CN114681385A - 一种舒缓修复组合物及制备方法和在敏感肌修护的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及A61K，更具体地，本发明涉及一种舒缓修复组合物及制备方法和在敏感肌修护的应用。包括：依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液。本发明提供的组合物通过依克多因搭配神经酰胺构建保护及修护作用屏障，可起到高效保护、高效修护屏障损伤、高效保湿的作用，适用于敏感性皮肤修护。且通过添加乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液，与依克多因协同增效，进一步发挥舒缓、修护、保湿的作用，促进成分的吸收，让屏障恢复强韧，修护肌肤敏感。因为神经酰胺脂溶体的结构，当作用于水基护肤品时，往往需要添加表面活性剂，而本发明利用依克多因和发酵产物滤液，可在不添加表面活性剂的同时，得到高分散体系。

Description

一种舒缓修复组合物及制备方法和在敏感肌修护的应用
技术领域
本发明涉及A61K，更具体地，本发明涉及一种舒缓修复组合物及制备方法和在敏感肌修护的应用。
背景技术
目前存在多种护肤原料提供抗衰、保湿、美白、防晒等功效，但由于护肤原料中刺激性成分等作用，长期使用时会影响皮肤健康，尤其对皮肤敏感人群，肌肤会变得越来越脆弱甚至受损。
CN113730314A涉及一种抗衰舒缓组合物，包括银耳异聚多糖、酵母锌、西洋梨提取物、车前子提取物、水解羽扇豆蛋白、皱波角叉菜、依克多因、褐藻提取物、羟基积雪草苷和乳酸杆菌发酵溶胞产物等，具有抗衰、舒缓抗敏等效果。
但目前舒缓成分往往难以有效抵御刺激原，比如紫外照射或者刺激性成分造成的皮肤问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明第一个方面提供了一种舒缓修复组合物，所述组合物的制备原料包括：依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液。
依克多因作为一种强效水结构形成物，发明人发现，其多电荷的结构可和神经酰胺脂质体，以及乳酸杆菌/豆浆发酵产物中维生素、蛋白质、多肽、核苷、磷脂、矿物质、有机酸等多种物质作用，有利于当用于水基体系作用于人体时，促进神经酰胺和发酵产物周边水分子增加和分散，促进蛋白质的展开，且利用作为皮肤组成部分的神经酰胺NP的作用，促进组合物成分的渗透以及表面防水屏障的形成，且经过乳酸杆菌分解的豆浆发酵产物中较多的小分子在防水屏障中形成更多地活性分子，抵御刺激因子SLS等造成的刺激性，以及对保水效果的影响。
作为本发明一种优选的技术方案，所述依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液的重量比为1～20：1～20：10～30。
作为本发明一种优选的技术方案，所述依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液的重量比为5～15：5～15：15～25。
此外，发明人也发现，通过控制依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液的用量，可更进一步抵御受到紫外、SLS等作用造成皮肤受损的同时，可促进蛋白膜套CE组装，强化天然保湿因子透明质酸等以及胶原蛋白的合成，并进一步实现重建皮肤屏障，增加皮肤屏障厚度，从而可减少刺激因子对敏感性或受损皮肤的刺激，并进一步促进本发明提供的组合物适用于敏感人群，改善皮肤炎症、缺水、脱屑、红肿等问题。
本发明组合物的原料均为市售产品，其中依克多因可购自BITOP的
Figure BDA0003548247070000021
natural等；神经酰胺NP可购自索路斯的HC-50、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液可购自AXIALYS的奥婷敏LF16-35，本发明乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液为包括溶剂和LACTOBACILLUS/SOYMILK FERMENT FILTRATE的混合物，其中LACTOBACILLUS/SOYMILKFERMENT FILTRATE占乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液的5～15wt％，溶剂可为水、醇或其混合物，如奥婷敏LF16-35包括水81wt％、LACTOBACILLUS/SOYMILK FERMENT FILTRATE10wt％、丁二醇7wt％、1,2-戊二醇2wt％。
本发明第二个方面提供一种护肤舒缓修复剂，所述舒缓修复剂包括如上所述的组合物。
作为本发明一种优选的技术方案，所述舒缓修复剂按重量百分数计，包括：
余量的水；
依克多因1～20wt％；
神经酰胺NP 1～20wt％；
乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液10～30wt％。
作为本发明一种优选的技术方案，所述舒缓修复剂的制备原料按重量百分数计，包括：
余量的水；
依克多因5～15wt％；
神经酰胺NP 5～15wt％；
乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液15～25wt％。
本发明提供一种包括依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液的修复剂，可用于水、乳、霜、面膜液、膏等不同的护肤品中，其中虽然本发明神经酰胺NP选择水溶性的神经酰胺NP，但是也需控制浓度在5％以下，且乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液中复杂的成分也会造成修复剂乳液的稳定，而发明人发现，当选择合适浓度的依克多因水复合物，可促进神经酰胺NP脂质体周围水增加，且乳酸杆菌/豆浆发酵产物多成分和依克多因的作用，也可减少低温下依克多因水冰晶的行程，从而得到稳定的修复剂。
作为本发明一种优选的技术方案，所述舒缓修复剂的制备原料按重量百分数计，还包括：增稠剂0～1wt％，优选为0～0.3wt％，所述增稠剂选自卡波姆、黄原胶、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物，优选为黄原胶。目前为了提高稳定性，在护肤品中都会添加大分子的增稠剂等物质，但该类物质会在皮肤表面形成大分子膜，当用手涂抹护肤品时，会出现颗粒，而本发明提供的修复剂可在不使用或者低使用量时，可形成均匀乳液，且在高温或低温时也可达到好的流动和分散性。
作为本发明一种优选的技术方案，所述舒缓修复剂的制备原料按重量百分数计，还包括：多元醇1～5wt％，所述多元醇选自1,3-丁二醇、丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、1,2-辛二醇，优选为己二醇、戊二醇。因豆浆发酵产物中的营养成分的存在，一般在使用时会添加防腐剂，但是化学防腐剂同样会对皮肤造成刺激等，而本发明通过添加多元醇作为抑菌剂，并协助乳酸杆菌使得发酵带来的弱酸性环境和成分，可避免微生物生长，从而促进修复剂长时间粘度稳定。本发明不对多元醇的种类做具体限定，从抑菌效果出发，可选择多元醇两种或多种的组合，如重量比为1：4-8的1,2-己二醇、1,2-戊二醇。
本发明第三个方面提供了一种所述的舒缓修复剂的制备方法，包括：
将神经酰胺加入55～65℃，800～1500r/min的水中，保温搅拌10～20min后，降温至40～50℃、脱泡后，加入投入依克多因、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液，在250～500rpm/min搅拌10～20min后，得到所述修复剂。
作为本发明一种优选的技术方案，所述舒缓修复剂的制备方法，包括：
将神经酰胺NP加入55～65℃，800～1500rpm/min的水中，保温搅拌10～20min后，加入增稠剂和多元醇的混合物，在2000～3000rpm/min均质后，真空脱泡，降温至40～50℃，加入依克多因、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液混合物，在250～500rpm/min搅拌10～20min后，得到所述修复剂。
在制备过程中，神经酰胺NP加入之前可将水升温至85-100℃灭菌，且加入神经酰胺NP后保温搅拌至均匀无颗粒，在加入预先混合至无结块的增稠剂和水混合，消泡。且依克多因、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液混合物可预先混合，在40～50℃保温搅拌至完全溶解后加入。
本发明第四个方面提供了一种所述的舒缓修复组合物在敏感肌修护的应用。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
(1)本发明提供的组合物通过依克多因搭配神经酰胺构建保护及修护作用屏障，可起到高效保护、高效修护屏障损伤、高效保湿的作用，适用于敏感性皮肤修护。
(2)且通过添加乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液，与依克多因协同增效，进一步发挥舒缓、修护、保湿的作用，促进成分的吸收，让屏障恢复强韧，修护肌肤敏感。
(3)此外，因为神经酰胺脂溶体的结构，当作用于水基护肤品时，往往需要添加表面活性剂，而本发明利用依克多因和发酵产物滤液，可在不添加表面活性剂的同时，得到高分散体系。
(4)且一般情况下，为了提高稳定性，需添加增稠剂，和少量多元醇等来增加组合物的稳定性，起到一定防腐效果的同时，发明人也发现，增稠剂的使用也使使用后，会出现残留在皮肤上的问题，而本发明通过使用修复组合物共同作用，可减少增稠剂和多元醇用量，促进保持组合物分散体系稳定，避免残留在皮肤上的问题。
附图说明
图1为IL-1α结果柱状图。
图2为组织形态图片。
图3为角质层厚度柱状图。
图4为活细胞层厚度柱状图。
图5为FLG图片。
图6为FLG蛋白含量柱状图。
图7为LOR图片。
图8为LOR蛋白含量柱状图。
图9为AQP3图片。
图10为AQP3蛋白含量柱状图。
具体实施方式
实施例
实施例使用的原料均为市售产品，依克多因可购自BITOP的
Figure BDA0003548247070000052
natural；神经酰胺NP可购自索路斯的HC-50、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液可购自AXIALYS的奥婷敏LF16-35。
实施例1～3提供一种组合物
实施例1～3提供一种组合物，所述组合物的制备原料如表1所示。
表1
实施例 依克多因、神经酰胺、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液重量比
1 6：8：20
2 10：8：20
3 10：12：20
实施例4～6提供一种包括实施例1～3组合物的舒缓修复剂及其制备方法
实施例4～6提供的舒缓修复剂的制备原料按重量百分数计，如表2所示。
表2
Figure BDA0003548247070000051
Figure BDA0003548247070000061
实施例4～6提供的舒缓修复剂的制备方法包括：
1、纯化水，投入反应釜中，升温至90℃，保温30分钟，灭菌；
2、降温至60℃，开启反应釜均质：1000rpm/min，将神经酰胺NP撒入反应釜，60℃保温搅拌15min至料体均匀一致无颗粒，再投入增稠剂和多元醇，均质：2500rpm/min，2min后，真空脱泡；
3、降温至45℃，投入依克多因、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液，搅拌350rpm/min，15分钟，取料体检测合格后，200目过滤出料。
性能评价
将实施例4～6提供的舒缓修复剂作为实验组进行下述实验。
1、观感指标：实施例4～6与标准品比对，符合以下观感指标：
(1)外观：流动性乳液；
(2)颜色：乳白色；
(3)质地：均匀一致。
2、理化指标：实施例4～6与标准品比对，符合以下理化指标：
(1)pH值(25℃)：6.5-7.5(直测)；
(2)离心考验(2000rpm/min，30min)：无分层；
(3)高低温测试：(分别在48℃、40℃、5℃、-15℃静置7天后，恢复常温，与当日制备的样品比对，无差异。
3、微生物指标：实施例4～6符合以下理化指标：
(1)细菌：≤100CFU；
(2)真菌和酵母菌：≤100CFU；
(3)致病菌：不得检出。
4、使用残留性：将脸部用洗面奶清洁后，将实施例4～6稀释10倍后涂抹在脸上，揉搓10min，观察是否会出现颗粒，发现完全吸收，无颗粒存在。
5、性能测试：
敏感肌是累及屏障受损、神经血管、免疫炎症的复杂循环过程。当皮肤角质层结构被破坏，屏障功能受损，表皮细胞间脂质含量不平衡，神经酰胺含量减少，皮肤水分流失加剧，会表现干燥脱屑。同时敏感肌较正常肌肤而言，感觉神经功能失调，当被刺激时，会出现烧灼、刺痛及瘙痒症状。刺激也可能导致角质形成细胞、肥大细胞等活化，并分泌炎性因子，导致血管反应性增高及血管扩张，表现红、肿、热、痛及瘙痒。
针对敏感肌的发生机制及表现，本发明提供的组合物从多方面解决敏感肌问题。通过为敏感肌肤建立保护，防止外界刺激对敏肌造成进一步损伤，同时对损伤的屏障进行修护，并且舒缓敏感肌肤的高反应状态，使肌肤回到健康强韧的状态，而为了验证本发明组合物的作用，本发明通过SLS刺激三维表皮模型
Figure BDA0003548247070000071
模拟敏感肌受到刺激后表皮组织形态退化，炎症因子增加，屏障相关基因蛋白程度下降等现象，本通过使用组合物来观察IL-1α因子、皮肤模型组织(角质层、活细胞层)形态变化、蛋白(FLG、LOR、AQP3)浓度的变化，验证本发明组合物对敏感肌的修复和免疫调节作用，具体测试如下。
将实施例4～6提供的舒缓修复剂加水稀释作为样品组、并设置空白对照BC、阴性对照NC、阳性对照PC，进行测试，测试方法为：
1.1模型给药
1)根据测试方案，将模型转移到6孔板中(提前添加0.9mLEpiGrowth培养液)，在6孔板上标注测试组编号。
2)NC和PC组表面添加25μL0.2％的SLS溶液，样品组表面添加12.5μL0.4％的SLS溶液和12.5μL相应浓度的样品工作液，将样品均匀分布于模型表面，置于CO2培养箱(37℃，5％CO2)中孵育24h。
3)孵育结束后，用无菌PBS溶液清洗模型表面残留的受试物，用无菌棉签轻轻拭去模型内、外残留液体，进行下列测试；
1.2ELISA测试
重组人白介素IL-1α作为炎症因子的一种，在结构上与成纤维细胞生长因子有关，并参与皮肤修复过程，可通过IL-1α的变化来观察受刺激后皮肤模型的皮肤舒缓能力。
1)收集模型培养液：孵育结束后，收集模型培养液于EP管中，置于-80℃冰箱保存。
2)炎症因子含量的检测：通过炎症因子IL-1α、IL-6ELISA检测试剂盒进行检测。
3.结果分析：应用GraphPadPrismProgram软件作图，各组间采用t-test统计分析，*p＜0.05表示差异显著，**p＜0.01表示差异极显著。
其中样品组、检测系统如表1所示。
表1
Figure BDA0003548247070000081
IL-1α测试结果如表2和图1所示。
表2
平均浓度(pg/mL) SD P-value
BC 1.71 0.26 /
NC 102.31 3.16 0.000##
PC(地塞米松) 80.71 1.61 0.000**
样品组1 55.92 0.75 0.000**
样品组2 48.96 0.77 0.000**
样品组3 68.15 0.35 0.000**
备注：用t-test方法进行统计分析时，NC组与BC组相比，显著性以#表示，P-value＜0.05表示为#，P-value＜0.01表示为##；PC组、样品组与NC组相比，显著性以*表示，，P-value＜0.05表示为**，P-value＜0.01表示为**。
与BC组相比，NC组的IL-1α含量显著上升，说明本次实验刺激条件有效。与NC组相比，PC(地塞米松)组的IL-1α含量显著下降，说明本次阳性对照检测有效。与NC组相比，样品1-3的IL-1α含量显著下降。
1.3组织形态测试
当皮肤受到刺激后，其表皮中的角质层、活细胞层会受到损伤，造成表皮层变薄，紧致度下降，影响皮肤作为屏障的作用，故为了观察本发明提供的组合物对表皮不同层的的影响，对组织形态以及表皮层的厚度进行测试。
取模型，用4％的多聚甲醛进行固定处理，固定24h后，将模型环切取下，进行H&E染色检测，显微镜下拍照观察，采集图片并分析。
其中样品组、检测系统如表3所示。
表3
Figure BDA0003548247070000091
得到组织形态图片如图2所示，可发现与BC组相比，NC组表皮模型角质层疏松增厚(红色箭头标记)，活细胞层受损，活细胞层数减少(绿色箭头标记)、有空泡出现(红色圆圈)，说明SLS刺激条件有效。与NC组相比，PC(WY14643)组模型四层结构边界清晰，活细胞层细胞排列紧凑，角质层疏松增厚现象明显改善，说明本次阳性对照检测有效。与NC组相比，样品1～3给药组模型四层结构边界清晰，活细胞层细胞排列紧凑，空泡减少，角质层疏松增厚现象明显改善。
并用t-test方法进行统计分析角质层厚度和活细胞层厚度，其中表4中NC组与BC组相比，显著性以#表示，P-value＜0.05表示为#，P-value＜0.01表示为##；PC组、样品组与NC组相比，显著性以*表示，P-value＜0.05表示为**，P-value＜0.01表示为**。
角质层厚度结果如表4和图3所示。
表4
平均厚度(μm) SD P-value
BC 11.62 2.21 /
NC 24.72 1.51 0.000##
PC(WY14643) 20.57 1.11 0.000**
样品组1 19.44 1.22 0.000**
样品组2 18.36 2.53 0.000**
样品组3 20.42 1.50 0.000**
如表4和图3可知与BC组相比，NC组的角质层厚度显著上升，说明本次实验刺激条件有效。与NC组相比，PC(WY14643)组的角质层厚度显著下降，说明本次阳性对照检测有效。与NC组相比，样品1～3的角质层厚度显著下降。
活细胞层厚度结果如表5和图4所示。
表5
平均厚度(μm) SD P-value
BC 25.09 1.71 /
NC 22.64 0.67 0.001##
PC(WY14643) 28.46 1.11 0.000**
样品组1 29.35 1.49 0.000**
样品组2 25.63 0.78 0.000**
样品组3 26.15 0.95 0.000**
1.4 FLG、LOR、AQP3测试
水通道蛋白3AQP3、兜甲蛋白LOR、丝聚蛋白FLG均为和保湿和屏障相关的蛋白，当受到刺激后，其表达水平发生下降，通过观察添加本发明提供的组合物后对FLG、LOR、AQP3的表达的影响，来验证组合物对保湿和皮肤屏障的作用。
取模型，用4％的多聚甲醛进行固定处理，固定24h后，将模型环切取下，进行免疫荧光检测，显微镜下拍照观察，采集图片，并用t-test方法进行统计分析角质层厚度，结果如表4和图3所示，其中表4中NC组与BC组相比，显著性以#表示，P-value＜0.05表示为#，P-value＜0.01表示为##；PC组、样品组与NC组相比，显著性以*表示，P-value＜0.05表示为**，P-value＜0.01表示为**。
其中样品组、检测系统如表6所示。
表6
Figure BDA0003548247070000111
1)FLG图片和数据分析
得到FLG图片如图5所示，FLG数据和柱状图如图6和表7所示，可发现与BC组相比，NC组的FLG蛋白含量显著下降，说明本次实验刺激条件有效。与NC组相比，PC(WY14643)组的FLG蛋白含量显著上升，说明本次阳性对照检测有效。与NC组相比，样品1～3的FLG蛋白含量显著上升。
表7
相对IOD平均值 SD P-value
BC 1.00 0.05 /
NC 0.37 0.01 0.000##
PC(WY14643) 3.43 0.42 0.000**
样品组1 5.97 0.27 0.000**
样品组2 1.57 0.06 0.000**
样品组3 1.65 0.07 0.000**
2)LOR图片和数据分析
得到LOR图片如图7所示，LOR数据和柱状图如图8和表8所示，可发现与BC组相比，NC组的LOR蛋白含量显著下降，说明本次实验刺激条件有效。与NC组相比，PC(WY14643)组的LOR蛋白含量显著上升，说明本次阳性对照检测有效。与NC组相比，样品维肌舒CBT1号、维肌舒CBT2号、维肌舒CBT3号的LOR蛋白含量显著上升。
表8
相对IOD平均值 SD P-value
BC 1.00 0.09 /
NC 0.55 0.04 0.001##
PC(WY14643) 1.31 0.04 0.000**
样品组1 1.55 0.10 0.000**
样品组2 0.85 0.07 0.003**
样品组3 0.77 0.06 0.005**
3)AQP3图片和数据分析
得到AQP3图片如图9所示，AQP3数据和柱状图如图10和表9所示，可发现与BC组相比，NC组的FLG蛋白含量显著下降，说明本次实验刺激条件有效。与NC组相比，PC(WY14643)组的FLG蛋白含量显著上升，说明本次阳性对照检测有效。与NC组相比，样品1～3的FLG蛋白含量显著上升。
表9
相对IOD平均值 SD P-value
BC 1.00 0.11 /
NC 0.23 0.01 0.000##
PC(WY14643) 0.62 0.01 0.000**
样品组1 0.78 0.03 0.000**
样品组2 0.55 0.01 0.000**
样品组3 0.80 0.05 0.000**
从上述测试可知，本发明提供的组合物可用于受损皮肤模型的修复，对皮肤模型中蛋白和细胞组织增殖和生长具有明显效果，可用于敏感肌等肌肤的屏障增强。

Claims (10)

1.一种舒缓修复组合物，其特征在于，所述组合物的制备原料包括：依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液。
2.根据权利要求1所述的舒缓修复组合物，其特征在于，所述依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液的重量比为1～20：1～20：10～30。
3.根据权利要求2所述的舒缓修复组合物，其特征在于，所述依克多因、神经酰胺NP、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液的重量比为5～15：5～15：15～25。
4.一种护肤舒缓修复剂，其特征在于，包括权利要求1～3任意一项所述的组合物。
5.根据权利要求4所述的护肤舒缓修复剂，其特征在于，所述舒缓修复剂按重量百分数计，包括：
余量的水；
依克多因1～20wt％；
神经酰胺NP 1～20wt％；
乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液10～30wt％。
6.根据权利要求5所述的护肤舒缓修复剂，其特征在于，所述舒缓修复剂的制备原料按重量百分数计，包括：
余量的水；
依克多因5～15wt％；
神经酰胺NP 5～15wt％；
乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液15～25wt％。
7.根据权利要求4～6任意一项所述的护肤舒缓修复剂，其特征在于，所述舒缓修复剂的制备原料按重量百分数计，还包括：增稠剂0～1wt％，优选为0～0.3wt％。
8.根据权利要求4～6任意一项所述的护肤舒缓修复剂，其特征在于，所述舒缓修复剂的制备原料按重量百分数计，还包括：多元醇1～5wt％。
9.一种根据权利要求4～8任意一项所述的护肤舒缓修复剂的制备方法，其特征在于，包括：
将神经酰胺加入55～65℃，800～1500r/min的水中，保温搅拌10～20min后，降温至40～50℃、脱泡后，加入投入依克多因、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液，在250～500rpm/min搅拌10～20min后，得到所述修复剂。
10.一种根据权利要求1～3任意一项所述的舒缓修复组合物在敏感肌修护的应用。
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