CN114641503A - 抗cd371抗体及其用途 - Google Patents

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CN114641503A CN202080077194.9A CN202080077194A CN114641503A CN 114641503 A CN114641503 A CN 114641503A CN 202080077194 A CN202080077194 A CN 202080077194A CN 114641503 A CN114641503 A CN 114641503A
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A·丹尼安
R·J·布伦特延斯
I·C·洛伦兹
M·A·波尔
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Abstract

本公开主题提供与CD371结合的抗体或其抗原结合片段，以及使用此类抗体或其抗原结合片段的方法。在某些实施方式中，抗CD371抗体或其抗原结合片段包括重链可变区，其包括与SEQ ID NO:1、SEQID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列。

Description

抗CD371抗体及其用途
相关应用的交叉引用
本申请要求于2019年9月13日提交的美国临时专利申请序列号：62/900,118和于2019年11月18日提交的美国临时专利申请序列号：62/936,913的优先权，其中每项申请的内容均通过引用以其整体并入，并要求每项申请的优先权。
序列列表
本申请包括序列表，该序列表通过EFS-Web以ASCII格式提交，在此通过引用以其整体并入。ASCII副本创建于2020年9月11日，命名为“0727341146_ST25”，大小为58682字节。
技术领域
本公开主题涉及结合CD371的抗体以及使用这种抗体的方法。
背景技术
CD371(CEC12A)，又称DCAL-2、MICL或CLL-1，是一种30kD的C型凝集素跨膜糖蛋白。它在单核细胞、粒细胞、自然杀伤(NK)细胞和嗜碱性粒细胞上表达。CD371是一种免疫抑制受体，其将Src同源磷酸酶SHP-1和SHP-2招募到其磷酸化的细胞质免疫受体酪氨酸基抑制基序(ITIM)(Sancho等人,Annu Rev.Immunol(2012)；30:491-529；Yan等人,Front Immunol(2015)；6:408；Lahoud等,J Immunol(2011)；187:842)。CD371被认为是一种负调节性尿酸晶体(尿酸单钠，MSU)的受体，其控制自身免疫和炎症性疾病(Neumann等人,Immunity,(2014)；40:389-99)。CD371是粒细胞和单核细胞功能的负调节因子(Marshall等人,J BiolChem(2004)；279(15):14792-802；Pye等人,Eur J Immunol(2008)；38(4):1157-63)。CD371的异常表达在急性髓系白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)中已有报道(Sadonik等人,Blood,(2016)；128:4234；Toft-Petersen等人,Br J Haematal(2016)；175(3):393-41)。最近的研究表明，CD371在92％的急性髓系白血病(AML)上表达，在粒细胞-巨噬细胞祖细胞(GMP)上缺失(Bakker等人,Cancer Res.(2004)；64(22):8443-50)。CD371也在白血病干细胞(LSC)上表达，LSC具有无限的自我更新能力，并产生大量具有CD371特定表型的子代母细胞(daughter blast cell)，是白血病复发的最重要原因之一(Siveen等人,MolCancer(2017)；16:13；Yoshida等人,Cancer Sci(2016)；107:5-11)。鉴于CD371在疾病中的重要作用，需要与CD371结合的抗体和使用此类药物的方法。
发明内容
本公开主题提供特异性结合CD371的抗体或其抗原结合片段，以及使用其抗体或抗原结合片段的方法。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括重链可变区，其包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括(a)重链可变区，其包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列；和(b)轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区选自：
(a)重链可变区，其包括与SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包括与SEQ ID NO:3中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列；
(c)重链可变区，其包括与SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列；
(d)重链可变区，其包括与SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列；
(e)重链可变区，其包括与SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列；和
(f)重链可变区，其包括与SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括含有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的重链可变区。在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括含有SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括：含有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区和轻链可变区选自：
(a)重链可变区，其包括SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包括SEQ ID NO:3中所示氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列；
(c)重链可变区，其包括SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列；
(d)重链可变区，其包括SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列；
(e)重链可变区，其包括SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列；和
(f)重链可变区，其包括SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，抗CD371抗体或其抗原结合片段包括：包括CDR1、CDR2和CDR3结构域的重链可变区；以及包括CDR1、CDR2和CDR3结构域的轻链可变区，其中重链可变区和轻链可变区CDR3结构域选自：
(a)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(b)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(c)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(d)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(e)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列及其保守修饰；和
(f)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列及其保守修饰。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分的重链可变区和轻链可变区CDR2结构域选自：
(a)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(b)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(c)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(d)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(e)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列及其保守修饰；和
(f)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列及其保守修饰。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分的抗CD371重链可变区和轻链可变区CDR1结构域选自：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(b)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(c)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(d)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列及其保守修饰；
(e)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列及其保守修饰；和
(f)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列及其保守修饰；以及轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列及其保守修饰。
在某些实施方式中，一个或多个CDR序列具有多达约5个氨基酸替换。在某些实施方式中，一个或多个CDR序列具有多达约3个氨基酸替换。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列；以及重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列；以及重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列；以及重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列；
(d)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列；以及重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列；
(e)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列；以及重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列，或
(f)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列；以及重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括：
(a)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列；
(b)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列；
(c)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列，或
(f)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗CD371抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列；
(d)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列；
(e)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列；或
(f)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列。
本公开主题提供抗体或其抗原结合片段，其与上述抗体或其抗原结合片段中的任何一种交叉竞争结合CD371。
本公开主题提供抗体或其抗原结合片段，其与上述抗体或其抗原结合片段中的任何一种结合CD371上相同的表位。
在某些实施方式中，所述抗体的序列为轻-重可变链方向(VL-VH)。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段以约1×10-7M与约1×10-8M之间或约1×10-9M与约1×10-8M之间的解离常数(KD)与人CD371结合。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括人可变区框架区。在某些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段为全人或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段为嵌合抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分是人源化抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述抗体的抗原结合片段为Fab、Fab'、F(ab')2、可变片段(Fv)或单链可变片段(scFv)。
本公开主题还提供免疫偶联物，其包括与治疗剂连接的本文公开的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述治疗剂是药物、细胞毒素或放射性同位素。
此外，本公开主题提供双特异性分子，其包括与第二功能部分连接的本文公开的抗体或其抗原结合片段的。在某些实施方式中，所述第二功能部分与所述抗体或其抗原结合片段具有不同的结合特异性。
本公开主题还提供组合物，其包括本文公开的抗体或其抗原结合片段、本文公开的免疫偶联物或本文公开的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述组合物是还包括药学上可接受载体的药物组合物。
此外，本公开主题提供编码本文公开的抗体或其抗原结合片段的核酸、包括该核酸分子的表达载体和包括该表达载体的宿主细胞。
本公开主题提供检测整个细胞或组织中CD371的方法。在某些实施方式中，所述方法包括：将细胞或组织与本文公开的抗体或其抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合片段包括可检测标记；以及通过测量与所述细胞或组织相关联的可检测标记的量来确定与所述细胞或组织结合的标记的抗体或其抗原结合片段的量，其中结合的抗体或其抗原结合片段的量指示所述细胞或组织中CD371的量。
此外，本公开主题提供治疗受试者中的肿瘤负荷的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向受试者施用本文公开的抗体或其抗原结合片段、其免疫偶联物、其双特异性分子或其组合物。在某些实施方式中，所述方法减少肿瘤细胞的数量。在某些实施方式中，所述方法减小肿瘤大小。在某些实施方式中，所述方法根除受试者中的肿瘤。
在某些实施方式中，所述受试者是人。
此外，本公开主题提供治疗和/或预防受试者中的肿瘤或瘤形成的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向受试者施用本文公开的抗体或其抗原结合片段、其免疫偶联物、其双特异性分子或其组合物。
在某些实施方式中，所述方法根除受试者中的肿瘤。在某些实施方式中，所述受试者是人。
此外，本公开主题提供增加或延长患有肿瘤或瘤形成的受试者的生存期的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向受试者施用本文公开的抗体或其抗原结合片段、其免疫偶联物、其双特异性分子或其组合物。在某些实施方式中，所述方法根除受试者中的肿瘤。在某些实施方式中，所述受试者是人。
此外，本公开主题提供预防和/或治疗肿瘤或瘤形成的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向受试者施用本文公开的抗体或其抗原结合片段、其免疫偶联物、其双特异性分子或其组合物。在某些实施方式中，所述受试者是人。
在某些实施方式中，所述肿瘤或瘤形成选自急性髓系白血病(AML)、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、胶质母细胞瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)和慢性髓系白血病(CML)。在某些实施方式中，所述肿瘤为AML。
此外，本公开主题提供用于治疗受试者中的肿瘤负荷、治疗和/或预防肿瘤或瘤形成、和/或增加或延长患有肿瘤或瘤形成的受试者的存活期的试剂盒，其包括本文公开的抗体或其抗原结合片段、其免疫偶联物、其双特异性分子、或其组合物。在某些实施方式中，所述试剂盒还包括使用本文公开的抗体或其抗原结合片段、其免疫偶联物、其双特异性分子、或其组合物治疗受试者中的肿瘤负荷、治疗和/或预防肿瘤或瘤形成和/或增加或延长患有肿瘤或瘤形成的受试者的生存期的书面说明。
附图说明
以下通过实施例给出(但并非旨在将本发明限制于所描述的特定实施方式)的详细描述可结合附图理解。
图1描绘抗CD371单克隆噬菌体制备物与转染人CD371的HEK293H细胞的结合。
图2A和2B描绘格式化为人IgG1的1B10和1C3与OCI细胞的结合。图2A显示B10(称为“1B10”)。图2B显示C3(或被称为“1C3”)。
图3描绘scFv-Fc融合蛋白和scFv片段与表达人CD371的HEK293细胞的结合。
具体实施方式
本公开主题提供抗CD371抗体。本说明书和实施例描述了本公开的非限制性实施方式。
为了明确披露而非限制，详细描述分为以下小节：
5.1.定义；
5.2.CD371；
5.3.抗CD371抗体；
5.4.编码抗体或抗原结合片段的核酸；
5.5.药物组合物和治疗方法；
5.6.试剂盒；和
5.7.检测方法
5.1.定义
在下面的描述中，术语的使用将遵循某些约定。通常，本文所用术语旨在解释为与本领域技术人员已知的这些术语的含义具有一致性。
“抗原结合蛋白”是包括抗原结合区或抗原结合部分的蛋白质或多肽，即与与其结合的另一分子具有强亲和力。抗原结合蛋白包括抗体、嵌合抗原受体(CAR)和融合蛋白。
本领域已知的“抗体”和“抗体”是指免疫系统的抗原结合蛋白。本文所指术语“抗体”包括具有抗原结合区的全长抗体，以及其任何其中保留“抗原结合部分”或“抗原结合区”的片段，或其单链，例如单链可变片段(scFv)。天然产生的“抗体”是一种糖蛋白，包括通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链由重链可变区(此处缩写为VH)和重链恒定(CH)区组成。重链恒定区由CH1、CH2和CH3三个结构域组成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区CL组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，与称为框架区(FR)的更为保守的区域相点缀。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1 q)。
本文所用术语“人抗体”旨在包括具有可变区的抗体，其中框架和CDR区均源自人生殖系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体包括一个恒定区，则该恒定区也源自人生殖系免疫球蛋白序列。本公开主题的人抗体可包括不由人生殖系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性突变或通过体内体细胞突变引入的突变)。
本文所用术语“单克隆抗体”是指从基本同质的抗体群体中获得的抗体，即构成该群体的单个抗体是相同的和/或结合相同的表位，但可能的变异抗体(例如，包括自然发生的突变或在单克隆抗体制备过程中产生的突变)除外，这类变体通常少量存在。与多克隆抗体制剂(通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体)不同，单克隆抗体制剂中的每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。因此，修饰语“单克隆”表示抗体的特性是从基本同质的抗体群体中获得的，并且不应被解释为需要通过任何特定方法生产抗体。例如，根据本公开主题使用的单克隆抗体可通过多种技术(包括但不限于杂交瘤法、重组DNA法、噬菌体展示法，以及利用含有全部或部分人免疫球蛋白位点的转基因动物的方法)制备，本文描述了用于制备单克隆抗体的此类方法和其他示例性方法。
如本文所用，术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、生成或分离的所有人抗体，例如(a)从人免疫球蛋白基因转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或由其制备的杂交瘤(下文进一步描述)中分离的抗体，(b)从转化为表达人抗体的宿主细胞中(例如从转染瘤中)分离的抗体，(c)从重组、组合的人抗体库中分离的抗体，以及(d)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的任何其他方法制备、表达、生成或分离的抗体。这种重组人抗体具有可变区，其中框架和CDR区源自人生殖系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方式中，此类重组人抗体可经受体外诱变(或者，当使用用于人Ig序列的动物转基因时，经受体内体细胞诱变)，因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是衍生自人生殖系VH和VL并与之相关的序列，可能不会天然存在于体内的人抗体生殖系库中。
术语“人源化抗体”是指其中从另一哺乳动物物种(如小鼠)的生殖系衍生的CDR序列已移植到人框架序列上的抗体。可在人框架序列内进行额外的框架区修饰。
术语“嵌合抗体”意指其中可变区序列源自一物种且恒定区序列源自另一物种的抗体，例如其中可变区序列源自小鼠抗体且恒定区序列源自人抗体的抗体。
如本文所用，“特异性结合CD371”的抗体意指结合CD371(例如，人CD371)的抗体，其解离常数(Kd)约为5×10-7M或更小、约为1×10-7M或更小、约为5×10-8M或更小、约为1×10-8M或更小、约为5×10-9M或更小、约为1×10-9M或更小、约为5×10-10M或更小、约为1×10-10M或更小、约为5×10-11M或更小、或约1×10-11M或更小。
“竞争结合的抗体”或“交叉竞争结合的抗体”与用于结合抗原(例如CD371)的参考抗体是指在竞争分析中阻断参考抗体与抗原(例如CD371)结合50％或更多的抗体，反之，在竞争分析中，参考抗体将抗体与抗原(例如CD371)的结合阻断50％或更多。“Antibodies”Harlow和Lane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,NY)中描述了一种典型的竞争分析。
如本文所用，“同种型”指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgM或IgGl)。
短语“识别抗原的抗体”和“抗原特异性抗体”在本文中与术语“特异性结合抗原(例如CD371多肽)的抗体”互换使用。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合区”指的是与抗原结合并赋予抗体抗原特异性的抗体的区域或部分；抗原结合蛋白的片段，例如，抗体包括保留特异性结合抗原(例如CD391多肽)能力的抗体的一个或多个片段。已经证明，抗体的抗原结合功能可由全长抗体的片段执行。包括在抗体的术语“抗体片段”内的抗原结合片段的实例包括Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab)2片段，包括两个通过铰链区的二硫键连接的Fab片段的二价片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人,Nature 1989；341:544-546)；和孤立的互补决定区(CDR)。
此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH是由单独的基因编码的，但它们可以通过合成的接头通过重组方法连接，从而使它们成为单个蛋白质链，其中VL和VH区配对形成单价分子。这些被称为单链Fv(scFv)；例如，见Bird等人,Science(1988)；242:423-426；和Huston等人,Proc Natl Acad Sci(1998)；85:5879-5883。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段以供使用。
“抗体”或“抗原结合蛋白”是指已从其自然环境成分中被鉴定、分离和/或回收抗体或抗原结合蛋白。“合成抗体”或“重组抗体”通常使用重组技术或本领域技术人员已知的肽合成技术生成。
如本文所用，术语“单链可变片段”或“scFv”是共价连接以形成VH：VL异二聚体的免疫球蛋白(例如，小鼠或人)的重链(VH)和轻链(VL)可变区的融合蛋白。重链(VH)和轻链(VL)要么直接连接，要么通过肽编码接头(例如，10、15、20、25个氨基酸)连接，连接VH的N端和VL的C端，或者VH的C端和VL的N端。接头通常富含甘氨酸以获得柔韧性，以及丝氨酸或苏氨酸以获得溶解度。接头可以连接胞外抗原结合结构域的重链可变区和轻链可变区。
接头的非限制性实例公开于Shen等人,Anal Chem(2008)；80(6):1910-1917和WO2014/087010，其内容通过引用以其整体并入本文。在某些实施方式中，所述接头是G4S接头。在某些实施方式中，所述接头包括以下提供的SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列：
Figure BDA0003629472670000161
在某些实施方式中，所述接头包括以下提供的SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列：
Figure BDA0003629472670000162
在某些实施方式中，所述接头包括以下提供的SEQ ID NO:64中所示氨基酸序列：
Figure BDA0003629472670000163
在某些实施方式中，所述接头包括以下提供的SEQ ID NO:65中所示氨基酸序列：
Figure BDA0003629472670000164
在某些实施方式中，所述接头包括以下提供的SEQ ID NO:66中所示氨基酸序列：
Figure BDA0003629472670000165
在某些实施方式中，所述接头包括以下提供的SEQ ID NO:67中所示氨基酸序列：
Figure BDA0003629472670000166
尽管去除了恒定区并引入了接头，但scFv蛋白仍保留原始免疫球蛋白的特异性。如Huston等人(Proc.Nat.Acad.Sci.USA,1988；85:5879-5883)所述，单链Fv多肽抗体可以由包括VH-和VL-编码序列的核酸表达。另见美国专利号5,091,513、5,132,405和4,956,778；和美国专利公开号20050196754和20050196754。已经描述了具有抑制活性的拮抗性scFv(参见，例如，Zhao等人,Hyrbidoma(Larchmt)2008；27(6):455-51；Peter等人,J CachexiaSarcopenia Muscle 2012年8月12日；Shieh等人,J Imunol 2009；183(4):2277-85；Giomarelli等人,Thromb Haemost 2007；97(6):955-63；Fife等人,J Clin Invst 2006；116(8):2252-61；Brocks等人,Immunotechnology 1997；3(3):173-84；Moosmayer等人,Ther Immunol 1995；2(10:31-40)。具有刺激活性的激动性scFv已经被描述(参见，例如，Peter等人,J Bioi Chern 2003 25278(38):36740-7；Xie等人,Nat Biotech 1997 15(8):768-71；Ledbetter等人,Crit Rev Immunol 1997；17(5-6):427-55；Ho等人,BioChimBiophys Acta 2003；1638(3):257-66)。
如本文所用，“F(ab)”是指与抗原结合但为单价且不具有Fc部分的抗体结构片段，例如，抗体经木瓜酶消化产生两个F(ab)片段和Fc片段(例如，重(H)链恒定区；不结合抗原的Fc区)。
如本文所用，“F(ab')2”是指通过胃蛋白酶消化完整IgG抗体产生的抗体片段，其中该片段具有两个抗原结合(ab')(二价)区，其中每个(ab')区包括两条独立的氨基酸链，一部分H链与轻(L)链通过S-S键连接用以结合抗原，并且其中剩余的H链部分连接在一起。“F(ab')2”片段可以分成两个单独的Fab'片段。
如本文所用，术语“载体”是指当与适当的控制元件结合时能够复制并且可以将基因序列转移到细胞中的任何遗传元件，例如质粒、噬菌体、转座子、粘粒、染色体、病毒、病毒颗粒。因此，该术语包括克隆和表达载体，以及病毒载体和质粒载体。
“CDR”定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，其是免疫球蛋白重链和轻链的高变区。参见，例如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,4thU.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)，或IMGT编号系统(Lefranc,The Immunologist(1999)；7:132-136；Lefranc等人，Dev.Comp.Immunol.(2003)；27:55-77)。如本文所用，术语“高变区”或“HVR”是指抗体可变结构域的每个序列高变(“互补决定区”或“CDR”)和/或在结构上形成定义的环(“高变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触”)的区。一般来说，抗体在可变区中包括三条重链和三条轻链CDR或CDR区。CDR为抗体与抗原或表位的结合提供大部分接触残基。在某些实施方式中，根据IMGT系统识别CDR。在某些实施方式中，使用可在http://www.imgt.org/IMGT_vquest/input访问的IMGT编号系统来识别CDR。
术语“分离的”表示与原始源或环境的分离程度。
“分离的抗体”是一种已经从其自然环境的成分中分离出来的抗体。在某些实施方式中，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反向HPLC)将抗体纯化至大于95％或99％的纯度。对于评估抗体纯度的方法的综述，参见，例如，Flatman等人,J.Chromatogr(2007)；B 848:79-87。
“分离的核酸”是指已经从其自然环境的组分中分离出来的核酸分子。分离的核酸包括包含在通常含有该核酸分子的细胞中的核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或存在于与其天然染色体位置不同的染色体位置。
“分离的编码抗体的核酸”(包括对特定抗体引用，例如抗-KLB抗体)是指一种或多种编码抗体重链和轻链(或其片段)的核酸分子，包括在单一载体分离载体中的此类核酸分子，并且此类核酸分子存在于宿主细胞中的一个或多个位置。
如本文所用，术语“载体”是指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及并入其已被引入的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导与其有效连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
“免疫偶联物”是与一种或多种异源分子偶联的抗体，包括但不限于细胞毒性剂。
“有效量”(或“治疗有效量”)是足以在治疗后产生有益或期望的临床结果的量。可以以一个或多个剂量向受试者施用有效量。就治疗而言，有效量是足以减轻、改善、稳定、逆转或减缓疾病进展或以其他方式减少疾病的病理后果的量。有效量通常由医师根据具体情况确定并且在本领域技术人员的技术范围内。在确定达到有效量的适当剂量时，通常会考虑几个因素。这些因素包括受试者的年龄、性别和体重、正在治疗的病情、病情的严重性和所施用的细胞的形式和有效浓度。
本文中的“个体”或“受试者”是脊椎动物，例如人或非人动物，例如哺乳动物。哺乳动物包括但不限于人、灵长类动物、农场动物、运动动物、啮齿动物和宠物。非人动物对象的非限制性实例包括啮齿动物，例如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠；兔子；狗；猫；羊；猪；山羊；牛；马；和非人灵长类动物，如猿和猴子。
如本文所用，“治疗”(及其语法变体，例如“治疗”或“治疗”)是指试图改变被治疗个体的自然过程的临床干预，并且可以用于预防或在临床病理进程中进行。治疗的理想效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、减少疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展速度、改善或缓解疾病状态、以及缓解或改善预后。在某些实施方式中，本公开主题的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展，例如，“肿瘤”(急性髓系白血病(AML))。
“瘤形成”是指以细胞或组织的病理性增殖及其随后迁移或侵入其他组织或器官为特征的疾病。瘤形成生长通常是不受控制和进行性的，并且发生在不会引起或导致正常细胞增殖停止的条件下。
术语“包括”、“包含”，旨在具有美国专利法赋予它们的广泛含义，可以表示“包括”、“包含”等。
如本文所用，术语“约”或“大约”是指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这将部分取决于如何测量或确定该值，即，测量系统的局限性。例如，根据本领域的实践，“约”可以表示在3个或超过3个标准偏差内。或者，“约”可表示给定值的至多20％、优选至多10％、更优选至多5％、更优选至多1％的范围内。或者，特别是关于生物系统或过程，该术语可以表示值的数量级内，优选地在5倍内，更优选地在2倍内。
如本文所述，任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所列举范围内的任何整数的值，并且除非另有说明，在适当时，包括其分数(例如整数的十分之一和百分之一)。
本公开主题的其他方面在以下公开中描述并且在本公开主题的范围内。
5.2.CD371
CD371(CEC12A)，也称为DCAL-2、MICL或CLL-1，是一种30kD的C型凝集素跨膜糖蛋白。它在单核细胞、粒细胞、自然杀伤(NK)细胞和嗜碱性粒细胞上表达。CD371是一种免疫抑制受体，其将Src同源磷酸酶SHP-1和SHP-2招募到其磷酸化的细胞质免疫受体酪氨酸基抑制基序(ITIM)(Sancho等人,Annu Rev.Immunol(2012)；30:491-529；Yan等人,FrontImmunol(2015)；6:408；Lahoud等,J Immunol(2011)；187:842)。CD371被认为是一种负调节性尿酸晶体(尿酸单钠，MSU)的受体，其控制自身免疫和炎症性疾病(Neumann等人,Immunity(2014)；40:389-99)。CD371是粒细胞和单核细胞功能的负调节因子(Marshall等，J Biol Chem(2004)；279(15):14792-802；Pye等人,Eur J Immunol(2008)；38(4):1157-63)。
在某些实施方式中，CD371是人CD371，其包括具有NCBI参考号：NP_612210.4(SEQID NO:15)的氨基酸序列或其片段或由其组成。
SEQ ID NO:15提供如下：
Figure BDA0003629472670000201
在某些实施方式中，CD371包括与SEQ ID NO:15中所示氨基酸序列或其片段具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％、至少约100％同一性的氨基酸序列或由其组成。
5.3.抗CD371抗体
本公开主题的抗体的特征在于抗体的特定功能特征或特性。例如，抗体特异性结合CD371(例如结合人CD371)。
在某些实施方式中，本公开的抗体或抗原结合片段与CD371(例如人CD371)结合的结合亲和力具有例如1×10-6M或更小(例如，约1×10-7M或更小、约1×10-8M或更小、约1×10-9M或更小、约1×10-10M或更小、或约1×10-11M或更小)的解离常数(Kd)。在某些实施方式中，本公开的抗体或抗原结合片段与CD371(例如人CD371)结合的Kd在约1×10-8M和约1×10-7M之间。在某些实施方式中，本公开的抗体或抗原结合片段与CD371(例如人CD371)结合的Kd在约1×10-9M和约1×10-8M之间。在某些实施方式中，本公开的抗体或抗原结合片段与CD371(例如人CD371)结合的Kd约1.5×10-8M或更小。在某些实施方式中，本公开的抗体或抗原结合片段与CD371(例如人CD371)结合的Kd约1×10-8M或更小。在某些实施方式中，本公开的抗体或抗原结合片段与CD371(例如人CD371)结合的Kd约1×10-8M。在某些实施方式中，本公开的抗体或抗原结合片段与CD371(例如人CD371)结合的Kd约9×10-9M。
本公开的抗体或抗原结合片段的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条(例如，一条或两条)完整的重链，以及至少一条(例如，一条或两条)完整的轻链)或可以包括抗原结合部分(Fab、F(ab')2、Fv或单链Fv片段(“scFv”))。在某些实施方式中，所述抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE，特别地选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在某些实施方式中，所述免疫球蛋白同种型是IgG1(例如，人IgG1)。在某些实施方式中，所述抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。
5.3.1.单链可变片段(scFv)
在某些实施方式中，本公开主题包括抗体或其抗原结合片段，其具有与一个或多个恒定结构域融合以形成具有人免疫球蛋白的Fc区的抗体以产生二价蛋白质的scFv序列，从而增加抗体的整体亲和力和稳定性。此外，Fc部分允许其他分子(包括但不限于荧光染料、细胞毒素、放射性同位素等)与抗体直接偶联，例如用于抗原定量研究、固定抗体以进行亲和力测量、用于靶向递送治疗剂，使用免疫效应细胞测试Fc介导的细胞毒性和许多其他应用。
这里呈现的结果突出了本公开的抗体或抗原结合片段在靶向CD371多肽(例如，人CD371)中的特异性、敏感性和效用。
本公开的分子基于使用噬菌体展示对单链可变片段(scFv)进行的鉴定和选择，其氨基酸序列赋予分子对目标CD371多肽的特异性并形成本公开所有抗原结合蛋白的基础。因此，scFv可用于设计各种“抗体”分子，包括例如全长抗体、其片段(例如Fab和F(ab')2)、微型抗体、融合蛋白(包括scFv-Fc融合)、多价抗体(即对同一抗原或不同抗原具有一种以上特异性的抗体，例如双特异性抗体、三体等)(参见Cuesta等人,Multivalentantibodies:when design surpasses evolution.Trends in Biotechnology 28:355-3622010)。
在某些实施方式中，所述抗原结合蛋白是全长抗体，本公开的抗体的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条或两条完整的重链和至少一条，优选两条完整的轻链)或可以包括抗原结合片段(Fab、F(ab')2、Fv或scFv)。在某些实施方式中，所述抗体重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE等。在某些实施方式中，所述免疫球蛋白同种型选自IgG1、IgG2、IgG3、和IgG4。在某些实施方式中，所述免疫球蛋白同种型是IgG1(例如，人IgG1)。抗体同种型的选择可取决于抗体设计用来引发的免疫效应功能。
在构建重组免疫球蛋白时，本领域技术人员已知各种免疫球蛋白同种型的恒定区的适当氨基酸序列和产生各种抗体的方法。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv是scFv-Fc融合蛋白或具有选自表1的VH和VL区或CDR的全长人IgG。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，所述scFv设计为“B031_P1_PH1B10”(也称为“B10”)。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2和含有SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3。SEQ ID NO:28-30在表1中提供。
在某些实施方式中，抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、以及含有SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。SEQ ID NO:31-33在表1中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、含有SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3、含有SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2，以及含有SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列的VL CDR2、含有SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，所述VH和VL通过接头连接。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，可变区一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VH-VL。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括在表1中提供的SEQ ID NO:68中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，轻链可变区(VL)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VL-VH。在某些实施方式中，抗-CD371scFv包括SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列。编码SEQ ID NO:16的氨基酸序列的示例性核苷酸序列在SEQ ID NO:22中示出。SEQ ID NOS:16和22在下面的表1中提供。
表1
Figure BDA0003629472670000241
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:3中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列的VL，任选在重链可变区和轻链可变区之间具有接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。SEQ ID NO:3和4在下表2中提供。在某些实施方式中，所述scFv被指定为“B031_P1_PH1C3”(也称为“C3”)。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv是scFv-Fc融合蛋白或具有选自表2的VH和VL区或CDR的全长人IgG。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:3中所示氨基酸序列的VH，如表2所示。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQID NO:4中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括：含有SEQ IDNO:3中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列的VL。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、和含有SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3。SEQ ID NO:34-36在表2中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。SEQ ID NO:37-39在表2中提供。
在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、含有SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3、含有SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:3中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，VH和VL通过接头连接。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，重链可变区(VH)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VH-VL。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括SEQ ID NO:69中所示氨基酸序列，其在表2中提供。
在某些实施方式中，轻链可变区(VL)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VL-VH。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列。编码SEQ ID NO:17的氨基酸序列的示例性核苷酸序列在SEQ ID NO:23中示出。SEQ IDNO:17和23在下表2中提供。
表2
Figure BDA0003629472670000261
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列的VH，任选在重链可变区和轻链可变区之间具有接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。SEQ ID NO:5和6在下表3中提供。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv被指定为“B031_P1_PH1D6”(也称为“D6”)。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv是scFv-Fc融合蛋白或具有选自表3的VH和VL区或CDR的全长人IgG。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列的VL。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列的VL。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、和含有SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3。SEQ ID NO:40-42在表3中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。SEQ ID NO:43-45在表3中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、含有SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3、含有SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列的VL CDR2、含有SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括：含有SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，VH和VL通过接头连接。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，重链可变区(VH)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VH-VL。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括在表3中提供的SEQ ID NO:70中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，轻链可变区(VL)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VL-VH。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列。编码SEQ ID NO:18的氨基酸序列的示例性核苷酸序列在SEQ ID NO:24中示出。SEQ IDNO:18和24在下表3中提供。
表3
Figure BDA0003629472670000281
Figure BDA0003629472670000291
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的VL，任选在重链可变区和轻链可变区之间具有接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。SEQ ID NO:7和8在下表4中提供。在某些实施方式中，所述抗CD371
scFv被指定为“B031_P1_PH2A11”(也称为“A11”)。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv是scFv-Fc融合蛋白或具有选自表4的VH和VL区或CDR的全长人IgG。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的VL。SEQ ID NO:7和8在表4中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、和含有SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3。SEQ ID NO:46-48在表4中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。SEQ ID NO:49-51在表4中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、含有SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3、含有SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，VH和VL通过接头连接。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，重链可变区(VH)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VH-VL。在某些实施方式中，所述CD371 scFv包括表4中提供的SEQ ID NO:71中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，轻链可变区(VL)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VL-VH。在某些实施方式中，scFv包括SEQ ID NO:19中所示氨基酸序列。编码SEQ IDNO:19的氨基酸序列的示例性核苷酸序列在SEQ ID NO:25中示出。SEQ ID NO:19和25在下表4中提供。
表4
Figure BDA0003629472670000301
Figure BDA0003629472670000311
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列的VL，任选在重链可变区和轻链可变区之间具有接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。SEQ ID NO:9和10在表5中提供。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv被指定为“B031_P1_PH2E4”(也称“E4”)。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv是scFv-Fc融合蛋白或具有选自表5的VH和VL区或CDR的全长人IgG。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列的VL。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、和含有SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3。SEQ ID NO:52-54在表5中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。SEQ ID NO:55-57在表5中提供。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1，含有SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、含有SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3、含有SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列或其保守修饰的VLCDR2、和含有SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，VH和VL通过接头连接。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，重链可变区(VH)位于N末端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VH-VL。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括在表5中提供的SEQ ID NO:72中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，轻链可变区(VL)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VL-VH。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列。编码SEQ ID NO:20的氨基酸序列的示例性核苷酸序列在SEQ ID NO:26中示出。SEQ IDNO:20和26在下表5中提供。
表5
Figure BDA0003629472670000331
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的VL，任选在重链可变区和轻链可变区之间具有接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。SEQ ID NO:11和12在下表6中提供。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv被指定为“B031_P1_PH2E8”(也称为“E8”)。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv是scFv-Fc融合蛋白或具有选自表6的VH和VL区或CDR的全长人IgG。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，所述抗CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的VL。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、和含有SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3。SEQ ID NO:58-60在表6中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。SEQ ID NO:61-63在表6中提供。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR1、含有SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR2、含有SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列或其保守修饰的VH CDR3、含有SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR1、含有SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列或其保守修饰的VL CDR3。
在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括含有SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，VH和VL通过接头连接。在某些实施方式中，所述接头包括SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，重链可变区(VH)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VH-VL。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括在表6中提供的SEQ ID NO:73中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，轻链可变区(VL)位于N端。在某些实施方式中，可变区位于从N端到C端：VL-VH。在某些实施方式中，所述抗-CD371 scFv包括SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列。编码SEQ ID NO:21的氨基酸序列的示例性核苷酸序列在SEQ ID NO:27中示出。SEQ IDNO:21和27在下表6中提供。
表6
Figure BDA0003629472670000351
5.3.2.单克隆抗体
本公开主题提供特异性结合CD371(例如人CD371)的抗体(例如人抗体，例如人单克隆抗体)。抗CD371抗体B031_P1_PH1B10(也称为“B10”)、B031_P1_PH1C3(也称为“C3”)、B031_P1_PH1D6(也称为“D6”)、B031_P1_PH2A11(也称为“A11”)、B031_P1_PH2E4(也称为“E4”)和B031_P1_PH2E8(也称为“E8”)的VH氨基酸序列分别在SEQ ID NO:1、3、5、7、9和11中显示。B10、C3、D6、A11、E4和E8的VL氨基酸序列分别在SEQ ID NO:2、4、6、8、10和12中显示。
鉴于B031_P1_PH1B10(B10)、B031_P1_PH1C3(C3)、B031_P1_PH1D6(D6)、B031_P1_PH2A11(A11)、B031_P1_PH2E4(E4)和B031_P1_PH2E8(E8)抗体的每一种均可以结合CD371，所述VH和VL可以被“混合和匹配”以生成其他抗CD371结合分子。这种“混合和匹配”的抗体的CD371结合可以使用本领域已知的结合试验来测试，包括例如ELISA、蛋白质印迹、RIA、Biacore分析。优选地，当混合和匹配VH和VL链时，来自特定VH/VL配对的VH序列被结构相似的VH序列替换。同样，来自特定VH/VL配对的VL序列被结构相似的VL序列替换。
在某些实施方式中，本公开主题提供抗体或其抗原结合片段或部分，其包括：(a)含有选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9和11的氨基酸序列的重链可变区(VH)和(b)含有选自SEQID NO:2、4、6、8、10和12的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；其中抗体或抗原结合片段特异性结合CD371，例如人CD371。在某些实施方式中，VH和VL选自：
(a)包括SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列的重链可变区，和包括SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)包括SEQ ID NO:3中所示氨基酸序列的重链可变区，和包括SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列的轻链可变区；
(c)包括SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列的重链可变区，和包括SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列的轻链可变区；
(d)包括SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的重链可变区，和包括SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的轻链可变区；
(e)包括SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列的轻链可变区；和
(f)包括SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，本公开主题提供抗体或其抗原结合片段，其包括B10、C3、D6、A11、E4和E8的重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3。
B10、C3、D6、A11、E4和E8的VH CDR1的氨基酸序列分别在SEQ ID NO:28、34、40、46、52和58中显示。B10、C3、D6、A11、E4和E8抗体的VH CDR2的氨基酸序列分别在SEQ ID NO:29、35、41、47、53和59中显示。B10、C3、D6、A11、E4和E8的VH CDR3的氨基酸序列分别在SEQ IDNO:30、36、42、48、54和60中显示。
B10、C3、D6、A11、E4和E8的VL CDR1的氨基酸序列分别在SEQ ID NO:31、37、43、49、55和61中显示。B10、C3、D6、A11、E4和E8的VL CDR2的氨基酸序列分别在SEQ ID NO:32、38、44、50、56和62中显示。B10、C3、D6、A11、E4和E8的VL CDR3的氨基酸序列分别在SEQ ID NO:33、39、45、51、57和63中显示。CDR区使用IMGT系统划定。在某些实施方式中，使用可在http://www.imgt.org/IMGT_vquest/input访问的IMGT编号系统来描绘CDR区域。
鉴于这些抗体或其抗原结合片段中的每一种都可以结合CD371，并且抗原结合特异性主要由CDR1、CDR2和CDR3区提供、VH CDR1、CDR2和CDR3序列以及VL CDR1、CDR2和CDR3序列可以被“混合和匹配”(即，来自不同抗体的CDR可以混合和匹配，尽管每个抗体必须包括VH CDR1、CDR2和CDR3以及VL CDR1、CDR2和CDR3)以生成其他抗CD371结合分子。这种“混合和匹配”抗体的CD371结合可以使用上述结合试验进行测试。当VH CDR序列混合和匹配时，来自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列被结构相似的CDR序列替换。同样，当VL CDR序列混合和匹配时，来自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列优选地被结构相似的CDR序列替换。对常规技术人员显而易见的是新的VH和VL序列可以通过用来自本文公开的抗体及其抗原结合片段B10、C3、D6、A11、E4和E8的CDR序列的结构相似序列替换一个或多个VH和/或VLCDR区序列来生成。
在某些实施方式中，本公开主题提供抗体或其抗原结合片段或部分，其包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:28、34、40、46、52和58的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:29、35、41、47、53和59的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:30、36、42、48、54和60的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:31、37、43、49、55和61的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:32、38、44、50、56和62的氨基酸序列；
(f)轻链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:33、39、45、51、57和63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:30SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:33SEQ ID NO:33SEQ ID NO:32所示氨基酸序列；
(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列；
(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列；
(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列；
(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列；
(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包括SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列；
(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列。
本文公开的抗CD371抗体的恒定区/框架区可以改变，例如，通过氨基酸替换，以修饰抗体的性质(例如，增加或减少以下一项或多项：抗原结合亲和力、Fc受体结合、抗体碳水化合物(例如糖基化、岩藻糖基化等)、半胱氨酸残基的数量、效应细胞功能、效应细胞功能、补体功能或结合位点的引入)。
在某些实施方式中，本公开的抗CD371抗体是全长人抗体，例如B10、C3、D6、A11、E4和E8中的任一种。全长人mAb，当施用于人时，会引起严重的副作用，包括过敏反应和超敏反应。
噬菌体展示文库的使用使得为针对非常明确的表位的独特和稀有Abs选择大量抗体库成为可能(有关噬菌体展示的更多详细信息，请参见McCafferty等人,Phageantibodies:filamentous phage displaying antibody variable domains.Nature,348:552-554)。因此，快速鉴定对肿瘤抗原衍生肽-MHC复合物分子具有高度特异性的人Fab或单链Fv(scFv)片段已因此成为可能。此外，通过使用Fab片段设计全长单克隆抗体(mAb)，可以直接生成治疗性人All，绕过通常需要开发治疗性mAb的数月耗时工作。本公开主题涉及开发全长人mAb，该mAb识别例如，用于癌症治疗(如用于治疗AML)的人CD371多肽(例如，具有SEQ ID NO:23中所示氨基酸序列的多肽)。
5.3.3.同源抗体
在某些实施方式中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括重链和轻链可变区，其包括与本文所述抗体的氨基酸序列(例如，B10、C3、D6、A11、E4和E8抗体)具有同源性或同一性的氨基酸序列，并且其中所述抗体或其抗原结合片段保留了本公开主题的抗CD371抗体或其抗原结合片段的所需功能特性。
例如，本公开主题提供包括重链可变区和轻链可变区的抗体或其抗原结合片段或部分，其中：
(a)重链可变区包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列具有至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源性或同一性的氨基酸序列；
(b)轻链可变区包括与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列具有至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源性或同一性的氨基酸序列；并且
其中所述抗体或其抗原结合片段以1×10-7M或更小的Kd或1×10-8M或更小的Kd与人CD371特异性结合。
在某些实施方式中，VH和/或VL氨基酸序列可以与上述序列具有至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源性或同一性。可以通过诱变(例如，定点或PCR介导的诱变)然后使用本文所述的结合测定法测试编码的改变的抗体的保留功能(即结合亲和力)获得具有与上述序列的VH和VL区具有高(即，80％或更高)同源性或同一性的VH和VL区的抗体。
如本文所用，两个氨基酸序列之间的同源性百分比等同于两个序列之间的同一性百分比。两个序列之间的同一性或同源性百分比是序列共享的相同位置数量的函数(即，％同源性＝相同位置的数量/位置的总数量×100)，考虑到空位的数量，和每个空位的长度，需要引入以实现两个序列的最佳联配。可以使用数学算法完成序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定，如下面的非限制性实施例中所述。
两个氨基酸序列之间的同源性或同一性百分比可使用E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.(1988)；14:11-17)的算法确定，该算法已纳入ALIGN程序(版本2.0)，使用PAM120重量残基表，空位长度罚值为12，空位罚值为4。此外，可以使用Needleman和Wunsch(J Mol Biol.(1970)48:444-453)算法确定两个氨基酸序列之间的同源性百分比，该算法已被纳入GCG软件包中的GAP程序(可访问www.gcg.com)，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，空位权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6。
另外或可选地，本公开主题的氨基酸序列还可以用作“查询序列(querysequence)”，以对公共数据库执行搜索，例如用于识别相关序列。可以使用Altschul等人,JMol Biol(1990)；215:403-10的XBLAST程序(2.0版)执行此类搜索。可以使用XBLAST程序执行BLAST蛋白质搜索，得分＝50，字长＝3，以获得与本发明的抗体分子具有同源性的氨基酸序列。为了获得空位联配以用于比较，可以使用Gapped BLAST，如Altschul等人,NucleicAcid Res(1997)；25(17):3389-3402所述。当使用BLAST和Gapped BLAST程序时，可以使用相应程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。
5.3.4.具有保守修饰的抗体
在某些实施方式中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括含有CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一个或多个包括基于本文所述的优选抗体(例如，B10、C3、D6、A11、E4和E8抗体)或其保守修饰的特定氨基酸序列，并且其中抗体保留本公开主题的抗CD371抗体或其抗原结合片段的所需功能特性。本公开主题提供包括重链可变区的抗体或其抗原结合片段或部分，该重链可变区包括CDR1、CDR2、和CDR3序列，其中：
(a)重链可变区CDR3序列包括选自SEQ ID NO:30、36、42、48、54和60的氨基酸序列及其保守修饰的氨基酸序列；
(b)轻链可变区CDR3序列包括选自SEQ ID NO:33、39、45、51、57和63的氨基酸序列及其保守修饰的氨基酸序列；并且
其中所述抗体或其抗原结合片段以1×10-7M或更低的Kd或1×10-8M或更低的Kd与人CD371结合。
在某些实施方式中，所述重链可变区CDR3序列包括选自SEQ ID NO:30、36、42、48、54和60的氨基酸序列及其保守修饰的氨基酸序列；轻链可变区CDR3序列包括选自SEQ IDNO:33、39、45、51、57和63的氨基酸序列及其保守修饰的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述重链可变区CDR2序列包括选自SEQ ID NO:29、35、41、47、53和59的氨基酸序列及其保守修饰的氨基酸序列；轻链可变区CDR2序列包括选自SEQ IDNO:32、38、44、50、56和62的氨基酸序列及其保守修饰的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述重链可变区CDR1序列包括选自SEQ ID NO:28、34、40、46、52和58的氨基酸序列及其保守修饰的氨基酸序列；轻链可变区CDR1序列包括选自SEQ IDNO:31、37、43、49、55和61的氨基酸序列及其保守修饰的氨基酸序列。
如本文所用，术语“保守序列修饰”旨在指不显著影响或改变包括氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。此类保守修饰包括氨基酸替换、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术将修饰引入本发明的抗体，例如定点诱变和PCR介导的诱变。
保守氨基酸替换是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。示例性的保守氨基酸替换在表7中显示。氨基酸替换可以被引入目标抗体并且针对所需活性(例如保留/改进的抗原结合、降低的免疫原性或改进的ADCC或CDC)筛选产物。在某些实施方式中，本文公开的序列，例如CDR序列、VH序列或VL序列，可具有多达约1个、多达约2个、多达约3个、多达约4个、多达约5个、多达约6个、多达约7个、多达约8个、多达约9个、多达约10个被修饰和/替换的氨基酸残基。
表7
原始残基 示例性保守氨基酸替换
Ala(A) Val；Leu；Ile
Arg(R) Lys；Gln；Asn
Asn(N) Gln；His；Asp，Lys；Arg
Asp(D) Glu；Asn
Cys(C) Ser；Ala
Gln(Q) Asn；Glu
Glu(E) Asp；Gln
Gly(G) Ala
His(H) Asn；Gln；Lys；Arg
Ile(I) Leu；Val；Met；Ala；Phe
Leu(L) Ile；Val；Met；Ala；Phe
Lys(K) Arg；Gln；Asn
Met(M) Leu；Phe；Ile
Phe(F) Trp；Leu；Val；IIe；Ala；Tyr
Pro(P) Ala
Ser(S) Thr
Thr(T) Val；Ser
Trp(W) Tyr；Phe
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser
Val(V) IIe；Leu；Met；Phe；Ala
氨基酸可以根据常见的侧链特性进行分类：
·疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
·中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
·酸性：Asp、Glu；
·碱性：His、Lys、Arg；
·影响链方向的残基：Gly、Pro；
·芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守替换将需要将这些类别中的一个类别的成员替换为另一个类别。
5.3.5.与本发明的抗CD371抗体交叉竞争结合CD371的抗CD371抗体
本公开主题提供与任何公开的抗CD371抗体交叉竞争结合CD371(例如，人CD371)的抗体或其抗原结合片段。例如但不作为限制，交叉竞争抗体可与本公开主题的任何抗CD371抗体或其抗原结合片段结合相同的表位区域，例如，相同的表位、相邻表位或重叠。在某些实施方式中，用于交叉竞争研究的参考抗体或其参考抗原结合片段可以是本文公开的任何一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，例如B10、C3、D6、A11、E4、和E8抗体。
此类交叉竞争抗体可以基于它们在标准CD371结合测定法中与任何一种本公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段交叉竞争的能力来鉴定。例如，Biacore分析、ELISA测定法或流式细胞术可用于证明与本公开主题的抗体的交叉竞争。测试抗体抑制例如任何一种本文公开的抗CD371抗体(例如B10、C3、D6、A11、E4和E8抗体)与CD371(例如人CD371)结合的能力彰显测试抗体可以与任何一种本公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段竞争结合CD371(例如，人CD371)且因此与任一本公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段结合CD371(例如，人CD371)上的相同表位区。在某些实施方式中，所述交叉竞争性抗体或其抗原结合片段与任何一种本公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段结合CD371(例如人CD371)上的相同表位。
5.3.6.结合抗原的抗体的表征
本公开主题的抗体或其抗原结合片段可以通过例如标准ELISA测试与CD371的结合。为了确定选择的抗CD371抗体是否与独特的表位结合，可以使用市售试剂(Pierce,Rockford,IL)对每种抗体进行生物素化。可以使用如上所述的CD371包被的ELISA板进行使用未标记的单克隆抗体和生物素化的单克隆抗体的竞争研究。可以用链霉-亲和素-碱性磷酸酶探针检测生物素化的mAb结合。
为了确定纯化抗体的同种型，可以使用对特定同种型抗体具有特异性的试剂进行同种型ELISA。可以通过蛋白质印迹进一步测试抗CD371人IgG与CD371抗原的反应性。
在某些实施方式中，通过放射性标记的抗原结合测定法(RIA)测量Kd。在某些实施方式中，使用目标抗体及其抗原的Fab版本进行RIA。例如，通过在存在一系列未标记抗原的情况下用最小浓度的(125I)标记的抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被板捕获结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(参见，例如，Chen等人,J Mol Biol(1999)；293:865-881)。
在某些实施方式中，使用
Figure BDA0003629472670000451
表面等离子体共振测定法测量Kd。例如，使用
Figure BDA0003629472670000452
-2000或
Figure BDA0003629472670000453
-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)的测定法。
5.3.7.免疫偶联物
本公开主题提供抗CD371抗体或其抗原结合片段，其与治疗部分如细胞毒素、药物(例如，免疫抑制剂)或放射性毒素偶联。此类偶联物在本文中称为“免疫偶联物”。包括一种或多种细胞毒素的免疫偶联物称为“免疫毒素”。细胞毒素或细胞毒剂包括对细胞有害(例如，杀死细胞)的任何试剂。细胞毒素的非限制性实例包括紫杉醇(例如蓖麻毒素、白喉、白树毒素)、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱、长春碱、秋水仙素、多柔比星、柔红霉素、二羟基蒽二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素及其类似物或同系物。治疗剂还包括，例如，卡奇霉素(calecheamicin)、aureastatin、抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪(decarbazine))、烷化剂(例如，氮芥、thioepa chlorambucil、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺式二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类药物(如柔红霉素(原道诺霉素)和多柔比星)、抗生素(如更生霉素)原放线菌素)、博来霉素、光神霉素和蒽霉素(AMC))、去甲基化剂(氮杂胞苷和地西他滨)和抗有丝分裂剂(例如，长春新碱和长春碱)。
可与本文公开的抗CD371抗体偶联的治疗性细胞毒素的其他实例包括duocarmycins、卡奇霉素、美登素和auristatin及其衍生物。可以使用本领域可用的接头技术将细胞毒素偶联至本文公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段。已用于将细胞毒素与抗体偶联的接头类型的实例包括但不限于腙、硫醚、酯、二硫化物和含肽接头。可以选择例如易受溶酶体区室内低pH切割或易受蛋白酶切割的接头，所述蛋白酶诸如优先在肿瘤组织中表达的蛋白酶，例如组织蛋白酶(例如，组织蛋白酶B、C、D)。为了进一步讨论细胞毒素的类型，用于将治疗剂与抗体偶联的接头和方法，另见Saito,G.等人,(2003)Adv.DrugDeliv.Rev.55:199-215；Trail,P.A.等人(2003)Cancer Immunol Immunother.52:328-337；Payne,G.(2003)Cancer Cell 3:207-212；Allen,T.M.(2002)Nat.Rev.Cancer 2:750-763；Pastan,I.和Kreitman,R.J.(2002)Curr.Opin.Investig.Drugs 3:1089-1091；Senter,P.D.和Springer,C.J.(2001)Adv.Drug Deliv.Rev.53:247-264。
本公开主题的抗CD371抗体或其抗原结合片段也可以与放射性同位素偶联以产生细胞毒性放射性药物，也称为放射免疫偶联物。可与抗体偶联用于诊断或治疗的放射性同位素的非限制性实例包括90Y、1311、225Ac、213Bi、223Ra和227Th。本领域建立了用于制备放射免疫偶联物的方法。放射免疫偶联物的实例是可商购的，包括ZevalinTM(IDECPharmaceuticals)和BexxarTM(Corixa Pharmaceuticals)，并且类似的方法可用于使用本发明的抗体制备放射免疫偶联物。
本公开主题的抗体偶联物可用于修饰给定的生物反应，并且药物部分不应被解释为限于经典化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所需生物活性的蛋白质或多肽。此类蛋白质可包括例如酶活性毒素或其活性片段，例如相思豆毒蛋白、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白质，例如肿瘤坏死因子(TNF)或干扰素-γ；或者，生物反应调节剂，例如淋巴因子、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或其他生长因子。
用于将此类治疗部分与抗体偶联的技术是众所周知的，参见，例如Arnon等人，"Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy"，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy，Reisfeld等人,(eds.),pp.243-56(AlanR.Liss,Inc.1985)；Hellstrom等人,"Antibodies For Drug Delivery",在ControlledDrug Delivery(第二版),Robinson等人(eds.),pp.623-53(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review"，在Monoclonal Antibodies'84:Biological And Clinical Applications,Pinchera等人(eds.),pp.475-506(1985)；"Analysis,Results,And Future Prospective Of TheTherapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy"，在MonoclonalAntibodies For Cancer Detection And Therapy,Baldwin等人(eds.),pp.303-16(Academic Press 1985),和Thorpe等人,"The Preparation And Cytotoxic PropertiesOf Antibody-Toxin Conjugates",Immunol.Rev.62:119-58(1982)。
5.3.8.双特异性分子
本公开主题提供包括本文公开的抗CD371抗体或其片段的双特异性分子。本公开抗体或其抗原结合片段可以衍生或连接至另一功能分子，例如另一种肽或蛋白质(例如，另一种抗体或受体的配体)以产生结合至少两种不同结合位点或靶分子的双特异性分子。本公开抗体或其抗原结合片段实际上可以衍生或连接至多于一种的其他功能分子以产生结合多于两种不同结合位点和/或靶分子的多特异性分子；这样的多特异性分子也意在被本文所用的术语“双特异性分子”所涵盖。为了生成双特异性分子，本公开抗CD371抗体或其抗原结合片段可以功能性地连接(例如，通过化学偶联、基因融合、非共价连接或其他方式)一个或多个其他结合分子，例如另一抗体、抗体片段、多肽或结合模拟物，例如双特异性分子。
本公开主题提供双特异性分子，其至少包括针对CD371的第一结合特异性和针对第二靶表位的第二结合特异性。第二靶表位可以是CD371表位或非CD371表位，例如不同的抗原。在某些实施方式中，双特异性分子是多特异性的，该分子可以进一步包括第三结合特异性。例如，当双特异性抗体的第一部分与肿瘤细胞上的抗原结合并且双特异性抗体的第二部分识别人免疫效应细胞表面上的抗原时，该抗体通过与人免疫效应细胞上的效应抗原特异性结合能够募集该效应细胞的活性。因此，在某些实施方式中，双特异性抗体，能够在效应细胞(例如T细胞和肿瘤细胞)之间形成联系，从而增强效应功能。在某些实施方式中，本公开的双特异性抗体至少包括与CD371的第一结合和与免疫细胞的至少第二结合。
本公开主题的双特异性分子可以通过使用本领域已知的方法偶联组分结合特异性来制备。例如，双特异性分子的每种结合特异性可以单独产生，然后彼此偶联。当结合特异性是蛋白质或肽时，多种偶联剂或交联剂可用于共价偶联。交联剂的非限制性实例包括蛋白A、碳二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、o-次苯基二马来酰亚胺(oPDM)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)和磺基琥珀酰4-(N-马来亚胺甲基)环己烷-1-羧酸盐(sulfo-SMCC)(参见例如，Karpovsky等人,(1984)J.Exp.Med.160:1686；Liu,MA等人,(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:8648)。其他方法包括Paulus(1985)Behring InsMitt.No.78,118-132；Brennan等人,(1985)Science 229:81-83)，和Glennie等人,(1987)J.Immunol.139:2367-2375)中描述的方法。偶联剂可以是SATA和sulfo-SMCC，两者都可从Pierce Chemical Co.(Rockford,IL)获得。
当结合特异性是抗体时，它们可以通过两条重链的C端铰链区的巯基键来偶联。在某些实施方式中，所述铰链区在偶联之前被修饰以包括奇数个巯基残基，优选一个。
或者，两种结合特异性可以在相同的载体中编码并在相同的宿主细胞中表达和组装。当双特异性分子是mAb×mAb、mAb×Fab、Fab×F(ab')2或配体×Fab融合蛋白时，该方法特别有用。
双特异性分子与其特定靶标的结合可以通过例如酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、FACS分析法、生物测定法(例如，生长抑制)或蛋白质印迹测定法来确认。这些测定法中的每一种通常通过使用对感兴趣的复合物特异性的标记试剂(例如抗体)来检测特别感兴趣的蛋白质-抗体复合物的存在。或者，可以使用多种其他免疫测定法中的任何一种来检测复合物。例如，抗体可以被放射性标记并用于放射免疫测定法(RIA)(参见例如，Weintraub,B.,Principles of Radioimmunoassays,Seventh TrainingCourse ON Radioligand Assay Techniques,The Endocrine Society,March,1986，其通过引用并入本文)。放射性同位素可以通过使用γ计数器或闪烁计数器或放射自显影等方法进行检测。
5.3.9.选择针对CD371多肽的高亲和力ScFv
下一步是在要么不结合要么以较低的结合亲和力结合的噬菌体展示文库(例如，人噬菌体展示文库)中筛选以高结合亲和力与目标靶抗原(例如CD371)结合的噬菌体。这可以通过噬菌体与抗原(所述抗原与固体支持物例如珠子或哺乳动物细胞结合)的反复结合，然后去除未结合的噬菌体并洗脱特异性结合的噬菌体来实现。在某些实施方式中，抗原(例如CD371)固定在表面(例如聚苯乙烯表面)上。噬菌体文库与细胞、珠子或其他固体支持物一起温育，并通过洗涤去除未结合的噬菌体。选择并测试结合的克隆。
一旦选择，通过流式细胞术测试阳性scFv克隆与细胞表面上的CD371(例如人CD371)的结合。简而言之，将噬菌体克隆与过表达CD371的HEK293H细胞一起温育。洗涤细胞，然后与M13外壳蛋白mAb一起温育。再次洗涤细胞并在流式细胞术之前用PE标记的抗小鼠Fab2进行标记。
在其他实施方式中，所述抗CD371抗体可包括一个或多个框架区氨基酸替换，其设计用于改善蛋白质稳定性、抗体结合、表达水平或用于引入治疗剂偶联的位点。然后根据本领域技术人员已知的方法将这些scFv用于生产重组人单克隆Igs。
5.3.10.使用选定的ScFv片段设计全长mAb
噬菌体展示技术允许快速选择和生产抗原特异性scFv和Fab片段，它们本身是有用的，或者可以进一步开发以提供完整的抗体、抗原结合蛋白或其抗原结合片段。与scFv和Fab抗体相比，具有Fc结构域的完整mAb具有许多优势。首先，只有全长Abs发挥通过Fc域介导的CDC和ADCC等免疫功能。其次，二价mAb提供比单体Fab Abs更强的抗原结合亲和力。第三，Fab和二价mAb的血浆半衰期和肾清除率将不同。每个的特定特征和优点可以与计划的效应器策略相匹配。第四，二价mAb可能以与scFv和Fab不同的速率内化，从而改变免疫功能或载体功能。例如，α发射体不需要内化即可杀死目标，但许多药物和毒素将受益于免疫复合物的内化。因此，在某些实施方式中，一旦从噬菌体展示文库获得对CD371特异的scFv克隆，就产生了使用scFv片段的全长IgG mAb。
为了在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中产生重组人单克隆IgG，可以基于本领域技术人员已知的方法设计全长IgG mAb(Tomomatsu等人,Production of human monoclonalantibody against FceRIa by a method combining in vitro immunization withphage display.Biosci Biotechnol Biochem 73(7):1465-1469 2009)。简而言之，具有匹配的Lambda或Kappa轻链恒定序列和IgG1 Fc亚类的抗体可变区可以亚克隆到哺乳动物表达载体中，(例如)(Lidija P等人,An integrated vector system for the eukaryoticexpression of antibodies or their fragments after selection from phagedisplay libraries.Gene 1997；187(1):9-18；Lisa JH,等人,Crystallographicstructure of an intact IgG1 monoclonal antibody.Journal of Molecular Biology1998；275(5):861-872)。动力学结合分析(Yasmina NA等人,Probing the bindingmechanism and affinity of tanezumab,a recombinant humanized anti-NGFmonoclonal antibody,using a repertoire of biosensors,Protein Science 2008；17(8):1326-1335)可用于确认全长IgG以纳摩尔范围内的Kd与CD371的特异性结合。
5.4.编码抗体或抗原结合片段的核酸
本公开主题提供编码本文公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段的核酸。在某些实施方式中，所述核酸包括SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27所示的核苷酸序列或由其组成。
还提供包括本公开的核酸的载体。在某些实施方式中，所述载体是表达载体。本公开主题进一步提供包括本文公开的表达载体的宿主细胞。
5.5.药物组合物和治疗方法
本公开主题提供包括本公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段、本公开的免疫偶联物、本公开的双特异性抗体的组合物。在某些实施方式中，所述组合物是还包括药学上可接受载体的药物组合物。
本公开主题提供使用本文公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段、免疫偶联物、双特异性抗体和组合物的各种方法。例如，本公开主题提供降低受试者中肿瘤负荷的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向受试者施用一种或多种本文公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段、免疫偶联物、双特异性抗体或组合物。本公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段可以减少受试者中的肿瘤细胞数量、减小受试者中的肿瘤大小和/或根除受试者中的肿瘤。
本公开主题还提供增加或延长患有肿瘤或瘤形成的受试者的存活率的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向受试者施用一种或多种本文公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段、免疫偶联物、双特异性抗体或组合物。所述方法可以降低或根除受试者中的肿瘤负荷。
本公开主题进一步提供用于治疗和/或预防受试者中的肿瘤或瘤形成的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向受试者施用一种或多种本文公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段、免疫偶联物、双特异性抗体或组合物。
此类方法包括以有效量施用本公开的抗-CD371抗体或其抗原结合片段，本公开的组合物(例如，药物组合物)以实现期望的效果，无论是缓解现有病症还是预防复发。对于治疗，给药量是产生所需效果的有效量。可以在一次或一系列给药中提供有效量。可以以推注或连续灌注的形式提供有效量。
瘤形成或肿瘤的非限制性实例包括急性髓性白血病(AML)、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤)、胶质母细胞瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)和慢性粒细胞白血病(CML)、骨癌、肠癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、黑色素瘤(皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、肾癌(如透明细胞癌)、喉癌、前列腺癌(如激素难治性前列腺癌)腺癌)、血癌(例如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤)、子宫癌、直肠癌、肛门区癌、膀胱癌、脑癌、胃癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、白血病(如急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症包括由石棉诱发的癌症(包括华氏巨球蛋白血症)、重链疾病和实体瘤，例如肉瘤和癌(例如，纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肝癌、尼罗河导管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、维尔姆氏瘤、宫颈癌、唾液腺癌、子宫癌、睾丸癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。
合适的肿瘤或瘤形成的非限制性实例包括急性髓性白血病(AML)、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、胶质母细胞瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)和慢性粒细胞白血病(CML)。在某些实施方式中，所述肿瘤或瘤形成是AML。
可以使用任何合适的方法或途径来施用本公开的抗CD371抗体，并且任选地，共同施用抗瘤剂。给药途径包括但不限于口服、静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、结内、瘤内、骨内、鞘内、胸膜、胸膜内和直接给药。然而，应该强调的是，本公开主题不限于任何特定的给药方法或途径。
本公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段可以作为偶联物施用，其特异性结合受体并在配体-毒素内化后递送有毒、致命的有效载荷。
本公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段可以以额外包括药学上可接受载体的组合物的形式施用。合适的药学上可接受的载体包括例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等中的一种或多种，以及它们的组合。药学上可接受的载体还可以包括少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，它们可提高结合蛋白的保质期或有效性。如本领域所熟知的，注射剂的组合物可以配制为在向哺乳动物施用后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。
本公开主题还提供抗体和编码它们的核酸的用于治疗肿瘤或瘤形成(例如AML)、用于诊断和预后应用以及用作检测细胞和组织中CD371的研究工具的用途。本公开主题涵盖包括本公开的抗体和核酸的药物组合物。本公开主题还涵盖用于通过载体化免疫疗法进行基于抗体的治疗的包括本公开主题的核酸的载体。载体包括能够表达和分泌抗体的表达载体，以及针对抗原结合蛋白(如嵌合抗原受体)的细胞表面表达的载体。
包括核酸的细胞，例如已经用本发明的载体转染的细胞也包括在本公开主题中。
5.6.试剂盒
本公开主题提供用于治疗和/或预防肿瘤或瘤形成(例如，AML)、用于降低肿瘤负荷和/或用于增加或延长患有肿瘤或瘤形成(例如，AML)的受试者的生存期的试剂盒。在某些实施方式中，所述试剂盒包括含有本文公开的单位剂型的抗CD371抗体或其抗原结合片段、免疫偶联物、双特异性抗体或组合物的组合物。在某些实施方式中，所述试剂盒包括装有治疗性或预防性疫苗的无菌容器；这样的容器可以是盒子、安瓿、瓶子、小瓶、管、袋子、小袋、泡罩包装或本领域已知的其他合适的容器形式。这种容器可以由塑料、玻璃、层压纸、金属箔、或其他适合盛放药物的材料。
在某些实施方式中，所述试剂盒还包括用于向受试者施用本文公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段、免疫偶联物、双特异性抗体或组合物的使用说明。使用说明一般可包括关于使用本文公开的抗CD371抗体或其抗原结合片段、免疫偶联物、双特异性抗体和组合物用于治疗和/或预防肿瘤或瘤形成(例如AML)、用于降低肿瘤负荷、和/或用于增加或延长患有肿瘤或瘤形成的受试者的生存期。在某些实施方式中，所述使用说明包括以下至少一项：治疗剂的描述；用于治疗和/或预防肿瘤或瘤形成(例如，AML)或其症状的剂量方案和给药；防范措施；警告；适应症；禁忌症；过量信息；不良反应；动物药理学；临床研究；和/或参考。使用说明可以直接印在容器上(如果存在)，或作为贴在容器上的标签，或作为在容器中或随容器提供的单独的纸张、小册子、卡片或文件夹。
5.7.检测方法
本公开主题提供用于检测全细胞或组织中的CD371的方法。在某些实施方式中，该方法包括：
a)使细胞或组织与本文公开的抗CD371抗体或抗原结合片段接触，其中该抗体或其抗原结合片段包括可检测标记；和
b)确定与细胞或组织结合的标记的抗体或其抗原结合片段的量。
在某些实施方式中，b)包括测量与细胞或组织相关的可检测标记的量，其中结合的抗体或其抗原结合片段的量指示细胞或组织中CD371的量。
所述细胞或组织可以是任何细胞或组织，包括任何正常、健康或癌细胞和组织。
6.实施例
提出以下实施例以向本领域普通技术人员提供关于如何制备和使用本公开主题的抗体、双特异性抗体、包括其的组合物、筛选和治疗方法的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人认为的他们本公开主题的范围。可以理解，鉴于上面提供的一般描述，可以实施各种其他实施例。
实施例1—抗CD371抗体和scFv的产生
与胞外结构域和氨基酸His 65-Ala 265相对应的CD371(UniProt登录号Q5QGZ9)的一部分被重组产生为带有多组氨酸标签(用于纯化)的可溶性蛋白质。鼠CD371(Thr 67-Arg 267)的胞外结构域也可产生为带有多组氨酸标签，以筛选抗体的跨物种反应性。
通过使用标准固相噬菌体展示淘选技术，对专有的天然半合成scFv噬菌体展示文库进行筛选，以寻找与CD371蛋白结合的抗体。简而言之，将重组CD371固定在聚苯乙烯表面，然后用约5％的牛奶封闭并与噬菌体文库一起温育。进行随后的洗涤、洗脱和噬菌体扩增步骤以完成每一轮生物淘选。使用来自前一轮淘选的扩增的富含CD371结合剂的噬菌体池作为后续轮次的输入，完成了三轮淘选。为了鉴定对CD371具有高特异性的克隆，通过使用抗M13噬菌体抗体的酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析来自第三轮淘选的单个克隆与人CD371、鼠CD371、和BSA(作为非特异性对照)的结合。仅选择那些表现出CD371特异性结合的单克隆噬菌体上清液进行抗体测序，从而鉴定出六种具有独特序列的抗体(B10(也称为“1B10”)、C3(也称为“1C3”)、D6(也称为“1D6”)、A11(也称为“2A11”)、E4(也称为“2E4”)和E8(也称为“2E8”))。筛选的抗体均未显示与人和小鼠CD371同源物的结合。
为了测试从噬菌体淘选活动中回收的抗体是否能够在细胞表面以其天然构象结合CD371，还在用CD371转染的HEK293H细胞和野生型HEK293H细胞上通过流式细胞术筛选单克隆噬菌体制备物。图1描述1B10、1C3、1D6、2A11、2E4和2E8抗体的结合概况。
实施例2：与表达CD371的细胞系结合的抗体
基于初步的体外功能表征，将两种mAb(1B10和1C3)重新格式化为人IgG1并测试与OCI细胞(CD371+AML细胞系)的结合。如图2A和2B所示，两种mAb均表现出剂量依赖性结合。B10被进一步设计成多种形式，包括具有两种方向的可变结构域(VH-VL或VL-VH)的scFv-Fc融合。这些scFv-Fc融合构建体显示出与CD371+细胞的特异性结合(见图3)。类似地，检测到在VL-VH方向上的B10 scFv与细胞的结合。然而，通过流式细胞术未观察到VH-VL方向上的B10 scFv的结合，表明亲和力较低，因此需要二价结合。
实施例3：溶液中与重组CD371结合的抗体
B10变体的亲和力测量通过用抗Fc抗体捕获IgG和Fc融合物并使用可溶性CD371作为分析物通过生物层干涉法来确定。对于scFv亲和力测量，用链霉亲和素捕获生物素化的CD371，并使用可溶性scFv作为分析物。表8显示不同抗体形式的解离常数(KD)、结合速率(kon)和解离速率(koff)。与流式细胞术结果一致，完整的IgG和scFv-Fc融合物比scFv结合更强(表8)，可能是由于它们的二价相互作用，导致亲合力效应。观察到VH-VL方向上的IB10scFv的弱结合，但解离常数不能通过任何曲线拟合方法计算。
表8.各种形式的抗体B10与可溶性CD371的结合亲和力
Figure BDA0003629472670000561
本公开主题的实施方式
从前面的描述，显然可以对本公开主题进行变化和修改以将其应用于各种用途和条件。这样的实施方式也在所附权利要求的范围内。
本文中对变量任何定义中元素列表的叙述包括将该变量定义为任何单个元素或所列元素的组合(或子组合)。本文对实施方式的叙述包括作为任何单个实施方式或与任何其他实施方式或其部分组合的实施方式。
本说明书中提及的所有专利和出版物都通过引用并入本文，其程度与每项独立的专利和出版物被具体地和单独地指示以通过引用并入的程度相同。
序列表
<110> 纪念斯隆-凯特琳癌症中心
<120> 抗CD371抗体及其用途
<130> 072734.1146
<150> US 62/900,118
<151> 2019-09-13
<150> US 62/936,913
<151> 2019-11-18
<160> 73
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 1
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gln Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gln Gly Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Met Trp Arg Gly Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 2
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser
20 25 30
Tyr Asn Asn Glu Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Thr Ser Glu Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 3
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 3
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asp Gly Ser Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Pro Val Asp Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 4
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 4
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Ser Ser
20 25 30
Tyr Asn Asn Glu Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Glu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 5
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 5
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asp Ile Asp Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Glu Leu Gly Ala Thr Thr Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 6
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Arg Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Glu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 7
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 7
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Thr
20 25 30
Gln Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Glu Ile Ser Gly Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Thr Glu Val Ser Gly Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 8
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Ser
20 25 30
Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Trp Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 9
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ala Gly Gly Asp Tyr Asp Ser Gly Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Gly Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Asp Tyr Ala Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 11
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 11
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Glu Ile Asp Gly Glu Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Val Asp Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Pro Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 12
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Gly Thr Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly
<210> 13
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 13
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ser
<210> 14
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 14
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 15
<211> 265
<212> PRT
<213> 智人
<400> 15
Met Ser Glu Glu Val Thr Tyr Ala Asp Leu Gln Phe Gln Asn Ser Ser
1 5 10 15
Glu Met Glu Lys Ile Pro Glu Ile Gly Lys Phe Gly Glu Lys Ala Pro
20 25 30
Pro Ala Pro Ser His Val Trp Arg Pro Ala Ala Leu Phe Leu Thr Leu
35 40 45
Leu Cys Leu Leu Leu Leu Ile Gly Leu Gly Val Leu Ala Ser Met Phe
50 55 60
His Val Thr Leu Lys Ile Glu Met Lys Lys Met Asn Lys Leu Gln Asn
65 70 75 80
Ile Ser Glu Glu Leu Gln Arg Asn Ile Ser Leu Gln Leu Met Ser Asn
85 90 95
Met Asn Ile Ser Asn Lys Ile Arg Asn Leu Ser Thr Thr Leu Gln Thr
100 105 110
Ile Ala Thr Lys Leu Cys Arg Glu Leu Tyr Ser Lys Glu Gln Glu His
115 120 125
Lys Cys Lys Pro Cys Pro Arg Arg Trp Ile Trp His Lys Asp Ser Cys
130 135 140
Tyr Phe Leu Ser Asp Asp Val Gln Thr Trp Gln Glu Ser Lys Met Ala
145 150 155 160
Cys Ala Ala Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Ile Asn Asn Lys Asn Ala
165 170 175
Leu Glu Phe Ile Lys Ser Gln Ser Arg Ser Tyr Asp Tyr Trp Leu Gly
180 185 190
Leu Ser Pro Glu Glu Asp Ser Thr Arg Gly Met Arg Val Asp Asn Ile
195 200 205
Ile Asn Ser Ser Ala Trp Val Ile Arg Asn Ala Pro Asp Leu Asn Asn
210 215 220
Met Tyr Cys Gly Tyr Ile Asn Arg Leu Tyr Val Gln Tyr Tyr His Cys
225 230 235 240
Thr Tyr Lys Lys Arg Met Ile Cys Glu Lys Met Ala Asn Pro Val Gln
245 250 255
Leu Gly Ser Thr Tyr Phe Arg Glu Ala
260 265
<210> 16
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 16
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser
20 25 30
Tyr Asn Asn Glu Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Thr Ser Glu Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Ser Asp Tyr Gln Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Gln Gly Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Met Trp Arg Gly Asp Tyr Tyr Ser Gly
225 230 235 240
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 17
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 17
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Ser Ser
20 25 30
Tyr Asn Asn Glu Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Glu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asp Gly Ser Gly Gly Gly Thr Asn Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Pro
225 230 235 240
Val Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
245 250 255
Ser
<210> 18
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Arg Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Glu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Thr Asp Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Asp Ile Asp Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Leu Glu Leu Gly Ala Thr Thr Val Tyr Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 19
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 19
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Ser
20 25 30
Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Trp Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Thr Gln
145 150 155 160
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Glu Ile Ser Gly Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Lys Asp Thr Glu Val Ser Gly Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 20
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 20
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Gly Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Asp Tyr Ala Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Ser Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ala Gly Gly Asp Tyr Asp Ser Gly Ala
225 230 235 240
Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 21
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 21
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Gly Thr Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Asp Gly Glu Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Val Asp Tyr Asp Ile Leu Thr Gly
225 230 235 240
Tyr Tyr Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser
<210> 22
<211> 762
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 22
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gcgtgccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta gacagctata acaatgagaa caatttagct 120
tggtatcagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata taccagcgaa 300
cctatcacgt tcggccaagg taccaaggtg gaaatcaaag gtggtggtgg ttcaggtggt 360
ggtggttctg gcggcggctc cggtggtggt ggatccgagg tgcagctgtt ggagtctggg 420
ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg cgactctcct gtgcagcctc tggattcacc 480
tttagcgact atcagatgag ctgggtccgc caggctccag ggaaggggct ggagtgggtg 540
tcaggcattc agggtggcgg tggtagcaca tattacgcag actccgtgaa gggccggttc 600
accatctccc gtgacaattc caagaacacg ctgtatctgc aaatgaacag cctgcgtgcc 660
gaggacacgg ctgtgtatta ctgtgcgaga gagatgtggc gtggggacta ctactccggt 720
atggacgtct ggggccaggg gaccacggtc accgtctcct ca 762
<210> 23
<211> 771
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 23
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gcgtgccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta agcagctata acaatgagaa caatttagct 120
tggtatcagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttacgccgc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagcgaa 300
ccttatacgt tcggccaagg taccaaggtg gaaatcaaag gtggtggtgg ttcaggtggt 360
ggtggttctg gcggcggctc cggtggtggt ggatccgagg tgcagctgtt ggagtctggg 420
ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg cgactctcct gtgcagcctc tggattcacc 480
tttaccagct atgccatgag ctgggtccgc caggctccag ggaaggggct ggagtgggtg 540
tcaggcattg acggtagcgg tggtggcaca aattacgcag actccgtgaa gggccggttc 600
accatctccc gtgacaattc caagaacacg ctgtatctgc aaatgaacag cctgcgtgcc 660
gaggacacgg ctgtgtatta ctgtgcgaga gcgtattacg atattttgac tggttacccc 720
gtggacggta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc a 771
<210> 24
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 24
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gcgtgccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta cgcagcagca acaataaaaa caatttagct 120
tggtatcagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttacgccgc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatcgcgaa 300
cctctgacgt tcggccaagg taccaaggtg gaaatcaaag gtggtggtgg ttcaggtggt 360
ggtggttctg gcggcggctc cggtggtggt ggatccgagg tgcagctgtt ggagtctggg 420
ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg cgactctcct gtgcagcctc tggattcacc 480
tttaccgact atgccatgag ctgggtccgc caggctccag ggaaggggct ggagtgggtg 540
tcagacattg acggtagcgg tggtagcaca gactacgcag actccgtgaa gggccggttc 600
accatctccc gtgacaattc caagaacacg ctgtatctgc aaatgaacag cctgcgtgcc 660
gaggacacgg ctgtgtatta ctgtgcgcta gagctgggag ctactaccgt ctactggggc 720
cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 747
<210> 25
<211> 741
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 25
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga acgtgccacc 60
ctctcctgcc gtgccagtca gagtgttgac agcagcaatt tagcctggta tcagcagaaa 120
cctggccagg ctccccgact cctcatctat ggcgcatcta gccgtgccac tggtatccca 180
gaccgtttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatcgca gctggcctat cacgttcggc 300
caaggtacca aggtggaaat caaaggtggt ggtggttcag gtggtggtgg ttctggcggc 360
ggctccggtg gtggtggatc cgaggtgcag ctgttggagt ctgggggagg cttggtacag 420
cctggggggt ccctgcgact ctcctgtgca gcctctggat tcacctttac cagcacccag 480
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tatggtggta gcacatacta cgcagactcc gtgaagggcc ggttcaccat ctcccgtgac 600
aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg aacagcctgc gtgccgagga cacggctgtg 660
tattactgtg caaaagacac ggaggtttcg ggagatgctt ttgatatctg gggccaaggg 720
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<212> DNA
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gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gcgtgccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tatagcggca acaataaaaa ctatttagct 120
tggtatcagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttacggcgc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata tgactatgcc 300
ccttttacgt tcggccaagg taccaaggtg gaaatcaaag gtggtggtgg ttcaggtggt 360
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ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg cgactctcct gtgcagcctc tggattcacc 480
tttaccagct attatatgag ctgggtccgc caggctccag ggaaggggct ggagtgggtg 540
tcaggcatta gcggtagcgg tgacagcaca agctacgcag actccgtgaa gggccggttc 600
accatctccc gtgacaattc caagaacacg ctgtatctgc aaatgaacag cctgcgtgcc 660
gaggacacgg ctgtgtatta ctgtgcgaga gaggcaggtg gtgactacga tagtggtgct 720
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 27
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gcgtgccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta gacagcagca acaataaaaa ctatttagct 120
tggtatcagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttacgacgc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaagg caccagcagc 300
cctctgacgt tcggccaagg taccaaggtg gaaatcaaag gtggtggtgg ttcaggtggt 360
ggtggttctg gcggcggctc cggtggtggt ggatccgagg tgcagctgtt ggagtctggg 420
ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg cgactctcct gtgcagcctc tggattcacc 480
tttagcagct atgccatgag ctgggtccgc caggctccag ggaaggggct ggagtgggtg 540
tcagagattg acggtgaggg tggttataca aattacgcag actccgtgaa gggccggttc 600
accatctccc gtgacaattc caagaacacg ctgtatctgc aaatgaacag cctgcgtgcc 660
gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgcgaga gaaggggtag attacgatat tttgactggt 720
tattatcctt acggtatgga cgtctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctca 777
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<220>
<223> 合成的多肽
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Ile Gln Gly Gly Gly Gly Ser Thr
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<220>
<223> 合成的多肽
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Ala Arg Glu Met Trp Arg Gly Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
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<220>
<223> 合成的多肽
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Gln Ser Val Leu Asp Ser Tyr Asn Asn Glu Asn Asn
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<211> 3
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<220>
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Trp Ala Ser
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Ala Arg Ala Tyr Tyr Asp Ile Leu
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Gln Ser Val Leu Arg Ser Ser Asn Asn Lys Asn Asn
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Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
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Ala Arg Glu Ala Gly Gly Asp Tyr Asp Ser Gly Ala Phe Asp Ile
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Gln Ser Val Leu Tyr Ser Gly Asn Asn Lys Asn Tyr
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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
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Ala Arg Glu Gly Val Asp Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Pro Tyr
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Gly Met Asp Val
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<220>
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Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
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<223> 合成的多肽
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Gln Gln Gly Thr Ser Ser Pro Leu Thr
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<220>
<223> 合成的多肽
<400> 64
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20
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<220>
<223> 合成的多肽
<400> 65
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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<220>
<223> 合成的多肽
<400> 66
Gly Gly Gly Gly Ser
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<220>
<223> 合成的多肽
<400> 67
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 68
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gln Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gln Gly Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Met Trp Arg Gly Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val
130 135 140
Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala
145 150 155 160
Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser Tyr Asn Asn
165 170 175
Glu Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys
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Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg
195 200 205
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
210 215 220
Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Thr Ser
225 230 235 240
Glu Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 69
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asp Gly Ser Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Pro Val Asp Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
145 150 155 160
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Ser Ser
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Tyr Asn Asn Glu Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
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Tyr Tyr Ser Glu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
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Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 70
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
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Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Asp Ile Asp Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val
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Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro
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Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys
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Ser Ser Gln Ser Val Leu Arg Ser Ser Asn Asn Lys Asn Asn Leu Ala
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Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 71
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Thr
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Gln Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
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Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu
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Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser
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Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
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Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala
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Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Trp Pro Ile Thr Phe Gly Gln
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Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 72
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 72
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
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Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val
130 135 140
Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala
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Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg
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Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Tyr
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Ala Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
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<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 73
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Glu Ile Asp Gly Glu Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Val Asp Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Pro Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser
145 150 155 160
Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu
165 170 175
Asp Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
180 185 190
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
195 200 205
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
210 215 220
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Gln Gln Gly Thr Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
245 250 255
Glu Ile Lys

Claims (51)

1.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列。
2.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列。
3.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括
(a)重链可变区，其包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列；和
(b)轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQID NO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列。
4.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和轻链可变区选自：
(a)包括与SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包括与SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)包括与SEQ ID NO:3中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包括与SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)包括与SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包括与SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)包括与SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包括与SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)包括与SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包括与SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的轻链可变区；和
(f)包括与SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包括与SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％同源性或同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
5.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区，所述重链可变区包括SEQID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列。
6.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列。
7.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括
(a)重链可变区，其包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQID NO:9或SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列；和
(b)轻链可变区，其包括SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQID NO:10或SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包括：
(a)包括SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列的重链可变区，以及包括SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列的轻链可变区；
(b)包括SEQ ID NO:3中所示氨基酸序列的重链可变区，以及包括SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列的轻链可变区；
(c)包括SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列的重链可变区，以及包括SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列的轻链可变区；
(d)包括SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的重链可变区，以及包括SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的轻链可变区；
(e)包括SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列的重链可变区，以及包括SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列的轻链可变区；和
(f)包括SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的重链可变区，以及包括SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的轻链可变区。
9.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括：含有CDR1、CDR2和CDR3结构域的重链可变区；以及含有CDR1、CDR2和CDR3结构域的轻链可变区，其中所述重链可变区和轻链可变区CDR3结构域选自：
(a)包括SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR3；以及包括SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(b)包括SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR3；以及包括SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(c)包括SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR3；以及包括SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(d)包括SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR3；以及包括SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(e)包括SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR3；以及包括SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR3；和
(f)包括SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR3；以及包括SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR3。
10.根据权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区和轻链可变区CDR2结构域选自：
(a)包括SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR2；
(b)包括SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR2；
(c)包括SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR2；
(d)包括SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR2；
(e)包括SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR2；和
(f)包括SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR2。
11.根据权利要求9或10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区和轻链可变区CDR1结构域选自：
(a)包括SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR1；以及包括SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR1；
(b)包括SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR1；以及包括SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR1；
(c)包括SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR1；以及包括SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR1；
(d)包括SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR1；以及包括SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR1；
(e)包括SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR1；以及包括SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR1；和
(f)包括SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR1；以及包括SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR1。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中一个或多个CDR序列具有多达约5个氨基酸替换。
13.根据权利要求9-11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中一个或多个CDR序列具有多达约3个氨基酸替换。
14.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括：
(a)包括SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；
(b)包括SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；
(c)包括SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；
(d)包括SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；
(e)包括SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3，或
(f)包括SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
15.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括：
(a)包括SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
(b)包括SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
(c)包括SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
(d)包括SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
(e)包括SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3，或
(f)包括SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
16.一种抗CD371抗体或其抗原结合片段，其包括：
(a)包括SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:29中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；包括SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；包括SEQ ID NO:31中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:33中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
(b)包括SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；包括SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；包括SEQ ID NO:37中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
(c)包括SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:41中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；包括SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；包括SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:44中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:45中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
(d)包括SEQ ID NO:46中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；包括SEQ ID NO:48中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；包括SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:50中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:51中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
(e)包括SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:53中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；包括SEQ ID NO:54中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；包括SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3；或
(f)包括SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列的重链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列的重链可变区CDR2；包括SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列的重链可变区CDR3；包括SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包括SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR2；以及包括SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与包括SEQ ID NO:15中所示氨基酸序列的CD371或其片段结合。
18.一种抗体或其抗原结合片段，其与权利要求1-17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段交叉竞争结合CD371。
19.一种抗体或其抗原结合片段，其与权利要求1-17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段结合CD371上的相同表位。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体序列为轻-重可变链方向(VL-VH)。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以约1×10-7M和约1×10-8M之间或约1×10-9M和约1×10-8M之间的解离常数(KD)与人CD371结合。
22.一种抗体或其抗原结合片段，其包括SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包括人可变区框架区。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为全长人或其抗原结合片段。
25.根据权利要求1-23中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为嵌合抗体或其抗原结合片段。
26.根据权利要求1-23中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其为人源化抗体或其抗原结合片段。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体的抗原结合片段为Fab、Fab'，F(ab')2、可变片段(Fv)或单链可变区(scFv)。
28.一种组合物，其包括权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
29.根据权利要求28所述的组合物，其为还包括药学上可接受的载体的药物组合物。
30.一种免疫偶联物，其包括连接至治疗剂的权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
31.根据权利要求30所述的免疫偶联物，其中所述治疗剂为药物、细胞毒素、或放射性同位素。
32.一种组合物，其包括权利要求30或31所述的免疫偶联物。
33.根据权利要求32所述的组合物，其为还包括药学上可接受的载体的药物组合物。
34.一种双特异性分子，其包括连接至第二功能部分的权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
35.根据权利要求34所述的双特异性分子，其中所述第二功能部分具有与所述抗体或其抗原结合片段不同的结合特异性。
36.一种组合物，其包括权利要求34或35所述的双特异性分子。
37.根据权利要求36所述的组合物，其为还包括药学上可接受的载体的药物组合物。
38.一种编码权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核酸。
39.一种包括根据权利要求38所述的核酸分子的表达载体。
40.一种包括根据权利要求39所述的表达载体的宿主细胞。
41.一种检测整个细胞或组织中CD371的方法，其包括：
将细胞或组织与权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合片段包括可检测标记；以及
通过测量与所述细胞或组织相关联的可检测标记的量来确定与所述细胞或组织结合的标记抗体或其抗原结合片段的量，其中结合的抗体或其抗原结合片段的量指示所述细胞或组织中CD371的量。
42.一种降低受试者中肿瘤负荷的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求30或31所述的免疫偶联物、权利要求34或35所述的双特异性分子、或权利要求28、29、32、33、36和37中任一项所述的组合物。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述方法减少所述受试者中的肿瘤细胞的数量、减小所述受试者中的肿瘤大小和/或根除所述受试者中的肿瘤。
44.一种治疗和/或预防受试者中的肿瘤或瘤形成的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求30或31所述的免疫偶联物、权利要求34或35所述的双特异性分子、或权利要求28、29、32、33、36和37中任一项所述的组合物。
45.一种增加或延长患有肿瘤或瘤形成的受试者生存期的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求30或31所述的免疫偶联物、权利要求34或35所述的双特异性分子、或权利要求28、29、32、33、36和37中任一项所述的组合物。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述方法可降低或根除所述受试者中的肿瘤负荷。
47.根据权利要求42-46中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或瘤形成选自急性髓系白血病(AML)、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、胶质母细胞瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、和慢性髓系白血病(CML)。
48.根据权利要求42-47中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或瘤形成为AML。
49.根据权利要求42-48中任一项所述的方法，其中所述受试者为人。
50.一种用于降低受试者的肿瘤负荷、治疗和/或预防受试者中的肿瘤或瘤形成、和/或增加或延长患有肿瘤或瘤形成的受试者的生存期的试剂盒，其包括权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
51.根据权利要求50所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括使用其抗体或其抗原结合片段来治疗和/或预防受试者中的肿瘤或瘤形成，和/或增加或延长患有肿瘤或瘤形成的受试者的生存期的书面说明。
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