CN114686586B - 一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物及其应用 - Google Patents

一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物及其应用。所述的分子标志物组合物为miR‑4455、miR‑574‑5p和miR‑4701‑3p的组合物。所述的分子标志物组合物在制备结核性胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的用途。本发明首次使用高通量微阵列芯片鉴定用于区分结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的胸腔积液差异miRNA，并在独立样本中进一步验证。本发明提供并鉴定了可用于鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的病灶部位的miRNA组合物，对于提高结核性胸膜炎的诊断十分重要。

Description

一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物及其应用。
背景技术
多种疾病可以引起胸腔积液的异常积聚，包括结核性胸膜炎、恶性胸膜疾病及肺炎等。在结核病高负担国家，由结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病引发的胸腔积液最为常见。目前，结核性胸膜炎的诊断主要依靠病史、临床表现、影像学、胸腔积液常规检查和疗效观察，确诊率较低，特别是与恶性胸膜疾病及其他感染性胸膜疾病鉴别诊断困难。
目前，结核性胸膜炎的诊断金标准仍然是胸腔积液中查到结核分枝杆菌。但是，应用常规涂片方法找到抗酸杆菌的灵敏度极低(0～1％)，胸腔积液中难以检测出结核分枝杆菌。另外，胸腔积液培养结核分枝杆菌灵敏度在11～50％，而且需要2～4周的培养时间。
结核性胸膜炎的诊断其他方法如：(1)分子生物学诊断是近年来的热点，但即使是敏感性较高的Xpert MTB/RIF检测，对于结核性胸腔积液的诊断敏感性仅为50％左右；(2)胸膜组织活检发现结核性肉芽肿、干酪性坏死或有抗酸杆菌存在，但此项检查创伤较大，手术风险较高；(3)传统的生化免疫学检查如纤维连接蛋白、腺苷脱氨酶、铁蛋白、溶菌酶以及胸腔积液血清白蛋白比值检测，有助于胸腔积液的诊断，但敏感性和特异性均无法满足诊断要求。因此，结核性胸膜炎虽然有多种诊断方式，但仍缺乏简便、经济、快速的确诊方法。
临床上与结核性胸膜炎最难以鉴别诊断的是恶性胸膜疾病，尽管胸腔积液细胞学检查对恶性胸腔积液的诊断具有重要的意义，胸腔积液中查到癌细胞或取得组织学诊断乃是恶性胸腔积液的金标准，但常规的细胞学检查阳性率较低(30～60％)，尤其是较早期异形性不太明显的癌细胞与间皮细胞几乎无法区别，以至造成诊断结果中存在着相当数量的假阴性。胸腔镜检查对恶性胸腔积液的诊断具有较高的价值，但因费用昂贵，操作难度大且有一定的手术风险，患者较难接受。
因此，实现结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的鉴别诊断，对后续精准治疗具有重要意义。
微小核糖核酸(microRNA,miRNA)存在于真核生物中，是一类长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子。可以在外周血、胸腔积液和脑脊液等多种体液中检测到，且稳定性较好，显现其出作为生物标志物的潜在可能性；与此同时，越来越多的实验表明，miRNAs在分枝杆菌感染过程中起到重要的调控作用，其异常表达与疾病的发生发展转归相关；且在其他疾病如肺癌、乳腺癌和宫颈癌等，已经有用miRNA作为生物标志物用于疾病诊断的相关研究。
对于胸腔积液miRNA作为生物标志物也有过相关研究，主要集中于恶性胸膜疾病的胸腔积液特异miRNA，发现miR-198、miR-134、miR-185、miR-22、miR-195-5p、miR-182-5p和miR-34a-5p等在恶性胸膜疾病的胸腔积液中特异表达，具有作为恶性胸膜疾病诊断用生物标识物的潜力。但是，既往研究主要集中于癌症，部分研究并没有将结核性胸膜炎单独分组，而是将其与其他炎性疾病合并为良性胸膜疾病组，与恶性胸膜疾病进行比较分析。
临床上，结核性胸膜炎最直接的确诊依据为胸腔积液中存在结核分枝杆菌，但因受限于诊断技术，大部分疑似患者并不能获得确诊结果，临床医生通常会根据是否合并肺结核(痰中查到结核分枝杆菌)、其他生化指标以及临床症状等进行判断，因此在临床上根据诊断证据级别的不同，通常分为3类结核性胸膜炎：1、在胸腔积液中查到结核分枝杆菌，直接诊断结核性胸膜炎；2、胸腔积液中未能查到结核杆菌，但患者痰液中查到结核杆菌，间接诊断结核性胸膜炎；3、胸腔积液和痰液中均未查到结核杆菌，仅能依靠其他生化指标和症状经临床诊断为结核性胸膜炎。具备鉴别诊断效能的特异miRNA，应该在这三类结核性胸膜炎患者的胸腔积液中稳定表达，且与恶性胸膜疾病的胸腔积液中的表达量存在显著差异。
综上所述，开发一种新的敏感度和特异度较高、操作性强且快速的早期诊断方法或技术，对于诊断和鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病，减少医疗资源消耗，将有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种敏感度和特异度较高、用于鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的病灶部位的分子标志物组合物及其在结核性胸膜炎诊断中的应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物，所述的分子标志物组合物为miR-4455、miR-574-5p和miR-4701-3p的组合物。
本发明还提供所述分子标志物的用途。
所述的分子标志物组合物在制备结核性胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的用途。
进一步的，所述诊断为区分结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病。
本发明还提供一种结核性胸膜炎辅助诊断试剂盒。
一种结核性胸膜炎辅助诊断试剂盒，包括检测分子标志物组合物表达量的试剂。
进一步的，所述试剂盒还包括RNA提取、反转录及qPCR检测的试剂。
进一步的，所述检测表达量的试剂为检测引物；
其中miRNA上游引物分别为：
hsa-miR-574-5p，其序列为5’-TCGGCAGGTGAGTGTGTGT-3’；
hsa-miR-4455，其序列为5’-GCCGAGAGGGTGTGTGTGTT-3’；
hsa-miR-4701-3p，其序列为5’-TCGGCAGGATGGGTGATG-3’；
下游引物为通用引物，其序列为5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’。
本发明还提供结核性胸膜炎诊断试剂盒的用途。
所述的诊断试剂盒制备结核性胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的用途。
进一步的，所述诊断为区分结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病。
为了鉴定用于区分结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的胸腔积液差异miRNA，并揭示结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病形成的不同病理生理过程，本发明提供了一项全基因组miRNA芯片筛查，完成了包括临床常见的3类结核性胸膜炎患者和恶性胸膜疾病患者的胸腔积液miRNA特异表达谱的筛选和对比分析，其中3类不同的结核性胸膜炎患者分别与恶性胸膜疾病患者的胸腔积液miRNA表达谱进行对比分析，发现10个miRNA在三类结核性胸膜炎组与恶性胸膜疾病组相比中都具有统计学差异。
进一步在另一组独立人群中对这10个差异miRNA进行了qPCR验证，包括结核性胸膜炎患者188例、恶性胸膜疾病患者122例。验证结果说明胸腔积液中miR-574-5p、miR-4701-3p和miR-4455的表达在结核性胸膜炎组仍然显著高于恶性胸膜疾病组，差异具有统计学意义(P<0.0001)。
受试者操作特征曲线(ROC)分析显示，这3种miRNA用于结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病鉴别诊断的ROC曲线下面积(AUC)均大于0.9，三种miRNA(miR-4455、miR-574-5p和miR-4701-3p)组合具有更好的鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的能力。
本发明首次使用高通量微阵列芯片鉴定用于区分结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的胸腔积液差异miRNA，并在独立样本中进一步验证。
本发明提供并鉴定了可用于鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的病灶部位的miRNA组合物，对于提高结核性胸膜炎的诊断十分重要。
附图说明
图1是ROC曲线分析miR-574-5p、miR-4701和miR-4455联合用于结核性胸膜炎及恶性胸膜疾病鉴别诊断的价值。
图中，A为贝叶斯模型；B为决策树模型；C为Logistic回归模型；D为支持向量机模型。
具体实施方式
为使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，以下实施例对本发明作进一步详细描述，以下实施例仅用于说明发明，但不用来限制本发明的范围。
一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物，所述的分子标志物组合物为miR-4455、miR-574-5p和miR-4701-3p的组合物。
本发明还提供所述分子标志物的用途。
所述的分子标志物组合物在制备结核性胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的用途。
进一步的，所述诊断为区分结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病。
本发明还提供一种结核性胸膜炎辅助诊断试剂盒。
一种结核性胸膜炎辅助诊断试剂盒，包括检测分子标志物组合物表达量的试剂。
进一步的，所述试剂盒还包括RNA提取、反转录及qPCR检测的试剂。
进一步的，所述检测表达量的试剂为检测引物；
其中miRNA上游引物分别为：
hsa-miR-574-5p，其序列为5’-TCGGCAGGTGAGTGTGTGT-3’；
hsa-miR-4455，其序列为5’-GCCGAGAGGGTGTGTGTGTT-3’；
hsa-miR-4701-3p，其序列为5’-TCGGCAGGATGGGTGATG-3’；
下游引物为通用引物，其序列为5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’。
本发明还提供结核性胸膜炎诊断试剂盒的用途。
所述的诊断试剂盒制备结核性胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的用途。
进一步的，所述诊断为区分结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病。
实施例1
miRNA芯片筛查试验
(1)研究对象
结核性胸膜炎患者：根据临床证据级别纳入三类结核性胸膜炎患者，
组1(TPE1)：胸腔积液结核杆菌病原学检测阳性的患者；
组2(TPE2)：胸腔积液结核杆菌病原学检测阴性但痰标本病原学检测阳性的患者；
组3(TPE3)：胸腔积液和痰结核杆菌病原学检测均阴性，但临床诊断为结核性胸膜炎。
结核性胸膜炎患者入组标准：
①临床有低热、盗汗、消瘦、胸痛、干咳等临床症状；②胸腔积液符合渗出液改变；③经抗结核治疗后胸腔积液吸收，临床症状缓解；④胸腔积液结核杆菌病原学检测阳性；⑤痰液结核杆菌病原学检测阳性；⑥胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)大于40U/L。具备第①～③项，且④～⑥项中任意一项者。
病原学检测阳性包括：结核分枝杆菌培养阳性，或者结核分枝杆菌涂片抗酸染色阳性，或者结核分枝杆菌分子生物学检测阳性。
恶性胸膜疾病患者：纳入1组恶性胸膜疾病患者。恶性胸膜疾病患者入组标准：胸腔积液脱落细胞学检查找到恶性肿瘤细胞或胸膜活检确诊胸膜组织中存在肿瘤细胞，并除外合并有细菌和结核感染等其它原因所致胸腔积液。
(2)芯片检测数据
组1(TPE1)：胸腔积液结核杆菌病原学检测阳性的患者，共6例；组2(TPE2)：胸腔积液结核杆菌病原学检测阴性但痰标本病原学检测阳性的患者，共7例；组3(TPE3)：胸腔积液和痰结核杆菌病原学检测均阴性，但临床诊断为结核性胸膜炎，共7例。
纳入1组肺癌患者，经病理和细胞学检测确认为肺癌，共6例。
芯片检测：按照商品化血液/血浆提取纯化试剂盒(QIAGEN，德国)说明书从患者胸腔积液样本(200μL)中提取总RNA。采用Agilent 8*60k人类miRNA微阵列芯片进行检测(包含miRbaseV21.0数据库中2549个人类miRNA的探针)，将总RNA(100ng)作为样本进行标记和杂交，使用扫描仪控制软件将微阵列图像信息转换为光点强度值用于计算，将原始样本检测数据标准化后得到MPE/TPE的差异倍数(Fold change，Fc)。
分析结果见表1。
表1 miRNA芯片结果分析
注：TPE为结核性胸膜炎组，其中TPE1胸腔积液结核杆菌病原学检测阳性组，TPE2为胸腔积液结核杆菌病原学检测阴性但痰液结核杆菌病原学检测阳性，TPE3为胸腔积液和痰液结核杆菌病原学检测均阴性，但临床诊断为结核性胸膜炎。MPE为恶性胸膜疾病组。P值为恶性胸膜疾病组与结核性胸膜炎组标准化信号值比较结果，p<0.05为有统计学意义。Fc,fold change(差异倍数)。
由表1可知，上述10个miRNA在三类结核性胸膜炎组与恶性胸膜疾病组相比中都具有统计学差异。
实施例2
qPCR验证试验
(1)试剂：
qPCR用内参基因：Cel-miR-39(QIAGEN，德国)；
RNA提取、反转录及qPCR检测的试剂为商业化试剂(QIAGEN，德国)。
(2)引物：
miRNA上游引物
Cel-miR-39：5‘-GCCGAGAGCTGATTTCGTCT-3’
hsa-miR-574-5p：5’-TCGGCAGGTGAGTGTGTGT-3’
hsa-miR-4455：5’-GCCGAGAGGGTGTGTGTGTT-3’
hsa-miR-4701-3p：5’-TCGGCAGGATGGGTGATG-3’
下游引物为通用引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’
(3)仪器：ABI Quantistudio7。
(4)试验方法：
将上述10个miRNA进行大样本量qPCR验证试验(结核性胸膜炎患者188例、恶性胸膜疾病患者122例)。
具体实验过程如下：
1)RNA提取：取250μL胸腔积液，在4℃、16000×g、离心10min后，吸取上层胸腔积液200μL，加入1mL TRIzol裂解5min，加入200μL氯仿以及3.5μLSpike-ln control cel-miR-39-3p内参(1.6×108拷贝量/μL)，充分震荡混匀15s，室温放置2-3min，4℃、12000×g、离心15min。转移上层透明水相至新的无酶离心管中，加入1.5倍体积的100％分析纯乙醇，充分混匀，加入收集柱中，室温10000×g离心15s，依次加入700μL RWT洗液和500μLRPE洗液，室温10000×g离心15s，加入500μL 80％乙醇，室温10000×g离心2min，然后将收集柱放入新的离心管中，室温14000×g离心5min至膜完全干燥。将收集柱放入新的离心管中，加入14μLRNase-free ddH20，室温放置2min，室温14000×g离心1min，收集离心管中液体，使用超微量紫外分光光度计(NanoDrop2000)测定RNA浓度和纯度。
2)RNA反转录：根据RNA的浓度和反转录试剂盒(miScript II RT Kit，QIAGEN)说明书进行操作。取4μL miScript HiSpec buffer(5×)、2μL miScript Nucleics Mix(10×)、2μL miScript Reverse Transcriptase Mix、100ngRNA和适量RNase-free ddH2O组成20μL反转录体系。37℃孵育60min，95℃灭活酶5min，完成反转录。
3)qPCR扩增：按照miScript PreAMP PCR Kit说明书进行预扩增，取待检测miRNA的引物(10×)各10μL，混合并稀释至0.4×，制成引物Mix备用。预扩增缓冲液5μL、HotStarTaq DNA聚合酶2μL、引物Mix 5μL、通用引物1μL、cDNA5μL、7μL nuclease-freeddH2O，配置成25μL预扩增反应体系，在普通PCR仪(Mycycler，Bio-rad)按照如下程序完成预扩增：95℃ 15min，然后94℃30s和60℃3min循环12次。预扩增产物进行8x稀释，然后取2μL预扩增产物稀释液、10μL PCR Master Mix(2×)、2μL待检测miRNA引物(10×)、2μL通用引物(10×)、6μL RNase-free ddH2O，组成20μL qPCR扩增体系，在qPCR检测仪(Quantistudio7，ABI)按照如下程序完成扩增：95℃15min，然后94℃15s，55℃30s，70℃30s循环40次。4)根据qPCR检测数据，以cel-miR-39为内参，采用2-ΔCT法计算各靶标miRNA的相对表达量。
(5)原始检测数据见表2。
表2 qPCR检测原始数据(相对表达量)
TPE：结核性胸膜炎；MPE：恶性胸膜疾病
(5)qPCR验证结果分析结果见表3。
表3.qPCR验证结果分析
miRNA Fc(MPE/TPE) P μ(MPE) μ(TPE)
miR-574-5p 0.05 <0.000 10.039±13.82 201.72±262.21
miR-4455 0.06 <0.000 0.054±0.075 0.93±1.19
miR-4701-3p 0.04 <0.000 0.22±0.47 5.75±9.07
注：TPE结核性胸膜炎组，MPE为恶性胸膜疾病组。P值为恶性胸膜疾病组与结核性胸膜炎组相对表达量比较结果(Mann-Whitney U test)，p<0.05为有统计学意义。Fc,foldchange(差异倍数)。μ组内均数±标准差。
实施例3
ROC分析单个miRNA的诊断敏感性和特异性分析
应用受试者工作特征曲线(ROC)在188例结核性胸膜炎患者和122例恶性胸膜疾病患者中对胸腔积液miR-574-5p、miR-4701-3p和miR-4455这三个差异miRNA进行了ROC曲线分析，结果见表4所示。
表4.胸腔积液中单一miRNA鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的诊断价值
结果说明miR-574-5p、miR-4701-3p和miR-4455用于结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病鉴别诊断的ROC曲线下面积(AUC)均大于0.9，具有很好的鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的能力。
实施例4
基于不同数学模型构建的诊断模型价值分析
miR-4455、miR-574-5p和miR-4701-3p的组合物基于不同数学模型构建的诊断模型价值结果如表5及图1所示。
表5基于不同数学模型评价3个miRNA组合用于鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的价值
(310例，miR-574-5p_miR-4701-3p_miR-4455)
由表5和图1可知，本发明提供的用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物miR-4455、miR-574-5p和miR-4701-3p的组合物，可用于鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病，具备临床诊断的实际价值。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种变换，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征和步骤，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (3)

1.一种检测生物标志物组合物表达量的试剂在制备鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜炎的试剂或试剂盒中的用途，所述生物标志物组合物为miR-4455、miR-574-5p 和 miR-4701-3p的组合。
2.如权利要求1所述的检测生物标志物组合物表达量的试剂在制备鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜炎的试剂或试剂盒中的用途，其特征在于：所述鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜炎的试剂或试剂盒还包括RNA提取、反转录及 qPCR 检测的试剂。
3.如权利要求1所述的检测生物标志物组合物表达量的试剂在制备鉴别诊断结核性胸膜炎和恶性胸膜炎的试剂或试剂盒中的用途，其特征在于，所述生物标志物组合物表达量的试剂为检测引物； 其中 miRNA 上游引物分别为：
hsa-miR-574-5p，其序列为 5’-TCGGCAGGTGAGTGTGTGT -3’；
hsa-miR-4455，其序列为 5’-GCCGAGAGGGTGTGTGTGTT -3’； hsa-miR-4701-3p，其序列为 5’-TCGGCAGGATGGGTGATG-3’；
下游引物为通用引物，其序列为 5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2021049671A1 (ja) * 2019-09-09 2021-03-18 国立大学法人東海国立大学機構 マイクロｒｎａを含む体液抽出物
CN114369656A (zh) * 2022-01-24 2022-04-19 首都医科大学附属北京胸科医院 一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物及其应用和试剂盒

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180057883A1 (en) * 2016-08-31 2018-03-01 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and Methods for the Diagnosis and Treatment of Lupus Nephritis

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021049671A1 (ja) * 2019-09-09 2021-03-18 国立大学法人東海国立大学機構 マイクロｒｎａを含む体液抽出物
CN114369656A (zh) * 2022-01-24 2022-04-19 首都医科大学附属北京胸科医院 一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物及其应用和试剂盒

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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A comparative characterization of the circulating miRNome in whole blood and serum of HCC patients;Devis pascut等;scientific reports;第9卷;摘要和表1 *

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