CN114699408B - 地布卡因在制备治疗生精功能障碍的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及地布卡因在制备治疗生精功能障碍的药物中的应用，属于医药技术领域。本发明提供了地布卡因在制备预防和/或治疗辐射导致的生精功能障碍的药物中的应用，研究发现，地布卡因可显著增加经辐照小鼠生精小管管腔长形精子的形成数量，并且，加速经辐照小鼠精原细胞到精子细胞的分化，在辐射导致的生精功能障碍的预防和/或治疗中极具应用前景。

Description

地布卡因在制备治疗生精功能障碍的药物中的应用
技术领域
本发明涉及地布卡因在制备治疗生精功能障碍的药物中的应用，属于化学技术领域。
背景技术
电离辐射的广泛应用，使人类获益的同时，也带来许多风险。研究表明，电离辐射可以作用于机体，引起生物分子、细胞器官受损和整体反应，抑制男性睾丸生精功能，从而导致生精功能障碍，诱使男性不育。
研究表明，电离辐射诱使男性不育的具体损伤机制可分为三类：DNA双链断裂、活性氧(ROS)的形成和细胞凋亡。首先，电离辐射会引起生精细胞发生难以修复的DNA双链断裂，损伤的效应会随辐射剂量的增加而增加。其次，电离辐照会还导致受照射细胞中内源性活性氧化物质的积累，损伤线粒体功能，使其发生自噬。最后，辐射会引起生精细胞凋亡信号激活，主要是Fas/FasL通路调节(具体可参见文献“AHMED E A,DE BOER P,PHILIPPENS ME P,等.Parp1-XRCC1 and the repair of DNA double strand breaks in mouse roundspermatids[J/OL].Mutation Research,2010,683(1-2):84-90.DOI:10/dhh4zf.”、“PARISL,CORDELLI E,ELEUTERI P,等.Kinetics of gamma-H2AX induction and removal inbone marrow and testicular cells of mice after X-ray irradiation[J/OL].Mutagenesis,2011,26(4):563-572.DOI:10/crmq5b.”和“VILLANI P,FRESEGNA A M,RANALDI R,等.X-ray induced DNA damage and repair in germ cells of PARP1(-/-)male mice[J/OL].International Journal of Molecular Sciences,2013,14(9):18078-18092.DOI:10/gchn53.”)。
地布卡因(Dibucaine)是一种用于表面麻醉和脊椎麻醉的药物，其可通过降低神经元细胞膜对钠离子的通透性，阻断神经冲动的产生和传导，进而产生麻醉效果。目前，关于地布卡因在制备治疗生精功能障碍的药物中的应用尚无报道。
发明内容
因此，本发明的目的在于提供了地布卡因的新用途，即提供了地布卡因在制备治疗生精功能障碍的药物中的应用。
为解决上述问题，本发明还提供了地布卡因在制备药物中的应用，所述药物具有如下至少一种用途：
(a)治疗和/或预防生精功能障碍；和/或，
(b)治疗和/或预防精子活力降低。
在本发明的一种实施方式中，所述生精功能障碍是指辐射导致的生精功能障碍。
在本发明的一种实施方式中，所述治疗和/或预防生精功能障碍是指增加生精小管管腔长形精子的形成数量以及加速精原细胞到精子细胞的分化。
在本发明的一种实施方式中，所述精子活力降低是指辐射导致的精子活力降低。
在本发明的一种实施方式中，所述辐射为电离辐射。
在本发明的一种实施方式中，所述电离辐射包括射线和来自放射性物质的辐射。
在本发明的一种实施方式中，所述射线包括X射线、α射线、β射线、γ射线、中子射线、负π介子射线或重离子射线。
在本发明的一种实施方式中，所述重离子射线包括氦离子射线、碳离子射线、氮离子射线、氧离子射线或氖离子射线。
在本发明的一种实施方式中，所述药物含有地布卡因、药物载体和/或药用辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。
在本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂和/或释放阻滞剂。
在本发明的一种实施方式中，所述药物的剂型为散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂或注射剂。
本发明技术方案，具有如下优点：
1、本发明提供了地布卡因在制备预防和/或治疗辐射导致的生精功能障碍的药物中的应用，研究发现，地布卡因可显著增加经辐照小鼠生精小管管腔长形精子的形成数量，并且，加速经辐照小鼠精原细胞到精子细胞的分化，在辐射导致的生精功能障碍的预防和/或治疗中极具应用前景。
2、本发明提供了地布卡因在制备预防和/或治疗辐射导致的精子活力降低的药物中的应用，研究发现，地布卡因可显著增加经辐照小鼠的精子活力，在辐射导致的精子活力降低的预防和/或治疗中极具应用前景。
附图说明
图1：不同组小鼠的精子活力(第21天采样)。
图2：不同组小鼠的精子活力(第35天采样)。
图3：不同组小鼠的睾丸组织(第35天采样)。
图4：不同组小鼠睾丸组织的重量(第21天采样)。
图5：不同组小鼠睾丸组织的重量(第35天采样)。
图6：NC组小鼠睾丸组织的HE染色结果(第21天采样)。
图7：IR5组小鼠睾丸组织的HE染色结果(第21天采样)。
图8：地布卡因0.08mg/kg组小鼠睾丸组织的HE染色结果(第21天采样)。
图9：地布卡因0.8mg/kg组小鼠睾丸组织的HE染色结果(第21天采样)。
图10：不同组小鼠睾丸组织中GFRA1、PLZF基因的mRNA相对表达量(第21天采样)。
图11：不同组小鼠睾丸组织中STRA8、DMRT1基因的mRNA相对表达量(第21天采样)。
图12：不同组小鼠睾丸组织中SPO11、SYCP2基因的mRNA相对表达量(第21天采样)。
图13：不同组小鼠睾丸组织中OVOL2、CCNA1基因的mRNA相对表达量(第21天采样)。
图14：不同组小鼠睾丸组织中TJP3基因的mRNA相对表达量(第21天采样)。
图15：不同组小鼠睾丸组织中RUNX2、TXNDC2基因的mRNA相对表达量(第21天采样)。
图16：不同组小鼠睾丸组织中TNP1和PRM3基因的mRNA相对表达量(第21天采样)。
图17：NC组和IR5组小鼠的精子活力(第25天采样)。
图18：IR5组和地布卡因0.08mg/kg组小鼠的精子活力(第25天采样)。
图19：IR5组和地布卡因0.8mg/kg组小鼠的精子活力(第25天采样)。
图20：NC组和IR5组小鼠的睾丸组织(第25天采样)。
图21：地布卡因0.08mg/kg组和地布卡因0.8mg/kg组小鼠的睾丸组织(第25天采样)。
图22：不同组小鼠睾丸组织的重量(第25天采样)。
图23：NC组小鼠睾丸组织的PAS染色结果(第25天采样)。
图24：IR5组小鼠睾丸组织的PAS染色结果(第25天采样)。
图25：地布卡因0.08mg/kg组小鼠睾丸组织的PAS染色结果(第25天采样)。
图26：地布卡因0.8mg/kg组小鼠睾丸组织的PAS染色结果(第25天采样)。
图27：不同组小鼠睾丸组织中GFRA1、PLZF基因的mRNA相对表达量(第25天采样)。
图28：不同组小鼠睾丸组织中STRA8、DMRT1基因的mRNA相对表达量(第25天采样)。
图29：不同组小鼠睾丸组织中SPO11、SYCP2基因的mRNA相对表达量(第25天采样)。
图30：不同组小鼠睾丸组织中OVOL2、CCNA1基因的mRNA相对表达量(第25天采样)。
图31：不同组小鼠睾丸组织中TJP3基因的mRNA相对表达量(第25天采样)。
图32：不同组小鼠睾丸组织中RUNX2、TXNDC2基因的mRNA相对表达量(第25天采样)。
图33：不同组小鼠睾丸组织中TNP1和PRM3基因的mRNA相对表达量(第25天采样)。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
下述实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实验例1：地布卡因对经辐射小鼠生精功能和精子活力的影响
1、实验材料
实验材料见表1。
表1实验材料
2、实验方法
(1)辐照与给药：取16只小鼠，分为四组，每组4只，四组分别为NC组、IR5组、地布卡因0.8mg/kg组以及地布卡因0.08mg/kg组。将IR5组、地布卡因0.8mg/kg组以及地布卡因0.08mg/kg组小鼠用X线辐射仪给予连续5次(每天1次)、每次0.5Gy的全身照射，构建小鼠辐照不育模型，模型建立后，将地布卡因0.8mg/kg组以及地布卡因0.08mg/kg组小鼠用地布卡因连续7次(每天1次)分别以0.8mg/kg、0.08mg/kg的剂量进行腹腔注射(考虑到麻醉药具有成瘾性，故只给药7天，且浓度控制得很低，基本不产生麻醉效应)。地布卡因用生理盐水溶解，按照20g小鼠腹腔注射100μL的体积配成相应浓度的原液，进行腹腔注射。
(2)精子检测：将四组小鼠的附睾头取出，放入预装1mL 1×PBS缓冲液(pH 7.4、浓度0.01M)的1.5mL EP管内，剪碎，37℃水浴加热5min，送苏州大学附属第二医院男科实验室完成精子检测，检测结果见图1～2和表2；精子活力结果中，PR(向前运动)+NP(非向前运动)为总活力，IM为不运动。
(3)睾丸组织固定和切片：将四组小鼠安乐死后采样睾丸组织，对睾丸组织进行拍照和称重，拍照及称重结果见图3～5。
(4)HE组织染色：将(3)获得的睾丸组织用改良戴维森氏固定液(由30％甲醛、15％乙醇、5％冰醋酸、50％去离子水组成，v/v)固定后，送南京弗瑞思生物科技有限公司进行石蜡标本制作、切片制作以及苏木素伊红(HE)染色，观察睾丸组织的病理变化，观察结果见图6～9。
(5)荧光定量PCR：对(3)获得的睾丸组织提取总RNA，再逆转录成cDNA(逆转录引物为购自诺唯赞公司的Cat.R323-01试剂盒的Random primers/Oligo(dT)20VN primer)，配制荧光定量PCR体系进行PCR反应去除空白对照本底荧光强度值，绘制荧光强度值相对表达量柱状图，得到睾丸组织中对应引物基因的mRNA相对表达量，进而判断睾丸组织的该对应基因的表达情况，绘制结果见图10～16(不同基因的表达量代表睾丸组织中处于对应时期生精细胞的数量，因此此处结果可以用于判断替米沙坦给药是否能促进从分化中的精原细胞到精子细胞的这一过程)；其中，PLZF、GFRA1为精原干细胞marker，STRA8、DMRT1为分化中精原细胞marker，SPO11、SYCP2为细线期、偶线期精母细胞marker，OVOL2、CCNA1为粗线期、双线期精母细胞marker，TJP3为终变期精母细胞marker，RUNX2、TXNDC2为S1期精子细胞marker，TNP1和PRM3为S2-S4期精子细胞marker；荧光定量PCR体系的成分为：购自诺唯赞公司的Q712-02试剂盒的2×Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix 10.0μL、10μM上游引物和10μM下游引物各0.4μL、模板DNA/cDNA1μL，用去离子水补充至总体积为20μL；荧光定量PCR的反应程序为：预变性30s，循环反应95℃10s、60℃30s，融解曲线95℃15s、60℃60秒，重复40个循环。
3、实验结果
(1)辐照与给药：按规定计划给药，给药期间未发现小鼠有昏睡或者过度兴奋的状态，采样时间如下：给药第21天采样一次(每组采样1只)，给药第35天采样一次(每组采样剩余3只，但未送病理，也未做荧光定量PCR)，共两次。
(2)精子检测：
①第一次采样：从图1中可见，相比于NC组(第21天采样)，IR5组(第21天采样)、地布卡因0.08mg/kg组(第21天采样)和地布卡因0.8mg/kg组(第21天采样)的总活力都显著降低，但地布卡因0.08mg/kg组(第21天采样)和地布卡因0.8mg/kg组(第21天采样)的精子总活力却显著高于IR5组(第21天采样)，说明地布卡因给药处理能提高经辐照小鼠的精子活力。
②第二次采样：从图2和表1中可见，相比于NC组(第35天采样)，IR5组(第35天采样)、地布卡因0.08mg/kg组(第35天采样)和地布卡因0.8mg/kg组(第35天采样)的总活力都显著降低，但可能由于个体差异较大，无法判断IR5组(第35天采样)、地布卡因0.08mg/kg组(第21天采样)与地布卡因0.8mg/kg组(第21天采样)之间的差别，精子浓度也没有显著的规律。
表2不同组小鼠的精子生成量(第35天采样)
(3)睾丸组织固定和切片：
①睾丸外形：从图3中可见，与NC组(第35天采样)相比，IR5组(第35天采样)、地布卡因0.08mg/kg组(第35天采样)和地布卡因0.8mg/kg组(第35天采样)小鼠的睾丸体积都显著减小，说明造模成功，但IR5组(第35天采样)、地布卡因0.08mg/kg组(第35天采样)和地布卡因0.8mg/kg组(第35天采样)小鼠的差别无法从睾丸外形和体积判断，说明地布卡因处理无法逆转辐照引起的睾丸体积缩小。
②睾丸重量：从图4～5中可见，与NC组(第21天采样+第35天采样)相比，IR5组(第21天采样+第35天采样)、地布卡因0.08mg/kg组(第21天采样+第35天采样)和地布卡因0.8mg/kg组(第21天采样+第35天采样)小鼠的睾丸重量都显著减小，说明造模成功，但IR5组(第21天采样+第35天采样)、地布卡因0.08mg/kg组(第21天采样+第35天采样)和地布卡因0.8mg/kg组(第21天采样+第35天采样)小鼠的差别无法从睾丸重量判断，说明地布卡因处理无法逆转辐照引起的睾丸重量减少。
(4)HE组织染色：
①NC组：从图6中可见，NC组(第21天采样)小鼠睾丸组织整体结构完整，各个生精小管内细胞层数较多，可见较多的精母细胞、精子细胞等，并可见长形精子，间质结构完整。
②IR5组：从图7中可见，与NC组(第21天采样)相比，IR5组(第21天采样)小鼠睾丸组织整体结构较为完整，但是大多数生精小管受损严重，各个生精小管内细胞层数大量减少，几乎很难看到精母细胞、精子细胞、长形精子等，管腔内容物严重减少，几乎不存在长形精子，间质结构相对完整。
③地布卡因0.08mg/kg组：从图8中可见，与NC组(第21天采样)相比，地布卡因0.08mg/kg组(第21天采样)睾丸组织整体结构较为完整，但是大多数生精小管受损严重，各个生精小管内细胞层数大量减少，几乎很难看到精母细胞、精子细胞、长形精子等，间质结构相对完整。但与IR5组(第21天采样)相比，生精小管管腔内容物显著增多，尽管大多数生精小管仍然缺乏精母细胞，精子细胞，但大多数生精小管管腔却充满了长形精子，这说明地布卡因0.08mg/kg给药在这个过程中发挥了显著的作用，有效地恢复了部分生精功能。
④地布卡因0.8mg/kg组：从图9中可见，与NC组(第21天采样)相比，地布卡因0.8mg/kg组(第21天采样)睾丸组织整体结构较为完整，但是大多数生精小管受损严重，各个生精小管内细胞层数大量减少，几乎很难看到精母细胞、精子细胞、长形精子等，间质结构相对完整。但与IR5组(第21天采样)相比，生精小管管腔内容物显著增多，尽管大多数生精小管仍然缺乏精母细胞，精子细胞，但大多数生精小管管腔却充满了长形精子，这说明地布卡因0.8mg/kg给药在这个过程中发挥了显著的作用，有效地恢复了部分生精功能，但无法从HE结果判断其与地布卡因0.08mg/kg组(第21天采样)的差异。
(5)荧光定量PCR：
NC组、IR5组、地布卡因0.08mg/kg组、地布卡因0.8mg/kg组(第21天采样)：
从图10～16中可见，精原干细胞marker：GFRA1：NC组＞地布卡因0.08mg/kg组＞地布卡因0.8mg/kg组＞IR5组，PLZF：IR5组＞地布卡因0.08mg/kg组＞地布卡因0.8mg/kg＞NC组；分化中的精原细胞marker：STRA8：IR5组＞NC组＞地布卡因0.08mg/kg组＞地布卡因0.8mg/kg，DMRT1：地布卡因0.08mg/kg组＞地布卡因0.8mg/kg＞IR5组＞NC组；细线期、偶线期精母细胞marker：SPO11：NC组＞IR5组＞地布卡因0.08mg/kg组＞地布卡因0.8mg/kg，SYCP2：NC组＞地布卡因0.08mg/kg组＞IR5组＞地布卡因0.8mg/kg；粗线期、双线期精母细胞marker：OVOL2和CCNA1都是NC组＞IR5组和地布卡因给药组；终变期精母细胞marker：TJP3：地布卡因给药组＞NC组＞IR5组；S1期精子细胞marker：RUNX2：NC组＞地布卡因0.08mg/kg组＞地布卡因0.8mg/kg＞IR5组，TXNDC2：NC组＞地布卡因0.8mg/kg＞地布卡因0.08mg/kg＞IR5组；S2～S4期精子细胞marker：TNP1：NC组＞地布卡因0.8mg/kg＞地布卡因0.08mg/kg＞IR5组，PRM3：NC组＞地布卡因0.08mg/kg＞地布卡因0.8mg/kg＞IR5组。说明地布卡因给药可能加速了从细线期精母细胞到终末期精母细胞的这一过程，进而使得S2～S4期精子细胞相比IR5组(第21天采样)增多。
实验例2：地布卡因对经辐射小鼠生精功能和精子活力的影响
1、实验材料
实验材料见表1。
2、实验方法
(1)辐照与给药：取24只小鼠，分为四组，每组6只，四组分别为NC组、IR5组、地布卡因0.8mg/kg组以及地布卡因0.08mg/kg组。将IR5组、地布卡因0.8mg/kg组以及地布卡因0.08mg/kg组小鼠用X线辐射仪给予连续5次(每天1次)、每次0.5Gy的全身照射，构建小鼠辐照不育模型，模型建立后，将地布卡因0.8mg/kg组以及地布卡因0.08mg/kg组小鼠用地布卡因连续7次(每天1次)分别以0.8mg/kg、0.08mg/kg的剂量进行腹腔注射。地布卡因用生理盐水溶解，按照20g小鼠腹腔注射100μL的体积配成相应浓度的原液，进行腹腔注射。
(2)精子检测：将三组小鼠的附睾头取出，放入预装1mL 1×PBS缓冲液(pH 7.4、浓度0.01M)的1.5mL EP管内，剪碎，37℃水浴加热5min，送苏州大学附属第二医院男科实验室完成精子检测，检测结果见图17～19；精子活力结果中，PR(向前运动)+NP(非向前运动)为总活力，IM为不运动。
(3)睾丸组织固定和切片：将三组小鼠安乐死后采样睾丸组织，对睾丸组织进行拍照和称重，拍照及称重结果见图20～22。
(4)HE组织染色：将(3)获得的睾丸组织用改良戴维森氏固定液(由30％甲醛、15％乙醇、5％冰醋酸、50％去离子水组成，v/v)固定后，送南京弗瑞思生物科技有限公司进行石蜡标本制作、切片制作以及过碘酸雪夫(PAS)染色，观察睾丸组织的病理变化，观察结果见图23～26。
(5)荧光定量PCR：对(3)获得的睾丸组织提取总RNA，再逆转录成cDNA(逆转录引物为购自诺唯赞公司的Cat.R323-01试剂盒的Random primers/Oligo(dT)20VN primer)，配制荧光强度值相对表达量柱状图，得到睾丸组织中对应引物基因的mRNA相对表达量，进而判断睾丸组织的该对应基因的表达情况，绘制结果见图27～33(不同基因的表达量代表睾丸组织中处于对应时期生精细胞的数量，因此此处结果可以用于判断替米沙坦给药是否能促进从分化中的精原细胞到精子细胞的这一过程)；其中，PLZF、GFRA1为精原干细胞marker，STRA8、DMRT1为分化中精原细胞marker，SPO11、SYCP2为细线期、偶线期精母细胞marker，OVOL2、CCNA1为粗线期、双线期精母细胞marker，TJP3为终变期精母细胞marker，RUNX2、TXNDC2为S1期精子细胞marker，TNP1和PRM3为S2-S4期精子细胞marker；荧光定量PCR体系的成分为：购自诺唯赞公司的Q712-02试剂盒的2×Taq Pro Universal SYBR qPCRMaster Mix 10.0μL、10μM上游引物和10μM下游引物各0.4μL、模板DNA/cDNA 1μL，用去离子水补充至总体积为20μL；荧光定量PCR的反应程序为：预变性30s，循环反应95℃10s、60℃30s，融解曲线95℃15s、60℃60秒，重复40个循环。
3、实验结果
(1)辐照与给药：按规定计划给药，于给药第25天采样。
(2)精子检测：从图17～19中可见，与NC组(第25天采样)相比，IR5组(第25天采样)的总活力、地布卡因0.08mg/kg组(第25天采样)的总活力和地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)的总活力都显著降低，说明造模成功。但地布卡因0.08mg/kg组(第25天采样)有4个样本的总活力显著高于IR5组(第25天采样)，地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)有3个样本显著高于IR5组(第25天采样)，排除个体差异，说明地布卡因给药处理能提高经辐射小鼠的精子总活力，改善辐照所致不育。
(3)睾丸组织固定和切片：
①睾丸外形：从图20～21中可见，与NC组(第25天采样)相比，IR5组(第25天采样)和地布卡因0.08mg/kg组(第25天采样)、地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)小鼠的睾丸体积都显著减小，说明造模成功，但IR5组(第25天采样)和地布卡因0.08mg/kg组(第25天采样)、地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)小鼠的差别无法从睾丸外形和体积判断，说明地布卡因处理无法逆转辐照引起的睾丸体积缩小。
②睾丸重量：从图22中可见，与NC组(第25天采样)相比，IR5组(第25天采样)和地布卡因0.08mg/kg组(第25天采样)、地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)小鼠的睾丸重量都显著减小，说明造模成功，但IR5组(第25天采样)和地布卡因0.08mg/kg组(第25天采样)、地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)小鼠的差别无法从睾丸重量判断，说明地布卡因处理无法逆转辐照引起的睾丸重量减少。
(4)PAS组织染色：
①NC组：从图23中可见，NC组(第25天采样)小鼠睾丸组织整体结构完整，各个生精小管内细胞层数较多，可见较多的精母细胞、精子细胞等，并可见长形精子，间质结构完整。
②IR5组：从图24中可见，与NC组(第25天采样)相比，IR5组(第25天采样)小鼠睾丸组织整体结构较为完整，但是大多数生精小管受损严重，各个生精小管内细胞层数大量减少，精母细胞、精子细胞、长形精子等尤其明显，管腔内容物严重减少，几乎不存在长形精子，间质结构相对完整。
③地布卡因0.08mg/kg组：从图25中可见，与NC组(第25天采样)相比，地布卡因0.08mg/kg组(第25天采样)小鼠睾丸组织整体结构较为完整，但是大多数生精小管受损严重，各个生精小管内细胞层数大量减少，精母细胞、精子细胞、长形精子等尤其明显，间质结构相对完整。但与IR5组(第25天采样)相比，地布卡因0.08mg/kg组(第25天采样)小鼠生精小管管腔细胞层数显著增多，尽管大多数生精小管中精母细胞、精子细胞仍然很少，但大多数生精小管的整体情况得到了改善，这说明地布卡因给药在这个过程中发挥了显著的作用，有效地恢复了部分生精功能。
④地布卡因0.8mg/kg组：从图26中可见，与NC组(第25天采样)相比，地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)小鼠睾丸组织整体结构较为完整，但是大多数生精小管受损严重，各个生精小管内细胞层数大量减少，精母细胞、精子细胞、长形精子等尤其明显，间质结构相对完整。但与IR5组(第25天采样)相比，地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)小鼠生精小管管腔细胞层数显著增多，尽管大多数生精小管中精母细胞、精子细胞仍然很少，但大多数生精小管的整体情况得到了改善，这说明地布卡因给药在这个过程中发挥了显著的作用，有效地恢复了部分生精功能。
(5)荧光定量PCR：
NC组、IR5组、地布卡因0.08mg/kg组、地布卡因0.8mg/kg组(第25天采样)：
从图27～33中可见，精原干细胞marker：GFRA1：NC组＞地布卡因0.8mg/kg组＞地布卡因0.08mg/kg组＞IR5组，PLZF：地布卡因0.8mg/kg＞IR5组＞NC组＞地布卡因0.08mg/kg组；分化中的精原细胞marker：STRA8：地布卡因0.8mg/kg＞NC组＞IR5组＞地布卡因0.08mg/kg组，DMRT1：地布卡因0.8mg/kg＞NC组＞地布卡因0.08mg/kg组＞IR5组；细线期、偶线期精母细胞marker：SPO11：NC组＞地布卡因0.8mg/kg＞地布卡因0.08mg/kg组＞IR5组，SYCP2：NC组＞地布卡因0.8mg/kg＞IR5组＞地布卡因0.08mg/kg组；粗线期、双线期精母细胞marker：OVOL2和CCNA1都是NC组＞地布卡因0.8mg/kg＞地布卡因0.08mg/kg组＞IR5组；终变期精母细胞marker：TJP3：NC组＞地布卡因0.8mg/kg＞IR5组＞地布卡因0.08mg/kg组；S1期精子细胞marker：RUNX2和TXNDC2：都是NC组＞地布卡因0.8mg/kg＞地布卡因0.08mg/kg组＞IR5组；S2～S4期精子细胞marker：TNP1和PRM3：都是NC组＞地布卡因0.8mg/kg＞地布卡因0.08mg/kg组＞IR5组。说明地布卡因给药可能加速了从细线期精母细胞到终末期精母细胞的这一过程，进而使得S2～S4期精子细胞相比IR5组增多。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
序列表
<110> 苏州大学附属第二医院
<120> 地布卡因在制备治疗生精功能障碍的药物中的应用
<160> 26
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
ctgggacttt gtgcgatgtg 20
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
cggtggaaga ggatctcaaa ca 22
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 3
tatcacagcc tcaaagtggc a 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 4
ggatgctttg agcttcagca a 21
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 5
cccaagcaga cacactcctg 20
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 6
cttttctgaa tgtcctctgg cg 22
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 7
gacactgaaa ccgaatgtgg a 21
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 8
tgtgggtctt ggttgtcctt t 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 9
tggcctgtgt gagtcaagac 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 10
cttgcccttc accgggattt 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 11
tatattccgg gcagtcccgt 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 12
catcgaggca gttgttccct 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 13
aatgtgagtc tgcgtcctcg 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 14
aaaacaagcc gcctaacacc 20
<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 15
cgcgcgattt aaggcatagg t 21
<210> 16
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 16
cgcgttgctc ggtactctc 19
<210> 17
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 17
cagcaggctg tggcttact 19
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 18
ctagcacggt tctctgtggg 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 19
ctggcggagc cctagaaagg 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 20
acaatcagcc cccactttgg 20
<210> 21
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 21
gtccatgcag gaatatttaa ggc 23
<210> 22
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 22
cccaaaagaa gctttgctga ca 22
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 23
gccgccacac aagatcaaac 20
<210> 24
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 24
acatttcttc tatggccaag tcc 23
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 25
gtcttcaaac aacacggggc 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 26
cgaatttcgt cacgactggc 20

Claims (4)

1.地布卡因在制备治疗和/或预防生精功能障碍的药物中的应用，其特征在于，所述生精功能障碍是指用X射线给予连续5次，每天1次、每次0.5Gy的全身照射导致的生精功能障碍。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗和/或预防生精功能障碍是指增加生精小管管腔长形精子的形成数量以及加速精原细胞到精子细胞的分化。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物含有地布卡因、药物载体和/或药用辅料。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1084062A (zh) * 1992-06-16 1994-03-23 维他凯恩制药株式会社 治疗疼痛的组合物和方法及增强疼痛解除的组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Motility activation, respiratory stimulation, and alteration of Ca2+ transport in bovine sperm treated with amine local anesthetics and calcium transport antagonists.;Jai Pal Singh 等.;Archives of Biochemistry and Biophysics;第221卷(第1期);291-303 *

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