CN114728976A - 用于治疗自身免疫性疾病的氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪化合物 - Google Patents

用于治疗自身免疫性疾病的氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪化合物 Download PDF

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丁冬
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Abstract

本发明涉及式(I)化合物，
Figure DDA0003642846320000011
其中R1至R3和n如本文所述，及其药用盐，以及包含所述化合物的组合物和使用所述化合物的方法。

Description

用于治疗自身免疫性疾病的氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪化 合物
本发明涉及可用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，尤其涉及可用于治疗全身性红斑狼疮或狼疮肾炎的TLR7和/或TLR8和/或TLR9的拮抗剂。
技术领域
自身免疫性结缔组织病(CTD)包括典型的自身免疫综合征，诸如全身性红斑狼疮(SLE)、原发性干燥综合征(pSjS)、混合性结缔组织病(MCTD)、皮肌炎/多发性肌炎(DM/PM)、类风湿关节炎(RA)和系统性硬化症(SSc)。除RA以外，对患者来说，没有真正有效且安全的疗法。SLE代表典型的CTD，其患病率为20-150/100,000，并在不同器官引起广泛的炎症和组织损伤，从皮肤和关节的常见症状到肾、肺或心力衰竭。传统上，SLE已使用非特异性抗炎药或免疫抑制剂进行治疗。但是，长期使用免疫抑制药物，例如，皮质类固醇仅部分有效，并伴有非预期毒性和副作用。贝利尤单抗是过去50年中唯一获得FDA批准的用于狼疮的药物，尽管仅对部分SLE患者具有适度延迟的疗效(Navarra,S.V.等人，Lancet 2011,377,721.)。其他生物制剂，诸如抗CD20 mAb、抗特定细胞因子的mAb或其可溶受体，在大多数临床研究中均失败了。因此，需要新型疗法，其在更大比例的患者群组中提供持续改善，并且对于在许多自身免疫以及自身炎症性疾病中的长期使用而言更安全。
Toll样受体(TLR)是模式识别受体(PRR)的重要家族，可以引发多种免疫细胞产生广泛的免疫应答。核内体TLR 7、TLR8和TLR9作为天然的宿主防御传感器，可识别衍生自病毒、细菌的核酸；具体地，TLR7/TLR8和TLR9分别识别单链RNA(ssRNA)和单链CpG-DNA。然而，TRL7、TRL8、TRL9的异常核酸传感被认为是广泛的自身免疫性疾病和自身炎症性疾病的关键节点(Krieg,A.M.等人，Immunol.Rev.2007,220,251.Jiménez-Dalmaroni,M.J.等人，Autoimmun Rev.2016,15,1.Chen,J.Q.等人，Clinical Reviews in Allergy&Immunology2016,50,1.)。抗RNA和抗DNA抗体是SLE的公认诊断标志，并且这些抗体可以将自身RNA和自身DNA两者传递至内体。自身RNA复合物可以被TLR7和TLR8识别，而自身DNA复合物可以触发TLR9活化。实际上，在SLE(系统性红斑狼疮)患者中，自身RNA和自身DNA从血液和/或组织中的缺陷清除很明显。据报道，TLR7和TLR9在SLE组织中被上调，并分别与狼疮性肾炎的慢性和活性有关。在SLE患者的B细胞中，TLR7表达与抗RNP抗体的产生相关，而TLR9表达与IL-6和抗dsDNA抗体水平相关。一致地，在狼疮小鼠模型中，抗RNA抗体需要TLR7，抗核小体抗体需要TLR9。另一方面，小鼠中TLR7或人TLR8的过度表达会促进自身免疫和自身炎症。此外，TLR8的活化特别有助于mDC/巨噬细胞的炎症性细胞因子分泌，嗜中性粒细胞胞外捕网过程(NETosis)，Th17细胞的诱导和Treg细胞的抑制。除了描述的TLR9在促进B细胞自身抗体产生中的作用外，pDC中通过自身DNA活化TLR9还会导致诱导I型IFN和其他炎症性细胞因子。考虑到pDC和B细胞两者中TLR9的这些作用，它们都是自身免疫性疾病发病机理的关键因素，而且在许多自身免疫性疾病患者中大量存在可轻易活化TLR9的自身DNA复合物，在抑制TLR7和TLR8途径基础之上，它对于进一步阻断自身DNA介导的TLR9途径可能具有额外益处。总之，TLR7、TLR8和TLR9途径代表了治疗自身免疫性疾病和自身炎症性疾病的新治疗靶点，针对这些疾病，不存在有效的不含类固醇和无细胞毒性的口服药物，并且从非常上游就抑制了所有这些途径可能会带来令人满意的治疗效果。因此，我们发明了靶向和抑制TLR7、TLR8和TLR9的口服化合物，用于治疗自身免疫性疾病和自身炎症性疾病。
发明内容
本发明涉及式(I)或(Ia)的新型化合物，
Figure BDA0003642846310000021
其中
R1为
Figure BDA0003642846310000031
Figure BDA0003642846310000032
Figure BDA0003642846310000033
其中R4为C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤素、硝基或氰基；R4a为C1-6烷基或C3-7环烷基；R5、R5a和R5b独立地选自H和氘；R6为H或卤素；
R2为C1-6烷基；
R3为5-7元单环芳基或杂芳基，或7-12元双环杂环基、杂环基-杂环基、杂环基氨基、C1-6烷基(杂环基)氨基或杂环基氧基；
或其药用盐。
本发明的另一目的涉及式(I)或(Ia)的新型化合物。它们的制备、基于根据本发明化合物的药物及其制备以及式(I)或(Ia)化合物作为TLR7和/或TLR8和/或TLR9拮抗剂的用途，及用于治疗或预防全身性红斑狼疮或狼疮肾炎的用途。式(I)或(Ia)化合物显示出优异的TLR7和TLR8和TLR9拮抗活性。另外，式(I)或式(Ia)的化合物还显示出良好的细胞毒性、光毒性、溶解性、hPBMC、人微粒体稳定性和SDPK特征，以及低CYP抑制作用。
具体实施方式
定义
术语“C1-6烷基”表示含有1至6个，特别是1至4个碳原子的饱和、直链或支链烷基，例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。特别地，“C1-6烷基”基团为甲基、乙基和正丙基。
术语“卤素”和“卤基”在本文中可互换使用，表示氟、氯、溴或碘。
术语“芳基”表示具有5至12个环原子的芳族烃单价或双环体系。芳基的实例包括但不限于苯基和萘基。芳基可进一步被取代基取代，这些取代基包括但不限于C1-6烷基；3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；1,4-二氮杂环庚烷基；被C1-6烷基取代的2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基；5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基；氨基-1,4-氧氮杂环庚烷基；被一个或两个独立地选自氨基和C1-6烷基的取代基取代的氮杂环丁烷基；未被取代或被C1-6烷基取代的哌嗪基；以及被一个或两个独立地选自氨基、C1-6烷氧基和卤素的取代基取代的吡咯烷基。
术语“杂芳基”表示具有5个至12个环原子的芳族杂环的单环或双环体系，其包含1、2、3或4个选自N、O和S的杂原子，剩余的环原子是碳。杂芳基部分的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、异噁唑基、苯并呋喃基、异噻唑基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、异苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基或喹噁啉基。杂芳基可进一步被取代基取代，这些取代基包括但不限于C1-6烷基；3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；1,4-二氮杂环庚烷基；被C1-6烷基取代的2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基；5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基；氨基-1,4-氧氮杂环庚烷基；被一个或两个独立地选自氨基和C1-6烷基的取代基取代的氮杂环丁烷基；未被取代或被C1-6烷基取代的哌嗪基；以及被一个或两个独立地选自氨基、C1-6烷氧基和卤素的取代基取代的吡咯烷基。
术语“杂环基”或“杂环”表示具有3至12个环原子的单价饱和或部分不饱和的单环或双环体系，其包含1至5个选自N、O和S的杂原子，剩余的环原子是碳。在特定的实施例中，杂环基是4至7个环原子的单价饱和的单环系统，其包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，剩余的环原子为碳。单环饱和杂环基的实例为氮丙啶基、环氧乙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢-噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,1-二氧代-硫代吗啉-4-基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、高哌嗪基、氧氮杂环庚烷基。双环饱和杂环的实例为氮杂双环[3.2.1]辛基、奎宁环基、氧氮杂双环[3.2.1]辛烷基、氮杂双环[3.3.1]壬烷基、氧氮杂-双环[3.3.1]壬烷基、氮杂双环[3.1.0]己烷基、氧代二氮杂螺[3.4]辛烷基、乙酰氧代二氮杂螺[3.4]辛烷基、噻氮杂双环[3.3.1]壬烷基、氧代氮杂螺[2.4]庚烷基、氧代氮杂螺[3.4]辛烷基、氧代氮杂双环[3.1.0]己烷基和二氧代四氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基。双环杂环基的实例包括但不限于1,2,3,4-四氢异喹啉基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基；5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶基；5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基；5,6,7,8-四氢-2,7-萘啶基；异吲哚啉基；3,4-二氢-1H-2,6-萘啶基；7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基；6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶基；2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基；5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶基和3,4-二氢-1H-异喹啉基。单环或双环的杂环基可进一步被氨基、羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基或杂环基取代。
术语“杂环基氨基”表示杂环基-NH-。
术语“杂环基氧基”表示杂环基-O-。
术语“药用盐”表示在生物学上或其他方面不是不期望的盐。“药用盐”包括酸加成盐和碱加成盐两者。
“药用酸加成盐”是指与无机酸和有机酸形成的那些药用盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等，所述有机酸可以选自脂肪族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸，诸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、和水杨酸等。
术语“药用碱加成盐”表示与有机或无机碱形成的那些药用盐。可接受的无机碱的示例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自药用有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)、环胺和碱性离子交换树脂(诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、氨丁三醇、二环己胺，赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和多胺树脂)的盐。
术语“药物活性代谢物”表示通过特定化合物或其盐在体内的代谢产生的药理活性产物。进入人体后，大多数药物均是化学反应的底物，可能改变其物理性质和生物学效应。这些通常影响本发明化合物极性的代谢转化改变了药物在体内分布和从体内排泄的方式。然而，在某些情况下，药物代谢是治疗效果所必需的。
术语“治疗有效量”是表示本发明的化合物或分子的量，当将其施用于受试者时，(i)治疗或预防特定疾病、病症或疾患，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状的发作。治疗有效量取决于化合物，所治疗的疾病状态，所治疗疾病的严重程度，受试者的年龄和相对健康状况，给药途径和形式，主治医学或兽医的判断和其他因素。
术语“药物组合物”表示包含治疗有效量的活性药物成分和一起施用于有此需要的哺乳动物(例如人)的药用赋形剂的混合物或溶液。
TLR7和/或TLR8和/或TLR9的拮抗剂
本发明涉及(i)，其是式(I)化合物，
Figure BDA0003642846310000061
R1为
Figure BDA0003642846310000062
Figure BDA0003642846310000063
Figure BDA0003642846310000071
其中R4为C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤素、硝基或氰基；R4a为C1-6烷基或C3-7环烷基；R5、R5a和R5b独立地选自H和氘；R6为H或卤素；
R2为C1-6烷基；
R3为5-7元单环芳基或杂芳基，或7-12元双环杂环基、杂环基-杂环基、杂环基氨基、C1-6烷基(杂环基)氨基或杂环基氧基；
或其药用盐。
本发明的进一步实施例为(ii)根据(i)所述的式(I)化合物，其中
R1为
Figure BDA0003642846310000072
其中R4为氰基；R5为H或氘；
R2为C1-6烷基；
R3为(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基)哌嗪基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基；(C1-6烷基)2氨基哌啶基；(C1-6烷基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基)氮杂环丁烷基；(C1-6烷基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基)氨基；(C1-6烷基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基)氨基；(C1-6烷基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶基)氨基；(C1-6烷基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基)氨基；2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基氧基；5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶基氨基；氨基(C1-6烷基)氮杂环丁烷基；氨基(C1-6烷基)哌啶基；氨基(C1-6烷基)吡咯烷基；C1-6烷基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基)氨基；哌嗪基；哌嗪基-3,4-二氢-1H-异喹啉基或哌嗪基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基；
或其药用盐。
本发明的另一个实施例为(iii)，其为式(Ia)化合物，
Figure BDA0003642846310000081
其中
R1为
Figure BDA0003642846310000082
其中R4为氰基；R5为H或氘；
R2为C1-6烷基；
R3为(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基)哌嗪基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基；(C1-6烷基)2氨基哌啶基；(C1-6烷基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基)氮杂环丁烷基；(C1-6烷基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基)氨基；(C1-6烷基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基)氨基；(C1-6烷基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶基)氨基；(C1-6烷基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基)氨基；2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基氧基；5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶基氨基；氨基(C1-6烷基)氮杂环丁烷基；氨基(C1-6烷基)哌啶基；氨基(C1-6烷基)吡咯烷基；C1-6烷基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基)氨基；哌嗪基；哌嗪基-3,4-二氢-1H-异喹啉基或哌嗪基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基；
或其药用盐。
本发明的另一个实施例为(iv)根据(i)至(iii)中任一者所述的式(I)或(Ia)化合物或其药用盐，其中R1为
Figure BDA0003642846310000091
其中R4为氰基；R5为氘。
本发明的另一个实施例为(v)根据(i)至(iv)中任一者所述的式(I)或(Ia)化合物，其中R3为(3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基)-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-基；(3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-基；(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基)哌嗪-1-基；(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基；(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)氮杂环丁烷-1-基；(5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基)氨基；(5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基)氨基；(6-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-2-基)氨基；(7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基；2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基；3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基；3-氨基-3-甲基-吡咯烷-1-基；3-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-6-基；4-(二甲基氨基)-1-哌啶基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基；4-氨基-4-甲基-1-哌啶基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氨基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氧基；5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶-2-基氨基；5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基氨基；5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基氨基；6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基；甲基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基或哌嗪-1-基。
本发明的另一个实施例为(vi)根据(i)至(v)中任一者所述的式(I)或(Ia)化合物或其药用盐，其中R2为甲基。
本发明的另一个实施例为(vii)根据(i)至(vi)中任一者所述的式(I)或(Ia)化合物或其药用盐，其中R3为(C1-6烷基)2氨基哌啶基；(C1-6烷基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基)氮杂环丁烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；哌嗪基或哌嗪基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基。
本发明的另一个实施例为(viii)根据(i)至(vii)中任一者所述的式(I)或(Ia)化合物或其药用盐，其中R3为(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基；3-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-6-基；4-(二甲基氨基)-1-哌啶基或哌嗪-1-基。
本发明的另一个实施例为(ix)根据(i)至(viii)中任一者所述的式(I)或(Ia)化合物或其药用盐，其中
R1为
Figure BDA0003642846310000101
其中R4为氰基；R5为氘；
R2为C1-6烷基；
R3为(C1-6烷基)2氨基哌啶基；(C1-6烷基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基)氮杂环丁烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；哌嗪基或哌嗪基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基；
或其药用盐。
本发明的另一个实施例为(x)根据(i)至(ix)中任一者所述的式(I)或(Ia)化合物或其药用盐，其中
R1为
Figure BDA0003642846310000102
其中R4为氰基；R5为氘；
R2为甲基；
R3为(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基；3-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-6-基；4-(二甲基氨基)-1-哌啶基或哌嗪-1-基；
或其药用盐。
本发明的另一个实施例为式(I)或(Ia)化合物，其选自以下化合物：
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[(6-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[甲基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(7S)-7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(7R)-7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5S)-5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5R)-5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-[2-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-[7-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[4-(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基)哌嗪-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氧基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-哌嗪-1-基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-(3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-(4-氨基-4-甲基-1-哌啶基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(3-氨基-3-甲基-吡咯烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-[3-[(5R)-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-[3-[(5R)-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；以及
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
或其药用盐。
合成
本发明的化合物可以通过任何常规方法制备。在以下方案和示例中提供了合成这些化合物及其原料的合适方法。除非另有说明，否则所有取代基，特别是R1和R2如上文所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号均具有有机化学领域普通技术人员众所周知的含义。
制备式(I)、(VII)和(VIII)化合物的一般合成路线如下所示。
方案1
Figure BDA0003642846310000131
其中X为卤素或离去基团，例如甲磺酸盐；R7为5-7元单环芳基或杂芳基，或7-12元双环杂环基；R8为H或C1-6烷基；或R7和R8与它们所连接的氮一起形成杂环基。
本发明的化合物的合成开始于双环胺、式III化合物与卤化物II经由布赫瓦尔德-哈特维希胺化反应在催化剂例如Ruphos Pd-G2和碱例如Cs2CO3的存在下进行反应，提供式IV化合物(参考：Acc.Chem.Res.1998，31，805-818；Chem.Rev.2016，116，12564-12649；Topics in Current Chemistry，2002，219，131-209；这些文献以引用方式并入本文)。替代性地，式IV化合物也可通过卤化物II与式III化合物在碱诸如DIPEA、NaHCO3和K2CO3存在下发生亲核取代来获得。式IV化合物在酸性条件下(诸如HCl在EtOAc中的溶液以及TFA在DCM中的溶液)发生Boc脱保护，得到式V化合物，该化合物可通过与式VI化合物在碱诸如DIPEANaHCO3和K2CO3存在下发生亲核取代或与式VI化合物发生布赫瓦尔德-哈特维希胺化反应并且随后经适当的脱保护，转化为式VII化合物。式VII化合物可与R8-CHO还原胺化，然后可经适当的脱保护，以得到式VIII。
用于制备式(I)、(VIII)和(XIV)化合物的合成路线在方案2中示出。
方案2
Figure BDA0003642846310000141
其中X为卤素；Y为卤素或离去基团，例如甲磺酸盐；R9为5-7元单环芳基或杂芳基，或7-12元双环杂环基；R7和R8与它们所连接的氮一起形成杂环基
卤化物II与式IX化合物之间发生布赫瓦尔德-哈特维希胺化反应，反应在催化剂例如Ruphos Pd-G2和碱例如Cs2CO3的存在下进行，得到式X化合物(参考：Acc.Chem.Res.1998，31，805-818；Chem.Rev.2016，116，12564-12649；Topics in CurrentChemistry，2002，219，131-209；这些文献以引用方式并入本文)。替代性地，式X化合物也可通过卤化物II与式IX化合物之间在碱诸如DIPEA、NaHCO3和K2CO3存在下发生亲核取代来获得。式X化合物在典型条件下(例如NaBH4在MeOH中)发生还原，以得到式XI化合物，该式XI化合物可以通过将仲羟基转化为离去基团(例如甲磺酸盐)而转化为式XII化合物。在催化剂和碱诸如KI和K2CO3的存在下，经由与胺HR9Y的取代反应来置换式XII化合物的离去基团，以得到式XIII化合物。式XIII化合物与胺NHR7R8之间发生布赫瓦尔德-哈特维希胺化反应或亲核取代，然后经适当的脱保护，可得到式XIV化合物。在催化剂和碱诸如KI和K2CO3的存在下，经由与胺NHR7R8的取代反应来置换式XII化合物中的离去基团，以得到式VIII化合物。
用于制备式(I)和(XVII)化合物的合成路线在方案3中示出。
方案3
Figure BDA0003642846310000151
其中R10为保护基团，例如苄基基团。
式XV化合物可以经由在碱例如DIEPA的存在下的亲核芳族取代或Pd催化的偶联与卤化物VI反应，以得到式XVI化合物。通过选择性脱保护(例如Pd/C催化氢化作用)从式XVI中除去R10后，所得式XVII化合物可在碱(例如DIEPA)存在下通过亲核取代与卤化物II反应，以得到式XVIII化合物。在一些实施例中，式XVII化合物在R12上可包含保护基团，例如Boc，并且将去除保护基团，以得到具有式XVIII的最终化合物。
式(Ia)化合物可根据方案1、2和3使用手性起始材料来合成。
本发明的化合物可以以非对映体或对映体的混合物形式获得，它们可以通过本领域熟知的方法分离，例如，(手性)HPLC或SFC。
本发明还涉及制备式(I)或(Ia)的化合物的方法，该方法包括以下步骤中的任一者：
a)式(V)化合物
Figure BDA0003642846310000152
与式(VI)化合物X-R7(VI)之间的布赫瓦尔德-哈特维希胺化反应或亲核取代；
b)式(VII)化合物
Figure BDA0003642846310000153
与R8-CHO的还原胺化；
c)式(XII)化合物
Figure BDA0003642846310000161
与胺NHR7R8之间的取代反应；
d)式(XIII)化合物
Figure BDA0003642846310000162
与胺NHR7R8之间的布赫瓦尔德-哈特维希胺化反应或亲核取代；
e)式(XVII)化合物
Figure BDA0003642846310000163
与式(II)化合物X-R1(II)之间的亲核取代；
其中X为卤素；Y为卤素或离去基团，例如甲磺酸盐；R7为5-7元单环芳基或杂芳基，或7-12元双环杂环基；R9为5-7元单环芳基或杂芳基，或7-12元双环杂环基。
式(Ia)化合物也可根据方案1、2或3通过使用手性中间体来合成。
根据上述方法生产的式(I)或(Ia)的化合物也是本发明的目的。
适应症和治疗方法
本发明提供了可以用作TLR7和/或TLR8和/或TLR9拮抗剂的化合物，其抑制通过TLR7和/或TLR8和/或TLR9通路的活化以及相应的下游生物学事件，包括但不限于通过产生所有类型的细胞因子和各种形式的自身抗体介导的先天性和适应性免疫应答。因此，本发明的化合物可用于在表达此类受体的所有类型的细胞中阻断TLR7和/或TLR8和/或TLR9，所述细胞包括但不限于浆细胞样树突细胞、B细胞、T细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、角质形成细胞、上皮细胞。如此，该化合物可用作全身性红斑狼疮和狼疮肾炎的治疗剂或预防剂。
本发明提供了治疗或预防有需要的患者的全身性红斑狼疮和狼疮肾炎的方法。
另一实施例包括治疗或预防需要这种治疗的哺乳动物中全身性红斑狼疮和狼疮肾炎的方法，其中所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、前药或药用盐。
实例
通过参考以下实例将更全面地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。
缩写
通过参考以下实例将更全面地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。
本文使用的缩写如下：
ACN： 乙腈
DCM： 二氯甲烷
DCE： 二氯乙烷
DIPEA或DIEA： N,N-二异丙基乙胺
DMF： N,N-二甲基甲酰胺
EA或EtOAc： 乙酸乙酯
FA： 甲酸
HATU: 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐
IC50： 半抑制浓度
IPA: 异丙醇
MS： 质谱
prep-HPLC： 制备型高效液相色谱
prep-TLC: 制备型薄层色谱
RuPhos Pd G2： 氯(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)第2代
SFC： 超临界流体色谱
TEA: 三甲胺
TFA： 三氟乙酸
THF： 四氢呋喃
v/v 体积比
一般实验条件
使用以下仪器之一通过快速色谱法纯化中间体和最终化合物：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge模块。ii)ISCO combi-flash色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL
Figure BDA0003642846310000181
粒径：40-60μm；ii)CAS登录号：硅胶：63231-67-4，粒径：47-60微米硅胶；iii)青岛海洋化学有限公司的ZCX，孔：200-300或300-400。
中间体和最终化合物在反相色谱柱上通过制备型HPLC纯化，反相色谱柱使用XBridgeTM Prep-C18(5μm,OBDTM 30×100mm)色谱柱，SunFireTM Prep-C18(5μm,OBDTM 30×100mm)色谱柱，Phenomenex Synergi-C18(10μm,25×150mm)或Phenomenex Gemini-C18(10μm,25×150mm)。Waters AutoP纯化系统(样品管理器2767，泵2525，检测器：Micromass ZQ和UV 2487，溶剂系统：乙腈和0.1％氢氧化铵在水中的溶液；乙腈和0.1％FA在水中的溶液，或乙腈和0.1％TFA在水中的溶液)。或Gilson-281纯化系统(泵322，检测器：UV 156，溶剂系统：乙腈和0.05％氢氧化铵在水中的溶液；乙腈和0.225％FA在水中的溶液；乙腈和0.05％HCl在水中的溶液；乙腈和0.075％TFA在水中的溶液；或乙腈和水)。
为了进行SFC手性分离，中间体分离通过手性柱(Daicel chiralpak IC,5μm,30×250mm)、AS(10μm,30×250mm)或AD(10μm,30×250mm)，使用Mettler Toledo MultigramIII系统SFC、Waters 80Q制备型SFC或Thar 80制备型SFC，溶剂系统：CO2和IPA(0.5％TEA的IPA溶液)或CO2和MeOH(0.1％NH3·H2O的MeOH溶液)，背压100bar，在254或220nm处检测UV。
使用LC/MS(WatersTM Alliance 2795-Micromass ZQ、Shimadzu Alliance2020-Micromass ZQ或Agilent Alliance 6110-Micromass ZQ)获得化合物的LC/MS光谱，LC/MS条件如下(运行时间3或1.5分钟)：
酸性条件I：A：0.1％TFA在H2O中的溶液；B：0.1％TFA在乙腈中的溶液；
酸性条件II：A：0.0375％TFA在H2O中的溶液；B：0.01875％TFA在乙腈中的溶液；
碱性条件I：A：0.1％NH3·H2O在H2O中的溶液；B：乙腈；
碱性条件II：A：0.025％NH3·H2O在H2O中的溶液；B：乙腈；
中性条件：A：H2O；B：乙腈。
质谱(MS)：通常仅报告表示母体质量的离子，除非另有说明，否则所引用的质量离子为正质量离子(MH)+。
使用Bruker Avance 400MHz获得NMR谱。
微波辅助反应在Biotage Initiator Sixty微波合成仪中进行。所有涉及对空气敏感的试剂的反应均在氩气或氮气气氛下进行。除非另有说明，否则试剂按原样购自商业供应商，未经进一步纯化。
制备实例
以下实例旨在说明本发明的含义，但绝不代表对本发明含义的限制：
中间体A1
5-氟喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000191
根据以下方案合成标题化合物：
Figure BDA0003642846310000192
步骤1：制备8-溴-5-氟喹啉(化合物A1.2)
在100mL梨形烧瓶中，将2-溴-5-氟苯胺(化合物A1.1，2.0g，10.5mmol)，丙烷-1,2,3-三醇(969mg，10.5mmol)和3-硝基苯磺酸钠(2.4g，10.5mmol)与70％H2SO4(20mL)合并，以得到深褐色溶液，将该溶液加热至150℃并搅拌3小时。冷却至室温后，将反应混合物倒入冰水中，并用氢氧化钠溶液中和。过滤所得混合物。将滤饼溶解在EtOAc中并过滤。将得到的滤液真空浓缩。将原材料通过快速色谱法纯化(硅胶，40g，0％至30％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物A1.2(2.0g，84％产率)。MS：计算值226和228[(M+H)+]，测量值226和228[(M+H)+]。
步骤2：制备5-氟喹啉-8-甲腈(中间体A1)
向8-溴-5-氟喹啉(化合物A1.2，4.9g，21.7mmol)在DMF(30mL)中的溶液加入双氰锌(5.0g，43.4mmol)和RuPhos Pd G2(CAS：1375325-68-0，西格玛奥德里奇，目录：753246，842mg，1.1mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌3小时，然后冷却至室温。过滤反应混合物，然后用水(50mL)稀释滤液，并用EA(80mL)萃取3次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，40g，0％至70％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到中间体A1(3.0g，80％产率)。MS：计算值173[(M+H)+]，测量值173[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 9.11(dd,J＝4.28,1.71Hz,1H),8.64(dd,J＝8.56,1.71Hz,1H),8.29(dd,J＝8.19,5.62Hz,1H),7.76(dd,J＝8.56,4.28Hz,1H),7.49(dd,J＝9.35,8.25Hz,1H)。
中间体A2
2-氘代-5-氟-喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000201
根据以下方案合成标题化合物：
Figure BDA0003642846310000202
步骤1：制备N-(2-溴-5-氟-苯基)-3,3-二甲氧基-丙酰胺(化合物A2.2)
在0℃下向2-溴-5-氟苯胺(化合物A2.1，50g，263mmol)和3,3-二甲氧基丙酸甲酯(45mL，316mmol)在THF(150mL)中的溶液滴加NaHMDS在THF(394mL，394mmol)中的溶液。将混合物在该温度下搅拌10分钟，然后将其升温至15℃并搅拌18小时。用饱和NH4Cl水溶液猝灭反应并且浓缩至约300mL。用水稀释溶液，并用EtOAc萃取。将有机层用Na2SO4干燥并浓缩，以得到化合物A2.2(100g，90％产率)。MS：计算值306[(M+H)+]，测量值306[(M+H)+]。
步骤2：制备8-溴-5-氟-1H-喹啉-2-酮(化合物A2.3)
在0℃下向N-(2-溴-5-氟-苯基)-3,3-二甲氧基-丙酰胺(化合物A2.2，100g，238mmol)在DCM(500mL)中的溶液中加入浓硫酸(300mL)。将混合物在15℃下搅拌2小时，然后将其缓慢倒入2000mL冰水中，并且出现黄色沉淀。过滤混合物，并将湿饼用500mL水，200mL异丙醇和300mL PE洗涤。将固体真空干燥，以得到化合物A2.3(50g，86.5％产率)。MS：计算值242[(M+H)+]，测量值242[(M+H)+]。
步骤3：制备5-氟-2-氧代-1H-喹啉-8-甲腈(化合物A2.4)
将8-溴-5-氟-1H-喹啉-2-酮(化合物A2.3，50g，206mmol)、氰化锌(4.8g，412mmol)、Pd(PPh3)4(2.4g，21mmol)在DMF中的溶液在120℃下搅拌5小时。将反应混合物用水稀释并用DCM萃取。将有机层干燥并浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过快速色谱柱纯化，以得到化合物A2.4(29g，74.5％产率)。MS：计算值189[(M+H)+]，测量值189[(M+H)+]。
步骤4：制备(8-氰基-5-氟-2-喹啉基)三氟甲磺酸盐(化合物A2.5)
在0℃下向5-氟-2-氧代-1H-喹啉-8-甲腈(化合物A2.4，17g，90mmol)和2,6-二甲基吡啶(39g，361mmol)在DCM中的溶液滴加三氟甲磺酸酐(51g，181mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，然后将反应用水稀释，用DCM萃取。将合并的有机层干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以得到化合物A2.5(23.0g，80％产率)。MS：计算值321[(M+H)+]，测量值321[(M+H)+]。
步骤5：制备2-氘代-5-氟-喹啉-8-甲腈(中间体A2)
向(8-氰基-5-氟-2-喹啉基)三氟甲磺酸酯(化合物A2.5，23g，72mmol)和氧化氘(100mL)的THF(230mL)溶液，加入碳酸钾(20g，144mmol)和Pd/C(6g)。将混合物在氘气氛(气球)下在40℃搅拌5小时。将混合物过滤，并将滤液浓缩并通过快速色谱柱纯化，以得到中间体A2(11g，87.8％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值174[(M+H)+]，测量值174[(M+H)+]。
中间体B
(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-1,3,4,6,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-酮
Figure BDA0003642846310000221
根据以下方案合成标题化合物：
Figure BDA0003642846310000222
步骤1：制备N-[(1R)-2-(苄基氨基)-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物B2)
向N-[(1R)-2-氨基-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物B1，135.0g，774.8mmol)在DCE(3.0L)中的溶液加入苯甲醛(71.0mL，695.8mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。将三乙酰氧基硼氢化钠(405.0g，1.9mol)加入上述溶液中。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物用饱和Na2CO3(水溶液)中和至pH为约8，用水(1.0L)稀释，并且用DCM(1.0L)萃取两次。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物B2(163.6g，80％产率)。MS：计算值265[(M+H)+]，测量值265[(M+H)+]。
步骤2：制备(E)-4-[苄基-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙基]氨基]丁-2-烯酸甲酯(化合物B3)
向N-[(1R)-2-(苄基氨基)-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物B2，185.0g，699.8mmol)在丙酮(2.0L)中的溶液加入4-溴巴豆酸甲酯(135.0g，754.2mmol)和碳酸钾(290.0g，2.1mol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤，并且浓缩滤液。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物B3(146.0g，57.6％产率)。MS：计算值363[(M+H)+]，测量值363[(M+H)+]。
步骤3：制备2-[(6R)-4-苄基-6-甲基-哌嗪-2-基]乙酸甲酯(化合物B4)
将(E)-4-[苄基-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙基]氨基]丁-2-烯酸甲酯(化合物B3，132.0g，364.2mmol)和HCl/甲醇(1N，1.0L)的混合物加热回流2小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩。将残余物用饱和K2CO3(水溶液)中和至pH为约10，用水(1.0L)稀释，并且用DCM(1.0L)萃取三次。将合并的有机层用盐水(1000mL)洗涤两次，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物B4(90.0g，94.0％产率)。MS：计算值263[(M+H)+]，测量值263[(M+H)+]。
步骤4：制备2-[(2S,6R)-4-苄基-1-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-6-甲基-哌嗪-2-基]乙酸甲酯(化合物B5)
向2-((6R)-4-苄基-6-甲基哌嗪-2-基)乙酸甲酯(化合物B4，90.0g，343.1mmol)在丙酮(2.0L)中的溶液加入溴乙酸甲酯(90.0g，588.4mmol)和碳酸钾(99.0g，716.3mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤，并且浓缩滤液。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物B5(50g，43.5％产率)。MS：计算值335[(M+H)+]，测量值335[(M+H)+]。
步骤5：制备(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-1,3,4,6,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-酮(中间体B)
在0℃下向叔丁醇钾(34.0g，303mmol)在甲苯(900mL)中的悬浮液中加入2-[(2S,6R)-4-苄基-1-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-6-甲基-哌嗪-2-基]乙酸甲酯(化合物B5，50.0g，104.7mmol)在甲苯(100mL)中的溶液。将所得混合物在0℃下搅拌2小时。然后将反应混合物用HCl(6N，100mL，水溶液)萃取两次。在100℃下将合并的水层再搅拌12小时。将反应混合物重新冷却至0℃，用饱和K2CO3(水溶液)碱化至pH为约8，并且用EA(100mL)萃取五次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过反相色谱法(ODS-C18，0％至100％的ACN在水中的溶液(含0.5％的NH3H2O))纯化，以得到中间体B(较快洗脱，13.4g，52.1％产率)和化合物B6(较慢洗脱，4.2g，16.4％产率)。
中间体B立体化学由NOESY确认。MS：计算值245[(M+H)+]，测量值245[(M+H)+]。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.25-7.17(m,5H),3.52-3.39(m,3H),2.91(d,J＝10.4Hz,1H),2.76-2.73(m,2H),2.55-2.47(m,2H),2.22(dd,J＝5.6Hz,1H),2.00(dd,J＝8.8Hz,1H),1.96-1.90(m,2H),0.95(t,J＝6.4Hz,3H)。
化合物B6立体化学由NOESY确认。MS：计算值245[(M+H)+]，测量值245[(M+H)+]。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.35-7.25(m,5H),3.59-3.47(m,2H),3.37(dq,J＝3.2,8.0Hz,1H),3.28-3.23(m,1H),3.10–3.06(m,1H),3.05-3.02(m,1H),2.83(dd,J＝3.0,10.8Hz,1H),2.58-2.46(m,2H),2.31-2.19(m,3H),1.15(d,J＝6.4Hz,3H)。
中间体C5-[(4R,7R,8aS)-7-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000241
根据以下方案合成标题化合物：
Figure BDA0003642846310000251
步骤1：制备(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-醇(化合物C1.1)
在0℃下向(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-1,3,4,6,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-酮(中间体B，12.0g，49.1mmol)在甲醇(300mL)中的溶液缓慢加入硼氢化钠(3.72g，98.3mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用HCl(10％水溶液)猝灭，直至pH为约4。然后将所得混合物用K2CO3水溶液碱化至pH为约8，用EA(100mL)萃取三次。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物C1.1(11.2g，92.6％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值247[(M+H)+]，测量值247[(M+H)+]。
步骤2：制备[(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]甲磺酸盐(化合物C1.2)
在0℃下向(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-醇(化合物C1.1，11.2g，45.5mmol)和DIPEA(40mL，228.6mmol)在EtOAc(500mL)中的溶液缓慢加入甲磺酰氯(11mL，136.7mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌5小时。将反应用饱和NaHCO3(水溶液)猝灭，并且将混合物用EA(100mL)萃取两次。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物C1.2(13.0g，88％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值325[(M+H)+]，测量值325[(M+H)+]。
步骤3：制备(4R,8aS)-7-叠氮基-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪(化合物C1.3)
向[(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]甲磺酸盐(化合物C1.2，13.0g，40.1mmol)在DMF(250mL)中的溶液加入叠氮化钠(7.8g，120.4mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温，用饱和NaHCO3(水溶液，100mL)猝灭，并用EA(150mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物C1.3(9g，82.7％产率)。MS：计算值272[(M+H)+]，测量值272[(M+H)+]。
步骤4：制备(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-胺(化合物C1.4)
在0℃下向(4R,8aS)-7-叠氮基-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪(化合物C1.3，9.0g，33.2mmol)在THF(128mL)和水(25mL)中的溶液缓慢加入三苯基膦(17.0g，66.2mmol)。添加完成后，将所得混合物在回流下加热2小时。将反应混合物冷却至室温，真空浓缩。将残余物与H2O(200mL)混合，用1N HCl(水溶液)酸化至pH为约2。将所得混合物用DCM(300mL)洗涤两次，然后用6ΝNaOH处理水相以将pH调节至12。用DCM(150mL)萃取三次之后，将有机层合并并且用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物C1.4(6g，73.6％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值246[(M+H)+]，测量值246[(M+H)+]。
步骤5：制备N-[(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物C1.5)
在0℃下向(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-胺(化合物C1.4，6.0g，24.5mmol)和三乙胺(7.0mL，50.2mmol)在DCM(60mL)中的溶液加入焦碳酸二叔丁酯(8.0g，36.7mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应用饱和NaHCO3(水溶液)猝灭，并且将混合物用DCM(80mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物C1.5(4.0g，47.2％产率)。MS：计算值346[(M+H)+]，测量值346[(M+H)+]。
步骤6：制备N-[(4R,8aS)-4-甲基-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物C1.6)
向N-[(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物C1.5，3.9g，11.3mmol)在2,2,2-三氟乙醇(100.0mL，1372mmol)中的溶液加入湿Pd/C(1.0g，10％活性炭载钯，含50％的水)。将所得混合物用H2吹扫3次，然后于45℃下在H2气氛下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤，并且固体用DCM洗涤，并且将滤液真空浓缩，以得到化合物C1.6(2.8g，96.7％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值256[(M+H)+]，测量值256[(M+H)+]。
步骤7：制备N-[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物C1.8)
向N-[(4R,8aS)-4-甲基-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物C1.6，1.05g，4.1mmol)的溶液在无水DMSO(20mL)中的溶液加入5-氟喹啉-8-甲腈(中间体A1，0.7g，4.1mmol)和DIPEA(3.6mL，20.6mmol)。将所得混合物在120℃下加热3小时。冷却至室温后，将反应混合物用水(60mL)稀释，用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物C1.7(较快洗脱，280mg，16.7％产率)和化合物C1.8(较慢洗脱，1.1g，65.6％产率)。
化合物C1.7立体化学由NOESY确认。MS：计算值408[(M+H)+]，测量值408[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.97(dd,J＝4.22,1.65Hz,1H),8.60(dd,J＝8.56,1.59Hz,1H),8.13(d,J＝8.07Hz,1H),7.63(dd,J＝8.56,4.28Hz,1H),7.25(d,J＝7.95Hz,1H),4.21-4.09(m,1H),3.65-3.53(m,1H),3.47-3.39(m,1H),3.13(br d,J＝10.03Hz,1H),2.85(t,J＝10.76Hz,1H),2.80-2.73(m,1H),2.73-2.58(m,2H),2.58-2.51(m,1H),2.39(ddd,J＝12.59,8.68,5.87Hz,1H),1.56-1.49(m,9H),1.39(td,J＝11.83,6.30Hz,1H),1.16(d,J＝5.99Hz,3H)。
化合物C1.8立体化学由NOESY确认。MS：计算值408[(M+H)+]，测量值408[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.97(dd,J＝4.28,1.71Hz,1H),8.61(dd,J＝8.62,1.65Hz,1H),8.13(d,J＝8.07Hz,1H),7.63(dd,J＝8.56,4.28Hz,1H),7.25(d,J＝7.95Hz,1H),4.21-4.14(m,1H),3.69(dd,J＝9.17,7.82Hz,1H),3.75-3.64(m,1H),3.58(br d,J＝10.88Hz,1H),3.46-3.39(m,1H),2.93-2.75(m,1H),2.82-2.74(m,1H),2.73–2.69(br d,J＝11.37Hz,1H),2.12(dd,J＝9.17,7.46Hz,1H),1.92(dt,J＝12.87,10.26Hz,1H),1.77(ddd,J＝12.93,5.96,2.51Hz,1H),1.47(s,9H),1.17(d,J＝6.11Hz,3H)。
步骤8：制备5-[(4R,7R,8aS)-7-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(中间体C)
向N-[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物C1.8，0.8g，2.0mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入三氟乙酸(5.0mL)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。浓缩反应混合物，将残余物用饱和K2CO3(水溶液)碱化，以将pH调节至10，用DCM(50mL)萃取五次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到中间体C(420mg，68％产率)。MS：计算值308[(M+H)+]，测量值308[(M+H)+]。
中间体D
(4R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]甲磺酸盐
Figure BDA0003642846310000281
根据以下方案合成标题化合物：
Figure BDA0003642846310000291
步骤1：制备(4R,8aS)-4-甲基-7-氧代-1,3,4,6,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酸叔丁酯(化合物D1.1)
向(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-1,3,4,6,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-酮(中间体B，12.0g，49.1mmol)和二碳酸二叔丁酯(10.7g，49.1mmol)在甲醇(300mL)中的溶液加入Pd/C(1.2g，4.9mmol，活性炭载钯，含50％的水)。将所得混合物用H2吹扫3次。然后将所得混合物在室温下搅拌4小时。将混合物用DCM通过硅藻土过滤，并且将滤液真空浓缩，以得到化合物D1.1(12.4g，99.3％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值255[(M+H)+]，测量值255[(M+H)+]。
步骤2：制备(4R,8aS)-4-甲基-2,3,4,6,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-酮(化合物D1.2)
向(4R,8aS)-4-甲基-7-氧代-1,3,4,6,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酸叔丁酯(化合物D1.1，12.4g，48.8mmol)在DCM(10mL)中的溶液加入HCl/二噁烷(4N，12mL)。将反应混合物在室温下搅拌60分钟，然后浓缩，以得到化合物D1.2(7.1g，94.4％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值155[(M+H)+]，测量值155[(M+H)+]。
步骤3：制备5-[(4R,8aS)-4-甲基-7-氧代-1,3,4,6,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物D1.3)
向(4R,8aS)-4-甲基-2,3,4,6,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-酮(化合物D1.2，7.1g，46.1mmol)和5-氟喹啉-8-甲腈(中间体A1，7.9g，46.1mmol)在DMSO(250mL)中的溶液加入DIPEA(24.9g，192.4mmol)。将所得混合物在120℃下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温，用水(水溶液，100mL)猝灭，并用EA(150mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物D1.3(11.4g，80.8％产率)。MS：计算值307[(M+H)+]，测量值307[(M+H)+]。
步骤4：制备5-[(4R,8aS)-7-羟基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物D1.4)
在0℃下向5-[(4R,8aS)-4-甲基-7-氧代-1,3,4,6,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物D1.3，11.4g，37.2mmol)在MeOH(100mL)中的溶液并分批加入NaBH4(2.8g，74.4mmol)。添加完成后，将所得混合物升至室温并且搅拌2小时。将反应混合物用水(10mL)猝灭，并且用EA(100mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物D1.4(10.3g，90％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值309[(M+H)+]，测量值309[(M+H)+]。
步骤5：(4R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]甲磺酸盐(中间体D)
在0℃下向5-[(4R,8aS)-7-羟基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物D1.4，10.3g，33.4mmol)和DIPEA(10.8g，83.8mmol)在DCM(60mL)中的溶液缓慢加入MsCl(4.6g，40.1mmol)。将所得混合物室温下搅拌过夜。将反应物用饱和NaHCO3(水溶液)猝灭，用DCM(80mL)萃取两次。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到中间体D(12.9g，92％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值387[(M+H)+]，测量值387[(M+H)+]。
中间体E
(4R,8aS)-2-(8-氰基-2-氘代-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]甲磺酸盐
Figure BDA0003642846310000311
与中间体D的制备类似，标题化合物通过使用2-氘代-5-氟-喹啉-8-甲腈(中间体A2)代替步骤(3)中的5-氟喹啉-8-甲腈(中间体A1)进行制备。获得中间体E。MS：计算值388[(M+H)+]，测量值388[(M+H)+]。
中间体F
(5R)-5-甲基-2,4,5,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003642846310000312
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0003642846310000313
步骤1：制备4-(二甲基氨基亚甲基)-(2R)-2-甲基-5-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(化合物F1.2)
向(2R)-2-甲基-5-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(化合物F1.1，CAS：2007925-02-0，Pharmablock，目录：PBS62487，5.00g，23.44mmol)在DMF(30mL)中的溶液加入N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(5.58g，46.88mmol)。在90℃下加热18小时后，将混合物冷却并浓缩，以得到化合物F1.2(6.29g)，其为橘红色液体，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值269[(M+H)+]，测量值269[(M+H)+]。
步骤2：制备(5R)-5-甲基-2,4,5,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(中间体F)
向4-(二甲基氨基亚甲基)-(2R)-2-甲基-5-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(化合物F1.2，6.29g，23.44mmol)在乙醇(30mL)中的溶液加入水合肼(1.76g，35.16mmol)。在50℃下搅拌2小时后，将混合物冷却并用水(100mL)稀释。将混合物用EA(100mL)萃取三次。合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱柱(EA/PE＝0至60％)纯化，以得到中间体F(1.80g)，其为黄色油状物。MS：计算值238[(M+H)+]，测量值238[(M+H)+]。
中间体G
4-(5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003642846310000321
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0003642846310000322
步骤1：制备吡啶并[3,4-b]吡嗪-2,3-二醇(化合物G2)
向3,4-二氨基吡啶(20.0g，183.27mmol，化合物G1)在盐酸溶剂(200.0mL)中的溶液加入草酸(19.8g，219.92mmol)，并且将反应在100℃下搅拌18小时。在反应完成后，将混合物冷却至室温，然后过滤悬浮液。将滤饼用EtOH(200ml)洗涤并且在真空下干燥，以得到粗化合物G2(33.08g，110.65％产率)，其为白色固体，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值164[(M+H)+]，测量值164[(M+H)+]。
步骤2：制备2,3-二氯吡啶并[3,4-b]吡嗪(化合物G3)
向吡啶并[3,4-b]吡嗪-2,3-二醇(化合物G2，12.0g，73.56mmol)在三氯磷酸(122.0mL，1273mmol)中的溶液加入三乙胺(10.25mL，73.56mmol)。将反应在130℃下加热48小时。然后将混合物真空浓缩并将残余物用饱和NaHCO3溶液(200mL)猝灭。然后将所得悬浮液过滤并且将滤液用EtOAc(500mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，然后真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至30％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物G3(900mg，6.12％产率)，其为白色固体。MS：计算值200[(M+H)+]，测量值200[(M+H)+]。
步骤3：制备3-氯-2-甲基硫烷基-吡啶并[3,4-b]吡嗪(化合物G4)
在0℃下向2,3-二氯吡啶并[3,4-b]吡嗪(化合物G3，800.0mg，4mmol)在THF(60mL)中的溶液加入甲硫醇钠(308.36mg，4.4mmol)，然后将反应在0℃下搅拌1小时。在反应完成后，将混合物用2N NH4Cl溶液(40mL)猝灭，然后将所得混合物用EtOAc(40mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至30％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物G4(750mg，88.59％产率)，其为黄色胶状物。MS：计算值212[(M+H)+]，测量值212[(M+H)+]。
步骤4：制备4-(2-甲基硫烷基吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物G5)
向3-氯-2-甲基硫烷基-吡啶并[3,4-b]吡嗪(化合物G4，750.0mg，3.54mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯在N,N-二甲基乙酰胺(15mL)中的溶液加入DIPEA(1.23mL，7.09mmol)。将溶液在50℃下搅拌4小时。在反应完成后，然后将混合物用水(30mL)稀释，并且用EtOAc(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，然后真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至30％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物G5(500mg，39.04％产率)，其为黄色胶状物)。MS：计算值362[(M+H)+]，测量值362[(M+H)+]。
步骤5：制备4-(6-苄基-2-甲基硫烷基-吡啶并[3,4-b]吡嗪-6-鎓-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯溴化物(化合物G6)
向4-(2-甲基硫烷基吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物G5，500.0mg，1.38mmol)在ACN(10mL)中的溶液加入苄基溴(0.17mL，1.46mmol)。然后将反应在80℃下搅拌2小时。在反应完成后，将混合物真空浓缩，以得到粗化合物G6(730mg，99.1％产率)，其为黄色胶状物，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值452[(M+H-Br)+]，测量值452[(M+H-Br)+]。
步骤6：制备4-(6-苄基-2-甲基硫烷基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物G7)
在0℃下向4-(6-苄基-2-甲基硫烷基-吡啶并[3,4-b]吡嗪-6-鎓-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯溴化物(化合物G6，730.0mg，1.37mmol)在ACN(30mL)中的溶液加入三乙酰氧基硼氢化钠(1452.74mg，6.85mmol)。将反应在20℃下搅拌4小时。在反应完成后，将混合物真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至5％的MeOH的DCM溶液)，以得到化合物G7(500mg，80.05％产率)，其为黄色胶状物。MS：计算值456[(M+H)+]，测量值456[(M+H)+]。
步骤7：制备4-(6-苄基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物G8)
在0℃下向4-(6-苄基-2-甲基硫烷基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物G7，500.0mg，1.1mmol)在THF(30mL)中的溶液加入10％Pd/C(300.0mg)和三乙基硅烷(3000.0mg，25.86mmol)。将反应在20℃下搅拌18小时。在反应完成后，将混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至50％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物G8(250mg，55.63％产率)，其为黄色固体。MS：计算值410[(M+H)+]，测量值410[(M+H)+]。
步骤8：制备4-(5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体G)
向4-(6-苄基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物G8，250.0mg，0.61mmol)在甲醇(20mL)中的溶液加入活性炭载钯(10％)(50mg)，然后将混合物在H2气氛下搅拌18小时。在反应完成后，将混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至50％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到中间体G(56mg，28.7％产率)，其为黄色固体。MS：计算值320[(M+H)+]，测量值320[(M+H)+]。
实例1
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000351
根据以下方案合成标题化合物：
Figure BDA0003642846310000352
步骤1：制备2-[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物1,2)
向5-[(4R,8aS)-7-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(中间体C1，70mg，228μmol)在二噁烷(8mL)中的溶液加入2-氯-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物1.1，CAS：1151665-15-4，PharmaBlock，目录：PB06675，61.2mg，228μmol)，RuPhos Pd G2(CAS：1375325-68-0，西格玛奥德里奇，目录：753246，17.7mg，22.8μmol)和Cs2CO3(223mg，683μmol)。将所得混合物在90℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温后，用水(30mL)稀释，并用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至100％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物1.2(38mg，30.9％产率)。MS：计算值540[(M+H)+]，测量值540[(M+H)+]。
步骤2：制备5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(实例1)
向2-[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物1,2，30mg，55.6μmol)在DCM(4mL)中的溶液加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到实例1(15mg，61.3％产率)。立体化学由NOESY确认。MS：计算值440[(M+H)+]，测量值440[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 9.05-8.94(m,1H),8.67-8.59(m,1H),8.16(d,J＝8.1Hz,1H),7.72-7.60(m,1H),7.28(d,J＝8.1Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),6.40(d,J＝8.4Hz,1H),4.48-4.35(m,1H),3.92-3.83(m,1H),3.81(s,2H),3.61(br d,J＝11.1Hz,1H),3.44(br d,J＝11.1Hz,1H),3.12(t,J＝6.1Hz,2H),2.96-2.70(m,6H),2.22-2.12(m,1H),2.07-1.96(m,1H),1.84-1.76(m,1H),1.20(d,J＝5.9Hz,3H)。
实例2
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000361
与实例1的制备类似，标题化合物通过使用7-氯-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(CAS：1060816-50-3，Bide Pharmatech，目录：BD748515)代替步骤1中的2-氯-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯进行制备。获得实例2。MS：计算值440[(M+H)+]，测量值440[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 9.04-8.95(m,1H),8.67-8.58(m,1H),8.17(d,J＝8.1Hz,1H),7.76(s,1H),7.70-7.63(m,1H),7.29(d,J＝8.1Hz,1H),6.30(s,1H),4.36(br d,J＝7.1Hz,1H),3.89-3.80(m,1H),3.87(s,2H),3.61(br d,J＝10.8Hz,1H),3.44(brd,J＝11.0Hz,1H),3.05(t,J＝6.0Hz,2H),2.98-2.61(m,6H),2.23-2.14(m,1H),2.09-1.97(m,1H),1.84-1.74(m,1H),1.20(d,J＝5.9Hz,3H)。
实例3
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000371
与实例1的制备类似，标题化合物通过使用2-氯-6,8-二氢-5H-1,7-萘啶-7-甲酸叔丁酯(CAS：1211581-54-2，PharmaBlock，目录：PBLJ8189)代替步骤1中的2-氯-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯进行制备。获得实例3。MS：计算值440[(M+H)+]，测量值440[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 9.10-8.96(m,1H),8.72-8.62(m,1H),8.20(d,J＝8.1Hz,1H),7.74-7.62(m,1H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),7.35(d,J＝8.6Hz,1H),6.57(d,J＝8.6Hz,1H),4.71-4.60(m,1H),4.27-4.15(m,1H),4.23(s,2H),3.91-3.83(m,1H),3.78(brd,J＝12.6Hz,1H),3.65(br d,J＝12.5Hz,2H),3.50(t,J＝6.2Hz,2H),3.22-3.04(m,2H),2.97(br t,J＝6.1Hz,3H),2.33-2.13(m,2H),1.40(d,J＝6.4Hz,3H)。
实例4
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[(6-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000372
与实例1的制备类似，标题化合物通过使用叔丁基2-氯-6-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶代替步骤1中的2-氯-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯进行制备。获得实例4。MS：计算值454[(M+H)+]，测量值454[(M+H)+]。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.89-8.79(m,1H),8.56-8.41(m,1H),8.03(d,J＝8.1Hz,1H),7.56-7.46(m,1H),7.16(d,J＝8.1Hz,1H),7.07(d,J＝8.4Hz,1H),6.28(d,J＝8.4Hz,1H),4.30(br d,J＝7.2Hz,1H),3.79-3.70(m,1H),3.49(br d,J＝11.1Hz,1H),3.39(s,2H),3.33(br d,J＝11.2Hz,1H),2.84-2.61(m,8H),2.36(s,3H),2.09-2.03(m,1H),1.96-1.84(m,1H),1.75-1.64(m,1H),1.08(d,J＝6.0Hz,3H)。
实例5
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[甲基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000381
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0003642846310000382
步骤1：制备2-[甲基-[4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物5.1)
向2-[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物1.2，36.0mg，70μmol)在DCE(8mL)中的溶液加入甲醛(22.2mg，74μmol)、NaBH3CN(22.2mg，350μmol)和乙酸(50μL，70μmol)。将所得混合物在50℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)稀释，用EA(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，12g，0％至100％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物5.1(28mg，72.2％产率)。MS：计算值554[(M+H)+]，测量值554[(M+H)+]。
步骤2：：制备5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[甲基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(实例5)
向2-[甲基-[4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物5.1，28mg，50.6μmol)在DCM(4mL)中的溶液加入TFA(2mL)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到实例5(8.1mg，36.1％产率)。立体化学由NOESY确认。MS：计算值454[(M+H)+]，测量值454[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 9.09(d,J＝1.6Hz,1H),8.92-8.90(m,1H),8.29(d,J＝8Hz,1H),7.92-7.90(m,1H),7.84-7.81(m,1H),7.53-7.51(m,1H),7.44-7.42(m,1H),5.40-5.38(m,1H),4.40-4.34(m,4H),4.13-3.98(m,1H),3.96-3.77(m,2H),3.76-3.64(m,3H),3.60-3.47(m,2H),3.38-3.35(m,5H),2.70-2.46(m,2H),1.54(d,J＝3.6Hz,3H)。
实例6
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000391
与实例1的制备类似，标题化合物通过使用2-氯-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(CAS：1092352-55-0，PharmaBlock，目录：PBN2011121)代替步骤1中的2-氯-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯进行制备。获得实例6。MS：计算值441[(M+H)+]，测量值441[(M+H)+]。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 9.09(d,J＝2.8Hz,1H),8.92(d,J＝8Hz,1H),8.46(s,1H),8.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.87-7.84(m,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),4.87(s,1H),4.38-4.34(m,4H),4.18-3.98(m,1H),3.96(dd,J＝13.2Hz,2H),3.68-3.65(m,2H),3.52-3.47(m,2H),3.31-3.25(m,3H),2.50-2.46(m,2H),1.54(d,J＝3.6Hz,3H)。
实例7A和7B
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈和5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000401
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0003642846310000411
步骤1：制备6-溴-N-甲氧基-N,2-二甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物7.2)
向6-溴-2-甲基-吡啶-3-甲酸(化合物7.1，10.0g，46.3mmol)在DMF(300mL)中的溶液加入DIPEA(23.9g，185.2mmol)、HATU(21.1g，55.5mmol)和O,N-二甲基羟胺HCl(9.0g，92.6mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。用水(1L)猝灭反应，并用EtOAc(400mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱柱纯化，以得到化合物7.2(11.5g，91.1％产率)。MS：计算值259[(M+H)+]，测量值259[(M+H)+]。
步骤2：制备1-(6-溴-2-甲基-3-吡啶基)乙酮(化合物7.3)
在0℃下向6-溴-N-甲氧基-N,2-二甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物7.2，11.5g，42.2mmol)在THF(200mL)中的溶液滴加甲基溴化镁(28.1mL，84.3mmol)。将所得混合物在15℃下搅拌1h。将反应用饱和NH4Cl(水溶液，100mL)猝灭，用EtOAc(300mL)萃取三次。将合并的有机层用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱柱纯化，以得到化合物7.3(9.0g，98.4％产率)。MS：计算值214[(M+H)+]，测量值214[(M+H)+]。
步骤3：制备1-(6-氯-2-(氯甲基)吡啶-3-基)乙酮(化合物7.4)
将1-(6-溴-2-甲基-3-吡啶基)乙酮(化合物7.3，4.0g，18.4mmol)、NCS(4.9g，36.9mmol)和AIBN(454.3mg，2.8mmol)在乙腈(120mL)中的溶液在80℃下搅拌16小时。将反应用水(400mL)稀释，用EtOAc(200mL)萃取两次。将合并的有机层用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱柱纯化，以得到化合物7.4(1.8g，38.2％产率)。MS：计算值204[(M+H)+]，测量值204[(M+H)+]。
步骤4：制备1-(6-氯-2-(氯甲基)吡啶-3-基)乙醇(化合物7.5)
在0℃下向1-(6-氯-2-(氯甲基)吡啶-3-基)乙酮(化合物7.4，4.0g，15.6mmol)在甲醇(100mL)中的溶液加入硼氢化钠(1.2g，31.3mmol)并在相同温度下搅拌1h。将反应混合物用HCl(10％水溶液)猝灭，直至pH为约4。然后将所得混合物用K2CO3水溶液碱化至pH为约8，用EA(100mL)萃取三次。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物7.5(4.3g，82.9％产率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。
步骤5：制备6-氯-3-(1-氯乙基)-2-(氯甲基)吡啶(化合物7.6)
在0℃下向1-(6-氯-2-(氯甲基)吡啶-3-基)乙醇(化合物7.5，4.3g，13.1mmol)在DCM(50mL)中的溶液加入SOCl2(7.8g，65.4mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。用饱和NaHCO3(100mL)猝灭反应，用DCM(200mL)萃取两次。将合并的有机层用水盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱柱纯化，以得到化合物7.6(4.0g，81.3％产率)。MS：计算值224[(M+H)+]，测量值224[(M+H)+]。
步骤6：制备2-氯-6-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-5,7-二氢吡咯并[3,4-b]吡啶(化合物7.7)
向6-氯-3-(1-氯乙基)-2-(氯甲基)吡啶(化合物7.6，3.8g，16.9mmol)在乙醇(50.78mL)中的溶液加入K2CO3(4.7g，33.8mmol)和2,4-二甲氧基苄胺(2.8mL，18.6mmol)并在65℃下搅拌18小时。将反应混合物冷却至室温，用EA(50mL)通过硅藻土过滤，并浓缩滤液。将残余物通过硅胶色谱柱纯化，以得到化合物7.7(3.9g，72.3％产率)。MS：计算值319[(M+H)+]，测量值319[(M+H)+]。
步骤7：制备2-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶(化合物7.8)
将2-氯-6-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-5,7-二氢吡咯并[3,4-b]吡啶(化合物7.7，1.0g，3.1mmol)在TFA(20.0mL)中的溶液在80℃下加热5小时。真空去除溶剂，以得到粗产物化合物7.8(0.9g，粗制)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值169[(M+H)+]，测量值169[(M+H)+]。
步骤8：制备2-氯-5-甲基-5,7-二氢吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物7.9)
向2-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶；2,2,2-三氟乙酸(化合物7.8，0.9g，3.2mmol)在甲醇(20mL)中的溶液加入碳酸钾(2.6g，19.1mmol)和焦碳酸二叔丁酯(1.4g，6.4mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用DCM(20mL)通过硅藻土过滤，并浓缩滤液。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物7.9(554mg，分两步，64.7％产率)。MS：计算值269[(M+H)+]，测量值269[(M+H)+]。
步骤9：制备2-[[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-5-甲基-5,7-二氢吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物7.10)
2-氯-5-甲基-5,7-二氢吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物7.9，141mg，0.5mmol)、5-[(4R,7R,8aS)-7-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(中间体C1，154mg，0.5mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(87mg，0.1mmol)、BINAP(119mg，0.2mmol)和tBuONa(92mg，960μmol)在甲苯(2mL)中的混合物。将所得混合物在100℃下搅拌16h。冷却至室温后，将反应混合物用水(30mL)稀释，并用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至100％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物7.10(80mg，27.5％产率)。MS：计算值540[(M+H)+]，测量值540[(M+H)+]。
步骤10：制备5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[(5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物7.11)
向2-[[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-5-甲基-5,7-二氢吡咯并[3,4-b]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物7.10，80mg，150μmol)在DCM(5mL)中的溶液加入HCl/二噁烷(4N，1.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌60分钟，然后浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到化合物7.11(50mg，75.9％)，其为黄色固体。MS：计算值440[(M+H)+]，测量值440[(M+H)+]。
步骤11：制备5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈和5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(实例7A和7B)
在DAICEL CHIRALPAK AD(10μm，250×30mm)色谱柱上用30％甲醇(0.1％NH3H2O)/CO2由SFC分解化合物7.11(50mg)，以得到两个单一异构体：实例7A(较快洗脱，10.8mg)。MS：计算值440[(M+H)+]，测量值440[(M+H)+]；和实例7B(较慢洗脱，11.8mg)。MS：计算值440[(M+H)+]，测量值440[(M+H)+]。实例7A 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.03(dd,J＝4.0,1.2Hz,1H),8.48-8.53(m,1H),8.21(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(dd,J＝8.4,4.0Hz,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.0Hz,1H),6.64(d,J＝5.6Hz,1H),6.33(d,J＝8.4Hz,1H),4.26-4.37(m,2H),3.94(s,2H),3.68(t,J＝8.0Hz,1H),3.52(d,J＝8.4Hz,2H),2.73(d,J＝6.4Hz,2H),2.65(d,J＝6.4Hz,2H),2.03(t,J＝7.8Hz,1H),1.75-1.84(m,1H),1.64-1.72(m,1H),1.27(d,J＝6.4Hz,3H),1.22(s,1H),1.06(d,J＝5.6Hz,3H)。实例7B 1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.03(dd,J＝4.0,1.2Hz,1H),8.50(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),8.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.66(dd,J＝8.4,4.0Hz,1H),7.32(d,J＝8.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.4Hz,1H),6.84(d,J＝3.6Hz,1H),6.40(d,J＝8.4Hz,1H),4.53(d,J＝5.6Hz,1H),4.29(s,1H),4.08(s,2H),3.67(s,1H),3.37(d,J＝7.6Hz,2H),2.73(d,J＝7.6Hz,2H),2.65(d,J＝6.4Hz,2H),2.01-2.07(m,1H),1.75-1.85(m,1H),1.69(d,J＝10.0Hz,1H),1.38(d,J＝6.4Hz,3H),1.22(s,1H),1.06(d,J＝5.6Hz,3H)。
实例8A和8B
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(7S)-7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈和5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(7R)-7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000451
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0003642846310000461
步骤1：制备3-溴-6-甲氧基-2-[(Z)-2-硝基丙-1-烯基]吡啶(化合物8.2)
在100℃下将3-溴-6-甲氧基-吡啶-2-甲醛(化合物8.1，5.0g，23.1mmol)和NH4OAc(890mg，11.6mmol)在硝基乙烷(30.0mL)中的溶液搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物8.2(2.6g，41.2％产率)。MS：计算值273和275[(M+H)+]；测量值273和275[(M+H)+]。
步骤2：制备3-溴-6-甲氧基-2-(2-硝基丙基)吡啶(化合物8.3)
在0℃下向3-溴-6-甲氧基-2-[(Z)-2-硝基丙-1-烯基]吡啶(化合物8.2，2.5g，7.8mmol)在THF(75mL)中的溶液加入硼氢化钠(588mg，15.6mmol)。将所得混合物在相同温度下搅拌1h，然后用HCl(10％水溶液)猝灭，直至pH为约4。然后将所得混合物用K2CO3水溶液碱化至pH为约8，用EA(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物8.3(1.2g，55.9％产率)。MS：计算值275和277[(M+H)+]；测量值275和277[(M+H)+]。
步骤3：制备N-[2-(3-溴-6-甲氧基-2-吡啶基)-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物8.4)
向3-溴-6-甲氧基-2-(2-硝基丙基)吡啶(化合物8.3，1.2g，4.3mmol)、NH4Cl(2.47g，46.2mmol)在甲醇(40mL)和水(3mL)中的溶液加锌(1.51g，23.1mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，然后过滤。向过滤物加入DIPEA(1340μL，7.7mmol)、焦碳酸二叔丁酯(1261mg，5.8mmol)，并且将混合物在室温下再搅拌4小时。然后将反应混合物用水(100mL)稀释，用EA(60mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物8.4(1.4g，94％产率)。MS：计算值345和347[(M+H)+]；测量值345和347[(M+H)+]。
步骤4：：制备2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)丙基]-6-甲氧基-吡啶-3-甲酸甲酯(化合物8.5)
在100℃下将N-[2-(3-溴-6-甲氧基-2-吡啶基)-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物8.4，1.4g，3.6mmol)、1,3-双(二苯基膦基)丙烷(595mg，1.4mmol)、三乙胺(2.5mL，18.1mmol)、乙酸钯(II)(162mg，0.7mmol)在甲醇(34mL)中的混合物在CO气氛下搅拌20小时。将反应用水(100mL)稀释，用EA(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物8.5(440mg，37.7％产率)。MS：计算值325[(M+H)+]；测量值325[(M+H)+]。
步骤5：制备N-[2-[3-(羟基甲基)-6-甲氧基-2-吡啶基]-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物8.6)
在0℃下向2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)丙基]-6-甲氧基-吡啶-3-甲酸酯(化合物8.5，420.0mg，1.1mmol)在THF(10mL)中的溶液加入硼氢化锂(94mg，4.3mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。通过饱和NH4Cl(水溶液，10mL)猝灭反应，用水(40mL)稀释，并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶层析法纯化，以得到化合物8.6(270mg，0.910mmol)。MS：计算值297[(M+H)+]；测量值297[(M+H)+]。
步骤6：制备2-甲氧基-7-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物8.7)
在0℃下向N-[2-[3-(羟基甲基)-6-甲氧基-2-吡啶基]-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物8.6，270.0mg，850μmol)、DIPEA(440μL，2.5mmol)在DCM(8mL)中的溶液加入甲磺酸酐(295mg，1.7mmol)并在室温下搅拌过夜。通过饱和NaHCO3(水溶液，10mL)猝灭反应，用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机层用水(30mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物用DMF(10mL)溶解，然后加入tBuONa(245mg，2.6mmol)和KI(70.5mg，425μmol)。将反应混合物在100℃下搅拌20分钟。冷却至室温后，将反应混合物用水(20mL)稀释，用DCM(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱柱纯化，以得到化合物8.7(190mg，80.0％产率)。MS：计算值279[(M+H)+]；测量值279[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.60(d,J＝8.4Hz,1H),4.78-4.74(m,1H),4.18(d,J＝16.8Hz,1H),3.93(s,3H),3.16-3.11(m,1H),2.64(d,J＝16.8Hz,1H),1.51(s,9H),1.13(d,J＝6.8Hz,3H)。
步骤7：制备2-羟基-7-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物8.8)
在100℃下将2-甲氧基-7-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物8.7，190.0mg，680μmol)和溴化氢(5.0mL，33％w/w(45％w/v)在乙酸中的溶液)的混合物搅拌18小时。将混合物真空浓缩，重新溶解在甲醇(10mL)中，用K2CO3碱化至pH为约8。然后将焦碳酸二叔丁酯(223mg，1.0mmol)加入上述混合物中。将所得混合物在室温下再搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(DCM:MeOH＝10:1)，以得到化合物8.8(160mg，89.7％产率)。MS：计算值265[(M+H)+]；测量值265[(M+H)+]。
步骤8：制备7-甲基-2-(三氟甲磺酰基氧基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物8.9)
在0℃下向2-羟基-7-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物8.8，140.0mg，530μmol)和2,6-二甲基吡啶(340mg，3.2mmol)在DCM(10mL)中的溶液滴加三氟甲磺酸酐(448mg，1.6mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌30分钟。通过饱和NaHCO3(水溶液，20mL)猝灭反应，用DCM(30mL)萃取三次。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物8.9(200mg，粗制)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值397[(M+H)+]，测量值397[(M+H)+]。
步骤9：制备2-[[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-7-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物8.10)
向7-甲基-2-(三氟甲磺酰基氧基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物8.9，120.0mg，0.3mmol)在甲苯(18mL)中的溶液加入5-[(4R,7R,8aS)-7-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(中间体C1，180.0mg，580μmol)、BINAP(72.1mg，116μmol)、碳酸铯(552mg，1.7mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(73.0mg，80μmol)。将反应混合物在100℃下搅拌18小时。冷却至室温后，将反应混合物用水(20mL)稀释，用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(EA)，以得到化合物8.10(50mg，75.0％产率)。MS：计算值554[(M+H)+]；测量值554[(M+H)+]。
步骤10：制备5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[(7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物8.11)
向2-[[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a
-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-7-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物8.10，50.0mg，90μmol)在DCM(5.0mL)中的溶液加入HCl/二噁烷(4N，1.0mL)。将反应混合物在室温下搅拌60分钟，然后浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到化合物8.11(30mg，73.6％产率)。MS：计算值454[(M+H)+]；测量值454[(M+H)+]。
步骤11：制备5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(7S)-7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈和5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(7R)-7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(实例8A和8B)
在DAICEL CHIRALPAK AD(10μm，250×30mm)色谱柱上用30％甲醇(0.1％NH3H2O)/CO2由SFC分解化合物8.11(30mg)，以得到两个单一异构体：实例8A(较快洗脱，15.2mg)。MS：计算值454(M+H)+，测量值454(M+H)+；和实例8B(较慢洗脱，11.2mg)。MS：计算值454(M+H)+，测量值454(M+H)+。实例8A 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝9.06(d,J＝5Hz,1H),8.46(d,J＝6.8Hz,1H),8.02(d,J＝8Hz,1H),7.51-7.49(m,1H),7.15(d,J＝8.4Hz,1H),7.08(d,J＝8Hz,1H),6.23(d,J＝8.4Hz,1H),4.57(d,J＝6.8Hz,1H),4.35-4.25(m,1H),3.96-3.87(m,3H),3.52-3.50(m,1H),3.38-3.35(m,1H),3.15-3.08(m,1H),2.80-2.71(m,5H),2.55-2.43(m,1H),2.09-2.02(m,1H),2.01-1.90(m,2H),1.85-1.75(m,1H),1.26(d,J＝6.4Hz,3H),1.17(d,J＝5.6Hz,3H)。实例8B 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝9.06(d,J＝5Hz,1H),8.46(d,J＝6.8Hz,1H),8.02(d,J＝8Hz,1H),7.51-7.48(m,1H),7.15(d,J＝8.4Hz,1H),7.08(d,J＝8Hz,1H),6.23(d,J＝8.4Hz,1H),4.57(d,J＝7.2Hz,1H),4.35-4.25(m,1H),3.96-3.87(m,3H),3.51(d,J＝10.4Hz,1H),3.38-3.35(m,1H),3.15-3.08(m,1H),2.80-2.71(m,5H),2.55-2.43(m,1H),2.09-1.99(m,2H),1.26(d,J＝6.4Hz,3H),1.17(d,J＝5.6Hz,3H)。
实例9A和9B
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5S)-5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈和5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5R)-5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000511
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0003642846310000512
步骤1：制备1-(5-溴-2-甲氧基-4-吡啶基)乙醇(化合物9.2)
在-78℃下向5-溴-2-甲氧基-吡啶-4-甲醛(化合物9.1，25.0g，115.7mmol)在THF(250mL)中的溶液滴加甲基溴化镁(3M在2-甲基四氢呋喃中，50.1mL，150.4mmol)，历时30分钟。在-78℃下将所得混合物搅拌30分钟。然后将混合物升温至室温，用饱和NH4Cl(水溶液，100mL)猝灭，用EtOAc(150mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物9.2(27g，粗制)。MS：计算值232和234[(M+H)+]；测量值232和234[(M+H)+]。
步骤2：制备5-溴-2-甲氧基-4-(1-四氢吡喃-2-基氧基乙基)吡啶(化合物9.3)
向1-(5-溴-2-甲氧基-4-吡啶基)乙醇(化合物9.2，粗制)和二氢吡喃(12.3mL，134.3mmol)在DCM(300mL)中的溶液加入p-TsOH(1.8g，10.4mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。用饱和NaHCO3(水溶液，200mL)猝灭反应，用DCM(150mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过色谱柱纯化，以得到化合物9.3(30g，分两步，83.57％产率)。MS：计算值316和318[(M+H)+]；测量值316和318[(M+H)+]。
步骤3：制备6-甲氧基-4-(1-四氢吡喃-2-基氧基乙基)吡啶-3-甲醛(化合物9.4)
向5-溴-2-甲氧基-4-(1-四氢吡喃-2-基氧基乙基)吡啶(化合物9.3，30.0g，86.3mmol)在THF(300mL)中的溶液滴加正丁基锂溶液(2.5M在己烷中，51.8mL，129.5mmol)，历时30分钟，并在-60℃下搅拌0.5小时。然后向上述混合物加入二甲基甲酰胺(20.1mL，259.0mmol)，并在-60℃下再搅拌1小时。将反应混合物升温至室温，并且用饱和NH4Cl(水溶液，50mL)猝灭，用水(500mL)稀释，用EtOAc(200mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱柱纯化，以得到化合物9.4(16g，69.3％产率)。MS：计算值266[(M+H)+]；测量值266[(M+H)+]。
步骤4：制备2-甲氧基-5-[(E)-2-硝基乙烯基]-4-(1-四氢吡喃-2-基氧基乙基)吡啶(化合物9.5)
在70℃下将6-甲氧基-4-(1-四氢吡喃-2-基氧基乙基)吡啶-3-甲醛(化合物9.4，15.5mg，58.4mmol)、NH4OAc(2249.3mg，29.2mmol)在硝基甲烷(300.0mL)中的混合物搅拌12小时。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱柱纯化，以得到化合物9.5(10.0g，48.1％产率)
MS：计算值309[(M+H)+]；测量值309[(M+H)+]。
步骤5：制备N-[2-[6-甲氧基-4-(1-四氢吡喃-2-基氧基乙基)-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物9.6)
在0℃下向2-甲氧基-5-[(E)-2-硝基乙烯基]-4-(1-四氢吡喃-2-基氧基乙基)吡啶(化合物9.5，9.0g，24.99mmol)在THF(225mL)中的溶液加入氢化铝锂(2845.0mg，75.0mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。然后在0℃下将1N K2CO3(水溶液，20mL)加入上述混合物，搅拌10分钟。将混合物通过硅藻土DCM/MeOH(20/1，300mL)过滤，并且浓缩滤液。将残余物溶解在DCM(200mL)中，然后加入DIPEA(13.1mL，75.0mmol)和二碳酸二叔丁酯(10.9g，50.0mmol)。将反应混合物在室温下再搅拌2小时，然后用水(300mL)稀释，用DCM(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过色谱柱纯化，以得到化合物9.6(4.0g，42.1％产率)。MS：计算值381[(M+H)+]；测量值381[(M+H)+]。
步骤6：制备N-[2-[4-(1-羟基乙基)-6-甲氧基-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物9.7)
向N-[2-[6-甲氧基-4-(1-四氢吡喃-2-基氧基乙基)-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物9.6，4.5g，10.1mmol)在甲醇(80mL)中的溶液加入p-TsOH(2.874g，15.1mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用饱和NaHCO3(水溶液，80mL)猝灭，用EtOAc(100mL)萃取两次。将有机层用盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物9.7(3500mg，粗制)。MS：计算值297[(M+H)+]；测量值297[(M+H)+]。
步骤7：制备1-[5-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]-2-甲氧基-4-吡啶基]甲磺酸乙酯(化合物9.8)
在0℃下向N-[2-[4-(1-羟基乙基)-6-甲氧基-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物9.7，3.5g，10.4mmol)和DIPEA(5.4mL，31.2mmol)在DCM(70mL)中的溶液加入甲磺酸酐(3.6g，20.8mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应用饱和NaHCO3(水溶液)猝灭，用DCM(80mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到化合物9.8(4.3g，粗制)。MS：计算值375[(M+H)+]；测量值375[(M+H)+]。
步骤8：制备7-甲氧基-1-甲基-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(化合物9.9)
在100℃下将甲磺酸1-[5-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]-2-甲氧基-4-吡啶基]乙酯(化合物9.8，4.3g，粗制)、tBuONa(2781.1mg，28.9mmol)、KI(0.26mL，4.82mmol)在DMF(60mL)中的溶液搅拌20分钟。冷却至室温后，将反应混合物用水(200mL)稀释，用EtOAc(80mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过色谱柱纯化，以得到化合物9.9(2.4g，分三步，85.4％产率)。MS：计算值279[(M+H)+]；测量值279[(M+H)+]。
步骤9：制备7-羟基-1-甲基-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(化合物9.10)
在100℃下将7-甲氧基-1-甲基-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(化合物9.9，2.4g，8.6mmol)在溴化氢(20.0mL，33％w/w(45％w/v)在乙酸中的溶液)中的混合物搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，重新溶解在甲醇(30mL)中，用K2CO3碱化至pH为约8。将二碳酸二叔丁酯(2.8g，12.9mmol)加入到上述混合物中，并在室温下再搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过色谱柱纯化，以得到化合物9.10(1.7g，74.6％产率)。MS：计算值265[(M+H)+]；测量值265[(M+H)+]。
步骤10：制备1-甲基-7-(三氟甲磺酰基氧基)-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(化合物9.11)
在0℃下向7-羟基-1-甲基-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(化合物9.10，250mg，950μ)在DCM(3mL)中的溶液加入三乙胺(192mg，1.9mmol)和N,N-双(三氟甲磺酰基)苯胺(676mg，1.9mmol)。将所得混合物在该温度下搅拌3小时。通过饱和NaHCO3(水溶液，20mL)猝灭反应，用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(PE:EA＝5:1)，以得到化合物9.11(200mg，53.3％产率)。MS：计算值397[(M+H)+]，测量值397[(M+H)+]。
步骤11：制备7-[[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-1-甲基-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(化合物9.12)
向5-[(4R,7R,8aS)-7-氨基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(中间体C1，200mg，0.65mmol)在二噁烷(15mL)中的溶液加入1-甲基-7-(三氟甲磺酰基氧基)-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(化合物9.11，258mg，0.65mmol)、BrettPhos Pd G3(177mg，0.2mmol)和碳酸铯(424mg，1.3mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌16小时。冷却至室温后，将反应混合物用水(20mL)稀释，用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(PE:EA＝1:3)，以得到化合物9.12(90mg，20.2％产率)。MS：计算值554[(M+H)+]；测量值554[(M+H)+]。
步骤12：制备5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[(5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物9.13)
向7-[[(4R,7R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氨基]-1-甲基-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(化合物9.12，90mg，160μmol)在DCM(5.0mL)中的溶液加入HCl/二噁烷(4N，1.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌60分钟，然后浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到化合物9.13(52mg，68.2％产率)。MS：计算值454[(M+H)+]；测量值454[(M+H)+]。
步骤13：制备5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5S)-5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈和5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5R)-5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(实例9A和9B)
在DAICEL CHIRALPAK AD(10μm，250×30mm)色谱柱上用30％IPA(0.1％NH3H2O)/CO2由SFC分解化合物9.13(52mg)，以得到两个单一异构体：实例9A(较快洗脱，6mg)。MS：计算值454(M+H)+，测量值454(M+H)+；和实例9B(较慢洗脱，8.7mg)。MS：计算值454(M+H)+，测量值454(M+H)+。实例9A 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.91-10.17(m,1H),9.47-9.74(m,1H),9.08(d,J＝4.0Hz,1H),8.58(d,J＝8.8Hz,1H),8.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.71(dd,J＝8.8,4.0Hz,1H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H),6.83-6.92(m,1H),4.54-4.67(m,2H),4.19-4.26(m,1H),3.97-4.07(m,2H),3.85-3.92(m,2H),3.49-3.53(m,1H),3.40-3.48(m,2H),3.32(s,1H),3.24-3.30(m,2H),2.90-3.03(m,2H),2.13-2.23(m,1H),1.61(d,J＝6.8Hz,3H),1.38(d,J＝6.4Hz,3H)。实例9B 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm9.96-10.08(m,1H),9.53-9.71(m,1H),9.05-9.11(m,1H),8.58(d,J＝8.0Hz,1H),8.26-8.32(m,1H),7.98(s,1H),7.71(dd,J＝8.4,4.0Hz,1H),7.35-7.41(m,1H),6.82-6.96(m,1H),4.56-4.70(m,2H),4.22-4.26(m,1H),3.96-4.07(m,2H),3.85-3.88(m,2H),3.49-3.53(m,1H),3.39-3.47(m,2H),3.31-3.36(m,1H),3.24-3.30(m,2H),2.89-3.02(m,2H),2.11-2.21(m,1H),1.60(d,J＝6.8Hz,3H),1.39(d,J＝6.4Hz,3H)。
实例10
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000561
根据以下方案合成标题化合物：
Figure BDA0003642846310000571
步骤1：5-[(4R,8aS)-7-(6-溴-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物10.2)
在密封管中装入(4R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]甲磺酸盐(中间体D，80mg，207μmol)、6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物10.1，CAS：226942-29-6，BePharm，目录：BD26419，175.6mg，828μmol)、KI(34.4mg，207μmol)和K2CO3(85.7mg，621μmol)和MeCN(5mL)。将所得混合物在110℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用EA(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至100％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物10.2(52mg，50％产率)。MS：计算值502[(M+H)+]，测量值502[(M+H)+]。将残余物通过反相色谱法(ODS-C18，0％至100％的ACN在水中的溶液(含0.5％的NH3H2O))纯化，以得到中间体B(较快洗脱，13.4g，52.1％产率)和化合物B6(较慢洗脱，4.2g，16.4％产率)。
步骤2：制备4-[2-[(4R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]-3,4-二氢-1H-异喹啉-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物10.3)
向5-[(4R,8aS)-7-(6-溴-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(化合物10.2，52mg，103.5μmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯在甲苯(4mL)中的溶液加入Pd2(dba)3(4.7mg，5.2μmol)、BINAP(6.5mg，10.4μmol)和NaOtBu(24.9mg，258.8μmol)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温后，用水(10mL)稀释，并用EA(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，24g，0％至100％的EtOAc在PE中的溶液)，以得到化合物10.3(27mg，43％产率)。
步骤3：制备5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(实例10)
向4-[2-[(4R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]-3,4-二氢-1H-异喹啉-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物10.3，27mg，44.4μmol)在DCM(3mL)中的溶液加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到实例10(13.7mg，61％)和化合物10.4(2.3mg，10％)。立体化学由NOESY确认。
实例10MS：计算值508[(M+H)+]，测量值508[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ9.0-9.1(m,1H),8.64(dd,1H,J＝1.5,8.7Hz),8.1-8.3(m,1H),7.67(ddd,1H,J＝1.2,4.3,8.5Hz),7.34(dd,1H,J＝4.1,7.9Hz),7.20(d,1H,J＝8.7Hz),7.02(dd,1H,J＝2.5,8.6Hz),6.94(d,1H,J＝2.2Hz),4.4-4.6(m,2H),3.9-4.3(m,2H),3.7-3.8(m,2H),3.5-3.6(m,2H),3.4-3.5(m,9H),3.2-3.3(m,2H),2.8-3.1(m,3H),2.4-2.6(m,1H),2.1-2.3(m,1H),1.3-1.4(m,3H)。
化合物10.3MS：计算值508[(M+H)+]，测量值508[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.9-9.1(m,1H),8.64(dd,1H,J＝1.5,8.7Hz),8.1-8.3(m,1H),7.67(ddd,1H,J＝1.2,4.3,8.5Hz),7.34(dd,1H,J＝4.1,7.9Hz),7.20(d,1H,J＝8.7Hz),7.02(dd,1H,J＝2.5,8.6Hz),6.94(d,1H,J＝2.2Hz),4.3-4.6(m,2H),4.0-4.2(m,2H),3.5-3.8(m,5H),3.4-3.5(m,9H),2.8-3.2(m,4H),2.4-2.6(m,1H),2.2-2.3(m,1H),1.3-1.4(m,3H)。
实例11
5-[(4R,7S,8aS)-7-[2-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000591
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用2-氯-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶(CAS：210539-05-2，BePharm，目录：BD55087)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉和N-[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：1932066-52-8，PharmaBlock，目录：PBZ4728)代替步骤2中的哌嗪-1-甲酸叔丁酯进行制备。获得实例11。MS：计算值539[(M+H)+]，测量值539[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.94(dd,1H,J＝1.4,4.2Hz),8.61(brd,1H,J＝8.9Hz),8.13(d,1H,J＝7.9Hz),7.7-7.8(m,1H),7.6-7.7(m,1H),7.35(d,1H,J＝8.1Hz),6.96(br t,1H,J＝7.8Hz),4.1-4.4(m,5H),3.9-4.1(m,4H),3.5-3.9(m,10H),3.41(s,3H),3.2-3.3(m,2H),2.7-2.9(m,1H),2.2-2.4(m,1H),1.44(br d,3H,J＝6.4Hz)。
实例12
5-[(4R,7S,8aS)-7-[7-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000592
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用7-氯-1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶(CAS：1060816-44-5，BePharm，目录：BD222578)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉和N-[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：1932066-52-8，PharmaBlock，目录：PBZ4728)代替步骤2中的哌嗪-1-甲酸叔丁酯进行制备。获得实例12。MS：计算值539[(M+H)+]，测量值539[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ9.07(d,1H,J＝3.3Hz),8.78(br d,1H,J＝6.1Hz),8.26(br d,1H,J＝7.8Hz),8.0-8.2(m,1H),7.78(br s,1H),7.49(br d,1H,J＝7.8Hz),7.21(br s,1H),4.5-4.8(m,4H),4.3-4.4(m,1H),3.7-4.2(m,16H),3.62(s,1H),3.53(m,4H),2.9-3.1(m,1H),2.5-2.6(m,1H),1.59(br s,3H)。
实例13
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[4-(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基)哌嗪-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000601
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用哌嗪代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉和7-氯-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(CAS：1060816-50-3，BePharm，目录：BD748515)代替步骤2中的哌嗪-1-甲酸叔丁酯进行制备。获得实例14。MS：计算值509[(M+H)+]，测量值509[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ9.14(dd,1H,J＝1.3,4.7Hz),8.99(br d,1H,J＝8.7Hz),8.36(d,1H,J＝7.9Hz),8.14(s,1H),7.8-8.0(m,1H),7.4-7.6(m,2H),4.5-4.7(m,4H),3.6-4.3(m,16H),3.40(dd,1H,J＝11.0,13.7Hz),3.17(t,2H,J＝6.2Hz),2.98(ddd,1H,J＝5.8,7.9,13.8Hz),2.5-2.6(m,1H),1.59(d,3H,J＝6.5Hz)。
实例14
5-[(4R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氧基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000611
根据以下方案合成标题化合物：
Figure BDA0003642846310000612
步骤1：制备2-[[(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物14.2)
将(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-醇(化合物C1.1，500.0mg，2.03mmol)和2-氯-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物C14.1，CAS：1151665-15-4，PharmaBlock，目录：PB06675，550.0mg，2.05mmol)和叔丁醇钾(600.0mg，5.35mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在微波放射下加热至115℃。将混合物真空浓缩至干，并加入30mL水。然后将混合物用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(DCM/MeOH＝10:1)，以得到化合物14.2(140mg，14.4％产率)，其为粗品。MS：计算值479[(M+H)+]；测量值479[(M+H)+]。
步骤2：制备2-[[(4R,8aS)-4-甲基-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物14.3)
在60℃下向2-[[(4R,8aS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物14.2，110.0mg，0.230mmol)、Pd/C(湿)(200.0mg，0.230mmol)在2,2,2-三氟乙醇(5.0mL)中的混合物在H2气球下氢化2h。将Pd/C经由硅藻土垫滤出并用MeOH(10mL)洗涤。将合并的有机相真空浓缩，以得到化合物14.3(50mg，56％产率)，其为粗品。MS：计算值389[(M+H)+]；测量值389[(M+H)+]。
步骤3：制备2-[[(4R,8aS)-4-甲基-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物14.4)
向2-[[(4R,8aS)-4-甲基-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物14.3，110.0mg，0.280mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.15mL，0.850mmol)在DMA(5mL)中的溶液加入5-氟喹啉-8-甲腈(中间体A1，110.0mg，0.640mmol)。然后将混合物在120℃下搅拌16小时。加入25mL水以猝灭反应，然后将30mL EA加入混合物中。然后将混合物用饱和盐水(10mL)洗涤三次。然后将有机相经Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(EA)，以得到化合物14.4(75mg，48.99％产率)。MS：计算值541[(M+H)+]；测量值541[(M+H)+]。
步骤4：制备5-[(4R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氧基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(实例14)
向2-[[(4R,8aS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物14.4，75.0mg，0.140mmol)在DCM(5mL)中的溶液加入HCl/二噁烷(4N，20.0mL，80mmol)。然后将混合物在室温下搅拌2h。然后将混合物浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到实例14(43mg，62.6％产率)。MS：计算值441[(M+H)+]；测量值441[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.20-9.16(m,1H),9.13(d,J＝8.4Hz,1H),8.40(d,J＝8.0Hz,1H),8.00(dd,J＝4.8,8.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.8Hz,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),5.80(q,J＝6.8Hz,1H),4.36(s,2H),4.13-3.89(m,4H),3.87-3.77(m,2H),3.64-3.57(m,2H),3.51(dd,J＝11.2,12.8Hz,1H),3.36(br dd,J＝10.8,13.6Hz,1H),3.21-3.14(m,2H),3.14-3.03(m,1H),2.12(dt,J＝5.6,13.2Hz,1H),1.49(d,J＝6.4Hz,3H)。
实例15
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-哌嗪-1-基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000631
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用哌嗪-1-甲酸叔丁酯代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备。MS：计算值378[(M+H)+]，测量值378[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.62(d,J＝8.7Hz,1H),8.17(d,J＝8.1Hz,1H),7.66(d,J＝8.7Hz,1H),7.34(d,J＝8.1Hz,1H),3.76(br s,1H),3.7-3.8(m,1H),3.4-3.6(m,3H),3.3-3.4(m,1H),3.2-3.3(m,4H),3.1-3.2(m,1H),3.17(s,1H),3.04(dd,J＝10.6,13.0Hz,1H),2.80(brd,J＝4.4Hz,4H),2.40(ddd,J＝5.2,7.6,12.6Hz,1H),1.80(dt,J＝8.2,12.2Hz,1H),1.38(d,J＝6.5Hz,3H)。
实例16
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000632
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(CAS：149771-44-8，PharmaBlock，目录：PBN20120001)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备。MS：计算值404[(M+H)+]，测量值404[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.66(d,1H,J＝8.6Hz),8.22(d,1H,J＝8.1Hz),7.71(d,1H,J＝8.6Hz),7.41(d,1H,J＝7.9Hz),4.08(br s,2H),3.8-4.0(m,3H),3.4-3.6(m,2H),2.9-3.2(m,3H),2.52(brt,3H,J＝13.1Hz),2.0-2.3(m,4H),1.8-2.0(m,1H),1.49(d,3H,J＝6.6Hz)。
实例17
5-[(4R,7S,8aS)-7-(3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000641
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用N-(3-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(CAS：1018443-01-0，PharmaBlock，目录：PB03046)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备。MS：计算值378[(M+H)+]，测量值378[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.65(d,1H,J＝8.6Hz),8.22(d,1H,J＝7.9Hz),7.70(d,1H,J＝8.6Hz),7.39(d,1H,J＝8.1Hz),3.5-3.9(m,10H),3.2-3.3(m,2H),3.1-3.2(m,1H),2.5-2.7(m,1H),1.66(s,4H),1.45(d,3H,J＝6.5Hz)。
实例18
5-[(4R,7S,8aS)-7-(4-氨基-4-甲基-1-哌啶基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000642
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用N-(4-甲基-4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(CAS：163271-08-7，PharmaBlock，目录：PB02909)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备。MS：计算值406[(M+H)+]，测量值406[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.65(d,1H,J＝8.6Hz),8.21(d,1H,J＝7.9Hz),7.69(d,1H,J＝8.6Hz),7.37(d,1H,J＝7.9Hz),3.9-4.1(m,2H),3.81(br d,1H,J＝12.2Hz),3.64(br d,1H,J＝12.3Hz),3.4-3.6(m,4H),2.9-3.3(m,5H),2.63(ddd,1H,J＝5.4,7.5,13.2Hz),1.9-2.2(m,5H),1.52(s,3H),1.39(d,3H,J＝6.4Hz)。
实例19
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(3-氨基-3-甲基-吡咯烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000651
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用N-(3-甲基吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(CAS：147459-52-7，PharmaBlock，目录：PB03048)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备。MS：计算值392[(M+H)+]，测量值392[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.66(d,1H,J＝8.7Hz),8.21(d,1H,J＝7.9Hz),7.70(d,1H,J＝8.6Hz),7.41(d,1H,J＝8.1Hz),3.6-4.0(m,6H),3.4-3.6(m,1H),3.37(s,1H),3.2-3.3(m,2H),2.9-3.1(m,2H),2.68(ddd,1H,J＝5.6,7.8,13.1Hz),2.1-2.3(m,2H),1.9-2.1(m,2H),1.57(s,3H),1.47(d,3H,J＝6.5Hz)。
实例20
5-[(4R,7S,8aS)-7-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000661
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用N,N-二甲基哌啶-4-胺(CAS：50533-97-6，BePharm，目录：BD21065)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备。MS：计算值420[(M+H)+]，测量值420[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.63(d,1H,J＝8.6Hz),8.18(d,1H,J＝7.9Hz),7.67(d,1H,J＝8.6Hz),7.38(d,1H,J＝7.9Hz),4.0-4.3(m,2H),3.4-3.9(m,8H),3.0-3.3(m,4H),2.93(s,6H),2.75(ddd,1H,J＝5.4,8.2,13.3Hz),2.41(brdd,2H,J＝2.4,13.5Hz),1.9-2.2(m,3H),1.42(d,3H,J＝6.4Hz)。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.61(d,1H,J＝8.6Hz),8.16(d,1H,J＝7.9Hz),7.65(d,1H,J＝8.6Hz),7.2-7.4(m,1H),3.6-4.2(m,3H),3.3-3.6(m,4H),2.8-3.2(m,9H),2.5-2.7(m,1H),1.7-2.1(m,9H),1.2-1.4(m,3H)
实例21
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000662
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-甲酸叔丁酯(CAS：189333-03-7，BePharm，目录：BD157859)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备。MS：计算值446[(M+H)+]，测量值446[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.61(d,1H,J＝8.6Hz),8.16(d,1H,J＝7.9Hz),7.65(d,1H,J＝8.6Hz),7.2-7.4(m,1H),3.6-4.2(m,3H),3.3-3.6(m,4H),2.8-3.2(m,8H),2.5-2.7(m,1H),1.7-2.1(m,9H),1.2-1.4(m,3H)。
实例22A和实例22B
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-[3-[(5R)-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈和5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-[3-[(5R)-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000671
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0003642846310000681
步骤1：制备(5R)-1-(1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物22.2)和(5R)-2-(1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物22.3)
向烧瓶中加入(5R)-5-甲基-2,4,5,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(中间体F，212.6mg，896μmol)和DMF(2mL)，将悬浮液用N2鼓泡5分钟，并加入NaH(60％，在矿物油中，107mg，2.69mmol)。将混合物在rt下搅拌0.5h后，加入3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯(化合物22.1，CAS：939759-26-9，PharmaBlock，目录：PB00431，284mg，896μmol)，并将混合物在60℃下搅拌2小时。冷却后，通过加水(10mL)猝灭反应。将混合物用EA(10mL)萃取3次，并且有机相用盐水(20mL)洗涤两次，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到淡黄色油状物，将该淡黄色油状物通过快速色谱柱(EA/PE＝0至70％)纯化，以得到化合物22.2和22.3(65mg)。这两种产物不可分离。MS：计算值427[(M+H)+]，测量值427[(M+H)+]。
步骤2：制备(5R)-1-(氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物22.4)和(5R)-2-(氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物22.5)
向含有(5R)-1-(1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物22.2)和(5R)-2-(1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物22.3)(65mg，152μmol)的烧瓶中加入MeOH(5mL)和Pd(OH)2/C(10重量％，6mg，39μmol)。在rt下在氢气球下搅拌2小时后，将反应混合物过滤并浓缩，以得到化合物22.4和化合物22.5(44mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值293[(M+H)+]，测量值293[(M+H)+]。
步骤3：制备5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-[3-[(5R)-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈和5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-[3-[(5R)-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈(实例22A和22B)
向密封管中加入(4R,8aS)-2-(8-氰基-2-氘代-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]甲磺酸盐(中间体E，60.5mg，156μmol)、(5R)-1-(氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物22.4)和(5R)-2-(氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(化合物22.5)(44mg，150μmol)、碳酸钾(65mg，469μmol)、碘化钾(24.9mg，150μmol)和MeCN(5mL)，将混合物在110℃下搅拌过夜。冷却后，将混合物通过硅藻土过滤并浓缩，以得到黄色油状物，将该黄色油状物溶解在DCM(5mL)和TFA(1mL)中。将混合物在rt下搅拌2小时，然后浓缩以得到油状物，将该油状物通过制备型HPLC(ODS-C18，乙腈和0.1％TFA在水中的溶液)纯化，以得到实例22A(较慢洗脱，10mg)和实例22B(较快洗脱，14mg)。
实例22A:MS：计算值484[(M+H)+]，测量值484[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.65(d,1H,J＝8.6Hz),8.1-8.2(m,1H),7.6-7.8(m,1H),7.52(d,1H,J＝6.6Hz),7.41(d,1H,J＝8.1Hz),4.5-4.8(m,4H),4.4-4.5(m,1H),4.3-4.3(m,1H),4.1-4.2(m,1H),3.5-4.0(m,9H),2.5-3.3(m,5H),1.3-1.6(m,6H)。
实例22B:MS：计算值484[(M+H)+]，测量值484[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.65(br d,1H,J＝8.4Hz),8.19(dd,1H,J＝2.8,7.9Hz),7.6-7.8(m,2H),7.38(br d,1H,J＝8.2Hz),5.3-5.5(m,1H),4.6-4.8(m,3H),4.1-4.5(m,4H),3.4-4.0(m,8H),3.0-3.3(m,3H),2.8-2.9(m,1H),2.70(br dd,1H,J＝10.6,16.3Hz),1.51(br d,3H,J＝6.4Hz),1.43(br dd,3H,J＝6.2,16.1Hz)。
实例23A和实例23B
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈和2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈(实例23A和23B)
Figure BDA0003642846310000701
与实例22的制备类似，标题化合物通过使用2,4,5,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(CAS：871726-73-7，BePharm，目录：BD208989)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备)。将实例23A和实例23B通过制备型HPLC(ODS-C18，乙腈和0.1％TFA在水中的溶液)分离。
实例23A(较快洗脱)MS：计算值415[(M+H)+]，测量值415[(M+H)+]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(d,J＝8.4Hz,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.53-7.49(m,1H),7.23(s,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,1H),4.89-4.82(m,1H),4.02(s,2H),3.78(t,J＝8.4Hz,1H),3.59(d,J＝11.2Hz,1H),3.34(d,J＝11.2Hz,1H),3.18-3.11(m,1H),3.08(t,J＝5.6Hz,1H),2.85-2.38(m,1H),2.79-2.74(m,2H),2.69(t,J＝8.4Hz,1H),2.62(t,J＝5.6Hz,1H),2.31-2.25(m,1H),2.13-2.04(m,1H),1.17(d,J＝6.2Hz,3H)。
实例23B(较慢洗脱)MS：计算值415[(M+H)+]，测量值415[(M+H)+]。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δ8.69(dd,1H,J＝2.4,8.6Hz),8.22(d,1H,J＝7.9Hz),7.6-7.8(m,2H),7.44(dd,1H,J＝1.8,8.0Hz),5.3-5.5(m,1H),4.29(d,2H,J＝12.0Hz),4.0-4.2(m,2H),3.8-4.0(m,3H),3.76(br d,1H,J＝12.8Hz),3.4-3.6(m,3H),3.2-3.3(m,1H),3.1-3.2(m,1H),3.07(t,1H,J＝6.3Hz),2.96(ddd,1H,J＝5.6,8.3,13.7Hz),2.3-2.5(m,1H),1.51(dd,3H,J＝3.5,6.5Hz)。
实例24
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈
Figure BDA0003642846310000711
与实例10的制备类似，标题化合物通过使用4-(5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-b]吡嗪-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体G)代替步骤1中的6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉进行制备。MS：计算值511[(M+H)+]，测量值511[(M+H)+]。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.88(d,J＝8.6Hz,1H),8.25-8.46(m,2H),7.84(d,J＝8.6Hz,1H),7.53(d,J＝8.1Hz,1H),4.53-4.73(m,3H),4.13-4.26(m,1H),3.88-4.11(m,8H),3.66-3.86(m,2H),3.54-3.66(m,2H),3.37-3.41(m,4H),2.94-3.11(m,1H),2.52-2.72(m,1H),2.03-2.10(m,1H),1.61-1.71(m,1H),1.56-1.61(m,3H),1.27-1.41(m,2H)。
实例25
为了确定具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物在HEK293-Blue-hTLR-7/8/9细胞测定中的活性，进行了以下测试。
HEK293-Blue-hTLR-7细胞测定：
稳定的HEK293-Blue-hTLR-7细胞系购自InvivoGen(Cat.#:hkb-htlr7,SanDiego,California,USA)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR7刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR7配体刺激HEK-Blue hTLR7细胞使NF-κB和AP-1活化以诱导SEAP。因此，在配体(诸如R848(Resiquimod))的刺激下孵育20小时，报告基因表达被TLR7拮抗剂降低。使用QUANTI-BlueTM试剂盒(Cat.#:rep-qb1,Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长下测定细胞培养上清液SEAP报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mML-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)的96孔板中以170μL的体积将HEK293-Blue-hTLR7细胞以250,000～450,000个细胞/mL的密度孵育，在上述DMEM中，在最终DMSO存在的条件下以1％的最终稀释度添加20μL供试化合物和10μL的20uM R848，在37℃的CO2培养箱中进行20小时的培养。然后将每个孔中的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在620～655nm下读取吸光度。TLR7活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估TLR7拮抗剂。
HEK293-Blue-hTLR-8细胞测定：
稳定的HEK293-Blue-hTLR-8细胞系购自InvivoGen(Cat.#:hkb-htlr8,SanDiego,California,USA)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR8刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR8配体刺激HEK-Blue hTLR8细胞使NF-κB和AP-1活化以诱导SEAP。因此，在配体(诸如R848)的刺激下孵育20小时，报告基因表达被TLR8拮抗剂降低。使用QUANTI-BlueTM试剂盒(Cat.#:rep-qb1,Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长下测定细胞培养上清液SEAP报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mML-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)的96孔板中以170μL的体积将HEK293-Blue-hTLR8细胞以250,000～450,000个细胞/mL的密度孵育，在上述DMEM中，在最终DMSO存在的条件下以1％的最终稀释度添加20μL供试化合物和10μL的60uM R848，在37℃的CO2培养箱中进行20小时的培养。然后将每个孔中的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在620～655nm下读取吸光度。TLR8活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估TLR8拮抗剂。
HEK293-Blue-hTLR-9细胞测定：
稳定的HEK293-Blue-hTLR-9细胞系购自InvivoGen(Cat.#:hkb-htlr9,SanDiego,California,USA)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR9刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR9配体刺激HEK-Blue hTLR9细胞使NF-κB和AP-1活化以诱导SEAP。因此，在配体(诸如ODN2006(Cat.#:tlrl-2006-1,Invivogen,San Diego,California,USA))的刺激下孵育20小时，报告基因表达被TLR9拮抗剂降低。使用QUANTI-BlueTM试剂盒(Cat.#:rep-qb1,Invivogen,San Diego,California,USA)在640nm波长下测定细胞培养上清液SEAP报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
HEK293-Blue-hTLR9细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度以170μL的体积，在96孔板中在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mML-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)中孵育,其中在1％的最终的DMSO存在下于连续稀释液中添加20μL测试化合物和10μL的20uMODN2006的以上DMEM溶液，在37℃的CO2培养箱中孵育20小时。然后将每个孔中的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在620～655nm处读取吸光度。TLR9活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估TLR9拮抗剂。
具有式(I)的化合物具有TLR7和/或TLR8抑制活性(IC50值)<0.1μM。此外，大多数化合物还具有<0.3μM的TLR9抑制活性。表1显示了本发明化合物的活性数据。
表1：本发明化合物在HEK293-Blue-hTLR-7/8/9细胞测定中的活性
Figure BDA0003642846310000731
Figure BDA0003642846310000741
实例26人微粒体稳定性测定
将人肝微粒体(目录号：452117，美国康宁)在37℃下于100mM磷酸钾缓冲液(pH7.4)中与受试化合物预孵育10分钟。通过添加NADPH再生系统来引发反应。最终的孵育混合物在100mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中含1μM供试化合物、0.5mg/mL肝微粒体蛋白、1mMMgCl2、1mM NADP、1单位/mL异柠檬酸脱氢酶和6mM异柠檬酸。在37℃下孵育0、3、6、9、15和30分钟后，将300μL冷ACN(包括内标)添加到100μL孵育混合物中以终止反应。沉淀并离心后，取出100uL上清液并加入300uL水。通过LC-MS/MS测定样品中残留的化合物的量。还制备并分析了零和30分钟无NADPH再生系统的对照。结果分类为：低(<7.0mL/min/kg)，中(7.0-16.2mL/min/kg)和高(16.2-23.2mL/min/kg)。测试结果汇总于表2中。
表2：人类微粒体稳定性结果
Figure BDA0003642846310000751
实例27
hERG通道抑制测定
hERG通道抑制测定是一种高度灵敏的测量，可鉴定表现出与体内心脏毒性相关的hERG抑制作用的化合物。将hERG K+通道克隆到人体内，并在CHO(中国仓鼠卵巢)细胞系中稳定表达。CHOhERG细胞用于膜片钳(电压钳，全细胞)实验。电压模式刺激细胞以活化hERG通道并传导IKhERG电流(hERG通道的快速延迟向外整流钾电流)。细胞稳定几分钟后，以0.1Hz(6bpm)的刺激频率记录IKhERG的振幅和动力学。此后，将测试化合物以增加的浓度加入制剂中。对于每种浓度，都试图达到稳态效果，通常在3-10分钟内达到此效果，此时施加下一个最高浓度。记录每种药物浓度下IKhERG的振幅和动力学，并将其与对照值进行比较(以100％计)。(参考文献：Redfern WS,Carlsson L,Davis AS,Lynch WG,MacKenzie I,PalethorpeS,Siegl PK,Strang I,Sullivan AT,Wallis R,Camm AJ,Hammond TG.2003；Relationships between preclinical cardiac electrophysiology,clinical QTinterval prolongation and torsade de pointes for a broad range of drugs:evidence for a provisional safety margin in drugdevelopment.Cardiovasc.Res.58:32-45,Sanguinetti MC,Tristani-Firouzi M.2006；hERG potassium channels and cardiac arrhythmia.Nature 440:463-469,Webster R,Leishman D,Walker D.2002；Towards a drug concentration effect relationship forQT prolongation and torsades de pointes.Curr.Opin.Drug Discov.Devel.5:116-26)。hERG的结果在表3中给出。
表3：hERG结果
Figure BDA0003642846310000761

Claims (21)

1.一种式(I)化合物，
Figure FDA0003642846300000011
其中
R1为
Figure FDA0003642846300000012
Figure FDA0003642846300000013
其中R4为C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤素、硝基或氰基；R4a为C1-6烷基或C3-7环烷基；R5、R5a和R5b独立地选自H和氘；R6为H或卤素；
R2为C1-6烷基；
R3为5-7元单环芳基或杂芳基，7-12元双环杂环基、杂环基-杂环基、杂环基氨基、C1-6烷基(杂环基)氨基或杂环基氧基；
或其药用盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中
R1为
Figure FDA0003642846300000021
其中R4为氰基；R5为H或氘；
R2为C1-6烷基；
R3为(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基)哌嗪基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基；(C1-6烷基)2氨基哌啶基；(C1-6烷基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基)氮杂环丁烷基；(C1-6烷基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基)氨基；(C1-6烷基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基)氨基；(C1-6烷基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶基)氨基；(C1-6烷基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基)氨基；2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基氧基；5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶基氨基；氨基(C1-6烷基)氮杂环丁烷基；氨基(C1-6烷基)哌啶基；氨基(C1-6烷基)吡咯烷基；C1-6烷基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基)氨基；哌嗪基；哌嗪基-3,4-二氢-1H-异喹啉基或哌嗪基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基；
或其药用盐。
3.一种式(Ia)化合物，
Figure FDA0003642846300000022
其中
R1为
Figure FDA0003642846300000031
其中R4为氰基；R5为H或氘；
R2为C1-6烷基；
R3为(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基)哌嗪基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基；(C1-6烷基)2氨基哌啶基；(C1-6烷基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基)氮杂环丁烷基；(C1-6烷基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基)氨基；(C1-6烷基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基)氨基；(C1-6烷基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶基)氨基；(C1-6烷基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶基)氨基；2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基氧基；5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶基氨基；5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶基氨基；氨基(C1-6烷基)氮杂环丁烷基；氨基(C1-6烷基)哌啶基；氨基(C1-6烷基)吡咯烷基；C1-6烷基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶基)氨基；哌嗪基；哌嗪基-3,4-二氢-1H-异喹啉基或哌嗪基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基；
或其药用盐。
4.根据权利要求2或3所述的化合物，其中
R1为
Figure FDA0003642846300000032
其中R4为氰基；R5为氘。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中R3为(3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基)-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-基；(3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-基；(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基)哌嗪-1-基；(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基；(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)氮杂环丁烷-1-基；(5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基)氨基；(5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基)氨基；(6-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-2-基)氨基；(7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基；2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基；3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基；3-氨基-3-甲基-吡咯烷-1-基；3-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-6-基；4-(二甲基氨基)-1-哌啶基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基；4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基；4-氨基-4-甲基-1-哌啶基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氨基；5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氧基；5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶-2-基氨基；5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基氨基；5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基氨基；6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基；甲基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基或哌嗪-1-基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中R2为甲基。
7.根据权利要求4所述的化合物，其中R3为(C1-6烷基)2氨基哌啶基；(C1-6烷基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基)氮杂环丁烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；哌嗪基或哌嗪基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中R3为(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基；3-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-6-基；4-(二甲基氨基)-1-哌啶基或哌嗪-1-基。
9.根据权利要求4所述的化合物，其中
R1为
Figure FDA0003642846300000041
其中R4为氰基；R5为氘；
R2为C1-6烷基；
R3为(C1-6烷基)2氨基哌啶基；(C1-6烷基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基)氮杂环丁烷基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基；哌嗪基或哌嗪基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪基；
或其药用盐。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中
R1为
Figure FDA0003642846300000051
其中R4为氰基；R5为氘；
R2为甲基；
R3为(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基；3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基；3-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-b]吡嗪-6-基；4-(二甲基氨基)-1-哌啶基或哌嗪-1-基；
或其药用盐。
11.一种化合物，其选自：
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[(6-甲基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[甲基(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基)氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基氨基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(7S)-7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(7R)-7-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5S)-5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[[(5R)-5-甲基-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基]氨基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-[2-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-[7-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-3,4-二氢-1H-2,6-萘啶-2-基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7R,8aS)-4-甲基-7-[4-(5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-基)哌嗪-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,8aS)-4-甲基-7-(5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-基氧基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-哌嗪-1-基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-(3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-(4-氨基-4-甲基-1-哌啶基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(3-氨基-3-甲基-吡咯烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-7-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-[3-[(5R)-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-[3-[(5R)-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基]-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-氘代-喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-4-甲基-7-(4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；以及
2-氘代-5-[(4R,7S,8aS)-7-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-4-甲基-3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]喹啉-8-甲腈；
或其药用盐。
12.一种用于制备根据权利要求1至11中任一项所述的化合物的方法，所述方法包括以下步骤中的任一者：
a)式(V)化合物
Figure FDA0003642846300000071
与式(VI)化合物X-R7(VI)之间的布赫瓦尔德-哈特维希胺化反应或亲核取代；
b)式(VII)化合物
Figure FDA0003642846300000072
与R8-CHO的还原胺化；
c)式(XII)化合物
Figure FDA0003642846300000073
与胺NHR7R8之间的取代反应；
d)式(XIII)化合物
Figure FDA0003642846300000081
与胺NHR7R8之间的布赫瓦尔德-哈特维希胺化反应或亲核取代；
e)式(XVII)化合物
Figure FDA0003642846300000082
与式(II)化合物X-R1(II)之间的亲核取代；
其中X为卤素；Y为卤素或离去基团，例如甲磺酸酯；R1和R2的定义与权利要求1至10中任一项相同；R7为5-7元单环芳基或杂芳基，或7-12元双环杂环基；R9为5-7元单环芳基或杂芳基，或7-12元双环杂环基。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或药用盐，其用作治疗活性物质。
14.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的化合物以及治疗惰性载体。
15.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物用于治疗或预防全身性红斑狼疮或狼疮肾炎的用途。
16.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防全身性红斑狼疮或狼疮肾炎。
17.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物作为TLR7或TLR8或TLR9拮抗剂的用途。
18.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于TLR7和TLR8和TLR9拮抗剂。
19.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或药用盐，其用于治疗或预防全身性红斑狼疮或狼疮肾炎。
20.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或药用盐，其根据权利要求12所述的方法制备。
21.一种用于治疗或预防全身性红斑狼疮或狼疮肾炎的方法，所述方法包括施用治疗有效量的如权利要求1至11中任一项所定义的化合物。
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