CN114657228A - 一种单环刺螠中提取ace抑制肽的方法及应用 - Google Patents
一种单环刺螠中提取ace抑制肽的方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114657228A CN114657228A CN202210532502.3A CN202210532502A CN114657228A CN 114657228 A CN114657228 A CN 114657228A CN 202210532502 A CN202210532502 A CN 202210532502A CN 114657228 A CN114657228 A CN 114657228A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ace inhibitory
- inhibitory peptide
- urechis unicinctus
- drying
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000237921 Urechis unicinctus Species 0.000 title claims abstract description 68
- 101000984728 Chiropsoides quadrigatus Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptide Proteins 0.000 title claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 58
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 33
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 10
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 57
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 32
- 230000002358 autolytic effect Effects 0.000 claims description 22
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 8
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 6
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 claims description 6
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 6
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 5
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 claims description 5
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 claims description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 5
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 claims description 3
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims description 3
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 claims description 3
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 claims description 3
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 claims description 3
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 claims description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 3
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 claims description 3
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims description 2
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 11
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 2
- 102000004270 Peptidyl-Dipeptidase A Human genes 0.000 description 29
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 description 29
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 15
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 108010007119 flavourzyme Proteins 0.000 description 3
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 102400000344 Angiotensin-1 Human genes 0.000 description 2
- 101800000734 Angiotensin-1 Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000251511 Holothuroidea Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N angiotensin I Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 2
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 244000132059 Carica parviflora Species 0.000 description 1
- 235000014653 Carica parviflora Nutrition 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 241000237928 Urechis Species 0.000 description 1
- 206010047139 Vasoconstriction Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- XSDQTOBWRPYKKA-UHFFFAOYSA-N amiloride Chemical compound NC(=N)NC(=O)C1=NC(Cl)=C(N)N=C1N XSDQTOBWRPYKKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002576 amiloride Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940127088 antihypertensive drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- FAKRSMQSSFJEIM-RQJHMYQMSA-N captopril Chemical compound SC[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O FAKRSMQSSFJEIM-RQJHMYQMSA-N 0.000 description 1
- 229960000830 captopril Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000019784 crude fat Nutrition 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000025033 vasoconstriction Effects 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明属于生物资源综合利用领域，具体涉及一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法及应用。将单环刺螠预处理后，加入优化后的复合蛋白酶酶解，灭酶后过滤收集上清；通过梯级透析获得粗溶液后，利用柱层析精细纯化，低温干燥得ACE抑制肽干粉。通过本方法制备得到的单环刺螠ACE抑制肽活性好，成本低，易于大量生产，可用于食品的组方生产。同时实现了单环刺螠的综合高值利用，具有良好的经济和社会效益。
Description
技术领域
本发明属于生物资源综合利用领域，具体涉及一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法及应用。
背景技术
单环刺螠，又称海肠或海肠子，是生活在海边潮间带泥性底质或珊瑚礁区中的管状螠虫动物，因其营养组成和海参有较多相似之处，故有“裸体海参”的美称。单环刺螠蛋白质含量为22.84%，且富含多种人类必需氨基酸，粗脂肪含量低至4.24%。其体内含有多糖、多肽、功能蛋白等多种活性成分，在抗凝血、抗肿瘤、降血压、降血脂、降血糖等方面具有较好的开发前景。因此探究单环刺螠深加工工艺，提取和利用单环刺螠营养成分具有良好的现实意义。但由于原材料生产及深加工技术工艺的缺乏，单环刺螠的综合利用，特别是有关单环刺螠体内活性物质的规模制备尚未实现，极大限制了该类活性物质的运用。
血管紧张素转化酶(ACE)又称激肽酶Ⅱ，是一种血管内皮细胞膜结合酶，其可将人体中的血管紧张素I转化为血管紧张素II，导致人体血管收缩，促使血压升高，目前认为ACE与高血压症密切相关。
现阶段使用最广泛的处方合成类降压药如:阿米洛利、卡托普利等，均旨在抑制血管紧张素I转化酶活性。但长期服用处方类降压药,会随之产生副作用。而天然食物来源的ACE抑制肽具有安全、易被人体吸收、产生的不良影响少等优势，已成为新药研发和替代治疗的可选择途径。如将食源性蛋白通过不同的酶酶解后，再利用多种分离纯化方法，从动植物中获得天然的ACE抑制活性肽片段，其主要来源于牛奶、大豆、鸡蛋、大蒜、玉米等。海洋生物来源的ACE抑制肽也有陆续报道，目前已从贝类、甲壳类、以及各种鱼中提取到多种类型的ACE抑制肽。与陆生动、植物来源相比，海洋生物来源的ACE抑制肽因与人体存在较远的亲缘关系，基本不存在人畜共患疾病的风险。同时由于结构较为新颖，活性相对较高，具有较高的市场应用价值。但目前报道的ACE抑制肽的制备工艺繁琐，来源相对局限，生产成本较高，难以实现大量生产。本发明利用前期开发制备的单环刺螠自溶酶进行单环刺螠的复合酶解，制备出较高活性的ACE抑制肽。生产成本降低，可用于大量生产。目前，尚未有单环刺螠来源ACE抑制活性肽分离纯化的报道。
发明内容
根据上述现有技术，本发明公开一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法及应用。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，将单环刺螠预处理后，加入蛋白酶进行酶解，灭酶后过滤收集上清；通过梯级透析获得粗溶液后，利用柱层析精细纯化，低温干燥得ACE抑制肽干粉；其中，所述酶为单环刺螠自溶酶、地衣芽孢杆菌蛋白酶、胶原蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或多种。
所述收集的上清液依次经10kDa、3kDa、1kDa进行梯度透析，收集1kDa以下截留组分。
进一步的说：
（1）将-20--10℃冷冻储存的单环刺螠置于20-30℃解冻3-5h，去杂质后，加入其5-10倍体积的处理液对其浸泡20-40min，匀浆；
（2）在步骤（1）得到的匀浆液中添加其质量1-3％的酶，调节温度至30-55℃，pH为4-11，酶解1-5h，80-100℃灭酶10-20min。冷却至15-25℃，6000—10000 r/min离心10-30min，过滤收集上清液；
（3）将步骤（2）所得的上清液依次装入截留分子量10kDa、3kDa、1kDa的透析袋进行梯度透析，每次透析于4-10℃的透析液中透析10-20h，得到1kDa以下截留组分粗溶液；
（4）将步骤（3）所得的ACE抑制肽粗溶液，通过葡聚糖凝胶柱层析进行精细纯化，用含有0.01-0.05mol/L的Zn离子的无菌水洗脱，收集洗脱液经228nm测定吸光度，将吸光度为228nm的洗脱液低温干燥，得ACE抑制肽。
所述步骤（1）处理液为：每100mL处理液中含氯化钠0.9g、氯霉素0.05-0.1g、青霉素0.05-0.1g、EDTA·2Na 0.05-0.5g，余量为无菌水。
所述步骤（3）透析液为0.9%的生理盐水、pH7.0的磷酸盐缓冲液、无菌水中的一种或几种。
所述纯化后的ACE抑制肽经低温烘干、低温喷雾干燥、低温减压干燥、旋转蒸发干燥中一种或几种方式进行干燥处理。
所述低温干燥时采用的助干剂为海藻糖、菊粉、麦芽糊精、β-环糊精、玉米淀粉、脱脂奶粉中的一种或几种；其中，助干剂添加量为所含固形物总体质量的8-200%，干燥温度为30-55℃。
优选地，纯化后的液体选择菊粉作为助干剂，30-55℃低温喷雾干燥制备。
一种所述方法获得的单环刺螠ACE抑制肽，按所述方法获得分子量为1000Da以下的单环刺螠ACE抑制肽。
一种所述单环刺螠ACE抑制肽的应用，所述单环刺螠ACE抑制肽在制备作为调理高血压症的食品中的应用，进一步的，该食品为保健食品或医学配方食品。
本发明方法通过最优酶解法由单环刺螠中提取获得ACE抑制肽，并且进一步的优化方法确定了ACE抑制肽活性最强的肽段区间，并选择合适的干燥助剂，利用低温喷雾干燥法进行生产。由此可见本发明所得ACE抑制肽活性好，活性肽肽段相对集中，生产成本低，易于大量生产。进而可用于食品的组方生产。同时实现了单环刺螠的综合高值利用，具有良好的经济和社会效益。
附图说明
图1为本发明中制备的单环刺螠自溶酶蛋白电泳图，其中，M为蛋白marker，1为经透析所得的单环刺螠自溶酶，2为层析后所得的单环刺螠自溶酶。
图2为5种蛋白酶酶解单环刺螠制备ACE抑制肽的ACE抑制效果对比图。
图3为不同干燥温度对ACE抑制率的影响，其中，1为120℃，2为80℃，3为30℃，4为55℃，5为100℃。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。
实施例1：单环刺螠自溶酶的制备
1.1单环刺螠自溶酶粗酶溶液的制备：
（1）取-20--10℃冷冻储存的单环刺螠废弃内脏常温解冻，待彻底解冻后，用无菌水清洗，去除杂质。加入PBS（0.1mol/l，pH8 .0）进行匀浆，并置于4℃环境下过夜，5000r/min条件离心8min，收集上清液；
（2）向上述收集的上清液中加入硫酸铵至20%饱和度，置于4℃环境下4h；8000r/min条件离心10min，收集上清液，向上清液中加入硫酸铵至70%饱和度，置于4℃环境下4h；8000r/min条件离心10min，取沉淀，向沉淀中加入其10倍体积的PBS缓冲液，用截留分子量是8KD-14KD的透析袋透析，得到自溶酶粗酶溶液。
1.2柱层析分离纯化自溶酶：
（1）透析后得到的自溶酶粗酶溶液进行离心12000r/min，离心10min得到上清；
（2）将步骤（1）所得到上清通过Sephadex G-100柱层析进行分离纯化，用含有0.015mol/L的Zn离子的PBS洗脱，酶标仪在340nm下测定吸光度并收集得到自溶酶溶液；
（3）将步骤（2）所得的自溶酶溶液经过SDS-PAGE鉴定，显示自溶酶的大小为8-10KD，如图1所示。
同时单环刺螠自溶酶的获得可参见申请号为CN201911388353.2，发明名称为“一种单环刺螠自溶酶的制备及应用”的中国专利文献中记载的方式获得。
实施例2：ACE抑制肽酶解目标蛋白酶的筛选
2.1原料的预处理：称取单环刺螠冷冻品1kg，静置于20℃解冻3h，而后加入其5倍体积的处理液中浸泡30min，处理液组成为氯化钠4.5g、氯霉素0.25g、青霉素0.25g、EDTA·2Na 0.25g、无菌水4.09475kg。匀浆。
2.2原料的离心：匀浆液中添加其质量2％的酶，最适条件下酶解，100℃灭酶15min；酶解后冷却至20℃，8000 r/min离心20 min，过滤收集上清液。
2.3蛋白酶筛选：在浆液中分别加入5种蛋白酶，料液比为1:2，其中，2% 单环刺螠自溶酶，PH 7.5，2%的地衣芽孢杆菌蛋白酶，PH 7.0 ；2%的枯草芽孢杆菌蛋白酶，PH 7.0 ；2%的碱性蛋白酶，PH 8.5 ；风味蛋白酶，PH7；搅拌条件下加入酶使其充分混合。
2.4酶解：
单环刺螠自溶酶37℃酶解2h后，在95℃条件下，作用15min高温灭酶；
地衣芽孢杆菌蛋白酶50℃酶解2h后，在95℃条件下，作用15min高温灭酶；
枯草芽孢杆菌蛋白酶53℃酶解2h后，在95℃条件下，作用15min高温灭酶；
碱性蛋白酶50℃酶解2h后，在95℃条件下，作用15min高温灭酶；
风味蛋白酶53℃酶解2h后，在95℃条件下，作用15min高温灭酶。
2.5离心：将酶解液冷却至20℃，8000转/min离心10min，收集上清液，在0.45 μm的滤膜中过滤上清液。
2.6测定ACE抑制率：ACE抑制率的检测参照文献(CN 113444145 A)中的方法进行。配置HHL溶液和ACE溶液：将ACE和HHL分别溶解在pH8.3，0.1 mol/L的硼酸钠缓冲溶液（含0.3 mol/L的NaCl）中，获得酶活力为0.1 U/mL的ACE溶液和浓度为5.82 mmol/L HHL溶液。ACE抑制率检测：取酶解液50 μL于1.5 ml离心管中（对照组加入50 μL的硼酸钠缓冲液），加入5.82 mmol/L HHL溶液100 μL，混匀。在37℃水浴锅中放置5 min，分别加入10 μL ACE溶液，混匀。在37℃水浴锅中放置30 min，分别加入150 μL、浓度为1 mol/L的HCl溶液，混匀至反应终止。分别加入1 mL的乙酸乙酯，振荡30 s，离心（4000 r/min，10 min）。静置，完全分离有机相和水相，移取0.8 mL上层有机相至2 mL离心管，在85℃水浴锅中将乙酸乙酯完全挥发。加入1 mL的蒸馏水使其充分溶解，测定该溶液在228 nm处的吸光度值（A228）。
其中: I 为ACE 抑制率；A0 为对照组的吸光度值；A1 为供试品的吸光度值。
结果如图2显示利用酶解法制备ACE抑制肽，各酶类所得产物的活性依次为：单环刺螠自溶酶>碱性蛋白酶>风味蛋白酶>地衣芽孢杆菌蛋白酶>枯草芽孢杆菌蛋白酶。
实施例3：ACE抑制肽酶解工艺的优化。
根据实施例2所选的单环刺螠自溶酶，进行单因素及响应面工艺优化。
3.1原料的预处理：称取单环刺螠冷冻品1kg，静置于20℃解冻3h，而后加入其5倍体积的处理液中浸泡30min，处理液组成为氯化钠4.5g、氯霉素0.25g、青霉素0.25g、EDTA·2Na 0.25g、无菌水4.09475kg。匀浆。
3.2原料的离心：匀浆液中添加其质量2％的酶，最适条件下酶解，100℃灭酶15min；酶解后冷却至20℃，8000 r/min离心20 min，过滤收集上清液。
3.3单因素实验：分别测定料液比（1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3），加酶量（1%、1.5%、2%、2.5%、3%），酶解时间（0 h、1.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h）对该蛋白酶酶解单环刺螠ACE抑制肽活性的影响。水解完成后于100 ℃保温10 min灭酶，以4000 r/min离心10 min，收集上清液进行ACE抑制活性测定。
3.4响应面优化：确定料液比、加酶量和酶解时间3个单因素的水平分别为：料液比（1∶1.5，1∶2和1∶2.5 g/mL）、加酶量（2%，2.5%和3%）、酶解时间（0.5，1和1.5 h）。以料液比、加酶量和酶解时间三个实验因素为自变量，水解度为响应值，用Design Expert 8.0软件，采用Box-Behnken设计进行响应面优化实验，分析研究这3个因素对提取工艺的影响，以ACE抑制率为指标，确定单环刺螠ACE抑制肽的最佳酶解工艺。单环刺螠自溶酶酶用量 ≥2500U/mg，加酶量3%，料液比1:1.68，温度 37℃下酶解1.5 h，酶解产物 ACE 抑制率最高可达52%。
实施例4：ACE抑制肽的分离纯化。
根据实施例3所优化的酶解工艺，制得粗酶解液，进行纯化。
4.1原料的预处理：称取单环刺螠冷冻品1kg，静置于20℃解冻3h，而后加入其5倍体积的处理液中浸泡30min，处理液组成为氯化钠4.5g、氯霉素0.25g、青霉素0.25g、EDTA·2Na 0.25g、无菌水4.09475kg。匀浆。
4.2原料的离心：匀浆液中添加其质量2％的酶，最适条件下酶解，100℃灭酶15min；酶解后冷却至20℃，8000 r/min离心20 min，过滤收集上清液。
4.3酶解：使用实施例3所优化的单环刺螠自溶酶，酶解条件为：料液比1:1.68、加酶量3%、酶解时间1.5h。
4.4纯化：根据最佳酶解工艺，制备ACE抑制肽，将上述获得酶解液依次通过10kDa、3 kDa、1 kDa，超滤离心，1 kDa以下的组分，检测其ACE抑制率；同时选择超滤离心截留1-3kDa的组分作为对比。
将上述收集1 kDa以下的组分，以及作为对比为1-3kDa的组分用G-25葡聚糖凝胶柱，过滤层析。
将纯化后的酶解液用超低温冷冻干燥，将所得的小于1 kDa冻干粉取出，以50 mg/mL的浓度上样3 mL，洗脱（0.2 mL/min），测吸收值（220 nm），收集样品，每管约3 mL，冻干，配置成50 mg/ml，检测ACE抑制率。采用5%浓缩胶和18%分离胶对最佳酶解条件下制备的ACE抑制肽的分子量进行测定，上样7μL，跑胶。用考马斯亮蓝蛋白快速染液染色观察。
4.5测定ACE抑制率：ACE抑制率的检测参照实施例2进行。
结果可知，所制备的活性最好的ACE抑制肽分子量小于1kDa，且条带较为均一，ACE抑制率在小于1 kDa分子量区间最强，可达83.27±0.53%；同时，作为对比为1-3kDa的组分的抑制率为52.64±3.14%。
实施例5：ACE抑制肽的低温干燥
5.1 干燥载体的选择：按照实施例4大量制备小于1 kDa分子量ACE抑制肽。将纯化累积得到0.6L样品平均分为2份，取1份80℃彻底烘干后测得固形物含量为0.8g/100mL。另一份按每100mL添加1.5g菊粉为助干剂，采用低温喷雾干燥机干燥温度为80℃进行喷雾干燥；两种干燥方式进行比较，采用低温喷雾干燥机干燥的效果突出，其喷雾效果和产物得率为所得粉末为淡黄色或白色，有单环刺螠特殊气味，得率平均为每100mL 2.5-3.5g。同时，也可按每100mL分别添加0.1-2.5g的海藻糖、菊粉、麦芽糊精、β-环糊精、玉米淀粉、脱脂奶粉做为助干剂和载体，而后采用低温喷雾干燥机干燥温度为80℃进行喷雾干燥。
5.2 干燥温度对活性影响的分析：将纯化累积得到0.5L样品平均分为5份，按照上述低温喷雾干燥机干燥条件进行，进调整干燥室温度分别为30、55、80、100、120℃，据出粉效果调整流速。将收集得到的干燥样品溶解后，按照实施例2进行ACE抑制率的测定。结果可知，低温干燥制备的ACE抑制肽效果较好。与冷冻干燥（温度-10—-40摄氏度，压力1.3-13帕，抑制率为49～62%）所得的样品相比，低温喷雾干燥机在30-55℃干燥的样品ACE抑制率可保持在45-60%，由此可见低温喷雾干燥机干燥方式可用于大量生产，并且所得产物可常温保存。
Claims (9)
1.一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：将单环刺螠预处理后，加入蛋白酶进行酶解，灭酶后过滤收集上清；通过梯级透析获得粗溶液后，利用柱层析精细纯化，低温干燥得ACE抑制肽干粉；其中，所述酶为单环刺螠自溶酶、地衣芽孢杆菌蛋白酶、胶原蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或多种。
2.按权利要求1所述的单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：所述收集的上清液依次经10kDa、3kDa、1kDa进行梯度透析，收集1kDa以下截留组分。
3.按权利要求1或2所述的单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：
（1）将-20--10℃冷冻储存的单环刺螠置于20-30℃解冻3-5h，去杂质后，加入其5-10倍体积的处理液对其浸泡20-40min，匀浆；
（2）在步骤（1）得到的匀浆液中添加其质量1-3％的酶，调节温度至30-55℃，pH为4-11，酶解1-5h，80-100℃灭酶10-20min，冷却至15-25℃，6000—10000 r/min离心10-30 min，过滤收集上清液；
（3）将步骤（2）所得的上清液依次装入截留分子量10kDa、3kDa、1kDa的透析袋进行梯度透析，每次透析于4-10℃的透析液中透析10-20h，得到1kDa以下截留组分粗溶液；
（4）将步骤（3）所得的ACE抑制肽粗溶液，通过葡聚糖凝胶柱层析进行精细纯化，用含有0.01-0.05mol/L的Zn离子的无菌水洗脱，收集洗脱液经228nm测定吸光度，将吸光度为228nm的洗脱液低温干燥，得ACE抑制肽。
4.按权利要求3所述的单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：所述步骤（1）处理液为：每100mL处理液中含氯化钠0.9g、氯霉素0.05-0.1g、青霉素0.05-0.1g、EDTA·2Na0.05-0.5g，余量为无菌水。
5.按权利要求3所述的单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：所述步骤（3）透析液为0.9%的生理盐水、pH7.0的磷酸盐缓冲液、无菌水中的一种或几种。
6.按权利要求3所述的单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：所述纯化后的ACE抑制肽经超低温冷冻干燥、低温烘干、低温喷雾干燥、低温减压干燥、旋转蒸发干燥中一种或几种方式进行干燥处理。
7.按权利要求6所述的单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：所述低温干燥时采用的助干剂为海藻糖、菊粉、麦芽糊精、β-环糊精、玉米淀粉、脱脂奶粉中的一种或几种；其中，助干剂添加量为所含固形物总体质量的8-200%，干燥温度为30-55℃。
8.一种权利要求1所述方法获得的单环刺螠ACE抑制肽，其特征在于：按权利要求1方法获得分子量为1000Da以下的单环刺螠ACE抑制肽。
9.一种权利要求8所述单环刺螠ACE抑制肽的应用，其特征在于：所述单环刺螠ACE抑制肽在制备作为调理高血压症的食品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210532502.3A CN114657228A (zh) | 2022-05-17 | 2022-05-17 | 一种单环刺螠中提取ace抑制肽的方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210532502.3A CN114657228A (zh) | 2022-05-17 | 2022-05-17 | 一种单环刺螠中提取ace抑制肽的方法及应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114657228A true CN114657228A (zh) | 2022-06-24 |
Family
ID=82037646
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210532502.3A Pending CN114657228A (zh) | 2022-05-17 | 2022-05-17 | 一种单环刺螠中提取ace抑制肽的方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114657228A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105111282A (zh) * | 2015-09-11 | 2015-12-02 | 哈尔滨工业大学 | 一种具有ace抑制活性的核桃肽及其制备方法 |
| CN105203671A (zh) * | 2015-11-05 | 2015-12-30 | 浙江省海洋水产研究所 | 海洋生物源多肽的高效液相色谱和凝胶渗透色谱分离纯化方法 |
| CN110760494A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-02-07 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种单环刺螠自溶酶的制备及应用 |
| CN112501230A (zh) * | 2020-12-17 | 2021-03-16 | 浙江海洋大学 | 一种单环刺螠ace抑制肽的制备方法及应用 |
| CN114410558A (zh) * | 2022-01-24 | 2022-04-29 | 江南大学 | 具有降血压功能的ace抑制肽-aceip及其基因工程制备方法 |
-
2022
- 2022-05-17 CN CN202210532502.3A patent/CN114657228A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105111282A (zh) * | 2015-09-11 | 2015-12-02 | 哈尔滨工业大学 | 一种具有ace抑制活性的核桃肽及其制备方法 |
| CN105203671A (zh) * | 2015-11-05 | 2015-12-30 | 浙江省海洋水产研究所 | 海洋生物源多肽的高效液相色谱和凝胶渗透色谱分离纯化方法 |
| CN110760494A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-02-07 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种单环刺螠自溶酶的制备及应用 |
| CN112501230A (zh) * | 2020-12-17 | 2021-03-16 | 浙江海洋大学 | 一种单环刺螠ace抑制肽的制备方法及应用 |
| CN114410558A (zh) * | 2022-01-24 | 2022-04-29 | 江南大学 | 具有降血压功能的ace抑制肽-aceip及其基因工程制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张晓晓等: "响应面法优化酶解单环刺内脏多肽的工艺研究", 《食品研究与开发》 * |
| 石彦国: "《大豆制品工艺学 第2版》", 30 June 2005, 中国轻工业出版社 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108823273B (zh) | 一种具有抗氧化活性的牡丹籽粕多肽及其制备方法和应用 | |
| CN109400678A (zh) | 一种刺参来源的抗氧化和dpp-iv抑制活性肽 | |
| CN102000121A (zh) | 北虫草寡肽组合物及其制备方法和使用 | |
| CN108484723B (zh) | 浒苔来源的血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用 | |
| CN109293740A (zh) | 一种牡蛎来源的ace抑制及抗肿瘤活性肽 | |
| CN111704650B (zh) | 具有降尿酸功效的多肽、组合物、复合制剂及制备方法和应用 | |
| CN104745665A (zh) | 具有促进骨骼生长作用的胶原肽及其制备方法和应用 | |
| CN102078012A (zh) | 一种枯草芽孢杆菌固体氨肽酶在紫菜复合酶解中的应用 | |
| CN111269290B (zh) | 一种鲟鱼抗炎肽的制备方法 | |
| CN104131055B (zh) | 一种藻红蛋白ace抑制肽的制备方法 | |
| KR101150425B1 (ko) | 미더덕 유래의 혈압조절용 조성물 | |
| CN104531663A (zh) | 鱿鱼碎肉制备高f值寡肽固定化酶水解方法 | |
| CN1166316C (zh) | 利用低值小杂鱼制备蛋白提取物的方法 | |
| CN109206483A (zh) | 一种贻贝来源的ace抑制及抗肿瘤活性肽 | |
| CN114657228A (zh) | 一种单环刺螠中提取ace抑制肽的方法及应用 | |
| CN108396047A (zh) | 一种小公鱼免疫调节肽的制备方法 | |
| CN103966291A (zh) | 酵母蛋白胨 | |
| CN107496465A (zh) | 基于球藻提取物的复配物及其制备方法 | |
| CN114989250B (zh) | 一种来源于海水珍珠的血管紧张素转化酶抑制多肽及其应用 | |
| CN115715796A (zh) | 一种可降低尿酸的组合物及应用 | |
| CN106084000B (zh) | 一种单环刺螠内脏蛋白源锌螯合肽 | |
| CN114657229A (zh) | 一种由海参内脏提取ace抑制肽的方法及应用 | |
| CN107338277A (zh) | 一种超声破碎小麦蛋白制备高f值寡肽的方法 | |
| CN102690854B (zh) | 一种利用虾壳制备血管紧张素转化酶抑制肽的方法 | |
| CN106636267A (zh) | 一种小分子参蚝多肽的提取方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220624 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |