CN114652857B - 一种用于修复内皮糖萼受损的靶向药物递送系统及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于修复内皮糖萼受损的靶向药物递送系统，该系统包括链接反式环辛烯基团的糖萼修复药物和E‑选择素结合肽修饰并装载四嗪基团的脂质体，属于药剂学领域。本发明制备的脂质体具有靶向性，且能通过EBP肽与内皮细胞上高表达的E‑选择素特异性结合，同时脂质体上装载的四嗪能够展示在糖萼受损的内皮细胞上并通过生物正交反应特异性识别并结合糖萼修复材料，从而实现糖萼受损部位的定点修复，达到靶向治疗急性肺损伤的目的。

Description

一种用于修复内皮糖萼受损的靶向药物递送系统及其制备 方法
技术领域
本发明属于药剂学领域，具体涉及一种用于修复内皮糖萼受损的靶向药物递送系统及其制备方法。
背景技术
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的全球流行使得急性肺损伤(ALI)这一概念再次进入大众的视野。急性肺损伤是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致的急性低氧性呼吸功能不全[1]。目前，除保护性机械通气、糖皮质激素治疗、液体管理措施外，可用于ALI的治疗手段相对有限，且临床治疗停留在处理原发病和并发症的支持治疗上，缺乏有效的针对其病理生理机制的治疗手段和靶向性药物[2]。
在急性肺损伤过程中，糖萼是最先也是受损最严重的部位之一。糖萼是位于血管内皮细胞管腔面细胞膜上的蛋白质-多糖复合物，层厚0.1-1.0μm，由血管内皮细胞合成分泌，是构成血管内皮表面的重要结构，其主体成分为蛋白聚糖和糖蛋白[3]。蛋白聚糖具有核心蛋白和带负电荷的糖胺聚糖(GAG)侧链结构。GAG的主要成分包括透明质酸、硫酸乙酰肝素(HS)、硫酸软骨素、角蛋白和硫酸皮肤素等[4]，其中HS的含量最高。在正常的生理状况下，糖萼均匀且有序地分布在内皮细胞顶膜上。而在急性肺损伤过程中，内皮细胞上的糖萼发生破损并有脱落入血的情况[5]。糖萼破损在一方面会导致连接紧密的内皮细胞之间出现疏松，进而导致血管通透性增加，使得血管中的水分和血浆蛋白等物质渗透到肺间质和肺泡中，引起并加重了肺水肿。在另一方面，糖萼的破坏使得内皮细胞表面的黏附分子暴露，有利于炎性细胞与内皮细胞黏附，并有利于炎性细胞的迁移，进而引起炎症的散播[6,7]。因此，可以通过修复内皮糖萼来治疗急性肺损伤。同时，E-选择素是一种细胞黏附分子选择素，内皮糖萼被破坏后，黏附分子暴露也使得E-选择素在内皮细胞上高表达[8]。因此可以利用E-选择素在被激活的内皮细胞上特异性高表达的性质，将药物递送到内皮糖萼受损的部位。E-选择素结合肽(EBP肽)能够特异性地结合E-选择素[9]，因此利用EBP肽就能够将药物被动靶向至内皮糖萼受损部位。
脂质体是由双层脂质膜以同心圆形式包绕形成的单层或多层球形微粒[10]。脂质体被广泛使用，但其内吞效率通常较低。诱导脂质体与细胞膜融合是提高递药效率的有效方法[11]。
生物正交反应是指在活体细胞或组织中，能够在不干扰生物自身生化反应条件下可以进行的化学反应，具有正交性和高反应速率的共轭反应。化学生物学家为满足生物正交的要求设计了各种化学策略。其中逆向电子需求Diels-Alder反应有着重要的理论和应用价值，近年来被应用于抗体修饰、材料合成和活体标记等多个领域。Weissleder小组研究了四嗪(Tz)和反式环辛烯(TCO)之间的反应速率(k>103M-1s-1)能够足够快以应用于体内[12]。一些研究试图应用生物正交反应到新型药物载体中，但需要更多的研究来实现高效使用递药系统进行药物输送。
因此本发明运用E-选择素结合肽(EBP肽)先将装载Tz的脂质体递送至急性肺损伤部位，之后运用生物正交反应将硫酸乙酰肝素递送到肺部，用于内皮糖萼的修复以及急性肺损伤的治疗。
参考文献：
[1]Wheeler AP,Bernard GR.Acute lung injury and the acute respiratorydistress syndrome:a clinical review.Lancet.2007May 5；369(9572):1553-1564.
[2]薛磊.急性肺损伤治疗策略的现状与未来[J].上海医学,44(8):5.
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发明内容
本发明的目的是提供一种用于修复内皮糖萼受损的靶向药物递送系统，本发明还提供该系统的制备方法及其应用。
为实现上述目的，本发明使用的技术手段如下：
一种用于修复内皮糖萼受损的靶向药物递送系统，包括链接反式环辛烯基团的糖萼修复药物和E-选择素结合肽修饰并装载四嗪基团的脂质体，所述脂质体以长循环脂质体材料装载四嗪基团，并在长循环脂质体材料上修饰E-选择素结合肽实现脂质体在内皮糖萼受损部位的被动靶向；所述糖萼修复药物通过四嗪基团与反式环辛烯的生物正交反应实现在内皮糖萼受损部位的单向递送。
其中，所述长循环脂质体材料为磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，包括二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DMPE-PEG)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)、二油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DOPE-PEG)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DPPE-PEG)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DLPE-PEG)中的一种或多种。
其中，所述糖萼修复药物包括硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、角蛋白及它们的衍生物。
一种制备所述用于修复内皮糖萼受损的靶向药物递送系统的方法，包括以下步骤：
(1)在长循环脂质体材料上引入能结合多肽的反应基团，然后将其与E-选择素结合肽进行反应，得到E-选择素结合肽修饰的长循环脂质体材料；
(2)将含有四嗪基团和琥珀酰亚胺酯的PEG衍生物与磷脂酰乙醇胺反应，得到链接四嗪基团的磷脂酰乙醇胺；
(3)将E-选择素结合肽修饰的长循环脂质体材料、链接四嗪基团的磷脂酰乙醇胺溶于有机溶剂，使用常规方法制备E-选择素结合肽修饰并装载四嗪基团的脂质体；
(4)将含有反式环辛烯基团和琥珀酰亚胺酯的PEG衍生物与糖萼修复药物反应，得到链接反式环辛烯基团的糖萼修复药物。
优选地，步骤(1)中所述的反应基团是马来酰亚胺。
优选地，所述含有四嗪基团和琥珀酰亚胺酯的PEG衍生物是四嗪-四聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯；所述含有反式环辛烯基团和琥珀酰亚胺酯的PEG衍生物是反式环辛烯-四聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯。
优选地，所述磷脂酰乙醇胺包括二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(DLPE)。
优选地，步骤(3)所述的脂质体中，所述链接四嗪基团的磷脂酰乙醇胺占所述E-选择素结合肽修饰的长循环脂质体材料的质量比为50-90％，更优为80％。
优选地，步骤(1)中，所述反应的时间为20-30小时。
优选地，步骤(3)所述的脂质体中还含有占脂质体质量20-50％的阳离子脂质材料，所述阳离子脂质材料包括溴化三甲基-2,3-二油酰氧基丙基铵(DOTAP)、氯化三甲基-2,3-二油烯氧基丙基铵(DOTMA)、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵(DOSPA)、溴化二甲基双十八烷基铵(DDAB)中的一种或多种。
进一步优选地，所述阳离子脂质材料占占脂质体质量的30-35％。
本发明的有益效果是：
本发明制备的脂质体具有靶向作用，且能通过EBP肽与内皮细胞上高表达的E-选择素特异性结合，同时脂质体上装载的四嗪能够展示在糖萼受损的内皮细胞上并通过生物正交反应特异性识别并结合糖萼修复材料，从而实现糖萼受损部位的定点修复，达到靶向治疗急性肺损伤的目的。
附图说明
图1：不同处方的脂质体和细胞的荧光成像，从左到右分别是0质量份DOTAP、14质量份DOTAP和28质量份DOTAP；
图2：靶向药物递送系统在HUVEC细胞上的激光共聚焦摄取结果；
图3：伊文思蓝的标准曲线；
图4：肺血管渗透性的定量分析结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明，使本领域技术人员可以更好的理解本发明并予以实施。应当理解，本说明书所列举的具体实施例仅用以解释本发明，而不是用于限定本发明的保护范围。本领域技术人员在以上实施例基础上做出各种修改或等同替换也应视为落在本发明的保护范围内。
本实施例所用的主要原材料及其说明：
硫酸乙酰肝素(HS，购自上海麦克林生化科技有限公司，纯度≥98％)：HS是糖萼的主要成分，可用于修复受损的糖萼。
二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPE，购自瑞士CordenPharma)：DMPE是一种脂质材料，属于磷脂酰乙醇胺中的一种，常用于与聚乙二醇偶联合成长循环脂质体材料。本发明中可用的磷脂酰乙醇胺还有二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(DLPE)等。
四嗪-四聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯(Tz-PEG4-NHS，西安瑞禧生物科技有限公司)：NHS是一种活性酯，容易与-NH2、-OH等基团反应，本发明利用NHS链接脂质材料磷脂酰乙醇胺；Tz能够与反式环辛烯发生生物正交反应。
二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺(MAL-PEG2000-DMPE，西安瑞禧生物科技有限公司)：是一种反应性长循环脂质体材料，其中的马来酰亚胺基团可以与巯基发生反应，是长循环脂质体材料上的反应基团，用于与含有巯基的多肽链接；而聚乙二醇化的磷脂具有出色的两亲性，可用于药物输送，延长药物的血液循环时间。本发明中可用的反应性长循环脂质体材料还包括MAL-PEG2000-DSPE、MAL-PEG2000-DOPE、MAL-PEG2000-DPPE、MAL-PEG2000-DLPE等。
反式环辛烯-四聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯(TCO-PEG4-NHS，西安瑞禧生物科技有限公司)：TCO可以与Tz发生生物正交反应；NHS基团用于链接糖萼修复药物。
E-选择素结合肽(EBP，吉尔生化生物有限公司合成)：序列为DITWDQLWDLMK，EBP肽是一种能够与E-选择素特异性结合的多肽，本发明中的EBP肽还能用可用的其它序列替代。
4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液(HEPES缓冲液，北京索莱宝科技有限公司)：是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。
三乙胺(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)：有碱性，能够将溶液pH调至碱性。
二氯甲烷(DCM，成都市科隆化学品有限公司)：是一种用途很广的优良的溶剂。
5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)常用于检测游离的巯基，也称作Ellman试剂。含巯基化合物可以与DTNB反应，断裂DTNB的二硫键产生2-硝基-5-硫代苯甲酸(NTB-)，若在中性或碱性pH条件下的水中可以离子化，生成NTB2-二价阴离子。这种NTB2-离子呈现黄色，即可以通过多功能酶标仪测定吸光度值来表征巯基含量。
(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP，购自瑞士CordenPharma)：DOTAP是一种阳离子脂质材料，加速脂质体与细胞膜的融合从而更易于被细胞所摄取。本发明可用的阳离子脂质材料还包括1,2-双十八烯氧基-3-甲基铵丙烷氯盐(DOTMA)、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵(DOSPA)、溴化二甲基双十八烷基铵(DDAB)等。
脂多糖(LPS，美国Sigma)：脂多糖是一种内毒素，可用于急性肺损伤小鼠模型的构建。
异硫氰酸荧光素标记的小麦胚芽凝集素(FITC-WGA，上海懋康生物科技有限公司)：FITC是一种荧光染料，WGA可以特异性的结合内皮细胞膜上的一种糖蛋白，也就是能与糖萼特异性结合，将FITC与WGA二者结合起来可以将内皮细胞膜上的糖萼标记出来。
磷酸盐缓冲溶液(PBS，武汉塞维尔生物科技有限公司)：是一种水基盐溶液，有助于保持恒定的pH值。溶液的渗透压和离子浓度通常与人体pH相近(等渗)。
伊文思蓝(BE，上海麦克林生化科技有限公司)：是一种偶氮染料，与血浆白蛋白高度亲和。经静脉入血后，测定肺部伊文思蓝的量就可考察肺毛细血管的通透性。
人脐静脉内皮细胞(HUVECs细胞，四川大学提供)：用于细胞实验。
本实施例所用仪器包括：
SYNERGY H1全功能酶标仪(美国BioTek)，SCIENTZ-10N/A冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，Research Plus移液器(德国Eppendorf公司)，ZEN3600纳米粒度仪(英国马尔文仪器有限公司)，CPA225B电子天平(赛多利斯天平有限公司)，HH-4数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)，透析袋(MW1000，MW2000)(上海炎怡生物技术有限公司),S1移液管电动移液器(赛默飞世尔科技有限公司)，JY92-IIN超声波细胞破碎机(宁波新芝超声设备有限公司)，JY92-IIN超声波细胞破碎机(宁波新芝超声设备有限公司)，RE-2000B旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，FV100激光共聚焦显微镜(日本OLYMPUS)，CHA-S恒温振荡器(常州澳华仪器有限公司)。
实施例1EBP肽修饰并装载四嗪基团的脂质体的制备
第一步，将EBP肽链接到长循环脂质体(MAL-PEG2000-DMPE)：
首先通过固相合成的方法合成氨基酸序列末端带有半胱氨酸残基的EBP肽，然后将1mol的EBP肽溶于0.05mM的HEPES缓冲液(pH为7.4)中，加入到1mol的MAL-PEG2000-DMPE水溶液中，在室温下搅拌23小时。得到的化合物透析除去多余的EBP肽即得EBP-PEG-DMPE。反应式如下：
改变反应时间，通过Ellman测试法测定反应液中游离的巯基以确定连接EBP肽的量，吸光度值越低表明反应液中游离的巯基越少，即代表有越多的巯基与马来酰亚胺基团结合。测定数据见表1。结果发现随着反应时间增加，巯基的量越来越少，表明EBP肽结合量增加。在反应23h后，基本未在反应体系中检测到游离巯基的存在。
表1.不同反应时间下反应液的吸光度值
搅拌时间 吸光度值
1h 0.0851
9h 0.0078
12h 0.0011
23h 0.0001
第二步，将四嗪(Tz)与脂质材料(DMPE)链接：
将1mol的DMPE和1mol的Tz-PEG4-NHS溶于DCM溶液中，并用三乙胺调pH至8-9，室温下搅拌53h。得到的化合物透析除去多余的Tz-PEG4-NHS即得锚定材料Tz-DMPE。反应方程式如下：
第三步，采用薄膜超声分散法制备EBP肽修饰并装载Tz的脂质体EBP-Tz-FLs：
脂质体的制备为本领域常规方法，本发明不限于使用薄膜超声法。
将13g Tz-DMPE，17g EBP-PEG-DMPE，14g DOTAP，溶于15mL的二氯甲烷溶剂中；在30℃条件下减压除去有机溶剂得到一层脂质薄膜；用注射用生理盐水水化薄膜；再用探头超声对得到的混悬液进行分散，即得EBP肽修饰并装载Tz的脂质体EBP-Tz-FLs。
该制剂给药方式为静脉注射，因此要检测制剂的粒径大小，制剂的电位代表其稳定性，也需要一并考察。利用ZEN3600系列纳米激光粒度仪测定纳米粒的粒径及电位，取0.1mL的脂质体稀释至1mL，设置纳米粒度仪温度为25℃，平衡时间为2min，重复测定3次。测得EBP-Tz-FLs的粒径为163.80±5.00nm，PDI为0.191±0.013，电位42.25±3.67mV，能够满足静脉注射的需要。
DOTAP的存在能够加强膜融合的效果，因此通过细胞实验来优化DOTAP的含量。分别称取下列各材料：17g EBP-PEG-DMPE；13g Tz-DMPE；0、14、28g DOTAP；1g的Cy3-DMPE(含有荧光，能够表征该脂质体的存在位置)。按照上述的方法分别制备脂质体。三种脂质体以80μg/ml的浓度与HUVEC细胞孵育30min。4％多聚甲醛固定后，于荧光显微镜下观察，结果如图1所示。结果发现，含14g DOTAP的脂质体荧光强度更强，膜融合效果更好。
Tz-DMPE/EBP-PEG-DMPE比例会影响该系统的靶向性，因此通过考察制剂的细胞靶向性来优化Tz-DMPE/EBP-PEG-DMPE的比例。利用上述制备方法分别得到了Tz-DMPE/EBP-PEG-DMPE为80％、60％、40％的制剂。将HUVEC细胞接种在6孔板上，培养24h后，用1ng/mlLPS溶液与细胞孵育12h，即完成造模。更换新鲜培养基，加入80μg/mL上述三种脂质体与细胞孵育1h。用PBS洗净细胞，加入5μg/mL TCO-Cy5与细胞孵育1h。用PBS洗净后，用1mL胰酶消化3min，之后3000rpm下离心3min，弃上清，并用PBS重悬细胞，再离心去除上清，反复用PBS洗涤3次，最后用1mL 4％多聚甲醛重悬细胞，并将该细胞悬液加入96孔板黑板中，每孔加入150μL的溶液，于多功能酶标仪下测定荧光强度，每组3个复孔。结果发现，Tz-DMPE/EBP-PEG-DMPE为80％时，测得TCO-Cy5在细胞上的荧光强度最高，表示EBP-Tz-FLs可以更多地修饰到细胞上，因此选择Tz-DMPE/EBP-PEG-DMPE的质量比为80％时靶向性更佳。
表2.不同Tz-DMPE:EBP-PEG-DMPE比对细胞靶向性的影响
实施例2糖萼修复材料TCO-HS的合成
将1mol的TCO-PEG4-NHS和1mol的HS溶于DMSO中，并用三乙胺调pH至8-9，室温下搅拌48h。得到的化合物透析除去多余的TCO-PEG4-NHS即得糖萼修复材料TCO-HS。反应式如下：
实施例3功效验证
第一步，内皮糖萼体外修复效果的评价
在每个6孔板孔中央滴20μL培养基。爬片在酒精灯上烤一会儿，轻轻放置于6孔板中。将HUVEC细胞接种在爬片上，培养24h后，用1ng/ml LPS溶液与细胞孵育12h，即完成造模。更换新鲜培养基，加入80μg/ml无荧光的脂质体与细胞孵育1h。用PBS洗净细胞，加入11.9μg/ml TCO-HS与细胞孵育1h。然后加入2μg/ml FITC-WGA与细胞孵育1h，目的是标记内皮糖萼。用PBS洗净后，取出爬片，倒扣于滴有20μL防荧光猝灭剂的载玻片上，放置于载玻片盒子中，于激光共聚焦显微镜下观察。实验分为5组：PBS组、EBP-Tz-FLs+TCO-HS组、Tz-FLs+TCO-HS组、EBP-FLs+TCO-HS组、TCO-HS组。
PBS组：细胞不与脂质体以及TCO-HS孵育，直接与FITC-WGA孵育。
EBP-Tz-FLs+TCO-HS组：细胞先与EBP-Tz-FLs孵育后，再与TCO-HS孵育，最后和FITC-WGA孵育。
Tz-FLs+TCO-HS组：Tz-FLs是不含有EBP-PEG-DMPE的脂质体，细胞先与Tz-FLs孵育，之后再与TCO-HS孵育，最后和FITC-WGA孵育。
EBP-FLs+TCO-HS组：EBP-FLs是不含有Tz-DMPE的脂质体，细胞先与EBP-FLs孵育，之后再与TCO-HS孵育，最后和FITC-WGA孵育。
EBP的存在能够将脂质体递送到内皮细胞糖萼受损的部位，Tz的存在可以将药物TCO-HS与脂质体连接，进一步修复受损的糖萼。FITC-WGA又能够特异性地标记内皮糖萼，荧光强度越强表示内皮糖萼越完整。从图2的荧光强度可以看出，EBP-Tz-FLs+TCO-HS组>Tz-FLs+TCO-HS组>EBP-FLs+TCO-HS组/TCO-HS组>PBS组，说明EBP-Tz-FLs+TCO-HS这个系统能够更好地修复内皮糖萼。
第二步，体内肺血管渗透性评估
(a)构建伊文思蓝的标准曲线：配置4mg/mL的伊文思蓝储备液，然后取10μL伊文思蓝储备液用二甲基甲酰胺稀释至1mL得到4μg/mL的伊文思蓝溶液，然后梯度稀释得到2、1、0.5、0.25、0.125μg/mL伊文思蓝溶液，于多功能酶标仪620nm下测定其吸光度值。将所得吸光度值与浓度作图即得伊文思蓝标曲，数据如图3所示。
所作伊文思蓝标准曲线R2达到4个9，满足要求。
(b)肺血管渗透性评估：
制备1mg/mL的脂多糖溶液，麻醉Balb/c小鼠，用1mL注射针在小鼠鼻腔内滴入40μL配制好的脂多糖溶液。4小时后尾静脉注射EBP-Tz-FLs(10mg/kg)，1小时后尾静脉注射TCO-HS(10mg/kg)。每天按照该方法给药1次，连续注射4天。末次给药2小时后，通过尾静脉注射伊文思蓝(20mg/kg)。2小时后处死小鼠，取肺组织，漂洗，除去血液，滤纸擦干。精确称重，剪碎肺组织，加入二甲基甲酰胺(100mg/mL)，在37℃下放置48h，2000rpm离心10min，取上清液，多功能酶标仪测定上清液在620nm波长下的吸光度，通过标准曲线计算肺组织中伊文思蓝的量，以评估各组小鼠肺血管的渗透性。并在实验的每一天记录小鼠体重。实验分组：Normal组、Saline组、EBP-Tz-FLs组、TCO-HS组、EBP-Tz-FLs+TCO-HS组。
Normal组：未造模的正常小鼠。
Saline组：造模后的模型小鼠。
EBP-Tz-FLs组：造模后用EBP-Tz-FLs治疗的小鼠。
TCO-HS组：造模后用TCO-HS治疗的小鼠。
EBP-Tz-FLs+TCO-HS组：造模后用EBP-Tz-FLs治疗，之后再用TCO-HS治疗的小鼠。
实验结果如图4所示。
从试验结果可以看出，EBP-Tz-FLs+TCO-HS组的肺血管渗透率最低，之后是TCO-HS，EBP-Tz-FLs组的肺血管渗透率与模型组相当，说明本发明的系统能将糖萼修复药物递送到肺血管糖萼受损部位发挥对肺损伤的修复治疗作用。

Claims (8)

1.一种用于修复内皮糖萼受损的靶向药物递送系统，其特征在于：包括链接反式环辛烯基团的糖萼修复药物和E-选择素结合肽修饰并装载四嗪基团的脂质体，
所述脂质体以长循环脂质体材料装载四嗪基团，并在长循环脂质体材料上修饰E-选择素结合肽实现脂质体在内皮糖萼受损部位的被动靶向；
所述糖萼修复药物通过四嗪基团与反式环辛烯的生物正交反应实现在内皮糖萼受损部位的单向递送，
制备方法包括以下步骤：
（1）在长循环脂质体材料上引入能结合多肽的反应基团，然后将其与E-选择素结合肽进行反应，得到E-选择素结合肽修饰的长循环脂质体材料；
（2）将含有四嗪基团和琥珀酰亚胺酯的PEG衍生物与磷脂酰乙醇胺反应，得到链接四嗪基团的磷脂酰乙醇胺；
（3）将E-选择素结合肽修饰的长循环脂质体材料、链接四嗪基团的磷脂酰乙醇胺溶于有机溶剂，使用常规方法制备E-选择素结合肽修饰并装载四嗪基团的脂质体；
（4）将含有反式环辛烯基团和琥珀酰亚胺酯的PEG衍生物与糖萼修复药物反应，得到链接反式环辛烯基团的糖萼修复药物，
所述长循环脂质体材料为磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，包括二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DMPE-PEG）、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DSPE-PEG）、二油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DOPE-PEG）、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DPPE-PEG）、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DLPE-PEG）中的一种或多种；
所述糖萼修复药物包括硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、角蛋白；
所述含有四嗪基团和琥珀酰亚胺酯的PEG衍生物是四嗪-四聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯；所述含有反式环辛烯基团和琥珀酰亚胺酯的PEG衍生物是反式环辛烯-四聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯。
2.如权利要求1所述的靶向药物递送系统，其特征在于：所述反应基团是马来酰亚胺。
3.如权利要求1所述的靶向药物递送系统，其特征在于：所述磷脂酰乙醇胺包括二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺（DMPE）、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（DSPE）、二油酰基磷脂酰乙醇胺（DOPE）、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺（DPPE）、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺（DLPE）。
4.如权利要求1所述的靶向药物递送系统，其特征在于：步骤（3）所述的脂质体中，所述链接四嗪基团的磷脂酰乙醇胺占所述E-选择素结合肽修饰的长循环脂质体材料的质量比为50-90％。
5.如权利要求1所述的靶向药物递送系统，其特征在于：步骤（1）中，所述反应的时间为20-30小时。
6.如权利要求1所述的靶向药物递送系统，其特征在于：步骤（3）所述的脂质体中还含有占脂质体质量20-50％的阳离子脂质材料，所述阳离子脂质材料包括溴化三甲基-2, 3-二油酰氧基丙基铵（DOTAP）、氯化三甲基-2, 3-二油烯氧基丙基铵（DOTMA）、三氟乙酸二甲基-2, 3 -二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵（DOSPA）、溴化二甲基双十八烷基铵（DDAB）中的一种或多种。
7.权利要求1-6任一项所述的靶向药物递送系统在制备修复内皮糖萼受损药物中的应用。
8.权利要求1-6任一项所述的靶向药物递送系统在制备治疗急性肺损伤药物中的应用。
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