CN114729930A

CN114729930A - 收集用于预测全身性过敏反应发作的数据的方法

Info

Publication number: CN114729930A
Application number: CN202080079268.2A
Authority: CN
Inventors: 木户博; 铃木宏一; 多田仁美; 品原和加子
Original assignee: Applied Medical Enzyme Research Institute Corp
Current assignee: Applied Medical Enzyme Research Institute Corp
Priority date: 2019-11-18
Filing date: 2020-11-17
Publication date: 2022-07-08
Also published as: US20230003738A1; JP7385302B2; EP4063861A4; JPWO2021100719A1; EP4063861A1; WO2021100719A1

Abstract

提供一种方法：对采集自患有食物过敏的婴幼儿/儿童的试样中的IgE抗体的抗体效价和IgE抗体对于过敏原的亲和力进行测定，通过基于ROC分析制作的判定基准对前期婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应的风险进行预测，来预测患有过敏的婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应风险。

Description

收集用于预测全身性过敏反应发作的数据的方法

技术领域

本发明涉及一种收集数据的方法，用于以通过基于从患有过敏的婴幼儿/儿童采集的试样中的IgE抗体对于过敏原的亲和性的程度(亲和力(avidity))等的ROC分析所决定的临界值为判定基准，预测前述婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应的可能性。

背景技术

食物过敏被定义为“由食物引起的经由抗原特异性免疫学机理引发对于机体而言不利的症状的现象”(例如，参照非专利文献1等)。对于人为维持生命而消化吸收的食物，口服免疫耐受(Immune tolerance)通常发挥作用，以免对于未消化的异物产生生物体的防御反应。但是，出生人口中5％～10％的婴幼儿在其出生后1年之内就会发生某些食物过敏，其发病机理或预防发病的方法目前尚未完全解释清楚。

全身性过敏反应的定义是“一种因过敏原的侵入而引起包括多个器官在内的全身性过敏症状、(并不是轻微的症状)可能会危及生命的超敏反应”(例如，参照专利文献2等)。因此，对于患有过敏的患者来说，是否有可能引发全身性过敏反应是非常重要的关注问题。

目前，包括ImmunoCAP(Thermo Fisher公司)法在内的各种测量抗原特异性IgE抗体的抗体效价的方法被用于过敏的诊断。然而，例如在ImmunoCAP法中，在制作显示受试者的过敏发生可能性的概率曲线的情况下，有对于IgE抗体效价相对较低的2级和3级的婴幼儿发生全身性过敏反应的可能性数值显示比实际发病率低等的报告(例如，参照非专利文献3、4等)。

此外，有人提出了一种收集用于预测风险的数据的方法，使用出生后6个月内的幼儿血浆试样，分别定量测定试样中IgG1和IgE对于过敏原的抗体效价，根据基于预先被统计处理的从IgG1向IgE的免疫球蛋白转换程度制作的判断标准，对前述食物过敏发作前的幼儿中针对所述过敏原发生过敏的风险进行预测(例如，参照专利文献1等)；然而，该方法难以预测是否发生全身性过敏反应。

此外，被认为是关于患有食物过敏的婴幼儿的全身性过敏反应发作的最可靠的诊断方法的“口服食物激发试验(Oral Food Challenge：OFC)”是在医生在场的情况下进行的，但因为受试者有可能发生全身性过敏反应，所以强烈希望开发出一种不进行OFC而预测发生全身性过敏反应的可能性的方法。然而，目前还没有关于用来预测发生全身性过敏反应的可能性的有效的诊断方法、有效的生物标志物等的报道。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开WO2017/195871小册子

非专利文献

非专利文献1：食物过敏诊疗指南2011，食物过敏研究会

非专利文献2：Simons FE,Ardusso LR,Bilo MB,EI-Gamal YE,Ledford DK,RingJ,Sanchez-Borges M,Senna GE,Sheikh A,Thong BY,World Allergy Orhan J.2011；4:13-37.

非专利文献3：Komata T,Soderstrom L,borres MP,Tachimoto H,Ebisawa M.,JAllergy Clin Immunol.2007；119:1272-1274.

非专利文献4：Furuya K,Nagao M,Sato Y,Ito S,Fujisawa T.,Allergy.2016；71:1435-1443.

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的课题在于提供一种对患有过敏的婴幼儿/儿童的全身性过敏反应发作风险进行预测的方法。

用于解决课题的方法

在仅以IgE抗体的抗体效价为参数并不能有效地预测全身性过敏反应发作这一状况下，本发明人考虑了在全身性过敏反应发作预测中是否需要其他参数。也就是说，在血液中，除IgE抗体以外，还存在对相同的过敏原反应的IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体、IgM抗体、IgA抗体、IgD抗体等，想到需要将这些抗体分别是识别抗原中的多个表位的多克隆抗体这一事实考虑进来。

并且，本发明人想到，在评价该IgE抗体向过敏原的结合时，不是仅对以往测定的用二抗仅测定IgE抗体的恒定部位而得的IgE抗体效价、即图1所示的IgE抗体的恒定部位(Fc区域)的“IgE数量”进行测定，而需要将作为IgE抗体的可变部对于过敏原显示出的“IgE质量”的“抗原与抗体的亲和性的总和”(亲和力(Avidity))考虑进来。本发明人选择1/IC50值作为表示IgE抗体对于过敏原的亲和力的参数，使用对各过敏原致敏阳性婴幼儿/儿童的IgE抗体效价乘以1/IC50值而得的数值和亲和力值，对有无全身性过敏反应发作进行分析，对上述参数进行了差异显著性检验，结果发现，与使用现有参数相比，在发生全身性过敏反应的人与无全身性过敏反应的人之间呈现更显著的统计学显著差异。此外，在检查的性能评价中所使用的ROC(接收者操作特征(Receiver Operating Characteristic))曲线分析中，也确认了IgE抗体效价乘以1/IC50值而得的数值与以往的仅IgE抗体量的检查相比对其灵敏度和根据特异性计算出的作为有用性指标值的曲线下方面积(Area Under Curve：AUC)有显著的增加。本发明人确认，对于至今为止尚无关于全身性过敏反应发作可能性的有效诊断方法的过敏患者，能够有效地预测全身性过敏反应的发作，从而完成了本发明。

即，本发明通过下述事项确定。

(1)一种收集数据的方法，用于以通过基于采集自患有食物过敏的婴幼儿/儿童的试样中的IgE抗体对于过敏原的亲和力的ROC分析所决定的临界值为判定基准，预测前述婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应风险。

(2)上述(1)所述的收集数据的方法，其特征在于，通过基于IgE抗体对于过敏原的亲和力的ROC分析而决定的临界值，是通过基于对IgE抗体对于过敏原的抗体效价乘以IgE抗体对于过敏原的亲和力而得的数值的ROC分析而决定的临界值。

(3)上述(2)所述的收集数据的方法，其特征在于，IgE抗体对于过敏原的亲和力被数值化为1/IC50。

(4)上述(3)所述的收集数据的方法，其特征在于，IC50是竞争性结合抑制活性值。

(5)上述(1)所述的收集数据的方法，其特征在于，通过基于IgE抗体对于过敏原的亲和力的ROC分析而决定的临界值，是通过基于IgE抗体的IC50的ROC分析而决定的临界值。

(6)上述(5)所述的收集数据的方法，其特征在于，IC50是竞争性结合抑制活性值。

(7)上述(2)～(6)中任一项所述的收集数据的方法，其特征在于，使用DCP芯片测定IgE抗体对于过敏原的抗体效价。

(8)上述(1)～(7)中任一项所述的收集数据的方法，其特征在于，试样为血浆或血清。

发明效果

根据本发明，对于以往难以诊断全身性过敏反应发作的婴幼儿/儿童能够有意义地预测发生全身性过敏反应的可能性。

附图说明

图1示出决定IgE抗体的“数量”和“质量”的结构性特征。

图2表示固化有蛋白质的DCP芯片的示意图。

图3用ROC曲线示出对1～6岁且由ImmunoCAP法判断为2级以上的343名婴幼儿实施的、关于加热鸡蛋OFC中过敏阳性者/阴性者使用对于加热鸡蛋过敏原的卵粘蛋白(OVM)的五种不同的测定参数进行ROC分析后的结果，所述测定参数为：CAP OVM sIgE(UA/mL)、DCPOVM sIgE(BUe/mL)、DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]、DCP OVM sIgEIC50(nM)、1/DCP OVM sIgE IC50(nM)。

图4用ROC曲线示出对1～3岁且由ImmunoCAP法判断为2级以上的256名婴幼儿实施的、关于加热鸡蛋OFC中过敏阳性者/阴性者使用五种不同的参数进行ROC分析后的结果，所述参数为：CAP OVM sIgE(UA/mL)、DCP OVM sIgE(BUe/mL)、DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgEIC50[(BUe/mL)/(nM)]、DCP OVM sIgE IC50(nM)、1/DCP OVM sIgE IC50(nM)。

图5示出对1～6岁且由ImmunoCAP法判断为2级以上的343名婴幼儿使用五种(A～D)不同的参数以加热鸡蛋[EW(heat)]OFC阳性、阴性检测鸡蛋过敏(EA)的有(+)无(-)的结果，以及关于有鸡蛋过敏(OFC阳性)者对全身性过敏反应(AN)的有(+)无(-)检测显著差异的结果，所述参数为：(A)CAP OVM sIgE(UA/mL)、(B)DCP OVM sIgE(BUe/mL)、(C)DCP OVMsIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]、(D)DCP OVM sIgE IC50(nM)、(E)1/DCP OVMsIgE IC50(nM)。

图6示出对1～6岁且由ImmunoCAP法判断为2级以上的343名婴幼儿，使用五种不同的参数，根据基于OFC的全身性过敏反应发作诊断，对被诊断为全身性过敏反应(AN)发作者(+)的受试者与被诊断为AN未发作者(-)的受试者进行ROC分析的结果，所述参数为：CAPOVM sIgE(UA/mL)、DCP OVM sIgE(BUe/mL)、DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]、DCP OVM sIgE IC50(nM)、1/DCP OVM sIgE IC50(nM)。

图7示出对1～3岁且由ImmunoCAP法判断为2级以上的256名婴幼儿使用五种(A～D)不同的参数以OFC阳性、阴性检测鸡蛋过敏(EA)的有(+)无(-)的结果，以及关于有鸡蛋过敏(OFC阳性)者对基于OFC的全身性过敏反应(AN)的有(+)无(-)检测显著差异的结果，所述参数为：(A)CAP OVM sIgE(UA/mL)、(B)DCP OVM sIgE(BUe/mL)、(C)DCP OVM sIgE/DCP OVMsIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]、(D)DCP OVM sIgE IC50(nM)、(E)1/DCP OVM sIgE IC50(nM)。

图8示出对1～3岁且由ImmunoCAP法判断为2级以上的256名婴幼儿，使用五种不同的参数，根据基于OFC的全身性过敏反应发作诊断，对被诊断为全身性过敏反应(AN)发作者(+)的受试者与被诊断为AN未发作者(-)的受试者进行ROC分析的结果，所述参数为：CAPOVM sIgE(UA/mL)、DCP OVM sIgE(BUe/mL)、DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]、DCP OVM sIgE IC50(nM)、1/DCP OVM sIgE IC50(nM)。

具体实施方式

作为本发明的、收集用于预测患有食物过敏的婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应风险的数据的方法，只要是以通过基于采集自患有食物过敏的婴幼儿/儿童的试样中的IgE抗体对于过敏原的亲和力的ROC分析所决定的临界值为判定基准的方法即可，无特别限制；作为通过基于IgE抗体对于过敏原的亲和力的ROC分析所决定的临界值，可以举出以对IgE抗体对于过敏原的抗体效价乘以IgE抗体对于过敏原的亲和力而得的值为参数通过ROC分析所决定的临界值，和以IgE抗体的IC50为参数通过ROC分析所决定的临界值，也可以将这两种临界值并用来判断。此外，本发明的方法还包括非医疗性地进行的情况，即非医疗性地收集数据的方法，并且还包括除医生行为以外的、收集用于预测患有食物过敏的婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应风险的数据的方法。作为上述食物过敏，可以举出因能成为过敏原的特定食物引起的过敏反应，作为全身性过敏反应，可以举出在过敏反应中特别严重的、能危及生命的超敏反应。

上述过敏原是指引起过敏原致敏或诱发过敏反应甚至全身性过敏反应的抗原。具体而言，只要是能够在人体内诱导产生IgE抗体的任意的抗原蛋白质或肽、其他糖链、核酸等即可，没有特别限定，可以例示蛋类、牛奶类、牛肉等肉类、鲑鱼、金枪鱼等鱼类、虾、蟹等贝类和软体动物类、谷物类、豆类和坚果类、果实类、蔬菜类、啤酒酵母、明胶等的成为食物过敏原的成分，其中，作为主要的过敏原可以举出：αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、α-乳白蛋白、作为乳清过敏原主要成分的β-乳球蛋白(BLG)等的奶过敏原、卵类粘蛋白(OVM)、卵白蛋白(OVA)、伴清蛋白或作为它们的混合物的蛋清过敏原(EW)、蛋黄过敏原和它们混合而成的蛋过敏原、麦醇溶蛋白、谷蛋白等小麦过敏原、荞麦过敏原、Arah1等花生过敏原、11S球蛋白等芝麻过敏原、原肌球蛋白等贝类过敏原。

上述过敏原致敏，是指当过敏原进入体内时、将其视为异物并试图将其排除的免疫功能发挥作用、产生识别并结合过敏原的IgE抗体的状态，将该状态称为对于该过敏原致敏或者发生过敏原致敏，但仅通过过敏原致敏不一定发生过敏反应。

作为上述过敏反应，可以举出在发生了上述过敏原致敏的状况下、当过敏原再次侵入时肥大细胞上的IgE抗体与过敏原结合而从肥大细胞释放组胺等化学递质的反应，将由所述过敏反应引起的症状称为过敏症状。

作为上述过敏症状可以举出：皮肤瘙痒、荨麻疹、血管水肿、发红、湿疹等皮肤症状；结膜充血/水肿、瘙痒、流泪、眼睑水肿等眼部症状；打喷嚏、流鼻涕、鼻塞等鼻部症状；口腔/嘴唇/舌头不适/肿胀、喉咙发痒/肿胀感等口腔咽喉症状；腹痛、恶心、呕吐、腹泻、血便等消化系统症状；咽部绞窄感、咽部水肿、嘶哑、咳嗽、喘鸣、呼吸困难和哮喘等呼吸系统症状；过敏性休克心动过速、虚脱、意识障碍和血压下降等全身症状等。

在本发明中的试样，只要是采集自患有过敏的婴幼儿/儿童中的试样即可，没有特别限定，可以举出采集自患者的血液、血清、血浆、唾液、泪液、鼻涕、尿等体液，优选为血清、血浆。在使用血清作为试样时，例如可以从患者的肱静脉采血，将获得的血液在4℃下静置一晚后，进行离心分离，将其上层清液作为血清使用。或者，也可以将以微创方式用微量采血针等对耳朵或者指尖穿刺而得的50～100μL的微量血液用微毛细管采集后直接使用。

上述患有食物过敏的婴幼儿/儿童，是1岁零个月(1岁)～12岁的婴幼儿/儿童，优选为1～6岁的婴幼儿/儿童，更优选为1～3岁的婴幼儿，可以举出因摄入食物过敏原而明确出现过敏症状的婴幼儿/儿童，或通过公知方法判定为是过敏阳性、患有食物过敏的婴幼儿/儿童。此外，也包括虽然明显对于过敏原致敏且有可能发生过敏但却并未出现过敏症状的婴幼儿/儿童，可以包括通过作为以往的食物过敏确定诊断法的OFC确定为非过敏阳性者的婴幼儿/儿童。

作为判定为上述婴幼儿/儿童患有食物过敏的具体方法，可以举出在皮肤点刺试验、嗜碱性粒细胞活化试验、公知的IgE检测法、OFC中，基于各个方法中的基准而确定是否患有过敏的方法。

[IgE抗体效价的测定]

作为定量测定上述IgE抗体的抗体效价的方法，包括上述公知的IgE检测法，只要是能够检测出试样中的对于过敏原的IgE抗体并定量测定IgE抗体效价的方法即可，没有特别限定，优选可以举出在载体上进行的使用标记二抗的ELISA方法。作为ELISA法中的载体，可以举出市售的ELISA芯片、因在非特异性吸附少这一点上有利而在载体表面形成有碳层的芯片、因有利于固定肽而导入了化学修饰基团的芯片或进行了活化处理的芯片，其中，优选地可以举出DCP芯片。此外，作为上述公知的IgE检测法，可以举出使用上述DCP芯片的DCP法、ImmunoCAP法、Alastat3g、ImmunoFastCheck、Oriton IgE等。另外，在计算IgE的抗体效价时，从在检测线精度范围内以更高精度进行测定的观点考虑，优选的是，将血清等血液试样稀释为1～数十倍、优选稀释为1.1～10倍、更优选稀释为1.5～5倍后对IgE抗体效价进行定量，在这种情况下，需要在通过使用DCP芯片的DCP法等测定IgE抗体效价后，乘以血液试样的稀释倍率，最终决定IgE抗体效价。

[DCP法]

在上述DCP法中，作为判断目标婴幼儿/儿童是否患有过敏的方法，可以基于目标婴幼儿/儿童的血液试样中的IgE抗体的产生程度即IgE抗体效价来判断，具体而言，虽然数值因过敏原而异，但若以卵粘蛋白(OVM)为例，则可以举出在该数值为800BUe/mL以上、优选为1000BUe/mL以上时判顶为患有过敏的方法。

作为上述DCP法，可以举出使用DCP芯片通过ELISA法测定IgE抗体的方法，作为上述DCP芯片可以举出：在对硅基板表面将碳层进行DLC(类金刚石碳)处理后的基板表面、或者载玻片的表面上施加处理过含氨基化合物或其聚合物和/或共聚物的静电层，进而再次处理二羧酸或多羧酸等后，用N-羟基琥珀酰亚胺和/或碳二亚胺类活化后得到的芯片；或者在载体表面或者上述碳层中导入了化学修饰基团后的芯片；或者进一步进行了活化处理后的芯片等。

作为上述标记二抗，可以举出HiLyte Fluor 555、Atto 532、Cy3、Alexa Fluor555、Cy5、FITC和罗丹明等的荧光标记二抗，过氧化物酶、碱性磷酸酶等的酶标记二抗，磁珠标记二抗，红外标记二抗，标记抗人IgE抗体。作为上述二抗，也可以使用抗体的Fab片段、F(ab')₂片段等，Fab片段可以通过将抗体用木瓜蛋白酶等处理来调制，F(ab')₂片段可以用胃蛋白酶等处理来调制。

[ImmunoCAP法]

在上述ImmunoCAP法中，作为判断目标婴幼儿/儿童是否患有过敏的方法，可以举出如下方法：进行分类，将IgE抗体效价小于0.35UA/mL者设为0级，将IgE抗体效价为0.35～0.69UA/mL者设为1级，将IgE抗体效价为0.70～3.49UA/mL者设为2级，将IgE抗体效价为3.50～17.49UA/mL者设为3级，将IgE抗体效价为17.50～49.99UA/mL者设为4级，将IgE抗体效价为50.00～99.99UA/mL者设为5级，将IgE抗体效价为100UA/mL以上者设为6级；判定0级为阴性，无过敏原致敏；判定1级为假阳性，有过敏原致敏但无过敏症状，判定2级以上为阳性。IgE抗体效价单位“UA/mL”是由开发ImmunoCAP法的Phadia公司独自设定的、对于过敏原产生的IgE抗体效价的单位，就量而言，与IU/mL相同。

[OFC]

根据儿童过敏学会食物过敏委员会的《食物过敏诊疗指南2016年摘要版，第7章》(https://www.jspaci.jp/allergy_2016/chap07.html)中的定义，上述OFC是指通过单次或分多次摄入确定或疑似导致过敏的食物来确认有无症状的检查。将单次摄入或分次摄入的目标食物的总量称为总负荷量。作为摄入间隔和分次方法的例子，有摄入间隔为20～60分钟、在1～2小时内分1～5次逐渐增加摄入量的方案，可以举出如下：在2次的情况下，每60分钟摄入总摄入量的1/4(第1次)、总摄入量的3/4(第2次)，或摄入总摄入量的1/3、2/3；在3次的情况下，每30～60分钟摄入1/8、3/8、1/2；在5次的情况下，每20～40分钟摄入1/16、1/16、1/8、1/4、1/2；在6次的情况下，摄入2/100、4/100、8/100、16/100、32/100、38/100等。但以婴幼儿为对象，虽说医生在场为前提，但因为是发生全身性过敏反应的可能性较高的试验，所以慎重起见而优选的是使次数更多，分成5次或6次以上，逐渐增加负荷量。

作为上述总负荷量，可以例示：在鸡蛋的情况下，1岁儿童为1/2个，2岁以上儿童为鸡蛋1个；在牛奶的情况下，1岁儿童为50ml，2岁以上儿童为200ml；在小麦的情况下，为面条50g，2岁以上儿童为200g。

在上述OFC中，判定为过敏阳性的基准如下。

(A)自过敏负荷开始后数分钟或数小时以内

皮肤症状—瘙痒、荨麻疹、红斑、血管水肿；以及

粘膜症状—结膜充血、流鼻涕、打喷嚏、咽部不适；中的一种以上

(B)自过敏负荷开始后数分钟或数小时以内

呼吸系统症状—咳嗽、喘鸣；

消化系统症状—腹痛、呕吐、腹泻；以及

全身症状—脸色苍白、血压降低、意识水平降低；中的一种以上

(C)自过敏负荷开始后数分钟或数小时以内

与儿童年龄对应的收缩压降低30％以上

当符合上述(A)、(B)、(C)的一种以上时，判定对于该特定过敏原为过敏阳性。

此外，判定发生全身性过敏反应的基准如下。

“1自过敏原负荷开始后数分钟或数小时以内出现皮肤或粘膜症状(例如：全身性荨麻疹、瘙痒、潮红、嘴唇/舌头/悬雍垂肿胀)且满足以下A)或B)中的一种以上。

A)呼吸障碍(例如：呼吸困难、呼气性喘鸣、吸气性喘鸣、PEF(呼气峰流速)降低、低氧症)

B)血压下降或相关器官衰竭(例如：低血压、虚脱、昏厥、失禁)

2自过敏原负荷开始后数分钟或数小时以内出现以下所示的C)～F)中的2种以上症状

C)出现皮肤或粘膜症状(例如：全身性荨麻疹、瘙痒、潮红、嘴唇/舌头/悬雍垂肿胀)

D)呼吸障碍(例如：呼吸困难、呼气性喘鸣、吸气性喘鸣、PEF(呼气峰流速)降低、低氧症)

E)血压下降或相关器官衰竭(例如：低血压、虚脱、晕厥、失禁)

F)持续的消化道症状(例如：疝痛、呕吐)”

本发明中用于预测患有食物过敏的婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应的风险的判断基准，只要是使用IgE抗体对于过敏原的抗体效价和IgE抗体对于过敏原的亲和力制作的基准即可，没有特别的限制，但是，优选使用对IgE抗体的抗体效价乘以IgE抗体的亲和力(1/IC50)而得的值。

[IgE抗体对于过敏原的亲和力的计算]

作为本发明中的IgE抗体对于过敏原的亲和力的值，可以举出IgE抗体的被数值化为IC50或1/IC50的值。IC50值是有时也被称为竞争性结合抑制活性值的数值，例如，作为固相化过敏原和可溶性过敏原之间的竞争性结合抑制活性，可以通过计算表示将抗原抗体结合反应抑制50％的过敏原浓度的值而得到。根据该计算方法，即使存在识别相同抗原的IgE以外的IgG、IgA、IgD和/或IgM抗体，也能够进行IC50值的评价，在这一点上是优选的。

作为上述IgE抗体的IC50值的计算方法，只要是基于能够实施IgE抗体的竞争结合化验的方法即可，没有特别限定，可以举出基于ELISA等生化化验的测定方法。对于单克隆抗体和纯化的IgE抗体，还可以举出能够使用表面等离子共振技术测量相互作用程度的Biacore、基于等温滴定量热法等的亲和力测定法。

作为通过上述ELISA计算IC50值的方法，可以举出使用蛋白质改性剂作为使抗原和抗体之间减小分子间吸引力的离液剂(Caotropic agent)来测定IgE抗体对于过敏原的亲和性的方法，或者通过竞争性ELISA进行测定的方法。由于离液剂不仅是对于抗体、还可能会导致抗体和抗原的分子间吸引力的减小，并且由于根据作为试样使用的血清的稀释倍率，即使离液剂的浓度相同抗原抗体结合抑制效果也变化，所以不能说重现性高。另一方面，通过使用添加各种浓度的过敏原进行的竞争性结合抑制反应法的竞争性ELISA所进行的IC50值的测定，因为根据试样的稀释倍率而IC50值变化的情况较少，所以重现性高，能够进行不同过敏原之间的IC50值的相互比较，能够定量地比较抗体对于过敏原的总结合活性，所以在这一点上是优选的。因此确认了如下事实：在计算IC50值时，即使在稀释了血浆或血清等血液试样的情况下，也无需乘以试样的稀释倍率。使用竞争性结合抑制反应法的ELISA的具体步骤的例子如下所示。

(前阶段反应)

向含有与抗原特异性过敏原结合的IgE抗体的试样中添加被阶段性地调制好的已知浓度的过敏原作为竞争性结合抑制物质，使其反应一定时间，所述被阶段性地调制好的已知浓度的过敏原，是被阶段性地调制成从浓度0(试样中不存在作为竞争性结合抑制物质的抗原)到在一定时间内过敏原能够与所有IgE抗体全部结合的充分的浓度。

作为上述前阶段反应中的一定时间，例如可以举出15分钟～2小时，优选30分钟～1小时。此外，作为上述被阶段性调制好的已知浓度，可以使用本领域人员根据试样中存在的抗体量等而适当选择的浓度，例如作为向血清或血浆中添加的用于竞争抑制的阶段性的过敏原浓度(最终浓度)的例子，可以举出0nM、0.1nM、1.0nM、10nM、100nM、1000nM的组合，或者0nM、0.1nM、1.0nM、10nM、100nM、200nM的组合等，但并不限于这些浓度。另外，对于分子量明确的过敏原，优选进行使用竞争性结合抑制反应法的ELISA，但对于分子量未知且不能通过摩尔浓度调整过敏原浓度的过敏原，可以通过mg/mL、μg/mL等的单位来调整上述阶段性的过敏原浓度。

(竞争性结合抑制反应)

将上述前阶段反应后的溶液提供到固化有过敏原的载体上，通过使上述前阶段反应后的溶液中游离的IgE抗体(一抗)与被固化的过敏原结合等的方法使其反应，然后经过去除一抗和清洗过程后，再使其与标记二抗反应，计算出结合的IgE抗体的结合量。

上述50％抑制抗原抗体结合反应的过敏原的浓度即“IC50”，在上述前阶段反应中，在设对于不存在竞争过敏原的浓度为0的溶液检测出的标记二抗的标记量为100％时，可以表现为上述标记量为50％时的抗原浓度(half maximal inhibitory concentration：50％抑制浓度)。

如前所述，IgE抗体对于过敏原的亲和力可以基于IC50值，用作为IC50值的倒数的“1/IC50”来表现。在使用上述竞争性结合抑制反应法的ELISA中，当试样中的IgE抗体的亲和性更低时，前阶段反应后的溶液中存在的游离IgE一抗的量更多，所以与被固化的过敏原结合的抗体量变多，IC50值更大。另一方面，在试样中的IgE抗体的亲和性更高时，前阶段反应后的溶液中存在的一抗的量更少，所以与被固化的过敏原结合的IgE抗体量变少，IC50值更小。因此，为了在IgE抗体的亲和性更低时将亲和力设为较低的数值、在IgE抗体的亲和性更高时将亲和力设为较高的数值，方便起见，有时使用IC50值的倒数。特别是，在对IgE抗体效价乘以IgE的抗原亲和性(亲和力)来进行评价时，使用IC50值的倒数。

作为计算亲和力时的所述标记二抗，可以举出HiLyte Fluor 555、Atto532、Cy3、Alexa Fluor 555、Cy5、FITC、罗丹明等荧光标记二抗，过氧化物酶和碱性磷酸酶等酶标记二抗，磁珠标记二抗，红外标记二抗等。此外，作为上述二抗，也可以使用抗体的Fab片段、F(ab')₂片段等，Fab片段可以通过用木瓜蛋白酶等处理抗体而得到，F(ab')₂片段可以通过用胃蛋白酶等处理而得到。

作为上述固化有过敏原的结合灵敏度高的载体，可以举出市售的ELISA用芯片、因在非特异性吸附少这一点上有利而在载体表面形成有碳层的芯片、因有利于固定肽而导入了化学修饰基团的芯片、进行了活化处理的芯片，其中，优选的是DCP芯片。

作为上述固化有过敏原的芯片以及使用它的IgE抗体的定量测定方法，可以使用公知的芯片和方法，例如可以包括使用日本特开2006-267058号公报、日本特开2006-267063号公报和日本特开2015-169616号公报中记载的芯片即上述DCP芯片的方法。

[ROC分析]

作为本发明中的根据IgE抗体的抗体效价和IgE抗体对于过敏原的亲和力而制作的判定基准，只要是能够预测婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应风险的判定基准即可，无特别限制。优选可以举出，以“对IgE抗体的抗体效价乘以IgE抗体对于过敏原的亲和力而得的值”为参数，使用通过ROC分析确定的临界值来进行预测。

所述ROC是被译为接收者操作特征或接收者动作特征等的词语，是用于自变量对作为二分变量的输出量的预测能力的比较或设定自变量对输出量的临界值的方法。

本发明中，作为进行自变量对作为二分变量的输出量的预测能力的比较的方法，例如可以举出如下方法：在不同的n种参数中，如果分别改变作为全身性过敏反应的阈值的设定，则与之相应地，对于全身性过敏反应阳性者的真阳性率和假阳性率会发生变化。当将真阳性率和假阳性率以真阳性率为纵轴、以假阳性率为横轴制图来制作n种ROC曲线时，其曲线下方面积(AUC)越大，参数越优，评价为预测能力越高。

作为上述ROC曲线的制作方法，可以举出如下的方法：在选择了某个参数的情况下，例如在受试者分类中关于全身性过敏反应阳性值进行了任意的阈值设定时，如果将把全身性过敏反应阳性受试者正确分类为Y的情况表示为TY，将把全身性过敏反应阳性受试者错误分类为Y的情况表示为FY，将把全身性过敏反应阴性受试者正确分类为N的情况表示为TN，将把全身性过敏反应阴性受试者错误分类为N的情况表示为FN，设将阳性者正确分类为阳性时的真阳性率(灵敏度)＝TY/(TY+FN)，设将阴性者分类为阳性时的假阳性率(1-特异性)＝FY/(FY+TN)，则对于某个阈值，可以标绘出(真阳性率，假阳性率)、即(灵敏度，1-特异性)，进而，通过设定各种阈值并进行大量标绘，来制作ROC曲线。

作为在上述ROC分析中设定临界值的方法，只要是能够提高预测能力的方法即可，没有特别限制，可以例示将灵敏度-(1-特异性)最大的值确定为临界值的方法，该临界值的设定也可以使用以下所示的ROC分析设备或市售软件通过公知的次序来决定。

ROC分析也可以使用公知的市售的分析设备进行，例如可以使用GraphPad Prismver.5.4(GraphPad公司)和JMP14(jmp.Statistical Discovery.^TM)等的软件来进行。

以下，通过实施例更具体地说明本发明，但本发明的技术范围不限于这些示例。

实施例

[实施例1]

(样本)

本实施例中的研究获得德岛大学伦理委员会的批准(#175-4)，于2012年8月至2019年1月期间，在德岛大学、德岛大学相关医院的健康保险鸣门医院和国立医院机构三重医院进行。

研究是对已被证实对鸡蛋有过敏原致敏或过敏、或被怀疑有对鸡蛋的过敏的1岁0个月至6岁的婴幼儿，在充分知情告知的情况下获得父母双方或父母某一方同意后进行的。此外，OFC是根据日本儿童过敏学会食物过敏委员会、食物过敏诊疗指南2016以及协和企划指南进行的。

受试婴幼儿的选择基准如下所示。

(1)经证实对鸡蛋有过敏原致敏、并且在实施OFC前进行6个月以上的无鸡蛋饮食的婴幼儿。

(但是，在实施OFC前3个月内为诊断目的而实施了加热鸡蛋OFC的婴幼儿除外。)

(2)经证实对鸡蛋有过敏原致敏、在即将实施OFC之前或实施4个月内进行血液检查、通过ImmunoCAP法或DCP法测定了卵类粘蛋白特异性IgE的婴幼儿。

根据这个标准，选出472人。

(过敏原的选择)

已知作为鸡蛋成分的卵清蛋白因加热会失去作为过敏原的活性，因此，在本次研究中，通过在OFC中摄入加热鸡蛋粉，以即使加热也不会丧失过敏原活性的卵类粘蛋白(OVM)作为指标，对患有鸡蛋过敏的受试婴幼儿有无全身性过敏反应发作进行研究。

对于上述472名受试婴幼儿，将自OFC的4周前到OFC实施日为止的从所有受试者采取的血清在低于-30℃下保存，使其直到分析为止不冻融。在进行OFC之前，通过利用常用的ImmunoCAP法(Phadia公司)的血液检测来测定针对卵粘蛋白(OVM)的IgE抗体的产生程度，将其分成级别0～6。本发明中，由于以验证IgE抗体亲和力测定在全身性过敏反应发作诊断中的有用性为目的，所以排除了IgE抗体效价低而难以测量亲和力的0级阴性者和1级假阳性者，对于判定为对卵类粘蛋白发生过敏原致敏且对亲和力的值能够计算出50％抑制抗原抗体结合反应的过敏原浓度的343名2级以上婴幼儿进行OFC。

(OFC的实施)

在上述ImmunoCAP法中，将通过对于对343名被确定为对OVM为过敏原致敏阳性的2级以上的婴幼儿进行OFC而实施了有无鸡蛋过敏的确定诊断后的样本用于亲和力的测定。OFC的实施方法基于Furuya K et al.,Allergy.2016；71:1435-1443和日本儿童过敏学会食物过敏委员会、食物过敏诊疗指南2016以及协和企划指南中记载的方法。

具体而言，将受试婴幼儿根据按年龄确定的可摄食量分为1岁儿童组和2～6岁儿童组。1岁儿童的OFC中的鸡蛋的总负荷量为6.5克加热鸡蛋粉(丘比株式会社)(相当于1/2个鸡蛋)。2～6岁儿童的OFC中的鸡蛋的总负荷量为13克加热鸡蛋粉(相当于一个鸡蛋)。

将上述总负荷量分为2/100、4/100、8/100、16/100、32/100、38/100这6个阶段，通过逐渐增加负荷量，以15～30分钟的间隔分6次使受试婴幼儿摄入加热鸡蛋粉，以此方法来进行试验。即，1岁儿童以0.13克、0.26克、0.52克、1.04克、2.08克、2.47克的顺序以15～30分钟的间隔分6次摄入加热鸡蛋粉。2～6岁的儿童以0.26克、0.52克、1.04克、2.08克、4.16克、4.94克的顺序以15～30分钟的间隔分6次摄入加热鸡蛋粉。

应予说明，为了不被发现是鸡蛋和为了修正每次摄入的摄入量增加的不同，将上述加热鸡蛋粉作为添加了南瓜或红薯粉的混合粉末提供给各婴幼儿。

当摄入了加热加蛋粉的婴幼儿符合如下所示基准时，在OFC中确定为对鸡蛋的过敏是阳性。在不符合如下所示基准时，确定为对鸡蛋的过敏是阴性。

(过敏阳性的确定基准)

(A)自加热鸡蛋粉负荷开始后数分钟或数小时以内，

皮肤症状—瘙痒、荨麻疹、红斑、血管水肿；以及

(B)自加热鸡蛋粉负荷开始后数分钟或数小时以内，

呼吸系统症状—咳嗽、喘鸣；

消化系统症状—腹痛、呕吐、腹泻；以及

(C)自加热鸡蛋粉负荷开始后数分钟或数小时以内

与儿童年龄对应的收缩压降低30％以上

当符合上述(A)、(B)、(C)的一种以上时，确定对于鸡蛋的过敏为阳性。

(全身性过敏反应发作的确定基准)

根据World Allergy Orhan J.2011；4:13-37世界过敏组织全身性过敏反应指南(World Allergy Organization Anaphylaxis Guidelines)中对诊断全身性过敏反应的标准(Criteria for Diagnosing Anaphylaxis)的记载，当满足以下1～3的基准中的任一项以上时，判定为发生了全身性过敏反应。

1自加热鸡蛋粉负荷开始后数分钟或数小时以内出现皮肤或粘膜症状(例如全身性荨麻疹、瘙痒、潮红、嘴唇/舌头/悬雍垂肿胀)且满足以下A)或B)中的一种以上。

2自加热鸡蛋粉负荷开始后数分钟或数小时以内出现以下所示的C)～F)中的2种以上症状

F)持续的消化道症状(例如：疝痛、呕吐)

3自加热鸡蛋粉负荷开始后数分钟或数小时以内出现与年龄相对应的收缩压降低、或者收缩压降低30％以上时。

将在上述OFC中被判断为阳性的婴幼儿诊断为有鸡蛋过敏，将在OFC中被判断为阴性的婴幼儿诊断为没有鸡蛋过敏。此外，在被诊断为有鸡蛋过敏的受试婴幼儿中，将表现出全身性过敏反应的婴幼儿称为有全身性过敏反应(AN+)，将没表现出全身性过敏反应的婴幼儿称为无全身性过敏反应(AN-)。此外，对于受试婴幼儿，还记载了通过实施OFC之前进行的利用ImmunoCAP法的血液检验而进行了分类的级别。结果如表1所示。

[表1]

患者背景：级别2-6、1-6岁(343例)

(M：男童F：女童。上部分的(％)表示相对于全部343例的比例，下部分的(％)表示相对于有鸡蛋过敏的204例的比例。)

(结果1)

根据表1明确可知，在343名进行了上述借助加热鸡蛋粉的OFC的1～6岁婴幼儿中，被确定为是OFC阳性且是鸡蛋过敏的有204名。另一方面，被确定为是OFC阴性而非鸡蛋过敏的有139名。此外，在204名被确定为鸡蛋过敏的婴幼儿中，被判定为发生全身性过敏反应的有38名，被判定未发生全身性过敏反应的有166名。

因此，在实施了OFC的1～6岁婴幼儿中，有59.5％被确定为鸡蛋过敏，40.5％被确定为非鸡蛋过敏。应予说明，在前阶段进行的ImmunoCAP法中，被判定为卵类粘蛋白致敏是阳性且被分类为2～6级的婴幼儿中的男女比例为男孩66.5％、女孩33.5％，男孩显著地表现出高值。但是，在通过OFC进行的鸡蛋过敏的确定诊断中，在有鸡蛋过敏、无鸡蛋过敏、有鸡蛋过敏且AN+、以及有鸡蛋过敏且AN-的各自的男女比例中未看出显著的差异。此外，在确定为鸡蛋过敏的婴幼儿中，呈现严重症状的AN+的婴幼儿占18.6％。尽管确认了是鸡蛋过敏，但AN-的婴幼儿过敏症状并不是能够危及生命的超敏反应状态。

(结果2)

表2仅显示了上述受试婴幼儿中由于免疫系统不发达而在日常诊疗中难以进行过敏诊断的1～3岁受试婴幼儿的数据。

[表2]

患者背景：级别2-6、1-3岁(256例)

(AN+：有全身性过敏反应、AN-：无全身性过敏反应M：男童 F：女童。上部分的(％)表示相对于所调查的全部256例的比例，下部分的(％)表示相对于被判定为有鸡蛋过敏的147例的比例。)

由表2明确可知，在256名进行了上述借助加热鸡蛋粉的OFC的1～3岁婴幼儿中，被确定为是OFC阳性且是鸡蛋过敏的有147名。另一方面，被确定为是OFC阴性而非鸡蛋过敏的有109名。此外，147名确定为鸡蛋过敏的婴幼儿中，被判定发生全身性过敏反应的有28名，被判定未发生全身性过敏反应的有119名。

因此，在实施了OFC的1～3岁婴幼儿中，有57.4％被确定为鸡蛋过敏，有42.6％被确定为非鸡蛋过敏。此外，在被确定为鸡蛋过敏的婴幼儿中，呈现严重症状的AN+的婴幼儿占19.0％。尽管确认了是鸡蛋过敏，但AN-的婴幼儿过敏症状并不是能够危及生命的超敏反应状态。综上确认，免疫系统未成熟的1～3岁婴幼儿中确定了鸡蛋过敏的婴幼儿中发生全身性过敏反应的婴幼儿的比例与1～6岁婴幼儿的情况相比没有显著差异。

[实施例2]

[OVM特异性IgE抗体效价的基于DCP法的测定]

对于上述343名1～6岁婴幼儿，使用在进行OFC前采集的血清试样，作为抗原蛋白，将鸡蛋中所含的分子量的公知为明确过敏原的OVM(Sigma公司制造)作为抗原而固化在DCP芯片上，测定与OVM结合的IgE抗体量，作为OVM特异性IgE抗体效价。应予说明，在IgE抗体效价的定量时，制作基于购自National Institute for Biological Standards andControl(Hertfordshire,England)的已知浓度的人标准IgE抗体(75/502)的荧光强度检量线，使用DCP芯片测定OVM特异性IgE抗体效价(BUe/mL)。

[OVM固化DCP芯片的制造]

(芯片的活化)

将对由玻璃基板构成的DCP芯片施设含氨基静电层、进而导入了带有由聚丙烯酸带来的负电荷的羧基的基板在化学交联剂(100mM WSC·HCl、100mM NHS、0.1M磷酸钾缓冲液(pH6.0))中，在遮光状态下于室温下一边振荡30分钟一边进行活化处理。将反应后的化学交联剂弃去后，将基板用MilliQ水一边振荡一边进行两次1分钟的洗涤，然后立即使用台式离心机(Allegra^TMX-22R Centrifuge，Beckman Coulter公司制造)除去水分，制得活化芯片。

(OVM的偶联反应)

将作为抗原蛋白的OVM(Sigma公司制造)以0.2～2.0mg/mL的浓度溶解在添加了5％～30％DMSO或5％～30％PEG300的溶液中，制得抗原蛋白溶液。将制得的抗原蛋白溶液分注到平底的384孔板(康宁公司制造)上，通过微阵列制作装置(OmniGridAccent，DIGILAB公司制造)在上述活化芯片上形成4nL点后，以15℃～30℃干燥1～18小时，将OVM抗原蛋白固化。图2示出了固化有OVM的DCP芯片的示意图。

(未反应活性基团的封闭反应)

对于上述作为抗原蛋白而固化了OVM的芯片向反应孔槽(孔)添加封闭试剂Blockmaster(JSR公司)，在遮光下以冷藏(4℃)静置，使其进行过夜反应。用抽吸器(VARIABLE SPEED PUMP、BIORAD公司制造)抽吸除去上述封闭试剂后，再次移至反应板上，添加10mL清洗液(50mM TTBS)后，振摇5分钟，然后用抽吸器抽吸除去清洗液。同样清洗3次后，再用纯净水(MilliQ水)清洗3次。使用离心机(Allegra(商标)，X-22R Centrifuge(BECKMAN COULTER公司制造))进行离心水滴去除操作(以2000rpm进行1分钟)，去除芯片表面的水滴，制得OVM固化DCP芯片。

(一抗反应)

用样品稀释液(20mM磷酸盐缓冲液，pH7.4/0.3M KCl/0.05％Tween20)适当稀释各受试婴幼儿的血清试样，制备血清稀释溶液(一抗溶液)，向反应孔槽添加10μL该稀释试样，在避光下以37℃静置2小时。

(与二抗的反应)

用抽吸器(VARIABLE SPEED PUMP、BIORAD公司制造)抽吸除去通过上述操作获得的稀释试样后，将芯片移至清洗盒中，添加10mL清洗液(TTBS：50mM Tris-HCl，pH7.5，150mMNaCl,0.95％Tween20),然后使用Double-Shaker NR3在5分钟重复3次清洗操作来进行清洗，然后再加入纯净水(MilliQ水)，在1分钟进行3次清洗。用上述离心机进行离心水滴去除(以2000rpm进行1分钟)，将芯片表面的水滴去除。接着，制备经荧光标记的二抗(HiLyteFluor(商标)或555connected antibody human IgE(HyTest公司)(稀释液，IMMUNO SHOTPlatimun/1％BSA，最终稀释浓度10μg/mL))作为二抗溶液。向载玻片上的各反应孔槽分注10μL该二抗溶液，在避光下以37℃静置2小时。

(被抗原捕获的一抗的检测)

用抽吸器抽吸除去上述稀释二抗溶液后，将芯片放入清洗盒中，使用Double-Shaker NR3(TAITEC公司制造)在5分钟重复进行3次清洗操作。然后，加入纯净水(MilliQ水)在1分钟进行3次冲洗，用上述离心机除去水滴并干燥。用荧光扫描仪(3D GeneScanner，东丽公司制造)测定荧光强度(Ex：532nm，Em：570nm)，并将从各芯片获得的斑点的荧光强度进行数值化。作为通过抗原抗体反应而与抗原结合的IgE抗体效价，以结合单位(BUe)表示测定单位，并根据固化在芯片上的已知浓度的各标准抗体的荧光强度检测线进行测定并表示。以下表述为1BUe＝2.4ng。

[实施例3]

[OVM特异性IgE抗体的亲和力测定]

对于上述343名1～6岁的婴幼儿，使用在进行OFC之前采集的血清试样和作为抗原蛋白的OVM(Sigma公司制造)，测定了OVM特异性IgE抗体对OVM的亲和力。

使用OVM固化DCP芯片进行以下反应。

(一抗反应)

用样品稀释液(20mM磷酸盐缓冲液，pH7.4/0.3M KCl/0.05％Tween20)适当稀释各受试婴幼儿的血清试样，例如稀释为2.5倍，制备血清稀释溶液(一抗溶液)，测定抗体效价。接着，重新调整所得的稀释液的抗体效价，以使得依赖于所添加的可溶性抗原量的竞争性结合抑制活性(亲和力)在可检测的范围内。具体而言，进行调整以使得OVM IgE所表示的荧光强度的下限值>测定界限值(空白+5SD)、荧光强度的上限值为5000以下的范围。此外，制备了用上述样品稀释剂调整为0、0.2、2.0、20、100和200nM的6阶段浓度的6种OVM溶液作为竞争性结合抑制物质。就IC50值而言，在测定样本中含有的IgE抗体与固化在芯片上的OVM抗原的抗原抗体反应时，进行前阶段反应，所述前阶段反应是将各种浓度的可溶性OVM即预先将上述6种OVM溶液以每种6μL分别添加到上述血清稀释液(6μL)中(共12μL)，在25℃下使其反应30分钟。在反应后，对于各个前阶段反应液采集10μL，添加到OVM固化DCP芯片上，在避光下于37℃静置2小时。应予说明，上述空白+5SD表示检测界限下限值，具体而言，将在仅缓冲液的无样本血清的条件下、来源于反应液中所含的荧光标记二抗与抗原非特异性结合的荧光强度设为空白值。就所述荧光强度而言，重复测定5次并计算出荧光强度的标准偏差(SD)值，将表示空白+5SD(检测界限下限值)以上的荧光强度的情况设为来源于样品的IgE的荧光强度。

(与二抗的反应)

用抽吸器(VARIABLE SPEED PUMP、BIORAD公司制造)抽吸除去在DCP芯片上进行了反应的血清稀释溶液后，将芯片移至清洗盒中，添加10mL清洗液(50mM TTBS),然后使用Double-Shaker NR3在5分钟重复3次清洗操作来进行清洗，然后加入纯净水(MilliQ水)在1分钟进行3次清洗。用上述离心机进行离心水滴去除(以2000rpm进行1分钟)而将芯片表面的水滴去除。接着，制备经荧光标记的二抗(HiLyte Fluor(商标)或555connectedantibody human IgE(HyTest公司)(稀释液，IMMUNO SHOT Platimun/1％BSA，最终稀释浓度10μg/mL))。向载玻片上的各反应孔槽分注10μL该二抗溶液，在避光下在37℃静置2小时。

然后，用抽吸器抽吸除去后，将芯片移至清洗盒中，添加10mL清洗液(50mM TTBS),使用Double-Shaker NR3在5分钟重复进行3次清洗操作，然后，加入纯净水(MilliQ水)在1分钟进行3次清洗。用上述离心机进行离心水滴去除(以2000rpm进行1分钟)而将芯片表面的水滴去除。将残存荧光量用荧光扫描仪(3D Gene Scanner，东丽公司制造)测定荧光强度(Ex：532nm，Em：570nm)，由此进行从各芯片获得的斑点的荧光强度的数值化。对于各受试婴幼儿/儿童，当将不存在OVM的溶液即竞争性结合抑制物质的浓度为0的情况下的荧光强度设为100％时，将表示荧光强度为50％的OVM浓度表示为“IC50值”。

[ROC分析]

[参考例1]

对在[实施例1]中进行了OFC的1～6岁的婴幼儿(343例)进行ROC分析。基于将OFC阳性诊断为有鸡蛋过敏、将OFC阴性诊断为无鸡蛋过敏的结果，使用迄今为止测定的通过DCP方法测定的OVM特异性IgE效价和OVM特异性IgE的亲和力以及利用ImmunoCAP法测定的OVM特异性IgE效价，对于下述五种参数进行ROC分析。将结果示于图3。此后，ROC分析使用GraphPad Prism ver.5.4(GraphPad公司)、JMP14(jmp.Statistical Discovery.^TM)进行。

(1)对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50值而得的[DCP OVM sIgE/DCP OVMs IgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]]；

(2)通过DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(DCPOVM sIgE IC50(nM))；

(3)通过DCP法测得的OVM特异性IgE的1/IC50值(1/DCP OVMs IgE IC50(nM))；

(4)通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价(DCP OVMs IgE(BUe/mL))；

(5)通过ImmunoCAP法测定的OVM特异性IgE效价(CAP OVMs IgE(UA/mL))；

此外，以343名1～6岁的婴幼儿为对象，根据基于OFC的对于OVM的过敏的确定诊断，对于被诊断为过敏阳性确定者的受试者和被诊断为过敏阴性确定者的受试者，分别对上述五种参数逐一进行ROC分析，计算出AUC值、临界值、灵敏度和特异性。将结果示于表3。

[表3]

①、②、③、④、⑤与图3记载的参数一致。

通过CAP OVM sIgE法(UA/mL)和DCP OVM sIgE法(BUe/mL)测得的OVM特异性IgE效价的AUC值几乎相同。在所研究的五种参数中，对IgE抗体效价乘以OVM亲和力得到的“DCPOVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50”的AUC值最高，为0.79，此时的过敏确定诊断的临界值显示为4459.00(BUe/mL)/(nM)。因此，当对IgE抗体效价乘以OVM亲和力得到的DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50的值显示为临界值以上即4459.00(BUe/mL)/(nM)以上时，可以判定为有鸡蛋过敏的风险较高，当显示小于此临界值时，可以判定为鸡蛋过敏的风险较低。因此，推定将目前为止对怀疑有鸡蛋过敏的患者一律实施的饮食限制仅对风险较高的患者实施、而对风险较低的患者解除等，对于改善患者的生活质量是有利的。另外，如图3下部所示，对IgE定量值乘以OVM亲和力得到的DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50(数量×质量)的AUC值与IC50值或OVM亲和力等单独参数相比，显示出表示显著差异的P值，显示出能够正确地判定有鸡蛋过敏的风险和没有鸡蛋过敏的情况。应予说明，在本说明书中，“OVM sIgE”是指(对)卵类粘蛋白特异性(specific)的IgE。

[参考例2]

在[实施例1]所示的受试者(1～6岁)中，特别以免疫系统发育不全、在日常诊疗中被认为难以诊断过敏的256名受试者(1～3岁)为对象，根据基于OFC的对于OVM的过敏的确定诊断，对于被诊断为过敏阳性确定者的受试者和被诊断为过敏阴性确定者的受试者，对上述五种参数进行ROC分析，将结果示于图4。

此外，以256名1～3岁婴幼儿为对象，根据基于OFC的对于OVM的过敏的确定诊断，对于被诊断为过敏阳性确定者的受试者和被诊断为过敏阴性确定者的受试者，分别对上述五种参数逐一进行ROC分析，计算出AUC值、临界值、灵敏度和特异性。将结果示于表4。

[表4]

①、②、③、④、⑤与图4记载的参数一致。

(结果)

在被认为难以进行过敏诊断的受试者(1～3岁)中，也与受试者(1～6岁)的情况同样地用5种参数进行研究。经确认，在受试者(1～3岁)中，通过ImmunoCAP法(UA/mL)和DCP法测得的OVM特异性IgE值(BUe/mL)的AUC值是与受试者(1～6岁)的情况大致相同的值。在所研究的五种参数中，与其他参数相比，对DCP OVM sIgE值乘以亲和力得到的DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50的AUC值最高，为0.79，此时的过敏确定诊断的临界值显示为1556.70(BUe/mL)/(nM)，为受试者(1～6岁)临界值的35％，显示为低值。另外，如图4下部所示，与受试者(1～6岁)同样，在受试者(1～3岁)中，对IgE定量值乘以OVM亲和力得到的DCP OVMsIgE/DCP OVM sIgE IC50(数量×质量)的AUC值与IC50值或OVM亲和力等单独参数相比，为表示显著差异的P值，显示出能够正确地判定有鸡蛋过敏的风险和没有鸡蛋过敏的情况。

[实施例4]

在表1所示的鸡蛋过敏原致敏阳性者的343名1～6岁的婴幼儿中，关于基于OFC进行的全身性过敏反应发作风险诊断，如图5所示，对于(A)CAP OVM sIgE(UA/mL)、(B)DCPOVM sIgE(BUe/mL)、(C)DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]、(D)DCP OVMsIgE IC50(nM)、(E)1/DCP OVM sIgE IC50(nM)这5种参数评价诊断精确度和有用性，并实施各组之间的显著差异检验。此外，将图5的统计数据表示在以下的表5中。

(结果)

根据图5和表5清楚可知，通过以往的过敏原特异性IgE定量法的(A)CAP OVM sIgE(UA/mL)和(B)DCP OVM sIgE(BUe/mL)，在鸡蛋过敏的有(EA+)和无(EA-)的诊断中具有显著差异，能够做出诊断，但是，在“能够危及生命的超敏反应状态、全身性过敏反应的发作”即[(AN+)和(AN-)]的诊断中，在两组之间无法检测出显著差异。但是，如果使用(C)DCP OVMsIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]作为参数，则鸡蛋过敏阳性者中的(AN+)和(AN-)之间存在显着差异(P＝0.0041)，表明可以进行识别。应予说明，如果是(D)DCP OVMsIgE IC50(nM)和(E)1/DCP OVM sIgE IC50(nM)值，也分别呈现出0.0183和0.0184的比较好的值。这样，通过使用OVM亲和力，全身性过敏反应发作风险诊断的诊断准确度提高，其效果在参数DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]时最为明显。

[表5]

关于1～6岁受试者(343名)的基于OFC结果的对于OVM的全身性过敏反应发作诊断，对上述五种参数进行ROC分析，将结果示于图6。

此外，以进行了上述ROC分析的343名1～6岁婴幼儿为对象，根据基于OFC的对于OVM的全身性过敏反应发作诊断，对于被诊断为全身性过敏反应发作者的受试者和被诊断为全身性过敏不发作者的受试者，分别利用上述五种参数计算出AUC值、临界值、灵敏度和特异性。将结果示于表6。

[表6]

①、②、③、④、⑤与图6记载的参数一致。

在ROC分析中，如果以乘以OVM亲和力而得的DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]为参数，则AUC为0.76，与其他参数相比最高，由于处于0.7～0.8以内，所以关于鸡蛋全身性过敏反应发作的诊断精确度判定为良好。该参数的临界值显示为8960.10[(BUe/mL)/(nM)]，大约是存在鸡蛋过敏的风险值4459.00[(BUe/mL)/(nM)]的两倍之高，在出现超过该值的数值的情况下，可以推定鸡蛋全身性过敏反应的发作风险变高。另外，如图6下部所示，在受试者(1～6岁)中，对IgE定量值乘以OVM亲和力得到的DCP OVMsIgE/DCP OVM sIgE IC50(数量×质量)的AUC值与以往的IgE定量值[(UA/mL)/mL]单独参数相比，P值显示出显著差异，显示出能够正确地判定有鸡蛋过敏的风险和没有鸡蛋过敏的情况。

[实施例5]

在表2所示的1～3岁免疫系统不成熟、难以进行过敏诊断的256名婴幼儿中，关于基于OFC的全身性过敏反应发作风险诊断，使用(A)CAP OVM sIgE(UA/mL)、(B)DCP OVMsIgE(BUe/mL)、(C)DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]、(D)DCP OVM sIgEIC50(nM)、(E)1/DCP OVM sIgE IC50(nM)这5种参数对其的诊断精确度和有用性进行评价，并进行各组间的显著性差异检验，将结果示于图7。此外，将图7的统计学数据表示在以下的表7中。

(结果)

根据图7清楚可知，在(A)CAP OVM sIgE(UA/mL)和(B)DCP OVM sIgE(BUe/mL)中，鸡蛋过敏的有(EA+)和无(EA-)的诊断具有显著差异而可以进行，但在全身性过敏反应发作风险诊断中，与1～6岁的情况同样，在两组之间没有观察到显著差异。但是，如果以(C)DCPOVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]为参数，则在鸡蛋过敏阳性者中的(AN+)和(AN-)之间存在显着差异(P＝0.0077)，表明能够进行识别。此外，在抗原亲和性参数(D)DCPOVM sIgE IC50(nM)和(E)1/DCP OVM sIgE IC50(nM)值时，P值也分别为0.0092和0.0093而呈现良好的值，表明对于全身性过敏反应发作预测诊断有用。

[表7]

以进行了上述ROC分析的256名1～3岁婴幼儿为对象，根据基于OFC的全身性过敏反应发作诊断，对于被诊断为全身性过敏反应发作者的受试者和被诊断为全身性过敏不发作者的受试者，分别利用上述五种参数计算出AUC值、临界值、灵敏度和特异性。将结果示于图8和表8。

[表8]

①、②、③、④、④与图8记载的参数一致。

以往全身性过敏反应发作诊断困难的1～3岁婴幼儿的全身性过敏反应发作者和非发作者之间的ROC分析中的DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]的临界值，如表8所示为1225.80，为1～6岁呈现的临界值(8960.10)的13.7％，呈现低值，明确可知在1～3岁婴幼儿中容易发生全身性过敏反应。关于将OVM亲和力乘以DCP OVM sIgE值而得的上述参数(数量×质量)，如图8和表8所示，ROC曲线所示的AUC值为0.77，在所研究的五组中最高，此时的灵敏度显示为最高值1.00，表明对于全身性过敏反应发作风险诊断是有用的。以上的结果在图7和表7所示的(C)DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]中，EA(+)(AN-)组和EA(+)(AN+)组之间的P值为P＝0.0077，显示出显著差异(P<0.008)。此外，在(D)DCP OVM sIgE IC50(nM)和(E)1/DCP OVM sIgE IC50(nM)中，EA(+)(AN-)组和EA(+)(AN+)之间的P值分别为P＝0.0092和P＝0.0093，均是比较好的结果。再有，如图8的下部所示，在受试者(1～3岁)中，对IgE定量值乘以OVM亲和力得到的DCP OVM sIgE/DCP OVMsIgE IC50(数量×质量)的AUC值与以往的IgE抗体效价[(UA/mL)/mL]或(BUe/mL)的单独参数相比，显示出显著差异，显示出能够正确地判定有对鸡蛋发生全身性过敏反应的风险和没有对鸡蛋发生全身性过敏反应的情况。综上可推定，当1～3岁全身性过敏反应发作风险诊断中的DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]的临界值为1225.80以上时，可以判定为对鸡蛋全身性过敏反应的发作风险较高。

(小结)

迄今为止，在过敏诊断中，如图1所示，仅测定血液中的过敏原特异性IgE的(量)，没有考虑作为过敏原特异性IgE的质量的抗原亲和性。因为抗体所呈现的反应根据抗体的“数量”和“质量”来实现，所以过敏原特异性IgE的生物学反应应该结合其“数量”和“质量”来评价。作为抗体的“质量”，在本发明中研究了抗原亲和力的有用性。

IgE对于过敏原的亲和力可以通过固化过敏原和可溶性过敏原之间的竞争性结合抑制活性(IC50值)来测定，用1/IC50值来表示。该方法具有如下优点：即使存在识别相同抗原的除IgE之外的IgG、IgA、IgD和IgM抗体也能够评价，不仅如此，还能够用相同的参数评价过敏原之间的亲和性差异、不同过敏原彼此的亲和性差异。在本发明中已确认，通过测量人血清中多克隆IgE抗体对于过敏原的亲和力(1/IC50值)，利用以往的过敏原特异性IgE定量法难以诊断发生全身性过敏反应的风险，但是，通过将对DCP OVM sIgE(BUe/mL)抗体效价乘以亲和力而得的DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]作为参数，能够预测诊断发生全身性过敏反应的风险。此外，新发现了如下事实：在1～6岁和1～3岁的鸡蛋过敏阳性患者发生全身性过敏反应风险诊断中，即使是对于过敏原的亲和力单独参数的DCPOVM sIgE IC50(nM)值和1/DCP OVM sIgE IC50(nM)值,虽然与对DCP OVM sIgE的抗体效价(BUe/mL)乘以亲和力而得的DCP OVM sIgE/DCP OVM sIgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]相比显著差异的程度减小，但其具有显著差异，能够区分全身性过敏反应发作的有无。

[实施例6]

为了验证根据之前的ROC分析计算出的对鸡蛋过敏和对鸡蛋发生全身性过敏反应的IC50值、IgE抗体效价以及IgE抗体对于过敏原的亲和力而制作的判定基准[(BUe/mL)/IC50]的临界值的可行性(有效性)，发明人对作为与取得之前数据(表1～表8等)的医院不同地域医院的大阪府高槻医院委托，在高槻医院的医院伦理委员会的批准(伦理委员会批准号：2019-92)下，自2020年2月20日起招募进行OFC的过敏患者，经患者及其家属同意后进行采血,实施了OVM特异性IgE值的测定和其亲和力值的计算。

作为测定的第一期，在2020年2月20日至2020年6月17日的约四个月所收集的19名鸡蛋过敏患者中，进行了OVM干预的加热鸡蛋OFC的病例为15例。除此以外的四名鸡蛋过敏患者因为判明了是由于作为生鸡蛋的过敏原的卵清蛋白引起的，被排除在本次研究之外。对于进行了加热鸡蛋OFC的15例病例，验证了专利记载的对鸡蛋过敏和对鸡蛋全身性过敏反应的IC50和[(BUe/mL)/IC50]值的临界值的有效性。

能够在高槻医院儿科进行加热鸡蛋OFC的病例中，15例中有2例为1～3岁，另外13例为8～15岁。在本研究中，关于8～15岁的13例，决定使用1～6岁的临界值研究有效性。

[表9]

(鸡蛋过敏诊断的临界值)

上述表9所示数值的内容如下。

[1]在1～3岁和1～6岁的婴幼儿中，根据基于OFC的对于OVM的过敏的确定诊断，对于被诊断为鸡蛋过敏阳性确定者的受试者和被诊断为鸡蛋过敏阴性确定者的受试者，从表3和表4中如以下这样提取进行了ROC分析的经过的临界值。

(1)通过DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(OVM sIgE IC50(nM))的关于有无过敏的临界值；

(即，在1～3岁的情况下小于1.13nM、1～6岁的情况下小于1.30nM时，可判定为过敏阳性。)

(2)对通过DCP法测定的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的[OVM sIgE/OVMs IgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]]的关于有无过敏的临界值；

(即，在1～3岁的情况下为1556.70(BUe/mL)/(nM)、1～6岁的情况下为4459.00(BUe/mL)/(nM)以上时，可判定为过敏阳性。)

(鸡蛋全身性过敏反应发作诊断的临界值)

[2]在1～3岁和1～6岁的婴幼儿中，根据基于OFC的鸡蛋全身性过敏反应发作诊断，对于被诊断为全身性过敏发作者的受试者和被诊断为全身性过敏不发作者的受试者，从表6和表8中如以下这样提取进行了ROC分析的结果的临界值。分别表示为：

(3)通过DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(OVM sIgE IC50(nM))的关于有无全身性过敏反应发作的临界值；(即1～3岁的情况为小于2.15nM、1～6岁的情况为小于1.03nM，则可判定为有全身性过敏反应发作的可能性。)

(4)对通过DCP法测定的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的[OVM sIgE/OVMs IgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]]的关于有无全身性过敏反应发作的临界值；

(即，在1～3岁的情况下为1225.80(BUe/mL)/(nM)以上、1～6岁的情况下为8960.00(BUe/mL)/(nM)以上时，可判定为有全身性过敏反应发作的可能性。)。

关于上述在高槻医院进行了OFC的病例，将从1～3岁的2例病例和8～15岁的13例病例得到的3种参数：DCP OVM-sIgE、DCP OVM-sIgE IC50、DCP OVM-sIgE/DCP OVM-sIgEIC50的结果示于下表10。

[表10]

表10(A)是加热鸡蛋OFC的结果被判定为鸡蛋过敏阴性的组(鸡蛋过敏阴性—全身性过敏反应发作阴性组)，2名1～3岁的婴幼儿和8名8～15岁的儿童属于这组。(B)是加热鸡蛋OFC的结果被判定为鸡蛋过敏阳性且不发生全身性过敏反应的组(鸡蛋过敏阳性—全身性过敏反应发作阴性组)。(C)是加热鸡蛋OFC的结果被判定为鸡蛋过敏阳性且发生全身性过敏反应的组(鸡蛋全身性过敏反应发作组)。

(鸡蛋过敏阴性—全身性过敏反应发作阴性组)

对于加热鸡蛋OFC的结果被判定为鸡蛋过敏阴性的2名1～3岁的婴幼儿，通过DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(OVM sIgE IC50(nM))为4.39nM和194.71nM，由于为1～3岁情况的OVM特异性IgE的IC50值的关于有无过敏的临界值1.13nM以上，所以确认了落入过敏阴性的范围。此外，对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值为757.12(BUe/mL)/(nM)和11.82(BUe/mL)/(nM)，由于是比1～3岁情况的OVM sIgE/OVMs IgEIC50的有关有无过敏的临界值1556.70低的值，所以确认了落入过敏阴性的范围。实际上，对于这2名婴幼儿没有确认有鸡蛋过敏的迹象。

应予说明，对于该2名病例，即使关于有无全身性过敏反应发作，也显示出比1～3岁的情况下的OVM特异性IgE IC50值(OVM sIgE IC50(nM))的临界值2.15nM高的数值。此外，还显示出比1～3岁的情况下的使用OVM sIgE/OVMs IgE IC50的参数的关于有无全身性过敏反应发作的临界值1225.80(BUe/mL)/(nM)低的数值，认为其发生全身性过敏反应的可能性非常低，到目前为止，关于这2名病例，没有接受到因摄入鸡蛋而发生全身性过敏反应的报告。

因此，可以确认，在1～3岁的情况下，可以有效地利用以OVM特异性IgE的IC50值作为参数而通过ROC分析确定的关于有无全身性过敏反应发作的临界值，以及以对OVM特异性IgE效价乘以1/IC50值而得的值作为参数而通过ROC分析确定的关于有无全身性过敏反应发作的临界值。

对于除THG-23和THG-44以外的8～15岁的6名儿童，通过DCP法测定的OVM特异性IgE的IC50值(OVM sIgE IC50(nM))为1.73nM～16.03nM的范围，由于为1～6岁OVM特异性IgE的IC50值的关于有无过敏的临界值1.30nM以上，所以确认了落入过敏阴性的范围。此外，由于对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值为170.93(BUe/mL)/(nM)～1082.41(BUe/mL)/(nM)，即小于1～6岁OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无过敏的临界值4459.00(BUe/mL)/(nM)，所以确认了落入过敏阴性的范围。

此外，对于除1名THG-44以外的7名8～15岁的儿童，均显示出比1～6岁的以OVM特异性IgE的IC50值为参数的关于有无全身性过敏反应发作的临界值1.03nM高的数值，显示出比1～6岁情况下的以OVM sIgE/OVMs IgE IC50为参数的关于有无全身性过敏反应的临界值8960.00(BUe/mL)/(nM)低的数值。这6名8～15岁的儿童完全没有呈现全身性过敏反应发作的迹象，确认了能够使用1～6岁情况的临界值来预测全身性过敏反应的发作。

对于1名8～15岁儿童(THG-44)，用DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(OVM sIgEIC50(nM))为0.93nM，由于小于1～6岁OVM特异性IgE的IC50值的关于有无过敏的临界值1.30nM，所以落入过敏阳性的范围。此外，由于小于1～6岁的OVM特异性IgE的IC50值的关于有无全身性过敏反应的临界值1.03nM，所以推测为有全身性过敏反应发作的可能性。

在THG-44病例中，对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值为15133.54(BUe/mL)/(nM)，是比1～6岁的OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无过敏的临界值1556.70高的值，落入过敏阳性的范围。而且，由于比1～6岁情况下的OVM sIgE/OVMsIgE IC50的关于有无全身性过敏反应的临界值8960.10(BUe/mL)/(nM)高，所以可预测全身性过敏反应发作的可能性非常高。因此，对于该儿童来说，虽然尚未确认因摄入鸡蛋引起的过敏症状，但认为将来有可能会发生全身性过敏反应，在医生的监督下，特别进行与鸡蛋有关的饮食指导，正在观察进展中。

对于1名8～15岁儿童(THG-23)，通过DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(OVMsIgE IC50(nM))为1.25nM，由于小于1～6岁的OVM特异性IgE的IC50值的关于有无过敏的临界值1.30nM，所以落入过敏阳性的范围。但是，是比1～6岁的OVM特异性IgE的IC50值的关于有无全身性过敏反应的临界值1.03nM高的数值，推测全身性过敏反应发作的可能性小。

在THG-23病例中，对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值为942.36(BUe/mL)/(nM)，由于是比1～6岁OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无过敏的临界值4459.00(BUe/mL)/(nM)低的值，所以落入过敏阴性的范围。此外，比1～6岁情况下的OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无全身性过敏反应的临界值8960.10(BUe/mL)/(nM)低。在应用1～6岁的2个临界值的情况下，可以说该儿童发作全身性过敏反应可能性较低。关于该儿童，因为目前即使摄入鸡蛋也未出现过敏症状，所以还在观察进展中。

(关于鸡蛋过敏阴性组的总结)

在鸡蛋过敏阴性组((A)组)中，确认了可以有效利用OVM特异性IgE的IC50值的关于有无全身性过敏反应发作的临界值和对OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值的关于有无全身性过敏反应发作的临界值。此外，确认了对于8～15岁的儿童也能够应用根据1～6岁的数据计算出的临界值。

(鸡蛋过敏阳性—全身性过敏反应发作阴性组)

对于加热鸡蛋OFC的结果被判定为鸡蛋过敏阳性的2名8～15岁儿童(THG-31和47)，通过DCP法测定的OVM特异性IgE IC50值(OVM sIgE IC50(nM))为1.05nM和0.48nM，因为是1～6岁OVM特异性IgE的IC50值的关于有无过敏的临界值1.30nM以下，所以确认了落入过敏阳性的范围。

对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值分别为1465.64(BUe/mL)/(nM)和3897.79(BUe/mL)/(nM)，是低于1～6岁OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无过敏的临界值4459.00(BUe/mL)/(nM)的值，落入过敏阴性的范围。这两名虽然出现鸡蛋过敏的轻微症状，但处于从鸡蛋过敏阳性向阴性的过渡期的可能性较高，正在观察进展中。

此外，这些儿童由于与1～6岁OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无全身性过敏反应的临界值8960.10(BUe/mL)/(nM)相比数值相当低，所以预测其发作全身性过敏反应的可能性较低，实际上并未出现全身性过敏反应症状。但是，对于THG-47病例，IgE的IC50值低于关于有无全身性过敏反应的临界值，今后也需要观察进展。

对于1名8～15岁儿童(THG-21)，通过DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(OVMsIgE IC50(nM))为1.74nM，由于为1～6岁OVM特异性IgE的IC50值的关于有无过敏的临界值1.30nM以上，所以落入过敏阴性的范围。对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值为4897.47(BUe/mL)/(nM)，是比1～6岁OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无过敏的临界值4459.00(BUe/mL)/(nM)高的数值，落入过敏阳性的范围。

在THG-21病例中，IC50值比1～6岁的以OVM特异性IgE的IC50值的关于有无全身性过敏反应的临界值1.03nM高，对OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的数值比1～6岁的OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无全身性过敏反应的临界值8960.10(BUe/mL)/(nM)低。在应用1～6岁的2个临界值的情况下，可以说发作全身性过敏反应可能性较低。实际上，该儿童症状轻微，无全身性过敏反应发作的既往病史。因此，确认了对于8～15岁的儿童也能够使用根据1～6岁的数据计算出的临界值。

对于1名8～15岁儿童(THG-13)，通过DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(OVMsIgE IC50(nM))为2.7nM，由于为1～6岁OVM特异性IgE的IC50值的关于有无过敏的临界值1.30nM以上，所以落入过敏阴性的范围。此外，对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值为317.17(BUe/mL)/(nM)，是比1～6岁OVM sIgE/OVMs IgE IC50的关于有无过敏的临界值4459.00(BUe/mL)/(nM)低很多的数值，落入过敏阴性的范围。

THG-13病例由于为1～6岁的OVM特异性IgE的IC50值的关于有无全身性过敏反应的临界值1.03nM以上，所以全身性过敏反应发作的可能性较小。此外，由于比1～6岁OVMsIgE/OVMs IgE IC50的关于有无全身性过敏反应的临界值8960.10(BUe/mL)/(nM)明显低，所以可以预测全身性过敏反应发作的可能性较低。该儿童目前虽然出现过敏症状，但无全身性过敏反应发作的既往病史，OVM抗体效价本身非常低，观察到过敏症状转轻的趋向，所以在观察进展中。

(鸡蛋全身性过敏反应发作组)

这是有关发作了全身性过敏反应的10岁儿童的研究。通过DCP法测得的OVM特异性IgE的IC50值(OVM sIgE IC50(nM))为0.26nM，是比前述1～6岁的OVM特异性IgE的IC50值的关于有无全身性过敏反应的临界值1.03nM低的数值，与全身性过敏反应发作的状况一致。此外，对通过DCP法测得的OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的值为81174.34(BUe/mL)/(nM)，是比前述1～6岁的OVM sIgE值/OVMs IgE IC50的关于有无全身性过敏反应的临界值8960.10(BUe/mL)/(nM)明显高的数值，与实际上正在发作全身性过敏反应的状况一致。

因此，能够确认对于该10岁儿童也能够应用使用前述1～6岁的OVM特异性IgE的IC50值的关于有无全身性过敏反应的临界值以及前述1～6岁的OVMsIgE值/OVMs IgE IC50的关于有无全身性过敏反应的临界值的判断。

(总结)

经确认，根据基于IgE抗体的抗体效价和IgE抗体对于过敏原的亲和力而计算出且由ROC分析所确定的临界值，能够预测婴幼儿/儿童的全身性过敏反应的发作风险。此外还确认了，使用以基于1～6岁儿童的数据计算出的OVM sIgE/OVMs IgE IC50为参数的关于有无全身性过敏反应的临界值和以IgE IC50为参数的关于有无全身性过敏反应的临界值的某个或者将它们并用，能够应用于8～15岁的儿童。应予说明，根据本发明，对于目前尚未发作过全身性过敏反应的婴幼儿/儿童，例如在明显超过了对OVM特异性IgE效价乘以1/IC50的值而得的OVM sIgE值/OVMs IgE IC50[(BUe/mL)/(nM)]]或IgE IC50(nM)的关于有无全身性过敏反应发作的临界值的情况下，也能够接受医生等的饮食指导等，在这一点上可以说是很好的。

Claims

1.一种收集数据的方法，用于以通过基于采集自患有食物过敏的婴幼儿/儿童的试样中的IgE抗体对于过敏原的亲和力的ROC分析所决定的临界值作为判定基准，预测前述婴幼儿/儿童发生全身性过敏反应风险。

2.根据权利要求1所述的收集数据的方法，其特征在于，通过基于IgE抗体对于过敏原的亲和力的ROC分析而决定的临界值，是通过基于对IgE抗体对于过敏原的抗体效价乘以IgE抗体对于过敏原的亲和力而得的数值的ROC分析而决定的临界值。

3.根据权利要求2所述的收集数据的方法，其特征在于，IgE抗体对于过敏原的亲和力被数值化为1/IC50。

4.根据权利要求3所述的收集数据的方法，其特征在于，IC50是竞争性结合抑制活性值。

5.根据权利要求1所述的收集数据的方法，其特征在于，通过基于IgE抗体对于过敏原的亲和力的ROC分析而决定的临界值，是通过基于IgE抗体的IC50的ROC分析而决定的临界值。

6.根据权利要求5所述的收集数据的方法，其特征在于，IC50是竞争性结合抑制活性值。

7.根据权利要求2～6中任一项所述的收集数据的方法，其特征在于，使用DCP芯片测定IgE抗体对于过敏原的抗体效价。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的收集数据的方法，其特征在于，试样为血浆或血清。