CN114632092B - 睾丸片在制备具有降糖活性的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了睾丸片在制备具有降糖活性的药物中的应用。所述睾丸片在制备提升血清中鸢尾素含量的药物的应用。本发明通过对小鼠喂养睾丸片后，检测到小鼠血清中分泌的鸢尾素含量有所升高，通过本研究表明睾丸片能够增加小鼠体内的血清鸢尾素水平。并且通过对肥胖引发的高血糖小鼠施用睾丸片治疗后，发现睾丸片组小鼠体重及血糖显著下降，通过本研究表明睾丸片对于肥胖及高血糖小鼠具有减轻体重、降低血糖的功效。

Description

睾丸片在制备具有降糖活性的药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地涉及一种睾丸片在制备具有降糖活性的药物中的应用。

背景技术

近年来，由于高脂饮食增加、体力活动减少、生活压力增大等原因，肥胖人群逐年扩大。众所周知，人体脂肪组织主要由白色脂肪(WAT)、棕色脂肪(BAT)两类构成。白色脂肪主要储存能量，而棕色脂肪主要通过解耦联蛋白-1(UCP-1)将线粒体内氧化磷酸化产生的能量以热的形式散发，并增强人体对体重增加的易感性，从而预防肥胖及相关代谢疾病的发生。因此，提高棕色脂肪产热可能作为治疗肥胖的一种选择。肥胖与糖尿病的发生、发展有重要的相关性-肥胖会导致明显胰岛素抵抗。肥胖症患者中的脂肪细胞可产生过多的坏死因子，其过度抑制胰岛素与血糖结合进入细胞内，使得血糖升高，诱发肥胖合并的糖尿病。

鸢尾素（Irisin）是经过锻炼之后的肌肉分泌的一种叫过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子α（PGC-1α）的蛋白调控下游因子剪切和修饰后形成的新型激素蛋白。其可以作用于白色脂肪细胞，诱导其转化为棕色脂肪细胞，棕色脂肪细胞能快速消耗葡萄糖和脂肪，增加机体能量消耗，促进新陈代谢，减轻体重。正因为鸢尾素能减轻体重，因此在一定程度上有助于减轻胰岛素抵抗，进而有助于2型糖尿病的治疗及病情改善。

Polyzos SA等（Irisinin metabolic diseases〔J〕．Endocrine，2018; 59( 2) :260-74）研究表明鸢尾素与一系列代谢相关性疾病，包括肥胖、2型糖尿病和心血管疾病等有关。鸢尾素参与调节肌肉细胞的线粒体功能、FNDC5 基因的表达及其他代谢途径，体外和动物实验表明鸢尾素对代谢途径有直接和间接的影响，主要作用于脂肪组织、肌肉和肝脏。首先，在脂肪组织，鸢尾素能够增强葡萄糖摄取，刺激脂肪分解，抑制脂肪堆积。其次，在肌肉组织，鸢尾素促进葡萄糖摄取、脂质摄取和代谢增加，减少糖原分解和糖异生。目前仅仅将鸢尾素作为肥胖及2型糖尿病的检测指标，并未开展过通过调节鸢尾素水平来治疗糖尿病的相关研究。

北京第一生物化学药业有限公司生产的睾丸片（药品批准文号：国药准字H11022468），其常用于治疗睾丸的发育迟缓，男子的更年期障碍，或者是缺乏睾丸素而导致的阳痿、早泄等各种疾病。睾丸片主要功能是促进雄性器官的生长、精子发生和雄性第二性征的发育，此外有研究证明雄性激素对骨密度、脂肪分布、肌肉量、血红蛋白等均有不同程度的影响等，但是其用于降糖活性药物的用途未见报道。

综上所述，肥胖以及肥胖引起的糖尿病正影响着人们的生活质量，采用一种安全有效的药物，提升人体内血清中鸢尾素含量，促进肥胖患者体内白色脂肪转化为棕色脂肪，进而达到降脂降糖的目的，已成为众多科学家的研究方向之一。然而，目前尚未发现以上述理论作为治疗机制的药物或治疗方案，本发明提供了一种极具价值的可行方案。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种睾丸片在制备具有降糖活性的药物中的应用。

本发明采用的技术方案为：

睾丸片在制备具有降糖活性的药物中的应用。

进一步地，所述睾丸片在制备提升血清中鸢尾素含量的药物的应用。

进一步地，所述睾丸片在制备由肥胖引起的糖尿病药物的应用。

进一步地，所述睾丸片在小鼠中用量为0.04-1 g/kg/只/天。

进一步地，所述睾丸片在小鼠中用量为0.1~0.5g/kg/只/天。

进一步地，所述睾丸片在小鼠中用量为0.2g/kg/只/天。

本发明获得的有益效果为：本发明通过对小鼠喂养睾丸片后，检测到小鼠血清中分泌的鸢尾素含量有所升高，通过本研究表明睾丸片能够提高小鼠体内的血清鸢尾素水平。并且通过对肥胖引发的高血糖小鼠施用睾丸片治疗后，发现睾丸片组小鼠体重及血糖显著下降，通过本研究表明睾丸片对于肥胖及高血糖小鼠具有减轻体重、降低血糖的功效。

本发明中睾丸片有提升血清鸢尾素水平的作用，同时睾丸片还能够调节肥胖型糖尿病患者的血糖水平；本研究为验证鸢尾素与糖尿病的关系提供了新的证据，填补了目前无相关药物通过调节鸢尾素水平用于降糖治疗的空白。睾丸片作为一个已上市药物，安全性能得到保障，顺应性良好，为肥胖型糖尿病患者提供一种新的治疗方案。

附图说明

图1为本发明实施例一各组小鼠血清中鸢尾素含量检测结果；

图2为本发明实施例二实验第一日各组小鼠体重测试结果；

图3为本发明实施例二实验最后一日各组小鼠体重测试结果；

图4为本发明实施例二实验第一日各组小鼠血糖含量；

图5为本发明实施例二实验最后一日各组小鼠血糖含量。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

实施例一小鼠血清鸢尾素含量检测

1实验材料：

6~8周龄雄性C57BL/6 小鼠，体重20~22 g，[购于北大医学部实验动物中心]，饲养于北大基础医学院免疫学系动物房；

睾丸片（北京第一生物化学药业有限公司，批号：210601）；

小鼠鸢尾素(Irisin)ELISA试剂盒（JL46388-96T，北京聚德安泰科技有限公司）；

SHBG Rabbit Polyclonal Antibody（美国proteintech）；

Irisin Antibody（美国BioVision）；GAPDH Antibody（美国proteintech）；HRPAffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG（美国EarthOx）；HRP AffiniPure Goat Anti-MouseIgG（美国EarthOx）；NewFlash Protein AnyKD PAGE（中国达科为）；Protein Maker（中国聚合美）；5x Loading buffer RIPA（中国HARVEYBIO）；PMSF（中国翊圣生物）；ECL显影液（中国达科为）；G:BOX 荧光、化学发光成像系统（美国Syngene）；电泳仪（美国Biored）；多全波段酶标仪（MULTISKAN MK3，美国Thermo公司）；Echo-MRI 700，美国；若干解剖镊子、剪刀，常规天平；电泳仪（美国Biored）。

2实验方法：

将 C57BL/6小鼠随机分成4组，分别标记为空白对照组（0.2ml 蒸馏水/只/天）、低剂量睾丸片（0.04g/kg/只/天）灌胃组、正常剂量睾丸片（0.2g/kg/只/天）灌胃组、高剂量睾丸片（1g/kg/只/天）灌胃组，每天灌胃相应剂量样品30天后处死小鼠。（实验剂量换算：成人剂量每日9片，每片0.2g，合计1.8g，按照剂量换算公式，小鼠剂量=成人剂量1.8g/70kg ×9.1 ≈ 0.2g/kg）

3小鼠血清鸢尾素含量检测方法

使用前将所有试剂和样本平衡至室温。推荐所有的样本、标准和对照测定双份。

1)准备好所有的试剂和工作标准品。

2)取下多余的微量培养板条，放回装有干燥剂的锡箔袋中，重新密封。

3)每孔加入100ul Assay Diluent RD1-51。

4)每孔依次加入100ul 标准品、样本和对照。用橡皮条密封。室温孵化2小时。记录测定标准和样本的分布。（确保该过程在15min内完成）

5)吸弃孔内液体，每孔400ul洗涤液，充分洗涤后完全去除液体。在干净的纸上拍干。反复洗涤4次。

6)每孔加入200ul Irisin Conjugate。用新的橡皮膏条密封。室温孵育2小时。

7)重复步骤5。

8)每孔加入200ul Substrate Solution。室温避光孵育30分钟。

9)每孔加入50ul Stop Solution。孔内颜色应该由蓝变黄。如果孔内颜色是绿色，或者颜色变化不均匀，轻轻拍打板子以确保充分混匀。

10)30分钟内使用酶标仪在450nm测定每孔的吸光度，如果波长校正是有效的，设为540nm或570nm。如果波长校正不可用，从450nm波长读数减去540nm或570nm波长读数。这种方法可以校正板的光学缺陷。直接在450nm而无校正读数可能会偏高或偏低。

4 各组小鼠鸢尾素含量检测

本实验在实验第30天处死各组小鼠，并眼球取血，离心后取血清迅速利用鸢尾素的ELISA检测试剂盒进行小鼠鸢尾素含量检测。实验结果如图1所示。图1中：Control为空白对照组，High-dose为高剂量睾丸片灌胃组，Normal-dose为正常剂量睾丸片灌胃组，Low-dose为低剂量睾丸片灌胃组。

由结果可知，低剂量、正常剂量、高剂量各喂养组小鼠血清中鸢尾素含量均显著高于空白对照组（P<0.05,P<0.001,P<0.001），随着睾丸片喂养的浓度增加，小鼠血清中分泌的鸢尾素含量也逐渐增加。该结果初步表明鸢尾素含量增加与睾丸片有一定的联系，随着睾丸片剂量的增加，鸢尾素含量升高。

实施例二睾丸片降糖作用研究

1 实验动物

2 主要试剂

睾丸片（北京第一生物化学药业有限公司，批号：210601）

高脂饲料（北京华阜康生物科技股份有限公司）

3 主要仪器

体重秤、血糖检测仪

4 实验动物的饲养条件

温度	20-25°C
		相对湿度	40-50%
光照周期	12小时光照周期 (7:00 – 19:00)
		每笼动物数量	4只/笼
动物笼	IVC笼
		饮食及饮水限制	无
动物饮食	自由采食
		动物饮水	自由饮水
垫料	玉米芯

5 实验动物标记

标记方法	笼牌、金属耳标（A001-A100）

6 实验动物初步分组

空白组	8只
		模型组	8只
睾丸片组	8只

7 适应期

适应期时长

7天

8 实验动物的饮食控制

小鼠在正常饮食适应喂养7天之后，模型组和睾丸片组更换正常饮食为高脂饮食，高脂饲料购自北京华阜康生物科技股份有限公司。

高脂饲料中添加20%蔗糖、15%猪油、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠，适量的酪蛋白、磷酸氢钙、石粉等。

9 实验动物监测

体重监测

每周监测

10 实验造模成功的判断标准

造模前、造模后每周称量小鼠的体重，计算肥胖度。

11 实验动物分组（选取肥胖度＞20%的小鼠）

每次干预前称量小鼠体重并记录，每周称量小鼠体重，造模完成后测量小鼠空腹血糖一次、实验最后一日测量小鼠空腹血糖一次，预计干预5周。

12 实验结果

12.1 小鼠体重结果

第一日各组小鼠体重如图2所示。在造模完成后，实验开始第一日，空白组小鼠与模型组小鼠体重有显著差异（P=0.0007），空白组小鼠与睾丸片组小鼠体重有显著差异（P=0.0011），模型组小鼠与睾丸片组小鼠体重无统计学差异（P=0.99）。表明实验造模成功，模型组及睾丸片组小鼠具有肥胖表现。

如图3所示，随着实验进行（2022.03.04-2022.04.10，共38日），睾丸片组小鼠体重下降明显，且均低于模型组小鼠。表明睾丸片具有降低体重、减轻肥胖症状的功效。

12.2 小鼠空腹血糖结果。

在造模完成后，实验开始第一日，空白组小鼠与模型组小鼠血糖有显著差异（P<0.0001），空白组小鼠与睾丸片组小鼠血糖有显著差异（P=0.0004），模型组小鼠与睾丸片组小鼠血糖无统计学差异（P=0.55）。表明实验造模成功，模型组及睾丸片组小鼠具有糖尿病表现，如图4所示。

结果可见，经过睾丸片给药38日后（2022.03.04-2022.04.10），睾丸片组小鼠血糖与空白组无统计学差异（P=0.56），模型组与空白组血糖具有显著差异（P<0.0001）。表明睾丸片具有降低肥胖小鼠血糖的功效，具有治疗因肥胖引起的糖尿病的潜力，如图5所示。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.睾丸片在制备具有降糖活性的糖尿病药物中的应用。

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