CN114748604B

CN114748604B - 一种用于骨髓损伤和/或抑制的复合物

Info

Publication number: CN114748604B
Application number: CN202210504220.2A
Authority: CN
Inventors: 林云锋; 张天旭; 蔡潇潇; 周蜜
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2022-05-10
Filing date: 2022-05-10
Publication date: 2023-04-07
Anticipated expiration: 2042-05-10
Also published as: CN114748604A

Abstract

本发明公开了一种治疗骨髓损伤和/或抑制的复合物，所述复合物是由DNA四面体与成骨多肽复合而成；所述DNA四面体是由序列如SEQ IDNO.1～4所述的单链DNA通过碱基互补配对自组装形成的四面体结构。本发明成骨生长肽‑DNA四面体框架纳米核酸复合物能显著提高骨髓基质细胞活性，促进骨髓基质细胞增殖和骨髓造血相关因子的分泌，缓解骨髓基质细胞的凋亡。本发明的多肽‑纳米核酸符合物生物安全性好，副作用小，相比于生长因子类药物，不会增加放化疗肿瘤复发的风险，用于骨髓抑制的预防及治疗，应用前景良好。

Description

一种用于骨髓损伤和/或抑制的复合物

技术领域

本发明具体涉及一种用于骨髓损伤和/或抑制的复合物。

背景技术

骨髓损伤及造血抑制是肿瘤化疗或放疗的主要并发症，可对造血系统造成严重损害，破坏骨髓微环境。大多数化疗药物靶向性较低，无法区分快速分裂的正常细胞，包括骨髓造血细胞、消化黏膜、皮肤、子宫内膜、卵巢等器官和组织。骨髓抑制可能导致随后的系统性问题，如感染、出血、贫血甚至多器官衰竭。尽管各种靶向药物已被广泛用于肿瘤靶向治疗，但传统的化疗药物如抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物性抗癌药仍是首选的抗癌药物，其中大部分可引起不同程度的骨髓抑制。

核酸纳米材料作为新型生物材料在组织工程和药物输送中得到了广泛的探索。单链 DNA 可以特别设计和自组装成具有特定空间结构的纳米框架。自2006年首次报道以来，DNA折纸因其智能自组装、优异的生物相容性和结构可设计性而在生物医学领域显示出巨大的潜力。由于特定的空间结构，包括纳米管、四面体等纳米结构的DNA纳米结构已被应用于药物递送、生物传感器、水凝胶等。在这些纳米结构中，四面体骨架核酸（tFNAs）纳米结构因其易于功能化、优异的细胞进入和组织穿透能力而被广泛用作有前景的药物载体。同时,tFNAs 也被报道具有促进细胞增殖和缓解炎症进展的作用, 在再生医学中具有巨大的潜力。然而，由于复杂的生物环境，DNA纳米材料的局限性在于体内给药后的结构稳定性。此外，普遍存在的纳米粒子-蛋白质相互作用使纳米粒子 (NPs) 的体内命运更加不可预测。血清中丰富的蛋白质和多肽可能会覆盖 NPs，从而改变基于 NPs 的药物递送系统的行为。

成骨生长肽（OGP）作为一种同源多肽，从骨髓中分离而来，对骨髓损伤有积极的反应。 OGP除促进成骨和骨形成外，还可以通过调节骨髓微环境和上调造血刺激因子来促进造血反应。OGP能明显改善整个造血功能，无免疫原性和细胞毒性。更为重要的是对其各类造血细胞都有刺激作用，通过改善骨髓造血微环境，上调成骨细胞和其他骨髓细胞系产生的造血刺激因子，非选择性地刺激白细胞、红细胞和血小板的增殖，并增加骨髓细胞数, 有广泛的生物医学应用前景，但其代谢快，生物利用度较低。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种治疗骨髓损伤和/或抑制的复合物，所述复合物是由DNA四面体与成骨多肽复合而成；

所述DNA四面体是由序列如SEQ ID NO.1～4所述的单链DNA通过碱基互补配对自组装形成的四面体结构。

进一步地，所述DNA四面体和成骨多肽的摩尔比为1:20～1:200。

更进一步地，所述DNA四面体和成骨多肽的摩尔比为1:100。

进一步地，所述成骨多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明还提供了一种前述的复合物在制备预防和/或治疗骨髓损伤的药物中的用途。

本发明还提供了一种前述的复合物在制备预防和/或治疗骨髓抑制的药物中的用途。

进一步地，所述药物是促进骨髓造血能力恢复的药物。

进一步地，所述药物是促进骨髓基质细胞增殖的药物。

进一步地，所述药物是提高骨髓基质细胞活性的药物。

进一步地，所述药物是缓解骨髓基质细胞凋亡的药物。

本发明最后提供了一种前述复合物的方法，它包括如下步骤：

按配比取成骨多肽和DNA四面体，20~30℃孵育4~8小时，去除未结合成骨多肽，即得。

本发明提供了一种用于骨髓损伤和/或抑制的复合物，其通过特定的核苷酸序列制得的DNA四面体框架纳米核酸与成骨生长肽在特定浓度条件下复合，在预防和/或治疗骨髓损伤及造血抑制方面效果显著，经细胞实验和动物实验证明，本发明成骨生长肽-DNA四面体框架纳米核酸复合物能显著提高骨髓基质细胞活性，促进骨髓基质细胞增殖，缓解骨髓基质细胞的凋亡。本发明的多肽-纳米核酸符合物生物安全性好，副作用小，相比于生长因子类药物，不会增加放化疗肿瘤复发的风险，用于骨髓抑制的预防及治疗，应用前景良好。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1 tFNAs的合成鉴定（a:PAGE凝胶电泳；b:原子力显微镜AFM表征）

图2 不同OGP/tFNAs摩尔浓度比的包封率及载药量

图3 OGP-tFNAs的合成鉴定（a: PAGE凝胶电泳；b:原子力显微镜AFM表征）

图4 tFNAs 及OGP-tFNAs的粒径电位（a:单纯tFNAs电位；b:OGP-tFNAs电位；c:单纯tFNAs粒径；d: OGP-tFNAs粒径）

图5 OGP-tFNAs细胞摄取的流式及荧光检测（a: 6h细胞摄取流式检测；b: 12h细胞摄取流式检测；c:OGP细胞摄取荧光检测,d:OGP细胞摄取荧光检测；e: OGP及tFNAs胞内分布荧光检测）

图6 tFNAs, OGP及OGP-tFNAs对OP9细胞活性的影响（a:不同浓度tFNAs对OP9细胞活性的影响；b. OGP及OGP-tFNA对OP9细胞活性的影响）

图7 OGP-tFNAs对化疗药物5-FU导致的OP9细胞增殖抑制的减轻作用（a:不同浓度5-FU对OP9细胞的抑制作用；b:细胞周期流式检测；c:细胞增殖相关蛋白Ki67表达检测）

图8 OGP-tFNAs对DNA损伤的减轻作用，减缓骨髓基质细胞的衰老（a:DNA损伤标志物γ-H2AX表达免疫荧光；b:β-半乳糖苷酶染色）

图9 OGP-tFNA减轻化疗药物5-FU导致的骨髓基质细胞凋亡（a:细胞凋亡流式检测；b:凋亡相关蛋白WB检测；c:Bcl-2免疫荧光检测；d:Bax免疫荧光检测；e: Casepase-3免疫荧光检测）

图10 10OGP-tFNAs保护骨髓基质细胞表达及分泌造血相关细胞因子SCF/SDF-1（a:SCF免疫荧光及WB检测；b: SDF-1免疫荧光及WB检测）

图11 OGP-tFNAs对化疗药物所致骨髓及造血损伤的保护作用（a:股骨及胸骨HE染色；b:股骨SCF/SDF-1免疫组化染色; c:脾脏HE染色；d:肾脏HE染色）

具体实施方式

实施例1、本发明复合物的制备

1）四面体DNA纳米框架核酸tFNAs合成及鉴定

将四条DNA单链（S1、S2、S3、S4）溶解于TM Buffer（10 mM Tris-HCl, 50 mMMgCl2, pH = 8.0）中，四条DNA单链的终浓度为1000nM，充分混合，迅速加热至95℃保持10分钟，之后迅速降温至4℃并维持20分钟以上，在上述温度调控下，四条单链根据碱基互补配对原则在体系内进行自组装过程，即可得到DNA四面体。

四条单链的序列(5′→3′)如下：

S1：ATTTATCACCCGCCATAGTAGACGTATCACCAGGCAGTTGAGACGAACATTCCTAAGTCTGAA（SEQ ID NO.1）

S2 ： ACATGCGAGGGTCCAATACCGACGATTACAGCTTGCTACACGATTCAGACTTAGGAATGTTCG（SEQ ID NO.2）

S3：ACTACTATGGCGGGTGATAAAACGTGTAGCAAGCTGTAATCGACGGGAAGAGCATGCCCATCC（SEQ ID NO.3）

S4 ： ACGGTATTGGACCCTCGCATGACTCAACTGCCTGGTGATACGAGGATGGGCATGCTCTTCCCG（SEQ ID NO.4）

通过PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和结果显示tFNAs条带较为单一，表示tFNAs产物较为纯净。合成后的DNA四面体，如图1a,电泳可见第二泳道为S1，第三泳道为S2，第三泳道为S3，第四泳道为S4，第七泳道为tFNAs。为了进一步证明四面体纳米结构的成功合成，通过原子力显微镜（AFM）观察产物形态，镜下可见三角形的颗粒，分布较为均匀(图1b)。

）成骨生长肽-DNA四面体框架核酸（OGP-tFNAs）的合成及鉴定

将上述合成的DNA四面体与成骨生长肽OGP，其氨基酸序列为：Ala-Leu-Lys-Arg-Gln-Gly-Arg-Thr- Leu-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly，不同摩尔比（1:20-1:200）室温孵育6小时，孵育完成后超滤管进行超滤（30K大小超滤管,4000rpm, 离心10分钟, 重复离心3次）去除未结合的成骨生长肽，即得到成骨生长肽-DNA四面体框架核酸复合物。测定不同摩尔比下该复合物包封率及载药量（图2），结合骨髓基质细胞增殖实验，筛选最佳摩尔比为1:100，进行后续表征鉴定及实验。通过PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE确定产物的合成（图3a）。通过原子力显微镜（AFM）观察产物形态(图3b)，镜下可见三角形的颗粒，与单纯的四面体框架核酸相比，其形状偏圆，证明的成骨生长肽在四面体框架核酸的表面吸附。

此外，为验证OGP-tFNAs的成功合成，其粒径及电位利用动态光散射进行检测，结果如图4所示，OGP-tFNAs复合物相较于单纯tFNAs粒径电位均有增加，进一步证明了OGP-tFNAs复合物的成功合成。

实施例2细胞摄取及增殖检测

1.本实验对OGP-tFNAs细胞摄取进行检测，验证其良好的入胞性能：

将Cy5荧光物质挂于S1链上合成Cy5-tFNAs，FITC修饰在OGP上，OP9细胞在20%胎牛血清DMEM培养基中培养贴壁24小时后，将培养基更换为Cy5-tFNAs终浓度分别为250nM，以不同浓度OGP/tFNAs比，在培养6h和12h后对细胞摄取进行流式细胞术及免疫荧光技术检测FITC-OGP/Cy5-tFNAs的入胞情况。

（1）流式细胞术

方法：

a. 在6孔板接种OP9细胞悬液，先在孵箱预培养24小时(37℃，5% CO2)。

b. 加入FITC-OGP/Cy5-tFNAs,于孵箱分别培养6小时和12小时(37℃，5% CO2)。

c. 消化细胞，收集细胞悬液，1000r/min下离心5min，PBS重悬，重复三次，上机检测。

结果：在培养6小时后，进入细胞的TFNAs量较少，而12h时入胞量较多，结果表明OGP-tFNAs能被OP9细胞摄取，以发挥入胞后续生物学效，且tFNAs的负载能够促进OGP的入胞。

（2）荧光示踪技术

方法：

a. 在共聚焦小皿中接种OP9细胞悬液，先在孵箱预培养24小时 (37℃，5% CO2)。

b. 加入FITC-OGP/Cy5-tFNAs，于孵箱培养6/12小时(37℃，5% CO2)。

c. 吸去培养基，用PBS清洗三次，每次5分钟；然后用4wt% 的多聚甲醛固定25分钟，吸去多聚甲醛，用PBS清洗三次，每次5分钟；再用鬼笔环肽（TRITC标记）处理，避光10~30分钟，吸去鬼笔环肽，用PBS清洗三次，每次5分钟；然后用DAPI处理，避光10分钟，吸去DAPI，用PBS清洗三次，每次5分钟；再用10wt% 的甘油封样，避光，4℃保存，并上机检测。

结果及结论：如图5所示，OP9细胞对OGP-tFNAs摄取在12h较6h多,且与单纯OGP相比，与tFNAs的复合增加了OGP的入胞，且入胞后OGP-tFNAs主要分布在胞浆内。

及OGP-tFNAs对OP9细胞的活性促进作用

方法：CCK-8检测

1）利用CCK-8检测试剂盒对tFNAs,OGP及OGP-tFNAs处理后细胞增殖及细胞活性的检测，将OP9细胞接种于96孔板，先在孵箱预培养24小时 (37℃，5% CO₂)。

2）加入tFNAs处理24及48h,基于单纯tFNAs对OP9细胞的影响，选择单纯tFNAs的最佳浓度;

3）基于最佳单纯tFNAs浓度并以此为对照，以不同浓度OGP及OGP-tFNA处理细胞（即：对于OGP-tFNAs组，均为250nM tFNAs的基础上，预先添加5*250-200*250 nM 浓度OGP复合后处理细胞，对于OGP组以相应5*250-200*250 nM浓度分别处理细胞）；

经上述处理后，吸去原培养液，加入CCK-8检测液，酶标仪于450nm测量吸光度，计算细胞活性。

结果及结论：

如图6a，单纯tFNAs可促进OP9细胞的增殖，当其浓度在62.5nm~250 nM之间，随浓度的增加OP9细胞活性增强，当浓度超过250 nM OP9细胞活性逐渐减弱，故以250nM单纯tFNAs作为探究OGP-tFNAs复合体对细胞活性的研究基础；

如图6b，单纯OGP及OGP-tFNAs均可促进OP9细胞的增殖，但单纯OGP和单纯的tFNAs在效果上相当，且都是随浓度的增加细胞活性先增加后减小。将250nM单纯tFNAs分别与5*250-200*250 nM OGP复合后，OP9细胞活性得到了显著的提高，且当250nM单纯tFNAs 与100*250 nM OGP复合后，OP9细胞活性相较100*250 nM单纯OGP有极显著的差异。

实施例3 OGP-tFNAs保护化疗药物导致的骨髓基质细胞损伤

除造血干细胞的直接损伤外，骨髓基质细胞的损伤是放化疗患者长期骨髓抑制的重要原因，缺乏骨髓基质细胞的造血支持作用，造血系统的恢复会受到很大程度的抑制。因此，保护骨髓基质细胞，减轻放化疗对其的损伤在骨髓损伤抑制的预防及治疗中至关重要的作用。因此，本实例进行OGP-tFNAs对OP9细胞的保护作用探究。经OGP-tFNAs 预处理后，化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）对OP9细胞的损伤减轻作用。

对细胞周期及增殖活性的影响

方法：

（1）流式细胞术检测OP9细胞周期

将OP9细胞在6孔板中培养24小时后，加入OGP/tFNAs/OGP-tFNAs预处理12h后，接着加入25ug/ml 5-FU处理24h。在上述处理后，消化细胞，收集细胞悬液，1000r/min下离心5min，PBS重悬，70%冰乙醇固定过夜，离心PBS清洗3次后，加入PI染色，流式上机检测。

（2）免疫荧光技术检测细胞增殖蛋白表达

方法：

A. 将OP9细胞接种于共聚焦小皿中，放置于孵箱中培养24小时。加入OGP/tFNAs/OGP-tFNAs预处理12h后，接着加入25ug/ml 5-FU处理24h。

B. 上述处理后，PBS清洗3次，4%多聚甲醛固定25分钟后，吸去多聚甲醛，PBS洗3次，每次5分钟；

C. 0.5% Triton-100处理20-25分钟，吸去Triton-100，PBS洗3次，每次5分钟；

D. 羊血清处理1小时，吸去羊血清，PBS洗3次，每次5分钟；

E. 一抗（抗Ki-67）处理，4℃，过夜。第二天，37℃复温0.5小时，回收一抗，PBS洗3次，每次5分钟。携带荧光的二抗处理，避光，37℃，1小时，吸去二抗，PBS洗3次，每次5分钟；

F. 鬼笔环肽处理，避光，10-30分钟，吸去鬼笔环肽，PBS洗3次，每次5分钟；

G. DAPI处理，避光，10分钟，吸去DAPI，PBS洗3次，每次5分钟。10%甘油封样，避光，4℃保存。上机检测。

结果及结论：如图7，通过细胞增殖标志蛋白Ki-67的表达及流式细胞周期的检测，5-FU处理显著抑制了OP9细胞的活性且降低了S期细胞的比例，表明5-FU处理造成的OP9细胞的增殖抑制，而OGP-tFNAs的预处理减轻了5-FU的抑制作用。

对化疗药物导致骨髓基质细胞DNA损伤及衰老的保护作用

（1）免疫荧光技术检测DNA损伤标记蛋白γ-H2AX

方法：

D. 羊血清处理1小时，吸去羊血清，PBS洗3次，每次5分钟；

E. 一抗（抗γ-H2AX）处理，4℃，过夜。第二天，37℃复温0.5小时，回收一抗，PBS洗3次，每次5分钟。携带荧光的二抗处理，避光，37℃，1小时，吸去二抗，PBS洗3次，每次5分钟；

（2）β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况检测

方法：

A. 将OP9细胞接种于12孔板中，放置于孵箱中培养24小时。加入OGP/tFNAs/OGP-tFNAs预处理12h后，接着加入25ug/ml 5-FU处理24h。

B.将配置好的β-半乳糖苷酶染色液加入12孔板，无CO₂的37°孵箱孵育过夜后光镜下观察染色结果。

结果及结论：如图8a，化疗药物5-FU引起了OP9细胞DNA损伤标志物γ-H2AX的表达增加，而OGP-tFNAs预处理组DNA损伤程度较轻。同时细胞衰老染色结果（图8b）同样表明OGP-tFNAs预处理减轻了OP9细胞的衰老程度。

对5-FU所致OP9细胞凋亡的缓解作用

方法：

（1）流式细胞术

将OP9细胞在6孔板中培养24小时后，加入OGP/tFNAs/OGP-tFNAs预处理12h后，接着加入25ug/ml 5-FU处理24h。在上述处理后，消化细胞，收集细胞悬液，1000r/min下离心5min，PBS清洗后离心，加入FITC-PI凋亡检测试剂，流式上机检测细胞凋亡情况。

（2）免疫荧光技术检测凋亡相关蛋白表达

D. 羊血清处理1小时，吸去羊血清，PBS洗3次，每次5分钟；

E. 一抗（anti-Bcl-2, Bax及Casepase3）处理，4℃，过夜。第二天，37℃复温0.5小时，回收一抗，PBS洗3次，每次5分钟。携带荧光的二抗处理，避光，37℃，1小时，吸去二抗，PBS洗3次，每次5分钟；

结论：如图9，流式凋亡及免疫荧光检测分析结果均表明，OGP-tFNAs预处理组，5-FU造成的骨髓基质细胞凋亡减少，凋亡促进蛋白表达减少，证明了OGP-tFNAs对骨髓基质细胞的保护作用。

实施例4 OGP-tFNAs对骨髓基质细胞造血支持相关细胞因子表达能力的保护作用

骨髓基质细胞可分泌生长因子及趋化因子，如干细胞生长因子SCF，基质细胞衍生因子SDF-1等，从而维持造血干细胞的自我更新，多向分化以及归巢等，以支持骨髓的造血能力。而放疗及化疗药物损伤基质细胞的蛋白表达能力，降低造血相关细胞因子的表达与分泌，因此本实验探究OGP-tFNAs对骨髓基质细胞分泌能力的保护作用。

方法：

（1）免疫荧光技术

A. 将OP9细胞接种于共聚焦小皿中，放置于孵箱中培养24小时将OP9细胞接种于共聚焦小皿中，放置于孵箱中培养24小时。加入OGP/tFNAs/OGP-tFNAs预处理12h后，接着加入25ug/ml 5-FU处理24h。B. 4%多聚甲醛固定25分钟后，吸去多聚甲醛，PBS洗3次，每次5分钟；

D. 羊血清处理1小时，吸去羊血清，PBS洗3次，每次5分钟；

E. 一抗（抗SCF，SDF-1抗体）处理，4℃，过夜。第二天，37℃复温0.5小时，回收一抗，PBS洗3次，每次5分钟。携带荧光的二抗处理，避光，37℃，1小时，吸去二抗，PBS洗3次，每次5分钟；

（2）蛋白印迹法

方法：

a. 在6孔板中接种OP9细胞，将培养板置于孵箱中预培养24小时（37℃，5% CO2）。

b.加入OGP/tFNAs/OGP-tFNAs预处理12h后，接着加入25ug/ml 5-FU处理24h。

c. 提取所有样本的全蛋白，再通过Western blot检测SCF和SDF-1的变化。

结果：如图所示,OGP-tFNAs预处理组，OP9细胞的对于干细胞生长因SCF及基质细胞衍生因子SDF-1的表达能力有较强的保护作用。

结果及结论：如图10所示，OGP-tFNAs预处理可减轻化疗药物所致基质细胞的蛋白表达能力降低作用， OGP-tFNAs可保护骨髓基质细胞表达及分泌造血相关细胞因子能力，从而促进减轻骨髓损伤，促进造血恢复。

实施例5 OGP-tFNAs对化疗小鼠骨髓损伤的保护作用

方法：

小鼠体内给药及组织学检测

6-8周ICR小鼠进行体内给药，前1-3天提前尾静脉注射OGP-tFNAs后，第4-6天利用环磷酰胺150mg/kg进行骨髓抑制的诱导，继续OGP-tFNAs尾静脉给药至第10天收样，行股骨及胸骨，脾脏组织学检测。将股骨及胸骨多聚甲醛固定后，脱钙液脱钙4周左右，行组织切片HE染色及免疫组化染色观察股骨及胸骨骨髓的组织学改变及造血相关蛋白的表达情况。

结果及结论：

正常组小鼠股骨，胸骨及其内部骨髓骨组织着色均匀，骨膜、骨小梁、骨髓腔及软骨细胞结构清晰形，形态结构正常，骨髓损伤及造血抑制造模组，骨髓有核细胞增生明显减低，有核细胞数明显减少，由大量脂肪填充骨髓腔，骨髓正常增殖情况受到明显抑制，而OGP-tFNAs组骨髓增生活跃，相比骨髓损伤组骨髓腔有明显的恢复（图11a）；同时，造血相关因子SCF及SDF-1的表达相较于模型组高(图11b)；对于脾脏组织，模型组脾脏基本结构被破坏，白髓面积缩小，甚至消失，无明显的生发中心，而OGP-tFNAs组白髓面积增大，脾脏结构有明显的恢复(图11c)；表明OGP-tFNAs对于化疗药物所致的骨髓及造血损伤有一定的保护作用；而肾脏HE染色无明显变化，证明OGP-tFNAs对肾脏无明显毒副作用(图11d)。

综上，本发明通过特定的核苷酸序列制得的DNA四面体框架纳米核酸与成骨生长肽在特定浓度条件下复合，在预防和/或治疗骨髓损伤及造血抑制方面效果显著，且生物安全性好，副作用小，相比于生长因子类药物，不会增加放化疗肿瘤复发的风险，用于骨髓抑制的预防及治疗，应用前景良好。

SEQUENCE LISTING

<110> 四川大学

<120> 一种用于骨髓损伤和/或抑制的复合物

<130> GYKH1118-2022P0115076CC

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atttatcacc cgccatagta gacgtatcac caggcagttg agacgaacat tcctaagtct 60

gaa 63

<210> 2

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

acatgcgagg gtccaatacc gacgattaca gcttgctaca cgattcagac ttaggaatgt 60

tcg 63

<210> 3

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

actactatgg cgggtgataa aacgtgtagc aagctgtaat cgacgggaag agcatgccca 60

tcc 63

<210> 4

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

acggtattgg accctcgcat gactcaactg cctggtgata cgaggatggg catgctcttc 60

ccg 63

Claims

1.一种治疗骨髓损伤和/或骨髓抑制的复合物，其特征在于：所述复合物是由DNA四面体与成骨多肽复合而成；

所述DNA四面体是由序列如SEQ ID NO.1～4所述的单链DNA通过碱基互补配对自组装形成的四面体结构；

所述成骨多肽的氨基酸序列为Ala-Leu-Lys-Arg-Gln-Gly-Arg-Thr- Leu-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly。

2.权利要求1所述的复合物在制备预防和/或治疗骨髓损伤的药物中的用途。

3.权利要求1所述的复合物在制备预防和/或治疗骨髓抑制的药物中的用途。

4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于：所述药物是促进骨髓造血能力恢复、骨髓基质细胞增殖的药物。

5.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于：所述药物是缓解骨髓基质细胞凋亡的药物。

6.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于：所述药物是提高骨髓基质细胞活性的药物。

7.一种制备权利要求1所述复合物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：