胞类型而是能够对多种不同细胞发挥其细胞毒性作用的细胞毒素以非特异性方式进行消融。消融的实例包括消耗至少5％的体内或体外的细胞群中的细胞(例如，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多)。可以使用多种细胞计数技术对细胞样品内的细胞计数进行定量，诸如通过使用计数室、Coulter计数器、流式细胞术或本领域已知的其他细胞计数方法。

如本文所用，术语“约”是指相对于参考量变化多达30％(例如，25％、20％、25％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)的量。

如本文在所关注的蛋白质的上下文中使用的，术语“活性”是指与蛋白质的野生型形式相关的生物学功能。例如，在酶的上下文中，术语“活性”是指蛋白质以产生相应化学反应产物的方式实现底物周转的能力。例如，可以使用本领域已知的底物转换测定法来检测和定量酶的活性水平。又如，在膜结合受体的语境中，术语“活性”可以指由受体启动的信号转导，例如，在与其同源配体结合时。可以检测和定量参与信号转导通路的受体的活性水平，例如，通过观察受体信号转导结果的增加，诸如一种或多种基因转录的增加(可以例如使用本领域已知的聚合酶链式反应技术检测到)。

如本文所用，“活化前列腺素E受体信号传导”等的化合物是指与未与特定化合物接触的前列腺素E受体表达细胞中的前列腺素E受体信号转导活性相比，具有增加与特定化合物接触的前列腺素E受体表达细胞中的前列腺素E受体的信号转导活性的能力的化合物。可以用于测量前列腺素E受体信号转导的测定法在例如WO 2010/108028中有所描述，该专利的公开内容以引用的方式并入本文，因为它涉及评估前列腺素E受体信号传导的方法。

如本文所用，术语“施用(administering，administration)”等是指通过任何有效途径给患者直接施用治疗剂(例如细胞群，诸如多能细胞群(例如，胚胎干细胞、诱导性多能干细胞、或CD34+细胞))。示例性施用途径在本文中描述并且尤其包括全身施用途径，诸如静脉注射。

如本文所用，术语“同种异体”是指从同一物种的不同受试者获得或衍生的细胞、组织、核酸分子或其他物质。例如，在表达一种或多种本文描述的蛋白质的细胞群(例如，多能细胞群)的情况下，同种异体细胞包括：(i)从未接受治疗的受试者获得，然后(ii)用指导一种或多种所需蛋白质表达的载体转导或转染的那些细胞。短语“指导表达”是指包括编码一种或多种待表达蛋白质的一种或多种多核苷酸。多核苷酸可包含增强所关注的蛋白质表达的附加序列基序。

如本文所用，术语“退火”是指通过链间氢键介导的杂交形成稳定的核酸双链体，例如，根据Watson-Crick碱基配对。双链体的核酸可以是例如至少50％彼此互补的(例如，约50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％彼此互补的)。一种核酸与另一种核酸退火后形成的“稳定双链体”是不会因严格洗涤而变性的双链体结构。示例性严格洗涤条件是本领域已知的并且包括比双链体的单个链的解链温度低约5℃的温度和低单价盐浓度，诸如小于0.2M(例如，0.2M、0.19M、0.18M、0.17M、0.16M、0.15M、0.14M、0.13M、0.12M、0.11M、0.1M、0.09M、0.08M、0.07M、0.06M、0.05M、0.04M、0.03M、0.02M、0.01M或更少)的单价盐浓度(例如，NaCl浓度)。

如本文所用，术语“自体”是指从个体自身的细胞、组织、核酸分子等获得或衍生的细胞、组织、核酸分子或其他物质。例如，在表达一种或多种本文描述的蛋白质的细胞群(例如，多能细胞群)的背景下，自体细胞包括从接受治疗的患者获得，然后用载体转导或转染指导一种或多种所关注的蛋白质的表达的那些细胞。

如本文所用，术语“细胞类型”是指共享基于基因表达数据在统计学上可分离的表型的一组细胞。例如，常见细胞类型的细胞可共享相似的结构和/或功能特征，诸如相似的基因激活模式和抗原呈递特征谱。常见细胞类型的细胞可包括从常见组织(例如，上皮组织、神经组织、结缔组织或肌肉组织)分离的那些和/或从常见器官、组织系统、血管或生物体的其他结构和/或区域分离的那些。

如本文所用，术语“调理(condition，conditioning)”是指受试者准备接受含有细胞群(例如，多能细胞群，诸如CD34+细胞)的移植物的过程。此类程序例如通过选择性消耗内源性细胞(例如，内源性CD34+细胞等)从而产生空位，所述空位依次被外源性细胞移植物填补，从而促进细胞移植物的植入。根据本文所述的方法，可通过将一种或多种能够消融内源性细胞(例如，CD34+细胞等)、放射疗法或它们的组合的剂施用于受试者来调节受试者以进行细胞移植程序。与本公开的组合物和方法结合使用的调理方案可以是清髓性的或非清髓性的。也可以使用本领域熟知的其他细胞消融剂和方法(例如，抗体-药物缀合物)。

如本文所用，术语“保守突变”、“保守取代”、“保守氨基酸取代”等等是指一个或多个氨基酸取代成表现出相似物理化学特性(诸如极性、静电荷和空间体积)的一个或多个不同的氨基酸。下表1中汇总了二十种天然氨基酸中的每一种的这些性质。

表1.天然存在的氨基酸的代表性物理化学性质

从该表可以看出，保守氨基酸家族包括(i)G、A、V、L和I；(ii)D和E；(iii)C、S和T；(iv)H、K和R；(v)N和Q；以及(vi)F、Y和W。因此，保守突变或取代是用一个氨基酸置换相同氨基酸家族的成员的突变或取代(例如，用Ser取代Thr或用Lys取代Arg)。

如本文所用，术语“二嵌段共聚物”是指由共价键合在一起的两个且不超过两个不同的聚合物区域(即，重复单元的嵌段)组成的非离子聚合物。如本文所述的二嵌段共聚物的一个实例包括两亲共聚物，诸如在存在或不存在接头的情况下，包含重复单元的亲水链的区域连接至包含重复单元的疏水链的区域的共聚物。这种二嵌段共聚物可以包含与聚氧丙烯(PPO)亚基的疏水链连接的聚氧乙烯(PEO)亚基的亲水链。PEO和PPO亚基的二嵌段共聚物可以由下式表示：X₁(C₂H₄O)_m-L-(C₃H₆O)_nX₂。X₁和X₂可以是任何化学部分。L可以是可以任选存在的接头。在一些实施方案中，PEO和PPO亚基嵌段直接共价连接。在一些实施方案中，X₁和X₂分别是H和OH。其他二嵌段共聚物包括例如聚(乙二醇)-聚(γ-苄基L-谷氨酸)PEG-PBLA、聚(乙二醇)-聚(D,L-乳酸)PEG-PDLLA、聚(乙二醇)-聚(L-乳酸)PEG-PLLA、聚(乙二醇)-聚(ε-己内酯)PEG-PCL、聚(乙二醇)-聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)PEG-PLGA、聚(乙二醇)-聚(γ-苄基L-谷氨酸)PEG-PBLG、聚(乙二醇)-聚(β-苄基L-天冬氨酸)PEG-PBLA、聚(乙二醇)-聚(α-甲酸苄酯-ε-己内酯)PEG-PBCL、和聚(乙二醇)-聚(δ-戊内酯)PEG-PVL。为清晰起见，如本文所用，X₁-[PEO]-L-[PPO]-X₂是指以下结构：

或具有相反取向的结构：

聚合物嵌段的长度可以定制。因此，存在许多不同的二嵌段共聚物。适用于与本公开的组合物和方法结合使用的二嵌段共聚物包括数均分子量为约10,000g/mol、至少约11,400g/mol、至少约12,600g/mol、至少约13,000g/mol、至少约14,600g/mol、或至少约15,000g/mol的那些。由于二嵌段共聚物的合成与一批与另一批之间的自然变化程度有关，因此上述数值(以及本文中用于表征给定二嵌段共聚物的数值)在合成时可能无法精确实现，并且平均值在某种程度上会有所不同。因此，如果没有另外明确说明，本文所用的术语“二嵌段共聚物”可以与术语“多种二嵌段共聚物”(代表若干二嵌段共聚物的实体，也称为二嵌段共聚物的混合物)互换使用。如本文所用，与一种或多种二嵌段共聚物的单体单元数或分子量相关的术语“平均”是技术上无法产生全部具有相同组成并因此具有相同分子量的二嵌段共聚物的结果。根据现有技术方法产生的二嵌段共聚物将作为二嵌段共聚物的混合物存在，每种二嵌段共聚物在其分子量方面表现出可变性，但混合物作为一个整体平均具有本文指定的分子量。BASF和Sigma Aldrich是与本公开的组合物和方法结合使用的二嵌段共聚物的合适来源。

由于在包含PPO和PEO亚基的二嵌段共聚物的合成过程中发生的变化，本领域的技术人员将理解m和n的值可以变化，例如，大于引述值最多2倍和小于引述值最多2倍。因此，如本文所用，“n＝50”等的值表示二嵌段共聚物的非均相混合物，其中n可以是25至100，诸如值为25至75、26至74、27至73、28至72、29至71，30至70、31至69、32至68、33至67、34至66、35至65、36至64、37至63、38至62、39至61、40至60、41至59、42至58、43至57、44至56、45至55等等。类似地，如本文所用，“n＝60”等的值表示二嵌段共聚物的非均相混合物，其中n可以是30至120，诸如30至90。类似地，如本文所用，“n＝70”等的值表示二嵌段共聚物的非均相混合物，其中n可以是35至140，诸如35至105。

如本文所用，术语“胚胎干细胞”和“ES细胞”是指来源于胚泡的内细胞团的胚胎衍生的全能或多能干细胞，它们可在合适条件下保持在体外培养物中。ES细胞能够分化为三种脊椎动物胚层中的任何一种细胞，例如内胚层、外胚层或中胚层。ES细胞的特征还在于它们能够在合适的体外培养条件下无限繁殖。ES细胞描述于例如Thomson等人，Science 282:1145(1998)中，该文献的公开内容以引用的方式并入本文，因为其涉及胚胎干细胞的结构和功能。

如本文所用，术语“内源性”描述天然存在于特定生物体(例如，人)中或生物体内的特定位置(例如，器官、组织或细胞，诸如人细胞)中的分子(例如，多肽、核酸或辅因子)。

如本文所用，术语“扩增剂”是指能够促进给定细胞类型离体增殖的物质。因此，“造血干细胞扩增剂”或“HSC扩增剂”是指能够促进体外造血干细胞群增殖的物质。造血干细胞扩增剂包括实现造血干细胞群增殖使得细胞保留造血干细胞功能潜力的那些。可以与本公开的组合物和方法结合使用的示例性造血干细胞扩增剂包括但不限于芳烃受体拮抗剂，诸如美国专利号8,927,281和9,580,426中描述的那些物质，这些专利中的每个的公开内容以引用的方式整体并入本文，特别是化合物SR1。可以与本公开的组合物和方法结合使用的其他造血干细胞扩增剂包括化合物UM-171和美国专利号9,409,906中描述的其他化合物，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。造血干细胞扩增剂还包括化合物UM-171，诸如US 2017/0037047中描述的化合物的结构和/或立体异构变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。适用于本公开的其他造血干细胞扩增剂包括组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂，诸如曲古抑菌A、环磷酰胺、环磷酰胺A、衣藻菌素、丁酸钠、二甲亚砜、辛二羟肟酸、间羧基肉桂酸双异羟肟酸、HC-毒素、Cyl-2、WF-3161、德布地欣和根赤壳菌素等，例如在WO 2000/023567中有所描述，该质量的公开内容以引用的方式并入本文。

如本文所用，术语“表达”是指以下事件中的一者或多者：(1)从DNA序列产生RNA模板(例如，通过转录)；(2)RNA转录物的加工(例如，通过剪接、编辑、5'帽形成和/或3'末端加工)；(3)RNA翻译为多肽或蛋白质；以及(4)多肽或蛋白质的翻译后修饰。在编码蛋白质产物的基因的上下文中，术语“基因表达”等与术语“蛋白质表达”等可互换使用。受试者中所关注的基因或蛋白质的表达可以通过例如检测来表现：从受试者获得的样品中的编码相应蛋白质的mRNA的数量或浓度的增加(如使用本文描述的或本领域已知的RNA检测程序所评估，诸如定量聚合酶链式反应(qPCR)和RNA seq技术)、相应蛋白质的数量或浓度的增加(如使用本文所述或本领域已知的蛋白质检测方法所评估，诸如酶联免疫吸附测定法(ELISA)等)、和/或相应蛋白质的活性增加(例如，在酶的情况下，如使用本文所述或本领域已知的酶活性测定法所评估)。如本文所用，如果可以在细胞或细胞所在的培养基中检测到上述事件中的一个或多个或全部，则认为细胞“表达”所关注的基因或蛋白质。例如，如果可以检测到以下事件，则认为所关注的基因或蛋白质由细胞或细胞群“表达”：(i)细胞或细胞群产生相应的RNA转录物，诸如mRNA模板(例如，使用本文所述的RNA检测程序)；(ii)RNA转录物的加工(例如，剪接、编辑、5'帽形成和/或3'末端加工，诸如使用本文所述的RNA检测程序)；(iii)RNA模板翻译为蛋白质产物(例如，使用本文所述的蛋白质检测程序)；和/或(iv)蛋白质产物的翻译后修饰(例如，使用本文所述的蛋白质检测程序)。

如本文所用，术语“功能潜力”涉及多能细胞，诸如造血干细胞，是指干细胞的功能性质，包括：1)多能性(它是指分化成多种不同血液谱系的能力，所述血液谱系包括但不限于粒细胞(例如早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如网织红细胞、红细胞)、血小板细胞(例如巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞))；2)自我更新(它是指干细胞产生与母细胞具有等同潜力的子细胞的能力，并且这种能力可以在个体的一生中反复发生而不会耗尽)；以及3)干细胞或其子代被重新引入移植受体，然后干细胞或其子代归巢到干细胞龛并重新建立生产性和持续性细胞生长和分化的能力。

如本文所用，术语“造血干细胞”和“HSC”是指具有自我更新和分化成不同谱系的成熟血细胞的能力的未成熟血细胞，包括但不限于粒细胞(例如早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如网织红细胞、红细胞)、血小板细胞(例如巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)。本领域已知此类细胞可以包括或不包括CD34+细胞。CD34+细胞是表达CD34细胞表面标志物的未成熟细胞。在人类中，CD34+细胞被认为包括具有上述干细胞特性的细胞亚群，而在小鼠中，HSC是CD34-。此外，HSC还指长期再造HSC(LT-HSC)和短期再造HSC(ST-HSC)。LT-HSC和ST-HSC根据功能潜力和细胞表面标志物表达进行区分。例如，人类HSC是CD34+、CD38-、CD45RA-、CD90+、CD49F+和lin-(成熟谱系标记阴性，包括CO2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11B、CD19、CD20、CD56、CD235A)。在小鼠中，骨髓LT-HSC是CD34-、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamf1/CD150+、CD48-和lin-(成熟谱系标记阴性，包括Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL-7ra)，而ST-HSC是CD34+、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamf1/CD150+和lin-(成熟谱系标记阴性，包括Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL-7ra)。此外，在稳态条件下，ST-HSC比LT-HSC更少静息(即更活跃)和更具增殖性。然而、LT-HSC具有更大的自我更新潜力(即，它们可以在整个成年期存活，并且可以通过连续受者进行连续移植)，而ST-HSC的自我更新能力有限(即，它们只能存活有限的时间，并且不具备连续移植的潜力)。任何这些HSC均可以用于本文所述的任何方法。或者，ST-HSC是有用的，因为它们具有高度增殖性，因此可以更快地产生分化的子代。

如本文所用，抑制组蛋白脱乙酰化的剂是指能够减弱或阻止组蛋白脱乙酰酶的活性，具体而言通过直接相互作用或通过间接方式减弱或阻止组蛋白脱乙酰酶活性，诸如通过使细胞中产生的组蛋白脱乙酰酶的数量减少或者通过抑制组蛋白脱乙酰酶和乙酰化组蛋白底物之间的相互作用的物质或组合物(例如，小分子、蛋白质、干扰RNA、信使RNA或其他天然或合成化合物，或者组合物，诸如病毒或由多种物质组成的其他材料)。抑制组蛋白脱乙酰酶的酶活性是指降低组蛋白脱乙酰酶催化从组蛋白残基(例如，组蛋白内的单甲基化赖氨酸残基、二甲基化赖氨酸残基或三甲基化赖氨酸残基；单甲基化精氨酸残基、或者对称/不对称二甲基化精氨酸残基)除去乙酰基的能力。优选地，这种抑制是特异性的，以使得抑制组蛋白脱乙酰基的剂降低组蛋白脱乙酰酶在一定浓度下从组蛋白残基上除去乙酰基的能力，该浓度低于产生另一种不相关的生物学效应所需的抑制剂的浓度。

如本文所用，术语“组蛋白脱乙酰酶”和“HDAC”是指催化从组蛋白N-末端赖氨酸残基的ε-氨基除去乙酰基的酶家族中的任一者。除非上下文另有说明，否则术语“组蛋白”是指来自任何物种的任何组蛋白，包括HI、H2A、H2B、H3、H4和H5。人类HDAC蛋白质或基因产物包括但不限于HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7、HDAC-8、HDAC-9、HDAC-10和HDAC-11。

如本文所用，术语“HLA匹配”是指其中供体和受体之间没有任何HLA抗原不匹配的供体-受体对，诸如为需要造血干细胞移植治疗的受体提供造血干细胞移植物的供体。HLA匹配(即所有6个等位基因都匹配)的供体-受体对移植物排斥的风险降低，因为内源性T细胞和NK细胞不太可能将传入的移植物识别为外来物，因此不太可能对移植物产生免疫响应。

如本文所用，术语“HLA错配”是指其中至少一种HLA抗原，特别是HLA-A、HLA-B、HLA-C和HLA-DR错配在供体和受体之间的供体-受体对，诸如为需要造血干细胞移植治疗的受体提供造血干细胞移植物的供体。在一些实施方案中，一种单倍型匹配而另一种错配。与HLA匹配的供体-受体对相比，HLA不匹配的供体-受体对可能具有更高的移植排斥风险，因为在HLA不匹配的情况下，内源性T细胞和NK细胞更有可能将传入的移植物识别为外来移植物供体-受体对，因此此类T细胞和NK细胞更有可能对移植物产生免疫响应。

如本文所用，术语“诱导性多能干细胞”、“iPS细胞”和“iPSC”是指可直接来源于分化的体细胞的多能干细胞。可以通过将特定的重编程因子组引入非多能细胞来产生人类iPS细胞，这些因子可以包括例如Oct3/4、Sox家族转录因子(例如，Sox1、Sox2、Sox3、Soxl5)、Myc家族转录因子(例如，c-Myc、1-Myc、n-Myc)、Kruppel样家族(KLF)转录因子(例如，KLF1、KLF2、KLF4、KLF5)和/或相关转录因子，诸如NANOG、LIN28和/或Glis1。例如，也可以通过使用miRNA、模拟转录因子作用的小分子或谱系区别因子来生成人类iPS细胞。人类iPS细胞的特征在于它们能够分化为三种脊椎动物胚层中的任何细胞，例如内胚层、外胚层或中胚层。人类iPS细胞的特征还在于它们能够在合适的体外培养条件下无限繁殖。人iPS细胞描述于例如Takahashi和Yamanaka，Cell 126:663(2006)中，该文献的公开内容以引用的方式并入本文，因为其涉及iPS细胞的结构和功能。

如本文所用，术语“抑制剂”是指结合至靶分子和/或抑制靶分子活性的剂(例如，小分子、肽片段、蛋白质、抗体或其抗原结合片段)。

如本文所用，术语“干扰核糖核酸”和“干扰RNA”是指通过以下方式抑制靶标RNA转录物的表达的RNA，诸如短干扰RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)或短发夹RNA(shRNA)：(i)退火至靶标RNA转录物，从而形成核酸双链体；以及(ii)促进核酸酶介导的RNA转录物的降解以及/或者(iii)减缓、抑制或防止RNA转录物的翻译，诸如通过在空间上阻止功能性核糖体-RNA转录物复合物的形成或者减弱从靶标RNA转录物的功能性蛋白质产物形成来进行。如本文所述的干扰RNA可以以例如单链或双链寡核苷酸的形式或以包含编码干扰RNA的转基因的载体(例如，病毒载体)的形式提供给患者。示例性干扰RNA平台例如在Lam等人,MolecularTherapy–Nucleic Acids 4:e252(2015)；Rao等人,Advanced Drug Delivery Reviews 61:746-769(2009)；和Borel等人,Molecular Therapy 22:692-701(2014)中有所描述，这些专利中的每个的公开内容均以引用的方式整体并入本文。

如本文在病毒转导方案的上下文中所使用，术语“感染复数”或“MOI”是指(i)添加到被靶向转导的细胞群中的病毒粒子与(ii)群体中的细胞数量的比率。例如，将1×10⁶个细胞群与1×10⁷个病毒粒子(例如，慢病毒病毒粒子，诸如本文所述的慢病毒粒子)接触的转导方案的特征在于感染复数为10。

如本文在造血干细胞和/或祖细胞的上下文中所使用，术语“动员”是指此类细胞从细胞通常驻留的干细胞龛(例如，骨髓)释放到外周循环中。“动员剂”是能够诱导造血干细胞和/或祖细胞从干细胞龛释放到外周循环中的剂。

如本文所用，术语“清髓性(myeloablative或myeloablation)”是指通常通过暴露于细胞毒性剂或辐射而显著损害或破坏造血系统的调理方案。清髓包括通过高剂量的细胞毒剂或破坏造血系统的全身照射引起的完全清髓。

如本文所用，术语“非清髓性(non-myeloablative或myelosuppressive)”是指不消除基本上所有宿主来源的造血细胞的调理方案。

如本文所用，术语“数均分子量”和“Mn”是指样品中的所有聚合物链的统计平均分子量，并且被定义为：

其中

M_i是链的分子量，并且

N_i是该分子量的链数。

如本文所用，术语“重均分子量”和“Mw”是指样品中的所有聚合物链的重量统计平均值，并且被定义为：

其中

M_i是链的分子量，并且

N_i是该分子量的链数。

如本文所用，术语“多分散指数”是指聚合物的分子量分布宽度的量度，并且被定义为：

多分散指数＝Mw/Mn。

如本文所用，术语“多能细胞”是指具有发育成多于一种分化细胞类型的能力的细胞，诸如造血谱系的细胞类型(例如，粒细胞(例如早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如网织红细胞、红细胞)、血小板细胞(例如巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞))。多能细胞的实例是ESC、iPSC和CD34+细胞。

如本文所用，术语“启动子”是指DNA上由RNA聚合酶结合的识别位点。聚合酶驱动转基因的转录。适合与本文所述的组合物和方法一起使用的示例性启动子描述于例如Sandelin等人，Nature Reviews Genetics 8:424(2007)，该文献的公开内容以引用的方式并入本文，因为它涉及核酸调控元件。此外，术语“启动子”可以指合成启动子，它是生物系统中不天然存在的调节性DNA序列。合成启动子包含与自然界不存在的多核苷酸序列相结合的部分天然启动子，可以使用各种转基因、载体和靶细胞类型对其进行优化以表达重组DNA。

相对于参考多核苷酸序列的“百分比(％)序列互补性”定义为在比对序列并引入缺口之后，候选序列中与参考多核苷酸序列中的核酸互补的核酸的百分比，如果需要的话，以实现最大百分比的序列互补性。如果给定的核苷酸形成规范的Watson-Crick碱基对，则认为给定的核苷酸与本文所述的参考核苷酸“互补”。为免生疑问，本公开中的Watson-Crick碱基对包括腺嘌呤-胸腺嘧啶、腺嘌呤-尿嘧啶和胞嘧啶-鸟嘌呤碱基对。在本文中，正确的Watson-Crick碱基对被称为“匹配”，而每个未配对的核苷酸和每个错误配对的核苷酸都被称为“错配”。用于确定核酸序列同一性百分比的比对可以以在本领域技术人员能力范围内的各种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2或Megalign软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括实现在所比较序列的全长上实现最大互补性所需的任何算法。例如，给定核酸序列A与给定核酸序列B的序列互补性百分比(也可以表述为给定核酸序列A与给定核酸序列B具有一定的互补性百分比)计算公式如下：

100×(分数X/Y)

其中X是A和B的比对(例如，由计算机软件，诸如BLAST执行)中互补碱基对的数量，其中Y是B中的核酸总数。应当理解，当核酸序列A的长度不等于核酸序列B的长度时，A与B的序列互补性百分比将不等于B与A的序列互补性百分比。如本文所用，如果查询核酸序列与参考核酸序列具有100％的序列互补性，则认为查询核酸序列与参考核酸序列“完全互补”。

相对于参考多核苷酸或多肽序列的“序列一致性百分比(％)”定义为在比对序列且引入空位(如果需要)以实现最大序列一致性百分比后，候选序列中与参考多核苷酸或多肽序列中的核酸或氨基酸一致的核酸或氨基酸的百分比。用于确定核酸或氨基酸序列同一性百分比的比对可以以在本领域技术人员能力范围内的各种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2或Megalign软件。所属领域技术人员可确定适用于比对序列的参数，包括实现所比较序列的全长内的最大比对所需的任何算法。例如，序列一致性百分比值可使用序列比较计算机程序BLAST来生成。例如，给定核酸或氨基酸序列A与给定核酸或氨基酸序列B的序列同一性百分比(也可以表述为给定核酸或氨基酸序列A与给定核酸或氨基酸序列B具有一定的序列同一性百分比)计算公式如下：

100×(分数X/Y)

其中X是通过序列比对程序(例如BLAST)在此程序的A和B比对中评定为一致匹配的核苷酸或氨基酸的数量，且其中Y是B中核酸的总数。应了解，当核酸或氨基酸序列A的长度不等于核酸或氨基酸序列B的长度时，A对B的序列一致性百分比将不等于B对A的序列一致性百分比。

如本文所用的术语“药学上可接受的”是指适于与受试者(例如哺乳动物，例如人)的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏响应和其他问题并发症并与合理效益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用，术语“调控序列”包括控制抗体链基因转录或翻译的启动子、增强子和其他表达控制元件(例如，聚腺苷酸化信号)。此类调控序列描述于例如Perdew等人，Regulation of Gene Expression(Humana Press,New York,NY,(2014))；该文献以引用的方式并入本文。

如本文所用，术语“干细胞”和“未分化细胞”是指处于未分化或部分分化状态的细胞，它们具有分化成多种细胞类型的发育潜力。干细胞能够增殖并产生更多此类干细胞，同时保持它们的功能潜力。干细胞可以不对称分裂，这被称为强制性不对称分化，其中一个子细胞保留亲本干细胞的功能潜力，而另一个子细胞表达与亲本细胞不同的其他特定功能、表型和/或发育潜力。子细胞本身可以被诱导增殖并产生子代，这些子代随后分化为一种或多种成熟细胞类型，同时还保留一种或多种具有亲代发育潜力的细胞。分化细胞可以来源于专能细胞，而专能细胞本身来源于专能细胞，依此类推。或者，群体中的一些干细胞可以对称地分裂成两个干细胞。因此，术语“干细胞”是指在特定情况下具有分化成更特化或分化的表型的发育潜力，并且在某些情况下保持增殖而不显著分化的能力的任何细胞亚群。在一些实施方案中，术语干细胞通常是指天然存在的亲本细胞，其子代(子代细胞)通过分化(例如通过获得完全个体特征，如在胚胎细胞和组织的逐渐多样化中所出现)而专门化，通常在不同方向上专门化。一些分化的细胞还具有产生更大发育潜力的细胞的能力。这种能力可以是自然的，也可以是在用各种因素处理后人为诱导的。从干细胞开始的细胞可能会朝着分化的表型发展，但随后可以被诱导“逆转”并重新表达干细胞表型，这个术语通常被本领域的普通技术人员称为“去分化”或“重编程”或“逆分化”。

如本文所用，术语“转基因”是指编码基因产物(例如，本文所述的基因产物)的重组核酸(例如，DNA或cDNA)。基因产物可以是RNA、肽或蛋白质。除了基因产物的编码区之外，转基因可以包括或可操作地连接至一个或多个元件以促进或增强表达，诸如启动子、增强子、去稳定结构域、响应元件、报告元件、隔离元件、聚腺苷酸化信号和/或其他功能元件。本公开的实施方案可以利用任何已知的合适的启动子、增强子、去稳定结构域、响应元件、报告元件、隔离元件、聚腺苷酸化信号和/或其他功能元件。

如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换使用，并且指已被诊断患有和/或正在接受疾病(诸如以本文描述的基因或蛋白质缺乏为特征的疾病)治疗的生物体(例如，哺乳动物，诸如人)。

如本文所用，术语“转导(transduction和transduce)”是指将病毒载体构建体或其部分引入细胞并随后在细胞中表达由载体构建体或其部分编码的转基因的方法。

如本文所用，术语“转导效率”是指给定群体中被载体(例如，病毒载体，诸如本文所述的慢病毒载体)的至少一个拷贝转导的细胞比例。例如，如果1×10⁶个细胞暴露于病毒(例如，慢病毒)并且在转导程序之后确定0.5×10⁶个细胞在它们的基因组中具有病毒载体的至少一个拷贝，则该程序的转导效率是50％。确定转导效率的示例性方法包括聚合酶链式反应(PCR)程序和流式细胞术。

如本文所用，“治疗(treatment和treating)”是指用于获得有益的或期望的结果，例如临床结果的方法。有益的或期望的结果可包括但不限于减轻或改善一种或多种症状或疾患；减少疾病或疾患的程度；稳定(即，不恶化)疾病、病症或疾患的状态；防止疾病或疾患的传播；延迟或减缓疾病或疾患的进展；改善或缓解疾病或疾患；并且可检测的或不可检测的缓解(部分或全部)。“改善”或“减轻”疾病或疾患是指与在不治疗的情况下的程度或时间过程相比，疾病、病症或疾患的程度和/或不期望的临床表现减轻和/或进展的时间过程减慢或延长。“治疗”还可意指相比于如果不接受治疗的预期生存，延长生存。需要治疗者包括已经患有疾患或病症者，以及倾向于或处于发展疾患或病症的风险者，以及其中疾患或病症将被预防者。

如本文所用，术语“载体”包括核酸载体，例如DNA载体，诸如质粒、RNA载体、病毒或其他合适的复制子(例如，病毒载体)。已开发出多种载体用于将编码外源蛋白质的多核苷酸递送到原核或真核细胞中。此类表达载体的实例公开于例如WO 1994/011026；该专利以引用的方式并入本文，因为它涉及适合于表达所关注的基因的载体。适于与本文所述的组合物和方法一起使用的表达载体包含多核苷酸序列，以及例如，用于表达蛋白质和/或将这些多核苷酸序列整合到哺乳动物细胞的基因组中的另外的序列元件。可以用于表达本文所述的一种或多种蛋白质的载体包括含有调控序列，诸如启动子和增强子区域的质粒，所述调控序列指导基因转录。此外，用于表达本文所述的一种或多种蛋白质的有用载体可以包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列提高相应基因的翻译速度，或提高由基因转录产生的mRNA的稳定性或核输出。此类序列元件的实例是5'和3'非翻译区、IRES和聚腺苷酸化信号位点，以指导表达载体上携带的一个或多个基因的有效转录。适于与本文所述的组合物和方法一起使用的表达载体还可以包含编码用于选择包含所述载体的细胞的标记的多核苷酸。合适标记的实例是编码抗生素(诸如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、诺尔丝菌素或博来霉素等)抗性的基因。

如本文所用，术语“载体拷贝数”或“VCN”是指细胞基因组中载体或其部分(例如，编码所关注的转基因的部分)的拷贝数量。可以确定细胞群或单个细胞集落的平均VCN。用于测量VCN的示例性方法包括PCR程序和流式细胞术。

如本文所用，术语“β-珠蛋白”连同本公开中列举的其他基因或蛋白质的名称，包括相应基因或蛋白质的野生型形式，以及变体(例如，剪接变体、截短、串联体和融合构建体等)。在β-珠蛋白的背景下，此类变体的实例是与野生型β-珠蛋白蛋白(例如，SEQ ID NO:2)的氨基酸序列中的任一者具有至少70％序列同一性(例如，70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.9％同一性或更多)的蛋白质，前提条件是例如β-珠蛋白变体保留野生型β-珠蛋白的功能。

如本文所用，术语“烷基”是指单价、任选支链的烷基，诸如具有1至6个或更多个碳原子的烷基。该术语的示例为以下基团，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基等。

如本文所用，术语“低级烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基。

如本文所用，术语“芳基”是指具有单环(例如，苯基)或多个稠合环(例如，萘基)的6至14个碳原子的不饱和芳族碳环基团。优选的芳基包括苯基、萘基、菲基等。

如本文所用，术语“芳烷基”和“芳基烷基”可互换使用并且指包含芳基部分的烷基。类似地，术语“芳基低级烷基”等是指含有芳基部分的低级烷基。

如本文所用，术语“烷基芳基”是指具有芳基取代基的烷基，包括苄基、苯乙基等。

如本文所用，术语“杂芳基”是指单环杂芳族、或双环或三环稠环杂芳族基团。杂芳基的具体实例包括任选取代的吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,3,4-三嗪基、1,2,3-三嗪基、苯并呋喃基、[2,3-二氢苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并三唑基、异苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、苯并咪唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹嗪基、喹唑啉基、酞嗪基、喹喔啉基、噌啉基、萘并吡啶基、吡啶并[3,4-b]吡啶基、吡啶并[3,2-b]吡啶基、吡啶并[4,3-b]吡啶基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、5,6,7,8-四氢喹啉基、5,6,7,8-四氢异喹啉基、嘌呤基、蝶啶基、咔唑基、呫吨基、苯并喹啉基等。

如本文所用，术语“烷基杂芳基”是指具有杂芳基取代基的烷基，包括2-呋喃基甲基、2-噻吩基甲基、2-(1H-吲哚-3-基)乙基等。

如本文所用，术语“低级烯基”是指优选具有2至6个碳原子并具有至少1或2个烯基不饱和位点的烯基。示例性的烯基是乙烯基(-CH＝CH₂)、n-2-丙烯基(烯丙基，-CH₂CH＝CH₂)等。

如本文所用，术语“烯基芳基”是指具有芳基取代基的烯基，包括2-苯基乙烯基等。

如本文所用，术语“烯基杂芳基”是指具有杂芳基取代基的烯基，包括2-(3-吡啶基)乙烯基等。

如本文所用，术语“低级炔基”是指优选具有2至6个碳原子并具有至少1-2个炔基不饱和位点的炔基，优选的炔基包括乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(-CH₂C≡CH)等。

如本文所用，术语“炔基芳基”是指具有芳基取代基的炔基，包括苯乙炔基等。

如本文所用，术语“炔基杂芳基”是指具有杂芳基取代基的炔基，包括2-噻吩基乙炔基等。

如本文所用，术语“环烷基”是指具有3至8个碳原子的单环环烷基，诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。

如本文所用，术语“低级环烷基”是指具有单环(例如，环己基)或多个稠合环(例如，降冰片基)的3至8个碳原子的饱和碳环基团。优选的环烷基包括环戊基、环己基、降冰片基等。

如本文所用，术语“杂环烷基”是指其中一个或多个环碳原子被杂原子，诸如氮原子、氧原子、硫原子等取代的环烷基。示例性的杂环烷基是吡咯烷基、哌啶基、氧代哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氧代哌嗪基、硫代吗啉基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、氧氮杂环烷基、噻氮杂环烷基、二氧杂噻吩基、氮杂烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基等。

如本文所用，术语“烷基环烷基”是指具有环烷基取代基的烷基，包括环己基甲基、环戊基丙基等。

如本文所用，术语“烷基杂环烷基”是指具有杂环烷基取代基的C₁-C₆-烷基，包括2-(1-吡咯烷基)乙基、4-吗啉基甲基、(1-甲基-4-哌啶基)甲基和类似。

如本文所用，术语“羧基”是指基团-C(O)OH。

如本文所用，术语“烷基羧基”是指具有羧基取代基的C₁-C₅-烷基，包括2-羧乙基等。

如本文所用，术语“酰基”是指基团-C(O)R，其中R可以是例如C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基，或C₁-C₆-烷基杂芳基等取代基。

如本文所用，术语“酰基氧基”是指基团-OC(O)R，其中R可以是例如C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基，或C₁-C₆-烷基杂芳基等取代基。

如本文所用，术语“烷氧基”是指基团-O-R，其中R是例如任选取代的烷基，诸如任选取代的C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基或C₁-C₆-烷基杂芳基等取代基。示例性烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、苯氧基等。

如本文所用，术语“烷氧基羰基”是指基团-C(O)OR，其中R是例如氢、C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基、或C₁-C₆-烷基杂芳基，以及其他可能的取代基。

如本文所用，术语“烷基烷氧基羰基”是指具有烷氧基羰基取代基的烷基，包括2-(苄氧基羰基)乙基等。

如本文所用，术语“氨基羰基”是指基团-C(O)NRR'，其中每个R和R'可以独立地是例如氢、C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基或C₁-C₆-烷基杂芳基等取代基。

如本文所用，术语“烷基氨基羰基”是指具有氨基羰基取代基的烷基，包括2-(二甲基氨基羰基)乙基等。

如本文所用，术语“酰基氨基”是指基团-NRC(O)R'，其中R和R'中的每一个可以独立地为例如氢、C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基或C₁-C₆-烷基杂芳基等取代基。

如本文所用，术语“烷基酰基氨基”是指具有酰基氨基取代基的烷基，包括2-(丙酰氨基)乙基等。

如本文所用，术语“脲基”是指基团-NRC(O)NR'R"，其中每个R、R'和R"可以独立地为例如氢、C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基、C₁-C₆-烷基杂芳基、环烷基或杂环烷基等取代基。示例性脲基还包括其中R'和R”与它们所连接的氮原子一起形成3-8元杂环烷基环的部分。

如本文所用，术语“烷基脲基”是指具有脲基取代基的烷基，包括2-(N'-甲基脲基)乙基等。

如本文所用，术语“氨基”是指基团-NRR'，其中R和R'中的每一个可以独立地为例如氢、C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基、C₁-C₆-烷基杂芳基、环烷基或杂环烷基等取代基。示例性氨基还包括其中R和R'与它们所连接的氮原子一起可形成3-8元杂环烷基环的部分。

如本文所用，术语“烷基氨基”是指具有氨基取代基的烷基，包括2-(1-吡咯烷基)乙基等。

如本文所用，术语“铵”是指带正电荷的基团-N⁺RR'R”，其中R、R'和R”中的每一个可以独立地是例如C₁-C₆-烷基、C₁-C₆-烷基芳基、C₁-C₆-烷基杂芳基、环烷基或杂环烷基等取代基。示例性的铵基团还包括其中R和R'与它们所连接的氮原子一起形成3-8元杂环烷基环的部分。

如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘原子。

如本文所用，术语“磺酰基氧基”是指基团-OSO₂-R，其中R选自氢、C₁-C₆-烷基、被卤素取代的C₁-C₆-烷基，例如-OSO₂-CF₃基团、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基和C₁-C₆-烷基杂芳基。

如本文所用，术语“烷基磺酰基氧基”是指具有磺酰基氧基取代基的烷基，包括2-(甲基磺酰基氧基)乙基等。

如本文所用，术语“磺酰基”是指基团“-SO₂-R”，其中R选自氢、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基、被卤素取代的C₁-C₆-烷基，例如-SO₂-CF₃基团、C₁-C₆-烷基芳基或C₁-C₆-烷基杂芳基。

如本文所用，术语“烷基磺酰基”是指具有磺酰基取代基的烷基，包括2-(甲基磺酰基)乙基等。

如本文所用，术语“亚磺酰基”是指基团“-S(O)-R”，其中R选自氢、C₁-C₆-烷基、被卤素取代的C₁-C₆-烷基，例如，-SO-CF₃基团、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基或C₁-C₆-烷基杂芳基。

如本文所用，术语“烷基亚磺酰基”是指具有亚磺酰基取代基的C₁-C₅-烷基，包括2-(甲基亚磺酰基)乙基等。

如本文所用，术语“硫烷基”是指基团-S-R，其中R是例如烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基或C₁-C₆-烷基杂芳基等取代基。示例性硫烷基是甲基硫烷基、乙基硫烷基等。

如本文所用，术语“烷基硫烷基”是指具有硫烷基取代基的烷基，包括2-(乙基硫烷基)乙基等。

如本文所用，术语“磺酰氨基”是指基团-NRSO₂-R'，其中每个R和R'可以独立地为氢、C₁-C₆-烷基、芳基、杂芳基、C₁-C₆-烷基芳基或C₁-C₆-烷基杂芳基等取代基。

如本文所用，术语“烷基磺酰氨基”是指具有磺酰氨基取代基的烷基，包括2-(乙基磺酰氨基)乙基等。

除非个别取代基的定义另有限制，否则上述基团，如“烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”和“杂芳基”等基团可以任选地被取代，例如被一个或多个取代基取代，当价允许时，诸如选自以下的取代基：烷基(例如，C₁-C₆-烷基)、烯基(例如，C₂-C₆-烯基)、炔基(例如，C₂-C₆-炔基)、环烷基、杂环烷基、烷基芳基(例如，C₁-C₆-烷基芳基)、烷基杂芳基(例如，C₁-C₆-烷基杂芳基、烷基环烷基(例如，C₁-C₆-烷基环烷基)，烷基杂环烷基(例如，C₁-C₆-烷基杂环烷基)、氨基、铵、酰基、酰基氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基、硝基等。在一些实施方案中，取代是其中相邻取代基经历闭环的取代，诸如其中涉及邻近官能取代基的情况，因此形成例如内酰胺、内酯、环酐、缩醛、硫代缩醛和缩醛等。

如本文所用，术语“任选稠合的”是指可以与环系统，诸如环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基稠合的环状化学基团。可以与任选稠合的化学基团稠合的示例性环系统包括例如吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、吲唑基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、吲哚嗪基、萘啶基、蝶啶基、茚满基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、吲哚啉基、异吲哚啉基、2,3,4,5-四氢苯并[b]噁庚因基、6,7,8,9-四氢-5H-苯并环庚烯基、色满基等。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指保留形成盐的非离子化母体化合物的所需生物活性的盐，诸如本文所述化合物的盐。此类盐的实例包括但不限于与无机酸(例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)形成的酸加成盐，以及与有机酸(诸如，乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、富马酸、马来酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、扑甲酸、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸)形成的盐。所述化合物还可以作为药学上可接受的季铵盐施用，诸如式-NR,R’,R”⁺Z^-的季铵盐，其中每个R、R’和R”可以独立地是例如氢、烷基、苄基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆-烷基芳基、C₁-C₆烷基杂芳基、环烷基、杂环等，Z是抗衡离子，诸如氯化物、溴化物、碘化物、-O-烷基、甲苯磺酸盐、甲基磺酸盐、磺酸盐、磷酸盐、羧酸盐(诸如苯甲酸盐、琥珀酸盐、乙酸盐、乙醇酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、抗坏血酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐和二苯乙酸盐)等。

如本文所用，例如，在蛋白激酶C(PKC)抑制剂(诸如星形孢菌素)的上下文中，术语“变体”是指含有一个或多个相对于参考剂的修饰的剂，并且(i)保留了功能性参考剂的性质(例如，抑制PKC活性的能力)和/或(ii)在细胞(例如，本文所述类型的细胞，诸如和CD34+细胞)内转化为参考剂。在小分子PKC抑制剂(诸如星形孢菌素)的上下文中，参考化合物的结构变体包括与参考化合物在一个或多个取代基的纳入和/或位置不同的那些，以及作为参考化合物异构体的变体，诸如结构异构体(例如，区域异构体)或立体异构体(例如，对映异构体或非对映异构体)，以及参考化合物的前药。在干扰RNA分子的情况下，变体可以含有一个或多个相对于母体干扰RNA分子的核酸取代。

本文所述的结构组合物还包括互变异构体、几何异构体(例如，E/Z异构体和顺/反异构体)、对映异构体、非对映异构体和外消旋形式，以及它们的药学上可接受的盐。此类盐包括例如与药学上可接受的酸形成的酸加成盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或磷酸氢盐、乙酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、和对甲苯磺酸盐。

如本文所用，未描述具有一个或多个立体中心的化合物的立体化学构型的化学结构式将被解释为包括所指示化合物的任何一种立体异构体，或一种或多种此类立体异构体的混合物(例如，任何所示化合物的对映异构体或非对映异构体之一，或者对映异构体的混合物(例如外消旋混合物)或非对映异构体的混合物)。如本文所用，具体描述具有一个或多个立体中心的化合物的立体化学构型的化学结构式将被解释为指所示特定立体异构体的基本纯形式。“基本纯”形式是指纯度大于85％，诸如纯度为85％至99％、85％至99.9％、85％至99.99％、或85％至100％，诸如纯度为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％、99.99％、99.999％、或100％的化合物，如使用本领域已知的色谱和核磁共振技术所评估。

附图说明

图1是显示当用二嵌段共聚物处理时CD34+细胞在转导后一天的存活力％的图。以0.0001mg/mL至10mg/mL的浓度测试了六种二嵌段共聚物(DBP1-DBP6)。下表展示了DBP1-DBP6中的每个的组成：

结果表明，在转导过程中二嵌段聚合物的施加对造血干细胞是无毒的。在若干二嵌段聚合物(+DBP1-6)的剂量范围(10-0.0001mg/mL)存在下，用慢病毒载体转导外周动员血CD34⁺干细胞20-24小时(仅载体，感染复数10)。显示的图汇总了在4个独立实验中，在慢病毒转导从不同健康供体(○，A-D)分离的CD34+细胞1天后，通过流式细胞术(AnnexinV^-7AAD^-)检测到的活细胞的百分比。

图2A-2F是显示当用二嵌段共聚物处理时在转导后一天转导效率增加倍数的图。图2A是DBP1，图2B是DBP2，图2C是DBP3，图2D是DBP4，图2E是DBP5，并且图2F是DBP6。这些图表明，二嵌段聚合物的施加可以提高造血干细胞的转导效率。在最终浓度为10-0.0001mg/mL的二嵌段聚合物(DBP1-6，A-F)存在下，用慢病毒载体(MOI 10)转导外周动员血CD34⁺干细胞。(A)这些图汇总了相对于仅用载体处理的细胞，通过添加二嵌段聚合物诱导的转导细胞百分比的倍数变化。使用从不同健康供体(○)分离的CD34+细胞，在4个独立实验中通过流式细胞术检测转导后12天的转基因表达来确定转导细胞的百分比。

图3是显示第12天骨髓液体培养物中的每个细胞的平均载体拷贝数的图。测试了DBP1–DBP6。该图表明，二嵌段聚合物的施加改善了造血干细胞的慢病毒整合。在最终浓度为0.1-0.0001mg/mL的二嵌段聚合物(DBP1-6)存在下，用慢病毒载体(MOI 10)转导外周动员血CD34⁺干细胞。该图汇总了通过从转导后12天的细胞培养物收获的基因组DNA中的整合转基因序列的液滴数字PCR检测来确定的平均转基因拷贝数(VCN)。显示了从2个不同健康供体(○)分离的CD34+细胞的数据。

图4是显示使用针对DBP1-DBP5的GFP载体的转导细胞百分比的图。用DBP测试了转导增强子元件的各种组合(TE组合1或组合2)。该图表明，二嵌段聚合物的施加可以提高造血干细胞的转导效率，这与其他化合物一致。在最终浓度为100-1μg/mL的二嵌段聚合物(DBP1-5)存在下，与其他也可以改善慢病毒转导的化合物组合施加(+TE组合1、+TE组合2)，用慢病毒载体(MOI 10)转导外周动员血CD34⁺干细胞。该图显示了通过转导后12天转基因表达的流式细胞术检测确定的转导细胞百分比。数据显示为平均值±SD，代表3个独立实验。

图5是显示用DBP1或DBP5与四种不同的转导增强剂组合TE组合1、组合2、组合3和组合4处理的细胞的存活力百分比的图。该图表明，在转导过程中二嵌段聚合物与其他化合物组合施加对造血干细胞是无毒的。在二嵌段聚合物DBP1和DBP5的剂量范围(1-0.1mg/mL)存在下，与其他也可以改善慢病毒转导的化合物组合施加(TE组合1-4)，用慢病毒载体转导外周动员血CD34⁺干细胞20-24小时(仅载体，感染复数10)。显示的图汇总了在慢病毒转导CD34+细胞1天后，通过流式细胞术(AnnexinV^-7AAD^-)检测到的活细胞的百分比。数据显示为平均值±SD，代表3个独立实验。

图6是显示用DBP1或DBP5以及上述图5中提到的四个TE组合之一处理的细胞的CD90-HSC百分比的倍数变化的图。该图表明，二嵌段聚合物与增强造血干细胞转导的其他化合物一起施加不会对造血干细胞表型或存活产生不利影响。在以各种最终浓度施加的二嵌段聚合物(DBP1和DPB5)存在下，与其他也可以改善慢病毒转导的化合物组合施用(+TE组合1-4)，用慢病毒载体(MOI 10)转导外周动员血CD34⁺干细胞。该图显示了相对于仅用载体处理的细胞，在转导后1天检测的CD34+CD90+干细胞的百分比的倍数变化(通过流式细胞术测定)。数据显示为平均值±SD，代表3个独立实验。

图7是显示具有不同的PEO和PPO组成的二嵌段共聚物导致造血干细胞的慢病毒转导改善的一系列图。在各种PEO和PPO组成(二嵌段PEO/PPO比率)的二嵌段共聚物存在下，用以100μg/mL的最终浓度施加的慢病毒载体(MOI 10)转导外周动员血CD34⁺干细胞。这些图显示了相对于在不存在二嵌段共聚物的情况下转导的细胞，转导的CD34+干细胞的百分比的倍数变化(通过流式细胞术测定)和在转导后12天检测的每个细胞的平均VCN。每个符号表示从独立健康供体测定的干细胞，在2个独立测定中测试了6名供体。

图8是显示具有宽范围的PEO和PPO嵌段含量的二嵌段共聚物增强造血干细胞的慢病毒转导的一系列图。在各种PEO和PPO组成(二嵌段PEO/PPO比率)的二嵌段共聚物存在下，用以100μg/mL的最终浓度施用的慢病毒载体(MOI 10)转导外周动员血CD34⁺干细胞。这些图显示了相对于在不存在二嵌段共聚物的情况下转导的细胞，转导的CD34+干细胞的百分比的倍数变化(通过流式细胞术测定)和在转导后12天检测的每个细胞的平均VCN。每个符号表示从独立健康供体测定的干细胞，在2个独立测定中测试了6名供体。

图9是显示二嵌段共聚物与RetroNectin相容的一系列图，RetroNectin是由三个功能结构域组成的重组人纤连蛋白片段：细胞结合结构域(C-结构域)、肝素结合结构域(H-结构域)和CS-1结构域。在存在或不存在RetroNectin(RN)、存在2种不同的二嵌段聚合物增强剂组合(二嵌段组合1和2)的情况下，用慢病毒载体(MOI 10)转导外周动员血CD34⁺干细胞。这些图显示了转导的CD34+干细胞的百分比(通过流式细胞术测定)和在转导后12天检测的每个细胞的平均VCN，代表至少3个独立测定，其中每个符号表示从独立健康供体测定的干细胞。

图10是显示相对于其他商业化合物所实现的结果，二嵌段共聚物的施用实现了干细胞转导的改进增强的一系列图。在存在2种不同的二嵌段聚合物增强剂组合(二嵌段组合1和2)的情况下，用慢病毒载体(MOI 10)，并且用各种二嵌段共聚物(PPO/PEO比率)或含有1mg/mL(LB)LentiBoost(泊洛沙姆338；来源Sirion Biotech)的增强剂组合转导外周动员血CD34⁺干细胞。这些图显示了与仅用载体处理的干细胞相比，转导的CD34+干细胞的百分比的倍数变化(通过流式细胞术测定)和在转导后12天检测的每个细胞的平均VCN。所绘制的数据显示了3个独立健康供体，其中每个符号表示从独立健康供体测定的干细胞。****P<0.001，***P<0.05配对学生t检验。

具体实施方式

例如，本文所述的组合物和方法可以用于修饰真核细胞，诸如多能细胞，包括造血干细胞(HSC)和造血祖细胞(HPC)。使用本公开的组合物和方法，此类细胞可以被改造以表达所关注的基因，和/或被操纵以便离体增殖。在本公开的一些实施方案中，将多能细胞群，诸如HSC和/或HPC群与编码转基因的病毒载体接触。转基因可编码蛋白质产物或调节不同基因表达的调控性核糖核酸(RNA)分子。在一些实施方案中，转基因编码在患有遗传疾病(例如以功能丧失突变为特征的遗传疾病)的患者(例如，哺乳动物患者，诸如人类)中有缺陷或无功能的蛋白质。细胞可以以促进细胞转导的方式与病毒接触，从而表达所期望的转基因。在一些实施方案中，然后将细胞施用于患有上述疾病的患者，从而恢复个体中的基因表达。

多种病毒载体可以与本公开的组合物和方法结合使用。例如，病毒载体可以是逆转录病毒，诸如慢病毒。本文描述了可以用于实现靶细胞转导的其他病毒载体。

为了增加转导的程度和/或转导靶细胞的速率，细胞可以与二嵌段共聚物，诸如由亲水性组分和疏水性组分组成的二嵌段共聚物接触。例如，亲水性组分可以包含聚氧乙烯亚基，并且疏水性组分可以包含聚氧丙烯亚基。

以下部分描述了可以用于增强靶细胞病毒转导的各种病毒载体和剂的使用以及经转导的细胞的一系列治疗用途。

二嵌段共聚物

可以与本发明的组合物和方法结合使用的二嵌段共聚物包括包含共价连接至疏水性嵌段的亲水性嵌段的那些二嵌段共聚物。此类二嵌段共聚物包括具有PEO和PPO亚基的那些。合适的二嵌段共聚物包括其中二嵌段共聚物的PEO亚基具有的数均分子量(Mn)为约5,000g/mol至约25,000g/mol的那些。例如，二嵌段共聚物的PEO亚基可以具有的Mn为约5,500g/mol、6,000g/mol、6,500g/mol、7,000g/mol、7,500g/mol、8,000g/mol、8,5000g/mol,9,000g/mol、9,500g/mol、10,000g/mol、10,500g/mol、11,000g/mol、11,500g/mol、12,000g/mol、12,500g/mol、13,000g/mol、13,500g/mol,14,000g/mol、14,500g/mol、15,000g/mol、15,500g/mol、16,000g/mol、16,500g/mol、17,000g/mol、17,500g/mol、18,000g/mol、18,500g/mol、19,000g/mol、19,500g/mol、20,000g/mol、20,500g/mol、21,000g/mol、21,500g/mol、22,000g/mol、22,500g/mol、23,000g/mol、23,500g/mol、24,000g/mol、24,500g/mol、或25,000g/mol。

例如，在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物的所述PEO亚基具有的Mn为约9,000g/mol至约19,000g/mol。在一些特定实施方案中，所述二嵌段共聚物的所述PEO亚基具有的Mn为约9,000g/mol、9,500g/mol、13,800g/mol、15,500g/mol、18,000g/mol、或19,000g/mol。

可以与本公开的组合物和方法结合使用的二嵌段共聚物包括其中二嵌段共聚物的PPO亚基具有的Mn为约2,000g/mol至约10,000g/mol的那些(例如，二嵌段共聚物的PPO亚基具有的Mn为约2,000g/mol、2,500g/mol、3,000g/mol、3,500g/mol、4,000g/mol、4,500g/mol、5,000g/mol、5,500g/mol、6,000g/mol、6,500g/mol、7,000g/mol、7,500g/mol、8,000g/mol、8,500g/mol、9,000g/mol、9,500g/mol、或10,000g/mol)。

例如，在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物的PPO亚基具有的Mn为约3,500g/mol至约5,500g/mol。在一些特定实施方案中，所述二嵌段共聚物的PPO亚基具有的Mn为约3,500g/mol或5,500g/mol。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于70质量％(例如，约60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、或更大)。

可以与本公开的组合物和方法结合使用的二嵌段共聚物包括具有的Mn大于约8,000g/mol的那些(例如，大于约8,500g/mol、9,000g/mol、或10,000g/mol)。例如，所述二嵌段共聚物可以具有的Mn大于约10,000g/mol(例如，所述二嵌段共聚物具有的Mn大于10,500g/mol、11,000g/mol、11,500g/mol、12,000g/mol、12,500g/mol、13,000g/mol、13,500g/mol、14,000g/mol、14,500g/mol、15,000g/mol、15,500g/mol、16,000g/mol、16,500g/mol、17,000g/mol、17,500g/mol、18,000g/mol、18,500g/mol、19,000g/mol、19,500g/mol、20,000g/mol、20,500g/mol、21,000g/mol、21,500g/mol、22,000g/mol、22,500g/mol、23,000g/mol、23,500g/mol、24,000g/mol、24,500g/mol、25,000g/mol、25,000g/mol、26,000g/mol、26,500g/mol、27,000g/mol、27,500g/mol、28,000g/mol、28,500g/mol、29,000g/mol、29,500g/mol、30,000g/mol、或更大)。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的多分散指数(Mw/Mn)为约1至约1.2(例如，所述二嵌段共聚物具有的多分散指数为约1、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09、1.10、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、1.17、1.18、1.19、或1.20)。例如，在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的多分散指数为约1.06至约1.17。在一些特定实施方案中，所述二嵌段共聚物具有的多分散指数为约1.06、1.07、1.08、1.09、1.10、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、或1.17。

可以与本文所述的组合物和方法结合使用的二嵌段共聚物可以具有以下结构：

X₁—[PEO]_m—L—[PPO]_n—X₂

其中m和n是整数；

L不存在或者是化学接头；并且

X₁和X₂各自独立地表示任选存在的化学取代基。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有以下结构：

X₁—[PEO]_m—[PPO]_n—X₂

其中m和n是整数；并且

X₁和X₂各自独立地表示任选存在的化学取代基。

下文更详细地描述了可以与本文所述的二嵌段共聚物结合使用的示例性接头(L)。

在一些实施方案中，X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、任选取代的烷氧基、任选取代的酰基氧基、任选取代的氨基、任选取代的烷基氨基、任选取代的酰氨基、卤素、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_2-6炔基、任选取代的酰基、任选取代的烷氧基羰基、氧代基、硫代羰基、任选取代的羧基或脲基。

在一些实施方案中，X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_1-6烷氧基或任选取代的C_1-6烷基氨基。

例如，在一些实施方案中，X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、H₂N、H₃CO、乙基-O、正丁基-O、叔丁基-O、正丁基或叔丁基。

在一些实施方案中，所述二嵌段共聚物具有以下结构：

[PEO]₃₂₃—[PPO]₈₆—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₂₃—[PPO]₈₆—O-正丁基、

[PEO]₃₁₈—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₁₈—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₉₅—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₉₅—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₃₄₁—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₄₁—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₂₈₄—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₈₄—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₂₀₀—[PPO]₅₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₀—[PPO]₅₅—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₁₇—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₇—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₃₀—[PPO]₆₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₃₀—[PPO]₆₅—O-正丁基、

[PEO]₂₄₀—[PPO]₅₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₄₀—[PPO]₅₅—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—O-正丁基、

[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—正丁基、

HO—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₇₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₇₀—OH、

可以与本公开的组合物和方法结合使用的二嵌段共聚物包括具有以下结构的二嵌段共聚物：

[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—OH。

该二嵌段共聚物具有的化学式大致为H(C₂H₄O)₂₀₅(C₃H₆O)₆₀OH。该二嵌段共聚物的Mn为约12,500g/mol。该二嵌段共聚物的多分散指数为约1.1。

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH。

该二嵌段共聚物具有的化学式大致为H(C₂H₄O)₂₁₆(C₃H₆O)₆₀OH。该二嵌段共聚物的Mn为约13,000g/mol。该二嵌段共聚物的多分散指数为约1.08。

[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—OH。

该二嵌段共聚物具有的化学式大致为H(C₂H₄O)₃₁₄(C₃H₆O)₆₀OH。该二嵌段共聚物的Mn为约17,300g/mol。该二嵌段共聚物的多分散指数为约1.13。

[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—OH。

该二嵌段共聚物具有的化学式大致为H(C₂H₄O)₃₅₂(C₃H₆O)₆₀OH。该二嵌段共聚物的Mn为约19,000g/mol。该二嵌段共聚物的多分散指数为约1.13。

[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—OH。

该二嵌段共聚物具有的化学式大致为H(C₂H₄O)₄₀₉(C₃H₆O)₉₅OH。该二嵌段共聚物的Mn为约23,500g/mol。该二嵌段共聚物的多分散指数为约1.17。

[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—OH。

该二嵌段共聚物具有的化学式大致为H(C₂H₄O)₄₃₂(C₃H₆O)₆₀OH。该二嵌段共聚物的Mn为约22,500g/mol。该二嵌段共聚物的多分散指数为约1.11。

如本文所述，二嵌段共聚物的环氧乙烷含量和环氧丙烷含量可以使用Alexandridis和Hatton,Colloids and Surfaces A:Physicochemical and EngineeringAspects 96:1-46(1995)中公开的方法测定，该文献的公开内容以引用的方式整体并入本文。本文所述的二嵌段共聚物可以根据例如Feng等人Polymers 9:1-31,2017描述的方法合成，该文献的公开内容据此以引用的方式整体并入。

接头

本文所述的二嵌段共聚物可以任选地包含连接聚合物的PEO亚基嵌段和PPO亚基嵌段的接头。二嵌段共聚物的PEO和PPO组分可以直接彼此结合，例如，不存在插入的接头。接头可以是肽接头或合成接头。

合成接头

例如，可以使用多种接头将PEO组分与PPO组分共价偶联，从而形成如本文所述的二嵌段共聚物。示例性接头包括可以例如通过酶促水解、光解、在酸性条件下水解、在碱性条件下水解、氧化、二硫化物还原、亲核切割或有机金属切割来切割的那些(参见例如，Leriche等人，Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012，该文献涉及适用于化学偶联的接头的公开内容以引用的方式并入本文)。可用于合成本文所述的缀合物的接头的实例包括含有亲电子试剂诸如迈克尔受体(例如，马来酰亚胺)、活化酯、缺电子羰基化合物和醛等等的那些，它们适合与抗体中存在的亲核取代基、抗原结合片段、蛋白质、肽和小分子(诸如胺和硫醇部分)反应。例如，适用于合成二嵌段共聚物的接头包括但不限于烷基、环烷基和杂环烷基接头(诸如开链乙基、丙基、丁基、己基、庚基、辛基、壬基或癸基链、环己基、环戊基、环丁基、环丙基、哌啶基、吗啉基)、或者其他含有两个反应性部分的接头(例如，卤素原子、醛基、酯基、酰氯基、酰基酐基、甲苯磺酰基、甲磺酰基、或溴磺酰基等等，它们可以被PEO或PPO聚合物中存在的反应性亲核原子取代)、含有两个卤代甲基的芳基或杂芳基接头(诸如苄基、萘基或吡啶基，它们可以被PEO或PPO聚合物中存在的反应性亲核原子取代)。示例性接头包括4-(N-马来酰亚氨基甲基)-环己烷-L-甲酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、碘乙酸N-琥珀酰亚氨基酯(SIA)、磺基-SMCC、间马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、磺基-MBS和碘乙酸琥珀酰亚胺酯，以及例如Liu等人,18:690-697,1979描述的那些，该文献涉及用于化学缀合的接头的公开内容以引用的方式并入本文。另外的接头包括不可切割的马来酰亚胺己酰基接头，它们在Doronina等人,Bioconjugate Chem.17:14-24,2006中有所描述，该文献涉及用于化学缀合的接头的公开内容以引用的方式并入本文。

如本文所述，共聚物的一个嵌段可以通过另外的接头与另一个嵌段结合，这些另外的接头包括在接头的一端和在接头的另一端与共聚物的一个嵌段(例如，PEO或PPO)共价结合的接头，它们含有由接头上存在的反应性取代基与二嵌段共聚物的另一个组分(例如，PEO或PPO)中存在的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分。可以用于形成接头的示例性反应性取代基包括但不限于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的羟基部分；赖氨酸残基的氨基部分；天冬氨酸和谷氨酸残基的羧基部分；和半胱氨酸残基的硫醇部分，以及非天然存在的氨基酸的炔丙基、叠氮基、卤代芳基(例如，氟芳基)、卤代杂芳基(例如，氟杂芳基)、卤代烷基和卤代杂烷基部分。与本文所述的二嵌段共聚物结合使用的接头包括但不限于含有如下表2所示的偶联反应形成的化学部分的接头。曲线表示缀合物的每个组分的连接点。

表2.在二嵌段共聚物的形成中通过偶联反应形成的示例性化学部分

肽接头

除上述合成接头之外，PEO聚合物与PPO聚合物的结合可以通过肽接头来实现。示例性肽接头包括含有一个或多个甘氨酸残基的那些。由于甘氨酸获得多个扭转角的能力，此类接头在空间上可以是柔性的。例如，与本文所述的组合物和方法结合使用的肽接头包括聚甘氨酸、聚丝氨酸或它们的组合。肽接头的另外的实例包括另外含有一个或多个极性氨基酸(诸如丝氨酸、苏氨酸)的那些。例如，与本文所述的组合物和方法结合使用的接头包括含有甘氨酸和丝氨酸的一个或多个重复的那些。另外的接头包括含有一个或多个阳离子或阴离子残基(诸如赖氨酸、精氨酸、天冬氨酸或谷氨酸残基)的那些。

PKC调节剂

多种剂可以用于降低PKC活性和/或表达。不受机制的限制，此类剂可通过刺激Akt信号转导和/或将丝切蛋白维持在脱磷酸化状态来增强病毒转导，从而促进肌动蛋白解聚。这种肌动蛋白解聚事件可以用于除去阻碍病毒载体进入靶细胞核的物理屏障。

星形孢菌素及其变体

R_c是O、NR_d或S；

---表示任选存在的键；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，PKC抑制剂是WO 1991/009034中描述的星形孢菌素变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类星形孢菌素变体的实例是以式(II)表示

R_c是O或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(III)表示

其中R₁是H、OH、氧代基或硫代羰基；

环A是任选取代的和任选稠合的杂环烷基环；

R_c是O或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(IV)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

环B是任选取代的杂芳基或杂环烷基环；

R_c是O或S；

W是O、NH或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(V)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

R_c是O或S；

W是O、NH或S；

p是0或1；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(VI)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

s是0-8的整数；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(VII)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

R₂是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；并且

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(VIII)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

R₂是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；并且

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(IX)表示

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(1)表示

或其盐。

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(X)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

t是0-6的整数；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(XI)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；并且

R₄是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(XII)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；并且

R₄是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(XIII)表示

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(3)表示

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是以式(4)表示

或其盐。

此类星形孢菌素变体的其他实例是：

或其盐。

在一些实施方案中，PKC抑制剂是WO 1993/007153中描述的星形孢菌素变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类星形孢菌素变体的实例以式(XIV)表示

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XV)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是选自以下的化合物：

或其盐。

在一些实施方案中，PKC抑制剂是美国专利号5,093,330中描述的星形孢菌素变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类星形孢菌素变体的实例以式(XVI)表示

或者其盐或季铵化变体。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XVII)表示的化合物

或者其盐或季铵化变体。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是选自以下的化合物：

或其盐。

在一些实施方案中，PKC抑制剂是美国专利号5,264,431中描述的星形孢菌素变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类星形孢菌素变体的实例以式(XVIII)表示

其中R是H、OH、C_1-6烷氧基或氧代基；并且

R₂是

R₅是H或C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XIX)表示的化合物

其中R是H、OH、C_1-6烷氧基或氧代基；并且

R₂是

R₅是H或C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，PKC抑制剂是美国专利号5,461,146中描述的星形孢菌素变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类星形孢菌素变体的实例以式(XX)表示

其中Z₁是H或OH；

Z₂是H或OH；

R₁是H、卤素或任选取代的烷基；

R₂是H或卤素；

R是OH或任选取代的烷氧基；并且

或其盐。

在一些实施方案中，PKC抑制剂是美国专利号5,756,494中描述的星形孢菌素变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类星形孢菌素变体的实例以式(XXI)表示

其中Z₁是H或OH；

Z₂是H或OH；

R₁是H、卤素或任选取代的烷基；

R₂是H或卤素；

R是OH或任选取代的烷氧基；并且

或其盐。

在一些实施方案中，PKC抑制剂是US 2005/0020570中描述的星形孢菌素变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类星形孢菌素变体的实例以式(XXII)、(XXIII)、(XXIV)、或(XXV)表示

每个X独立地是O、OH和H，或一对氢原子；

每个n独立地是0-4的整数；并且

每个m独立地是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(128)表示的化合物

或其盐。该化合物也称为K252a。

每个X独立地是O、OH和H，或一对氢原子；

每个n独立地是0-4的整数；

每个m独立地是0-4的整数；

每个n’独立地是0-4的整数；并且

每个m’独立地是0-4的整数；

或其盐。

在一些实施方案中，PKC抑制剂是US 5,624,949中描述的星形孢菌素变体，该专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类星形孢菌素变体的实例以式(XXVIII)表示

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXIX)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXX)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是以式(XXXI)表示的化合物

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

在一些实施方案中，所述PKC抑制剂是选自以下的化合物：

并且

干扰RNA

可以与本公开的组合物和方法结合使用的示例性PKC调节剂包括干扰RNA分子，诸如短干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)和/或微RNA(miRNA)，它们减少PKC基因表达。产生干扰RNA分子的方法是本领域已知的并且详细描述于例如WO 2004/044136和美国专利号9,150,605中，这些专利中的每个的公开内容以引用的方式整体并入本文。

HDAC抑制剂

多种剂可用于抑制组蛋白脱乙酰酶，以增加病毒转导过程中的转基因表达。不希望受理论的束缚，来自病毒载体的转基因表达减少可以是由组蛋白脱乙酰化进行的载体基因组的表观遗传沉默引起的。因此，本文所述的方法可以另外包括使细胞与HDAC抑制剂接触，例如，在使细胞与二嵌段共聚物接触之前、同时或之后，以改善病毒转导和/或增加转基因表达。异羟肟酸代表一类特别强效的HDAC抑制剂，它们借助在这些酶的活性位点内结合阳离子锌的异羟肟酸官能团来抑制这些酶。示例性抑制剂包括曲古抑菌素A以及伏立诺他(Vorinostat)(N-羟基-N'-苯基-辛二酰胺，在Marks等人,Nature Biotechnology 25,84to90(2007)；Stenger,Community Oncology 4,384-386(2007)中有所描述，该文献的公开内容以引用的方式并入本文)。其他HDAC抑制剂包括帕比司他(Panobinostat)，它在Drugs ofthe Future 32(4):315-322(2007)中有所描述，该文献的公开内容以引用的方式并入本文。

组蛋白脱乙酰酶的异羟肟酸抑制剂的另外的实例包括如下所示的化合物，它们在Bertrand,European Journal of Medicinal Chemistry 45:2095-2116(2010)中有所描述，该文献的公开内容以引用的方式并入本文：

其他不含异羟肟酸取代基的HDAC抑制剂也已经开发，包括丙戊酸(Gottlicher等人,EMBO J.20(24):6969-6978(2001))和莫西替司他(Mocetinostat)(N-(2-氨基苯基)-4-[[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]甲基]苯甲酰胺，它在Balasubramanian等人,CancerLetters 280:211-221(2009)中有所描述)，这些文献中的每个的公开内容以引用的方式并入本文。利用不同于异羟肟酸的化学官能团的其他小分子抑制剂包括在Bertrand,European Journal of Medicinal Chemistry 45:2095-2116(2010)中描述的那些，该文献的公开内容以引用的方式并入本文：

可用于本发明的组合物和方法的组蛋白乙酰化的化学调节剂的另外的实例包括以下的调节剂：HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9、HDAC10、Sirt1、Sirt2和/或HAT，诸如丁酰异羟肟酸、M344、LAQ824(达诺司他(Dacinostat))、AR-42、贝利司他(Belinostat)(PXD101)、CUDC-101、斯瑞泰德、苯丁酸钠、塔沙金霉素(Tasquinimod)、奎辛司他(Quisinostat)(JNJ-26481585)、普拉西诺司他(Pracinostat)(SB939)、CUDC-907、恩替司他(Entinostat)(MS-275)、莫西司他(Mocetinostat)(MGCD0103)、盐酸图巴斯塔辛A(Tubastatin A HCl)、PCI-34051、卓西司他(Droxinostat)、PCI-24781(阿贝司他(Abexinostat))、RGFP966、罗西诺司他(Rocilinostat)(ACY-1215)、CI994(泰克地那林(Tacedinaline))、图巴辛、RG2833(RGFP109)、瑞米司他(Resminostat)、图巴斯塔辛A(Tubastatin A)、BRD73954、BG45、4SC-202、CAY10603、LMK-235、NexturastatA、TMP269、HPOB、Cambinol和漆树酸。

在一些特定实施方案中，HDAC抑制剂是斯瑞泰德。

环孢菌素

在一些实施方案中，在病毒转导过程中，所述细胞还与环孢菌素，诸如环孢菌素A(CsA)或环孢菌素H(CsH)接触。所述细胞可以同时与所述二嵌段共聚物和所述环孢菌素接触。或者，所述细胞可以在与所述环孢菌素接触之前与所述二嵌段共聚物接触。在一些实施方案中，所述细胞在与所述二嵌段共聚物接触之前与所述环孢菌素接触。

在一些实施方案中，所述环孢菌素是CsH。

前列腺素E受体信号传导的活化剂

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是15d-PGJ2、δ2-PGJ2、2-羟基十七碳三烯酸(HHT)、血栓素(TXA2和TXB2)、PGI2类似物(例如，伊洛前列素和曲前列素)、PGF2类似物(例如，曲伏前列素、卡前列素氨丁三醇、他氟前列素、拉坦前列素、比马前列素、异丙基乌诺前列酮、氯前列醇、雌二醇和苏帕潘)、PGE1类似物(例如，11-脱氧PGE1、米索前列醇和布塔前列素)、以及科里醇-A([3aa,4a,5,6aa]-(-)-[n-4-(羟甲基)-2-氧代-2H-环戊二烯并/b/呋喃-5-基][1,1'-联苯]-4-甲酸酯)、科里醇-B(2H-环戊二烯并[b]呋喃-2-酮,5-(苯酰氧基)六氢-4-(羟甲基)[3aR-(3aa,4a,5,6aa)])和科里二醇((3aR,4S,5R,6aS)-六氢-5-羟基-4-(羟甲基)-2H-环戊二烯并[b]呋喃-2-酮)。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是前列腺素E受体配体，诸如前列腺素E2(PGE2)或者它们的类似物或衍生物。前列腺素通常是指衍生自含有20个碳原子包括5-碳环的脂肪酸的激素样分子，如本文所述和本领域已知的。PGE2“类似物”或“衍生物”的示例性实例包括但不限于16,16-二甲基PGE2、16-16二甲基PGE2对-(对乙酰氨基苯甲酰氨基)苯基酯、l l-脱氧-16,16-二甲基PGE2、9-脱氧-9-亚甲基-16,16-二甲基PGE2、9-脱氧-9-亚甲基PGE2、9-酮氟前列醇、5-反式PGE2、17-苯基-ω-三去甲PGE2、PGE2丝氨醇酰胺、PGE2甲酯、16-苯基四去甲PGE2、15(S)-15-甲基PGE2、15(R)-15-甲基PGE2、8-异-15-酮PGE2、8-异PGE2异丙酯、20-羟基PGE2、诺氯前列素、舒前列酮、布前列素、15-酮PGE2和19(R)羟基PGE2。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是非基于PGE2的配体。在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是CAY10399、ONO_8815Ly、ONO-AE1-259或CP-533,536。非基于PGE2的EP2激动剂的其他实例包括WO 2007/071456中公开的咔唑和芴，关于此类剂的公开内容以引用的方式并入本文。非基于PGE2的EP₃激动剂的示例性实例包括但不限于AE5-599、MB28767、GR63799X、ONO-NT012和ONO-AE-248。非基于PGE₂的EP₄激动剂的示例性实例包括但不限于ONO-4819、APS-999Na、AH23848和ONO-AE 1-329。基于非PGE2的EP4激动剂的另外的实例可见于WO 2000/038663；美国专利号6,747,037；和美国专利号6,610,719，它们中的每个关于此类激动剂的公开内容均以引用的方式并入。

在一些实施方案中，所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是Wnt激动剂。Wnt激动剂的示例性实例包括但不限于Wnt多肽和糖原合酶激酶3(GSK3)抑制剂。适合用作刺激前列腺EP受体信号传导通路的化合物的Wnt多肽的示例性实例包括但不限于Wnt1、Wnt2、Wnt2b/13、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt7c、Wnt8、Wnt8a、Wnt8b、Wnt8c、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、Wnt14、Wnt15或它们的生物活性片段。适合用作刺激前列腺素EP受体信号传导通路的剂的GSK3抑制剂结合至GSK3a或GSK3或者降低它们的活性。GSK3抑制剂的示例性实例包括但不限于BIO(6-溴靛玉红3’-肟)、LiCl、Li₂CO₃或其他GSK3抑制剂，如美国专利号6057117和6608063以及US 2004/0092535和US 2004/0209878所示例，以及ATP竞争性、选择性GSK-3抑制剂CHIR-911和CHIR-837(分别另外称为CT-99021/CHIR-99021和CT-98023/CHIR-98023)(Chiron Corporation(Emeryville,CA))。

CHIR-98023的结构是

或其盐。

在一些实施方案中，所述GSK3抑制剂是CHIR-99021。

在一些实施方案中，所述GSK3抑制剂是Li₂CO₃。

聚阳离子聚合物

在本文所述的方法的一些实施方案中，所述细胞还与聚阳离子聚合物接触。所述细胞可以同时与所述二嵌段共聚物和所述聚阳离子聚合物接触。或者，所述细胞可以在与所述聚阳离子聚合物接触之前与所述二嵌段共聚物接触。在一些实施方案中，所述细胞在与所述二嵌段共聚物接触之前与所述聚阳离子聚合物接触。

在一些实施方案中，所述聚阳离子聚合物是硫酸鱼精蛋白。

另外的转导增强剂

在本文所述的方法的一些实施方案中，在转导过程中，所述细胞还与抑制mTor信号传导的剂接触。所述抑制mTor信号传导的剂可以是例如雷帕霉素，以及其他mTor信号传导的抑制剂。

旋转接种

在本公开的一些实施方案中，可以例如通过离心使靶向转导的细胞旋转，同时与病毒载体(例如，与本文所述的一种或多种另外的剂组合)一起培养。该“旋转接种”过程可以以例如约200xg至约2,000xg的向心力进行。向心力可以是例如约300xg至约1,200xg(例如，约300xg、400xg、500xg、600xg、700xg、800xg、900xg、1,000xg、1,100xg、或1,200xg或更大)。在一些实施方案中，将所述细胞旋转约10分钟至约3小时(例如，约10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、65分钟、70分钟、75分钟、80分钟、85分钟、90分钟、95分钟、100分钟、105分钟、110分钟、115分钟、120分钟、125分钟、130分钟、135分钟、140分钟、145分钟、150分钟、155分钟、160分钟、165分钟、170分钟、175分钟、180分钟或更长)。在一些实施方案中，所述细胞在室温下，诸如在约25℃的温度下旋转。

涉及旋转接种步骤的示例性转导方案例如在Millington等人,PLoS One 4:e6461(2009)；Guo等人,Journal of Virology 85:9824-9833(2011)；O’Doherty等人,Journalof Virology 74:10074-10080(2000)；和Federico等人,Lentiviral Vectors andExosomes as Gene and Protein Delivery Tools,Methods in Molecular Biology1448，第4章(2016)中有所描述，这些文献中的每个的公开内容以引用的方式并入本文。

靶细胞

可以与本文所述的组合物和方法结合使用的细胞包括能够进行进一步分化的细胞。例如，可以与本文所述的组合物和方法结合使用的一种细胞类型是多能细胞。多能细胞是具有发育为多于一种分化细胞类型的能力的细胞。多能细胞的实例是ESC、iPSC和CD34+细胞。ESC和iPSC能够分化为外胚层(它形成皮肤和神经系统)、内胚层(它形成胃肠道和呼吸道、内分泌腺、肝脏和胰腺)和中胚层(它形成骨骼、软骨、肌肉、结缔组织和大部分循环系统)。

可以与本文所述的组合物和方法结合使用的细胞包括造血干细胞和造血祖细胞。造血干细胞(HSC)是未成熟的血细胞，具有自我更新和分化为成熟血细胞的能力，包括但不限于粒细胞(例如早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如网织红细胞、红细胞)、血小板细胞(例如巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)。人类HSC是CD34+。此外，HSC还指长期再造HSC(LT-HSC)和短期再造HSC(ST-HSC)。这些HSC中的任一者都可以与本文所述的组合物和方法结合使用。

HSC和其他多能祖细胞可以从血液制品中获得。血液制品是从身体或身体器官获得的含有造血来源细胞的产品。这些来源包括未分级的骨髓、脐带、胎盘、外周血或外周动员血。所有上述粗制或未分级的血液制品都可以通过多种方式富集具有HSC或骨髓祖细胞特征的细胞。例如，可以根据它们表达的细胞表面分子选择更成熟、分化的细胞。血液制品可以通过正向选择CD34+细胞进行分级，其中包括能够自我更新、多潜能的造血干细胞亚群，并且可以重新引入移植受体体内，然后它们归巢于造血干细胞龛并重新建立生产性和持续性的造血功能。这种选择是使用例如商购获得磁性抗CD34珠(Dynal,Lake Success,NY)完成的。骨髓祖细胞也可以根据它们表达的标记进行分离。未分级的血液制品可以直接从供体获得，也可以从冷冻保存库中收回。HSC和骨髓祖细胞也可以通过ES细胞、iPS细胞或其他重编程的成熟细胞类型的分化获得。

可以与本文所述的组合物和方法结合使用的细胞包括同种异体细胞和自体细胞。当使用同种异体细胞时，细胞可以任选地与接受细胞治疗的受试者HLA匹配。

可以与本文所述的组合物和方法结合使用的细胞包括CD34+/CD90+细胞和CD34+/CD164+细胞。这些细胞可以含有更高百分比的HSC。这些细胞在Radtke等人Sci.Transl.Med.9:1-10,2017和Pellin等人Nat.Comm.1-:2395,2019中有所描述，这些文献中的每个的公开内容均据此以引用的方式整体并入。

用于转基因表达的病毒载体

病毒基因组提供了丰富的载体来源，这些载体可以用于将外源基因有效传递到哺乳动物细胞中。病毒基因组是尤其可以用于基因递送的载体，因为此类基因组内包含的多核苷酸通常通过一般化或特殊化转导掺入哺乳动物细胞的核基因组中。这些过程作为天然病毒复制周期的一部分发生，并且不需要添加蛋白质或剂来诱导基因整合。病毒载体的实例是逆转录病毒(例如，逆转录病毒科病毒载体)、腺病毒(例如，Ad5、Ad26、Ad34、Ad35和Ad48)、细小病毒(例如，腺相关病毒)、冠状病毒、负链RNA病毒诸如正粘病毒(例如，流感病毒)、棒状病毒(例如，狂犬病毒和水疱性口炎病毒)、副粘病毒(例如麻疹病毒和仙台病毒)、正链RNA病毒(诸如细小核糖核酸病毒和甲病毒)以及双链DNA病毒，包括腺病毒、疱疹病毒(例如，1型和2型单纯疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒)和痘病毒(例如，牛痘、改良安卡拉痘苗(MVA)、鸡痘和金丝雀痘)。其他病毒包括例如诺沃克(Norwalk)病毒、囊膜病毒、黄病毒、呼肠孤病毒、乳多空病毒、嗜肝DNA病毒、人乳头瘤病毒、人泡沫病毒和肝炎病毒。逆转录病毒的实例是：禽白血病-肉瘤、禽C型病毒、哺乳动物C型、B型病毒、D型病毒、致癌逆转录病毒(oncoretrovirus)、HTLV-BLV组、慢病毒、α逆转录病毒、γ逆转录病毒、泡沫病毒(Coffin,J.M.,Retroviridae:The viruses and their replication,Virology，第三版(Lippincott-Raven,Philadelphia,1996))。其他实例是鼠类白血病病毒、鼠类肉瘤病毒、小鼠乳房肿瘤病毒、牛白血病病毒、猫白血病病毒、猫肉瘤病毒、禽白血病病毒、人T细胞白血病病毒、狒狒内源病毒、长臂猿白血病病毒、梅森辉瑞(Mason Pfizer)猴病毒、猿猴免疫缺陷病毒、猿猴肉瘤病毒、劳斯肉瘤病毒和慢病毒。载体的其他实例描述于例如McVey等人(US 5,801,030)中，该专利的教导以引用的方式并入本文。

逆转录病毒载体

用于本文描述的方法和组合物中的递送载体可以是逆转录病毒载体。一种可以用于本文所述的方法和组合物中的逆转录病毒载体类型是慢病毒载体。慢病毒载体(LV)是逆转录病毒的亚群，可高效转导范围广泛的分裂和非分裂细胞类型，使转基因稳定、长期表达。Delenda,The Journal of Gene Medicine 6:S125(2004)中提供了包装和转导LV的优化策略的概述，该文献的公开内容以引用的方式并入本文。

基于慢病毒的基因转移技术的使用依赖于携带高度缺失病毒基因组的重组慢病毒颗粒的体外生产，所述基因组中容纳了所关注的转基因。具体而言，重组慢病毒通过在允许细胞系中反式共表达以下构建体/载体来回收：(1)包装构建体，即表达Gag-Pol前体和Rev的载体(或者反式表达)；(2)表达包膜受体的载体，通常具有异源性质；和(3)转移载体，由除去所有开放阅读框但维持复制、衣壳化和表达所需的序列的病毒cDNA组成，其中插入了要表达的序列。

用于本文描述的方法和组合物中的LV可以包括5'-长末端重复序列(LTR)、HIV信号序列、HIV Psi信号5'-剪接位点(SD)、δ-GAG元件、Rev响应元件(RRE)、3'-剪接位点(SA)、延伸因子(EF)1-α启动子和3'-自失活LTR(SIN-LTR)中的一者或多者。慢病毒载体任选地包括中央多嘌呤区(cPPT)和土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)，如US 6,136,597中所述，该专利的公开内容以引用的方式并入本文，因为其涉及WPRE。慢病毒载体可以还包括pHR'骨架，它可以包括例如如下提供的。

Lu等人，Journal of Gene Medicine 6:963(2004)中描述的Lentigen LV可以用于表达DNA分子和/或转导细胞。用于本文描述的方法和组合物中的LV可以是5'-长末端重复序列(LTR)、HIV信号序列、HIV Psi信号5'-剪接位点(SD)、δ-GAG元件、Rev响应元件(RRE)、3'-剪接位点(SA)、延伸因子(EF)1-α启动子和3'-自失活LTR(SIN-LTR)。对本领域的技术人员而言显而易见的是，这些区域中的一个或多个任选地被另一个执行类似功能的区域取代。

增强子元件可以用于增加经修饰的DNA分子的表达或增加慢病毒整合效率。用于本文描述的方法和组合物中的LV可以包括nef序列。用于本文描述的方法和组合物中的LV可以包括增强载体整合的cPPT序列。cPPT作为(+)链DNA合成的第二个起点，并在其天然HIV基因组中间引入部分链重叠。在转移载体骨架中引入cPPT序列大大增加了核转运和整合到靶细胞DNA中的基因组总量。用于本文描述的方法和组合物中的LV可以包括土拨鼠转录后调控元件(WPRE)。WPRE通过促进转录物的核输出和/或通过增加新生转录物的聚腺苷酸化效率而在转录水平上发挥作用，从而增加细胞中的总mRNA量。将WPRE添加到LV中导致体外和体内由几种不同的启动子造成的转基因表达的水平的显著改善。用于本文描述的方法和组合物中的LV可以包括cPPT序列和WPRE序列。载体还可包括允许从单个启动子表达多种多肽的IRES序列。

除了IRES序列之外，允许表达多种多肽的其他元件也是有用的。用于本文描述的方法和组合物中的载体可包括允许表达多于一种多肽的多个启动子。用于本文描述的方法和组合物中的载体可包括允许表达多于一种多肽的蛋白质切割位点。允许表达多于一种多肽的蛋白质切割位点的实例在Klump等人,Gene Ther.；8:811(2001)，Osborn等人,Molecular Therapy 12:569(2005)，Szymczak和Vignali,Expert Opin Biol Ther.5:627(2005)，和Szymczak等人,Nat Biotechnol.22:589(2004)中有所描述，这些文献涉及允许表达多于一种多肽的蛋白质切割位点的公开内容以引用的方式并入本文。对本领域的技术人员来说很容易理解的是，允许未来鉴定的多种多肽表达的其他元件是有用的，并且可以用于适合与本文所述的组合物和方法一起使用的载体中。

用于本文描述的方法和组合物中的载体可以是临床级载体。

治疗方法

可以使用本公开的组合物和方法治疗的示例性疾病

可以使用本公开的组合物和方法引入靶细胞并最终递送给患者(例如，通过将靶细胞施用于患者)的转基因包括编码治疗性蛋白质的那些。转基因的受体(例如，被转导以表达转基因的细胞的受体)可以患有以编码蛋白质缺乏为特征的疾病。例如，可以根据本公开的组合物和方法在靶细胞中表达并递送给患者的转基因包括编码β-珠蛋白的转基因，该转基因对于治疗患有β-地中海贫血的患者特别有用。人β-珠蛋白cDNA和蛋白质的示例性核酸和氨基酸序列如下所示。

示例性野生型人β-珠蛋白cDNA序列：

ATGGTGCATCTGACCCCGGAAGAAAAAAGCGCGGTGACCGCGCTGTGGGGCAAAGTGAACGTGGATGAAGTGGGCGGCGAAGCGCTGGGCCGCCTGCTGGTGGTGTATCCGTGGACCCAGCGCTTTTTTGAAAGCTTTGGCGATCTGAGCACCCCGGATGCGGTGATGGGCAACCCGAAAGTGAAAGCGCATGGCAAAAAAGTGCTGGGCGCGTTTAGCGATGGCCTGGCGCATCTGGATAACCTGAAAGGCACCTTTGCGACCCTGAGCGAACTGCATTGCGATAAACTGCATGTGGATCCGGAAAACTTTCGCCTGCTGGGCAACGTGCTGGTGTGCGTGCTGGCGCATCATTTTGGCAAAGAATTTACCCCGCCGGTGCAGGCGGCGTATCAGAAAGTGGTGGCGGGCGTGGCGAACGCGCTGGCGCATAAATATCAT

(SEQ ID NO:1)

示例性野生型人β-珠蛋白氨基酸序列：

MVHLTPEEKSAVTALWGKVNVDEVGGEALGRLLVVYPWTQRFFESFGDLSTPDAVMGNPKVKAHGKKVLGAFSDGLAHLDNLKGTFATLSELHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLAHHFGKEFTPPVQAAYQKVVAGVANALAHKYH(SEQ ID NO:2)

可以与本公开的组合物和方法结合使用的转基因的其他实例包括激素和生长和分化因子，包括但不限于胰岛素、胰高血糖素、生长激素(GH)、甲状旁腺激素(PTH)、降钙素、生长激素释放因子(GRF)、促甲状腺激素(TSH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、催乳素、褪黑激素、加压素、β-内啡肽、甲硫氨酸脑啡肽、亮氨酸脑啡肽、催乳素释放因子、催乳素抑制因子、促肾上腺皮质激素释放激素、促甲状腺激素释放激素(TRH)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、绒毛膜促性腺激素(CG)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素、血管抑制素、内皮抑素、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、促红细胞生成素(EPO)、结缔组织生长因子(CTGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、bFGF2、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGFα)、血小板源性生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子I和II(IGF-I和IGF-II)、包含TGFβ的转化生长因子β(TGFβ)超家族中的任一者、活化素、抑制素或任何骨形态发生蛋白(BMP)BMP 1 15、调蛋白/神经调节蛋白/ARIA/神经分化因子(NDF)家族生长因子中的任一者、神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子NT-3、NT-4/5和NT-6、睫状神经营养因子(CNTF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经秩蛋白(neurtuin)、persephin、集聚蛋白、信号素/脑衰蛋白家族中的任一者、神经生长因子-1和神经生长因子-2、肝细胞生长因子(HGF)、肝配蛋白、头发生素、音猬因子和酪氨酸羟化酶。

可以与本公开的组合物和方法结合使用的转基因的其他实例包括编码调节免疫系统的蛋白质的那些，所述蛋白质包括但不限于细胞因子和淋巴因子，诸如血小板生成素(TPO)、白介素(IL)IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16和IL-17、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、白血病抑制因子(LIF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、单核细胞集落刺激因子(M-CSF)、Fas配体、肿瘤坏死因子α和β(TNFα和TNFβ)、干扰素(IFN)IFN-α、IFN-β和IFN-γ、干细胞因子、flk-2/flt3配体。本公开还包括编码由免疫系统产生的蛋白质产物的转基因。这些包括但不限于免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、IgD和IgE、嵌合免疫球蛋白、人源化抗体、单链抗体、T细胞受体、嵌合T细胞受体、单链T细胞受体、I类和II类MHC分子，以及工程化的MHC分子(包括单链MHC分子)。有用的基因产物还包括补体调节蛋白，诸如膜辅因子蛋白(MCP)、衰变加速因子(DAF)、CR1、CR2和CD59。

合适的转基因的其他实例包括编码激素、生长因子、细胞因子、淋巴因子、调节蛋白和免疫系统蛋白的受体中的任一者的那些。此类受体的实例包括flt-1、flk-1、TIE-2；trk家族受体，诸如TrkA、MuSK、Eph、PDGF受体、EGF受体、HER2、胰岛素受体、IGF-1受体、FGF家族受体、TGFβ受体、白介素受体、干扰素受体、血清素受体、α-肾上腺素能受体、β-肾上腺素能受体、GDNF受体、p75神经营养因子受体等。另外的实例是编码细胞外基质蛋白的转基因，诸如整合素、跨膜结合蛋白的反受体，诸如细胞间粘附分子(ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3和ICAM-4)、血管细胞粘附分子(VCAM)和选择素(E-选择素、P-选择素和L-选择素)。本发明包括胆固醇调节受体，包括LDL受体、HDL受体、VLDL受体和清道夫受体。另外的实例是编码这些受体的载脂蛋白配体的转基因，包括ApoAI、ApoAIV和ApoE。其他转基因包括编码以下的那些转基因：抗微生物肽，诸如防御素和maginin，转录因子，诸如jun、fos、max、mad，血清响应因子(SRF)，AP-1，AP-2，myb，MRG1，CREM，Alx4，FREAC1，NF-κB，亮氨酸拉链家族成员，C₂H₄锌指蛋白，包括Zif268、EGR1、EGR2、C6锌指蛋白，包括糖皮质激素和雌激素受体，POU结构域蛋白，例如Pit1，同源结构域蛋白，包括HOX-1、基本螺旋-环-螺旋蛋白，包括myc、MyoD和肌细胞生成素，含有ETS-box的蛋白，TFE3，E2F，ATF1，ATF2，ATF3，ATF4，ZF5，NFAT，CREB，HNF-4，C/EBP，SP1，CCAAT盒结合蛋白，干扰素调节因子1(IRF-1)，维尔姆斯肿瘤蛋白，ETS结合蛋白，STAT，GATA-box结合蛋白，例如GATA-3，以及有翼螺旋蛋白的叉头家族。

其他有用的转基因包括编码以下的那些转基因：氨基甲酰合成酶I、鸟氨酸转氨甲酰酶、精氨琥珀酸合成酶、精氨琥珀酸裂合酶、精氨酸酶、延胡索酰乙酰乙酸水解酶、苯丙氨酸羟化酶、α-1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、胆色素原脱氨酶、因子VII、因子VIII、因子IX、因子II、因子V、因子X、因子XII、因子XI、血管性血友病因子、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和还原酶、血红素加氧酶、血管紧张素转化酶、内皮素-1、心房利钠肽、尿激酶原、尿激酶、纤溶酶原活化剂、肝素辅因子II、活化蛋白C(因子V莱顿)、蛋白C、抗凝血酶、胱硫醚β-合酶、支链酮酸脱羧酶、白蛋白、异戊酰CoA脱氢酶、丙酰CoA羧化酶、甲基丙二酰CoA变位酶、戊二酰CoA脱氢酶、胰岛素、β-葡萄糖苷酶、丙酮酸羧化酶、肝磷酸化酶、磷酸化酶激酶、甘氨酸脱羧酶(也称为P蛋白)、H蛋白、T蛋白、门克斯病蛋白、肿瘤抑制因子(例如，p53)、囊性纤维化跨膜调节因子(CFTR)、威尔逊病基因PWD的产物、Cu/Zn超氧化物歧化酶、芳香族氨基酸脱羧酶、酪氨酸羟化酶、乙酰胆碱合成酶、激素原转化酶、蛋白酶抑制剂、乳糖酶、脂肪酶、胰蛋白酶、胃肠道酶(包括胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶)、腺苷脱氨酶、α1抗胰蛋白酶、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)、GLUT-1、GLUT-2、海藻糖磷酸合酶、己糖激酶I、II和III、葡萄糖激酶、单独的链或类型的胶原蛋白中的任何一者或多者、弹性蛋白、纤连蛋白、血小板反应蛋白、玻连蛋白和腱生蛋白、以及自杀基因(诸如胸苷激酶和胞嘧啶脱氨酶)。其他有用的蛋白质包括参与溶酶体贮积症的那些，包括酸性β-葡萄糖苷酶、α-半乳糖苷酶a、α-1-艾杜糖苷酸酶、艾杜糖酸硫酸酯酶、溶酶体酸性α-葡萄糖苷酶、鞘磷脂酶、己糖胺酶A、己糖苷酶A和B、芳基硫酸酯酶A、酸性脂肪酶、酸性神经酰胺酶、半乳糖神经酰胺酶、α-岩藻糖苷酶、α-甘露糖苷贮积症、β-甘露糖苷贮积症、天冬氨酸氨基葡萄糖苷酶、神经氨酸酶、半乳糖神经酰胺酶、乙酰肝素-N-硫酸酯酶、N-乙酰-α-氨基葡萄糖苷酶、乙酰-CoA:α-氨基葡糖苷N-乙胺转移酶、N-乙酰葡萄糖胺-6-硫酸硫酸酯酶、N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸硫酸酯酶、芳基硫酸酯酶B、β-葡糖醛酸糖苷酶和氨基己糖苷酶A和B。

其他有用的转基因包括编码非天然存在的多肽的那些，所述非天然存在的多肽诸如嵌合或杂合多肽或具有包含插入、缺失或氨基酸置换的非天然存在的氨基酸序列的多肽。例如，单链工程化免疫球蛋白可以对某些免疫功能低下的患者有用。其他有用的蛋白质包括缺乏跨膜和胞质结构域的截短受体。这些截短受体可以用于通过与它们结合而拮抗它们各自配体的功能，而不伴随受体的信号传导。其他类型的非天然存在的基因序列包括正义和反义分子以及催化核酸，诸如核酶，它们可以用于调节基因的表达。

可以在靶细胞中表达的示例性转基因包括编码下表3中列出的蛋白质产物的那些，所述靶细胞随后可以施用于患者以治疗以编码产物的缺陷或功能障碍为特征的疾病。

表3.与基因缺陷或功能障碍相关的示例性病症

供体细胞的选择

在一些实施方案中，接受治疗的受试者是提供细胞(例如，多能细胞，诸如CD34+HSC或HPC)的供体，这些细胞随后被修饰以在重新施用于患者之前表达本公开的一种或多种治疗性蛋白质。在这种情况下，提取的细胞(例如，CD34+HSC或HPC)可以在例如编码本公开的一种或多种治疗性蛋白质的转基因掺入和/或具有有害突变的等位基因变体断裂之后重新灌注到受试者，以使得细胞随后可以归巢到造血组织并建立生产性造血作用，从而恢复患者体内转基因的表达。在接受治疗的受试者也充当细胞供体的情况下，移植的细胞(例如，HSC或HPC)不太可能发生移植排斥。这来源于这样一个事实，即注入的细胞来自患者并表达与患者表达相同的HLA I类和II类抗原。或者，受试者和供体可以是不同的。在一些实施方案中，受试者和供体是相关的，并且可以例如是HLA匹配的。如本文所述，HLA匹配的供体-受体对具有降低的移植排斥风险，因为移植受体内的内源性T细胞和NK细胞不太可能将传入的造血干细胞或祖细胞移植物识别为外源的，因此较少可能对移植物产生免疫响应。示例性HLA匹配的供体-受体对是遗传相关的供体和受体，诸如家族供体-受体对(例如，同胞供体-受体对)。在一些实施方案中，受试者和供体是HLA错配的，这发生在供体和受体之间至少一个HLA抗原，特别是HLA-A、HLA-B和HLA-DR错配时。例如，为了减少移植排斥的可能性，供体和受体之间可以匹配一种单倍型，而另一种可以是错配的。

药物组合物和给药

在将共同表达本公开的一种或多种治疗性蛋白质的细胞群施用于受试者的情况下，所施用的细胞数量可以取决于例如所需蛋白质的表达水平、患者、药物制剂方法、施用方法(例如施用时间和施用通路)、患者的年龄、体重、性别、所治疗疾病的严重度，以及患者是否已接受消融内源性多能细胞(例如，内源性CD34+细胞、造血干细胞或祖细胞、或小胶质细胞等)的剂。所施用的细胞数可以是例如约1×10⁴个细胞/kg至约1×10¹⁴个细胞/kg或更多。细胞可以以未分化状态施用，或者在部分或完全分化为靶细胞类型之后施用。可以以任何合适的剂型施用一定数量的多能细胞。

实施例

提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供如何使用、制备和评估本文所述的组合物和方法的描述，并且这些实施例仅旨在作为本公开的示例而不旨在限制发明人认为是他们的公开的范围。

实施例1.二嵌段共聚物的合成

通过活性阴离子聚合反应来制备聚(环氧乙烷-b-环氧丙烷)二嵌段共聚物。反应方案如下所示：

将阴离子嵌段的等分试样终止并且通过尺寸排阻色谱法(SEC)分析以获得第一嵌段的分子量。第二嵌段的分子量由质子NMR光谱通过比较约3.6ppm的环氧乙烷质子的峰面积与约1.08ppm的环氧丙烷质子的峰面积来计算。最终二嵌段共聚物的多分散性通过SEC来获得。聚(环氧乙烷-b-环氧丙烷)可溶于氯仿、THF、甲醇和乙醇。聚合物从己烷和醚中沉淀出来。

实施例2.二嵌段共聚物转导

在二嵌段聚合物化合物(DBP1-6)的存在下，用慢病毒载体转导外周动员血CD34⁺干细胞(仅载体，感染复数(MOI)10-20)。DBP化合物对细胞存活力的作用(在转导后1天测定；图1)和转导效率(相对于仅用载体处理的细胞，以通过添加DBP诱导的转导细胞的百分比的倍数变化表示；图2A-2F)在转导后12-14天确定。DBP对每个细胞的整合载体拷贝数(VCN)的作用通过在转导后12天从细胞培养物收获的基因组DNA中的整合转基因序列的液滴数字PCR检测来确定(图3)。转导细胞的百分比通过转基因表达的流式细胞术检测来评估(图4)。确定DBP化合物与各种转导增强子元件组合对细胞存活力(图5)和转导效率(图6)的作用。

值得注意的是，据发现，二嵌段共聚物在一系列PEO和PPO组合物中实现了CD34⁺干细胞的转导效率提高(图7和8)。还发现，二嵌段共聚物与RetroNectin相容(图9)。出乎意料的是，还发现，二嵌段共聚物相对于三嵌段共聚物，特别是泊洛沙姆338，可以引起转导效率提高(图10)。

其他实施方案

在不偏离本公开的范围和精神的情况下，所述公开的各种修改和变化对本领域技术人员将是显而易见的。尽管已结合具体实施方案对本公开进行了描述，但是应当理解所要求保护的本公开不应当不适当地限定于此类具体实施方案。实际上，所描述的用于执行本公开的方式的各种修改对于本领域的技术人员是显而易见的，且旨在包含在本公开的范围内。

其他实施方案在权利要求范围内。

Claims

1.一种转导真核细胞以表达转基因的方法，所述方法包括使所述细胞与(i)编码所述转基因的病毒载体和(ii)包含聚氧乙烯(PEO)亚基和聚氧丙烯(PPO)亚基的二嵌段共聚物接触。

2.一种在真核细胞中表达转基因的方法，所述方法包括使所述细胞与(i)编码所述转基因的病毒载体和(ii)包含PEO亚基和PPO亚基的二嵌段共聚物接触。

3.一种促进编码转基因的病毒载体迁移至真核细胞的细胞核的方法，所述方法包括使所述细胞与(i)所述病毒载体和(ii)包含PEO亚基和PPO亚基的二嵌段共聚物接触。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述二嵌段共聚物包含以下结构：

X₁—[PEO]_m—L—[PPO]_n—X₂

其中m和n是整数；

L不存在或者是化学接头；并且

X₁和X₂各自独立地表示任选存在的化学取代基。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述二嵌段共聚物包含以下结构：

X₁—[PEO]_m—[PPO]_n—X₂

其中m和n是整数；并且

X₁和X₂各自独立地表示任选存在的化学取代基。

6.如权利要求4或5所述的方法，其中X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、任选取代的烷氧基、任选取代的酰基氧基、任选取代的氨基、任选取代的烷基氨基、任选取代的酰氨基、卤素、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_2-6炔基、任选取代的酰基、任选取代的烷氧基羰基、氧代基、硫代羰基、任选取代的羧基或脲基。

7.如权利要求6所述的方法，其中X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_1-6烷氧基或任选取代的C_1-6烷基氨基。

8.如权利要求7所述的方法，其中X₁和X₂各自独立地不存在或者是H、OH、H₂N、H₃CO、乙基-O、正丁基-O、叔丁基-O、正丁基或叔丁基。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述二嵌段共聚物的PEO亚基具有的数均分子量(Mn)为约5,000g/mol至约25,000g/mol。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述二嵌段共聚物的PEO亚基具有的Mn为约9,000g/mol至约19,000g/mol。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述二嵌段共聚物的PEO亚基具有的Mn为约9,000g/mol、9,500g/mol、13,800g/mol、15,500g/mol、18,000g/mol、或19,000g/mol。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述二嵌段共聚物的PPO亚基具有的Mn为约2,000g/mol至约10,000g/mol。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述二嵌段共聚物的PPO亚基具有的Mn为约3,500g/mol至约5,500g/mol。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述二嵌段共聚物的PPO亚基具有的Mn为约3,500g/mol或5,500g/mol。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于40质量％。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于50质量％。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于60质量％。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的平均环氧乙烷含量大于70质量％。

19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的Mn大于约8,000g/mol。

20.如权利要求19所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的Mn大于约10,000g/mol。

21.如权利要求19或20中任一项所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的Mn为约10,000g/mol至约30,000g/mol。

22.如权利要求21所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的Mn为约12,000g/mol至约25,000g/mol。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的Mn为约12,500g/mol至约23,500g/mol。

24.如权利要求23所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的Mn为约12,500g/mol、13,000g/mol、17,300g/mol、19,000g/mol、22,500g/mol、或23,500g/mol。

25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的多分散指数(Mw/Mn)为约1至约1.2。

26.如权利要求25所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的多分散指数为约1.06至约1.17。

27.如权利要求26所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有的多分散指数为约1.08、1.10、1.11、1.13、或1.17。

28.如权利要求4-27中任一项所述的方法，其中m是约100至约500。

29.如权利要求28所述的方法，其中m是约200至约450。

30.如权利要求29所述的方法，其中m是约162至约486、约159至约477、约108至约324、约103至约309、约148至约444、约171至约513、约142至约426、约100至约300、约113至约339、约109至约327、约115至约345、或约120至约360。

31.如权利要求30所述的方法，其中m是约200、205、216、217、225、230、240、284、314、318、323、352、409、或432。

32.如权利要求4-31中任一项所述的方法，其中n是约10至约200。

33.如权利要求32所述的方法，其中n是约40至约100。

34.如权利要求33所述的方法，其中n是约43至约129、约27至约81、约29至约87、约28至约84、约30至约90、约33至约99、或约28至约84。

35.如权利要求34所述的方法，其中n是约50、53、55、57、60、65、70、86、或95。

36.如权利要求4-35中任一项所述的方法，其中m:n的比率为约1至约12。

37.如权利要求36所述的方法，其中m:n的比率为约2至约8。

38.如权利要求37所述的方法，其中m:n的比率为约2至约7.2。

39.如权利要求38所述的方法，其中m:n的比率为约2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、或7.2。

40.如权利要求4-39中任一项所述的方法，其中所述二嵌段共聚物具有选自以下的结构：

[PEO]₃₂₃—[PPO]₈₆—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₂₃—[PPO]₈₆—O-正丁基、

[PEO]₃₁₈—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₁₈—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₅₃—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₅₃—O-正丁基、

[PEO]₂₉₅—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₉₅—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₃₄₁—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₄₁—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₂₈₄—[PPO]₅₇—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₈₄—[PPO]₅₇—O-正丁基、

[PEO]₂₀₀—[PPO]₅₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₀—[PPO]₅₅—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₁₇—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₇—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₃₀—[PPO]₆₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₃₀—[PPO]₆₅—O-正丁基、

[PEO]₂₄₀—[PPO]₅₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₄₀—[PPO]₅₅—O-正丁基、

[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₀₅—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₁₄—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₃₅₂—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₄₀₉—[PPO]₉₅—O-正丁基、

[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₄₃₂—[PPO]₆₀—O-正丁基、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH、

[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—正丁基、

HO—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₅₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₆₀—OH、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₇₀—O-正丁基、

HOCH₂CH₂—[PEO]₂₁₆—[PPO]₇₀—OH、

41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

42.如权利要求41所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是人类细胞。

43.如权利要求1-42中任一项所述的方法，其中所述细胞是多能细胞。

44.如权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述细胞是CD34+细胞。

45.如权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述细胞是胚胎干细胞。

46.如权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述细胞是诱导性多能干细胞。

47.如权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述细胞是造血干细胞(HSC)或造血祖细胞(HPC)。

48.如权利要求1-47中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述细胞与降低蛋白激酶C(PKC)的活性和/或表达的物质接触。

49.如权利要求48所述的方法，其中所述降低PKC的活性和/或表达的物质活化Akt信号转导。

50.如权利要求48或49所述的方法，其中所述降低PKC的活性和/或表达的物质是PKC抑制剂或降低编码PKC的核糖核酸(RNA)转录物的翻译的剂。

51.如权利要求50的方法，其中所述降低PKC的活性和/或表达的物质是PKC抑制剂。

52.如权利要求50所述的方法，其中所述降低PKC的活性和/或表达的物质是降低编码PKC的RNA转录物的翻译的剂。

53.如权利要求52所述的方法，其中所述剂包括核酸。

54.如权利要求53所述的方法，其中所述核酸包括干扰RNA。

55.如权利要求54所述的方法，其中所述干扰RNA是短干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)或微RNA(miRNA)。

56.如权利要求53所述的方法，其中所述核酸包括反义寡核苷酸。

57.如权利要求53-56中任一项所述的方法，其中所述核酸与编码PKC的内源性RNA转录物退火。

58.如权利要求57所述的方法，其中所述核酸与编码PKC的内源性RNA转录物至少85％互补。

59.如权利要求58所述的方法，其中所述核酸与编码PKC的内源性RNA转录物至少90％、95％、96％、97％、98％、99％互补、或100％互补。

60.如权利要求51所述的方法，其中所述PKC抑制剂是以式(I)表示的化合物

R_c是O、NR_d或S；

表示任选存在的键；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

61.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(II)表示

R_c是O或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

62.如权利要求61所述的方法，其中所述化合物是以式(III)表示

其中R₁是H、OH、氧代基或硫代羰基；

环A是任选取代的和任选稠合的杂环烷基环；

R_c是O或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

63.如权利要求62所述的方法，其中所述化合物是以式(IV)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

环B是任选取代的杂芳基或杂环烷基环；

R_c是O或S；

W是O、NH或S；

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

64.如权利要求63所述的方法，其中所述化合物是以式(V)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

R_c是O或S；

W是O、NH或S；

p是0或1；

或其盐。

65.如权利要求64所述的方法，其中所述化合物是以式(VI)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

s是0-8的整数；

或其盐。

66.如权利要求65所述的方法，其中所述化合物是以式(VII)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

R₂是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；并且

或其盐。

67.如权利要求66所述的方法，其中所述化合物是以式(VIII)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

R₂是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；并且

或其盐。

68.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(IX)表示

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

69.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(1)表示

或其盐。

70.如权利要求69所述的方法，其中所述化合物是以式(2)表示的星形孢菌素，即(2S,3R,4R,6R)-3-甲氧基-2-甲基-4-(甲基氨基)-29-氧杂-1,7,17-三氮杂八环[12.12.2.12,6.07,28.08,13.015,19.020,27.021,26]二十九-8,10,12,14,19,21,23,25,27-壬-16-酮

或其盐。

71.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(X)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；

t是0-6的整数；

或其盐。

72.如权利要求71所述的方法，其中所述化合物是以式(XI)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；并且

R₄是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；

或其盐。

73.如权利要求72所述的方法，其中所述化合物是以式(XII)表示

其中R₁是H、OH或氧代基；并且

R₄是H、OH、任选取代的烷氧基或任选取代的酰基氧基；

或其盐。

74.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(XIII)表示

n是0-4的整数；并且

m是0-4的整数；

或其盐。

75.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(3)表示

或其盐。

76.如权利要求75所述的方法，其中所述化合物是以式(4)表示

或其盐。

77.如权利要求73所述的方法，其中所述化合物是以式(128)表示

或其盐。

78.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物选自：

或其盐。

79.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(XIV)表示

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

80.如权利要求79所述的方法，其中所述化合物是以式(XV)表示

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

81.如权利要求80所述的方法，其中所述化合物选自：

或其盐。

82.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(XVI)表示

或者其盐或季铵化变体。

83.如权利要求82所述的方法，其中所述化合物是以式(XVII)表示

或者其盐或季铵化变体。

84.如权利要求83所述的方法，其中所述化合物选自：

或其盐。

85.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(XVIII)表示

其中R是H、OH、C_1-6烷氧基或氧代基；并且

R₂是

R₅是H或C_1-6烷基；

R₆是游离的羟基或被脂族C_2-22羧酸酯化的羟基，或者是C_1-6烷氧基羰基氧基、C_1-6烷基磺酰基氧基、游离的氨基或被脂族C_2-22羧酸酰化的氨基、C_1-6烷氧基羰基氨基、叠氮基、苯甲酰氧基、苄氧基羰基氧基、苯甲酰氨基、苄氧基羰基氨基或苯基磺酰基氧基，它们中的每个在所述苯基部分中任选地被卤素、羟基、三氟甲基、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基取代；并且

R₇是游离的OH或被脂族C_2-22羧酸酯化的OH、C_1-6烷氧基羰基氧基、C_1-6烷基磺酰基氧基、叠氮基、游离的氨基或被脂族C_2-22羧酸酰化的氨基、C_1-6烷基氨基、二-C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基羰基氨基、氨基甲酰氨基、苯甲酰氧基、苄氧基羰基氧基、苯基磺酰基氧基、苯甲酰氨基、苄基氨基或苄氧基羰基氨基，它们中的每个在所述苯基部分中任选地被卤素、羟基、三氟甲基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基或C_1-6烷氧基羰基取代；

或其盐。

86.如权利要求85所述的方法，其中所述化合物是以式(XIX)表示

其中R是H、OH、C_1-6烷氧基或氧代基；并且

R₂是

R₅是H或C_1-6烷基；

或其盐。

87.如权利要求86所述的方法，其中所述化合物选自N-(1-α-O-苄基-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(2-N-乙酰-胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-0-甲磺酰-1-α-O-苄基-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-叠氮基-1-α-O-苄基-2-N-乙酰-6-脱氧胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-氨基-1-α-O-苄基-2-N-乙酰-6-脱氧胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-氨基-6-脱氧-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(6-O-甲磺酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(2-N-乙酰-脱甲基胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-α-O-苄基-2-N-乙酰同胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-α-O-苄基-2-N-乙酰-L-同胞壁酰基)星形孢菌素、N-(2-N-乙酰-L-同胞壁酰基)星形孢菌素的1-α-异头物、N-(1-α-O-苄基-4,6-O-二乙酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-α-O-苄基-4-O-乙酰-6-O-硬脂酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(4-O-乙酰-6-O-硬脂酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素的1-α-异头物、N-(4,6-O-二乙酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素的1-α-异头物、N-(1-α,4-O-二乙酰-6-O-硬脂酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-α,4,6-O-三乙酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-6-O-乙酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-6-O-甲磺酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-6-O-甲苯磺酰基-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、N-(1-脱氧-6-叠氮基-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素、和N-(1-脱氧-6-O-甲磺酰-2-N-乙酰胞壁酰基)星形孢菌素，或其盐。

88.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(XX)表示

其中Z₁是H或OH；

Z₂是H或OH；

R₁是H、卤素或任选取代的烷基；

R₂是H或卤素；

R是OH或任选取代的烷氧基；并且

或其盐。

89.如权利要求88所述的方法，其中所述化合物是以式(XXI)表示

其中Z₁是H或OH；

Z₂是H或OH；

R₁是H、卤素或任选取代的烷基；

R₂是H或卤素；

R是OH或任选取代的烷氧基；并且

或其盐。

90.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物以式(XXII)、(XXIII)、(XXIV)、或(XXV)表示

每个X独立地是O、OH和H，或一对氢原子；

每个n独立地是0-4的整数；并且

每个m独立地是0-4的整数；

或其盐。

91.如权利要求85所述的方法，其中所述化合物是以式(XXVI)或(XXVII)表示

每个X独立地是O、OH和H，或一对氢原子；

每个n独立地是0-4的整数；

每个m独立地是0-4的整数；

每个n’独立地是0-4的整数；并且

每个m’独立地是0-4的整数；

或其盐。

92.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物是以式(XXVIII)表示

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

93.如权利要求92所述的方法，其中所述化合物是以式(XXIX)表示

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

94.如权利要求93所述的方法，其中所述化合物是以式(XXX)表示

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

95.如权利要求94所述的方法，其中所述化合物是以式(XXXI)表示

其中R₁是H或任选取代的C_1-6烷基；并且

R₂是任选取代的C_1-6烷基；

或其盐。

96.如权利要求60所述的方法，其中所述化合物选自：

97.如权利要求1-96中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述细胞与组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂接触。

98.如权利要求97所述的方法，其中所述HDAC抑制剂选自：

99.如权利要求98所述的方法，其中所述HDAC抑制剂是

100.如权利要求1-99中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述细胞与糖原合酶激酶3(GSK3)抑制剂接触。

101.如权利要求100所述的方法，其中所述GSK3抑制剂选自由以下各项组成的组：6-溴靛红-3'-肟(BIO)、LiCl、Li₂CO₃、CHIR-99021和CHIR-98023。

102.如权利要求101所述的方法，其中所述GSK3抑制剂是CHIR-99021。

103.如权利要求101所述的方法，其中所述GSK3抑制剂是Li₂CO₃。

104.如权利要求1-103中任一项所述的方法，其中所述病毒载体选自由以下各项组成的组：逆转录病毒科家族病毒、腺相关病毒、腺病毒、细小病毒、冠状病毒、弹状病毒、副粘病毒、小RNA病毒、甲病毒、疱疹病毒、和痘病毒。

105.如权利要求104所述的方法，其中所述病毒载体是逆转录病毒科家族病毒载体。

106.如权利要求105所述的方法，其中所述逆转录病毒科家族病毒载体是慢病毒载体。

107.如权利要求106所述的方法，其中所述逆转录病毒科家族病毒载体是α逆转录病毒载体或γ逆转录病毒载体。

108.如权利要求104-107中任一项所述的方法，其中所述逆转录病毒科家族病毒载体包括中央多嘌呤区、土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件、5'-LTR、HIV信号序列、HIV Psi信号5'-剪接位点、δ-GAG元件、3'-剪接位点、和3'-自失活LTR。

109.如权利要求1-108中任一项所述的方法，其中所述病毒载体是假型病毒载体。

110.如权利要求109所述的方法，其中所述假型病毒载体包含一种或多种来自病毒的包膜蛋白，所述病毒选自：水泡性口膜炎病毒(VSV)、RD114病毒、鼠白血病病毒(MLV)、猫白血病病毒(FeLV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEE)、人泡沫病毒(HFV)、大眼梭鲈真皮肉瘤病毒(WDSV)、塞姆利基森林病毒(SFV)、狂犬病病毒、禽造白细胞组织增生病毒(ALV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、牛白血病病毒(BLV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)、辛诺柏病毒(SNV)、樱桃扭叶病毒(ChTLV)、猿猴T细胞白血病病毒(STLV)、梅森-辉瑞猴病毒(MPMV)、松鼠猴逆转录病毒(SMRV)、劳斯相关病毒(RAV)、藤浪肉瘤病毒(FuSV)、禽癌病毒(MH2)、禽脑脊髓炎病毒(AEV)、苜蓿花叶病病毒(AMV)、禽肉瘤病毒CT10和马传染性贫血病病毒(EIAV)。

111.如权利要求110所述的方法，其中所述假型病毒载体包含VSV-G包膜蛋白。

112.如权利要求1-111中任一项所述的方法，其中所述接触离体发生。

113.如权利要求112所述的方法，其中所述细胞在所述接触之前已经新鲜培养或已经冷冻保存。

114.如权利要求1-113中任一项所述的方法，其中所述细胞还与环孢菌素接触。

115.如权利要求114所述的方法，其中所述环孢菌素是环孢菌素A或环孢菌素H。

116.如权利要求115所述的方法，其中所述环孢菌素是环孢菌素H。

117.如权利要求1-116中任一项所述的方法，其中所述细胞还与前列腺素E受体信号传导的活化剂接触。

118.如权利要求117所述的方法，其中所述前列腺素E受体信号传导的活化剂是前列腺素E2。

119.如权利要求1-118中任一项所述的方法，其中所述细胞还与聚阳离子聚合物接触。

120.如权利要求119所述的方法，其中所述聚阳离子聚合物是聚凝胺、硫酸鱼精蛋白、聚乙烯亚胺或聚乙二醇/聚-L-赖氨酸嵌段共聚物。

121.如权利要求120所述的方法，其中所述聚阳离子聚合物是硫酸鱼精蛋白。

122.如权利要求1-121中任一项所述的方法，其中所述细胞在与所述病毒载体接触时通过离心来旋转。

123.如权利要求122所述的方法，其中所述细胞以约300xg至约1,200xg的向心力旋转。

124.如权利要求122或123所述的方法，其中所述细胞在约25℃的温度下旋转。

125.一种在受试者中表达转基因的方法，所述方法包括将根据如权利要求1-124中任一项所述的方法修饰的细胞群或其子代施用于所述受试者。

126.一种将经遗传修饰的细胞群递送给受试者的方法，所述方法包括将根据如权利要求1-124中任一项所述的方法修饰的细胞群或其子代施用于所述受试者。

127.一种将细胞疗法提供给有需要的受试者的方法，所述方法包括将根据如权利要求1-124中任一项所述的方法修饰的细胞群或其子代施用于所述受试者。

128.如权利要求125-127中任一项所述的方法，其中所述细胞对于所述受试者是同种异体的。

129.如权利要求128所述的方法，其中所述细胞与所述受试者HLA匹配。

130.如权利要求125-127中任一项所述的方法，其中所述细胞对于所述受试者是自体的。

131.如权利要求125-130中任一项所述的方法，其中在接触之前，前体细胞群从所述受试者或供体分离，并且其中所述前体细胞离体扩增，以产生将被施用于所述受试者的细胞群。

132.如权利要求131所述的方法，其中所述前体细胞是CD34+HSC，并且其中所述前体细胞在不丧失HSC功能潜力的情况下扩增。

133.如权利要求131或132所述的方法，其中在所述前体细胞从所述受试者或供体分离之前，给所述受试者或供体施用一种或多种多能细胞动员剂。

134.如权利要求125-133中任一项所述的方法，其中在将所述细胞群施用于所述受试者之前，通过将一种或多种调理剂施用于所述受试者来消融所述受试者中的内源性多能细胞群。

135.如权利要求125-133中任一项所述的方法，所述方法包括在将所述细胞群施用于所述受试者之前，通过将一种或多种调理剂施用于所述受试者来消融所述受试者中的内源性多能细胞群。

136.如权利要求134或135所述的方法，其中所述一种或多种调理剂是非清髓性调理剂。

137.如权利要求125-136中任一项所述的方法，其中在将所述细胞群施用于所述受试者后，所施用的细胞或其子代分化为一种或多种选自以下的细胞类型：巨核细胞、血小板细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成肌细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞。

138.如权利要求125-137中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

139.如权利要求138所述的方法，其中所述受试者是人类。

140.如权利要求125-139中任一项所述的方法，其中所述受试者已经被诊断为缺乏由所述转基因编码的内源性蛋白质。

141.如权利要求140所述的方法，其中所述受试者已经被诊断为患有表3中所列的疾病。

142.如权利要求140所述的方法，其中所述受试者已经被诊断为患有β地中海贫血。

143.如权利要求1-142中任一项所述的方法，其中所述转基因编码β-珠蛋白蛋白。

144.如权利要求143所述的方法，其中所述转基因包含与SEQ ID NO:1的核酸序列具有至少85％序列同一性的核酸。

145.如权利要求144所述的方法，其中所述转基因包含与SEQ ID NO:1的核酸序列具有至少90％序列同一性的核酸。

146.如权利要求145所述的方法，其中所述转基因包含与SEQ ID NO:1的核酸序列具有至少95％序列同一性的核酸。

147.如权利要求146所述的方法，其中所述转基因包含具有SEQ ID NO:1的核酸序列的核酸。

148.如权利要求143-147中任一项所述的方法，其中所述β-珠蛋白蛋白具有与SEQ IDNO:2的氨基酸序列至少85％同一的氨基酸序列。

149.如权利要求148所述的方法，其中所述β-珠蛋白蛋白具有与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列。

150.如权利要求149所述的方法，其中所述β-珠蛋白蛋白具有与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。

151.如权利要求150所述的方法，其中所述β-珠蛋白蛋白具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

152.一种组合物，所述组合物包含通过如权利要求1-124中任一项所述的方法形成的混合物。

153.一种细胞培养基，所述细胞培养基包含如权利要求152所述的组合物。

154.一种真核细胞群，所述真核细胞群已经根据如权利要求1-124中任一项所述的方法修饰。

155.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求154所述的真核细胞群，其中所述药物组合物还包含一种或多种赋形剂、稀释剂或载剂。

156.如权利要求155所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制用于施用于受试者。

157.如权利要求156所述的药物组合物，其中所述受试者是哺乳动物。

158.如权利要求157所述的药物组合物，其中所述受试者是人类。

159.如权利要求156-158中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制用于给所述受试者静脉内输注。

160.一种试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求152所述的组合物或如权利要求153所述的细胞培养基。

161.如权利要求160所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括包装插页，所述包装插页包括用于转导所述细胞的说明书。

162.一种试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求164所述的细胞群或如权利要求155-159中任一项所述的药物组合物。

163.如权利要求162所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括指导使用者根据如权利要求125-151中任一项所述的方法将所述细胞群施用于受试者的包装插页。