CN114732937B

CN114732937B - 一种用于动物耳软骨支撑材料的敷料及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN114732937B
Application number: CN202210546086.2A
Authority: CN
Inventors: 冯珮
Original assignee: Spf Beijing Biotechnology Co ltd
Current assignee: Spf Beijing Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-05-20
Filing date: 2022-05-20
Publication date: 2022-09-09
Anticipated expiration: 2042-05-20
Also published as: CN114732937A

Abstract

本申请涉及一种用于动物耳软骨支撑材料的敷料及其制备方法和应用。以重量份数计，所述敷料包括以下组分：积雪草苷3~5份；羟基积雪草苷2~4份；芦荟粉1~3份；三七粉1~2份；参麦2~4份；交联透明质酸1~2份；固定剂3~10份。所述敷料有助于皮肤修复并可辅助机体免疫功能，将其敷于动物耳软骨上制成的支撑材料的生物相容性好，且可促进骨细胞、胶原细胞及纤维细胞的生长及浸润，为医疗行业提供新的选择。

Description

一种用于动物耳软骨支撑材料的敷料及其制备方法和应用

技术领域

本申请涉及耳软骨支撑材料制备领域，尤其是涉及一种用于动物耳软骨支撑材料的敷料及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，由于各行各业的快速发展以及临床上先天性疾病、感染疾病、肿瘤、外科手术等，造成的骨骼异常和骨骼损伤十分常见。我国每年有约1200万骨科病例需要植骨或骨膜。在目前临床中由化脓性中耳炎、外伤等原因导致的鼓膜穿孔也十分常见，经久不愈增加中耳反复感染的机会、导致传导性耳聋甚至胆脂瘤形成，需要通过外科手术进行干预。

长期以来，自体骨、自体骨膜和异体骨是临床上治疗骨骼缺损的常用植骨材料。自体骨移植存在来源有限和造成供骨区多种并发症等问题；异体骨片尚不能完全克服移植后的免疫排斥反应，有潜在的病源传播危险。而对于鼓膜的修补来说选择合适的移植材料对手术成功率及术后听力恢复起着至关重要的作用。目前的自体材料和人工材料都很难达到上述要求。1967年Goodhill首次提出使用自体软骨-软骨膜复合物作为鼓膜移植材料，经过50多年的临床应用，发现该复合物具有抗感染能力强、保留的软骨膜可以加速与鼓膜残缘的愈合、具有一定的硬度和弹性等特点，但软骨-软骨膜手术经常使用的耳屏软骨多不平整，铺放至移植床后容易发生边缘上翘或下陷，导致术后穿孔愈合不良。其次是研究发现薄层软骨比全厚软骨和颞肌筋膜具有更高的穿孔愈合率，这就要求术中对取出的耳屏软骨进行修剪，但术中制备和铺放薄层软骨会延长手术时间，增加感染等并发症的风险，而且软骨切削越薄越卷曲，更增加了移植物移位和术后再穿孔的风险。

皮肤是维持内环境稳定和阻止微生物入侵的屏障，严重烧伤后发生局部和全身的病理变化多与丧失皮肤屏障有关。重建和恢复皮肤屏障是烧伤治疗的最主要目标。创面修复材料应具有保护创面、减少水分丢失、减轻组织进一步损伤和疼痛、防止微生物侵入、促进创面愈合的作用，其包括：纺织品敷料、生物敷料、合成敷料、生物合成敷料以及组织工程化皮肤。创面修复材料在皮肤愈合中起着至关重要的作用。

耳软骨隆鼻是隆鼻术中的一种，即对鼻部进行整形的外科手术。在整形医学界，公认的最为合理的隆鼻材料当属自体的软骨。其中多用耳软骨、鼻中隔软骨及肋软骨。近一两年来，中国的整形医生逐渐认识到软骨隆鼻的好处，开始在临床推广，并取得了很好的效果。耳软骨移术，具有人工材料不可比拟的优点，具体为：1、组织相容性好且稳固。与鼻局部的组织愈合为一体，很容易固定，不会出现移位；2、吸收少，自体软骨吸收率低，没有血液供应也能成活生存；3、耳软骨移植术操作简单，获取容易。自体软骨隆鼻一般可以取自耳软骨，鼻中隔软骨和肋软；4、很容易雕刻修整模型，是理想的隆鼻材料。通常的鼻假体材料，形状较固定(L型)并不能做出漂亮的鼻尖，而运用耳软骨则完全可以达到塑造鼻尖这个效果，杜绝了鼻头变形、穿孔等问题；5、触感真实，术后不必担心正常接触鼻部，可推按鼻头，且手感柔软逼真。

软骨是特化的致密的结缔组织，由大量的细胞间质和有包囊的软骨细胞构成。根据软骨组织内所含纤维成分的不同，可将软骨分为透明软骨、弹性软骨和纤维软骨三种，其中以透明软骨的分布较广，结构也较典型。动物耳软骨（如兔、犬、猪等）属于软骨中的弹性软骨，为一种略带弹性的坚韧组织，在机体内起支持和保护作用。由软骨细胞、纤维和基质构成。基质含有70%的水分，有机成分主要是多种蛋白，如软骨粘蛋白、胶原和软骨硬蛋白等。在动物实验中兔耳已经广泛用于各种实验研究中，主要是由于兔耳朵面积大且厚度在0.2-0.75mm之间。

耳软骨材料作为一种生物材料，其植入体内过程与一般创伤过程及异物侵入过程相似。在体内植入研究中，局部炎性反应或免疫刺激是观察材料与机体反应的重要内容。一方面耳软骨材料植入体内是一个创伤过程，因此植入后局部反应与典型的创伤愈合过程非常相似，一般来说愈合过程主要为炎症期和修复期，由于材料在体内长期存在，成为一个持续的炎性刺激物，局部炎性细胞活性增强，这样炎症期可以延长，修复期也会延长和增强，创伤后炎症修复时间的长度和程度主要取决于植入物的生物相容性和生物降解性。虽然耳软骨材料生物相容性好，但植入体内后仍然会被看作异物，因此材料周围会有异物反应，异物反应的强度和范围与生物相容性和生物降解性也有着密切的关系。因此，选择合适的包埋敷料也至关重要。

发明内容

为了解决现有技术中存在的不足，本申请提供一种用于动物耳软骨支撑材料的敷料，所述敷料有助于皮肤修复并可辅助机体免疫功能，将其敷于动物耳软骨上制成的支撑材料的生物相容性好，且可促进骨细胞、胶原细胞及纤维细胞的生长及浸润，为医疗行业提供新的选择。

为此，本申请第一方面提供了一种用于动物耳软骨支撑材料的敷料，以重量份数计，所述敷料包括以下组分：

积雪草苷 3~5份；

羟基积雪草苷 2~4份；

芦荟粉 1~3份；

三七粉 1~2份；

参麦 2~4份；

交联透明质酸 1~2份；

固定剂 3~10份。

本申请中，积雪草苷和羟基积雪草苷均为积雪草提取物，具有很多药理作用。例如，积雪草苷能抑制胶原纤维，具有抑制纤维组织增生的作用；对小鼠、大鼠有镇静、安定作用，此作用主要是对中枢神经系统中的胆碱能系统的影响；能治疗皮肤溃疡，如顽固性创伤、皮肤结核、麻风等，对小鼠、豚鼠、兔肌肉注射或皮下植入可促进皮肤生长、局部白细胞增多、结缔组织血管网增生、粘液分泌增加、毛及尾的生长加速等；用于尿血、衄血、痛经、崩漏、便血、痔疮出血、胃出血、外伤出血等各种出血，有止血止痛的作用等。

在本申请的一些具体实施方式中，所述敷料中积雪草苷的重量份数可以为3份、4份或5份等。在本申请的一些优选的具体实施方式中，所述敷料中积雪草苷的重量份数为4份。

在本申请的一些具体实施方式中，所述敷料中羟基积雪草苷的重量份数可以为2份、3份或4份等。在本申请的一些优选的具体实施方式中，所述敷料中积雪草苷的重量份数为3份。

本申请中，所采用的芦荟粉来源于芦荟，芦荟中蕴含75种元素，与人体细胞所需物质几乎完全吻合，有着明显的保健价值，对皮肤创伤、烧伤以及x射线局部照射均有保护作用，同时具有抗病毒感染，促进伤口愈合复原的作用，有消炎杀菌、吸热消肿、软化皮肤、保持细胞活力的功能，还具有愈合创伤活性。在本申请的一些具体实施方式中，所述芦荟粉的重量份数可以为2份。

本申请中，三七粉是植物三七的根茎制品，是用三七主根打成的粉。三七的功用可用“止血、散瘀、定痛”六个字来概括。1912年版《中国医药大辞典》记载：三七功用补血，去瘀损，止血衄，能通能补，功效最良，是方药中之最珍贵者。三七生吃，去瘀生新，消肿定痛，并有止血不留瘀血，行血不伤新的优点；熟服可补益健体；扩张血管的作用；有较强的镇痛作用，具有抗疲劳、提高学习和记忆能力的作用；抗炎症作用；具有免疫调节剂的作用，能使过高或过低的免疫反应恢复到正常，但不干扰机体正常的免疫反应；抗肿瘤作用；抑制疤痕增生；抗衰老、抗氧化作用；降低血脂及胆固醇作用；保护肝脏。在本申请的一些具体实施方式中，所述三七粉的重量份数可以为1份。

本申请中，参麦的主要成分为红参、麦冬。主要功效是益气固脱，养阴生津，生脉。用于治疗气阴两虚型之休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒细胞减少症。能提高肿瘤病人的免疫功能，与化疗药物合用时，有一定非增效作用，并能减少化疗药物所引起的毒副反应。其主要药理功能为：适用于各种休克，可兴奋肾上腺皮质系统及增加网状内皮系统对休克时各种病理性物质的清除作用，可改善心﹑肝﹑脑等重要脏器的供血﹑改善微循环及抗凝作用；用于冠心病心绞痛﹑心肌梗塞，病毒性心肌炎，肺原性心脏病，心力衰竭等，能强心升压，改善冠脉流量，增加机体耐缺氧能力，减少心肌耗氧量，并有保护﹑修复心肌细胞及一定的抗心律失常作用；对于各种癌症病人，配合化疗﹑放疗有明显的增效减毒作用，能改善癌症病人全身健康状况保护骨髓造血功能，改善肿瘤病人的细胞免疫功能（提高NK﹑LAK活性及TH/TS值等），提高肿瘤消失缩小率。在本申请的一些具体实施方式中，所述参麦的重量份数可以为2份。

在一些实施方式中，所述参麦包括红参和麦冬。本申请中，所述参麦中主要包括红参和麦冬，但除了红参和麦冬外还包括其他佐剂，如聚山梨酯80、蔗糖等。

本申请对所采用的参麦没有明确限定，其为市面上成品化的颗粒产品。

在一些具体实施方式中，所述红参和麦冬的重量比为（1~5）:（1~5）。在本申请的一些优选的具体实施方式中，所述红参和麦冬的重量比为1:1。

本申请对采用的芦荟粉和三七粉的粒径没有明确限定，其为本领域的常规选择。在本申请的一些具体实施方式中，上述粉末的粒径可以各自独立地为1~5μm。

本申请对采用的交联透明质酸的分子量没有明确限定，其为本领域中常规采用的分子量。在本申请的一些具体实施方式中，所采用的交联透明质酸的分子量为50~100万道尔顿。

本申请中所述敷料的有效成分以积雪草苷和羟基积雪草苷为主，芦荟粉为辅，配以三七粉和参麦，加之交联透明质酸；通过上述特定重量份数的组分的配合作用，使得所制得的敷料有助于皮肤修复并可辅助机体免疫功能。

本申请中，所述敷料中的固定剂用于将敷料固定于动物的耳软骨上。在一些具体实施方式中，所述固定剂包括聚乙烯醇（PVA）和琼脂粉。其中，固定剂中的聚乙烯醇起主要的固定作用，而琼脂粉起辅助作用。

本申请中所采用的聚乙烯醇的黏度可以为20.5~24.5，醇解度可以为87~89mol%。

在一些实施方式中，所述聚乙烯醇和琼脂粉的重量比为1:（1~2）。在一些具体实施方式中，所述敷料中包括3~5份的聚乙烯醇和3~5份的琼脂粉。在一些优选的实施方式中，所述述敷料中包括5份聚乙烯醇和3份琼脂粉。

本申请通过加入上述特定重量配比的固定剂，能使制得的敷料更好地固定于耳软骨上，且对机体的免疫炎症反应很小。

在一些具体实施方式中，以重量份数计，所述敷料包括以下组分：

积雪草苷 3~5份；

羟基积雪草苷 2~4份；

芦荟粉 1~3份；

三七粉 1~2份；

参麦 2~4份；

交联透明质酸 1~2份；

聚乙烯醇 3~5份；

琼脂粉 3~5份；

其中参麦中包含的红参和麦冬的重量比为1:1。

在一些优选的具体实施方式中，以重量份数计，所述敷料包括以下组分：

积雪草苷 4份；

羟基积雪草苷 3份；

芦荟粉 2份；

三七粉 1份；

参麦 2份；

交联透明质酸 1份；

聚乙烯醇 5份；

琼脂粉 3份；

其中参麦中包含的红参和麦冬的重量比为1:1。

本申请中，所述敷料除了包括上述提到的组分外，还可以包括水等。

本申请第二方面提供了一种制备如本申请第一方面所述的敷料的方法，所述方法包括以下步骤：

S1，将所述积雪草苷、羟基积雪草苷、芦荟粉、三七粉、参麦、交联透明质酸和固定剂按照其重量配比与水混合，获得混合物；

S2，将所述混合物制成片状后进行干燥，获得所述敷料。

在一些实施方式中，所述干燥的温度为45~50℃，干燥的时间为24~36h。

本申请通过将敷料的干燥温度控制在45~50℃内，能使获得的敷料的性能更好。若干燥温度过高，容易造成敷料卷边严重，且敷料水分丢失过快过多，进而影响敷料的性能；而干燥温度太低的话水分过多不宜保存且不宜成型。

在一些具体实施方式中，所述敷料的制备方法包括以下步骤：

（1）将琼脂粉和聚乙烯醇分别与水混合后，加热搅拌溶解，分别获得混合液1和混合液2；

（2）将积雪草苷、羟基积雪草苷、芦荟粉、三七粉和参麦按照其重量配比与水混合后，加入交联透明质酸，搅拌，获得混合液3；

（3）在混合液3中加入所需用量的混合液1和混合液2，将获得的混合物制成片状后进行干燥，获得所述敷料。

本申请第三方面提供了一种动物耳软骨支撑材料，其包括动物耳软骨以及敷于所述动物耳软骨上的敷料，所述敷料为如本申请第一方面所述的敷料或者第二方面所述方法制备的敷料。

在一些实施方式中，所述动物耳软骨选自鼠耳软骨、兔耳软骨、猪耳软骨和犬耳软骨中的至少一种。

在一些优选的实施方式方式中，所述动物耳软骨为鼠耳软骨。鼠耳的再植效果相较与其他动物来说操作更加简单，并且效果更好。大鼠的饲养更加经济节约，同时鼠耳更加容易获得，相较于兔耳来说，鼠耳的厚度更加优越，在耳鼓膜手术中成为更加理想的材料，且鼠耳小且圆润，更加节约、容易修整。

利用动物耳软骨和敷料制备的支撑材料为一种新型天然生物植入材料，它可促进骨细胞、胶原细胞及纤维细胞的生长及浸润，生物相容性相较于其他现有材料会更加适合体内植入。

本申请第四方面提供了一种如本申请第三方面所述的动物耳软骨支撑材料在医疗美容行业、医用烧伤创面修复材料、耳鼓膜修复手术和医疗骨科修复中的应用。

本申请提供的动物耳软骨支撑材料能够较好的在医疗美容行业、医用烧伤创面修复材料、耳鼓膜修复手术和医疗骨科修复中，为医疗行业提供新的选择。

有益技术效果：本申请所述用于动物耳软骨支撑材料的敷料中的有效成分以积雪草苷和羟基积雪草苷为主，芦荟粉为辅，配以三七粉和参麦，加之交联透明质酸；通过上述特定重量份数的组分的配合作用，使得所制得的敷料有助于皮肤修复并可辅助机体免疫功能。同时所述敷料中还含有特定重量配比的固定剂，能使制得的敷料更好地固定于动物耳软骨上，且对机体的免疫炎症反应很小。将所述敷料敷于动物耳软骨上制备的动物耳软骨支撑材料的生物相容性好，且可促进骨细胞、胶原细胞及纤维细胞的生长及浸润，能够较好的在医疗美容行业、医用烧伤创面修复材料、耳鼓膜修复手术和医疗骨科修复中，为医疗行业提供新的选择。

附图说明

图1为实施例2制备的敷料在大鼠皮肤内的病理切片HE染色图。

图2为市场上销售的某成品膜在狗皮肤内一年左右的病理切片HE染色图。

图3为测试例2制备的鼠耳软骨支撑材料在大鼠皮肤内的病理切片HE染色图。

具体实施方式

为使本申请更加容易理解，下面将结合实施例来进一步详细说明本申请，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本申请的应用范围。本申请中所使用的原料或组分若无特殊说明均可以通过商业途径或常规方法制得。

下述实施例中所采用的交联透明质酸的分子量为80万道尔顿；所采用的聚乙烯醇的黏度为22，醇解度可以为88mol%；所采用的参麦为李时珍医药集团有限公司生产的参麦颗粒。

下述实施例所采用的实验动物为：6-8 周龄 SPF 级雄性野生型SD大鼠，来自斯贝福（北京）生物技术有限公司。饲养在IVC环境中，饲养期间各组动物可自由获得食物和水。饲养环境：昼夜各半循环照明，湿度控制在 40%-60%，温度控制在 24±2.0℃。按实验动物使用的 3R 原则给予人道的关怀。

下述实施例所采用的实验仪器为：生物安全柜（Hfsmfe-1500LC，上海力申科学（力康），中国），电子天平（STX1202ZH， OHAUS，中国），麻醉机（R580，瑞沃德，中国），手术剪，手术镊，4-0缝合线，二分之一7×20三棱缝合针

实施例1

将24g的琼脂粉加入176ml的去离子水，95℃加热搅拌溶解，获得混合液1；将40g的PVA加入160ml的去离子水中，95℃30mins溶解，获得混合液2；

将积雪草苷3g、羟基积雪草苷2g、芦荟粉2g、三七粉1 g、参麦2g与39ml的去离子水混合，然后加入交联透明质酸1g，搅拌均匀；然后加入25g混合液1，25g混合液2，搅拌均匀后获得混合物；混合物中，各组分的浓度分别为积雪草苷3wt%，羟基积雪草苷2wt%，芦荟粉2wt%，三七粉1wt%，参麦2wt%，交联透明质酸1wt%，琼脂粉3wt%，PVA 5wt%。

将所述混合物制成制成1×1cm大小的片状，放入47℃烘箱内24h干燥，获得敷料。敷料中各组分的重量份数分别为积雪草苷3份，羟基积雪草苷2份，芦荟粉2份，三七粉1份，参麦2份，交联透明质酸1份，琼脂粉3份，PVA 5份。

实施例2

与实施例1基本相同，不同之处在于，将积雪草苷4g、羟基积雪草苷3g、芦荟粉2g、三七粉1 g、参麦2g与37ml的去离子水混合。获得的混合物中，各组分的浓度分别为积雪草苷4wt%，羟基积雪草苷3wt%，芦荟粉2wt%，三七粉1wt%，参麦2wt%，交联透明质酸1wt%，琼脂粉3wt%，PVA 5wt%。制得的敷料中各组分的重量份数分别为积雪草苷4份，羟基积雪草苷3份，芦荟粉2份，三七粉1份，参麦2份，交联透明质酸1份，琼脂粉3份，PVA 5份。

实施例3

与实施例1基本相同，不同之处在于，将积雪草苷5g、羟基积雪草苷4g、芦荟粉2g、三七粉1 g、参麦2g与35ml的去离子水混合。获得的混合物中，各组分的浓度分别为积雪草苷5wt%，羟基积雪草苷4wt%，芦荟粉2wt%，三七粉1wt%，参麦2wt%，交联透明质酸1wt%，琼脂粉3wt%，PVA 5wt%。制得的敷料中各组分的重量份数分别为积雪草苷5份，羟基积雪草苷4份，芦荟粉2份，三七粉1份，参麦2份，交联透明质酸1份，琼脂粉3份，PVA 5份。

测试例1：敷料性能测试

将实施例1-3制备的敷料分别植入到大鼠皮下，饲养3-4周后进行取材，HE染色。将染色结果与市场上销售的某成品膜的染色结果进行对比。具体的HE染色步骤如下：

1. 固定组织：

取含有上述材料部分的皮肤固定于Bouin’s固定液，该固定液有FPA、甲醛、乙酸混合而成，PA可沉淀蛋白引起组织收缩，但不会是组织硬化，其与甲醛和乙酸混合后，穿透速度加快，固定均匀，组织收缩轻微，对细胞的细微结构显示的很清晰，为一种良好的固定液。给固定液也可软化皮肤和肌腱，利于切片。

2. 组织脱水：

透明组织之前需要脱去组织中的水分。由于乙醇具有脱水特性，能使组织硬化且可与二甲苯透明剂互溶，因此本试验选取乙醇作为脱水剂。为避免高浓度乙醇造成组织皱缩、变脆，试验先用75%、85%和95%浓度的乙醇浸泡1小时，进行梯度脱水。随后用无水乙醇进行完全脱水，完全脱水重复三次，每次1小时。第一次无水乙醇完全脱水1小时后进行组织修块，去除残余的脂肪组织或切出所需观察的组织切面；第二遍无水乙醇完全脱水1小时；第三遍无水乙醇，需过夜处理（约12小时），以确保组织脱水充分且彻底。

3. 组织透明：

二甲苯可与乙醇任意比例互溶，可将组织从无水乙醇过渡到液体石蜡中，因此本试验将二甲苯作为过渡液。二甲苯可使组织呈现半透明状，因此该过渡过程也称组织透明。具体操作如下：将无水乙醇和纯二甲苯按 1:1的体积比混合，然后将脱水完全的组织浸入该混合液（30分钟）。将组织浸于二甲苯中（30分钟）。更换二甲苯，待组织完全透明，进行组织透蜡。

4. 组织透蜡：

选取熔点为70℃左右的石蜡，设置恒温箱温度为75℃，提前放入石蜡，将其融化至液态。将融化的石蜡和二甲苯1:1的体积比混合。将入透明完全的组织浸入该混合液并置于75℃恒温箱。一小时后，去除混合液，更换纯石蜡，2次，每次1小时，以确保石蜡完全浸入组织样品。更换石蜡并放入恒温箱抽真空，3-4小时，确保组织透蜡充分。

5. 组织包埋：

取L型铝制金属槽，倒入液态石蜡。将待包埋组织的切面朝下垂直放入框底中央。将提前备好的标签沿金属槽边缘插入液体石蜡。待凝固完全后剥出蜡块。

6. 修蜡切片：

以组织为中心，将距离组织0.5 cm以外的石蜡去除，修成平整的与大蜡块。四边平行的小正方形。将切片机切片厚度调整至4微米（根据不同组织和试验需要）；固定组织蜡块于蜡槽；固定莱卡刀片于刀片槽；移动刀口至距蜡块约0.1 cm 处并固定。右手握转轮把手，顺时针均匀转动转轮；左手执眼科镊，去除无组织的蜡带。待出现固定的样品时，小心夹起蜡带，轻轻放入展片机内，在水温38℃的展片机内展片，时间约3-5 分钟（时间以实际的展片效果为准）。

7. 切片制作：

待石蜡薄片在水浴锅中完全展开，用载玻片捞出，每张载玻片上组织样个数2-3个为宜。标记载玻片并烘烤，24-36小时后收集载玻片并存储于切片盒。

8. 常规HE染色步骤：

脱蜡：脱蜡时间长短取决于蜡是否彻底溶解。气温低可延长时间，气温高可适当缩短时间或在温箱中加速脱蜡。脱蜡步骤如下：

水化；苏木精液染色30s (以稍深染为宜)；自来水冲洗5min（洗去苏木精和浮色）；颜色分化；移入分化液(1%盐酸酒精)中，分化几秒至30秒钟，使切片褪色至淡兰红色即可。分化的作用，可使细胞浆兰色脱去，而细胞核更加清晰，鲜丽，分化不足时，胞浆带兰，胞核过染，分化过度时，胞核太淡，难以辩认，可再退回苏木素染液，延长一定时间。流水中，洗涤30～60min，使组织呈鲜兰色或天兰色(兰化)。

伊红染色：染色步骤如下：

脱水、透明：切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。脱水步骤如下：

透明步骤如下：

封固：用树胶封固，先从二甲苯Ⅱ中取出切片，将组织外围的二甲苯迅速擦去，在滴上一滴树胶于组织片上，然后取干净的盖玻片，仔细加在封固剂上，慢慢压平，使盖片位置适中。切片封固后，放在温箱中烤干，或平置凉干后装盒。

显微观察：先用低倍镜(“4×”或“2×”物镜)有序地全面观察切片的全貌及结构特征，然后在高倍镜下选择性地观察细胞的特征。

HE染色结果显示，实施例2制备的敷料的炎症反应症状最轻。实施例2制备的敷料在大鼠皮肤内的病理切片如图1所示。从病理切片中可以看出真皮下植入片状敷料，材料内部有微气泡，无上皮样细胞和成纤维细胞长入，外周纤维性包囊膜完整，成纤维细胞显著增生，少量嗜中性粒细胞浸润，偶见误植入的毛发旁异物巨细胞。植入材料无降解，生物相容性良好。图2为市场上销售的某成品膜在狗皮肤内一年左右的病理切片结果，从图2可以观察到该膜已经完全降解，周围有较多的炎性细胞和巨噬细胞浸润，组织中含有较多少量的肉芽组织形成。图1与图2进行对比，可说明本申请所研发的敷料炎性反应程度轻可以用于大鼠耳软骨上，作为敷料用于后续实验。

测试例2：耳软骨支撑材料性能测试

一、分离耳软骨

在超净台内将8-10周龄SD大鼠脱颈处死后，酒精消毒大鼠耳根部，用手术剪剪下耳朵，用无菌生理盐水冲洗干净，用少量脱毛膏涂抹于耳朵上停留1-2mins，处理干净后，用无菌生理盐水冲洗干净。仔细剥离软骨膜和周围结缔组织，获得鼠耳软骨，将其浸泡在无菌生理盐水，后续备用。

二、性能测试

将实施例2制备的敷料敷于步骤一制备的鼠耳软骨上，获得耳软骨支撑材料。将上述耳软骨支撑材料植入大鼠皮肤内，饲养3-4周后进行取材，并进行HE染色。HE染色的具体步骤同测试例1，染色结果如图3所示。

从图3可知，SD大鼠皮下植入耳软骨支撑材料后周围纤维包膜不明显，材料内出现大量成纤维细胞，肉芽组织老化，植入材料的软骨组织结构消失，外周有许多嗜中性粒细胞浸润，未见异物巨细胞、淋巴细胞和瘢痕组织。结果表明机体对上述制成的耳软骨支撑材料排异反应不明显，其生物相容性好，能够为医疗行业提供新的选择。

应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本申请，并不构成对本申请的任何限制。通过参照典型实施例对本申请进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本申请权利要求的范围内对本申请作出修改，以及在不背离本申请的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本申请涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本申请限于其中公开的特定例，相反，本申请可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。

Claims

1.一种用于动物耳软骨支撑材料的敷料，其特征在于，以重量份数计，所述敷料包括以下组分：

积雪草苷 4份；

羟基积雪草苷 3份；

芦荟粉 2份；

三七粉 1份；

参麦 2份；

交联透明质酸 1份；

聚乙烯醇 5份；

琼脂粉 3份；

其中所述参麦中包括红参和麦冬，所述红参和麦冬的重量比为1:1。

2.一种制备如权利要求1所述的敷料的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1，将所述积雪草苷、羟基积雪草苷、芦荟粉、三七粉、参麦、交联透明质酸、聚乙烯醇和琼脂粉按照其重量配比与水混合，获得混合物；

S2，将所述混合物制成片状后进行干燥，获得所述敷料。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述干燥的温度为45~50℃，干燥的时间为24~36h。

4.一种动物耳软骨支撑材料，其包括动物耳软骨以及敷于所述动物耳软骨上的敷料，所述敷料为如权利要求1所述的敷料或者权利要求2或3中所述的方法制备的敷料。

5.根据权利要求4所述的动物耳软骨支撑材料，其特征在于，所述动物耳软骨选自鼠耳软骨、兔耳软骨、猪耳软骨和犬耳软骨中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的动物耳软骨支撑材料，其特征在于，所述动物耳软骨为鼠耳软骨。

7.一种如权利要求4-6所述的动物耳软骨支撑材料在制备医用烧伤创面修复材料中的应用。