CN114617870B - Tnp-470在制备治疗和/或预防以t-型钙离子通道为靶点的疾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了TNP‑470在制备治疗和/或预防以T‑型钙离子通道为靶点的疾病的药物中的应用，特别是在治疗炎性疼痛、三叉神经痛及坐骨神经痛药物方面的应用。本发明公开了TNP‑470的新用途，为开发用于治疗和/或预防以T‑型钙离子通道为治疗靶点的疾病的药物提供了新的理论和技术支撑，在临床治疗领域具有广泛的应用前景。

Description

TNP-470在制备治疗和/或预防以T-型钙离子通道为靶点的疾 病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种TNP-470在制备治疗和/或预防以T-型钙离子通道为靶点的疾病的药物中的应用。

背景技术

慢性疼痛(如三叉神经痛、坐骨神经痛、偏头痛等)是严重危害人类身心健康和生活质量的慢性疾病，被喻为“不死的癌症”，其疼痛反复发作、迁延难治的特征使患者长期遭受折磨，而且会诱发焦虑、抑郁和恐惧等恶性情绪或精神异常，甚至会引起个体产生自杀倾向，严重危害患者的生命及生活质量(Julius and Basbaum，Nature，2001，413:203-10)。在众多能缓解疼痛的制剂中，根据药理作用机制，主要可分为两类：非甾体抗炎镇痛药及阿片受体激动药。前者仅对轻中度疼痛有效，用药后容易出现胃出血等严重副作用；后者止痛效果强烈，但对慢性神经性痛疗效差，且患者长期使用后机体产生耐受及药物成瘾。因此，寻求新的安全有效的止痛药物，但又能避免严重副作用的新的制剂显得尤为迫切。

离子通道是位于生物膜上的一类可以快速通透离子的蛋白，主要包含电压门控型及配体门控型离子通道两大类，在感觉信号传导、心脏搏动、平滑肌蠕动和激素分泌等过程中具有重要作用。离子通道特定位点的突变将导致通道功能发生异常，引起细胞功能紊乱，最终导致疾病的发生。而某些疾病又可使离子通道功能、结构发生改变，产生离子通道代偿性疾病如神经病理性疼痛等(Waxman and Zamponi，Nat Neurosci，2014，17，153-63)。电压门控型离子通道按照其药理性质及分子构成又分为钠(Na⁺)、钾(K⁺)、钙(Ca²⁺)、氯(Cl^-)等四种。其中，电压门控钙离子通道是体内分布最为广泛、数量最多的离子通道，又可分为L-型、P/Q-型、N-型、R-型和T-型。T-型钙离子通道又称低电压激活钙通道，其激活阈值较低、失活较快，对静息状态下的神经元兴奋性起主要调节作用。遗传或药理学抑制神经T-型钙离子通道会抑制神经元兴奋性，而增强神经T-型钙离子通道电流则会增加动作电位发放。

目前，T-型钙离子通道作为重要的分子靶标在药物研发领域正逐步受到关注。一方面，T-型钙离子通道可作为疼痛治疗的药物靶点，主要包括以下证据和优势：首先，神经元T-型钙离子通道在整个疼痛感觉传导通路都有表达和分布，影响包括痛觉在内的感觉信号传导(Zamponi等，Brain Res Rev，2009，60，84-89)。感觉神经元T-型钙离子通道基因敲减或基因敲除会导致动物对伤害性刺激感觉敏感性降低(Bourinet等，Pain，2016，157，15-22)，表明T-型钙离子通道在疼痛，特别是神经病理性疼痛及炎症痛中发挥重要的生理作用。另一方面，T-型钙离子通道还可作为癫痫等神经精神兴奋性异常疾病治疗的药物靶点(Zamponi等，Pflugers Arch，2010，460，395-403)，研究发现T-型钙T-型钙离子通道亚型基因变异可以使通道电流增加，诱导神经元高兴奋，导致癫痫发作。在WAG/Rij癫痫鼠模型中应用选择性T-型钙离子通道阻滞剂可以有效控制癫痫发作(Peloquin等，Epilepsia，2006，47，655-658)。

TNP-470(又名：夫马吉欣，夫马菌素醇)是一种烟曲霉素经碱性水解后所产生的衍生物，是甲硫氨酸氨肽酶-2抑制剂，也是一种血管生成抑制剂。其化学名为4-羟基-alpha-乙基氨基-甲基-苄醇盐酸盐，分子式为C₁₉H₂₈ClNO₆，分子量为401.88，化学结构式如下：

TNP-470作为一种血管生成抑制剂，在体内外均具有强烈的抑制内皮细胞增殖与血管形成作用，其主要抑制DNA合成及细胞从G1期向S期的转变，抑制特异性细胞周期蛋白表达、细胞周期依赖激酶的激活，进而抑制肿瘤细胞生长，具有较强的抗肿瘤作用。此外，研究显示TNP-470还可减少能量摄入并增加能量消耗。然而，TNP-470是否对神经系统疾病具有作用，尤其是在疼痛、癫痫等神经系统疾病治疗中应用未见报道，且其机制也更是不明。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种TNP-470在制备治疗和/或预防以T-型钙离子通道为治疗靶点的疾病的药物中的应用。本发明公开了TNP-470新用途，为开发用于治疗疼痛疾病的药物提供了新的理论和技术支撑，在临床治疗领域具有广泛的应用前景。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了TNP-470在制备治疗和/或预防以T-型钙离子通道为治疗靶点的疾病的药物中的应用。

进一步地，所述疾病为炎性疼痛。

进一步地，所述疾病为癫痫。

进一步地，所述疾病为神经病理痛。

进一步地，所述疾病为三叉神经痛。

进一步地，所述TNP-470用于降低TG神经元动作电位频率，抑制神经元兴奋性。

进一步地，所述疾病为坐骨神经痛。

进一步地，所述疾病为偏头痛。

进一步地，所述TNP-470用于降低T-型钙离子通道电流。

进一步地，所述药物以TNP-470为活性成分，还包括药学上可接受的载体。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1.本发明通过研究TNP-470对T-型钙离子通道的影响，发现TNP-470可以显著抑制T-型钙离子通道电流。此外，通过动物实验证明了TNP-470可以通过抑制T-型钙离子通道来缓解炎性疼痛和神经病理性疼痛(三叉神经痛及坐骨神经痛)的疼痛反应，具有良好的镇痛作用。利用TNP-470对T-型钙离子通道的抑制作用，可以将TNP-470应用在制备用于治疗和/或预防以T-型钙离子通道为治疗靶点的疾病的药物中。

2.本发明公开了TNP-470在制备疼痛治疗药物方面的应用，所述疾病包括炎性疼痛、三叉神经痛、坐骨神经痛、偏头痛及癫痫等，还公开了其作用机制为TNP-470对T-型钙离子通道电流的抑制作用，为开发用于治疗疼痛疾病的药物提供了理论和技术支撑。

附图说明

图1为本发明实施例1中TNP-470对TG神经元电压门控离子通道电流的影响。其中：

图1A为TNP-470对钠离子通道电流的影响；

图1B为TNP-470对A型钾离子通道电流的影响；

图1C为TNP-470对延迟整流钾通道电流的影响；

图1D为TNP-470对高电压激活钙离子通道电流的影响；

图1E为TNP-470对低电压激活T-型钙离子通道电流的影响；

图1F为TNP-470对上述各电流作用的统计图。

图2为本发明实施例1中不同浓度TNP-470对T-型钙离子通道电流作用的剂量效应曲线。

图3为本发明实施例2中TNP-470对TG神经元动作电位发放的影响。其中：

图3A为对照组和给药组的1秒刺激时程神经元放电示意图；

图3B为对照组和给药组的1秒刺激时程神经元动作电位频率的统计图。

图4为本发明实施例3中TNP-470对CFA诱导的炎性疼痛模型大鼠痛行为影响。其中：

图4A为生理盐水组和CFA模型组的面部痛阈值随时间变化的统计图；

图4B为5nmol TNP-470给药组、1nmol TNP-470给药组和溶剂组对CFA诱导第2天的炎症性疼痛模型大鼠的面部痛阈值的影响；

图4C为预先给药TTA-P2后，TNP-470对CFA炎性痛模型大鼠痛阈的影响。

图5为本发明实施例4中TNP-470对三叉神经病理性痛模型(CCI-ION)大鼠的疼痛行为学的影响。其中：

图5A为假手术组和CCI-ION模型组的面部痛阈值随时间变化的统计图；

图5B为5nmol TNP-470给药组、1nmol TNP-470给药组和溶剂组对CCI-ION模型建立第14天的三叉神经痛模型大鼠的面部痛阈值的影响；

图5C为预先给药TTA-P2后，TNP-470对CCI-ION模型建立第14天的三叉神经病理性痛模型大鼠的面部痛阈值的影响。

图6为本发明实施例5中TNP-470对坐骨神经痛模型(SNI)大鼠的疼痛行为学的影响。其中：

图6A为假手术组和SNI模型组的痛阈值随时间变化的统计图；

图6B为5nmol TNP-470给药组、1nmol TNP-470给药组和溶剂组对SNI模型建立第7天的坐骨神经痛模型大鼠痛阈值的影响；

图6C为溶剂组和TTA-P2组中给药TNP-470对SNI模型建立第7天的坐骨神经痛模型大鼠的痛阈值的影响。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

实施例1：TNP-470对T-型钙离子通道电流的抑制作用

本实施例中，所选的实验材料如下：成年雄性健康的Sprague-Dawley大鼠，体重180-220克，由苏州大学实验动物中心提供。动物中心的卫生级核定文件编号：SYXK(苏)2007-0035。TNP-470及电生理试剂均购自Sigma公司。

(1)三叉神经元分离：具体方法采用三叉神经节神经元酶解条件(Zhang Y等，JPineal Res，2018，64，e12476)急性分离成年雄性SD大鼠三叉神经节(trigeminalganglion,TG)神经元细胞。雄性SD大鼠麻醉后暴露其三叉神经节。利用显微解剖镊取双侧三叉神经节，尽量去除其纤维连接。将培养基中的三叉神经节移入3毫克/毫升的胶原酶消化液中消化45分钟，然后在2毫克/毫升的胰蛋白酶消化液中再消化15分钟。上述操作完毕后，以含有10％胎牛血清的培养基终止其消化。反复吹打细胞至分散，经过40微米细胞筛滤过，得到的混悬液离心。弃去上清液，细胞沉淀物用培养基重悬，重悬后接种于24孔培养板中的预先用多聚赖氨酸包被的盖玻片上，并置于培养箱中待用。

(2)全细胞膜片钳记录：在室温下，采用Multiclamp 700B放大器进行全细胞电压钳记录。玻璃电极电阻为3-5MΩ。DigiData1322A在pClamp10.2软件中转换为数字信号。串联电阻补偿70-80％。应用全细胞膜片钳技术分别记录电压门控钠离子通道电流、A型钾离子通道电流、延迟蒸馏钾离子通道电流、高电压门控钙离子通道电流及低电压门控T-型钙离子通道电流，每组记录8-10个细胞，具体操作如下：

记录电压门控钠离子通道电流时，细胞钳制在-90毫伏，刺激方波至0毫伏，刺激时程为40毫秒。

记录钾离子通道电流时，细胞钳制在-80毫伏，去极化至+40毫伏可记录到总得钾通道电流，随后给予一个-10毫伏的前置脉冲，失活所有的A型钾通道电流，得到延迟整流钾通道电流。将总得钾通道电流减去延迟整流型电流即为A型钾通道电流。

记录高电压型钙通道电流时，细胞钳制在-60毫伏，刺激方波至0毫伏，刺激时程为40毫秒。

记录T-型钙通道电流时，细胞钳制在-110毫伏，刺激方波至-40毫伏，刺激时程为40毫秒。

本实施例通过上述方法检测了TNP-470对SD大鼠TG神经元电压门控钠离子通道电流、A型钾离子通道电流、延迟蒸馏钾离子通道电流、高电压门控钙离子通道电流及低电压门控T-型钙离子通道电流的影响。结果如图1所示，由图1A至1D可知，1微摩尔/升的TNP-470对电压门控钠通道电流(n＝10)、A型钾通道电流(n＝9)、延迟蒸馏钾通道电流(n＝9)、高电压门控钙通道电流(n＝8)均没有显著影响。如图1E所示，1微摩尔/升TNP-470对低电压门控T-型钙通道电流具有明显的抑制效应。如图1F所示，1微摩尔/升TNP-470对上述离子通道电流影响的柱状统计图，表明1微摩尔/升的TNP-470对T-型钙通道电流抑制率为56.8％(n＝9，***p<0.001vs.加药前)。

如图2所示，研究不同浓度的TNP-470(1纳摩尔/升、10纳摩尔/升、100纳摩尔/升、1微摩尔/升、10微摩尔/升、100微摩尔/升)对T-型钙通道电流的抑制作用，浓度依赖曲线采用sigmoidal Hill方程[Y＝1/(1+10(log IC50-X)nH]，其中X是浓度的对数值，IC50是半数有效剂量，经Prism 5.0软件拟合。最大抑制率为70.6％(n＝8)，半数有效抑制浓度IC50为0.36微摩尔/升。上述括号中n以及图2括号中的数字为所记录的细胞数量。

实施例2：TNP-470对TG神经元动作电位发放频率的影响

(1)三叉神经节神经元的分离：与实施例1相同。

(2)动作电位电流钳记录：在室温下，采用Multiclamp 700B放大器进行全细胞式电流钳记录。向细胞内注射180皮安(pA)持续时间1秒的电流，使细胞稳定在-70mV水平，记录所产生的动作电位频率。

(3)TNP-470对TG神经元动作电位发放频率的抑制作用：

将1微摩尔/升的TNP-470直接作用于三叉神经节神经元作为给药组，TNP-470给药前作为对照组。测试结果如图3A、3B所示：对照组的动作电位为11.8±1.7个，给药组的动作电位为5.6±0.9个。其中，**p<0.01vs.加药前对照组。给予1微摩尔/升的TNP-470后的神经元的动作电位个数出现明显下降，表明TNP-470能显著抑制TG神经元动作电位的发放频率。

实施例3：TNP-470对CFA诱导的炎性疼痛模型大鼠的疼痛行为的影响

(1)完全氟氏佐剂(CFA)炎性疼痛模型建立：取成年健康的雄性SD大鼠(180-220克)，面部须垫部皮下注射CFA，剂量为20微升/只。选取注射CFA第2天出现痛觉过敏的个体作为实验对象即实验组大鼠。

(2)痛阈测定：用von Frey细丝(Stoelting公司，型号NC12775)刺激大鼠须垫部，直至大鼠出现逃避行为视为阳性反应。从1克开始，连续刺激大鼠须垫部5次，若有三次出现阳性反应，则给予小一级的机械刺激；若未能出现阳性反应，则给予大一级的机械刺激。设定15克为最大的机械刺激强度，并且在双盲的条件下进行，将实验动物出现阳性反应的最小强度视为大鼠的机械痛阈值。

(3)TNP-470对CFA诱导的炎性疼痛模型大鼠的疼痛行为的影响：

1.CFA诱导对大鼠的面部痛阈值的影响：

取正常大鼠16只，分成二组，每组8只，第一组为生理盐水组，第二组为CFA模型组。如图4A所示，分别经过1天、2天、3天、7天、10天、14天，检测各组的面部痛阈值，CFA模型组第2天的面部痛阈值达到最低(**p<0.01vs.生理盐水组；双因素方差分析)，而生理盐水组的面部痛阈值没有明显变化。由此可知，CFA诱导可以降低大鼠的面部痛阈值，CFA诱导的炎性疼痛模型构建成功。

2.TNP-470对CFA诱导的炎性疼痛模型大鼠的面部痛阈值的影响：

取前述方法得到的CFA模型大鼠27只，分成3组，每组9只。在CFA诱导后第2天，对第一组大鼠三叉神经节定位注射1nmol TNP-470，第二组大鼠三叉神经节定位注射5nmolTNP-470，对照组大鼠三叉神经节定位注射相应溶剂。结果如图4B所示，5nmol及1nmol TNP-470给药组大鼠面部痛阈值在给药后3小时明显翻转CFA诱导的机械痛敏(*p<0.05vs.溶剂组；双因素方差分析)。由此可知，TNP-470可以显著缓解CFA诱导的炎症性疼痛模型的疼痛行为反应，具有镇痛作用。

3.TNP-470对CFA诱导的炎性疼痛模型大鼠的镇痛作用机制研究：

在CFA诱导后第2天，预先对三叉神经节定位注射给药5nmol的T-型钙通道阻断剂TTA-P2，30分钟后定位注射给药5nmol TNP-470，作为TTA-P2组。另一组预先注射相应溶剂，30分钟后定位注射给药5nmol TNP-470，作为溶剂组。结果如图4C所示，TTA-P2可翻转CFA诱导的炎症性疼痛，随后继续给药5nmol TNP-470则对面部痛阈值没有进一步改变；而在对照组注射溶剂后，继续给药5nmol TNP-470仍可显著升高面部痛阈值(*p<0.05vs.TTA-P2组+完全弗氏佐剂2天；+p<0.05vs.溶剂组+0小时；#p<0.05vs.溶剂组+0小时；双因素方差分析)。

以上结果表明，TNP-470对CFA诱导的炎症性疼痛模型大鼠疼痛具有镇痛作用，结合膜片钳电生理结果可知，TNP-470可通过阻断T-型钙通道对炎性疼痛产生明显的镇痛作用。

实施例4：TNP-470对三叉神经痛模型大鼠的疼痛行为的影响

(1)眶下神经慢性压迫性损伤(CCI-ION)模型：选取成年雄性健康的Sprague-Dawley大鼠(180–220克)，采用4％水合氯醛按照1毫升/100克的剂量以腹腔注射方式对大鼠进行麻醉，大鼠仰卧位固定在手术台上，于左上颌第一磨牙水平用无菌刀片划开，采用钝性弯曲的玻璃棒小心分离周围组织，直至暴露眶下神经。在其两端分别用5.0丝线进行结扎，间距为2毫米。手术结束后，用棉球擦拭血迹并涂抹青霉素钠防止感染。假手术组只需按上述方法钝性分离眶下神经，无需结扎。

(2)面部痛阈值测定：采用与实施例3相同的方法进行痛阈值测定。

(3)TNP-470对CCI-ION模型大鼠的疼痛行为的影响：

1.CCI-ION对大鼠面部痛阈值的影响：

取正常的大鼠14只，分成二组，每组7只。第一组为假手术组，第二组为CCI-ION模型组。分别经过7天、14天、21天、28天检测各组的面部痛阈值。

检测结果如图5A所示，假手术组的面部痛阈值没有明显变化，CCI-ION模型组第14天的面部痛阈值显著降低，并可持续至少28天(***p<0.001vs.假手术组；双因素方差分析)。

2.TNP-470对CCI-ION模型大鼠的面部痛阈值的影响：

取前述方法得到的CCI-ION模型大鼠21只，每组7只大鼠。在CCI-ION模型建立后第14天，在第一组大鼠三叉神经节定位注射1nmol的TNP-470，第一组大鼠三叉神经节定位注射5nmol的TNP-470，对照组定位注射相应溶剂，分别经过1小时、3小时、6小时、12小时检测各组的面部痛阈值。

检测结果如图5B所示，5nmol及1nmol TNP-470给药后3小时即可明显翻转CCI-ION模型大鼠的机械痛敏(*p<0.05vs.溶剂组；双因素方差分析)，即大鼠的面部痛阈值在注射TNP-470后上升。由此可知，TNP-470可以显著翻转CCI-ION神经病理痛模型大鼠的疼痛行为反应，具有镇痛作用。

3.TNP-470对CCI-ION模型大鼠的镇痛作用机制研究：

在CCI-ION模型建立后第14天，预先对三叉神经节定位注射给药5nmol TTA-P2，30分钟后定位注射给药5nmol TNP-470，作为TTA-P2组。另一组预先注射相应溶剂，30分钟后定位注射给药5nmol TNP-470。

结果如图5C所示，定位注射TTA-P2可提高CCI-ION模型大鼠的面部痛阈值，但随后继续给药5nmol TNP-470则对面部痛阈值没有进一步改变；而在对照组注射溶剂后，继续给药5nmol TNP-470仍可显著升高面部痛阈值(*p<0.05vs.CCI-ION模型第14天+TTA-P2组，#p<0.05vs.溶剂组+TNP-470注射0小时；双因素方差分析)。

以上结果表明，TNP-470对CCI-ION诱导的三叉神经痛模型大鼠疼痛具有显著镇痛作用，结合膜片钳电生理结果可知，TNP-470通过阻断T-型钙通道对三叉神经痛产生显著的镇痛作用。

实施例5：TNP-470对坐骨神经痛模型大鼠的疼痛行为的影响

本研究采用常用、经典的坐骨神经分支(胫腓总神经)选择性损伤，建立坐骨神经痛大鼠模型(spared nerve injury,SNI)。

(1)大鼠SNI模型的建立：坐骨神经通过股二头肌切开暴露，然后用5.0丝线结扎胫腓总神经，同时切断。手术结束时，用5.0丝线将肌肉和皮肤分成两层缝合，然后在伤口上涂抹利多卡因凝胶。对于假手术，以上述相同方式暴露坐骨神经，不结扎和切断神经。

(2)足部痛阈值测定：大鼠在行为学测定之前，首先要置于铁丝网架上的有机玻璃箱中适应环境，该过程持续三天，每次1小时。用von Frey纤维丝垂直刺激大鼠右后足，刺激的力度以使探针弯成90度为准，持续时间不大于4秒，当大鼠出现受试足快速抬起、躲避、舔咬等动作时则视为阳性反应，否则视为阴性反应。当出现阳性反应时给予小一级强度的刺激，当出现阴性反应时给予大一级强度的刺激。当出现一次阳性反应和阴性反应的骑跨，再按上述方法测定4次刺激。最终缩腿阈值(PWT)根据公式：

计算得到。其中X_f为最后一根用于测定的纤维丝的刺激强度，K_δ：根据阳性反应和阴性反应出现的模式所对应得到的数值。

(3)TNP-470对SNI模型大鼠的疼痛行为的影响

1.SNI对大鼠面部痛阈值的影响：

取正常的大鼠16只,分成二组，每组8只。第一组为假手术组，第二组为SNI模型组，分别经过3天、5天、7天、10天检测各组的痛阈值。

检测结果如图6A所示，SNI模型组在第7天机械痛阈值达到最低，并可持续至少10天(***p<0.001vs.假手术组；双因素方差分析)。

2.TNP-470对SNI模型大鼠的面部痛阈值的影响：

取前述方法制备得到的SNI模型大鼠27只，分成三组，每组9只。在SNI模型建立后第7天，在第一组大鼠的鞘内注射5nmol的TNP-470，第二组大鼠鞘内注射1nmol的TNP-470，对照组的大鼠鞘内注射相应溶剂，分别经过1小时、3小时、6小时检测各组的机械痛阈。

检测结果如图6B所示，5nmol及1nmol TNP-470鞘内给药可明显翻转SNI模型大鼠的机械痛敏(*p<0.05vs.溶剂组；双因素方差分析)。由此可知，TNP-470可以显著翻转SNI神经病理痛模型大鼠的疼痛行为反应，具有镇痛作用。

3.TNP-470对SNI模型大鼠的镇痛作用机制研究：

在SNI模型建立后第7天，预先鞘内给药5nmol TTA-P2，30分钟后鞘内给药5nmolTNP-470，作为TTA-P2组。另一组鞘内给药预先注射相应溶剂，30分钟后鞘内给药5nmolTNP-470。

结果如图6C所示，鞘内给药TTA-P2可显著抑制SNI模型大鼠机械痛阈，但随后继续给药5nmol TNP-470则对痛阈值没有进一步改变；而在对照组注射溶剂后，继续给药5nmolTNP-470仍可显著升高机械性痛阈值(*p<0.05vs.SNI模型第7天+TTA-P2组，#p<0.05vs.溶剂组+TNP-470注射0小时；双因素方差分析)。

以上结果表明，TNP-470对SNI诱导的坐骨神经痛模型大鼠疼痛具有显著镇痛作用，且TNP-470对SNI模型大鼠的镇痛作用是通过对T-型钙通道的抑制作用实现的。

本发明通过全细胞膜片钳研究方法，在实施例1及实施例2中，研究了TNP-470对大鼠TG神经元不同类型电压门控离子通道电流及神经元动作电位放电的影响，通过电压钳记录方法，发现TNP-470可选择性显著抑制大鼠TG神经元低电压门控T-型钙通道电流，该作用具有量效关系。通过电流钳记录方法，发现TNP-470可显著降低TG神经元动作电位发放频率。

此外，本发明通过动物学实验，在实施例3、实施例4及实施例5中，研究了TNP-470对CFA诱导的炎性痛模型、CCI-ION诱导的三叉神经痛模型、及SNI诱导的坐骨神经痛模型大鼠痛阈值的影响，发现TNP-470可以显著缓解上述三种疼痛模型大鼠疼痛行为反应，具有镇痛作用。此外，结合上述全细胞膜片钳研究数据，在行为学水平，阐明了TNP-470的镇痛作用，主要是通过其抑制T-型钙通道而产生。

本发明发现了TNP-470可显著抑制T-型钙离子通道，显著翻转炎性疼痛，三叉神经痛及坐骨神经痛模型大鼠痛敏反应，具有明显的镇痛作用。因此，TNP-470还可应用在制备用于治疗和/或预防以T-型钙离子通道为靶点的疾病药物中，所述疾病包括如炎性疼痛，三叉神经痛、坐骨神经痛、偏头痛及癫痫等。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (3)

1.TNP-470在制备治疗以T-型钙离子通道为靶点的坐骨神经痛的药物中的应用，TNP-470为唯一活性成分。

2.TNP-470在制备治疗以T-型钙离子通道为靶点的三叉神经痛的药物中的应用，TNP-470为唯一活性成分。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物以TNP-470为唯一活性成分，还包括药学上可接受的载体。

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