CN114689868A - 处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法 - Google Patents
处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114689868A CN114689868A CN202011631081.7A CN202011631081A CN114689868A CN 114689868 A CN114689868 A CN 114689868A CN 202011631081 A CN202011631081 A CN 202011631081A CN 114689868 A CN114689868 A CN 114689868A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protein
- treating agent
- kit
- detected
- substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明提供了一种处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法。该处理剂包括缓冲对、蛋白组分和糖醇组分,处理剂中糖醇组分的质量含量为5~20%,处理剂的pH值为5.5~9.5。上述pH范围的处理剂中糖醇组分的质量含量相对于现有技术中糖醇组分的常规5%以下的含量有明显增加,提高了处理剂的流变学密度,拓宽了线性检测范围。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学线性检测研究技术领域,具体而言,涉及一种处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法。
背景技术
在采用双抗体夹心法检测待测标本中的抗原时,检测的信号强度与待测抗原浓度往往呈现良好的线性关系;而当待测标本含有高浓度待测抗原,固相抗体(即捕获抗体)及标记抗体的剂量/活性相对不足,或者高浓度待测抗原引发的检测信号超过仪器的线性检测范围时,校准曲线的信号强度与待测物浓度经常变化线性关系,从而使免疫检测失去准确定量高浓度段待测抗原的能力。
增加固相抗体(即捕获抗体)及标记抗体的用量常常可以缓解和这一现象;但对于微孔和微球/磁性微球等固相载体,可以增加其固相抗体的量通常非常有限,因此,增加标记抗体替代的方法往往是首选方法。
但在实际操作中,增加标记抗体替代常常导致检测信号过强而超过仪器的检测范围,同样明显的高浓度待测抗原的检测失去精确性。
在申请公布号为CN101201353A的专利申请中提供了一种解决方法,其提供了一种扩大免疫检测范围的方法,通过两种抗体分别在双反应夹心法和免疫竞争法的作用下,迅速吸附在可在同一反应系统中相互区分的两种固相载体上。其中双反应夹心法是在双抗体夹心法的线性范围内测定样品浓度,免疫竞争法是在双抗体夹心法的线性范围以外的样品浓度下测定免疫竞争法。
在授权公告号为CN103293299B的专利中,提供了另一种解决方法:用未标记的示踪抗体稀释已标记的示踪抗体,即通过示踪抗体总浓度的提高和检测信号的降低,从而在免疫检测中起到增加示踪抗体浓度而不加强检测信号强度的目的,使待测物的浓度与信号强度可在高浓度范围内呈现良好的线性关系,使双抗体夹心免疫检测的浓度范围得到有效地拓宽。
授权公告号为CN104597232B的专利提供的解决方法为:捕获抗体竞争双抗体夹心免疫法,其中的抗体包括游离捕获抗体,标记抗体和固定捕获抗体。其中游离捕获抗体,无标记,与标记抗体在抗原上结合的表位不同,固定捕获抗体固定于固相载体上。首先使用游离捕获抗体与固定捕获抗体竞争结合待测抗原,形成的抗原抗体复合物与标记抗体结合,反应过程中会形成多种复合物,即标记抗体-抗原的复合物,游离捕获抗体-抗原的复合物,标记抗体-抗原-固定捕获抗体夹心复合物,游离捕获抗体-抗原-标记抗体复合物,其中只有标记抗体与抗原-固定捕获抗体形成的夹心复合物能通过标记做进一步检测,通过标记抗体-抗原的复合物,游离捕获抗体-抗原的复合物和游离捕获抗体-抗原-标记抗体的复合物不能被检测,相当于减少了与待测液中捕获抗体反应的抗原量,从而扩大了检测范围。
上述技术方案需要额外增加包被和/或标记抗体的使用量或种类,成本较高,同时抗体组合程度复杂。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法,以解决现有技术中拓宽免疫学线性检测范围的方法成本高的问题。
为了实现上述目的,根据本发明的一个方面,提供了一种处理剂,该处理剂包括缓冲对、蛋白组分和糖醇组分,处理剂中糖醇组分的质量含量为5~20%,处理剂的pH值为5.5~9.5。
进一步地,上述处理剂的pH值为8.5~9.5或5.5~6.5。
进一步地,上述蛋白组分的质量含量为1~5%。
进一步地,上述缓冲对离子强度为100~200mM。
进一步地,上述糖醇组分包括蔗糖、海藻糖、山梨醇、丙三醇和甘露醇中的任意一种或多种的组合;和/或缓冲对选自PB缓冲对、PBS缓冲对、Tris-HCl缓冲对和HEPES缓冲对中的任意一种;和/或蛋白组分包括牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白和卵清白蛋白中的任意一种或多种的组合。
根据本发明的另一方面,提供了一种用于免疫学检测的试剂盒,试剂盒包括包被蛋白、标记蛋白和反应缓冲液,该反应缓冲液为上述任一种的处理剂。
根据本发明的另一方面,提供了一种用于免疫学检测的试剂盒,试剂盒包括包被蛋白和标记蛋白,包被蛋白和标记蛋白中的一种或两种具有组分稀释液,该组分稀释液为上述任一种的处理剂。
根据本发明的另一方面,提供了一种免疫学检测方法,该免疫学检测方法包括采用上述任一种的试剂盒对待测物质进行检测,或者上述任一种的试剂盒和上述任一种的处理剂对待测物质进行检测,待测物质与试剂盒中的包被蛋白和标记蛋白特异性结合。
进一步地,上述免疫学检测方法包括:步骤S1,将待测物质、试剂盒中的包被蛋白和标记蛋白和处理剂混合并在35~38℃下温育5~9min,以使包被蛋白、待测物质与标记蛋白反应形成免疫复合物;步骤S2,利用外加磁场将免疫复合物沉淀,并采用清洗液对沉淀后的免疫复合物进行清洗;步骤S3,向清洗后的免疫复合物沉淀加入与标记物反应的底物进行反应,检测相对发光强度;优选地,待测物质与处理剂的体积比为1:15~20。
进一步地,上述免疫学检测方法为标记免疫分析方法,优选地,的标记免疫分析方法选自化学发光免疫分析法、酶联免疫分析法、放射免疫法中的任意一种。
进一步地,上述免疫学检测方法为两步夹心法,步骤S1包括:将待测物质、处理剂、包被蛋白混合后在35~38℃下温育5~9min,形成第一混合体系,在磁场中对第一混合体系进行清洗;将清洗后的第一混合体系与标记蛋白混合后在35~38℃下温育5~9min,形成包括包被蛋白、待测物质与标记蛋白的免疫复合物。
应用本发明的技术方案,上述糖醇组分的质量含量相对于现有技术中糖醇组分的常规5%以下的含量有明显增加,提高了处理剂的流变学密度,拓宽了线性检测范围。
具体实施方式
需要说明的是,在不冲突的情况下,本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
术语说明:
本文所述的反应缓冲液指的是独立于关键组分之外的单一试剂。可以在反应前或者反应过程中加入反应体系,从而影响免疫反应的进行。
本文所述的组分稀释液指的是与试剂盒关键组分共存的液体环境。所述的关键组分包括免疫反应过程中所需的抗原/抗体。优选的,所述的抗原/抗体与固相载体或标记物连接。
包被蛋白指的是包被在固相载体上的蛋白,固相载体包括但不限于磁性微球,纤维素膜,聚苯乙烯,蛋白可以是与待测物质特异性结合的抗原、抗体或其片段、抗原结合剂等。
标记蛋白指的是用标记物标记的蛋白,标记物包括但不限于异鲁米诺及其衍生物、鲁米诺、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等,蛋白可以是与待测物质特异性结合的抗原、抗体或其片段、抗原结合剂等。
如本申请背景技术所分析的,现有技术中多种拓宽免疫学线性检测范围的方法,需要额外增加包被和/或标记抗体的使用量或种类,成本较高,同时抗体组合程度复杂,引入的额外抗体及包被标记容易引起批间差,也难以适应多种方法学的检测。为了降低成本本申请另辟蹊径,通过处理剂的优化实现了拓宽线性范围的目的,基于此,本申请提供了一种处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法。
在本申请一种典型的实施方式中,提供了一种处理剂,该处理剂包括缓冲对、蛋白组分和糖醇组分,上述处理剂中糖醇组分的质量含量为5~20%,优选为10~20%,pH值为5.5~9.5。
上述pH范围的处理剂中糖醇组分的质量含量相对于现有技术中糖醇组分的常规5%以下的含量有明显增加,提高了处理剂的流变学密度,拓宽了线性检测范围。利用处理剂拓宽了线性检测范围,成本较低。
上述处理剂中糖醇组分的质量含量可以为6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%和20%等任意数值。
在本申请一些实施例中,处理剂的pH值为8.5~9.5或5.5~6.5。
上述处理剂中的缓冲对、蛋白组分和糖醇组分均为处理剂的常用组分,申请人在试验中发现处理剂的pH值对于线性检测范围具有一定的影响,并且经过反复试验优化出处理剂的pH值为8.5~9.5或5.5~6.5。
在一些实施例中,上述蛋白组分的质量含量为1~5%。
将处理剂中的蛋白组分含量由常规的0.5%以下上调至本申请的1~5%提高了处理剂的流变学密度,因此进一步有效地拓宽了线性检测范围。
上述蛋白组分的质量含量可以为1%,1.5%,2%,2.5%,3%,3.5%,4%,4.5%,5%等任意数值。
此外,还可以通过对处理剂中缓冲对离子强度的调整来调整线性检测范围,优选地,上述缓冲对离子强度为100~200mM,以实现对线性检测范围的进一步拓宽。本领域技术人员可以采用本领域常用的添加不同浓度的NaCl调节离子强度。
用于本申请的糖醇组分可以为本领域常用的糖醇组分,优选上述糖醇组分包括蔗糖、海藻糖、山梨醇、丙三醇(甘油)和甘露醇中的任意一种或多种的组合。
用于本申请的处理剂中的缓冲对可以为本领域常用的缓冲液体系常用的缓冲对,优选上述处理剂中的缓冲对选自PB缓冲对、PBS缓冲对、Tris-HCl缓冲对和HEPES缓冲对中的任意一种。
用于本申请的蛋白组分可以为本领域常用的蛋白组分,为了进一步提高蛋白组分对体系的稳定作用,优选上述蛋白组分包括牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白和卵清白蛋白中的任意一种或多种的组合。在本申请另一种典型的实施方式中,提供了一种用于免疫学检测的试剂盒,该试剂盒包被蛋白、标记蛋白、和反应缓冲液,所述反应缓冲液为上述任一种的处理剂。
在本申请另一种典型的实施方式中,提供了一种用于免疫学检测的试剂盒,该试剂盒包括包被蛋白和标记蛋白,该包被蛋白和所述标记蛋白中的一种或两种具有组分稀释液,该组分稀释液为上述任一种的处理剂。
本申请的处理剂具有更高的流变学密度,从而拓宽检测线性范围。
本申请的上述试剂盒可以适用于多种抗体的检测,优选地,上述抗体为P1NP抗体、SAA抗体或Anti-hIgM抗体,发光标记物为ABEI,保存稀释液为PBS缓冲液。上述物质的配合使用,能够得到更宽的线性范围。
本申请试剂盒中处理剂之外的各组分具体组成均可参考现有技术,以下以抗体为P1NP抗体,发光标记物为ABEI,保存稀释液为PBS缓冲液为例对试剂盒中各组分的制备进行说明:
(1)P1NP抗体包被的磁性微球:其中磁性微球的浓度是1mg/mL,P1NP抗体的浓度是8μg/mL,P1NP抗体包被的磁性微球按照如下方法制备:
取一定量的磁球(Merck公司生产的Estapor系列羧基化微球M1-180/20)纳米磁球,按每毫克磁球加入10mg的DCC,然后加入DMF溶液使磁球的浓度为20mg/ml,置于在38℃水浴锅中并振摇或者机械搅拌2小时。活化好的纳米磁球溶液去除上清液,然后加入pH9.5的碳酸盐缓冲液,使其浓度达到20mg/mL(以纳米磁球计);再以每毫克磁球8μg的量添加P1NP抗体,然后置于室温震摇反应2小时。磁性分离,用洗液(0.5%BSA溶液)清洗固体三遍,得到包被好P1NP抗体的磁球。检测时将包被好P1NP抗体的磁球加入组分稀释液(碳酸盐缓冲液,也可以是磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或Tris缓冲液或者本申请的处理剂)中,使其浓度为1mg/mL,备用。
(2)ABEI标记的P1NP抗体,其中ABEI浓度:1.563ng/mL,P1NP抗体的浓度:62.5ng/mL;ABEI标记的P1NP抗体按照如下方法制备:
取1mg P1NP抗体,用0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.5)将其体积调至1ml,然后放入透析袋中,并置于pH9.5碳酸盐缓冲液中透析0.5小时。取出透析好的P1NP抗体,加入25μgABEI-半琥珀酰胺酸-NHS,室温震摇2小时。
安装好G-25凝胶柱,用纯化水洗脱干净后,再用pH值7.4的PBS缓冲液进行平衡洗脱。G-25凝胶柱平衡洗脱完毕后,将标记好ABEI的P1NP抗体过柱纯化,然后收集出现峰值的蛋白溶液。将收集好的蛋白溶液,加入等体积的含5%的BSA的保护液,加入稀释液(可以为本申请的处理剂)稀释至ABEI标记抗体浓度为62.5ng/mL。
上述说明仅是示意性说明,本领域技术人员可以根据需要选择相应的固相载体和发光标记物。
在本申请另一种典型的实施方式中,提供了一种免疫学检测方法,该免疫学检测方法包括采用上述任一种的试剂盒对待测物质的相对光强度进行检测,或者采用上述的试剂盒和上述的处理剂对待测物质进行检测,待测物质与试剂盒中的包被蛋白和标记蛋白发生特异性结合。
利用上述任一种的试剂盒采用常用的免疫学检测方法对待测物质的浓度进行检测,通过检测已知不同浓度梯度的样本,得到测定浓度,计算出回收率R(测试浓度和理论浓度的比值),再通过线性回归方程对测定浓度和理论浓度进行拟合,得到回归方程,并得到线性相关系数,回收率(R)越接近[70.0%,130%],或[80%,120%],或[90%-100%]范围时,说明线性越好。r最大值为1,r值越接近1,说明回归直线对检测值的拟合程度越好,也就是线性越好,利用本申请试剂盒在常用的免疫学检测方法检测,得到的线性相关系数r比常规缓冲液得到的线性相关系数更大,更接近1,说明本申请的缓冲液的线性检测范围更宽泛。
在本申请一种实施例中,上述免疫学检测方法包括:步骤S1,将待测物质、试剂盒中的包被蛋白和标记蛋白和处理剂混合并在35~38℃下温育5~9min,形成包括包被蛋白、待测物质与所述标记蛋白反应形成免疫复合物;步骤S2,利用外加磁场将免疫复合物沉淀,并采用清洗液对沉淀后的免疫复合物进行清洗;步骤S3,向清洗后的免疫复合物沉淀加入与标记物反应的底物进行反应,检测相对发光强度。
上述过程为免疫学检测方法的常规流程,其中本申请对温育时间进行控制,调节抗原抗体结合反应时间,从而调节免疫反应动力学效率,以实现改进提升线性的效果。
此外,为了进一步通过检测方法拓宽线性范围,优选上述抗原与缓冲液的体积比为1:15~20。该体积比与常规检测所用体积比相比,缓冲溶液的用量明显增加,从而对样本中待测抗原浓度实现了一定的稀释作用,通过调节抗原抗体结合的反应容积,从而调节免疫反应动力学效率,以实现改进提升线性的效果。
本申请的上述免疫学检测方法可以为标记免疫性分析方法,优选的,选自化学发光免疫分析法、酶联免疫分析法、放射免疫法中的任意一种。或者上述免疫学检测方法为夹心法、捕获法、间接检测法、竞争法中的任意一种。无论上述检测方法基于何种原理,通过调节抗原抗体结合的条件状态,从而调节免疫反应动力学效率,以实现改进提升线性的效果。
上述夹心法应用的试剂盒包括的主要成分是抗体包被的磁性微球,发光标记物标记的抗体,形成的是抗体-待测物-抗体的三元复合物。捕获法应用的试剂盒包括的主要成分是二抗包被的磁性微球,发光标记物标记的抗原,形成的是二抗-待测抗体-抗原的三元复合物。间接法应用的试剂盒包括的主要成分是抗原包被的磁性微球,发光标记物标记的二抗,形成的是抗原-待测抗体-二抗的三元复合物。
竞争法应用的试剂盒采用的主要成分是抗体包被的磁性微球,发光标记物标记的抗原,抗原和待测物质竞争性的与抗体结合。
也有可能是其他非典型的方法学,例如采用特定抗原结合蛋白(例如新冠病毒的ACE2受体)用于包被磁性微球,形成抗原结合蛋白-抗原-抗体的三元复合物,也可以用标记物标记特定抗原结合蛋白等。
在一种实施例中,上述免疫学检测方法为两步夹心法,其中该步骤S1包括:将待测物质、处理剂、包被蛋白混合后在35~38℃下温育5~9min,形成第一混合体系,在磁场中对第一混合体系进行清洗;将清洗后的第一混合体系与标记蛋白混合后在35~38℃下温育5~9min,形成包被蛋白、待测物质与标记蛋白的免疫复合物。两步夹心法可以增加反应体积,可以缩短反应时间,优选的是在两步夹心法中的第一步增加反应体积,缩短反应时间。
以下将结合实施例和对比例,进一步说明本申请有益效果。
以下采用两步夹心法对本申请的免疫学检测方法进行说明。
首先用试剂盒检测样本,具体过程如下:
第一步反应:加入10μL含P1NP抗原的样本,100μL处理剂和20μL P1NP抗体包被的磁性微球溶液混匀,在37℃温育一定时间,在磁环境中清洗3遍,得到清洗后的第一混合体系;
第二步反应:向清洗后的第一混合体系中加入200μL发光标记物,混匀。在37℃温育一定时间,形成包括磁性微球包被的P1NP抗体、待测P1NP抗原、P1NP抗体与ABEI偶联的发光免疫复合物
检测:外加磁场将上述发光免疫复合物沉淀,除去上清液,并以自动灌注系统缓冲液进行清洗,加入化学发光激发物,检测发出的相对光强度(RLU)。
上述实验所用成分:
P1NP抗体包被的磁性微球:磁性微球的浓度是1mg/mL,P1NP抗体的浓度是8μL/mL。
发光标记物:ABEI标记的P1NP抗体,其中ABEI浓度为1.563ng/mL,P1NP抗体的浓度:62.5ng/mL。
处理剂:基础组分为Tris-HCl缓冲液,以下各实施例和对比例中对处理剂的组成进行对比。
检测样本具体信息:
使用零浓度校准品将P1NP企业校准品分别配制成浓度为1200ng/mL(高值样本H)和5.00ng/mL(低值样本L)浓度水平的样本,然后使用H点浓度样本和L点浓度样本进行等浓度间隔稀释得到6个不同浓度水平的样本(如表1所示)。随机抽取一盒试剂,对每一浓度水平的样本重复测定3次,计算测定结果均值,并计算样本的回收率(R),将测定浓度的平均值与理论浓度用最小二乘法进行直线拟合,计算线性相关系数(r),在[5.00,1200]ng/mL浓度范围内,线性相关系数(r)应>0.9900。
表1等浓度间隔稀释获得6个不同浓度水平样本配制
对比例1
处理剂pH=7.0,处理剂离子强度50mM,处理剂中甘油的质量含量为2%,处理剂中酪蛋白质量含量为0.5%,反应过程添加处理剂100μL,两步反应中各温育时间10分钟,测试并计算得到平均回收率(R)和线性相关系数(r)。
以下实施例1至10相对于对比例1,除了特别说明外,仅仅表2至10中的参数进行变化,其它不变。
实施例1:变更对比例1处理剂中的pH值分别为5.5、6.0、6.5、8.5、9.0、9.5,从而验证处理剂中pH值对检测线性的影响,各pH值对应的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表2。
表2
处理剂pH | 平均回收率(R)(%) | 线性相关系数r |
pH5.5 | 73.46 | 0.8023 |
pH6.0 | 81.05 | 0.8779 |
pH6.5 | 77.92 | 0.8466 |
pH7.0(对比例1) | 67.22 | 0.7563 |
pH8.5 | 75.46 | 0.8319 |
pH9.0 | 82.21 | 0.8825 |
pH9.5 | 74.62 | 0.8163 |
实施例2:变更对比例1处理剂中的蛋白类组分的浓度分别为1%,2%,5%,从而验证蛋白类组分对检测线性的影响,酪蛋白含量对应的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表3。
表3
实施例3:变更对比例1处理剂中的离子强度,验证离子强度对检测线性的影响
配制处理剂时,通过添加不同浓度的NaCl调剂离子强度。本实施例在处理剂中分别加入50mM、100mM、150mM和200mM的NaCl,以调节离子浓度在50mM、100mM、150mM和200mM。各离子强度对应的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表4。
表4
实施例4:变更对比例1处理剂中糖醇类组分的浓度,验证糖醇类组分对检测线性的影响,各甘油浓度对应的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表5。
表5
实施例5:变更对比例1处理剂的添加量,验证处理剂使用量对检测线性的影响,使用量平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表6。
表6
反应体积/μL | 平均回收率(R)(%) | 线性相关系数r |
100(对比例1) | 67.22 | 0.7563 |
150 | 77.19 | 0.8405 |
175 | 81.37 | 0.8856 |
200 | 83.90 | 0.9264 |
实施例6:验证温育时间对检测线性的影响,各温育时间对应的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表7。
表7
反应时间/分钟 | 平均回收率(R)(%) | 线性相关系数r |
5 | 82.80 | 0.8897 |
9 | 72.61 | 0.7944 |
10(对比例1) | 67.22 | 0.7563 |
实施例7:验证了前述各技术手段的结合对检测线性的影响,各结合对应的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表8(各实验组除表中呈现的实验条件以外,其他实验条件与对比例1相同)。
表8
实施例8:将实施例6的酪蛋白替换为同等浓度的牛血清白蛋白,得到的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表9。
表9
反应时间/分钟 | 平均回收率(R)(%) | 线性相关系数r |
5 | 82.26 | 0.8815 |
9 | 72.11 | 0.7864 |
10 | 66.59 | 0.7473 |
实施例9:将实施例6的甘油替换为同等浓度的甘露醇,得到的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表10。
表10
反应时间/分钟 | 平均回收率(R)(%) | 线性相关系数r |
5 | 83.48 | 0.8967 |
9 | 73.09 | 0.8059 |
10 | 69.81 | 0.7739 |
实施例10:将实施例6的Tris-HCl缓冲液替换为同等pH的PBS缓冲液,得到的平均回收率(R)和线性相关系数(r)见表11。
表11
反应时间/分钟 | 平均回收率(R)(%) | 线性相关系数r |
5 | 82.06 | 0.8753 |
9 | 69.50 | 0.7728 |
10 | 66.01 | 0.7391 |
从以上的描述中,可以看出,本发明上述的实施例实现了如下技术效果:
上述糖醇组分的质量含量相对于现有技术中糖醇组分的常规5%以下的含量有明显增加,提高了处理剂的流变学密度,拓宽了线性检测范围。利用处理剂拓宽了线性检测范围,成本较低。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (11)
1.一种处理剂,其特征在于,所述处理剂包括缓冲对、蛋白组分和糖醇组分,所述处理剂中所述糖醇组分的质量含量为5~20%,所述处理剂的pH值为5.5~9.5。
2.根据权利要求1所述的处理剂,其特征在于,所述处理剂的pH值为8.5~9.5或5.5~6.5。
3.根据权利要求1所述的处理剂,其特征在于,所述蛋白组分的质量含量为1~5%。
4.根据权利要求1所述的处理剂,其特征在于,所述缓冲对离子强度为100~200mM。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的处理剂,其特征在于,所述糖醇组分包括蔗糖、海藻糖、山梨醇、丙三醇和甘露醇中的任意一种或多种的组合;和/或所述缓冲对选自PB缓冲对、PBS缓冲对、Tris-HCl缓冲对和HEPES缓冲对中的任意一种;和/或所述蛋白组分包括牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白和卵清白蛋白中的任意一种或多种的组合。
6.一种用于免疫学检测的试剂盒,所述试剂盒包括包被蛋白、标记蛋白和反应缓冲液,其特征在于,所述反应缓冲液为权利要求1至5中任一项所述的处理剂。
7.一种用于免疫学检测的试剂盒,所述试剂盒包括包被蛋白和标记蛋白,所述包被蛋白和所述标记蛋白中的一种或两种具有组分稀释液,其特征在于,所述组分稀释液为权利要求1至5中任一项所述的处理剂。
8.一种免疫学检测方法,其特征在于,所述免疫学检测方法包括采用权利要求6所述的试剂盒对待测物质进行检测,或者采用权利要求7所述的试剂盒对待测物质进行检测,或者采用权利要求7所述的试剂盒和权利要求1至5中任一项所述的处理剂对待测物质进行检测,所述待测物质与所述试剂盒中的包被蛋白和标记蛋白特异性结合。
9.根据权利要求8所述的免疫学检测方法,其特征在于,所述免疫学检测方法包括:
步骤S1,将待测物质、所述试剂盒中的包被蛋白和标记蛋白和所述处理剂混合并在35~38℃下温育5~9min,以使所述包被蛋白、待测物质与所述标记蛋白反应形成免疫复合物;
步骤S2,利用外加磁场将所述免疫复合物沉淀,并采用清洗液对沉淀后的所述免疫复合物进行清洗;
步骤S3,向清洗后的所述免疫复合物沉淀加入与标记物反应的底物进行反应,检测相对发光强度;
优选地,所述待测物质与所述处理剂的体积比为1:15~20。
10.根据权利要求9所述的免疫学检测方法,其特征在于,所述免疫学检测方法为标记免疫分析方法,优选地,所述的标记免疫分析方法选自化学发光免疫分析法、酶联免疫分析法、放射免疫法中的任意一种。
11.根据权利要求10所述的免疫学检测方法,其特征在于,所述免疫学检测方法为两步夹心法,所述步骤S1包括:
将所述待测物质、所述处理剂、所述包被蛋白混合后在35~38℃下温育5~9min,形成第一混合体系,在磁场中对所述第一混合体系进行清洗;
将清洗后的第一混合体系与所述标记蛋白混合后在35~38℃下温育5~9min,形成包括所述包被蛋白、所述待测物质与所述标记蛋白的免疫复合物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011631081.7A CN114689868A (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011631081.7A CN114689868A (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114689868A true CN114689868A (zh) | 2022-07-01 |
Family
ID=82135086
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011631081.7A Pending CN114689868A (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114689868A (zh) |
-
2020
- 2020-12-30 CN CN202011631081.7A patent/CN114689868A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112129950B (zh) | 一种检测白介素6的磁微粒化学发光试剂盒 | |
US20180231540A1 (en) | Reagent kit used for detecting gastrin-17, and preparation method and application for reagent kit | |
CN113136269A (zh) | 一种用于化学发光免疫检测的清洗液 | |
CN113391076A (zh) | 一种25-羟基维生素d的免疫检测方法及其应用 | |
CN111562372B (zh) | 一种检测肌酸激酶同工酶ck-mb的胶乳增强免疫比浊法试剂盒 | |
CN114236122A (zh) | 试剂盒及其制备方法和应用 | |
CN110865182B (zh) | 一种阻断剂及其在免疫检测中的应用 | |
CN111007263B (zh) | 一种检测试剂盒及检测方法 | |
CN113640511A (zh) | 一种磁微粒电化学发光试剂盒 | |
CN113671169A (zh) | 用于化学发光免疫检测aep的非特异性吸附清洗液 | |
KR20140057495A (ko) | Pivka-ii 측정 시약에서의 비특이 반응의 억제 방법 | |
EP1079231A1 (en) | Immunoassay reagents and immunoassay method | |
CN114689868A (zh) | 处理剂、用于免疫学检测的试剂盒和免疫学检测方法 | |
CN116008524A (zh) | 一种无蛋白通用型保护液及其制备方法和在真菌毒素定量检测试剂盒中的应用 | |
EP0886754B1 (en) | Non-competitive immunoassay with blocking of unoccupied specific binding sites on solid phase | |
CN116183931A (zh) | 一种半乳糖凝集素-3磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒 | |
US20110136261A1 (en) | Method of assaying complex and kit to be used therefor | |
US7252961B2 (en) | Competitive immunoassay using complexed analyte derivatives | |
CN115201183A (zh) | 一种单人份S100β蛋白化学发光测定试剂盒及其测定方法 | |
Son et al. | Strategies for the optimization of bead-immunoassays for the effective detection of target biomolecules | |
US9541550B2 (en) | Method for immunologically measuring soluble LR11 | |
CN107976539B (zh) | 一种降低酶联免疫法包被后本底的方法 | |
CN110862438B (zh) | 一种复合物及其制备方法与应用 | |
EP0903582B1 (en) | Ligand binding surfaces | |
CN113686841B (zh) | 定量检测甲状腺素结合力试剂盒及其制备方法、检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |