CN114729039A - Vista结合抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了新型抗VISTA抗体、包含此类抗体的药物组合物，以及使用此类抗体和药物组合物治疗诸如癌症等疾病的治疗方法。

Description

VISTA结合抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年3月12日提交的美国临时申请号62/817,268的权益，其出于所有目的全文以引用方式明确并入。
技术领域
本公开涉及用于调节免疫应答的新型抗VISTA抗体和包含此类抗体的药物组合物，以及使用所公开的抗体治疗诸如癌症等疾病。
背景技术
通过调节免疫应答来治疗疾病被称为免疫疗法。已证明免疫疗法在治疗癌症方面越来越有效。癌症治疗中的许多免疫治疗成功是基于靶向免疫检查点的免疫调节抗体的使用。
T细胞活化的V结构域Ig抑制剂(VISTA)是一种I型跨膜蛋白，其用作免疫检查点并且由C10orf54基因编码。VISTA是大约50kDa的蛋白质并且属于免疫球蛋白超家族，并具有一个IGV结构域。VISTA是B7家族的一部分并且主要在白细胞中表达。VISTA的转录由p53控制。VISTA可以充当T细胞上的配体和受体来抑制T细胞效应功能并维持外周耐受。VISTA在肿瘤浸润性淋巴细胞(诸如髓源性抑制细胞和调节性T细胞)中高水平表达，并且其被抗体阻断在黑色素瘤和鳞状细胞癌的小鼠模型中导致肿瘤生长延迟。
本发明提供用于治疗疾病的新型单一疗法和组合疗法。
发明内容
在一个方面，本发明涉及新型抗VISTA抗体。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:2的vhCDR1、包含SEQ IDNO:3的vhCDR2、包含SEQ ID NO:4的vhCDR3、包含SEQ ID NO:6的vlCDR1、包含SEQ ID NO:7的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:8的vlCDR3。在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQID NO:10的vhCDR1、包含SEQ ID NO:11的vhCDR2、包含SEQ ID NO:12的vhCDR3、包含SEQ IDNO:14的vlCDR1、包含SEQ ID NO:15的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:16的vlCDR3。在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:18的vhCDR1、包含SEQ ID NO:19的vhCDR2、包含SEQ ID NO:20的vhCDR3、包含SEQ ID NO:22的vlCDR1、包含SEQ ID NO:23的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:24的vlCDR3。
在一些实施方案中，本发明包括一种调节受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区的抗VISTA抗体。
在一些实施方案中，本发明包括一种调节受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3的抗VISTA抗体。
在一些实施方案中，本文所述的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与人IgG具有至少90％同一性的恒定区。在一些实施方案中，IgG选自由以下组成的组：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一些实施方案中，IgG是IgG4。
在另一方面，本发明涉及一种核酸组合物，其包含编码本文所述的重链可变区中的任一个的第一核酸和编码本文所述的轻链可变区中的任一个的第二核酸。
本发明的另一方面涉及一种表达载体组合物，其包含本文所述的核酸组合物中的任一种。在一些实施方案中，第一核酸包含在第一表达载体中并且第二核酸包含在第二表达载体中。在一些其他实施方案中，第一核酸和第二核酸包含在单个表达载体中。
本发明的另一方面涉及一种宿主细胞，其包含本文所述的表达载体中的任一种。还呈现了一种制备抗VISTA抗体的方法，并且所述方法包括在抗体表达的条件下培养宿主细胞，以及回收抗体。
在另一方面，本发明涉及一种组合物，其包含本文所述的抗VISTA抗体中的任一种和药学上可接受的载剂或稀释剂。
还描述了一种调节受试者的免疫应答的方法，并且所述方法包括向受试者施用有效量的本文所述的抗VISTA抗体中的任一种，或本文所述的组合物中的任一种。
在一些实施方案中，所述方法调节受试者的免疫应答，并且所述方法包括向受试者施用有效量的抗VISTA抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包含SEQ ID NO:2的vhCDR1、包含SEQ ID NO:3的vhCDR2、包含SEQ ID NO:4的vhCDR3、包含SEQ ID NO:6的vlCDR1、包含SEQID NO:7的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:8的vlCDR3。
在一些实施方案中，所述方法调节受试者的免疫应答，并且所述方法包括向受试者施用有效量的抗VISTA抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包含SEQ ID NO:10的vhCDR1、包含SEQ ID NO:11的vhCDR2、包含SEQ ID NO:12的vhCDR3、包含SEQ ID NO:14的vlCDR1、包含SEQ ID NO:15的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:16的vlCDR3。
在一些实施方案中，所述方法调节受试者的免疫应答，并且所述方法包括向受试者施用有效量的抗VISTA抗体，其中所述抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包含SEQ ID NO:18的vhCDR1、包含SEQ ID NO:19的vhCDR2、包含SEQ ID NO:20的vhCDR3、包含SEQ ID NO:22的vlCDR1、包含SEQ ID NO:23的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:24的vlCDR3。
在另一方面，本发明涉及一种治疗受试者的癌症的方法，并且所述方法包括向受试者施用有效量的本文所述的抗VISTA抗体，或其组合物。在一些实施方案中，待治疗的癌症表达VISTA。待治疗的癌症可以是结直肠癌、乳腺癌、直肠癌、肺癌(包括非小细胞肺癌)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、软组织肉瘤、卡波西肉瘤、类癌、头颈癌、黑色素瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、结直肠癌、间皮瘤和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，抗VISTA抗体与一种或多种另外的治疗剂组合使用以治疗癌症。在一些实施方案中，另外的治疗剂是其他免疫检查点抑制剂，诸如PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA抑制剂、TIM-3抑制剂和LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂是肿瘤靶向抗体。在一些实施方案中，肿瘤靶向抗体是抗CD20、抗EGFR和抗Her2。在一些实施方案中，肿瘤靶向抗体是曲妥珠单抗(trastuzumab)、利妥昔单抗(rituximab)和西妥昔单抗(cetuximab)。在一些实施方案中，另外的治疗剂是整联蛋白结合多肽-Fc融合体。在一些实施方案中，整联蛋白结合多肽-Fc融合体是NOD-201。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:1的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:5的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:9的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:13的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:17的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:21的轻链可变区。在另一方面，本发明涉及一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:1的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:5的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ IDNO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:9的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:13的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ IDNO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:17的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:21的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种抑制患有病症的受试者的细胞上的VISTA与VSIG3的结合的方法，其通过向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体来实现，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ IDNO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:1的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:5的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种抑制患有病症的受试者的细胞上的VISTA与VSIG3的结合的方法，其通过向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体来实现，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ IDNO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:9的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:13的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种抑制患有病症的受试者的细胞上的VISTA与VSIG3的结合的方法，其通过向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体来实现，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ IDNO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:17的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:21的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:1和5所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:9和13所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:17和21所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:1和5所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:9和13所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:17和21所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:1和5所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:9和13所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:17和21所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:1和5所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:9和13所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:17和21所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:1和5具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:9和13具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:17和21具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:1和5具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:9和13具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:17和21具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:1的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:5的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:9的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ IDNO:13的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:17的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ IDNO:21的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:1的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:5的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:9的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ IDNO:13的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ ID NO:17的重链可变区。在一些实施方案中，抗体还包括包含SEQ IDNO:21的轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种治疗受试者的非癌性疾病的方法，其包括向受试者施用有效量的根据本文所述的方法或组合物中的任一种的抗体。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在另一方面，本发明涉及一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区的抗体结合相同的表位。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3的抗体结合相同的表位。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区的抗体竞争结合人VISTA。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3的抗体竞争结合人VISTA。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
在另一方面，本发明涉及一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在另一方面，本发明涉及一种根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中免疫应答是抗原特异性T细胞应答。
附图说明
本发明的这些和其他特征、方面和优点将通过以下描述和附图变得更好理解。
图1A提供VS7抗VISTA抗体的可变重链和轻链以及相应的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3序列。
图1B提供VS147抗VISTA抗体的可变重链和轻链以及相应的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3序列。
图2A-图2B提供IgG1、IgG2、IgG3和IgG4序列的实例。
图3提供证明了使用抗VISTA抗体时的抗原结合和展示(c-myc)的流式细胞术数据。最初的几轮筛选产生20+克隆，其中许多对人抗原具有亚nM亲和力。随后的亲和力成熟和交叉反应性选择产生小鼠和人交叉反应克隆VS147。
图4A-图4B提供抗VISTA抗体克隆的人和鼠VISTA结合数据和Kd。VS147对人抗原表现出亚nM亲和力并且对小鼠抗原表现出单nM亲和力。高表达VISTA的巨噬细胞系。HIGH细胞与T细胞的共培养抑制活化和IL-2分泌。
图5A-图5UU提供抗VISTA抗体的序列。
图6A-图6I提供抗VISTA抗体的序列。
图7A-图7C提供抗VISTA抗体的序列。
图8示出在25nM抗原下改善的小鼠结合。
图9示出VISTA 1.4克隆分析。数据示出2个修饰变体的测得的人/小鼠Kd。
具体实施方式
I.介绍
本公开提供了新型抗VISTA抗体。本文所述的抗VISTA抗体结合人VISTA。在一些实施方案中，抗VISTA抗体以高亲和力结合人VISTA。在一些实施方案中，抗VISTA抗体充当功能性VISTA激动剂，并且在与VISTA结合时，它们诱导或增强免疫应答。在一些实施方案中，抗VISTA抗体充当功能性VISTA拮抗剂，并且在与VISTA结合时，它们阻断VISTA与VSIG3的相互作用，并抑制免疫应答，或在一些情况下抑制免疫应答的阻抑。在本公开中还提供了使用此类抗体调节受试者的免疫应答，并且例如治疗癌症的方法。VISTA的配体已被证明是VSIG3。(参见，例如WO2018027042和US20170306020，其以引用方式全文并入本文。)此外，本公开描述了编码这些抗体的核酸，以及包含此类核酸的宿主细胞。
II.定义
为了便于理解本发明，下面定义了许多术语和短语。
如本文所用，以下每个术语在本节中具有与其相关的含义。
除非另有说明，否则权利要求和说明书中使用的术语如下所述进行定义。在与母临时专利申请中使用的术语直接冲突的情况下，以本说明书中使用的术语为准。
“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，是指由DNA和RNA编码的20种天然存在的氨基酸中的一种，以及后来被修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，即，与氢、羧基、氨基和R基团结合的α碳，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指结构不同于氨基酸的一般化学结构但以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的化学化合物。氨基酸在本文中可以用它们通常已知的三字母符号或通过IUPAC-IUB生化命名委员会推荐的一字母符号来指代。同样，核苷酸可以用它们普遍接受的单字母代码来指代。
“氨基酸取代”是指用第二、不同的“置换”氨基酸残基置换预先确定的氨基酸序列(起始多肽的氨基酸序列)中的至少一个现有氨基酸残基。“氨基酸插入”是指将至少一个另外的氨基酸并入预先确定的氨基酸序列中。虽然插入将通常由插入一个或两个氨基酸残基组成，但可以进行目前更大的“肽插入”，例如插入约三个至约五个或甚至最多至约十个、十五个或二十个氨基酸残基。一个或多个插入残基可以是如上文所公开的天然存在的或非天然存在的。“氨基酸缺失”是指从预先确定的氨基酸序列中去除至少一个氨基酸残基。
在本文中，“氨基酸取代”或“取代”意指用不同氨基酸置换亲本多肽序列中特定位置处的氨基酸。特别地，在一些实施方案中，取代是针对并非天然存在于特定位置、并非天然存在于生物体内或任何生物体内的氨基酸。例如，取代M252Y是指变体多肽，在这一情况下是指Fc变体，其中位置252处的甲硫氨酸被酪氨酸置换。为清楚起见，已经被工程化以改变核酸编码序列但不改变起始氨基酸(例如，将CGG(编码精氨酸)换成CGA(仍然编码精氨酸)以增加宿主生物体表达水平)的蛋白质不是“氨基酸取代”；也就是说，尽管产生对相同蛋白质进行编码的新基因，但是如果蛋白质在其开始的特定位置处具有相同氨基酸，则所述蛋白质不是氨基酸取代。
“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，以指代氨基酸残基的聚合物。所述术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。
如本文所用，本文的“蛋白质”意指至少两个共价连接的氨基酸，包括蛋白质、多肽、寡肽和肽。肽基可包括天然存在的氨基酸和肽键。
“核酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。除非具体限制，否则该术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，其具有与参考核酸类似的结合特性并且以与天然存在的核苷酸类似的方式代谢。除非另有说明，否则特定核酸序列还隐含地涵盖其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)和互补序列以及明确指出的序列。具体地，简并密码子取代可以通过生成其中一个或多个选定的(或所有)密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer等人,《核酸研究(NucleicAcid Res.)》19:5081,1991；Ohtsuka等人,《生物化学(Biol.Chem.)》260:2605-2608,1985；以及Cassol等人,1992；Rossolini等人,《分子与细胞探针(Mol.Cell.Probes)》8:91-98,1994)。对于精氨酸和亮氨酸，第二碱基处的修饰也可以是保守的。术语核酸可与基因、cDNA和基因编码的mRNA互换使用。本文使用的多核苷酸可以由任何多聚核糖核苷酸或多聚脱氧核糖核苷酸组成，它们可以是未修饰的RNA或DNA或修饰的RNA或DNA。例如，多核苷酸可以由单链和双链DNA、为单链和双链区域的混合物的DNA、单链和双链RNA，以及为单链和双链区域的混合物的RNA、包含可以是单链的或更典型地双链的或单链和双链区域的混合物的DNA和RNA的杂交分子组成。此外，多核苷酸可以由包含RNA或DNA或RNA和DNA两者的三链区域组成。多核苷酸还可以包含一个或多个修饰碱基或出于稳定性或其他原因修饰的DNA或RNA骨架。“修饰”碱基包括，例如，三苯甲基化的碱基和非常见碱基，诸如肌苷。可以对DNA和RNA进行多种修饰；因此，“多核苷酸”包括化学、酶促或代谢修饰的形式。
术语“核苷酸序列”包括单链形式的核酸中寡核苷酸或多核苷酸中核苷酸的排序。
“核酸构建体”意指已被构建为包括一个或多个在自然界中未一起发现的功能单元的核酸序列。实例包括环状、线性、双链、染色体外DNA分子(质粒)、粘粒(包含来自λ噬菌体的COS序列的质粒)、包括非天然核酸序列的病毒基因组等。
术语“寡核苷酸”、“多核苷酸”和“核酸分子”在本文中可互换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合形式，核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。因此，该术语包括但不限于单链、双链或多链DNA或RNA、基因组DNA、cDNA、DNA-RNA杂交体，或包括嘌呤和嘧啶碱基或其他天然、化学或生化修饰的、非天然的或衍生的核苷酸碱基的聚合物。多核苷酸的骨架可以包括糖和磷酸基团(如通常可在RNA或DNA中发现的)，或修饰或取代的糖或磷酸基团。
术语“抗体”以最广泛的含义使用，包括例如完整的免疫球蛋白或抗原结合部分。抗原结合部分可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学切割产生。因此，术语抗体包括两条重链和两条轻链的传统四聚抗体，以及抗原结合片段，诸如Fv、Fab和scFv。在一些情况下，本发明提供包括至少一个如本文概述的抗原结合结构域的双特异性抗体。
如本文所用，术语“PK”是“药代动力学”的首字母缩略词并且涵盖化合物的特性，包括例如受试者的吸收、分布、代谢和消除。如本文所用，“延长PK基团(extended-PKgroup)”是指当与生物活性分子融合或一起施用时增加生物活性分子的循环半衰期的蛋白质、肽或部分。延长PK基团的实例包括PEG、人血清白蛋白(HSA)结合剂(如美国公布号2005/0287153和2007/0003549、PCT公布号WO 2009/083804和WO 2009/133208中所公开的，以及如美国公布号2012/094909中所述的SABA分子)、人血清白蛋白、Fc或Fc片段及其变体，以及糖(例如，唾液酸)。其他示例性延长PK基团在Kontermann等人,《现代生物技术观点(Current Opinion in Biotechnology)》2011；22:868-876中公开，其以引用方式整体并入本文。
如本文所用，术语“Kassoc”或“Ka”旨在指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而如本文所用的术语“Kdis”或“Kd”旨在指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所用，术语“KD”旨在指解离常数，其由Kd与Ka的比率(即，Kd/Ka)获得并表示为摩尔浓度(M)。抗体的KD值可以使用本领域中充分建立的方法来确定。在一些实施方案中，用于确定抗体的KD的方法是通过使用表面等离子共振，例如通过使用生物传感器系统诸如
Figure BDA0003346782430000151
系统。在一些实施方案中，抗体的KD通过生物层干涉测量法确定。在一些实施方案中，KD值是用固定化的测量的。在其他实施方案中，KD值是用固定化的抗体(例如，亲本小鼠抗体、嵌合抗体或人源化抗体变体)测量的。在某些实施方案中，KD值以二价结合模式测量。在其他实施方案中，KD值以单价结合模式测量。
在某些方面，所描述的多肽可以使用一个或多个“接头结构域”，诸如多肽接头。如本文所用，术语“接头”或“接头结构域”是指将两个或更多个结构域连接在线性序列中的序列。如本文所用，术语“多肽接头”是指将两个或更多个结构域连接在多肽链的线性氨基酸序列中的肽或多肽序列(例如，合成肽或多肽序列)。例如，多肽接头可用于将多肽连接至Fc结构域或其他PK延长物，诸如HSA。在一些实施方案中，此类多肽接头可以为多肽分子提供柔性。示例性接头包括Gly-Ser接头，诸如但不限于[Gly4Ser]，其包括4个甘氨酸，随后是1个丝氨酸，以及[Gly4Ser3]，其包括4个甘氨酸，随后是3个丝氨酸。本文中的术语“接头”还可以指scFv和/或其他抗体结构中使用的接头。通常，存在许多可以使用的合适的scFv接头，包含通过重组技术产生的传统肽键。接头肽可主要包括以下氨基酸残基：Gly、Ser、Ala或Thr。接头肽应当具有足够以确保相对于彼此的正确构象以使得其保留期望活性的方式连接两个分子的长度。在一个实施方案中，接头具有约1至50个氨基酸的长度，优选约1至30个氨基酸的长度。在一个实施方案中，可使用长度为1至20个氨基酸的接头，在一些实施方案中使用约5至约10个氨基酸。有用的接头包括甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n和(GGGS)n，其中n是至少为1(并且通常为3至4)的整数)、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物以及其他柔性接头。可替代地，各种非蛋白质聚合物，包括但不限于聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物可用作接头，即可以用作接头。其他接头序列可包括具有任何长度的CL/CH1结构域的任何序列，但并非CL/CH1结构域的所有残基；例如，CL/CH1结构域的前5-12个氨基酸残基。接头可以衍生自免疫球蛋白轻链，例如Cκ或Cλ。接头可以衍生自任何同种型的免疫球蛋白重链，包含例如Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4、Cα1、Cα2、Cδ、Cε和Cμ。接头序列还可衍生自其他蛋白质，诸如Ig样蛋白(例如，TCR、FcR、KIR)、铰链区衍生序列以及来自其他蛋白质的其他天然序列。在一些实施方案中，接头是“结构域接头”，其用于将如本文所概述的任何两个结构域连接在一起。虽然可以使用任何合适的接头，但是许多实施方案利用甘氨酸-丝氨酸聚合物以及允许以足够允许每个结构域保持其生物学功能的长度和柔性来重组连接这两个结构域的任何肽序列，所述甘氨酸-丝氨酸聚合物包含例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n和(GGGS)n，其中n是至少为1(并且通常为3至4至5)的整数。
如本文所用，术语“连接的”、“融合的”或“融合体”可互换使用。这些术语是指两个或更多个元件或组分或结构域通过包括化学缀合或重组手段在内的任何手段接合在一起。化学缀合的方法(例如，使用异双功能交联剂)是本领域已知的。
术语“整联蛋白”是指对细胞粘附很重要的跨膜异二聚体蛋白。整联蛋白包含α和β亚基。这些蛋白质与细胞外基质组分(例如，纤连蛋白、胶原蛋白、层粘连蛋白等)结合，并通过诱导信号级联放大作出响应。整联蛋白通过Arg-Gly-Asp(RGD)基序的识别与细胞外基质组分结合。某些整联蛋白在肿瘤细胞的表面被发现，并且因此成为有希望的治疗靶标。在某些实施方案中，被靶向的整联蛋白是ανβ3、ανβ5和α5β1，单独或组合。
术语“整联蛋白结合多肽”是指包括打结素(knottin)多肽支架内的整联蛋白结合结构域或环的多肽。整联蛋白结合结构域或环包括至少一种RGD肽。在某些实施方案中，RGD肽被ανβ1、ανβ3、ανβ5、ανβ6和α5β1整联蛋白识别。在某些实施方案中，RGD肽结合ανβ1、ανβ3、ανβ5、ανβ6和α5β1整联蛋白的组合。这些特定的整联蛋白存在于肿瘤细胞及其脉管系统上，并且因此是感兴趣的靶标。
整联蛋白是细胞外基质粘附蛋白的家族，其非共价地缔合成具有不同的细胞和粘附特异性的α和β异二聚体(Hynes,1992；Luscinskas和Lawler,1994)。通过整联蛋白-蛋白质相互作用介导的细胞粘附负责细胞运动、存活和分化。整联蛋白受体的每个α和β亚基都有助于配体结合和特异性。
蛋白质与许多不同的细胞表面整联蛋白的结合可以通过短肽基序Arg-Gly-Asp(RGD)介导(Pierschbacher和Ruoslahti,1984)。这些肽具有双重功能：当固定化到表面上时，它们促进细胞粘附，并且当呈递至溶液中的细胞时，它们抑制细胞粘附。含有RGD序列的粘附蛋白包括：纤连蛋白、玻连蛋白、骨桥蛋白、纤维蛋白原、血管性血友病因子、血小板反应蛋白、层粘连蛋白、巢蛋白、腱生蛋白和骨唾液蛋白(Ruoslahti,1996)。RGD序列对20种已知整联蛋白中的大约一半表现出特异性，包括α5β1、α8β1、ανβ1、ανβ3、ανβ5、ανβ6、ανβ8和αvβ3整联蛋白，以及在较小程度上的α2β1、α3β1、α4β1和α7β1整联蛋白(Ruoslahti,1996)。具体地，ανβ3整联蛋白能够结合广泛多种含有RGD的蛋白质，包括纤连蛋白、纤维蛋白原、玻连蛋白、骨桥蛋白、血管性血友病因子和血小板反应蛋白(Ruoslahti,1996；Haubner等人,1997)，而α5β1整联蛋白更具特异性并且仅显示出与纤连蛋白结合(D'Souza等人,1991)。
线性肽序列RGD对整联蛋白的亲和力远低于其所来源的蛋白质(Hautanen等人,1989)。这是由于在线性肽中不存在的折叠蛋白质结构域提供的构象特异性。增加的功能性整联蛋白活性由环状RGD基序的制备、RGD序列侧翼残基的改变以及小分子模拟物的合成导致(综述于(Ruoslahti,1996；Haubner等人,1997))。
术语“环结构域”是指肽链内的氨基酸子序列，其不具有有序的二级结构，并且通常驻留于肽的表面。术语“环”在本领域中被理解为是指不像在α螺旋、β折叠等形式中那样有序的二级结构。
术语“整联蛋白结合环”是指约9-13个氨基酸的一级序列，其通常通过实验方法诸如定向分子进化从头开始(ab initio)产生，以结合整联蛋白。在某些实施方案中，整联蛋白结合环包括置于特定于支架和期望的结合特异性的氨基酸之间的RGD肽序列或类似物。含有RGD的肽或类似肽(诸如RYD等)通常不是简单地取自已知蛋白质的天然结合序列。整联蛋白结合环优选在半胱氨酸残基之间插入打结素多肽支架内，并且根据半胱氨酸残基之间的三维间距调整环的长度以获得最佳整联蛋白结合。例如，如果打结素支架中的侧翼半胱氨酸残基彼此连接，则最佳环可比侧翼半胱氨酸残基与一级序列中分开的半胱氨酸残基连接时短。另外，可以引入特定的氨基酸取代以将较长的含RGD环约束为最佳构象以实现高亲和力整联蛋白结合。本文使用的打结素多肽支架可包含被作出以截短天然打结素，或去除环或不必要的半胱氨酸残基或二硫键的某些修饰。
将整联蛋白结合序列并入分子(例如，打结素多肽)支架中为配体呈递提供了比线性或环状肽环更具刚性且更稳定的框架。此外，小肽在溶液中的构象灵活性很高，并在结合时导致大的熵罚(entropic penalties)。此类构建体也已在国际专利公布WO 2016/025642中详细描述，所述专利以引用方式整体并入本文。
将整联蛋白结合序列并入打结素多肽支架提供了高亲和力整联蛋白结合所需的构象约束。此外，支架提供了用于进行蛋白质工程化研究诸如亲和力或稳定性成熟的平台。
如本文所用，术语“打结素蛋白”是指小蛋白的结构家族，通常为25-40个氨基酸，其与一系列分子靶标如蛋白质、糖和脂质结合。它们的三维结构基本上是由三至五个二硫键的特殊排列定义的。这类生物分子因在具有相同胱氨酸网络的几种不同的微蛋白(microprotein)中发现的其中一个二硫桥跨越了由另外两个链内二硫键限制的大环的特征性打结拓扑结构而得名。虽然它们的二级结构含量通常较低，但打结素共享一个小的三链反平行β折叠，其通过二硫键框架稳定。生物化学上明确定义的打结素家族成员，也称为胱氨酸结蛋白，包括来自喷瓜(Ecballium elaterium)种子的胰蛋白酶抑制剂EETI-II、来自肉食性锥形蜗牛鸡心螺(Conus geographus)的毒液的神经元N型Ca2+通道阻断剂共芋螺毒素(co-conotoxin)、刺豚鼠相关蛋白(AgRP，参见Millhauser等人,“Loops and Links:Structural Insights into the Remarkable Function of the Agouti-RelatedProtein,”《纽约科学院年报(Ann.N.Y.Acad.ScL)》,2003年6月1日；994(1):27-35)、ω-漏斗网蛛毒素(omega agatoxin)家族等。合适的漏斗网蛛毒素序列[SEQ ID NO:41]在美国专利8,536,301中给出，所述专利与本申请具有共同的发明人。适用于本文所公开的方法的其他漏斗网蛛毒素序列包括但不限于ω-漏斗网蛛毒素-Aa4b(GenBank登录号P37045)和ω-漏斗网蛛毒素-Aa3b(GenBank登录号P81744)。适用于本文所公开的方法的其他打结素序列包括打结素[烟粉虱(Bemisia tabaci)](GenBank登录号FJ601218.1)、ω-莱科毒素(Omega-lycotoxin)(Genbank登录号P85079)、μ-O芋螺毒素MrVIA＝电压门控钠通道阻断剂(Genbank登录号AAB34917)以及木鳖子(Momordica cochinchinensis)胰蛋白酶抑制剂I(MCoTI-I)或II(MCoTI-II)(分别为Uniprot登录号P82408和P82409)。
打结素蛋白具有特征性的二硫化物连接的结构。此结构也在Gelly等人,“TheKNOTTIN website and database:a new information system dedicated to theknottin scaffold,”《核酸研究》,2004,第32卷,数据库专刊(Database issue)D156-D159中有所说明。三链β折叠存在于许多打结素中。半胱氨酸残基之间的间距很重要，整联蛋白结合环的分子拓扑结构和构象也很重要。
术语“分子支架”是指整联蛋白结合环并入其中的具有预先确定的三维结构的聚合物，诸如如本文所述的RGD肽序列。术语“分子支架”具有本领域公认的含义(在其他上下文中)，此处也有此含义。例如，Skerra的综述“Engineered protein scaffolds formolecular recognition,”《分子识别期刊(J.Mol.Recognit.)》2000；13:167-187描述了以下支架：免疫球蛋白超家族的抗体的单个结构域、蛋白酶抑制剂、螺旋束蛋白、二硫化物打结的肽和脂质运载蛋白。为选择适当的分子支架给出了指导。
术语“打结素多肽支架”是指适合用作分子支架的打结素蛋白，如本文所述。用于工程化的期望的打结素多肽支架的特征包括1)体外和体内的高稳定性，2)用其他序列置换支架的氨基酸区域而不破坏整体折叠的能力，3)通过工程化分子的单独区域来产生多功能或双特异性靶向的能力，以及4)用以允许化学合成和在期望时并入非天然氨基酸的小尺寸。源自人蛋白质的支架有利于治疗应用，以减少毒性或免疫原性问题，但并不总是严格要求。已用于蛋白质设计的其他支架包括纤连蛋白(Koide等人,1998)、脂质运载蛋白(Beste等人,1999)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)(Hufton等人,2000)以及淀粉酶抑肽(tenamistat)(McConnell和Hoess,1995；Li等人,2003)。虽然这些支架已被证明是蛋白质工程化的有用框架，但诸如打结素之类的分子支架具有明显优势：它们的小尺寸和高稳定性。
如本文所用，术语“NOD201”是指包含以下序列：GCPRPRGDNPPLTCSQDSDCLAGCVCGPNGFCG(SEQ ID NO:119；2.5F肽)并且在2.5F肽与Fc结构域之间没有接头的整联蛋白结合多肽-Fc融合体。在一些实施方案中，Fc结构域来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4并且可以是小鼠或人来源的。
如本文所用，术语“NOD201modK”是指包含以下序列：GCPRPRGDNPPLTCKQDSDCLAGCVCGPNGFCG(SEQ ID NO:120；2.5FmodK肽)并且在2.5FmodK肽与Fc结构域之间没有接头的整联蛋白结合多肽-Fc融合体。在一些实施方案中，Fc结构域来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4并且可以是小鼠或人来源的。
如本文所用，术语“NOD203”是指包含以下序列：GCPRPRGDNPPLTCSQDSDCLAGCVCGPNGFCGGGGGS(SEQ ID NO:121；2.5F肽)并且在2.5F肽与Fc结构域之间具有Gly4Ser接头的整联蛋白结合多肽-Fc融合体。在一些实施方案中，Fc结构域来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4并且可以是小鼠或人来源的。
如本文所用，术语“NOD203modK”是指包含以下序列：GCPRPRGDNPPLTCKQDSDCLAGCVCGPNGFCGGGGGS(SEQ ID NO:122；2.5FmodK肽)并且在2.5FmodK肽与Fc结构域之间具有Gly4Ser接头的整联蛋白结合多肽-Fc融合体。在一些实施方案中，Fc结构域来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4并且可以是小鼠或人来源的。
如本文所用，术语“NOD204”是指包含以下序列：GCPRPRGDNPPLTCSQDSDCLAGCVCGPNGFCGGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:123；2.5F肽)并且在2.5F肽与Fc结构域之间具有Gly4Ser3接头的整联蛋白结合多肽-FC融合体。在一些实施方案中，Fc结构域来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4并且可以是小鼠或人来源的。
如本文所用，术语“NOD204modK”是指包含以下序列：CPRPRGDNPPLTCKQDSDCLAGCVCGPNGFCGGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:124；2.5FmodK肽)并且在2.5FmodK肽与Fc结构域之间具有Gly4Ser3接头的整联蛋白结合多肽-FC融合体。在一些实施方案中，Fc结构域来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4并且可以是小鼠或人来源的。
如本文所用，术语“AgRP”是指PDB条目1HYK。其在打结素数据库中的条目是SwissProt AGRP_HUMAN，可在其中找到129个氨基酸的全长序列。它包含从氨基酸87处开始的序列。一个另外的G被添加到此构建体中。它还包括Jackson等人2002Biochemistry,41,7565以及国际专利公布WO 2016/025642(其以引用方式整体并入)中描述的CI 05A突变；来自环4的粗体且加有下划线的部分被本文所述的RGD序列置换。环1和3在括号之间示出。
如本文所用，“整联蛋白结合多肽-Fc融合体”与“打结素-Fc”可互换使用，并且是指包括打结素多肽支架内的整联蛋白结合氨基酸序列并且与Fc结构域可操作地连接的整联蛋白结合多肽。在一些实施方案中，Fc结构域与整联蛋白结合多肽的N端融合。在一些实施方案中，Fc结构域与整联蛋白结合多肽的C端融合。在一些实施方案中，Fc结构域通过接头与整联蛋白结合多肽可操作地连接。
如本文所用，术语“Fc区”是指由其两条重链的对应Fc结构域(或Fc部分)形成的天然免疫球蛋白的部分。如本文所用，术语“Fc结构域”是指单个免疫球蛋白(Ig)重链的一部分，其中Fc结构域不包含Fv结构域。因此，Fc结构域也可以称为“Ig”或“IgG”。在某些实施方案中，Fc结构域在木瓜蛋白酶切割位点上游不远处的铰链区开始并在抗体的C端结束。因此，完整的Fc结构域包括至少铰链结构域、CH2结构域和CH3结构域。在某些实施方案中，Fc结构域包括以下中的至少一个：铰链(例如，上、中和/或下铰链区)结构域、CH2结构域、CH3结构域、CH4结构域，或其变体、部分或片段。在其他实施方案中，Fc结构域包括完整的Fc结构域(即，铰链结构域、CH2结构域和CH3结构域)。在一个实施方案中，Fc结构域包括与CH3结构域(或其部分)融合的铰链结构域(或其部分)。在另一个实施方案中，Fc结构域包括与CH3结构域(或其部分)融合的CH2结构域(或其部分)。在另一个实施方案中，Fc结构域由CH3结构域或其部分组成。在另一个实施方案中，Fc结构域由铰链结构域(或其部分)和CH3结构域(或其部分)组成。在另一个实施方案中，Fc结构域由CH2结构域(或其部分)和CH3结构域组成。在另一个实施方案中，Fc结构域由铰链结构域(或其部分)和CH2结构域(或其部分)组成。在一个实施方案中，Fc结构域缺少CH2结构域的至少一部分(例如，CH2结构域的全部或一部分)。本文的Fc结构域通常是指包含免疫球蛋白重链的Fc结构域的全部或一部分的多肽。这包括但不限于包含整个CH1、铰链、CH2和/或CH3结构域的多肽以及仅包含例如铰链、CH2和CH3结构域的此类肽的片段。Fc结构域可源自任何物种和/或任何亚型的免疫球蛋白，包括但不限于人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM抗体。人IgG1恒定区可以在Uniprot P01857和图2中找到。缺失上铰链区的人IgG1的Fc结构域可以在国际专利公布号WO 2016/025642的表2，SEQ ID NO:3中找到。Fc结构域涵盖天然Fc和Fc变体分子。对于Fc变体和天然Fc，术语Fc结构域包括单体或多聚体(例如二聚体)形式的分子，无论是从完整抗体消化还是通过其他手段产生的。将氨基酸残基编号分配给Fc结构域是根据Kabat的定义进行的。参见，例如，Sequences of Proteins of Immunological Interest(Table of Contents,Introduction and Constant Region Sequences章节),第5版,Bethesda,MD:NIH第1卷:647-723(1991)；Kabat等人,“Introduction”Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,US Dept of Health and Human Services,NIH,第5版,Bethesda,MD第1卷:xiii-xcvi(1991)；Chothia&Lesk,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917(1987)；Chothia等人,《自然(Nature)》342:878-883(1989)，其中的每一个均出于所有目的以引用方式并入本文。关于本文所述的整联蛋白结合多肽-Fc融合体，来自如本文所述或已知的任何IgG的任何Fc结构域可以用作Fc融合体的一部分，包括小鼠、人及其变体，诸如铰链缺失(EPKSC缺失；参见，来自国际专利公布号WO 2016/025642的SEQ ID NO:3)。
如本文所述，本领域普通技术人员将理解，可对任何Fc结构域进行修饰，使得其氨基酸序列与天然存在的免疫球蛋白分子的天然Fc结构域有所不同。在某些示例性实施方案中，Fc结构域具有增加的效应功能(例如，FcγR结合)。
本发明的多肽的Fc结构域可源自不同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的Fc结构域可包含源自IgG1分子的CH2和/或CH3结构域和源自IgG3分子的铰链区。在另一个实例中，Fc结构域可以包含部分源自IgG1分子并且部分源自IgG3分子的嵌合铰链区。在另一个实例中，Fc结构域可以包含部分源自IgG1分子并且部分源自IgG4分子的嵌合铰链。
“源自”指定多肽或蛋白质的多肽或氨基酸序列是指所述多肽的来源。优选地，源自特定序列的多肽或氨基酸序列具有与该序列或其部分基本上相同的氨基酸序列，其中所述部分由至少10-20个氨基酸，优选地至少20-30个氨基酸，更优选地至少30-50个氨基酸组成，或本领域普通技术人员以其他方式可鉴定为在序列中具有其起源的氨基酸序列。源自另一肽的多肽相对于起始多肽可具有一个或多个突变，例如一个或多个氨基酸残基已被另一氨基酸残基取代或具有一个或多个氨基酸残基插入或缺失。
多肽可以包含并非天然存在的氨基酸序列。此类变体必须与起始IL-2或打结素蛋白具有小于100％的序列同一性或相似性。在一些实施方案中，变体将具有与起始多肽的氨基酸序列具有约75％至小于100％的氨基酸序列同一性或相似性的氨基酸序列，更优选地约80％至小于100％，更优选地约85％至小于100％，更优选地约90％至小于100％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)并且在一些实施方案中约95％至小于100％，例如在变体分子的长度上。
在一个实施方案中，起始多肽序列与源自其的序列之间存在一个氨基酸差异。相对于该序列的同一性或相似性在本文中定义为在将序列对齐并在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比之后候选序列中与起始氨基酸残基相同(即，相同残基)的氨基酸残基的百分比。
表1：序列汇总
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在一个实施方案中，整联蛋白结合多肽或其变体包含选自SEQ ID NO:51-119的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。在一个实施方案中，多肽包括与选自SEQ ID No:51-119的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，多肽包括与选自SEQ ID No:51-119的连续氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的连续氨基酸序列。在一个实施方案中，多肽包括具有选自SEQ IDNO:51-119的氨基酸序列的至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、300、400或500(或这些数字内的任何整数)个连续氨基酸的氨基酸序列。
表2：结合整联蛋白的打结素序列
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Figure BDA0003346782430000311
Figure BDA0003346782430000321
Figure BDA0003346782430000331
表3：整联蛋白结合多肽序列、信号序列、接头、Fc融合体
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Figure BDA0003346782430000351
Figure BDA0003346782430000361
表4：示例性IgG序列：
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Figure BDA0003346782430000381
本领域普通技术人员还将理解，本文使用的多肽，包括整联蛋白结合多肽-Fc融合体，可被改变，使得其序列不同于其所源自的天然存在的或天然的序列，同时保留天然序列的期望活性。例如，可进行导致“非必需”氨基酸残基处的保守取代或改变的核苷酸或氨基酸取代。突变可通过标准技术引入，诸如定点诱变和PCR介导的诱变。
本文所述的多肽(例如，打结素、Fc、打结素-Fc、整联蛋白结合多肽-Fc融合体等)可在一个或多个氨基酸残基处，例如在必需或非必需氨基酸残基处包含保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基置换的取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支化侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，结合多肽中的非必需氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基置换。在另一个实施方案中，氨基酸串可以用在侧链家族成员的顺序和/或组成上不同的结构上类似的串置换。可替代地，在另一个实施方案中，可沿编码序列的全部或部分随机引入突变，诸如通过饱和诱变，并且可以将所得突变体并入本发明的结合多肽中并针对其结合期望靶标的能力进行筛选。
“程序性死亡-1(PD-1)”受体是指属于CD28家族的免疫抑制性受体。PD-1主要在先前激活的T细胞上体内表达，并与两种配体PD-L1和PD-L2结合。如本文所用，术语“PD-1”包括人PD-1(hPD-1)、hPD-1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-1序列可以在GenBank登录号AAC51773(来自国际公布号WO2016/025642的SEQ ID NO:52)下找到。
“程序性死亡配体1(PD-L1)”是PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体中的一种(另一种是PD-L2)，其在与PD-1结合时下调T细胞活化和细胞因子分泌。如本文所用，术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)、hPD-L1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-L1序列可以在GenBank登录号Q9NZQ7(来自国际公布号WO2016/025642的SEQ ID NO:53)下找到。
“细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)”是一种T细胞表面分子并且是免疫球蛋白超家族的成员。这种蛋白质通过与CD80和CD86的结合来下调免疫系统。如本文所用，术语“CTLA-4”包括人CTLA-4(hCTLA-4)、hCTLA-4的变体、同种型和物种同源物，以及与hCTLA-4具有至少一个共同表位的类似物。完整的hCTLA-4序列可以在GenBank登录号P16410(来自国际公布号WO 2016/025642的SEQ ID NO:54)下找到。
“淋巴细胞激活基因3(LAG-3)”是与通过与MHC II类分子的结合实现的淋巴细胞活性抑制相关的抑制性受体。该受体增强Treg细胞的功能并抑制CD8+效应T细胞功能。如本文所用，术语“LAG-3”包括人LAG-3(hLAG-3)、hLAG-3的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。完整的hLAG-3序列可以在GenBank登录号P18627(来自国际公布号WO 2016/025642的SEQ ID NO:55)下找到。
“T细胞膜蛋白3(TIM-3)”是参与通过T细胞和B细胞应答的抑制实现的淋巴细胞活性抑制的抑制性受体。其配体是在各种类型的癌症中上调的半乳糖凝集素9。如本文所用，术语“TIM-3”包括人TIM-3(hTIM-3)、hTIM-3的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。完整的hTIM-3序列可以在GenBank登录号Q8TDQ0(来自国际公布号WO2016/025642的SEQ ID NO:56)下找到。
“B7家族”是指具有未定义受体的抑制性配体。B7家族包括B7-H3和B7-H4，两者在肿瘤细胞和肿瘤浸润细胞上均上调。完整的hB7-H3和hB7-H4序列可以分别在GenBank登录号Q5ZPR3和AAZ17406(来自国际公布号WO 2016/025642的SEQ ID NO:57和58)下找到。
“血管内皮生长因子(VEGF)”是分泌性二硫化物连接的同源二聚体，其选择性地刺激内皮细胞增殖、迁移和产生基质降解酶，所有这些都是新血管的形成所需要的过程。除了是唯一已知的内皮细胞特异性丝裂原之外，VEGF因其诱导对大分子的血管渗透性瞬时增加的能力而在血管生成生长因子中是独一无二的。术语“VEGF”或“VEGF-A”用于指165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子和相关的121、145、189和206个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如例如Leung等人《科学(Science)》,246:1306(1989)和Houck等人《分子内分泌学(Mol.Endocrin.)》,5:1806(1991)所描述，以及其天然存在的等位基因和加工形式。VEGF-A是包括VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F和P1GF的基因家族的一部分。VEGF-A主要结合两种高亲和力受体酪氨酸激酶VEGFR-1(Fit-1)和VEGFR-2(Flk-1 KDR)，后者是VEGF-A的血管内皮细胞有丝分裂信号的主要递质。
“具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)”是在T细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)上发现的免疫受体，如Yu X等人,《自然免疫学(Nat Immunol.)》10(1):48-57(2009)所述。它也被称为WUCAM和Vstm3。TIGIT以高亲和力结合例如树突细胞(DC)和巨噬细胞上的CD155(PVR)。TIGIT也与CD112(PVRL2)结合，但亲和力较低。另外参见Anderson,A.等人,《免疫(Immunity)》,44(5):989-1004(2016)。人TIGIT序列可以以登录号Q495A1在UniProtKB上找到。
如本文所用，“免疫检查点”是指调节抗原的T细胞受体识别的幅度和质量的刺激和抑制性信号。在某些实施方案中，免疫检查点是抑制性信号。在某些实施方案中，抑制性信号是PD-1与PD-L1之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是CTLA-4与CD80或CD86之间的相互作用以代替CD28结合。在某些实施方案中，抑制性信号是LAG-3与MHC II类分子之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是TIM-3与半乳糖凝集素9之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是TIGIT与CD155之间的相互作用。
如本文所用，“免疫检查点阻断剂”或“免疫检查点抑制剂”或“免疫检查点调节剂”是指减少、抑制、干扰或调节免疫系统途径中的一种或多种检查点蛋白或其他蛋白质的分子。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止与免疫检查点相关的抑制性信号。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是破坏与免疫检查点相关的抑制性信号传导的抗体或其片段。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是破坏抑制性信号传导的小分子。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是阻止检查点阻断蛋白之间的相互作用的抗体、其片段或抗体模拟物，例如阻止PD-1与PD-L1之间的相互作用的抗体或其片段。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是阻止CTLA-4与CD80或CD86之间的相互作用的抗体或其片段。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是阻止LAG-3与MHC II类分子之间的相互作用的抗体或其片段。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是阻止TIM-3与半乳糖凝集素9之间的相互作用的抗体或其片段。检查点阻断剂也可以是分子(或其突变)本身的可溶性形式，例如可溶性PD-L1或PD-L1融合体，以及可溶性TIGIT或TIGIT融合体的形式。
术语“改善(ameliorating)”是指疾病状态例如癌症的治疗中的任何治疗上有益的结果，包括预防、减轻其严重程度或进展、缓解或治愈。
术语“体内”是指在活生物体中发生的过程。
如本文所用的术语“哺乳动物”或“受试者”或“患者”包括人和非人，并且包括但不限于人、非人灵长类动物、犬科动物、猫科动物、鼠科动物、牛科动物、马科动物和猪科动物。
“个体”或“宿主”或“受试者”或“患者”是指需要诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物受试者，特别是人。其他受试者可包括食蟹猴、牛、狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马等。
如本文所用，术语“哺乳动物”是指任何哺乳动物，包括但不限于啮齿目哺乳动物，诸如小鼠和仓鼠，以及兔形目(Logomorpha)哺乳动物，诸如兔。在一些实施方案中，哺乳动物来自食肉目，包括猫科动物(猫)和犬科动物(狗)。在一些实施方案中，哺乳动物来自偶蹄目，包括牛科动物(牛)和猪科动物(swines)(猪)或来自奇蹄目的，包括马科动物(马)。最优选哺乳动物属于灵长类、新大陆猴科(Ceboids)或猴目(猴子)或类人猿目(人和猿)。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，哺乳动物是食蟹猴。
在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“同一性百分比”是指当针对最大对应性进行比较和比对时，两个或更多个序列或子序列具有特定百分比的相同核苷酸或氨基酸残基，如使用下述序列比较算法(例如，BLASTP和BLASTN或技术人员可获得的其他算法)中的一种或通过目测检查所测量的。取决于应用，“同一性百分比”可以存在于被比较序列的区域上，例如在功能性结构域上，或者，可替代地，存在于待比较的两个序列的全长上。
为了进行序列比较，通常一个序列充当与测试序列进行比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中，指定子序列坐标(如有必要)，并且指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法基于所指定的程序参数，计算一个或多个测试序列相对于参考序列的百分比序列同一性。
用于比较的序列的最佳比对可以通过以下来进行：例如，Smith&Waterman的局部同源算法(《应用数学进展(Adv.Appl.Math.)》2:482(1981))；Needleman和Wunsch的同源比对算法(《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》48:443(1970))；Pearson&Lipman的相似性搜索法(《美国国家科学院院刊(Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA)》85:2444(1988))；这些算法的计算机化实施方式(威斯康星州麦迪逊科学大道575号基因学计算机组(Genetics ComputerGroup)的威斯康星基因学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或目测检查(通常参见Ausubel等人,见下)。
适用于确定百分比序列同一性和序列相似性的算法的一个实例是BLAST算法，其描述于Altschul等人,《分子生物学杂志》215:403-410(1990)中。用于执行BLAST分析的软件可以通过美国国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)的网站公开获得。
如本文所用，术语“gly-ser多肽接头”是指由甘氨酸和丝氨酸残基组成的肽。示例性的gly-ser多肽接头包含氨基酸序列Ser(Gly4Ser)n。在一个实施方案中，n＝1。在一个实施方案中，n＝2。在另一个实施方案中，n＝3，即Ser(Gly4Ser)3。在另一个实施方案中，n＝4，即Ser(Gly4Ser)4。在另一个实施方案中，n＝5。在另一个实施方案中，n＝6。在另一个实施方案中，n＝7。在另一个实施方案中，n＝8。在另一个实施方案中，n＝9。在另一个实施方案中，n＝10。另一个示例性的gly-ser多肽接头包含氨基酸序列(Gly4Ser)n。在一个实施方案中，n＝1。在一个实施方案中，n＝2。在一个优选的实施方案中，n＝3。在另一个实施方案中，n＝4。在另一个实施方案中，n＝5。在另一个实施方案中，n＝6。另一个示例性的gly-ser多肽接头包含氨基酸序列(Gly3Ser)n。在一个实施方案中，n＝1。在一个实施方案中，n＝2。在一个优选的实施方案中，n＝3。在另一个实施方案中，n＝4。在另一个实施方案中，n＝5。在另一个实施方案中，n＝6。
如本文所用，“半衰期”是指多肽的血清或血浆浓度在体内降低50％所需的时间，例如由于自然机制的降解和/或清除或隔离(sequestration)。本文使用的延长PK IL-2在体内稳定并且其半衰期通过例如与HSA、MSA或Fc的融合，通过聚乙二醇化，或通过结合抵抗降解和/或清除或隔离的血清白蛋白分子(例如，人血清白蛋白)而增加。半衰期可以以本身已知的任何方式确定，诸如通过药代动力学分析。合适的技术对于本领域技术人员来说将是清楚的，并且可例如通常包括以下步骤：将合适剂量的本发明的氨基酸序列或化合物适当地施用给受试者；定期从所述受试者收集血液样品或其他样品；确定所述血液样品中本发明的氨基酸序列或化合物的水平或浓度；以及从由此获得的数据(的图)计算直到本发明的氨基酸序列或化合物的水平或浓度与给药时的初始水平相比减少了50％的时间。另外的细节提供于例如标准手册，诸如Kenneth,A.等人,《药物的化学稳定性：药师手册(ChemicalStability of Pharmaceuticals:A Handbook for Pharmacists)》和Peters等人,《药代动力学分析：实用方法(Pharmacokinetic Analysis:A Practical Approach)》(1996)中。另外参考Gibaldi,M.等人,《药代动力学(Pharmacokinetics)》,第2修订版本,Marcel Dekker(1982)。
如本文所用，“小分子”是分子量低于约500道尔顿的分子。
如本文所用，“治疗性蛋白质”是指可作为药物施用于受试者的任何多肽、蛋白质、蛋白质变体、融合蛋白和/或其片段。示例性的治疗性蛋白质是白细胞介素，例如IL-7。
如本文所用，关于由两种或更多种单独组分产生的效果的“协同作用”或“协同效应”是指当这些组分组合使用时产生的总效果大于每种组分单独作用的单独效果的总和的现象。
术语“足够的量”或“足以......的量”是指足以产生期望效果的量，例如足以减小肿瘤大小的量。
术语“治疗有效量”是有效改善疾病症状的量。治疗有效量可以是“预防有效量”，因为预防可以被视为疗法。
组合物的“有效量”或“治疗有效量”包括足以为施用组合物的受试者提供有益效果的组合物的量。递送媒介物的“有效量”包括足以有效结合或递送组合物的量。
如本文所用，“组合疗法”包括在方案中以顺序方式施用每种药剂或疗法，其将以基本上同时的方式提供这些药剂或疗法的组合和共同施用的有益效果。组合疗法还包括这样的组合：其中可在不同时间和/或通过不同途径施用单独要素，但它们组合作用以通过组合疗法的每种药剂或肿瘤治疗方法的共同作用或药代动力学和药效学效应提供有益效果。
如本文所用，术语“与……组合”是指以下用途：其中例如在第二疗法的整个施用过程中施用第一疗法；其中第一疗法的施用时间段与第二疗法的施用重叠，例如，其中第一疗法的施用在第二疗法的施用之前开始，并且第一疗法的施用在第二疗法的施用结束之前结束；其中第二疗法的施用在第一疗法的施用之前开始，第二疗法的施用在第一疗法的施用结束之前结束；其中第一疗法的施用在第二疗法的施用开始之前开始，并且第二疗法的施用在第一疗法的施用结束之前结束；其中第二疗法的施用在第一疗法的施用开始之前开始，并且第一疗法的施用在第二疗法的施用结束之前结束。因此，“组合”也可以指涉及施用两种或更多种疗法的方案。如本文所用，“与……组合”还指两种或更多种疗法的施用，它们可以以相同或不同的调配物、通过相同或不同的途径以及以相同或不同的剂型类型施用。
如本文所用，“约”将被普通技术人员理解并且将根据其使用的上下文在一定程度上变化。如果考虑到使用该术语的上下文，普通技术人员不清楚该术语的使用，则“约”将表示最高至特定值的正负10％。
冠词“一个”、“一种”和“所述”在本文用于指冠词的一个/种或多于一个/种(例如，至少一个/种)语法宾语。举例来说，“一个元件”是指一个元件或多于一个元件。
如本文所用，当提及诸如量、持续时间等可测量值时，“约”意在涵盖指定值的±20％或±10％、更优选±5％、甚至更优选±1％，并且更优选地是±0.1％的变化，因为这样的变化适合于执行所公开的方法。
如本文所用，“ADCC”或“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”意指其中表达FcγR的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上的结合抗体并且随后引起靶细胞裂解的细胞介导的反应。ADCC与结合FcγRIIIa相关；与FcγRIIIa结合的增加引起ADCC活性的增加。如本文所讨论的，本发明的许多实施方案完全消融ADCC活性。
如本文所用，“ADCP”或抗体依赖性细胞介导的吞噬作用意指其中表达FcγR的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上的结合抗体并且随后引起靶细胞的吞噬作用的细胞介导的反应。
本文中的“抗原结合结构域”或“ABD”意指一组六个互补决定区(CDR)在作为多肽序列的一部分存在时与如本文所讨论的靶抗原特异性地结合。因此，“抗原结合结构域”结合本文概述的靶抗原。如本领域中已知，这些CDR通常作为可变重CDR(vhCDR或VHCDR或CDR-HC)的第一组和可变轻CDR(vlCDR或VLCDR或CDR-LC)的第二组存在，其各自包括三个CDR：重链的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3和轻链的vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。CDR分别存在于可变重链结构域和可变轻链结构域中，并且一起形成Fv区。因此，在一些情况下，抗原结合结构域的六个CDR由可变重链和可变轻链提供。在“Fab”形式下，6个CDR的组由两条不同的多肽序列提供，可变重链结构域(vh或VH；包含vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)和可变轻链结构域(vl或VL；包含vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)，其中vh结构域的C端连接到重链CH1结构域的N端，vl结构域的C端连接到轻链恒定结构域的N端(且因此形成轻链)。在scFv形式中，VH和VL结构域通常通过使用如本文所述的接头共价连接成单个多肽序列，其可以是(从N端开始)vh-接头-vl或vl-接头-vh，前者通常是优选的(包括每侧的可选结构域接头，这取决于使用的形式)。如本领域所理解的，CDR在每个可变重结构域和可变轻结构域中被框架区隔开：对于轻可变区，这些是FR1-vlCDR1-FR2-vlCDR2-FR3-vlCDR3-FR4，对于重可变区，它们是FR1-vhCDR1-FR2-vhCDR2-FR3-vhCDR3-FR4，框架区显示出与人种系序列的高度同一性。本发明的抗原结合结构域包括Fab、Fv和scFv。
本文中的“修饰”意指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失或对与蛋白质化学连接的部分的更改。举例来说，修饰可以是连接于蛋白质的改变的碳水化合物或PEG结构。本文中的“氨基酸修饰”意指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。为清楚起见，除非另外说明，否则氨基酸修饰总是针对由DNA编码的氨基酸，例如具有DNA和RNA中的密码子的20种氨基酸。
如本文所用，“变体蛋白”或“蛋白变体”意指借助于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本蛋白质的蛋白质。蛋白质变体可以指蛋白质本身、包括蛋白质的组合物或编码其的氨基酸序列。优选地，蛋白变体与亲本蛋白相比具有至少一个氨基酸修饰，例如与亲本相比，具有约一个至约七十个氨基酸修饰，优选约一个至约五个氨基酸修饰。如下文所描述的，在一些实施方案中，亲本多肽，例如，Fc亲本多肽，是人野生型序列，如来自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc区。本文的蛋白变体序列将优选与亲本蛋白序列具有至少约80％的同一性，并且最优选至少约90％的同一性，更优选至少约95％-98％-99％的同一性。变体蛋白质可以指变体蛋白质本身、包括蛋白质变体的组合物或编码其的DNA序列。
因此，本文所用的“抗体变体”或“变体抗体”是指借助于至少一个氨基酸修饰而与亲本抗体不同的抗体，本文所用的“IgG变体”或“变体IgG”是指借助于至少一个氨基酸修饰而与亲本IgG(同样，在许多情况下，来自人IgG序列)不同的抗体，并且本文所用的“免疫球蛋白变体”或“变体免疫球蛋白”是指借助于至少一个氨基酸修饰而与亲本免疫球蛋白序列不同的免疫球蛋白序列。本文所用的“Fc变体”或“变体Fc”是指包含Fc结构域中的氨基酸修饰的蛋白质。本发明的Fc变体根据构成它们的氨基酸修饰来定义。因此，例如，M252Y或252Y是相对于亲本Fc多肽，在位置252处具有取代丝氨酸的Fc变体，其中编号是根据EU索引。同样，M252Y/S254T/T256E定义了相对于亲本Fc多肽，具有取代M252Y、S254T和T256E的Fc变体。野生型氨基酸的实体可以是非特异性的，在此情况下前述变体被称为252Y/254T/256E。应注意，提供取代的顺序是任意的，也就是说，例如，252Y/254T/256E是与254T/252Y/256E相同的Fc变体，诸如此类。关于本发明中所讨论的与抗体有关的所有位置，除非另外指出，否则氨基酸位置编号根据可变区编号的Kabat，以及包括Fc区在内的恒定区的EU索引。EU索引或如Kabat或EU编号方案中的EU索引是指EU抗体的编号(Edelman等人,1969,《美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)》63:78-85，在此通过引用整体并入本文中)。修饰可以是添加、缺失或取代。取代可以包含天然存在的氨基酸，以及在一些情况下合成氨基酸。
本文所用的“Fv”或“Fv片段”或“Fv区”意指包括单一抗原结合结构域(ABD)的VL和VH结构域的多肽。如本领域技术人员所理解的，这些通常由两条链组成，或者可以组合(通常与本文所述的接头)以形成scFv。
本文所用的“Fab”或“Fab区”是指包含VH、CH1、VL和CL免疫球蛋白结构域的多肽。Fab可以单独指代该区域，或者在全长抗体、抗体片段或Fab融合蛋白的背景下指代该区域。
本文所用的“效应功能”是指由抗体Fc区与Fc受体或配体相互作用产生的生物化学事件。效应功能包括但不限于ADCC、ADCP和CDC。
本文所用的“Fcγ受体”、“FcγR”或“FcγR(FcgammaR)”是指结合IgG抗体Fc区并由FcγR基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人中，这个家族包括但不限于FcγRI(CD64)，包括同种型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括同种型FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；以及FcγRIII(CD16)，包括同种型FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2)(Jefferis等人,2002,《免疫学快报(Immunol Lett)》82:57-65，其以引用的方式整体并入本文中)，以及任何未发现的人FcγR或FcγR同种型或同种异型。在一些情况下，如本文所概述的，与一种或多种FcγR受体的结合被减少或消融。例如，减少与FcγRIIIa的结合减少ADCC，并且在一些情况下，减少与FcγRIIIa和FcγRIIb的结合是期望的。
如本文所用的“FcRn”或“新生儿Fc受体”意指结合IgG抗体Fc区，并且至少部分地由FcRn基因编码的蛋白质。FcγR可来自任何生物体，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔和猴。如本领域已知的，功能FcRn蛋白包括两种多肽，通常被称为重链和轻链。轻链是β-2微球蛋白并且重链由FcRn基因编码。除非本文另外指出，否则FcRn或FcRn蛋白是指FcRn重链与β-2-微球蛋白的复合物。
如本文所用的“亲本多肽”是指随后经过修饰以产生变体的起始多肽。亲本多肽可以是天然存在的多肽或者天然存在的多肽的变体或工程化型式。亲本多肽可以指代多肽本身、包含所述亲本多肽的组合物或编码所述亲本多肽的氨基酸序列。因此，本文所用的“亲本免疫球蛋白”是指未修饰的免疫球蛋白多肽，其经过修饰以产生变体，并且本文所用的“亲本抗体”是指未修饰的抗体，其经过修饰以产生变体抗体。应注意，“亲本抗体”包括如下概述的已知的商业重组产生的抗体。
本文中的“重链恒定区”意指抗体的CH1-铰链-CH2-CH3部分，通常来自人IgG1、IgG2或IgG4。
本文所用的“靶抗原”是指由给定抗体的可变区特异性结合的分子。在本案中，靶抗原是VISTA蛋白。
本文使用的“靶细胞”是指表达靶抗原的细胞。
如本文所用，“可变区”意指免疫球蛋白的区域，其包括一个或多个基本上由分别构成κ、λ和重链免疫球蛋白基因座的V.κ、V.λ、和/或VH基因中的任一种编码的Ig结构域。
“野生型或WT”在本文中是指在自然界中发现的氨基酸序列或核苷酸序列，包括等位基因变异。WT蛋白质具有尚未经有意修饰的氨基酸序列或核苷酸序列。
本文所用的“位置”是指蛋白质序列中的位置。位置可顺序地或根据已建立格式例如抗体编号的EU索引进行编号。
本文所用的“残基”是指蛋白质中的位置及其相关的氨基酸身份标识。例如，天冬酰胺297(也称为Asn297或N297)是人抗体IgG1中位置297处的残基。
本发明的抗体通常是重组的。“重组”意指使用重组核酸技术在外源宿主细胞中产生抗体。
应用于多核苷酸的术语“重组”意指多核苷酸是克隆、限制或连接步骤以及导致构建体与自然界中发现的多核苷酸有区别和/或不同的其他程序的各种组合的产物。所述术语分别包含原始多核苷酸构建体的复制和原始病毒构建体的后代。
相对于蛋白序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为在对齐序列和在需要时引入缺口以实现最大序列同一性百分比之后，并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分，候选序列中与特定(亲本)序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以以本领域的能力范围内的各种方式实现，例如使用可公开获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件实现。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在进行比较的序列的全长内实现最大比对所需的任何算法。一种特定程序是美国公布号20160244525的[0279]到[0280]段落中所概述的ALIGN-2程序，所述公布特此以引用方式并入。核酸序列的另一种近似比对由Smith和Waterman《应用数学进展》,2:482-489(1981)的局部同源性算法提供。此算法可以通过使用由Dayhoff在《蛋白质序列和结构图集(Atlas of Protein Sequencesand Structure)》,密苏里州Dayhoff编辑,增刊53:353-358,美国华盛顿国家生物医学研究基金会(National Biomedical Research Foundation)中开发的评分矩阵应用于氨基酸序列，并由Gribskov在《核酸研究(Nucl.Acids Res.)》14(6):6745-6763(1986)中进行标准化。
遗传学计算机组(麦迪逊，威斯康星州)在“BestFit”实用程序应用程序中提供了实施该算法以确定序列的百分比同一性的实例。该方法的默认参数在Wisconsin SequenceAnalysis Package Program Manual,Version 8(1995)(可从Genetics Computer Group,Madison,WI获得)中有所描述。在本发明的上下文中建立百分比同一性的另一种方法是使用由爱丁堡大学(University of Edinburgh)版权所有、由John F.Collins和ShaneS.Sturrok开发并由智生公司(IntelliGenetics,Inc.，加利福尼亚州山景城)分发的MPSRCH程序包。从这套程序包中，可以使用史密斯-沃特曼算法，其中默认参数用于评分表(例如，空位开放罚分为12、空位延伸罚分为1，并且空位为6)。从生成的数据中，“匹配”值反映了“序列同一性”。用于计算序列之间的百分比同一性或相似性的其他合适程序是本领域公知的，例如，另一种比对程序是BLAST，使用默认参数。例如，可以使用以下默认参数来使用BLASTN和BLASTP：遗传密码＝标准；过滤器＝无；链＝两者；截止＝60；期望＝10；矩阵＝BLOSUM62；描述＝50个序列；排序方式＝高分；数据库＝非冗余，GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS翻译+Swiss蛋白质+Spupdate+PIR。这些程序的详细信息可以通过将http://放置于blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi.前面的网址找到。
本发明的氨基酸序列(“发明序列”)与亲本氨基酸序列之间的同一性的程度被计算为在两个序列的比对中精确匹配的数除以“发明序列”的长度或亲本序列的长度，以最短者为准。结果以同一性百分比表示。
在一些实施方案中，两个或更多个氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％或90％同一性。在一些实施方案中，两个或更多个氨基酸序列具有至少95％、97％、98％、99％或甚至100％同一性。
“特异性结合”或“特异性结合于”特定抗原或表位，或“对”特定抗原或表位“具有特异性”意指与非特异性相互作用可测量地不同的结合。特异性结合可以如下测量：例如相比于对照分子的结合来确定一种分子的结合，所述对照分子通常是不具有结合活性的类似结构分子。例如，可通过与类似于靶标的对照分子竞争来确定特异性结合。
“疾病”包括动物(包括人)的健康状态，其中动物不能维持体内稳态，并且其中如果疾病没有改善，则动物的健康继续恶化。
相比之下，动物(包括人)的“疾患”包括动物能够维持体内稳态的健康状态，但动物的健康状态不如没有疾患时的健康状态。如果不加以治疗，疾患不一定会导致动物健康状况进一步下降。
术语“治疗(treatment/treating/treat)”和类似术语是指获得所需药理学和/或生理学效应。就完全或部分预防疾病或其症状或降低疾病或其症状的可能性而言，该效果可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或可归因于该疾病的副作用而言，该效果可以是治疗性的。本文所使用的“治疗”涵盖对哺乳动物(特别是人)疾病的任何治疗，并且包括：(a)预防疾病在受试者发生，所述受试者可为易发生所述疾病但尚未被诊断为已患所述疾病者；(b)抑制疾病，即停止疾病的发展或进展；以及(c)缓解疾病，即引起疾病消退和/或缓解一种或多种疾病症状。“治疗”也涵盖递送剂以提供药理学效应，甚至在疾病或病症不存在下。例如，“治疗”涵盖递送可在疾病病症不存在下(例如例如在疫苗的情况下)诱发免疫应答或赋予免疫力的组合物。
如本文所使用的，术语“消退”以及源自其的词不一定意味着100％或完全回归。相反，存在不同程度的消退，本领域普通技术人员认识到其中具有潜在益处或治疗效果。在这方面，所公开的方法可以提供任何量的任何水平的哺乳动物癌症消退。此外，本发明方法提供的消退可以包括疾病(例如，癌症)的一种或多种病症或症状的消退。此外，出于本文的目的，“消退”可以包括延迟疾病的发作、延迟症状的发作和/或延迟其病症的发作。关于进行性疾病和病症，“消退”可以包括减缓疾病或疾患的进展、减缓疾病或疾患的症状的进展、和/或减缓其病症的进展。
“编码”包括多核苷酸如基因、cDNA或mRNA中核苷酸的特定序列的固有性质，以在生物过程中作为合成其他聚合物和大分子的模板，所述聚合物和大分子具有确定的核苷酸序列(即rRNA、tRNA和mRNA)或确定的氨基酸序列和由此产生的生物学性质。因此，如果，例如对应于该基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生该蛋白，则该基因编码该蛋白。两条编码链，与mRNA序列相同且通常在序列表中提供的核苷酸序列，以及用作基因或cDNA的转录模板的非编码链都可以称为编码该基因或cDNA的蛋白或其他产物。
如本文所使用的，术语“可操作地连接”包括与第二多核苷酸具有功能关系的多核苷酸，例如，包含以这样的方式排列在核酸部分内的两个多核苷酸的单链或双链核酸部分，其方式为两个多核苷酸中的至少一个能够对另一个多核苷酸施加生理学效应。例如来说，与基因编码区可操作地连接的启动子能够促进编码区的转录。指示可操作连接时指定的顺序并不重要。例如，短语：“启动子与核苷酸序列可操作地连接”和“核苷酸序列与启动子可操作地连接”在本文中可互换使用并且被认为是等效的。在一些情况下，当编码所需蛋白质的核酸进一步包括启动子/调节序列时，该启动子/调节序列位于所需蛋白质编码序列的5'端，从而驱动所需蛋白质在细胞中的表达。
如本文所用，术语“启动子”包含可操作地连接到如对期望分子进行编码的核酸序列等待转录的核酸序列的DNA序列。启动子通常定位在待转录的核酸序列的上游，并为RNA聚合酶和其他转录因子的特异性结合提供位点。
“载体”能够将基因序列转移到靶细胞。典型地，“载体构建体”、“表达载体”和“基因转移载体”意指能够指导所关注基因的表达并且可以通过载体的全部或一部分的基因组整合或载体作为染色体外元件的短暂或可遗传维持将基因序列转移到靶细胞的任何核酸构建体。因此，所述术语包含克隆和表达媒剂以及整合载体。
如本文所使用的，术语“调控元件”包含控制核酸序列表达的某些方面的核苷酸序列。调控元件的实例示例性地包括有助于核酸序列的复制、转录和/或转录后加工的增强子、内部核糖体进入位点(IRES)、内含子、复制起点、聚腺苷酸化信号(pA)、启动子、增强子、转录终止序列和上游调节结构域。在某些情况下，调控元件还可以包含顺式调节DNA元件以及转座元件(TE)。本领域的普通技术人员能够在不超过常规实验的情况下选择和使用表达构建体中的这些和其他调控元件。表达构建体可以使用遗传重组途径或使用众所周知的方法以合成方式产生。
“控制元件”或“控制序列”是参与分子的相互作用的核苷酸序列，所述相互作用有助于对多核苷酸进行功能调节，包含多核苷酸的复制、重复、转录、剪接、翻译或降解。调节会影响过程的频率、速度或特异性并且在本质上会具有增强或抑制性。本领域已知的控制元件包含例如转录调节序列，如启动子和增强子。启动子是在某些条件下能够结合RNA聚合酶并且启动对通常位于启动子下游(沿3'方向)的编码区进行转录的DNA区域。
本文所使用的氨基酸残基被“磷酸化”的陈述意指磷酸基团与氨基酸残基的侧链酯连接。可以被磷酸化的典型氨基酸残基包含丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)。
如本文所使用的，术语“药物组合物”是指活性剂与惰性或活性载体的组合，使得该组合物特别适用于体内或离体的诊断或治疗用途。
如本文所使用的，术语“药学上可接受的载体”是指任何标准药用载体，例如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳剂(例如，例如油/水或水/油乳剂)和各种类型的润湿剂。组合物还可包括稳定剂和防腐剂。对于载体、稳定剂和佐剂的实例，参见例如，Martin,《雷明登氏药学全书(Remington's Pharmaceutical Sciences)》,第15版,麦克出版公司(MackPubl.Co.),宾夕法尼亚州伊斯顿[1975]。
如本文所用，术语“增强免疫应答”和“诱导免疫应答”可互换使用并且是指刺激免疫应答。
如本文所用，术语“抑制免疫应答”是指阻断免疫应答的刺激。阻断可以是部分的或完全的。
在整个说明书中，当组合物被描述为具有、包含或包括特定组分时，或当过程和方法被描述为具有、包含或包括特定步骤时，预期另外存在基本上由所述组分组成或由所述组分组成的本发明的组合物，并且存在基本上由所述加工步骤组成或由所述加工步骤组成的根据本发明的过程和方法。
一般而言，除非另外说明，否则规定百分比的组合物是按重量计的。进一步地，如果变量未附带定义，则对照该变量之前的定义。
本发明的各个方面在以下部分中阐述；然而，在一个特定部分中描述的本发明的方面不限于任何特定部分。
III.抗VISTA抗体
本公开提供了新型抗VISTA抗体。此类抗体结合人VISTA。图1列出了可以与人VISTA结合的如图1中指定的组合的重链可变区和轻链可变区的肽序列。在一些实施方案中，重链可变区和轻链可变区以Fab形式排列。在一些实施方案中，重链可变区和轻链可变区融合在一起以形成scFv。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:1(如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区)具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与如图1、图5、图6和/或图7中所提供的轻链可变区具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体选自由以下组成的组：VS7、VS143、VISTA0.5.9、VISTA1.4.1、VISTA1.4.2、VISTA1.4.3、VISTA1.4.4、VISTA1.4.5、VISTA1.4.6、VISTA1.4.7(VS147)、VISTA1.4.8、V1、V2、V3、V4、V5、V6、V7、V8、V9、V10、V11、V12、V13、V14、V15、V16、V17、V18、XC147 HC、XC147 LC和V9.7(XC147的scFv型式)。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包含如VS7、VS143、VISTA 0.5.9、VISTA1.4.1、VISTA1.4.2、VISTA1.4.3、VISTA1.4.4、VISTA1.4.5、VISTA1.4.6、VISTA1.4.7(VS147)、VISTA1.4.8、V1、V2、V3、V4、V5、V6、V7、V8、V9、V10、V11、V12、V13、V14、V15、V16、V17、V18、XC147 HC、XC147 LC和V9.7(XC147的scFv型式)中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:5具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:1的vhCDR1、包含SEQ IDNO:3的vhCDR2、包含SEQ ID NO:4的vhCDR3、包含SEQ ID NO:6的vlCDR1、包含SEQ ID NO:7的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:8的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:9具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:13具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:10的vhCDR1、包含SEQ IDNO:11的vhCDR2、包含SEQ ID NO:12的vhCDR3、包含SEQ ID NO:14的vlCDR1、包含SEQ IDNO:15的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:16的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:145具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:146的vhCDR1、包含SEQ IDNO:147的vhCDR2、包含SEQ ID NO:148的vhCDR3、包含SEQ ID NO:149的vlCDR1、包含SEQ IDNO:150的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:151的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:152具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:153的vhCDR1、包含SEQ IDNO:154的vhCDR2、包含SEQ ID NO:155的vhCDR3、包含SEQ ID NO:156的vlCDR1、包含SEQ IDNO:157的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:158的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:159具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:160的vhCDR1、包含SEQ IDNO:161的vhCDR2、包含SEQ ID NO:162的vhCDR3、包含SEQ ID NO:163的vlCDR1、包含SEQ IDNO:164的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:165的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:166具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:167的vhCDR1、包含SEQ IDNO:168的vhCDR2、包含SEQ ID NO:169的vhCDR3、包含SEQ ID NO:170的vlCDR1、包含SEQ IDNO:171的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:172的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:173具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:174的vhCDR1、包含SEQ IDNO:175的vhCDR2、包含SEQ ID NO:176的vhCDR3、包含SEQ ID NO:177的vlCDR1、包含SEQ IDNO:178的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:179的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:180具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:181的vhCDR1、包含SEQ IDNO:182的vhCDR2、包含SEQ ID NO:183的vhCDR3、包含SEQ ID NO:184的vlCDR1、包含SEQ IDNO:185的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:186的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:187具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:188的vhCDR1、包含SEQ IDNO:189的vhCDR2、包含SEQ ID NO:190的vhCDR3、包含SEQ ID NO:191的vlCDR1、包含SEQ IDNO:192的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:193的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:194具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:195的vhCDR1、包含SEQ IDNO:196的vhCDR2、包含SEQ ID NO:197的vhCDR3、包含SEQ ID NO:198的vlCDR1、包含SEQ IDNO:199的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:200的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:201具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:202的vhCDR1、包含SEQ IDNO:203的vhCDR2、包含SEQ ID NO:204的vhCDR3、包含SEQ ID NO:205的vlCDR1、包含SEQ IDNO:206的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:207的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:208具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:209的vhCDR1、包含SEQ IDNO:210的vhCDR2、包含SEQ ID NO:211的vhCDR3、包含SEQ ID NO:212的vlCDR1、包含SEQ IDNO:213的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:214的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:215具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:216的vhCDR1、包含SEQ IDNO:217的vhCDR2、包含SEQ ID NO:218的vhCDR3、包含SEQ ID NO:219的vlCDR1、包含SEQ IDNO:220的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:221的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:222具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:223的vhCDR1、包含SEQ IDNO:224的vhCDR2、包含SEQ ID NO:225的vhCDR3、包含SEQ ID NO:226的vlCDR1、包含SEQ IDNO:227的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:228的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:229具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:230的vhCDR1、包含SEQ IDNO:231的vhCDR2、包含SEQ ID NO:232的vhCDR3、包含SEQ ID NO:233的vlCDR1、包含SEQ IDNO:234的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:235的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:236具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:237的vhCDR1、包含SEQ IDNO:238的vhCDR2、包含SEQ ID NO:239的vhCDR3、包含SEQ ID NO:240的vlCDR1、包含SEQ IDNO:241的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:242的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:243具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:244的vhCDR1、包含SEQ IDNO:245的vhCDR2、包含SEQ ID NO:246的vhCDR3、包含SEQ ID NO:247的vlCDR1、包含SEQ IDNO:248的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:249的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:250具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:251的vhCDR1、包含SEQ IDNO:252的vhCDR2、包含SEQ ID NO:253的vhCDR3、包含SEQ ID NO:254的vlCDR1、包含SEQ IDNO:255的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:256的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:257具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:258的vhCDR1、包含SEQ IDNO:259的vhCDR2、包含SEQ ID NO:260的vhCDR3、包含SEQ ID NO:261的vlCDR1、包含SEQ IDNO:262的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:263的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:264具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:265的vhCDR1、包含SEQ IDNO:266的vhCDR2、包含SEQ ID NO:267的vhCDR3、包含SEQ ID NO:268的vlCDR1、包含SEQ IDNO:269的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:270的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:271具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:275具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:279具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:272的vhCDR1、包含SEQ IDNO:273的vhCDR2、包含SEQ ID NO:274的vhCDR3、包含SEQ ID NO:276的vlCDR1、包含SEQ IDNO:277的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:278的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:280具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:284具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:288具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:281的vhCDR1、包含SEQ IDNO:282的vhCDR2、包含SEQ ID NO:283的vhCDR3、包含SEQ ID NO:285的vlCDR1、包含SEQ IDNO:286的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:287的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:289具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:293具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:297具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:290的vhCDR1、包含SEQ IDNO:291的vhCDR2、包含SEQ ID NO:292的vhCDR3、包含SEQ ID NO:294的vlCDR1、包含SEQ IDNO:295的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:296的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:298具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:302具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:306具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:299的vhCDR1、包含SEQ IDNO:300的vhCDR2、包含SEQ ID NO:301的vhCDR3、包含SEQ ID NO:303的vlCDR1、包含SEQ IDNO:304的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:305的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:307具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:311具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:315具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:308的vhCDR1、包含SEQ IDNO:309的vhCDR2、包含SEQ ID NO:310的vhCDR3、包含SEQ ID NO:312的vlCDR1、包含SEQ IDNO:313的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:314的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:316具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:320具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:324具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:317的vhCDR1、包含SEQ IDNO:318的vhCDR2、包含SEQ ID NO:319的vhCDR3、包含SEQ ID NO:321的vlCDR1、包含SEQ IDNO:322的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:323的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:325具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:329具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:333具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:326的vhCDR1、包含SEQ IDNO:327的vhCDR2、包含SEQ ID NO:328的vhCDR3、包含SEQ ID NO:330的vlCDR1、包含SEQ IDNO:331的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:332的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:334具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:338具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:342具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:335的vhCDR1、包含SEQ IDNO:336的vhCDR2、包含SEQ ID NO:337的vhCDR3、包含SEQ ID NO:339的vlCDR1、包含SEQ IDNO:340的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:341的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:343具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:347具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:351具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:344的vhCDR1、包含SEQ IDNO:345的vhCDR2、包含SEQ ID NO:346的vhCDR3、包含SEQ ID NO:348的vlCDR1、包含SEQ IDNO:349的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:350的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:352具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:356具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:360具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:353的vhCDR1、包含SEQ IDNO:354的vhCDR2、包含SEQ ID NO:355的vhCDR3、包含SEQ ID NO:357的vlCDR1、包含SEQ IDNO:358的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:359的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:361具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:365具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:369具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:362的vhCDR1、包含SEQ IDNO:363的vhCDR2、包含SEQ ID NO:364的vhCDR3、包含SEQ ID NO:366的vlCDR1、包含SEQ IDNO:367的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:368的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:370具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:374具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:378具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:371的vhCDR1、包含SEQ IDNO:372的vhCDR2、包含SEQ ID NO:373的vhCDR3、包含SEQ ID NO:375的vlCDR1、包含SEQ IDNO:376的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:377的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:379具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:383具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:387具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:380的vhCDR1、包含SEQ IDNO:381的vhCDR2、包含SEQ ID NO:382的vhCDR3、包含SEQ ID NO:384的vlCDR1、包含SEQ IDNO:385的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:386的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:388具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:392具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:396具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:389的vhCDR1、包含SEQ IDNO:390的vhCDR2、包含SEQ ID NO:391的vhCDR3、包含SEQ ID NO:393的vlCDR1、包含SEQ IDNO:394的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:395的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:397具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:401具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:405具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:398的vhCDR1、包含SEQ IDNO:399的vhCDR2、包含SEQ ID NO:400的vhCDR3、包含SEQ ID NO:401的vlCDR1、包含SEQ IDNO:402的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:403的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:406具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:410具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:414具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:407的vhCDR1、包含SEQ IDNO:408的vhCDR2、包含SEQ ID NO:409的vhCDR3、包含SEQ ID NO:411的vlCDR1、包含SEQ IDNO:412的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:413的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:415具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:419具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:423具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:416的vhCDR1、包含SEQ IDNO:417的vhCDR2、包含SEQ ID NO:418的vhCDR3、包含SEQ ID NO:420的vlCDR1、包含SEQ IDNO:421的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:422的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:424具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:428具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:432具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:425的vhCDR1、包含SEQ IDNO:426的vhCDR2、包含SEQ ID NO:427的vhCDR3、包含SEQ ID NO:429的vlCDR1、包含SEQ IDNO:430的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:431的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:433具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:437具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:441具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:434的vhCDR1、包含SEQ IDNO:435的vhCDR2、包含SEQ ID NO:436的vhCDR3、包含SEQ ID NO:438的vlCDR1、包含SEQ IDNO:439的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:440的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:442具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:446具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:450具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:443的vhCDR1、包含SEQ IDNO:444的vhCDR2、包含SEQ ID NO:445的vhCDR3、包含SEQ ID NO:447的vlCDR1、包含SEQ IDNO:448的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:449的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:451具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:455具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:459具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:452的vhCDR1、包含SEQ IDNO:453的vhCDR2、包含SEQ ID NO:454的vhCDR3、包含SEQ ID NO:456的vlCDR1、包含SEQ IDNO:457的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:458的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:460具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:464具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:468具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:461的vhCDR1、包含SEQ IDNO:462的vhCDR2、包含SEQ ID NO:463的vhCDR3、包含SEQ ID NO:465的vlCDR1、包含SEQ IDNO:466的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:467的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:469具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:473具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:477具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:470的vhCDR1、包含SEQ IDNO:471的vhCDR2、包含SEQ ID NO:472的vhCDR3、包含SEQ ID NO:474的vlCDR1、包含SEQ IDNO:475的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:476的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:478具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:482具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:486具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:479的vhCDR1、包含SEQ IDNO:480的vhCDR2、包含SEQ ID NO:481的vhCDR3、包含SEQ ID NO:483的vlCDR1、包含SEQ IDNO:484的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:485的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:487具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:491具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:495具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:488的vhCDR1、包含SEQ IDNO:489的vhCDR2、包含SEQ ID NO:490的vhCDR3、包含SEQ ID NO:492的vlCDR1、包含SEQ IDNO:493的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:494的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:496具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:500具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:504具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:497的vhCDR1、包含SEQ IDNO:498的vhCDR2、包含SEQ ID NO:499的vhCDR3、包含SEQ ID NO:501的vlCDR1、包含SEQ IDNO:502的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:503的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:505具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:509具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:513具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:506的vhCDR1、包含SEQ IDNO:507的vhCDR2、包含SEQ ID NO:508的vhCDR3、包含SEQ ID NO:510的vlCDR1、包含SEQ IDNO:511的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:512的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:514具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区和氨基酸序列与SEQ ID NO:518具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开中的抗VISTA抗体包括氨基酸序列与SEQ ID NO:522具有至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的重链可变区。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体包括包含SEQ ID NO:515的vhCDR1、包含SEQ IDNO:516的vhCDR2、包含SEQ ID NO:517的vhCDR3、包含SEQ ID NO:519的vlCDR1、包含SEQ IDNO:520的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:521的vlCDR3。在一些实施方案中，这样的6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR含有1或2个氨基酸取代，并且修饰的抗VISTA抗体保持与人VISTA的结合。
除了本文所述的重链和轻链可变区和/或CDR中的序列变体之外，还可以对重链和/或轻链可变区的框架区进行改变。在一些实施方案中，框架区中的变体(例如，不包含CDR)保留与种系序列至少约80％、85％、90％或95％的同一性。可以制备变体以与轻链V-GENE、轻链J-GENE、重链V-GENE、重链J-GENE和重链D-GENE等位基因中的任一项保持至少约80％、85％、90％或95％的同一性。
在一些实施方案中，在保持与种系基因序列至少80％、85％、90％或95％同一性的框架区中进行变异，同时保持6个CDR不变。
在一些实施方案中，在与种系基因序列保持至少80％、85％、90％或95％同一性的框架区和6个CDR两者中都进行了变异。或者，CDR可具有氨基酸修饰(例如来自所述组的CDR中的1、2、3、4或5个氨基酸修饰(即，CDR可为经修饰的，只要所述组6个CDR中的改变的总数小于6个氨基酸修饰，其中改变CDR的任何组合；例如，vlCDR1中可存在一个变化，vhCDR2中可存在两个变化，vhCDR3中可不存在变化等)。
通过从本文所述的那些中选择重链和轻链的CDR和/或可变区的氨基酸序列并适当地将其与框架区和/或抗体的重链和轻链的恒定区的氨基酸序列组合，本领域技术人员将能够根据本发明设计抗VISTA抗体。本发明中描述的抗体框架区和/或恒定区(Fc结构域)可以来源于任何物种的抗体，例如来源于人、兔、狗、猫、小鼠、马或猴。
在一些实施方案中，恒定区源自人，并且包括源自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD亚型或其变体的重链恒定区，以及源自κ或λ亚型或其变体的轻链恒定区。在一些实施方案中，重链恒定区源自人IgG，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一些实施方案中，重链恒定区的氨基酸序列与人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区至少80％、85％、90％或95％相同。在一些其他实施方案中，恒定区的氨基酸序列与另一种哺乳动物(如兔子、狗、猫、小鼠、马或猴)的抗体恒定区具有至少80％、85％、90％或95％的同一性。在一些实施方案中，抗体恒定区包括铰链、CH2结构域、CH3结构域和任选的CH1结构域。
在一些实施方案中，本文的抗体可源自来自不同物种的混合物，例如嵌合抗体和/或人源化抗体。通常，“嵌合抗体”和“人源化抗体”都是指组合来自超过一种物种的区域的抗体。例如，“嵌合抗体”传统上包括来自小鼠(或在一些情况下为大鼠)的可变区和来自人的恒定区。“人源化抗体”通常是指非人抗体，其具有与人抗体中发现的序列交换的可变结构域框架区。通常，在人源化抗体中，除CDR之外的整个抗体由人来源的多核苷酸编码或除了在其CDR内之外，与这种抗体相同。CDR(部分或全部由源自非人生物体的核酸编码)被移植到人抗体可变区的β折叠框架中以形成抗体，其特异性由移植的CDR决定。这类抗体的形成描述于例如WO 92/11018、Jones,1986,《自然》321:522-525、Verhoeyen等人,1988,《科学》239:1534-1536中，其以引用的方式整体并入本文中。所选择的受体框架残基“回复突变”到相应的供体残基通常需要重新获得在初始移植构筑体中丧失的亲和力(US 5530101；US5585089；US 5693761；US 5693762；US 6180370；US 5859205；US 5821337；US 6054297；US 6407213，其以引用的方式整体并入本文中)。人源化抗体最佳还包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的至少一部分，并且因此通常将包括人Fc区。使用具有基因工程化免疫系统的小鼠也可以产生人源化抗体，例如Roque等人,2004,《生物技术进展(Biotechnol.Prog.)》20:639-654，其以引用的方式整体并入本文中。用于人源化和重塑非人抗体的多种技术和方法是本领域熟知的(参见Tsurushita和Vasquez,2004,《单克隆抗体的人源化(Humanization of Monoclonal Antibodies)》,《B细胞分子生物学(MolecularBiology of B Cells)》,533-545,爱思唯尔科学公司(Elsevier Science)(美国)和其中引用的参考文献，其以引用的方式整体并入本文中)。人源化方法包括但不限于以下文献中所述的方法：Jones等人,1986,《自然》321:522-525；Riechmann等人,1988,《自然》332:323-329；Verhoeyen等人,1988,《科学》239:1534-1536；Queen等人,1989,《美国国家科学院院刊》86:10029-33；He等人,1998,《免疫学杂志(J.Immunol.)》160:1029-1035；Carter等人,1992,《美国国家科学院院刊》89:4285-9；Presta等人,1997,《癌症研究(Cancer Res.)》57(20):4593-9；Gorman等人,1991,《美国国家科学院院刊》88:4181-4185；O'Connor等人,1998,《蛋白质工程(Protein Eng)》11:321-8，所有所述文献通过引用整体并入。降低非人抗体可变区免疫原性的人源化或其他方法可以包括表面再塑方法，如例如Roguska等人,1994,《美国国家科学院院刊》91:969-973中所述，其以引用的方式整体并入本文中。其他人源化方法可涉及仅移植部分CDR，包括但不限于以下文献中所述的方法：Tan等人,2002,《免疫学杂志》169:1119-1125；De Pascalis等人,2002,《免疫学杂志》169:3076-3084，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中。
在一些实施方案中，本发明的抗体包括源自特定种系重链免疫球蛋白基因的重链可变区和/或源自特定种系轻链免疫球蛋白基因的轻链可变区。例如，由于自然发生的体细胞的突变或定点突变的有意引入，与人种系序列相比，此类抗体可能包含氨基酸差异。然而，人源化抗体通常与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列在氨基酸序列上具有至少80％相同，并且在与其他物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠种系序列)进行比较时，包含将抗体鉴定为源自人序列的氨基酸残基。在某些情况下，人源化抗体可以与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列在氨基酸序列上至少95％、96％、97％、98％或99％，或甚至至少96％、97％、98％或99％相同。通常，衍生自特定人种系序列的人源化抗体将显示与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10-20个氨基酸差异。在某些情况下，人源化抗体可显示与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过5个，或甚至不超过4个、3个、2个或1个氨基酸差异。
在一些实施方案中，如本领域已知的，本公开的抗体是人源化的并且是亲和力成熟的。基于结构的方法可用于人源化和亲和力成熟，例如美国专利第7,657,380号中所述。基于选择的方法可以用于人源化和/或亲和成熟抗体可变区，包括但不限于以下文献中所述的方法：Wu等人,1999,《分子生物学杂志》294:151-162；Baca等人,1997,《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》272(16):10678-10684；Rosok等人,1996,《生物化学杂志》271(37):22611-22618；Rader等人,1998，《美国国家科学院院刊》95:8910-8915；Krauss等人,2003,《蛋白质工程化(Protein Engineering)》16(10):753-759，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中。
IV.抗VISTA抗体的特征
在一些实施方案中，本文所述的抗VISTA抗体结合人VISTA。在一些实施方案中，通过ELISA或本领域技术人员已知的任何其他方法测量抗VISTA抗体与人VISTA的结合。
在一些实施方案中，本文所述的抗VISTA抗体以高亲和力结合人VISTA。可以用固定化的抗原或固定化的抗体来测量KD值。KD值也可以以单价或二价结合模式测量。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体在施用于人受试者时表现出低免疫原性。这些抗体可以包含源自人IgG1、人IgG2、人IgG3或人IgG4的Fc结构域。在一些实施方案中，这些抗体使用源自人免疫球蛋白的框架区进行人源化。
抗VISTA抗体对T细胞功能的影响可以使用本领域已知的和本文描述的多种方法来测定。因此，抗VISTA抗体可以用作VISTA激动剂或VISTA拮抗剂。
在一些实施方案中，所描述的抗VISTA抗体充当VISTA激动剂，并且因此，此类抗VISTA抗体诱导或增强免疫应答以及加强或增强VISTA/VSIG3途径的阻抑作用。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指激活免疫细胞。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指激活免疫细胞。
在一些实施方案中，所描述的抗VISTA抗体通过诱导或增强针对抗原的免疫应答来发挥作用。在一些实施方案中，所描述的抗VISTA抗体通过阻抑来自VISTA/VSIG3应答的免疫阻抑来发挥作用。
在一些实施方案中，所描述的抗VISTA抗体充当VISTA/VSIG3途径激动剂，并且因此，此类抗VISTA抗体加强或增强VISTA/VSIG3对T细胞免疫的阻抑作用，从而有效地阻抑T细胞免疫。在一些实施方案中，拮抗可以包括，例如，抑制VSIG3和/或VISTA的信号传导。在一些实施方案中，抗VISTA抗体激动(agonize)VSIG3/VISTA相互作用。在一些实施方案中，激动的抗VISTA抗体导致增强VSIG3和/或VISTA的信号传导。
在一些实施方案中，所描述的抗VISTA抗体充当VISTA/VSIG3途径拮抗剂，并且因此，此类抗VISTA抗体阻抑VISTA/VSIG3对T细胞免疫的阻抑作用，从而通过减少来自VISTA/VSIG3途径的阻抑而有效地增加T细胞免疫。在一些实施方案中，抗VISTA抗体拮抗VSIG3/VISTA相互作用。在一些实施方案中，VISTA信号传导的拮抗可以包括CD3诱导的细胞因子信号的拮抗。在一些实施方案中，VISTA信号传导的拮抗可以包括消除CD3诱导的IL-2产生、CD3诱导的IFN-γ产生、CD3诱导的RANTES产生、CD3诱导的MIP-1α产生、CD3诱导的IL-17产生以及CD3诱导的CXCLI I产生中的至少一种。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体与VSIG3竞争结合VISTA。在一些实施方案中，抗VISTA抗体对VISTA/VSIG3的抑制可以是部分抑制。在一些实施方案中，抗VISTA抗体对VISTA/VSIG3的抑制可以是完全抑制。在一些实施方案中，抗VISTA抗体抑制至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的结合。在一些实施方案中，抑制免疫应答是指停止VISTA+癌细胞生长。在一些实施方案中，抑制免疫应答是指停止细胞生长以便治疗癌症。在一些实施方案中，抗VISTA抗体通过抑制来自VISTA/VSIG3途径的免疫阻抑来抑制细胞生长。
在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指激活针对特定抗原的免疫细胞。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指提供共刺激信号。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指激活T细胞。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指激活B细胞。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指增加细胞毒性T淋巴细胞应答。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指增加CD4+T效应细胞功能。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指减少CD4+T效应细胞功能的阻抑。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指增加CD8+T效应细胞功能。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指减少CD8+T效应细胞功能的阻抑。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指增加抗原特异性T细胞功能、增殖和/或活化。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指减少抗原特异性T细胞功能、增殖和/或活化的阻抑。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指增加抗原特异性Th1应答。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指减少抗原特异性Th1应答的阻抑。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指增加或支持记忆细胞形成。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指减少记忆细胞形成的阻抑。在一些实施方案中，本公开的抗VISTA抗体促进或增强人VISTA对免疫的至少一种作用，包括例如但不限于对以下中的任何一种或多种的阻抑作用：T细胞免疫；单核细胞的活化；T细胞增殖的诱导；细胞因子表达的诱导或阻抑；单核细胞的存活率增加；在表达VISTA的细胞中诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；和/或在表达VISTA的细胞中诱导抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指减少ADCC的抑制。在一些实施方案中，诱导或增强免疫应答是指引发ADCP。在一些实施方案中，可以调节ADCC以引起VISTA表达细胞的至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％裂解。
在一些实施方案中，抑制细胞生长是指肿瘤抑制或肿瘤大小的减小。
功效读数(Efficacy readouts)可以包括监测αβ和/或γδT细胞的变化、细胞毒性T细胞活性、诸如CD137、CD107a等标志物的变化、NK和/或NK/T活性的变化、干扰素γ的产生、调节性T细胞的变化(包括Treg数量的变化)、巨噬细胞数量的变化、嗜中性粒细胞促肿瘤发生(pro-tumorigenic)活性的变化、T细胞活化、CTL活化、诸如CD45RA或CCR7等活化标志物的变化，以及癌细胞的细胞毒性测定。功效读数还可以包括对CD3诱导的细胞因子信号的拮抗作用。功效读数还可以包括消除以下中的至少一种：CD3诱导的IL-2产生、CD3诱导的IFN-γ产生、CD3诱导的RANTES产生、CD3诱导的MIP-1α产生、CD3诱导的IL-17产生，以及CD3诱导的CXCLI I产生。功效读数还可以包括肿瘤大小减小、肿瘤数量减少、转移数量减少以及疾病状态降低(或预期寿命增加)。在一些实施方案中，抑制细胞生长是指肿瘤抑制或肿瘤大小的减小。在一些实施方案中，肿瘤大小减小10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％指示治疗功效。在一些实施方案中，肿瘤数量减少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％指示治疗功效。在一些实施方案中，肿瘤负荷减少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％指示治疗功效。在一些实施方案中，转移数量减少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％指示治疗功效。
V.本发明的核酸
本发明还涵盖编码本文所述的抗VISTA抗体的核酸，以及含有此类核酸的表达载体和用此类核酸和/或表达载体转化的宿主细胞。如本领域的技术人员所理解的，由于遗传密码的简并性，本文描绘的蛋白质序列可以由任何数量的可能核酸序列进行编码。
本发明还涵盖编码抗VISTA抗体和/或VISTA结合结构域的核酸组合物。本领域技术人员将理解，在抗原结合结构域的情况下，核酸组合物通常包括编码重链可变区的第一核酸和编码轻链可变区的第二核酸。在scFv的情况下，可以制备编码重链可变区和轻链可变区的单个核酸，由本文所述的接头分开。在传统抗体的情况下，核酸组合物通常包括编码重链的第一核酸和编码轻链的第二核酸，它们将在细胞中表达时自发组装成“传统”四聚体形式的两条重链和两条轻链。
如本领域所知，编码本发明组分的核酸可并入表达载体中，并取决于宿主细胞，用于产生本发明抗体。这两种核酸可以并入单个表达载体或两个不同的表达载体中。通常，核酸可操作地连接到任何数量的位于表达载体上的调控元件(启动子、复制起点、可选择标记、核糖体结合位点、诱导剂等)。表达载体可以是染色体外的或整合的载体。
本发明的核酸和/或表达载体可以引入本领域公知的任何类型的宿主细胞，包括哺乳动物、细菌、酵母、昆虫和真菌细胞。转染后，可以使用本领域已知的方法，例如有限稀释、ELISA、FACS、显微镜检查或Clonepix，分离单细胞克隆用于细胞库生成。克隆可以在适合生物反应器放大和保持抗体表达的条件下培养。可以使用本领域已知的方法对抗体进行分离和纯化，所述方法包含离心、深度过滤、细胞裂解、均质化、冻融、亲和力纯化、凝胶过滤、离子交换色谱法、疏水相互作用交换色谱法和混合模式色谱法。
VI.治疗应用
本公开提供一种调节受试者的免疫应答的方法，并且所述方法包括向受试者施用有效量的本文所述的抗VISTA抗体或含有抗VISTA抗体的药物组合物。
在一些实施方案中，本公开所涵盖的调节免疫应答的方法包括抑制受试者的免疫应答，并且在另外的实施方案中，此类方法包括向受试者施用有效量的充当VISTA拮抗剂的抗VISTA抗体，或通过施用含有拮抗性抗VISTA抗体的药物组合物。
在一些实施方案中，本公开提供了用于诱导或增强受试者的免疫应答的方法，其例如通过向受试者施用有效量的充当VISTA激动剂的抗VISTA抗体或通过向受试者施用含有此类激动性抗VISTA抗体的药物组合物来实现。
本公开还提供了治疗受试者的癌症的方法，并且此类方法包括向受试者施用有效量的充当VISTA拮抗剂的抗VISTA抗体或含有此类抗VISTA抗体的药物组合物。在一些实施方案中，待治疗的癌症在癌细胞表面表达VISTA。在一些实施方案中，与相应的非癌性组织相比，待治疗的癌症上调VISTA。在一些实施方案中，待治疗的受试者在T细胞上表达VISTA，诸如在CD8+和/或CD4+T细胞上。在一些实施方案中，待治疗的受试者在一种或多种类型的免疫细胞上表达高水平的VISTA，所述免疫细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、自然杀伤T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞和树突细胞。在一些实施方案中，待治疗的癌症使用VISTA/VSIG3途径来促进肿瘤生长。在一些实施方案中，待治疗的癌症对现有的靶向其他免疫检查点(例如CTLA-4、PD-1或PD-L1)的免疫调节抗体无反应。
本文中的“癌症疗法”是指预防或治疗癌症或改善一种或多种癌症症状的任何方法。通常，此类疗法将包括单独或组合施用抗VISTA(包括，例如，与整联蛋白结合多肽-Fc融合体组合)，以及可能与化学疗法或放射疗法或其他生物制剂组合并且用于增强其活性。在一些实施方案中，癌症疗法可以包括增加的存活率或通过增加的存活率来测量。在一些实施方案中，癌症疗法导致肿瘤体积的减小。
如本文所用，“癌症”泛指任何赘生性疾病(无论是侵袭性的、非侵袭性的还是转移性的)，其特征在于引起恶性生长或肿瘤的异常和不受控制的细胞分裂(例如，不受调节的细胞生长)。如本文所用，我们可使用术语“癌症”(或“癌性”)、“过度增殖性”和“赘生性”来指具有自主生长能力的细胞(即，以快速增殖的细胞生长为特征的异常状态或病状)。其非限制性实例在本文中描述。这包括哺乳动物中通常以不受调节的细胞生长为特征的任何生理病况。癌症实例举例说明于实施例中并且在说明书内也有描述。术语“癌症”或“赘生物”用于指各种器官系统的恶性肿瘤，包括影响肺、乳腺、甲状腺、淋巴腺和淋巴组织、胃肠器官和泌尿生殖道的那些恶性肿瘤，以及通常被认为包括恶性肿瘤的腺癌，诸如大多数结肠癌、肾细胞癌、前列腺癌和/或睾丸肿瘤、非小细胞肺癌、小肠癌、食道癌、黑色素瘤、前列腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、非小细胞肺癌、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、结直肠癌和头颈癌。
可以使用本公开治疗的癌症的非限制性实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞性NHL；高级淋巴母细胞性NHL；高级小型非裂解细胞NHL；肿块性病变NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和华氏巨球蛋白血症)；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性骨髓母细胞白血病；多发性骨髓瘤以及移植后淋巴组织增殖性病症(PTLD)。在一些实施方案中，适用于通过本发明治疗的其他癌症包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴系统恶性肿瘤。此类癌症的更具体的实例包括结直肠癌、膀胱癌、卵巢癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞性NHL；高级淋巴母细胞性NHL；高级小型非裂解细胞NHL；肿块性病变NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和华氏巨球蛋白血症)；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性骨髓母细胞白血病；和移植后淋巴组织增殖性疾病(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤病(phakomatoses)相关的异常血管增殖、水肿(诸如与脑部肿瘤相关)和梅格斯氏综合征(Meigs'syndrome)。优选地，癌症选自由以下组成的组：结直肠癌、乳腺癌、直肠癌、非小细胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、软组织肉瘤、卡波西肉瘤、类癌、头颈癌、黑色素瘤、卵巢癌、间皮瘤和多发性骨髓瘤。在一个示例性实施方案中，癌症是早期或晚期(包括转移性)膀胱癌、卵巢癌或黑色素瘤。在另一个实施方案中，癌症是结直肠癌。在一些实施方案中，本发明的方法可用于治疗血管化肿瘤。
过度增殖性和赘生性疾病状态可归类为病理性的(即，表征或构成疾病状态)，或可以将其归类为非病理性的(即，偏离正常但与疾病状态无关)。该术语意在包括所有类型的癌性生长或致癌过程、转移性组织或恶性转化的细胞、组织或器官，而不管组织病理学类型或侵袭阶段如何。“病理性过度增殖性”细胞出现在以恶性肿瘤生长为特征的疾病状态中。非病理性过度增殖性细胞的实例包括与伤口修复相关的细胞增殖。
细胞增殖性和/或分化性病症的实例包括癌症(例如，癌、肉瘤、转移性病症或造血赘生性病症，例如白血病)。转移性肿瘤可以由多种原发肿瘤类型引起，包括但不限于前列腺、结肠、肺、乳腺和肝的那些。因此，本文所用的组合物和任选的至少一种治疗癌症的另外的治疗剂可以施用于患有癌症的患者。
增殖性疾病的其他实例包括造血赘生性病症。如本文所用，术语“造血赘生性病症”包括涉及造血起源的增生性/赘生性细胞(例如，源自髓系、淋巴系或红细胞系)或其前体细胞的疾病。在一些实施方案中，所述疾病由低分化的急性白血病(例如，成红细胞白血病和急性巨核细胞白血病)引起。其他示例性骨髓病状包括但不限于急性早幼粒细胞白血病(APML)、急性骨髓性白血病(AML)和慢性骨髓性白血病(CML)(综述于Vaickus,L.(1991)《肿瘤学/血液学评论(Crit Rev.in Oncol./Hemotol.)》11:267-97)；淋巴系统恶性肿瘤包括但不限于急性淋巴母细胞性白血病(ALL)，其包括B系ALL和T系ALL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、幼淋巴细胞白血病(PLL)、毛细胞白血病(HLL)和华氏巨球蛋白血症。其他形式的恶性淋巴瘤包括但不限于非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)及其变体、外周T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、大颗粒淋巴细胞白血病(LGF)、霍奇金氏病(Hodgkin'sdisease)和Reed-Stemberg病。
术语“癌”是本领域公认的并且是指上皮或内分泌组织的恶性肿瘤，包括呼吸系统癌、胃肠系统癌、泌尿生殖系统癌、睾丸癌、乳腺癌、前列腺癌、内分泌系统癌和黑色素瘤。突变的IL-2多肽可以用于治疗患有、怀疑患有或可能处于发展任何类型癌症(包括肾癌或黑色素瘤)或任何病毒性疾病的高风险中的患者。示例性癌包括由子宫颈、肺、前列腺、乳房、头颈、结肠和卵巢的组织形成的那些。该术语还包括癌肉瘤，其包括由癌性和肉瘤性组织组成的恶性肿瘤。“腺癌”是指源自腺组织或其中肿瘤细胞形成可识别的腺结构的癌。
在一些实施方案中，待治疗的癌症是黑色素瘤、前列腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、非小细胞肺癌、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、结直肠癌和头颈癌。
VII.组合疗法
本文所述的抗VISTA抗体可以与另外的治疗剂组合使用以治疗癌症。
本领域技术人员将理解，对于每种抗VISTA抗体和任选的至少一种或多种用于治疗癌症的另外治疗剂而言，足以减少肿瘤生长和大小的量，或治疗有效量，将不仅因所选的特定化合物或组合物而异，而且还因施用途径、所治疗病状的性质以及患者的年龄和病状而异，并且最终将由患者的医生或药剂师决定。将给予本方法中使用的化合物的时间长度因人而异。
在一些实施方案中，用于治疗癌症的一种或多种另外的治疗剂是免疫检查点抑制剂。如本文所述，免疫检查点抑制剂包括抗PD-1抑制剂、抗PD-L1抑制剂、抗CTLA-4抑制剂、抗TIM-3抑制剂和抗LAG-3抑制剂。免疫检查点抑制剂的类型的实例包括抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体选自由纳武单抗、派姆单抗和伊匹单抗组成的组。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体选自由伊匹单抗和曲美木单抗组成的组。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。在一些实施方案中，抗LAG-3是IMP-321。
在一些实施方案中，用于治疗癌症的一种或多种另外的治疗剂是肿瘤靶向剂。如本文所述，肿瘤靶向剂还可以包括整联蛋白结合Fc-融合多肽(包括，例如，NOD-201。在一些实施方案中，用于治疗癌症的一种或多种另外的治疗剂是放射。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体和用于治疗癌症的至少一种或多种另外的治疗剂抑制肿瘤细胞的生长和/或增殖。在一些实施方案中，抗VISTA抗体和用于治疗癌症的至少一种或多种另外的治疗剂减小肿瘤大小。在某些实施方案中，抗VISTA抗体和用于治疗癌症的至少一种或多种另外的治疗剂抑制原发性肿瘤的转移。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体和至少一种或多种检查点抑制剂抑制肿瘤细胞的生长和/或增殖。在一些实施方案中，抗VISTA抗体和至少一种或多种检查点抑制剂减小肿瘤大小。在某些实施方案中，抗VISTA抗体和至少一种或多种检查点抑制剂抑制原发性肿瘤的转移。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体可以与佐剂组合以治疗晚期乳腺癌。在一些实施方案中，抗VISTA抗体可以与佐剂组合以治疗晚期卵巢癌。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体与手术方法结合使用以治疗癌症。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体与肿瘤靶向抗体结合使用。在一些实施方案中，肿瘤靶向抗体选自由抗CD20、抗EGFR和抗Her2组成的组。在一些实施方案中，肿瘤靶向抗体选自由曲妥珠单抗、利妥昔单抗、西妥昔单抗和抗Her2组成的组。
在一些实施方案中，抗VISTA抗体可以与本文所述的整联蛋白结合多肽-Fc融合体组合以治疗癌症。在一些实施方案中，抗VISTA抗体可以与本文所述的整联蛋白结合多肽-Fc融合体连同本文所讨论的至少一种用于治疗癌症的另外的治疗剂组合以治疗癌症。在一些实施方案中，整联蛋白结合多肽-Fc融合体是如本文所述的。在一些实施方案中，整联蛋白结合多肽-Fc融合体是如本文在表2中所述的。在一些实施方案中，整联蛋白结合多肽-Fc融合体包含选自由SEQ ID NO:51-119组成的组的序列。在一些实施方案中，整联蛋白结合多肽-Fc融合体是NOD-201。在一些实施方案中，整联蛋白结合多肽-Fc融合体是SEQ ID NO:118。在一些实施方案中，整联蛋白结合多肽-Fc融合体是SEQ ID NO:119。
功效读数可以包括监测αβ和/或γδT细胞的变化、细胞毒性T细胞活性、诸如CD137、CD107a等标志物的变化、NK和/或NK/T活性的变化、干扰素γ的产生、调节性T细胞的变化(包括Treg数量的变化)、巨噬细胞数量的变化、嗜中性粒细胞促肿瘤发生活性的变化、T细胞活化、CTL活化、诸如CD45RA或CCR7等活化标志物的变化，以及癌细胞的细胞毒性测定。功效读数还可以包括对CD3诱导的细胞因子信号的拮抗作用。功效读数还可以包括消除以下中的至少一种：CD3诱导的IL-2产生、CD3诱导的IFN-γ产生、CD3诱导的RANTES产生、CD3诱导的MIP-1α产生、CD3诱导的IL-17产生，以及CD3诱导的CXCLI I产生。功效读数还可以包括肿瘤大小减小、肿瘤数量减少、转移数量减少以及疾病状态降低(或预期寿命增加)。在一些实施方案中，抑制细胞生长是指肿瘤抑制或肿瘤大小的减小。在一些实施方案中，肿瘤大小减小10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％指示治疗功效。在一些实施方案中，肿瘤数量减少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％指示治疗功效。在一些实施方案中，肿瘤负荷减少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％指示治疗功效。在一些实施方案中，转移数量减少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％指示治疗功效。
可以选择抗体和另外的治疗剂的量以及相对的给药时间，以获得期望的组合治疗效果。例如，当对需要这种施用的患者施用组合疗法时，组合中的治疗剂或包括治疗剂的药物组合物或组合物可以以任何顺序施用，例如顺序、同时施用，一起，同时等等。此外，例如，多特异性结合蛋白可以在另外的治疗剂发挥其预防或治疗作用的时间期间给药，反之亦然。
VIII.药物组合物和施用
本公开的特征还在于包含治疗有效量的本文所述的抗VISTA抗体的药物组合物/调配物。该组合物可以配制用于多种药物递送系统。一种或多种生理学上可接受的赋形剂或载体也可以包含在组合物中以用于适当的调配物。在《雷明登氏药学全书》,麦克出版公司,宾夕法尼亚州费城,第17版,1985中可以找到用于本公开的合适的调配物。此外，药物递送的方法的简要评述参见Langer，《科学(Science)》249:1527-1533(1990)，其以引入的方式并入本文中。
本公开的抗体可以存在于冻干调配物或液体水性药物调配物中。本文有关的水性载体是一种药学上可接受的(对人体给药安全且无毒)并且可用于制备液体调配物。示例性载体包括无菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或葡萄糖溶液。
本公开的抗体可以存在于包含蛋白质和冻干保护剂的冻干调配物中。冻干保护剂可以是糖，例如二糖。在某些实施方案中，冻干保护剂是蔗糖或麦芽糖。冻干调配物还可以包含缓冲剂、表面活性剂、填充剂和/或防腐剂中的一种或多种。
本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化，以获得有效实现特定患者、组合物和给药方式的所需治疗反应的活性成分的量，而不对患者有毒。对于成人，其可以以0.1mg至1g的范围并且优选地在0.5mg至500mg的活性抗体的范围内每次施用来施用。可替代地，可以根据患者的大致体重或表面积调整患者的剂量。确定合适剂量的其他因素可包括待治疗或预防的疾病或病症、疾病的严重程度、给药途径以及患者的年龄、性别和医学病症。本领域技术人员通常根据本文公开的剂量信息和测定对确定适当治疗剂量所需的计算进行进一步细化。剂量也可以通过使用已知的测定结合适当的剂量反应数据来确定剂量来确定。当监测疾病的进展时，可以调整个体患者的剂量。可以测量患者体内可靶向构建体或复合物的血液水平，以确定是否需要调整剂量以达到或维持有效浓度。药物基因组学可用于确定哪些可靶向构建体和/或复合物及其剂量最有可能对特定个体有效(Schmitz等，Clinica Chimica Acta 308：43-53，2001；Steimer等，临床化学学报308:33-41,2001)。
剂量可以每天、每周、每月或每年给药一次或多次，甚至每2至20年给药一次。本领域普通技术人员可以基于测量的停留时间和可靶向构建体或复合物在体液或组织中的浓度容易地估计给药的重复率。本发明的给药可以是静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、胸膜内、鞘内、腔内、通过导管灌注或通过直接病灶内注射。这可以每天给药一次或多次、每周一次或多次、每月一次或多次、以及每年一次或多次。
实施例
实施例1：抗VISTA抗体
进行多轮筛选以产生20+抗VISTA抗体克隆，其中许多对人抗原具有亚nM亲和力(图3)。随后的亲和力成熟和交叉反应性选择产生小鼠和人交叉反应克隆VS147。VS147对人抗原具有亚nM亲和力并且对小鼠抗原具有单nM亲和力(图4A和图4B)。
实施例2：抗VISTA抗体
对抗VISTA抗体的各种克隆进行诱变(图8)。交叉反应性产生小鼠和人交叉反应克隆VS1.4.7和VS 1.4.3。VS1.4.7和VS 1.4.3对人抗原表现出pM亲和力并且对小鼠抗原表现出单nM亲和力(图9)。数据示出2个修饰变体的测得的人/小鼠Kd。
在不脱离本发明的精神或基本特征的情况下，本公开可以以其他特定形式来体现。因此，前述实施方案在所有方面都应被认为是说明性的，而不是对本文所述的发明的限制。因此，本发明的范围由所附权利要求而不是前述描述来指示，并且在权利要求的含义和等效范围内的所有变化都旨在包含在其中。
提供上述实施例以向本领域中的技术人员给出如何实施和使用本发明的组合物、系统和方法的实施方案的完整公开和说明，并非意图限制发明人对于他们的发明的主张范围。用于实施本发明的上述模式的修改为熟练的技术人员所显见，并且意图属于以下权利要求范围之内。本说明书中所提及的所有专利和出版物指示本发明所属领域的技术人员的水平。本公开中引用的所有参考文献通过引用并入，其程度如同每个参考文献已经以全文引用的方式单独地并入。
使用所有标题和章节命名仅仅是出于清楚和参考的目的并且不应当被认为是以任何方式进行限制。举例而言，本领域中的技术人员应了解根据本文所述的本发明的精神和范围按需要组合来自不同标题和章节的各种方面的有用性。
本文所引证的所有参考文献都以引用的方式且出于所有目的完整并入本文中，犹如个别公布或专利或专利申请特别且个别明示出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
如本领域中的技术人员显而易见，在不背离本申请的精神和范围的情况下可对其进行许多修改和变化。本文所述的特定实施方案和实施例仅以实施例方式提供，并且本申请仅由随附权利要求的术语以及权利要求有权主张的等效物的全部范围限制。

Claims (92)

1.一种抗VISTA抗体，其包含：
a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区；
b)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链可变区；或
c)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区。
2.一种抗VISTA抗体，其包含：
a)包含SEQ ID NO:2的vhCDR1、包含SEQ ID NO:3的vhCDR2、包含SEQ ID NO:4的vhCDR3、包含SEQ ID NO:6的vlCDR1、包含SEQ ID NO:7的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:8的vlCDR3；
b)包含SEQ ID NO:10的vhCDR1、包含SEQ ID NO:11的vhCDR2、包含SEQ ID NO:12的vhCDR3、包含SEQ ID NO:14的vlCDR1、包含SEQ ID NO:15的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:16的vlCDR3；或
c)包含SEQ ID NO:18的vhCDR1、包含SEQ ID NO:19的vhCDR2、包含SEQ ID NO:20的vhCDR3、包含SEQ ID NO:22的vlCDR1、包含SEQ ID NO:23的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:24的vlCDR3。
3.一种抗VISTA抗体，其包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
4.一种抗VISTA抗体，其包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
5.根据前述权利要求中任一项所述的抗VISTA抗体，其中所述抗体包含氨基酸序列与人IgG具有至少90％同一性的恒定区。
6.根据权利要求5所述的抗VISTA抗体，其中所述人IgG选自由IgG1、IgG2、IgG3和IgG4组成的组。
7.根据权利要求6所述的抗VISTA抗体，其中所述IgG是IgG4。
8.一种核酸组合物，其包含：
(a)编码根据前述权利要求中任一项所述的重链可变区的第一核酸；
(b)编码根据前述权利要求中任一项所述的轻链可变区的第二核酸。
9.一种表达载体组合物，其包含：
(a)第一表达载体，所述第一表达载体包含根据权利要求6所述的第一核酸；以及
(b)第二表达载体，所述第二表达载体包含根据权利要求6所述的第二核酸。
10.一种表达载体组合物，其包含根据权利要求6所述的核酸组合物，其中所述第一核酸和所述第二核酸包含在单个表达载体中。
11.一种宿主细胞，其包含根据权利要求9或10所述的表达载体组合物。
12.一种制备抗体的方法，其包括在所述抗体表达的条件下培养根据权利要求11所述的宿主细胞；以及回收所述抗体。
13.一种组合物，其包含根据权利要求1-7中任一项所述的抗体和药学上可接受的载剂或稀释剂。
14.一种调节受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或根据权利要求13所述的组合物。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包含SEQ ID NO:2的vhCDR1、包含SEQ ID NO:3的vhCDR2、包含SEQ ID NO:4的vhCDR3、包含SEQ ID NO:6的vlCDR1、包含SEQ ID NO:7的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:8的vlCDR3。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包含SEQ ID NO:10的vhCDR1、包含SEQ ID NO:11的vhCDR2、包含SEQ ID NO:12的vhCDR3、包含SEQ ID NO:14的vlCDR1、包含SEQ ID NO:15的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:16的vlCDR3。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包含SEQ ID NO:18的vhCDR1、包含SEQ ID NO:19的vhCDR2、包含SEQ ID NO:20的vhCDR3、包含SEQ ID NO:22的vlCDR1、包含SEQ ID NO:23的vlCDR2，以及包含SEQ ID NO:24的vlCDR3。
18.一种治疗受试者的癌症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1-8中任一项所述的抗体或根据权利要求13所述的组合物。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症表达VISTA。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：结直肠癌、乳腺癌、直肠癌、肺癌(包括非小细胞肺癌)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、软组织肉瘤、卡波西肉瘤、类癌、头颈癌、黑色素瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、结直肠癌、间皮瘤和多发性骨髓瘤。
21.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其中所述抗体与一种或多种另外的治疗剂组合以治疗癌症。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述另外的治疗剂是其他免疫检查点抑制剂。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述其他免疫检查点抑制剂选自由以下组成的组：PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、TIM-3抑制剂和LAG-3抑制剂。
24.根据权利要求21所述的方法，其中所述另外的治疗剂是肿瘤靶向抗体。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述肿瘤靶向抗体选自由以下组成的组：抗CD20、抗EGFR和抗Her2。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述肿瘤靶向抗体选自由以下组成的组：曲妥珠单抗、利妥昔单抗和西妥昔单抗。
27.根据权利要求24所述的方法，其中所述另外的治疗剂是整联蛋白结合多肽-Fc融合体。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述整联蛋白结合多肽-Fc融合体是NOD-201。
29.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。
30.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。
31.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。
32.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。
33.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。
34.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。
35.一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使所述细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。
36.一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使所述细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。
37.一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使所述细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。
38.一种抑制患有病症的受试者的细胞上的VISTA与VSIG3的结合的方法，其通过向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体来实现，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。
39.一种抑制患有病症的受试者的细胞上的VISTA与VSIG3的结合的方法，其通过向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体来实现，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。
40.一种抑制患有病症的受试者的细胞上的VISTA与VSIG3的结合的方法，其通过向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体来实现，其中所述抗体包括包含SEQ ID NO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。
41.根据权利要求29、32、35或38中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:1的重链可变区。
42.根据权利要求29、32、35或38中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:5的轻链可变区。
43.根据权利要求30、33、36或39中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:9的重链可变区。
44.根据权利要求30、33、36或39中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:13的轻链可变区。
45.根据权利要求31、34、37或40中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:17的重链可变区。
46.根据权利要求31、34、37或40中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:21的轻链可变区。
47.根据权利要求29、32、35或38中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:1的重链可变区和包含SEQ ID NO:5的轻链可变区。
48.根据权利要求30、33、36或39中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:9的重链可变区和包含SEQ ID NO:13的轻链可变区。
49.根据权利要求31、34、37或40中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:17的重链可变区和包含SEQ ID NO:21的轻链可变区。
50.根据权利要求29-49中任一项所述的方法，其中所述免疫应答是抗原特异性T细胞应答。
51.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:1和5所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
52.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:9和13所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
53.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:17和21所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
54.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:1和5所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
55.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:9和13所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
56.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:17和21所示的重链和轻链可变区序列的抗体结合相同的表位。
57.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:1和5所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
58.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:9和13所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
59.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:17和21所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
60.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:1和5所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
61.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:9和13所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
62.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含分别如SEQ ID NO:17和21所示的重链和轻链可变区序列的抗体竞争结合人VISTA。
63.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:1和5具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
64.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:9和13具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
65.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:17和21具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
66.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:1和5具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
67.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:9和13具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
68.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含分别与SEQ ID NO:17和21具有至少95％同一性的重链和轻链可变区序列。
69.一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。
70.一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。
71.一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。
72.一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:2的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:4的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR3。
73.一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:10的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:11的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:12的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:16的轻链可变区CDR3。
74.一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包括包含SEQ IDNO:18的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；包含SEQ ID NO:20的重链可变区CDR3；包含SEQ ID NO:22的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:23的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:24的轻链可变区CDR3。
75.一种治疗受试者的非癌性疾病的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1-8中任一项所述的抗体或根据权利要求13所述的组合物。
76.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
77.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1和/或图46中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
78.一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使所述细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
79.一种抑制VISTA表达细胞的生长的方法，其包括使所述细胞与有效抑制VISTA表达细胞生长的量的与人VISTA结合的单克隆抗体接触，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
80.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区的抗体结合相同的表位。
81.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3的抗体结合相同的表位。
82.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区的抗体竞争结合人VISTA。
83.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体与包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3的抗体竞争结合人VISTA。
84.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
85.一种用于诱导或增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强针对抗原的免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
86.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
87.一种用于抑制受试者中针对抗原的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制针对抗原的免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
88.一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
89.一种用于诱导或增强受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效诱导或增强免疫应答的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
90.一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的重链可变区和轻链可变区。
91.一种用于抑制受试者中的免疫应答的阻抑的方法，其包括以有效抑制免疫应答的阻抑的量向所述受试者施用与人VISTA结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含如图1、图5、图6和/或图7中所提供的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
92.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫应答是抗原特异性T细胞应答。
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