CN114621135A - 一种lpa1小分子拮抗剂 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一种LPA1小分子拮抗剂。具体而言，本公开提供了一种式V所示的苯基吡啶类化合物，这些化合物具有一定的LPA1受体的抑制作用。

Description

一种LPA1小分子拮抗剂
技术领域
本公开属于医药领域，涉及一种LPA1小分子拮抗剂。
背景技术
血磷脂系膜衍生生物活性脂质介体，其中医学上最重要的溶血磷脂中的一者为溶血磷脂酸(LPA)，溶血磷脂影响包括增殖、分化、存活、迁移、黏附、侵袭及形态发生的基本细胞功能。这些功能影响许多生物进程，其包括但不限于神经发生、血管发生、伤口愈合、纤维化、免疫及致癌作用。
LPA是非单一分子实体而系具有不同长度及饱和度的脂肪酸的内源性结构变体的集合。LPA的结构主链是衍生自基于甘油的磷脂，诸如磷脂酰胆碱(PC)或磷脂酸(PA)。溶血磷脂酸(LPA)为已显示经特异性G-蛋白偶联受体(GPCR)组以自分泌及旁分泌方式起作用的溶血磷脂。LPA结合至其同源GPCR(LPA1、LPA2、LPA3、LPA4、LPA5、LPA6)活化细胞内信号传导途径以产生各种生物反应。发现LPA受体的拮抗剂用于治疗LPA起作用的疾病、障碍或病症。
发明内容
本公开(The disclosure)提供了式V所示化合物或其可药用的盐，其为
Figure BDA0003403233960000011
其中
R13选自羧基、亚磷酸基；
R14独立地选自氘、卤素、甲基、乙基、丙基、正丙基、环丙基、甲氧基、乙氧基和环丙氧基；h选自0-2的整数；优选h为0；
X4、X5独立地选自CH、CR12或氮原子，且X4、X5中至少一个选自氮原子；
R12独立地选自氘、卤素、甲基、乙基、丙基、环丙基、甲氧基、乙氧基、氨基和氰基，优选氘、卤素和甲基；更优选甲基；
R6独立的选自氘和卤素；
z选自0-4的整数，优选z选自0-2的整数；
R2选自单键、亚甲基，优选R2为亚甲基；所述亚甲基任选被1-2个氘、甲基、甲氧基、羟基、卤素、硝基、氰基、环丙基、环戊基所取代；优选所述亚甲基任选被1-2个氘、卤素、环丙基所取代；更优选所述亚甲基任选被1-2个氘、卤素所取代；
-X3-选自-O-或者-NR11-，所述R11选自氢、氘；
-X6-选自-O-或者-NR3-，所述R3选自氢、氘、C1-6烷基、C3-6环烷基；优选所述R3选自氢、氘、甲基、乙基、环丙基；所述甲基、乙基、环丙基优选被1-3个羟基、卤素、硝基、氰基所取代；
R4选自氢、氘、C1-6烷基，C3-6环烷基，所述C1-6烷基、C3-6环烷基任选被一个或多个氘、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、硝基、氰基、C3-6环烷基所取代。
在某些可实施方案，式V所示的化合物或其可药用盐中，X4选自氮原子，X5选自CH或氮原子；
在某些可实施方案，式V所示的化合物或其可药用盐中，R4选自氢、氘、甲基、乙基、丙基、正丙基、正丁基、环戊基、环丁甲基、环丙甲基、环戊甲基，所述甲基、乙基、丙基、正丙基、环丙甲基、环戊甲基任选被一个或多个氘、卤素、氰基所取代。
式V所示典型化合物或其可药用的盐，式V所示典型化合物包括但不限于：
Figure BDA0003403233960000021
Figure BDA0003403233960000031
Figure BDA0003403233960000041
Figure BDA0003403233960000051
式V所示典型化合物或其可药用的盐，式V所示的化合物包括但不限于：
Figure BDA0003403233960000052
Figure BDA0003403233960000061
其中，化合物的构型还可以是下列所述的构型：
Figure BDA0003403233960000071
Figure BDA0003403233960000081
本公开中还提供了一种药物组合物，包括至少一种治疗有效量的前述式V所示化合物或其可药用的盐、或由前述方法制备获得化合物或其可药用的盐以及药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，所述的药物组合物的单位剂量为0.001mg-1000mg。
在某些实施方案中，基于组合物的总重量，所述的药物组合物含有0.01-99.99％的前述化合物或其可药用的盐。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有0.1-99.9％的前述化合物或其可药用的盐。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有0.5％-99.5％的前述化合物或其可药用的盐。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有1％-99％的前述化合物或其可药用的盐。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有2％-98％的前述化合物或其可药用的盐。
在某些实施方案中，基于组合物的总重量，所述的药物组合物含有0.01％-99.99％的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有0.1％-99.9％的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有0.5％-99.5％的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有1％-99％的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有2％-98％的药学上可接受的赋形剂。
本公开还提供一种预防和/或治疗与LPA1相关病症患者的方法，其通过向所述患者施用治疗有效量的如式V所示的化合物或其可药用盐或前述的药物组合物。
本公开还提供一种预防和/或治疗器官纤维化变性疾病、呼吸系统疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、炎性疾病、神经系统疾病、心脑血管疾病、胃肠道疾病、疼痛、泌尿系统疾病、眼病、代谢疾病、癌症、移植器官排斥患者的方法，其通过向所述患者施用治疗有效量的如V所示的化合物或其可药用盐或前述的药物组合物。
本公开还提供如式V所示的化合物或其可药用盐或前述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗与LPA1相关病症的药物中的用途。在一些实施方案中，所述与LPA1相关病症优选器官纤维化变性疾病、呼吸系统疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、炎性疾病、神经系统疾病、心脑血管疾病、胃肠道疾病、疼痛、泌尿系统疾病、眼病、代谢疾病、癌症、移植器官排斥；
所述器官纤维化变性疾病包括但不限于：肺纤维化(特别是特发性肺纤维化)、肾纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化、肠纤维化、眼纤维化。
所述呼吸系统疾病包括但不限于：呼吸障碍，包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、支气管痉挛、咳嗽、慢性咳嗽、呼吸衰竭。
所述肾脏疾病包括但不限于：急性肾损伤、慢性肾病。
所述肝脏疾病包括但不限于：酒精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝炎、急慢性肝炎、肝硬化、肝机能减退等肝脏疾病。
所述炎性疾病包括但不限于：自身免疫病、炎症、关节炎、类风湿性关节炎、硬皮病、雷诺氏现象、慢性瘙痒。
所述神经系统疾病包括但不限于：老年痴呆症、帕金森、神经退行性变、外伤性脑损伤、癫痫、精神疾病、睡眠障碍。
所述心脑血管疾病包括但不限于：胶原血管疾病、心肌梗死、脑卒中、血栓症、动脉粥样硬化、心衰、高血压。
所述胃肠道疾病包括但不限于：结肠综合症、炎性肠病、消化道疾病、胃肠功能紊乱。
所述疼痛包括但不限于：癌症疼痛、神经病性疼痛、炎性疼痛、手术疼痛、内脏疼痛、牙痛、经前期疼痛、中枢性疼痛、由灼伤所致疼痛、偏头痛、或簇性头痛、慢性疼痛。
所述泌尿系统疾病包括尿失禁、排尿困难、膀胱炎、前列腺肥大症、前列腺肥大症所伴随的排尿障碍、膀胱颈硬化症、膀胱活动低下症。
所述眼病包括黄斑变性、糖尿病性视网膜病。
所述癌症包括但不限于：乳癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、神经胶质母细胞瘤、骨癌、结肠癌、肠癌、头颈癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、慢性淋巴球性白血病、肿瘤转移。
本公开还提供如式V所示的化合物或其可药用盐或前述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗器官纤维化变性疾病、呼吸系统疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、炎性疾病、神经系统疾病、心脑血管疾病、胃肠道疾病、疼痛、泌尿系统疾病、眼病、代谢疾病、癌症、移植器官排斥的药物中的用途。
本公开中所述化合物可药用盐可选自无机盐或有机盐。
本公开化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本公开设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本公开的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围之内。本公开的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本公开某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明所述化合物的化学结构中，键
Figure BDA0003403233960000101
表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键
Figure BDA0003403233960000102
可以为
Figure BDA0003403233960000103
或
Figure BDA0003403233960000104
或者同时包含
Figure BDA0003403233960000105
和
Figure BDA0003403233960000106
两种构型。本公开所述化合物的化学结构中，键
Figure BDA0003403233960000107
并未指定构型，即键
Figure BDA0003403233960000108
的构型可以为E型或Z型，或者同时包含E和Z两种构型。
本公开的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺、内酰胺-内酰亚胺异构化。内酰胺-内酰亚胺平衡实例是在如下所示的A和B之间。
Figure BDA0003403233960000109
本发明中的所有化合物可以被画成A型或B型。所有的互变异构形式在本发明的范围内。化合物的命名不排除任何互变异构体。
本公开还包括一些与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本公开化合物。可结合到本公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl等。
除另有说明，当一个位置被特别地指定为氘(D)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即，至少10％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘、至少2000倍的丰度的氘、至少3000倍的丰度的氘、至少4000倍的丰度的氘、至少5000倍的丰度的氘、至少6000倍的丰度的氘或更高丰度的氘。本公开还包括各种氘化形式的式(I)化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式(I)化合物。在制备氘代形式的式(I)化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
“任选地”或“任选”是指意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如“任选的被卤素或者氰基取代的C1-6烷基”是指卤素或者氰基可以但不必须存在，该说明包括烷基被卤素或者氰基取代的情形和烷基不被卤素和氰基取代的情形。
术语解释：
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用赋形剂”包括但不限于任何已经被美国食品和药物管理局批准对于人类或家畜动物使用可接受的任何助剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增香剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
本披露中所述“有效量”或“有效治疗量”包含足以改善或预防医学病症的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：如待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。
“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选一个或多个以下基团，独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
术语“环烷基”或“碳环”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至7个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。环烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选一个或多个以下基团，独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
所述环烷基环可以稠合于芳基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。同理，“炔氧基”、“烯氧基”、“环烷氧基”、“杂环烷氧基”、“环烯氧基”的定义如上述“烷氧基”定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氧代”指＝O取代基。
“一价基团”是指一个化合物从“形式上”消除一个单价的原子或基团。“亚基”则是指化合物从“形式上”消除两个单价或一个双价形成的原子或原子团。示例“烷基”是指由烷烃分子中去除1个氢原子后余下的部分，包括1至20个碳原子的直链和支链一价基团。“亚烷基(-CH2-)”则表示烷烃分子中去除2个氢原子后余下的部分，包括1至20个碳原子的直链和支链亚基团。含有1至6个碳原子的亚烷基，非限制性实施例包括亚甲基(-CH2-)、亚乙基(如-CH2CH2-或-CH(CH3)-)、亚丙基(如-CH2CH2CH2-或-CH(CH2CH3)-)、亚丁基(如-CH2CH2CH2CH2-)。亚烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选一个或多个以下基团，独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、C3-8环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
同理，“亚烷氧基”、“亚烯基”、“亚烯氧基”、“亚环烷基”、“亚杂环烷基”的定义如“亚烷基”。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本公开中，但这些实施例并非限制本公开中的范围。
本公开中实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(LCMS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。化合物的光学异构体(异构体)空间构型可进一步通过测量单晶参数的方式确认。
HPLC的测定使用Waters ACQUITY ultra high performance LC、Shimadzu LC-20A systems、Shimadzu LC-2010HT series或安捷伦Agilent 1200LC高压液相色谱仪(ACQUITY UPLC BEH C18 1.7UM 2.1X50MM色谱柱、Ultimate XB-C18 3.0*150mm色谱柱或Xtimate C18 2.1*30mm色谱柱)。
MS的测定用Waters SQD2质谱仪，以正/负离子模式扫描，质量扫描范围为100～1200。
手性HPLC分析测定使用Chiralpak IC-3 100×4.6mm I.D.，3um、Chiralpak AD-3150×4.6mm I.D.，3um、Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.，3um、Chiralpak AS-3 150×4.6mm I.D.，3um、ChiralpakAS-3 100×4.6mm I.D.，3μm、ChiralCel OD-3 150×4.6mmI.D.，3um、Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D.，3μm、ChiralCel OJ-H 150×4.6mm I.D.，5um、Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3um色谱柱；
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
快速柱纯化系统使用Combiflash Rf150(TELEDYNE ISCO)或者Isolara one(Biotage)。
正向柱层析一般使用烟台黄海硅胶100～200目、200～300目或300～400目硅胶为载体，或者使用常州三泰预填预填超纯正相硅胶柱(40-63μm，60，12g,，25g，40g，80g或其他规格)。
反相柱层析一般使用常州三泰预填超纯C18硅胶柱(20-45μm，
Figure BDA0003403233960000141
40g，80g，120g，220g或其他规格)。
高压柱纯化系统使用Waters AutoP，配合使用Waters XBridge BEH C18 OBDPrep Column，
Figure BDA0003403233960000142
5μm，19mm X 150mm或者Atlantis T3 OBD Prep Column，
Figure BDA0003403233960000143
5μm，19mm X 150mm。
手性制备柱使用DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10um)或Phenomenex-Amylose-1(250mm*30mm,5um)。
本公开中的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自上海泰坦科技，ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)。
中间体BB-5的合成
Figure BDA0003403233960000151
步骤1：(1S,4S,5S)-4-碘-6-噁双环[3.2.1]辛烷-7-酮(BB-1)
将(S)-(-)-3-环己烯甲酸(50.0g,396.3mmol)溶于二氯甲烷(500mL)，加入碘化钾(85.5g,515.2mmol)，碳酸氢钠(43.3g,515.2mmol)和水(500mL)，再分批加入碘(120.7g,475.6mmol)，室温反应。TLC监测反应完成后，加入碳酸钠水溶液(500mL)，二氯甲烷萃取(500mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品BB-1(99.8g)，直接用于下步反应。
步骤2：(1S,5R)-6-噁双环[3.2.1]辛烷-7-酮(BB-2)
将BB-1(99.8g,396.0mmol)溶于乙醇(1000mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(98.2mL,593.9mmol)。氩气保护下，加入Pd/C(5.00g)，通入氢气，换气3次，升温至45℃，氢气氛围(40psi)下反应。TLC监测反应完成后，加入水(600mL)，乙酸乙酯萃取(700mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品BB-2(48g)，直接用于下步反应。
步骤3：(1S,3R)-3-羟基环己烷-1-甲酸异丙酯(BB-3)
将BB-2(48g,380.5mmol)溶于异丙醇(500mL)，冷却至0℃，滴加乙酰氯(59.7g,760.9mmol)，恢复至室温反应。TLC监测反应完成后，加入水(700mL)，乙酸乙酯萃取(600mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品，进一步柱层析(石油醚/四氢呋喃)得到BB-3(35g，3步收率49.4％)。
MS(ESI):m/z＝187.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.03-4.89(m,1H),3.63–3.56(m,1H),2.34-2.22(m,1H),2.19-2.10(m,1H),1.98-1.87(m,1H),1.87-1.69(m,2H),1.43-1.22(m,4H),1.19(d,J＝6.3Hz,6H)
步骤4：(1S,3S)-3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(BB-4)
将6-溴-3-羟基-2-甲基吡啶(5.00g,26.6mmol)，(1S,3R)-3-羟基环己烷-1-甲酸异丙酯(6.40g,34.6mmol)和三苯基膦(17.4g,66.5mmol)溶于无水四氢呋喃(60mL)，室温下滴加偶氮二甲酸二异丙酯(13.4g,66.5mmol)，滴加完毕后升温至50℃反应。反应完成后，浓缩反应液，剩余物柱层析(石油醚/四氢呋喃)得到BB-4(3.8g，收率40.1％)。
MS(ESI):m/z＝357.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.20(d,J＝8.5Hz,1H),7.02(d,J＝8.5Hz,1H),5.04-4.94(m,1H),4.60-4.53(m,1H),2.77-2.66(m,1H),2.43(s,3H),2.05-1.58(m,8H),1.21(dd,J＝0.8,6.3Hz,6H)
步骤5：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(三丁基锡)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(BB-5)
将BB-4(800.0mg,2.25mmol)和六正丁基二锡(1.43g,2.47mmol)溶于二氧六环(10mL)，氮气保护下，加入氯化锂(565.6mg,13.5mmol)，三环己基膦(63.0mg,0.225mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(102.8mg,0.112mmol)，升温至100℃反应。反应完成后，将反应液硅藻土过滤，乙酸乙酯淋洗(10mL×3)，滤液浓缩，剩余物柱层析(石油醚/乙酸乙酯)得到BB-5(700mg，收率55％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.22-7.08(m,1H),7.04-6.91(m,1H),5.08-4.98(m,1H),4.70-4.60(m,1H),2.84-2.71(m,1H),2.51(s,3H),2.12-2.02(m,1H),2.00-1.86(m,3H),1.82-1.72(m,2H),1.71-1.63(m,8H),1.43-1.36(m,12H),1.26(d,J＝6.2Hz,6H),0.97-0.93(m,9H)
实施例1
Figure BDA0003403233960000171
(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(1)
Figure BDA0003403233960000172
步骤1：2-溴苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(1a)
将2-溴苄醇(500mg,2.67mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)，冷却至0℃，加入氢化钠(60％，171.1mg，4.28mmol)，反应30分钟后，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(471mg，3.48mmol)，室温反应3小时。加入水(15mL)，乙酸乙酯萃取(15mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品通过快速柱层析(0-15％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到无色油状物1a(500mg，收率65.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(dd,J＝1.0,7.9Hz,1H),7.43(br d,J＝7.5Hz,1H),7.33(dt,J＝1.0,7.5Hz,1H),7.19(dt,J＝1.7,7.6Hz,1H),5.27-5.18(m,2H),3.28(t,J＝7.3Hz,2H),2.96(s,3H),1.63-1.53(m,2H),0.95-0.85(m,3H).
步骤2：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(1b)
将1a(150mg,0.52mmol)，中间体(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(三丁基甲锡烷基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(356mg,0.63mmol)，氯化锂(66.7mg,1.57mmol)，三乙胺(530mg,5.24mmol)，碘化亚铜(99.8mg,0.52mmol)和四(三苯基膦)钯(60.6mg,0.052mmol)置于微波管，加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。微波条件下，升温至120℃，反应1小时。加入水(15mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品通过快速柱层析(0-35％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到棕色油状物1b(80mg，收率47.4％)。
步骤3：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(1)
将1b(80.0mg,0.17mmol)溶于四氢呋喃(1mL)，水(1mL)和甲醇(0.5mL)，加入氢氧化锂(13.9mg,0.33mmol)，室温反应12小时。减压蒸除有机溶剂，加入水(10mL)，1M盐酸水溶液调pH为3～5，二氯甲烷萃取(10mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品经制备HPLC纯化得化合物1(14.7mg，20.2％)。LCMS:MS(ESI)m/z＝441.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.13(br d,J＝6.8Hz,1H),7.80(br d,J＝8.5Hz,1H),7.69-7.50(m,4H),5.18(s,2H),5.03(br s,1H),3.16(br t,J＝7.3Hz,2H),2.89-2.78(m,4H),2.71(s,3H),2.20-1.93(m,4H),1.90-1.64(m,4H),1.51(sxt,J＝7.4Hz,2H),0.85(t,J＝7.4Hz,3H)
实施例2
Figure BDA0003403233960000181
(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(2)
Figure BDA0003403233960000191
步骤1：(2-溴-6-甲基苯基)甲醇(2a)
Ar气保护下，将2-溴-6-甲基苯甲酸甲酯(2g,8.73mmol)溶于甲醇(10mL)，降温至-78℃，向反应液中加入二异丁基氢化铝(26.2mL,26.19mmol),然后缓慢升至室温，搅拌12小时。向反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，依次用水(100mL)，饱和食盐水(100mL)洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品，粗品通过快速柱层析(0-15％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，得到2a(1.4g,收率79.8％)。
步骤2：2-((2-溴-6-甲基苄基)氧)四氢-2H-吡喃(2b)
室温下，将2a(600mg,2.69mmol)溶于二氯甲烷(10mL),加入3,4-二氢-2H-吡喃(300mg,3.58mmol)和对苯甲磺酸(51.3mg,0.30mmol)，搅拌1小时。向反应液中加入碳酸氢钠饱和溶液至pH＝7-8，减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-15％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，得到2b(687mg，收率90％)。
步骤3：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(3-甲基-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)甲基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(2c)
Ar气保护下，将2b(100mg,0.54mmol)溶于二氧六环(6mL)，依次加入联硼酸频那醇酯(207mg,0.82mmol)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(40.3mg,0.054mmol)和醋酸钾(160mg,1.63mmol)，升温至85℃，反应3小时。向反应液中加入(1S,3S)-3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(100mg,0.29mmol),K2CO3(119mg,0.87mmol)和水(0.3mL)。85℃温度下反应12小时。减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-18％乙酸乙酯/石油醚)，得到2c(50mg，两步收率21.4％)。
步骤4：(1S,3S)-3-((6-(2-(羟甲基)-3-甲基苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸异丙酯(2d)
将2c(50mg,0.13mmol)溶于甲醇(5mL)，加入对甲苯磺酸(2.3mg,0.013mmol)，升温至60℃，反应12小时。减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-20％乙酸乙酯/石油醚)，得到2d(22mg,收率42％)。
步骤5：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸(2)
Ar气保护下，将2d(22mg,0.055mmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)，冷却至0℃，加入氢化钠(60％,4.4mg,0.11mmol)，反应5分钟，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(9.0mg,0.066mmol)，室温反应1小时。向反应液中加入水(0.5mL)，加入NaOH(14.5mg,0.36mmol)，升温至40℃，反应24小时，反应液用1M盐酸水溶液淬灭，并调pH为6.0～7.0，减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-5％甲醇/二氯甲烷)，得到化合物2(7mg,收率42％)。
LCMS:MS(ESI):m/z＝455.5[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.37–7.22(m,4H),5.14(d,J＝4.3Hz,2H),4.82(s,1H),3.18–3.10(m,2H),2.85-2.77(m,3H),2.54(s,3H),2.48(s,3H),2.15-2.11(m,1H),2.00-1.94(m,3H),1.82–1.65(m,4H),1.52-1.48(m,3H),0.96–0.78(m,3H).
实施例3
Figure BDA0003403233960000201
(1S,3S)-3-((6-(4-氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(3)
Figure BDA0003403233960000211
步骤1：2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟苯甲醛(3a)
Ar气保护下，将2,5-二溴-6-甲基吡啶(1000mg,3.99mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)，加入4-氟-2-醛基苯硼酸(1003mg,5.98mmol)和Cs2CO3(1947.74mg,5.978mmol)，升温至80℃，反应5个小时。向反应液中加入水(50mL)稀释，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，依次用水(50mL)，饱和食盐水(50mL)洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品在乙酸乙酯和石油醚中重结晶得到3a(1172mg,收率80％)。
步骤2：(2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟苯基)甲醇(3b)
将3a(600mg,2.04mmol)溶于甲醇(8mL)，冷却至0℃，加入硼氢化钠(113mg,3.0mmol)，升至室温反应20分钟。反应液用1M盐酸水溶液淬灭，并调pH为6.0～7.0，减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过硅胶色谱法快速柱层析纯化(0-15％乙酸乙酯/石油醚)，得到3b(515mg，收率87％)。
步骤3：3-溴-6-(4-氟-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶(3c)
室温下，将3b(500mg,0.68mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，加入3,4-二氢-2H-吡喃(68.1mg,0.68mmol)和对甲苯磺酸(32.1mg,0.17mmol)，搅拌1小时，向反应液中加入碳酸氢钠饱和溶液至pH为7～8，减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过硅胶色谱法快速柱层析纯化(0-15％乙酸乙酯/石油醚)，得到3c(630mg，收率98％)。
步骤4：6-(4-氟-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-羟基(3d)
Ar气保护下，将3c(700mg,1.84mmol)溶于二氧六环/水混合溶液(v/v＝20:1，21mL)，依次加入三(二亚苄基丙酮)二钯(84mg,0.09mmol)和2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(78mg,0.18mmol)，最后加入氢氧化钾(413mg,7.36mmol)。升温至90℃，反应10小时。减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过硅胶色谱法快速柱层析纯化(0-15％乙酸乙酯/石油醚)，得到3d(465mg，收率79％)。
步骤5：(1S,3S)-3-((6-(4-氟-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(3e)
将(1S,3R)-3-羟基环己烷-1-甲酸异丙酯(258.8mg,1.39mmol),偶氮二甲酸二乙酯(757.3mg,1.32mmol)和三苯基膦(757.3mg,1.32mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)，然后再加入3d(420mg,1.32mmol)，室温下反应1小时。减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过硅胶色谱法快速柱层析纯化(0-15％乙酸乙酯/石油醚)，得到3e(153mg，收率39％)。
步骤6：(1S,3S)-3-((6-(4-氟-2-(羟甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(3f)
将3e(100mg,0.21mmol)溶于甲醇(8mL)，加入对甲苯磺酸(3.6mg,0.021mmol)，升温至60℃，反应12小时。减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过硅胶色谱法快速柱层析纯化，(0-20％乙酸乙酯/石油醚)，得到3f(49.6mg,收率60％)。
步骤7：(1S,3S)-3-((6-(2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(6)
Ar气保护下，将3f(40mg,0.10mmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)，冷却至0℃，加入氢化钠(60％,6mg,0.15mmol)，反应5分钟，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(16.2mg,0.12mmol)，室温反应1小时。向反应液中加入水(0.5mL)，加入NaOH(6.39mg,0.16mmol)，升温至40℃，反应24小时，反应液用1M盐酸水溶液淬灭，并调pH为6.0～7.0，减压浓缩反应液，得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-5％甲醇/二氯甲烷)，得到化合物3(33.2mg,两步收率68％)。LCMS:MS(ESI):m/z＝459.5[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.32-7.37(m,2H),7.20(d,J＝8.5Hz,1H),7.12(d,J＝9.8Hz,1H),7.04(td,J＝8.4,2.8Hz,1H),5.11(s,2H),4.70(s,1H),3.08–2.94(m,2H),2.73–2.66(m,3H),2.38(s,3H),2.03-1.99(m,1H),1.90–1.79(m,3H),1.73–1.52(m,4H),1.41-1.38(m,2H),1.23-1.19(m,1H),0.76-0.72(m,3H).
实施例4
(1S,3S)-3-((6-(4-氟-3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(4)
Figure BDA0003403233960000231
步骤1：6-溴-3-氟-2-甲基苯甲酸(4a)
将3-氟-2-甲基苯甲酸(3.0g,19.46mmol)、N-溴代丁二酰亚胺(4.6g,20.43mmol)和醋酸钯(224mg,1.95mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，升温至90℃反应过夜。向反应液加入水(50mL)，乙酸乙酯(100mL)萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到4a(2.2g，收率49％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝233.0[M+H]+
步骤2：(6-溴-3-氟-2-甲基苯基)甲醇(4b)
室温下，将4a(1.1g,5.776mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，硼烷四氢呋喃络合物(20mL,20.0mmol)缓慢滴加到反应体系中，升温到65℃，反应过夜。TLC监测反应完全。冰浴下，加入无水甲醇淬灭反应。旋干后，乙酸乙酯(100mL)稀释，用水和饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-50％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到4b(0.5g，收率48％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝219.1[M+H]+
步骤3：2-((6-溴-3-氟-2-甲基苄基)氧)四氢-2H-吡喃(4c)
将4b(250mg,1.14mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入3,4-二氢-2H-吡喃(144mg,1.71mmol)、对甲苯磺酸(65mg,0.34mmol)，反应2小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，二氯甲烷(100mL)萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到4c(270mg，收率78％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝303.0[M+H]+
步骤4：2-(4-氟-3-甲基-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)甲基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(4d)
氮气保护下，将4c(270mg,0.82mmol)溶于二氧六环(10mL)，依次加入联硼酸频那醇酯(509mg,2.0mmol)、醋酸钾(393mg,4.0mmol)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(110mg，0.13mmol)，80℃反应2小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，二氯甲烷(100mL)萃取，有机相用盐水(50mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到4d(170mg，收率51％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝351.2[M+H]+
步骤5：(1S,3S)-3-((6-(4-氟-3-甲基-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(4e)
将4d(100mg,0.29mmol)溶于二氧六环(10mL)，依次加入(1S,3S)-3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸异丙酯(60mg,0.17mmol)、碳酸钾(63mg,0.46mmol)，(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(11mg，0.015mmol)，氮气保护，80℃反应1小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，二氯甲烷(100mL)萃取后，有机相用盐水(50mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到4e(60mg，收率82％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝500.3[M+H]+
步骤6：(1S,3S)-3-((6-(4-氟-2-(羟甲基)-3-甲基苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(4f)
将4e(55mg,0.11mmol)溶于甲醇/水(10mL/1mL)中，加入对甲苯磺酸(4mg,0.024mmol)，氮气保护，60℃反应2小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用盐水(50mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，将粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到4f(30mg，收率66％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝416.2[M+H]+
步骤7：(1S,3S)-3-((6-(4-氟-3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(4g)
氮气保护下，将4f(30mg，0.072mmol)溶于无水THF(5mL)，冷却到0℃，加入氢化钠(60％，9mg，0.2mmol)到反应体系中，反应5分钟，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(14mg，0.10mmol)，室温反应1小时，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液(30mL)，二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到4g(25mg，收率67％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝515.3[M+H]+
步骤8：(1S,3S)-3-((6-(4-氟-3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(4)
将4g(25mg,0.048mmol)溶于甲醇/水(5mL/1mL)中，冷却到0℃，加入氢氧化钠(9mg,0.2mmol)，室温反应过夜，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液(30mL)，二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，该粗品经制备HPLC纯化得化合物4(10mg，收率49％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝473.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.30–7.20(m,2H),7.19–7.10(m,1H),5.21–5.09(m,2H),4.82–4.79(m,1H)3.21–2.99(m,2H),2.80–2.70(m,3H),2.48(s,3H),2.36(s,3H),2.17–2.06(m,1H),2.01–1.88(m,2H),1.78–1.59(m,4H),1.53–1.40(m,2H),1.37–1.22(m,2H),0.92–0.70(m,3H).
实施例5
Figure BDA0003403233960000261
(1S,3S)-3-((6-(4,5-二氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(5)
Figure BDA0003403233960000262
步骤1：(2-溴-4,5-二氟苯基)甲醇(5a)
将2-溴-4,5-二氟苯甲酸甲酯(1.5g，5.78mmol)溶于四氢呋喃(40mL)，降温到-70℃，将二异丁基氢化铝(17.3mL,17.3mmol)缓慢滴加到反应体系中，缓慢升温到室温，反应12小时，TLC监测反应完全。加入1M氢氧化钠水溶液(30mL)，乙酸乙酯(100mL)萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到5a(0.6g，收率46％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝223.2[M+H]+
步骤2：2-((2-溴-4,5-二氟苄基)氧)四氢-2H-吡喃(5b)
将5a(650mg,2.92mmol)溶于二氯甲烷(40mL)，加入3,4-二氢-2H-吡喃(318mg,3.79mmol)和对甲苯磺酸(100mg,0.58mmol)，室温反应2小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，二氯甲烷(100mL)萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到5b(0.6g，收率70％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝306.0[M+H]+
步骤3：2-(4,5-二氟-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)甲基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(5c)
将5b(100mg,0.33mmol)溶于二氧六环(10mL)，依次加入联硼酸频那醇酯(124mg,0.49mmol)、醋酸钾(95mg,0.98mmol)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(11mg，0.015mmol)，氮气保护，80℃反应2小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，二氯甲烷(100mLⅹ2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到5c(100mg，粗品)，直接用于下一步反应。
LCMS:MS(ESI)m/z＝354.2[M+H]+
步骤4：(1S,3S)-3-((6-(4,5-二氟-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(5d)
将5c(100mg,0.33mmol)溶于二氧六环(10mL)，依次加入(1S,3S)-3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸异丙酯(50mg,0.15mmol)、碳酸钾(63mg,0.46mmol)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(11mg，0.015mmol)，氮气保护，80℃反应2小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，二氯甲烷(100mL)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到5d(60mg，收率82％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝475.5[M+H]+。
步骤5：(1S,3S)-3-((6-(4,5-二氟-2-(羟甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸异丙酯(5e)
将5d(60mg,0.12mmol)溶于甲醇/水(10mL/1mL)中，加入对甲苯磺酸(4mg,0.024mmol)，氮气保护，60℃反应2小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得到粗品，该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到5e(30mg，收率60％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝419.2[M+H]+。
步骤6：(1S,3S)-3-((6-(4,5-二氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(5f)
氮气保护下，将5e(30mg，0.072mmol)溶于无水THF(5mL)，冷却到0℃，加入氢化钠(60％，9mg，0.2mmol)，反应5分钟，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(19mg，0.14mmol)，室温反应1小时，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液(30mL)，二氯甲烷萃取(50mL×3)，有机相用合并，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得到粗品，该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到5f(25mg，收率67％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝518.5[M+H]+。
步骤7：(1S,3S)-3-((6-(4,5-二氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(5)
将5f(22mg,0.042mmol)溶于甲醇/水(5mL/1mL)中，降温到0℃，加入氢氧化钠(9mg,0.2mmol)到反应体系中，室温反应过夜后，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液(30mL)，二氯甲烷萃取(50mL×3)，有机相用饱和食盐水(50mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得到粗品，该粗品经制备HPLC纯化得化合物5(10mg，收率49％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝476.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.54–7.31(m,4H),5.20(d,J＝8.7Hz,2H),4.83(s,1H),3.23–3.04(m,2H),2.88–2.73(m,3H),2.51(s,3H),2.12(d,J＝13.9Hz,1H),1.97(m,3H),1.89–
1.60(m,4H),1.59–1.41(m,2H),1.40–1.27(m,1H),0.84(m,3H).
实施例6
Figure BDA0003403233960000291
(1S,3S)-3-((6-(3,4-二氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(6)
Figure BDA0003403233960000292
步骤1：(6-溴-2,3-二氟苯基)甲醇(6a)
将6-溴-2,3-二氟苯甲醛(1g，4.53mmol)溶于甲醇(10mL)，冷却至0℃，加入硼氢化钠(342mg，9.06mmol),升至室温反应20分钟。反应液用1M盐酸水溶液淬灭，并调pH为6.0～7.0，减压浓缩反应液得到粗品。粗品通过硅胶色谱法快速柱层析纯化(0-15％乙酸乙酯/石油醚)，得到6a(800mg,收率79％)。
步骤2～5：将实施例2中步骤2原料(2-溴-6-甲基苯基)甲醇(2a)替换成(6-溴-2,3-二氟苯基)甲醇(6a)，其余步骤和试剂，按照实施例2的方法，合成得到标题化合物6(1S,3S)-3-((6-(3,4-二氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸(18mg)。
MS(ESI):m/z＝477.4[M+H]+
1H NMR:(400MHz,CD3OD)δ7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.43–7.22(m,3H),5.31(d,J＝8.6Hz,2H),4.82(s,1H),3.14(t,J＝7.4Hz,1H),2.96(t,J＝7.4Hz,1H),2.82-2.81(m,2H),2.63(s,2H),2.50(s,3H),2.14–2.09(m,1H),2.10-1.93(m,3H),1.83–1.61(m,3H),1.54–1.29(m,3H),0.81(m,3H).
实施例7
Figure BDA0003403233960000301
(1S,3S)-3-((6-(3-氟-4-甲氧基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(7)
Figure BDA0003403233960000302
步骤1：(6-溴-2-氟-3-甲氧基苯基)甲醇(7a)
将6-溴-2-氟-3-甲氧基苯甲醛(2g，8.58mmol)溶于甲醇(10mL)，冷却至0℃，加入硼氢化钠(648mg,17.16mmol),升至室温反应20分钟。反应液用1M盐酸水溶液淬灭，并调pH为6.0～7.0，减压浓缩反应液得到粗品。粗品通过硅胶色谱法快速柱层析纯化(0-15％乙酸乙酯/石油醚)，得到7a(1.6g,收率79％)。
步骤2～5：将实施例2中步骤2原料(2-溴-6-甲基苯基)甲醇(2a)替换成(6-溴-2-氟-3-甲氧基苯基)甲醇(7a)，其余步骤和试剂，按照实施例2的方法，合成得到标题化合物7(1S,3S)-3-((6-(3-氟-4-甲氧基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸(31mg)。
MS(ESI):m/z＝489.5[M+H]+
1H NMR:(400MHz,CD3OD)δ7.33(d,J＝8.5Hz,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,1H),7.18-7.06(m,2H),5.15(d,J＝6.8Hz,2H),4.72–4.64(m,1H),3.82(s,3H),3.02(t,J＝7.3Hz,1H),2.84(t,J＝7.6Hz,1H),2.75–2.66(m,2H),2.50(s,1H),2.37(s,3H),2.05–1.95(m,1H),1.87-1.80(m,3H),1.72–1.50(m,4H),1.41–1.23(m,3H),0.68(m,3H).
实施例8
Figure BDA0003403233960000311
(1S,3S)-3-((6-(4-氰基-3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(8)
Figure BDA0003403233960000321
步骤1：(3-氨基-6-碘-2-甲基苯基)甲醇(8a)
将3-氨基-2-甲基苯甲醇(4.5g,32.8mmol)溶于甲醇(30mL)，冰浴下，加入氯化碘(5.8g,36.1mmol)，缓慢升至室温搅拌1小时，TLC监测反应完全。向反应液加入乙酸乙酯(100mL)，依次用饱和硫代硫酸钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-30％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到8a(5g，收率58％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝264.0[M+H]+
步骤2：3-(羟甲基)-4-碘-2-甲基苯甲氰(8b)
在室温下，将氰化亚铜(1.8g,20.0mmol)溶于乙腈(20mL)，升温至80℃，搅拌1小时，加入亚硝酸叔丁酯(2.5g,24.0mmol)，半小时后加入8a(2.1g,8.0mmol)。80℃下反应5小时，至TLC监测反应完全。向反应液中加入乙酸乙酯(100mL)稀释，用水和饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-50％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到8b(310mg，收率14％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝274.0[M+H]+
步骤3：3-氰基-6-碘-2-甲基苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(8c)
氮气保护下，将8b(200mg,0.73mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)中，冰浴下，加入氢化钠(60％，73mg，1.8mmol)，反应5分钟后，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(149mg，1.1mmol)，室温反应1小时，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液(30mL)，二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至粗品，该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到8c(200mg，收率73％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝373.0[M+H]+
步骤4：3-氰基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基甲基(丙基)氨基甲酸酯(8d)
将8c(170mg,0.46mmol)，联硼酸频那醇酯(174mg,0.69mmol)、醋酸钾(45mg,0.46mmol)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(38mg，0.05mmol)溶于二氧六环(3mL)中，在微波条件下，升温至100℃，反应11小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，二氯甲烷萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到8d(100mg，收率59％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝373.2[M+H]+
步骤5：(1S,3S)-3-((6-(4-氰基-3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(8e)
将8d(100mg,0.27mmol)，(1S,3S)-3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸异丙酯(80mg,0.22mmol)、碳酸钾(75mg,0.54mmol)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(20mg，0.03mmol)溶于二氧六环(3mL)和水(0.5mL)中，在氮气保护下，升温至90℃，反应1小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，二氯甲烷(50mL×2)萃取后，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到8e(60mg，收率43％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝522.3[M+H]+
步骤6：(1S,3S)-3-((6-(4-氰基-3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(8)
将8e(15mg,0.03mmol)和叔丁醇钾(7mg,0.06mmol)溶于叔丁醇(2mL)，氮气保护下，室温反应过夜，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵溶液(2mL)，减压浓缩至粗品，再通过液相制备(乙腈/水含0.05％甲酸)得到8(5mg，收率36％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝480.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.77(d,J＝8.0Hz,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,1H),7.36–7.28(m,1H),5.24–5.18(m,2H),4.50–4.42(m,1H),3.25–3.05(m,2H),2.88–2.75(m,3H),2.70(s,3H),2.55–2.37(m,3H),2.22–2.13(m,1H),2.01–1.93(m,2H),1.88–
1.59(m,4H),1.57–1.42(m,4H),0.92–0.74(m,3H).
实施例9
Figure BDA0003403233960000341
(1S,3S)-3-((6-(4-甲酰胺-3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(9)
Figure BDA0003403233960000342
将8e(30mg,0.058mmol)溶于乙醇/水(2mL/0.5mL)中，加入氢氧化钠(9mg,0.2mmol)升温至80℃，反应过夜后，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液(2mL)，减压浓缩得到粗品，再通过液相制备(乙腈/水含0.05％甲酸)得到9(12mg，收率42％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝498.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.51–7.43(m,2H),7.32(d,J＝7.9Hz,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),5.18–5.15(m,2H),4.50–4.32(m,1H),3.22–3.07(m,2H),2.90–2.73(m,3H),2.61–2.46(m,6H),2.21–2.07(m,1H),2.04–1.89(m,2H),1.83–1.63(m,4H),1.60–1.34(m,4H),0.95–0.71(m,3H).
实施例10
Figure BDA0003403233960000351
(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-(甲基磺酰氨基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸(10)
Figure BDA0003403233960000352
步骤1：N-(3-(羟甲基)-4-碘-2-甲基苯基)甲磺酰胺(10a)
室温下，将3-氨基-6-碘-2-甲基苯甲醇(500mg,1.9mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入吡啶(2.5g，9.5mmol)，缓慢滴加甲基磺酰氯(326mg，2.85mmol)，反应过夜，TLC监测反应完全。向反应液中加入乙酸乙酯(100mL)稀释，用水和饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-50％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到10a(300mg，收率46％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝342.0[M+H]+
步骤2：6-碘-2-甲基-3-(甲基磺酰氨基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(10b)
将10a(300mg,0.88mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)中，冷却至0℃，加入氢化钠(60％，105mg，2.6mmol)，反应5分钟后，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(178mg，1.3mmol)，室温反应1小时，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液(30mL)，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到10b(270mg，收率69％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝441.0[M+H]+
步骤3：2-甲基-3-(甲基磺酰氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(10c)
将10b(270mg,0.61mmol)，联硼酸频那醇酯(233mg,0.92mmol)、醋酸钾(120mg,1.22mmol)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(45mg，0.010mmol)溶于二氧六环(6mL)中，微波条件下升温至100℃反应11小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，二氯甲烷(100mL)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到10c(100mg，收率37％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝441.3[M+H]+
步骤4：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-(甲基磺酰氨基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(10d)
将10c(100mg,0.23mmol)，(1S,3S)-3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸异丙酯(80mg,0.22mmol)、碳酸钾(75mg,0.54mmol)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(20mg，0.03mmol)溶于二氧六环(5mL)和水(0.5mL)中，在氮气保护下，升温至90℃反应1小时，TLC监测反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，二氯甲烷(100mL)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到10d(50mg，收率42％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝590.3[M+H]+
步骤5：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(3-甲基-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-(甲基磺酰氨基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(10)
将10d(40mg,0.068mmol)溶于甲醇/水(2mL/0.5mL)中，加入氢氧化钠(9mg,0.2mmol)，升温至60℃反应过夜后，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液(2mL)，减压浓缩至粗品，再通过液相制备(乙腈/水含0.05％甲酸)得到10(12mg，收率32％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝548.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.67-7.60(m,2H),7.52(d,J＝8.3Hz,1H),7.33(d,J＝8.3Hz,1H),5.17(d,J＝9.4Hz,4H),3.31–3.23(m,1H),3.23–3.10(m,2H),3.05(s,2H),2.99(s,1H),2.95–2.78(m,4H),2.56(s,2H),2.51(s,2H),2.39(s,1H),2.14(d,J＝13.9Hz,1H),2.06–1.91(m,2H),1.79(d,J＝12.4Hz,1H),1.69(d,J＝11.2Hz,2H),1.50(d,J＝15.3Hz,3H),1.40–1.28(m,1H),0.95–0.78(m,3H).
实施例11
Figure BDA0003403233960000371
(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-(甲砜基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(11)
Figure BDA0003403233960000372
步骤1：2-溴-5-甲砜基苯甲醛(11a)
将3-甲砜基苯甲醛(1g,5.4mmol)，2-氨基-5-氯三氟甲苯(211mg,1.08mmol),N-溴代丁二酰亚胺(1.25g,7.02mmol)和醋酸钯(121mg,0.54mmol)在氮气保护下溶解在1,2-二氯乙烷(10mL)和三氟乙酸(2mL)溶液中，该混合物加热至60℃，搅拌反应18小时。反应完成后，减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-40％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到11a(500mg，收率35％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.42(s,1H),8.47(d,J＝2.4Hz,1H),8.03(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),7.92(d,J＝8.3Hz,1H),3.12(s,3H).
步骤2：(2-溴-5-(甲砜基)苯基)甲醇(11b)
将11a(500mg,1.9mmol)溶解在甲醇(20mL)中，冷却至0℃，加入硼氢化钠(36.1mg,0.95mmol)，搅拌反应10分钟。反应完成后加入饱和食盐水(10mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-80％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到11b(500mg，收率100％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝247.0,249.0[M-OH]+
步骤3：2-溴-5-(甲砜基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(11c)
将11b(500mg,1.9mmol)溶于干燥四氢呋喃(20mL)，冷却至0℃,加入氢化钠(60％，152mg,3.8mmol)，反应5分钟，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(307mg，2.3mmol)，升至室温，反应2小时。反应完成后加入冰水(10mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-50％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到11c(450mg，收率65％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝365.2[M+H]+
步骤4：5-(甲砜基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(11d)
将11c(200mg,0.55mmol),联硼酸频那醇酯(211mg,0.83mmol),1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(36.6mg,0.05mmol)和醋酸钾(162mg,1.65mmol)溶于1,4-二氧六环溶液(10mL)中，微波反应器加热至120℃，反应3小时。反应液冷却后，不经处理，直接用于下步反应。
LCMS:MS(ESI)m/z＝412.2[M+H]+
步骤5：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-(甲砜基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(11e)
上述步骤4反应液冷却后，加入(1S,3S)-3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(196mg,0.55mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(36.6mg,0.05mmol)，无水碳酸钾(228mg,1.65mmol)和水(2mL)。将混合物加热至100℃，反应1小时。反应完成后加入水(10mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。该粗品通过快速柱层析(0-60％乙酸乙酯/石油醚)，纯化得到11e(250mg，两步收率81％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝561.2[M+H]+
步骤6：(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-(甲砜基)苯基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(11)
将11e(250mg,0.45mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，室温下加入2.5M氢氧化钠水溶液(10mL)，反应2小时。反应完成后，加水(10mL)稀释，用1.0M盐酸水溶液调pH值至4，乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，该粗品用通过快速柱层析[C-18柱,乙腈/水5-60％)]进行纯化后冻干，得到11(120mg，收率51％)。
LCMS:MS(ESI)m/z＝519.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.25(s,1H),7.99(d,J＝1.9Hz,1H),7.95(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),7.76(d,J＝8.1Hz,1H),7.53–7.46(m,2H),5.41–5.29(m,2H),4.84–4.79(m,1H),3.35(s,3H),3.26(s,3H),3.14–2.96(m,2H),2.76(s,1H),2.69–2.57(m,2H),2.43(s,3H),2.06–1.99(m,1H),1.91–1.77(m,2H),1.70–1.49(m,2H),1.39(d,J＝11.2Hz,2H),0.81–0.72(m,3H).
实施例12
Figure BDA0003403233960000401
(1S,3S)-3-((6-(4-氯-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(12)
Figure BDA0003403233960000402
步骤1：2-溴-5-氯苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(12a)
将2-溴-5-氯苄醇(500mg,2.26mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)，冷却至0℃，加入氢化钠(60％，135.5mg,3.39mmol)，反应30分钟后，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(397.9mg,2.94mmol)，室温反应3小时。加入水(15mL)，乙酸乙酯萃取(15mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到12a(500mg，收率69.1％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49(d,J＝8.6Hz,1H),7.38(d,J＝2.4Hz,1H),7.16(dd,J＝2.6,8.4Hz,1H),5.30-5.01(m,2H),3.35-3.23(m,2H),2.97(d,J＝6.1Hz,3H),1.68-1.51(m,2H),0.99-0.87(m,3H)
步骤2：(1S,3S)-3-((6-(4-氯-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(12b)
氮气氛围下，将12a(150mg,0.47mmol)，(1S,3S)-3-((2-甲基-6-(三丁基甲锡烷基)吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(398mg,0.70mmol)，氯化锂(39.7mg,0.94mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(45.6mg,0.047mmol)溶于二氧六环(2mL)。升温至110℃，反应12小时。反应完成后，将反应液浓缩得到粗品，粗品通过快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到12b(50mg，收率20.7％)。
步骤3：(1S,3S)-3-((6-(4-氯-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(12)
将12b(60.0mg,0.12mmol)溶于四氢呋喃(1mL)，水(1mL)和甲醇(0.5mL)，加入氢氧化锂(4.63mg,0.19mmol)，室温反应12小时。反应完成后，减压蒸除有机溶剂，加入水(10mL)，1M盐酸水溶液调pH为3～5，二氯甲烷萃取(10mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品经制备HPLC纯化得12(4.7mg，收率10.2％)。
MS(ESI)m/z＝475.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.09–7.97(m,1H),7.76–7.69(m,1H),7.64(s,1H),7.58–7.47(m,2H),5.14(s,2H),4.86–4.73(m,1H),3.20–3.04(m,2H),2.89–2.77(m,4H),2.67(s,3H),2.20–1.91(m,4H),1.88–1.63(m,4H),1.57–1.45(m,2H),0.91–0.80(m,3H).
实施例13
Figure BDA0003403233960000411
(1S,3S)-3-((6-(2,4-二氟-6-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(13)
Figure BDA0003403233960000421
步骤1：(2-溴-3,5-二氟苯基)甲醇(13a)
将原料2-溴-3,5-二氟苯甲醛(300mg,1.36mmol)溶于乙醇(20mL)，冷却至0℃后加入硼氢化钠(37mg,1.1mmol)，室温反应。反应完成后，加入饱和食盐水(10mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品，粗品快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到13a(290mg，收率95％)。
MS(ESI)m/z＝205.0,207.0[M-OH]+
步骤2：2-溴-3,5-二氟苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(13b)
将13a(290mg,1.3mmol)溶于无水四氢呋喃(20mL)，冷却至0℃，加入氢化钠(60％,108mg,2.7mmol)，反应30分钟后，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(228.8mg,1.69mmol)，室温反应3小时。加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品柱层析(乙酸乙酯/石油醚)进行纯化得到无色油状物13b(400mg，收率95％)。
MS(ESI)m/z＝322.2,324.2[M+H]+
步骤3：3,5-二氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(13c)
将12b(130mg,0.4mmol),联硼酸频那醇酯(154mg,0.6mmol),1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(30mg,0.04mmol)和醋酸钾(119mg,1.2mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)，该混合物在微波反应器加热至120℃，反应3小时。反应完成后，冷却，直接用于下步反应。
MS(ESI)m/z＝370.4[M+H]+
步骤4：(1S,3S)-3-((6-(2,4-二氟-6-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(13d)
上述反应液冷却后，加入(1S,3S)-3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基-1-甲酸异丙酯(144mg,0.4mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(30mg,0.04mmol)，无水碳酸钾(167mg,1.2mmol)和水(2mL)。升温至100℃反应。反应完成后，加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品，粗品快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到13d(60mg，两步收率29％)。
MS(ESI)m/z＝519.4[M+H]+
步骤5：(1S,3S)-3-((6-(2,4-二氟-6-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己烷-1-甲酸(13)
将13d(50mg,0.1mmol)溶于四氢呋喃(5mL)，加入2.5M氢氧化钠水溶液(10mL)，室温下反应。反应完成后，加水(10mL)稀释，1M盐酸调节pH值至4～5，乙酸乙酯萃取(50mL×2)。合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品，该粗品反相快速柱层析(乙腈/水)纯化后冻干，得到13(12mg，收率26％)。
MS(ESI)m/z＝477.4[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.26(s,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.36–7.24(m,2H),7.20–7.06(m,1H),5.01(s,2H),4.85–4.73(m,1H),3.16–2.96(m,2H),2.80–2.61(m,4H),2.39(s,3H),2.07–1.94(m,1H),1.91–1.76(m,3H),1.68–1.47(m,4H),1.45–1.33(m,2H),0.76(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例14
Figure BDA0003403233960000431
(1S,3S)-3-((2-(4-氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(14)
Figure BDA0003403233960000441
步骤1：2-氯-4-甲基嘧啶-5-醇(BB-6)
氮气氛围下，将2-氯-5-甲氧基-4-甲基嘧啶(1.0g,6.31mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，冷却至-78℃，缓慢滴加三溴化硼(2.38mL,25.2mmol)。滴加完毕后，-78℃下反应20分钟后，升至室温反应。反应完成后，将反应液冷却至-78℃，缓慢滴加甲醇(30mL)淬灭反应。恢复至室温，滴加饱和碳酸氢钠溶液调体系pH至5，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到BB-6(710mg,收率77.9％)。
MS(ESI):m/z＝144.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.65(s,1H),8.09(s,1H),2.33(s,3H).
步骤2：(1S,3S)-3-((2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(BB-7)
将BB-6(600.0mg,4.15mmol)，(1S,3R)-3-羟基环己烷-1-甲酸异丙酯(1004.9mg,5.40mmol)和三苯基膦(2721.6mg,10.4mmol)溶于无水四氢呋喃(30mL)，升温至50℃，缓慢滴加偶氮二甲酸二叔丁酯(2389.3mg,10.4mmol)，滴加完毕后50℃反应。反应完成后，浓缩反应液，剩余物快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯)得到BB-7(850mg，收率65.5％)。
MS(ESI):m/z＝313.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(s,1H),5.05-4.99(m,1H),4.73-4.67(m,1H),2.76-2.71(m,1H),2.47(s,3H),2.00-1.79(m,3H),1.75-1.57(m,5H),1.24(dd,J＝2.5,6.3Hz,6H).
步骤3：2-溴-5-氟苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(14a)
将2-溴-5-氟苄醇(1.00g,4.87mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)，冷却至0℃，加入氢化钠(60％，292mg,7.32mmol)，反应30分钟后，加入N-甲基-N-丙基氯甲酰胺(860mg,6.34mmol)，室温反应。TLC监测反应完成后，加入水(15mL)，乙酸乙酯萃取(15mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到14a(1.0g，收率67.4％)。
MS(ESI):m/z＝303.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(dd,J＝5.3,8.8Hz,1H),7.30-7.22(m,1H),7.18(dt,J＝3.1,8.5Hz,1H),5.06(s,2H),3.21(td,J＝7.1,14.2Hz,2H),2.94-2.80(m,3H),1.59-1.43(m,2H),0.82(t,J＝7.4Hz,3H)
步骤4：5-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(14b)
氮气保护下，将14a(500.0mg,1.64mmol),联硼酸频那醇酯(626.2mg,2.47mmol),1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(135.6mg,0.164mmol)和醋酸钾(403.3mg,4.11mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)，该混合物加热至80℃反应。反应完成后，加入水(10mL)稀释，乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品柱层析(四氢呋喃/石油醚)得到14b(400mg，收率69.3％)。
MS(ESI):m/z＝352.2[M+H]+
步骤5：(1S,3S)-3-((2-(4-氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(14c)
将14b(300.0mg,0.85mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)，加入(1S,3S)-3-((2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(347.3mg,1.11mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(135.6mg,0.16mmol)和碳酸钠(90.5mg,0.85mmol)，升温至80℃反应。反应完成后，加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到14c粗品(300mg)，直接用于下步反应。
MS(ESI):m/z＝502.3[M+H]+
步骤6：(1S,3S)-3-((2-(4-氟-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(14)
将上述14c粗品(300.0mg)溶于四氢呋喃(1mL)，水(1mL)和甲醇(0.5mL)，加入氢氧化锂(50.2mg,1.20mmol)，室温反应12小时。反应完成后，减压蒸除有机溶剂，加入水(10mL)，1M盐酸水溶液调pH为5～7，二氯甲烷萃取(10mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品经制备HPLC纯化得14(37.1mg，两步收率9.5％)。
MS(ESI):m/z＝460.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),7.88(t,J＝7.4Hz,1H),7.26–7.18(m,1H),7.07(td,J＝8.3,2.7Hz,1H),5.52(s,2H),4.84(s,1H),3.28–3.11(m,2H),2.99–2.78(m,4H),2.51(s,3H),2.24–2.09(m,1H),2.04–1.73(m,6H),1.70–1.49(m,3H),0.94–0.79(m,3H).
实施例15
Figure BDA0003403233960000461
(3-((6-(4-氯-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(15)
Figure BDA0003403233960000462
步骤1：(3-氧代环己基)膦酸二乙酯(BB-8)
将三氯化铈(1.49g,5.20mmol)加入到2-环己烯-1-酮(5.04mL,52.0mmol)与亚磷酸三乙酯(9.85mL,57.2mmol)的混合溶液，室温下无溶剂反应。TLC监测反应完成，减压浓缩，剩余物经快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到BB-8(2.0g,收率16.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.18-4.10(m,4H),2.62-2.12(m,7H),1.89-1.60(m,2H),1.33(t,J＝7.0Hz,6H)
步骤2：(3-羟基环己基)膦酸二乙酯(BB-9)
将BB-8(500mg,2.14mmol)溶于甲醇(10mL)，冷却至0℃，加入硼氢化钠(86.6mg,2.56mmol)，反应1小时。TLC监测反应完成后，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品，粗品经快速柱层析(甲醇/二氯甲烷)得到BB-9(240mg,收率47.6％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.19-4.07(m,4H),3.68-3.54(m,1H),2.30-2.20(m,1H),2.06-1.86(m,3H),1.70-1.65(m,1H),1.46-1.20(m,10H)
步骤3：(3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧基)环己基)膦酸二乙酯(BB-10)
将6-溴-3-羟基-2-甲基吡啶(3g,16mmol)，(3-羟基环己基)膦酸二乙酯(5.27g,22.3mmol)和三苯基膦(6.28g,23.9mmol)溶于无水四氢呋喃(50mL)，冷却至0℃，滴加偶氮二甲酸二异丙酯(4.84g,23.9mmol)，滴加完毕后恢复至室温反应12小时。反应完成后，浓缩反应液，加入甲基叔丁基醚(50mL)打浆，过滤，滤液浓缩，剩余物柱层析(石油醚/四氢呋喃)得到BB-10(3.5g，收率54％)。
MS(ESI):m/z＝406.1[M+H]+
步骤4：5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(15a)
氮气保护下，将12a(3.5g,10.9mmol)溶于1,4-二氧六环(30mL)，依次加入醋酸钾(3.21g,32.8mmol)，联硼酸频那醇酯(4.16g,16.4mmol)和1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(450.2mg,0.55mmol)，该混合物加热至100℃反应。TLC监测反应完成后，将反应液过滤，乙酸乙酯淋洗(40mL×3)，滤液浓缩得到粗品15a(3.6g)，直接用于下步反应。
步骤5：5-氯-2-(5-((3-(二乙氧基膦酰基)环己基)氧)-6-甲基吡啶-2-基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(15b)
氮气保护下，将15a(300.0mg,0.82mmol)和(3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧基)环己基)膦酸二乙酯(397.8mg,0.98mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)，加入碳酸钾(225.5mg,1.63mmol)和四(三苯基膦)钯(56.6mg,0.05mmol)，升温至80℃反应。TLC监测反应完成后，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品经快速柱层析(四氢呋喃/石油醚)得到15b(170mg,收率36.7％)。
MS(ESI):m/z＝567.1[M+H]+
步骤6：(3-((6-(4-氯-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(15)
将15b(100.0mg,0.18mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)，冷却至0℃，加入三甲基溴硅烷(0.14mL,1.06mmol)，恢复至室温反应。TLC监测反应完成后，加入水(10mL)，二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品经HPLC制备得到15(14.9mg,收率16.6％)。
MS(ESI):m/z＝511.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.57–7.47(m,2H),7.46–7.40(m,2H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),5.20(s,2H),4.48–4.35(m,1H),3.21–3.07(m,2H),2.88–2.74(m,3H),2.52(s,1H),2.46(s,2H),2.37–1.26(m,11H),0.90–0.77(m,3H).
实施例16
Figure BDA0003403233960000481
(3-((6-(2-(((丁基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氯苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(16)
Figure BDA0003403233960000491
步骤1：2-溴-5-氯苄基(4-硝基苯)碳酸酯(16a)
将2-溴-5-氯苄醇(10.0g,45.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(37.3mL,225.8mmol)溶于二氯甲烷(200mL)，分批缓慢加入对硝基苯基氯甲酸酯(27.3g,135.5mmol)，室温下反应。TLC监测反应完成后，加入水(200mL)稀释，乙酸乙酯萃取(200mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品16a(20g)，直接用于下步反应。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49-8.26(m,2H),7.87-7.30(m,5H),5.35(s,2H).
步骤2：2-溴-5-氯苄基丁基(甲基)氨基甲酸酯(16b)
将甲基丁胺(1.37mL,11.5mmol)和三乙胺(4.78mL,34.4mmol)溶于二氯甲烷(50mL)，缓慢加入16a(4.43g,11.5mmol)，室温下反应。TLC监测反应完成后，加入水(50mL)稀释，乙酸乙酯萃取(70mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品16b(2g)，直接用于下步反应。
MS(ESI):m/z＝333.9/335.9[M+H]+
步骤3～5：将实施例15步骤4中2-溴-5-氯苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(12a)
替换成2-溴-5-氯苄基丁基(甲基)氨基甲酸酯(16b)，其余步骤和试剂，按照实施例15的方法，合成得到标题化合物16。
MS(ESI):m/z＝525.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.57–7.48(m,2H),7.46–7.40(m,2H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),5.19(s,2H),4.46–4.35(m,1H),3.25–3.11(m,2H),2.87–2.72(m,3H),2.53(s,1H),2.50–2.41(m,2H),2.36–2.15(m,1H),2.11–1.92(m,2H),1.91–1.66(m,2H),1.61–1.33(m,6H),1.32–1.19(m,2H),0.99–0.85(m,3H).
实施例17
Figure BDA0003403233960000501
(3-((6-(4-氯-2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(17)
将实施例16步骤2中原料甲基丁胺替换成(环丁基甲基)甲胺盐酸盐，其余步骤和试剂，按照实施例16的方法，合成得到标题化合物17。
MS(ESI):m/z＝537.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.56–7.49(m,2H),7.47–7.37(m,3H),5.20(br d,J＝11.8Hz,2H),4.90–4.85(m,1H),3.27–3.08(m,2H),2.87–2.71(m,3H),2.54(s,3H),2.51–2.43(m,1H),2.38–2.26(m,1H),2.24–1.93(m,5H),1.92–1.46(m,9H).
实施例18
Figure BDA0003403233960000502
(3-((6-(4-氯-2-(((环戊基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(18)
将实施例16步骤2中原料甲基丁胺替换成环戊基甲基胺，其余步骤和试剂，按照实施例16的方法，合成得到标题化合物18。
MS(ESI):m/z＝537.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80-7.59(m,1H),7.57-7.46(m,2H),7.46-7.32(m,2H),6.53(s,2H),5.17-5.05(m,2H),4.64-4.17(m,2H),2.75(s,3H),2.63(s,3H),2.48-2.35(m,1H),2.23-2.05(m,1H),1.89-1.73(m,4H),1.70-1.64(m,2H),1.57-1.16(m,9H)
实施例19
Figure BDA0003403233960000511
(3-((6-(4-氯-2-((((环戊基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(19)
将实施例16步骤2中原料甲基丁胺替换成(环戊基甲基)甲胺，其余步骤和试剂，按照实施例16的方法，合成得到标题化合物19。
MS(ESI):m/z＝551.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.55–7.46(m,2H),7.45–7.40(m,2H),7.36(d,J＝8.5Hz,1H),5.20(br d,J＝9.6Hz,2H),4.46–4.31(m,1H),3.18–3.05(m,2H),2.88–2.74(m,3H),2.52(s,1H),2.46(s,2H),2.28–1.27(m,16H),1.22–1.06(m,2H).
实施例20
Figure BDA0003403233960000512
(3-((6-(4-氯-2-((3-(环丁基甲基)-3-甲基脲)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(20)
Figure BDA0003403233960000521
步骤1：2-溴-5-氯苄基甲磺酸酯(20a)
将2-溴-5-氯苄醇(8.00g,36.1mmol)溶于四氢呋喃(100mL)，加入三乙胺(10.0mL,72.2mmol)，冷却至0℃后，加入甲磺酸酐(9.44g,54.2mmol)，室温下反应。TLC监测反应完成后，将反应液浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品20a(10.5g)，直接用于下步反应。
步骤2：2-(2-溴-5-氯苄基)异吲哚-1,3-二酮(20b)
将上述20a(10.5g,35.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)，加入邻苯二甲酰亚胺钾盐(7.79g,42.1mmol)，室温下反应。TLC监测反应完成后，将反应液浓缩，加入水(200mL)，二氯甲烷萃取(200mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，甲基叔丁基醚(50mL)打浆纯化得到20b(10.0g,两步收率81.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.96-7.88(m,2H),7.81-7.75(m,2H),7.54-7.46(m,1H),7.17-7.05(m,2H),4.91(s,2H).
步骤3：2-(5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)异吲哚-1,3-二酮(20c)
氮气保护下，将20b(10.0g,28.5mmol)溶于1,4-二氧六环(200mL)，依次加入醋酸钾(8.40g,85.6mmol)，联硼酸频那醇酯(10.87g,42.8mmol)和1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(1.18g,1.43mmol)，该混合物加热至100℃反应。TLC监测反应完成后，将反应液过滤，乙酸乙酯淋洗(40mL×3)，滤液浓缩得到粗品，快速柱层析(石油醚/四氢呋喃)得到20c(8.0g，收率60.9％)。
MS(ESI):m/z＝398.3[M+H]+
步骤4：(3-((6-(4-氯-2-((1,3-二氧代异吲哚-2-基)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸二乙酯(20d)
氮气保护下，将20c(1.50g,3.77mmol)和(3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧基)环己基)膦酸二乙酯(1.17g,2.90mmol)溶于1,4-二氧六环(25mL)和水(5mL)，加入碳酸钾(802.0mg,5.80mmol)和四(三苯基膦)钯(201.2mg,0.17mmol)，升温至80℃反应。TLC监测反应完成后，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，快速柱层析(四氢呋喃/石油醚)得到20d(1.0g,收率57.7％)。
MS(ESI):m/z＝597.1[M+H]+
步骤5：(3-((6-(2-(氨甲基)-4-氯苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸二乙酯(20e)
将20d(900.0mg,1.51mmol)溶于甲醇(20mL)，加入水合肼(493.0mg,15.1mmol)，升温至60℃反应。TLC监测反应完成后，将反应液浓缩，乙醇(20mL)打浆，过滤，滤液浓缩得到20e(600mg，收率56.2％)。
MS(ESI):m/z＝467.2[M+H]+
步骤6：(3-((6-(4-氯-2-((3-(环丁基甲基)-3-甲基脲)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸二乙酯(20f)
将20e(300.0mg,0.642mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，冷却至0℃，加入三乙胺(195.0mg,1.93mmol)和三光气(66.7mg,0.225mmol)。反应30分钟后，加入(环丁基甲基)甲胺盐酸盐(87.1mg,0.642mmol)，恢复至室温反应。TLC监测反应完成后，加入饱和碳酸氢钠(15mL)，二氯甲烷萃取(15mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，快速柱层析(四氢呋喃/石油醚)得到20f(40mg,收率10.5％)。
MS(ESI):m/z＝592.3[M+H]+
步骤7：(3-((6-(4-氯-2-((3-(环丁基甲基)-3-甲基脲)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(20)
将20f(40.0mg,0.068mmol)溶于无水乙腈(1mL)，冷却至0℃，加入三甲基溴硅烷(31.2mg,0.204mmol)和2,6-二甲基吡啶(21.9mg,0.204mmol)，恢复至室温反应。TLC监测反应完成后，浓缩得到粗品，粗品经HPLC制备得到标题化合物20(6.2mg,收率17％)。
MS(ESI):m/z＝536.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.50–7.45(m,2H),7.40–7.34(m,2H),4.52–4.38(m,1H),4.27(s,2H),2.88(s,3H),2.63–2.55(m,1H),2.53(s,3H),2.51–2.42(m,1H),2.27–2.18(m,1H),2.08–1.68(m,10H),1.59–1.29(m,5H).
实施例21
Figure BDA0003403233960000541
(3-((6-(4-氯-2-((3-环戊基-3-甲基脲)甲基)苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(21)
以(3-((6-(2-(氨甲基)-4-氯苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸二乙酯(20e)为原料，将实施例20步骤6中原料(环丁基甲基)甲胺盐酸盐替换成环戊基甲基胺，按照实施例20的步骤6～7类似方法，合成得到标题化合物21。
MS(ESI):m/z＝536.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65–7.35(m,3H),7.25–7.16(m,2H),4.63–4.45(m,1H),4.34–3.97(m,3H),2.75(s,3H),2.59–2.31(m,4H),2.10–1.13(m,17H).
实施例22
Figure BDA0003403233960000542
(3-((6-(2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(22)
Figure BDA0003403233960000551
步骤1：2-溴-5-氟苯基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(22a)
将2-溴-5-氟苄醇(400mg,1.95mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，加入三乙胺(591mg,5.85mmol)和对硝基氯甲酸苯酯(374mg,1.85mmol)。升温至40℃下反应3小时。反应完成后，加入三乙胺(543mg,5.38mmol)和(环丁基甲基)甲胺盐酸盐(120mg,1.21mmol)，室温下反应。LCMS监测反应完成后，将反应液浓缩，剩余物快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到22a(300mg，收率75％)
MS(ESI)m/z＝330.1[M+H]+
步骤2：5-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(22b)
将22a(300mg,0.91mmol),联硼酸频那醇酯(462mg,1.82mmol),1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(66mg,0.09mmol)和醋酸钾(267mg,2.73mmol)溶于1,4-二氧六环溶液(6mL)，该混合物微波反应器加热至120℃反应。反应完成后，冷却至室温，浓缩后得到粗产品，粗品快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到化合物22b(320mg，收率93％)。
MS(ESI)m/z＝378.3[M+H]+
步骤3：2-(5-((3-(二乙氧基膦酰基)环己基)氧)-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟苄基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(22c)
将22b(300mg,0.80mmol),(3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧基)环己基)膦酸二乙酯(323mg,0.80mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(66mg,0.08mmol)，无水碳酸钾(330mg,2.39mmol)溶于二氧六环(5mL)和水(2mL)。该混合物在微波反应器中加热至100℃反应1小时。反应完成后，加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品。该粗品通过反相柱层析(乙腈/水)得到化合物22c(200mg，收率44％)。
MS(ESI)m/z＝577.5[M+H]+
步骤4：(3-((6-(2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(22)
将化合物22c(40mg,0.01mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)，室温下加入三甲基氯硅烷(151mg,1.39mmol)，2,6-二甲基吡啶(223mg,2.08mmol)和碘化钠(208mg,1.39mmol)，升温至40℃反应。反应完成后，减压浓缩，加入甲醇(5mL)室温搅拌1小时。将反应液浓缩得到粗品，该粗品用通过反相柱层析(乙腈/水)得到标题化合物22(10mg，收率28％)。
MS(ESI)m/z＝521.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.54–7.41(m,2H),7.39–7.31(m,1H),7.25–7.16(m,2H),5.21(s,2H),4.45–4.32(m,1H),3.22–3.05(m,2H),2.77–2.64(m,4H),2.41–2.30(m,3H),2.30–2.19(m,1H),2.15–2.05(m,1H),2.04–1.68(m,7H),1.68–1.28(m,6H).
实施例23
Figure BDA0003403233960000561
(3-((6-(2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4,5-二氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(23)
Figure BDA0003403233960000571
步骤1：(2-溴-4,5-二氟苯基)甲醇(23a)
将原料2-溴-4,5-二氟苯甲酸甲酯(1000mg,3.98mmol)溶于无水四氢呋喃(20mL),冷却至-78℃，缓慢滴加二异丁基氢化铝(11.95mL,11.95mmol),低温下反应2小时。TLC监测反应完成后，滴加饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品。该粗品快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到23a(800mg，收率90％)。
MS(ESI)m/z＝205.2,207.2[M-17]+
步骤2：2-溴-4,5-二氟苄基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(23b)
将23a(400mg,1.79mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，加入三乙胺(543mg,5.38mmol)和对硝基氯甲酸苯酯(183mg,1.79mmol)。升温至40℃下反应3小时。反应完成后，加入三乙胺(543mg,5.38mmol)和(环丁基甲基)甲胺盐酸盐(120mg,1.21mmol)，室温下反应。LCMS监测反应完成后，将反应液浓缩，剩余物快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到23b(270mg，收率64％)。
MS(ESI)m/z＝348.1[M+H]+
步骤3：4,5-二氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(23c)
将23b(250mg,0.72mmol),联硼酸频那醇酯(365mg,1.44mmol),1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(52mg,0.07mmol)和醋酸钾(211mg,2.15mmol)溶于1,4-二氧六环溶液(6mL)，该混合物微波反应器加热至120℃反应。反应完成后，冷却至室温，浓缩后得到粗产品，粗品快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到化合物23c(250mg，收率88％)。
MS(ESI)m/z＝396.4[M+H]+
步骤4：2-(5-((3-(二乙氧基膦酰基)环己基)氧)-6-甲基吡啶-2-基)-4,5-二氟苄基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(23d)
将23c(250mg,0.63mmol),(3-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)氧基)环己基)膦酸二乙酯(257mg,0.63mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(52mg,0.06mmol)，无水碳酸钾(262mg,1.90mmol)溶于二氧六环(5mL)和水(2mL)。该混合物在微波反应器中加热至100℃反应1小时。反应完成后，加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品。该粗品快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到化合物23d(150mg，收率40％)。
MS(ESI)m/z＝595.4[M+H]+:
步骤5：(3-((6-(2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4,5-二氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)氧)环己基)膦酸(23)
将化合物23d(50mg,0.07mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)，室温下加入三甲基溴硅烷(116mg,0.76mmol)和2,6-二甲基吡啶(81mg,0.76mmol)，升温至40℃反应。反应完成后，减压浓缩，加入甲醇(5mL)室温搅拌1小时。将反应液浓缩得到粗品，该粗品用通过反相柱层析(乙腈/水)得到标题化合物23(10mg，收率22％)。
MS(ESI)m/z＝539.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60–7.37(m,4H),5.18(d,J＝11.0Hz,2H),4.45–4.33(m,1H),3.23–2.98(m,2H),2.76–2.63(m,3H),2.38–2.29(m,4H),2.29–2.21(m,1H),2.12–2.03(m,1H),2.03–1.70(m,7H),1.68–1.26(m,6H).
实施例24
Figure BDA0003403233960000581
(1S,3S)-3-((2-(4-氯-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(24)
Figure BDA0003403233960000591
步骤1：(1S,3S)-3-((2-(4-氯-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(24a)
将15a(200.0mg,0.54mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(0.5mL)，加入(1S,3S)-3-((2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(221.2mg,0.71mmol)和碳酸钾(150.4mg,1.09mmol)，置换氮气5分钟。氮气保护下，加入四(三苯基膦)钯(125.7mg,0.11mmol)，升温至80℃反应。反应完成后，加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到24a粗品(200mg)，直接用于下步反应。
MS(ESI):m/z＝518.2[M+H]+
步骤6：(1S,3S)-3-((2-(4-氯-2-(((甲基(丙基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(24)
将上述24a粗品(200.0mg,0.39mmol)溶于四氢呋喃(2mL)，水(0.5mL)和甲醇(0.5mL)，加入氢氧化锂(22.2mg,0.97mmol)，升温至50℃反应。LCMS监测反应完成后，减压蒸除有机溶剂，剩余物经制备HPLC纯化得标题化合物24(25mg，两步收率13.6％)。
MS(ESI):m/z＝476.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.49(s,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.52(d,J＝2.5Hz,1H),7.37(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),5.51(s,2H),4.92–4.72(m,1H),3.25–3.11(m,2H),2.93–2.82(m,4H),2.54(s,3H),2.21–2.07(m,1H),2.07–1.86(m,3H),1.84–1.61(m,4H),1.59–1.42(m,2H),0.99–0.77(m,3H).
实施例25
Figure BDA0003403233960000601
(1S,3S)-3-((2-(4-氯-2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(25)
Figure BDA0003403233960000602
步骤1：2-溴-5-氯苄基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(25a)
将(环丁基甲基)甲胺盐酸盐(569mg,5.74mmol)和三乙胺(2.39mL,17.2mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，缓慢加入16a(2.88g,7.46mmol)，室温下反应。TLC监测反应完成后，加入水(50mL)稀释，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品25a(860mg)，直接用于下步反应。
MS(ESI):m/z＝345.8/347.8[M+H]+
步骤2：5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(25b)
氮气保护下，将25a(800.0mg,2.31mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)，依次加入醋酸钾(679.5mg,6.92mmol)，联硼酸频那醇酯(897.1mg,3.46mmol)和1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(85.6mg,0.12mmol)，该混合物加热至100℃反应。TLC监测反应完成后，将反应液过滤，乙酸乙酯淋洗(40mL×3)，滤液浓缩得到粗品25b(1.0g)，直接用于下步反应。
MS(ESI):m/z＝394.2[M+H]+
步骤3～4：(1S,3S)-3-((2-(4-氯-2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(25)
按照实施例24的合成方法，将5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(15a)替换成5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基(环丁基甲基)(甲基)氨基甲酸酯(25b)，合成得到标题化合物25。
MS(ESI):m/z＝502.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.48(s,1H),7.92–7.81(m,1H),7.55–7.49(m,1H),7.37(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.51(d,J＝7.3Hz,2H),4.88–4.77(m,1H),3.39–3.17(m,2H),2.92–2.76(m,4H),2.58–2.49(m,4H),2.21–2.10(m,1H),2.06–1.95(m,3H),1.95–1.74(m,7H),1.71–1.60(m,3H).
实施例26
Figure BDA0003403233960000611
(1S,3S)-3-((2-(2-(((丁基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氯苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(26)
按照实施例24的合成方法，将原料5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基甲基(丙基)氨基甲酸酯(15a)替换成5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基丁基(甲基)氨基甲酸酯(16c)，合成得到标题化合物26。
MS(ESI):m/z＝490.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.54(s,1H),8.01–7.91(m,1H),7.54(d,J＝2.0Hz,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),5.50(s,2H),4.88–4.76(m,1H),3.29–3.18(m,2H),2.91–2.80(m,4H),2.61(s,3H),2.18–2.03(m,2H),1.98–1.87(m,2H),1.86–1.65(m,4H),1.53–1.42(m,2H),1.36–1.21(m,2H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例27
Figure BDA0003403233960000621
(1S,3S)-3-((2-(4-氯-2-(((环戊基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(27)
按照实施例25的合成方法，将步骤1中原料(环丁基甲基)甲胺盐酸盐替换成环戊基甲基胺，合成得到标题化合物27。
MS(ESI):m/z＝502.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53(s,1H),7.95–7.81(m,1H),7.51(s,1H),7.39(d,J＝5.6Hz,1H),5.52(s,2H),4.95–4.71(m,1H),4.67–4.19(m,1H),2.96–2.85(m,1H),2.73(s,3H),2.56(s,3H),2.24–1.39(m,16H).
实施例28
Figure BDA0003403233960000622
(1S,3S)-3-((2-(2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(28)
Figure BDA0003403233960000631
步骤1：(1S,3S)-3-((2-(2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(28a)
将22b(50mg,0.16mmol)，(1S,3S)-3-((2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(60mg,0.16mmol),双三苯基膦二氯化钯(22mg,0.032mmol)和碳酸钠(42mg,0.40mmol)混悬于二氧六环(4mL)和水(2mL)中。该混悬物在微波反应器中加热到125℃反应1小时。LCMS监测反应完成，将反应液通过C18反相柱(乙腈/水)纯化得到28a(30mg，收率35％)。
MS(ESI)m/z＝528.4[M+H]+
步骤2：(1S,3S)-3-((2-(2-((((环丁基甲基)(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(28)
将28a(30mg,0.057mmol)溶于甲醇(2mL)，四氢呋喃(2mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂一水合物(12mg,0.29mmol)。30℃反应6小时，LCMS监测反应完成后，浓缩得粗品，该粗品通过HPLC制备分离得标题化合物28(8mg,收率29％)。
MS(ESI)m/z＝486.4[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.25(s,1H),8.56(s,1H),7.98(s,1H),7.34–7.14(m,2H),5.45(d,J＝10.0Hz,2H),4.96–4.86(m,1H),3.23–3.00(m,2H),2.80–2.58(m,4H),2.44(s,3H),2.38–2.27(m,1H),2.07–1.98(m,1H),1.96–1.72(m,7H),1.71–1.47(m,6H).
实施例29
Figure BDA0003403233960000641
(1S,3S)-3-((2-(2-(((丁基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(29)
Figure BDA0003403233960000642
步骤1：2-溴-5-氟苄基丁基(甲基)氨基甲酸酯(29a)
将2-溴-5-氟苄醇(200mg,0.98mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，冷却至0℃，加入三乙胺(246mg,2.44mmol)和对硝基氯甲酸苯酯(177mg,0.88mmol)。0℃反应15分钟后，恢复至室温反应1.5小时。加入三乙胺(246mg,2.44mmol)和甲基丁胺(85mg,0.98mmol)，室温下反应。LCMS监测反应完成后，将反应液浓缩，剩余物快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到29a(220mg，收率71％)
MS(ESI)m/z＝318.2[M+H]+
步骤2：5-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基丁基(甲基)氨基甲酸酯(29b)
将29a(220mg,0.69mmol),联硼酸频那醇酯(350mg,1.38mmol),1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(51mg,0.069mmol)和醋酸钾(202mg,2.07mmol)溶于1,4-二氧六环溶液(6mL)，该混合物微波反应器加热至120℃反应。反应完成后，冷却至室温，浓缩后得到粗产品，粗品快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到化合物29b(200mg，收率79％)。
MS(ESI)m/z＝366.3[M+H]+
步骤3：(1S,3S)-3-((2-(2-(((丁基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(29c)
将29b(50mg,0.16mmol)，(1S,3S)-3-((2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(60mg,0.16mmol),双三苯基膦二氯化钯(22mg,0.032mmol)和碳酸钠(42mg,0.40mmol)混悬于二氧六环(4mL)和水(2mL)中。该混悬物在微波反应器中加热到125℃反应1小时。LCMS监测反应完成，将反应液通过C18反相柱(乙腈/水)纯化得到29c(30mg，收率36％)。
MS(ESI)m/z＝516.5[M+H]+
步骤4：(1S,3S)-3-((2-(2-(((丁基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-4-氟苯基)-4-甲基嘧啶-5-基)氧)环己烷-1-甲酸(29)
将29c(30mg,0.058mmol)溶于甲醇(2mL)，四氢呋喃(2mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂一水合物(12mg,0.29mmol)。30℃反应6小时，LCMS监测反应完成后，浓缩得粗品，该粗品通过HPLC制备分离得标题化合物29(20mg,收率73％)。
MS(ESI)m/z＝474.5[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.26(s,1H),8.56(s,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.31–
7.21(m,2H),5.45(d,J＝10.5Hz,2H),4.96–4.86(m,1H),3.20–2.98(m,2H),2.80–2.64(m,4H),2.44(s,3H),2.10–1.96(m,1H),1.90–1.77(m,3H),1.70–1.47(m,4H),1.45–1.08(m,4H),0.92–0.74(m,3H).
实施例30
Figure BDA0003403233960000651
(1S,3S)-3-((2'-(((环戊基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)氧)环己烷-1-甲酸(30)
Figure BDA0003403233960000661
步骤1：2-溴苄基(4-硝基苯)碳酸酯(30a)
将2-溴苄醇(5.00g,26.7mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(20.7g,160.4mmol)，冷却至0℃，分批加入对硝基氯甲酸苯酯(10.8g,53.5mmol)，室温下反应。TLC监测反应完成后，将反应液浓缩，剩余物柱层析(石油醚/四氢呋喃)得到30a(7.0g，收率74.4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝9.1Hz,2H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.64-7.55(m,3H),7.47(t,J＝7.5Hz,1H),7.37(dt,J＝1.4,7.7Hz,1H),5.38(s,2H)
步骤2：2-溴苄基环戊基(甲基)氨基甲酸酯(30b)
将30a(2.00g,5.68mmol)溶于二氯甲烷，加入N,N-二异丙基乙胺(2.20g,17.0mmol)和N-甲基环戊胺盐酸盐(924.5mg,6.82mmol)，室温下反应。TLC监测反应完成后，加入水(20mL)，二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯)得到30b(1.2g，收率67.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56(dd,J＝1.0,7.8Hz,1H),7.41(d,J＝7.3Hz,1H),7.33-7.28(m,1H),7.20-7.15(m,1H),5.26-5.13(m,2H),4.65–4.45(m,1H),2.88-2.75(m,3H),1.89-1.75(m,2H),1.74-1.64(m,2H),1.62-1.45(m,4H)
步骤3：(4'-羟基-[1,1'-联苯]-2-基)甲基环戊基(甲基)氨基甲酸酯(30c)
氮气保护下，将30b(600.0mg,1.92mmol)和4-羟基苯硼酸(318.1mg,2.31mmol)溶于1,4-二氧六环(9mL)和水(3mL)，加入四(三苯基膦)钯(111.0mg,0.0960mmol)和碳酸钾(796.8mg,5.76mmol)，升温至100℃反应。LCMS监测反应完全后，加入水(3mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到30c(625.4mg，收率43.2％)。
MS(ESI):m/z＝348.0[M+Na]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54-7.44(m,1H),7.35(dd,J＝3.7,5.3Hz,2H),7.31-7.27(m,1H),7.23-7.11(m,2H),6.94-6.79(m,2H),5.14(s,2H),4.70-4.32(m,1H),2.78(s,3H),1.85-1.39(m,9H)
步骤4：(1S,3S)-3-((2'-(((环戊基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)氧)环己烷-1-甲酸异丙酯(30d)
将30c(210.0mg,0.645mmol)，(1S,3R)-3-羟基环己烷-1-甲酸异丙酯(318.1mg,2.31mmol)和三苯基膦(423.2mg,1.61mmol)溶于四氢呋喃(4mL)，缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(326.2mg,1.61mmol)，升温至60℃反应。TLC监测反应完成后，加入水(3mL)，乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，快速柱层析(乙酸乙酯/石油醚)得到30d(100mg，收率31.4％)。
MS(ESI):m/z＝516.1[M+Na]+
步骤5：(1S,3S)-3-((2'-(((环戊基(甲基)氨基甲酰)氧)甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)氧)环己烷-1-甲酸(30)
将30d(100.0mg,0.203mmol)溶于四氢呋喃(0.4mL)，水(0.4mL)和甲醇(0.2mL)，加入氢氧化锂一水合物(10.2mg,0.243mmol)，室温反应。TLC监测反应完全后，将反应液浓缩，加入水(1mL)，乙酸乙酯萃取(2mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，剩余物经制备HPLC纯化得到标题化合物30(3mg，收率3.3％)。
MS(ESI):m/z＝474.2[M+Na]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48–7.42(m,1H),7.40–7.31(m,2H),7.29–7.22(m,3H),7.04–6.98(m,2H),5.06(s,2H),4.75–4.62(m,1H),4.50–4.26(m,1H),2.88–2.75(m,1H),2.72(s,3H),2.12–2.02(m,1H),1.98–1.86(m,3H),1.85–1.46(m,12H).
生物测试
对本发明中化合物的拮抗剂特性利用FLIPR(荧光成像读板仪)法进行测定，所述化合物是CHO-K1细胞(中国仓鼠卵巢细胞K1，HDB)中所表达的hLPAR1(人溶血磷脂酸受体1)激活所诱导的细胞内钙升高的抑制剂。
1实验试剂及仪器耗材
试剂及仪器耗材 供应商 货号
CHO-K1/LPA1R Cells HDB
Nutrient Mixture F-12Ham Gibco 21700
Fetal Bovine Serum biosera FB-1058/500
Hygromycin B CALBIOCHEM 400052-20mL
Fluo-8 AAT Bioquest 21080
Probenecid Invitrogen P36400
Tartrazine Sigma T0388-100G
Acid Red ALDRICH 210633-25G
HBSS with Ca/Mg Sigma H1387
HEPES,pH 7.4 gibco 15630-080
Bovine serum albumin,fatty acid free Proliant 69700
FLIPR Molecular Devices HD-4HYSG2600
FLIPRTETRA pipette tips(384,black) Molecular Devices 9000-0764
Oleoyl-L-α-lysophosphatidic acid sodium salt(LPA1) Sigma L7260
Assay plate,384well,black with clear,flat bottom CORNING 3764
PP-MICROPLATE,384well Perkin Elmer 6008590
2化合物准备
1.LPA1:溶解于DPBS(含有0.1％无脂肪酸BSA)，配成浓度为0.8μM的母液,分装并保存于-20℃。
2.待测化合物溶于DMSO，配成浓度为10mM的母液,保存于-20℃。
3.化合物用DMSO梯度稀释，配成200x化合物溶液(起始浓度为50μM，3倍稀释，10个点)。
4.准备5x化合物溶液，用HBSS+20mM HEPES缓冲液稀释，Bravo转移到384孔板(货号#6008590)中。
5.然后用Bravo转移10μL 5x化合物溶液于384孔黑色细胞培养板(货号#3764)中。
DMSO的终浓度为1％。
50x Red dye:4g Tartrazine和10.2g Acid Red溶于100mL H2O。
Fluo-8染色混合液:4mL反应缓冲液(HBSS+20mM HEPES+0.1％无脂肪酸BSA+0.001％F-127),32μL fluo-8,320μL 50x Red dye,40μL probeneid.
3实验步骤
1.用细胞培养基(F-12+10％FBS+400μg/ml Hygromycin B)培养CHO-K1/LPA1R细胞。
2.细胞汇合度达到80％，0.25％胰酶消化。
3.待细胞形态变圆，用培养基F-12(10％FBS)终止消化，细胞计数。然后用F-12(10％FBS)稀释成密度为6.7×105cells/ml的细胞悬液。
4.Multidrop将细胞铺到384孔黑色细胞培养板中，每孔30μL细胞悬液，于37℃、5％CO2培养箱中培养20-24小时。将培养基换成无血清的F-12培养基，饥饿24小时。
5.测试LPA1的计量实验。用反应缓冲液配制6X LPA1溶液(起始浓度为60μM，3倍稀释，10个点)，HPE为60μM LPA1，ZPE为反应缓冲液。弃掉384孔黑色细胞培养板中的培养基，换成反应缓冲液(HBSS+20mM HEPES+0.1％无脂肪酸BSA+0.001％F-127)。加入10μL 5％DMSO的反应缓冲液，再加入10μL Fluo-8染色混合液，37℃、5％CO2培养箱中避光孵育0.5小时。
6.FLIPR设置相应程序，读数。收集2分钟的数据。
7.根据LPA1的数值得到其反应曲线，计算出EC80时LPA1的浓度。配制6X LPA1溶液于384孔板(货号#6008590)中。
8.根据化合物准备步骤配制5X化合物溶液。弃掉384孔黑色细胞培养板中的培养基，换成反应缓冲液(HBSS+20mM HEPES+0.1％无脂肪酸BSA+0.001％F-127)。Bravo转移10μL5X化合物溶液，随后立即加入10μL Fluo-8染色混合液，37℃、5％CO2培养箱中避光孵育0.5小时。
9.FLIPR设置相应程序，读数。收集2分钟的数据。
10.最后对输出的荧光计数进行分析。
4实验结果
表1化合物对LPAR1受体所获得的IC50
化合物 LPAR1 IC<sub>50</sub>(nM)
BMS-986278 106*(n＝3)
1 242.1
2 1081
3 47
4 698
5 141
6 1095
7 >10000
8 8861
9 >10000
10 >10000
11 >10000
12 19.6*(n＝2)
13 143.8
14 439.8
15 35.5
16 12.0
17 10.2
18 38.3
19 17.1
20 212.8
21 741.4
22 78.3
23 26.9
24 54.2
25 43.1
26 25.4
27 36.9
28 224
29 50
30 >10000
*数据为n次测定结果的平均值。

Claims (9)

1.如式V所示的化合物或其可药用盐，其为
Figure FDA0003403233950000011
其中
R13选自羧基、亚磷酸基；
R14独立地选自氘、卤素、甲基、乙基、丙基、正丙基、环丙基、甲氧基、乙氧基和环丙氧基；h选自0-2的整数；优选h为0；
X4、X5独立地选自CH、CR12或氮原子，且X4、X5中至少一个选自氮原子；
R12独立地选自氘、卤素、甲基、乙基、丙基、环丙基、甲氧基、乙氧基、氨基和氰基，优选氘、卤素和甲基；更优选甲基；
R6独立的选自氘和卤素；
z选自0-4的整数，优选z选自0-2的整数；
R2选自单键、亚甲基，优选R2为亚甲基；所述亚甲基任选被1-2个氘、甲基、甲氧基、羟基、卤素、硝基、氰基、环丙基、环戊基所取代；优选所述亚甲基任选被1-2个氘、卤素、环丙基所取代；更优选所述亚甲基任选被1-2个氘、卤素所取代；
-X3-选自-O-或者-NR11-，所述R11选自氢、氘；
-X6-选自-O-或者-NR3-，所述R3选自氢、氘、C1-6烷基、C3-6环烷基；优选所述R3选自氢、氘、甲基、乙基、环丙基；所述甲基、乙基、环丙基优选被1-3个羟基、卤素、硝基、氰基所取代；
R4选自氢、氘、C1-6烷基，C3-6环烷基，所述C1-6烷基、C3-6环烷基任选被一个或多个氘、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、硝基、氰基、C3-6环烷基所取代。
2.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中
X4选自氮原子，X5选自CH或氮原子；
3.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中
R4选自氢、氘、甲基、乙基、丙基、正丙基、正丁基、环戊基、环丁甲基、环丙甲基、环戊甲基，所述甲基、乙基、丙基、正丙基、环丙甲基、环戊甲基任选被一个或多个氘、卤素、氰基所取代。
4.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的盐，式V所示的化合物选自
Figure FDA0003403233950000021
Figure FDA0003403233950000031
Figure FDA0003403233950000041
5.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的盐，式V所示的化合物选自
Figure FDA0003403233950000042
Figure FDA0003403233950000051
Figure FDA0003403233950000061
6.一种根据权利要求1-5中任一项所示的化合物的同位素取代物，优选地，所述的同位素取代为氘原子取代。
7.一种药物组合物，包括至少一种治疗有效量的如权利要求1-5任一项所述的化合物或其可药用的盐或如权利要求6所述的同位素取代物，以及药学上可接受的赋形剂。
8.权利要求1-5中任一项所述的化合物或其可药用盐、权利要求6所述的同位素取代物、或权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗与LPA1相关病症的药物中的用途。
9.权利要求1-5中任一项所述的化合物或其可药用盐、权利要求6所述的同位素取代物、或权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗器官纤维化变性疾病、呼吸系统疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、炎性疾病、神经系统疾病、心脑血管疾病、胃肠道疾病、疼痛、泌尿系统疾病、眼病、代谢疾病、癌症、移植器官排斥的药物中的用途。
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