CN114588103B - 负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶及制备方法与应用 - Google Patents

负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶及制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶及制备方法与应用，泊洛沙姆温敏凝胶负载紫杉醇脂质体；紫杉醇脂质体的脂质体中DOPE、DOPC、CHEMS、CHOL的摩尔比为1:2.5～3.5:1～2:0.4～0.6；紫杉醇脂质体中紫杉醇与脂质体的质量比为1:10～25；泊洛沙姆温敏凝胶中泊洛沙姆P407 15～20份，泊洛沙姆P188 4～6份，蒸馏水75～80份。将紫杉醇脂质体与泊洛沙姆温敏凝胶联用，凝胶可改善脂质体稳定性，形成双层缓释体系，粘附在肿瘤部位缓慢释药。增强其生物利用度，减轻全身毒性；负载的不稳定药物受到脂质体和温敏凝胶的双层保护，其稳定性大幅提升。

Description

负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶及制备方法与应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶及制备方法与应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
宫颈癌的发病率大约占所有癌症的12％，死亡率位居第一位，是威胁世界女性的第二大癌症。随着HPV感染逐渐增多，宫颈癌发病率显著增长，且患者呈年轻化趋势。宫颈癌的治疗方式主要是手术和放疗，但为了保留生育能力，也有不少人选择化疗。而传统癌症静脉化疗是全身性化疗，给药方法为静脉滴注，具有很强的全身毒性，治疗效果较差，只能作为辅助手段。
宫颈癌的临床常用治疗药物为紫杉醇(PTX)，其抗癌机制是与微管蛋白在细胞内结合并促进二聚体聚合，减慢微管蛋白解离，稳定微管，使肿瘤细胞分裂停止在G2/M期。但PTX溶解性差，毒副作用强，治疗效果不佳。
亲水凝胶是一种具有亲水基的聚合物，对低分子有较好的透过性，广泛应用于生物医学领域。但宫颈以及阴道处的生理结构和环境较为复杂，人体自身在不同时期会分泌多种不同量的液体，可能会影响温敏凝胶的滞留时间、黏附能力，甚至会影响相变的成功与否，其中黏附性与能否在病灶处正常相变十分重要。普通亲水凝胶粘附性较差，难以实现宫颈给药，不能长时间附着于宫颈并持续释放药物。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶及制备方法与应用，采用负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶用于宫颈癌的局部化疗，以有效减小全身化疗的靶外毒性。单纯的泊洛沙姆p407溶液胶凝温度低于30℃，不适宜单独应用于人体，通过添加泊洛沙姆同系物，调节二者的比例至可以获得适宜的胶凝温度；并通过制备负载紫杉醇的脂质体，改善紫杉醇的治疗效果，以提高药物的靶向性和生物利用度。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下所述：
在本发明的第一方面，提供一种负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶，泊洛沙姆温敏凝胶作为载体，在所述载体上负载紫杉醇脂质体；
所述紫杉醇脂质体中脂质体的组成按摩尔比为，DOPE：DOPC：CHEMS：CHOL＝1:2.5～3.5:1～2:0.4～0.6；紫杉醇脂质体中紫杉醇与脂质体的质量比例为1:10～25；
所述泊洛沙姆温敏凝胶的组成，按质量份数计，泊洛沙姆P407 15～20份，泊洛沙姆P1884～6份，蒸馏水75～80份。
在本发明的第二方面，提供一种第一方面所述负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶的制备方法，
(1)紫杉醇脂质体的制备：取二油酰基卵磷脂DOPC、二油酰磷脂酰乙醇胺DOPE、总胆固醇CHOL和紫杉醇PTX溶于三氯甲烷中，充分混匀后减压旋转蒸发，待溶液蒸干后，形成一层无色透明的薄膜；向其中加入PBS溶液，用滤膜挤压过滤，得到紫杉醇脂质体；
(2)泊洛沙姆温敏凝胶的制备：冷却法制备温敏凝胶：将泊洛沙姆P407和P188冰水浴中搅拌，得到表层有泡沫悬浮的凝胶，静止至泡沫消退，过夜得到无色透明的空白凝胶；
(3)将步骤(1)制得的紫杉醇脂质体与步骤(2)制备的泊洛沙姆温敏凝胶进行混合，即得负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶。
在本发明的第三方面，提供一种上述负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶在宫颈癌的原位化疗中的应用。
本发明采用负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶用于宫颈癌的局部化疗，以有效减小全身化疗的靶外毒性。单纯的泊洛沙姆p407溶液胶凝温度低于30℃，不适宜单独应用于人体，可通过添加泊洛沙姆同系物，调节二者的比例至可以获得适宜的胶凝温度。并通过制备紫杉醇脂质体，改善紫杉醇的治疗效果，以提高药物的靶向性和生物利用度。采用泊洛沙姆温敏凝胶作为载体，使得载药凝胶可以在室温下为液态，给药后则转变成凝胶，粘附在药部位，缓慢稳定的释放药物；并且还可以通过添加粘附剂来增强所述温敏凝胶的粘附性。
本发明的具体实施方式具有以下有益效果：
本发明中将紫杉醇(PTX)脂质体与泊洛沙姆温敏凝胶联用，巧妙的结合凝胶与脂质体各自的优点：凝胶可以将脂质体包裹在立体网状结构中，改善脂质体稳定性，形成双层缓释体系，粘附在肿瘤部位缓慢释药。随着凝胶逐渐溶蚀，先释放出的脂质体可增加抗癌药物的跨膜转运，增强其生物利用度，减轻全身毒性；温敏凝胶-脂质体复合体系所负载的不稳定药物受到脂质体和温敏凝胶的双层保护，其稳定性大幅提升。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1中A为实施例1中泊洛沙姆温敏凝胶在胶凝温度以下时的溶液状态图，B为实施例1中泊洛沙姆温敏凝胶在胶凝温度以上时的胶凝状态图；
图2为中A为实施例1中的脂质体溶液图片，B为实施例1中的脂质体溶液的丁达尔效应图；
图3为实施例1中的紫杉醇脂质体电镜图；
图4为本发明实施例中的胶凝温度的稳定性图片；
图5为本发明实施例中的泊洛沙姆温敏凝胶的溶蚀曲线。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本发明的一种实施方式中，提供了一种负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶，泊洛沙姆温敏凝胶作为载体，在所述载体上负载紫杉醇脂质体；
所述紫杉醇脂质体中脂质体的组成按摩尔比为，DOPE：DOPC：CHEMS：CHOL＝1:2.5～3.5:1～2:0.4～0.6；紫杉醇脂质体中紫杉醇与脂质体的质量比例为1:10～25；
所述泊洛沙姆温敏凝胶的组成，按质量份数计，泊洛沙姆P407 15～20份，泊洛沙姆P1884～6份，蒸馏水75～80份。
优选地，DOPE、DOPC、CHEMS、CHOL的摩尔比1:3:1.5:0.5。
优选地，所述泊洛沙姆温敏凝胶中还含有粘附剂，所述胶黏剂优选羧甲基壳聚糖。
优选地，紫杉醇脂质体与泊洛沙姆温敏凝胶的质量比为1:500～2000。
本发明采用泊洛沙姆温敏凝胶作为载体，可通过调节泊洛沙姆P407和P188的用量改变凝胶的胶凝温度，使得载药凝胶可以在室温(25℃)下为液态，在人体温度(36℃)下则转变成凝胶，从而粘附在药部位，缓慢稳定的释放药物，并在处方中加入羧甲基壳聚糖增强粘附性。
为了改善治疗效果、提高癌症患者生存率和生存质量，本发明制备的负载紫杉醇的脂质体可以改善紫杉醇的治疗效果，提高药物的靶向性和生物利用度，从而减少全身毒性。脂质体是由胆固醇和磷脂组成的封闭脂质囊泡，具有脂质双分子层，是靶向递送药物的一种新剂型。脂质体的磷脂双分子层与生物细胞膜结构非常相似，可以在人体内进行降解，无免疫原性。通过修饰脂质体膜，改变脂质体表面电荷，可以延长循环时间，改变靶组织，此外脂质体作为载体可以有效的保护药物效应基团，改善治疗效果；克服肿瘤细胞的耐药性；具有良好的生物相容性；采用泊洛沙姆温敏凝胶作为载体，使得载药凝胶可以在室温下为液态，给药后则转变成凝胶，粘附在药部位，缓慢稳定的释放药物，并且还可以通过添加粘附剂来增强凝胶的粘附性。
本发明中具有温度敏感特性的凝胶体系，黏附性高于现有凝胶体系，凝胶转变速率迅速，可附着于阴道或宫颈处，长时间滞留，提高负载药物的释放率，增强疗效，以达到增强药物靶向性，减少全身毒性的作用。
本发明的一种实施方式中，提供了一种上述负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶的制备方法，
(1)紫杉醇脂质体的制备：取二油酰基卵磷脂DOPC、二油酰磷脂酰乙醇胺DOPE和总胆固醇CHOL，加入紫杉醇，溶于三氯甲烷中，充分混匀后减压旋转蒸发，待溶液蒸干后，形成一层无色透明的薄膜；向其中加入PBS溶液，用滤膜挤压过滤，得到紫杉醇脂质体；
(2)泊洛沙姆温敏凝胶的制备：冷却法制备温敏凝胶：将泊洛沙姆P407和P188冰水浴中搅拌，得到表层有泡沫悬浮的凝胶，静止至泡沫消退，过夜得到无色透明的空白凝胶；
(3)将步骤(1)制得的紫杉醇脂质体与步骤(2)制备的泊洛沙姆温敏凝胶进行混合，即得负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶。
在一种或多种实施方式中，步骤(1)中减压旋转蒸发的温度为35～45℃，转速为110～130rpm；
在一种或多种实施方式中，步骤(1)中PBS溶液为预热至35～45℃的PBS溶液；优选地，加入PBS溶液后水浴超声15s，超声次数不少于三次，置于35～45℃水浴中以1100～1300rpm的速度搅拌0.5～1.5h；
在一种或多种实施方式中，步骤(1)中滤膜为直径为0.20～0.24μm的滤膜。
在一种或多种实施方式中，步骤(2)中冰水浴中搅拌时间为3.5～4.5h；
在一种或多种实施方式中，步骤(2)中泊洛沙姆P407和P188加入水中搅拌的温度和过夜温度均为4℃。
本发明的一种实施方式中，提供了一种上述负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶在宫颈癌的原位化疗中的应用。
所述应用可以直接利用负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶进行宫颈癌的原位化疗的应用，也可以为在制备宫颈癌的原位化疗药物中的应用。
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的解释和说明。
实施例1
负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶的制备：
负载紫杉醇脂质体的制备：取二油酰基卵磷脂DOPC、二油酰磷脂酰乙醇胺DOPE和总胆固醇CHOL、胆固醇酯CHEMS，其中摩尔比DOPE：DOPC：CHEMS：CHOL＝1:3:1.5:0.5，溶于适量CHCl3中，充分混匀后减压旋转蒸发，温度为40℃，转速为120rpm，待溶液蒸干后，形成一层无色透明的薄膜，继续旋蒸10min尽可能减少有机和溶剂残留。向其中加入2mL预热至40℃的PBS溶液，水浴超声15s，共三次，置于40℃水浴中以1200rpm的速度搅拌1h，最后用直径为0.22μm的滤膜挤压过滤，如图2所示。
粒径分布与表面电荷通过粒径电位分析仪测定；将所制的脂质体溶液滴加在铜网上，用滤纸吸去多余的溶液后，再滴加2％的磷钨酸，静置10min待其充分染色，烤干后在透射电镜(TEM)下观察脂质体的微观形态，如图3所示。
泊洛沙姆温敏凝胶的制备：
冷却法制备温敏凝胶：取4℃冰箱中静止过夜的蒸馏水，将不同比例的泊洛沙姆P407和P188加入水中搅拌，其中P407的质量分数为15％，P188的质量分数为5％，蒸馏水为80％，冰水浴中搅拌4h，得到表层有泡沫悬浮的凝胶，静止至泡沫消退，在4℃冰箱过夜，得到无色透明的溶液为空白凝胶，如图1所示。
胶凝温度的测定：采用试管倒转法测试胶凝温度；取0.5mL溶液加入1.5mL离心管中，利用磁力搅拌器控制温度缓慢上升；每升高1℃，将离心管上下倒转，观察液体流动情况，完全不流动时记录胶凝温度。
将上述制得的负载紫杉醇脂质体与泊洛沙姆温敏凝胶按照质量比1:1000进行混合，即得负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶。
实施例2
负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶的制备：
负载紫杉醇脂质体的制备：取二油酰基卵磷脂DOPC、二油酰磷脂酰乙醇胺DOPE和总胆固醇CHOL、胆固醇酯CHEMS，其中摩尔比DOPE：DOPC：CHEMS：CHOL＝1:3:1.5:0.5，溶于适量CHCl3中，充分混匀后减压旋转蒸发，温度为40℃，转速为120rpm，待溶液蒸干后，形成一层无色透明的薄膜，继续旋蒸10min尽可能减少有机和溶剂残留。向其中加入2mL预热至40℃的PBS溶液，水浴超声15s，共三次，置于40℃水浴中以1200rpm的速度搅拌1h，最后用直径为0.22μm的滤膜挤压过滤。
泊洛沙姆温敏凝胶的制备：
冷却法制备温敏凝胶：取4℃冰箱中静止过夜的蒸馏水，将不同比例的泊洛沙姆P407和P188加入水中搅拌，其中P407的质量分数为18％，P188的质量分数为5％，蒸馏水为77％，冰水浴中搅拌4h，得到表层有泡沫悬浮的凝胶，静止至泡沫消退，在4℃冰箱过夜，得到无色透明的溶液为空白凝胶。
将上述制得的负载紫杉醇脂质体与泊洛沙姆温敏凝胶按照质量比1:1000进行混合，即得负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶。
实施例3
负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶的制备：
负载紫杉醇脂质体的制备：取二油酰基卵磷脂DOPC、二油酰磷脂酰乙醇胺DOPE和总胆固醇CHOL、胆固醇酯CHEMS，其中摩尔比DOPE：DOPC：CHEMS：CHOL＝1:3:1.5:0.5，溶于适量CHCl3中，充分混匀后减压旋转蒸发，温度为40℃，转速为120rpm，待溶液蒸干后，形成一层无色透明的薄膜，继续旋蒸10min尽可能减少有机和溶剂残留。向其中加入2mL预热至40℃的PBS溶液，水浴超声15s，共三次，置于40℃水浴中以1200rpm的速度搅拌1h，最后用直径为0.22μm的滤膜挤压过滤。
泊洛沙姆温敏凝胶的制备：
冷却法制备温敏凝胶：取4℃冰箱中静止过夜的蒸馏水，将不同比例的泊洛沙姆P407和P188加入水中搅拌，其中P407的质量分数为20％，P188的质量分数为5％，蒸馏水为75％，冰水浴中搅拌4h，得到表层有泡沫悬浮的凝胶，静止至泡沫消退，在4℃冰箱过夜，得到无色透明的溶液为空白凝胶。
所述泊洛沙姆温敏凝胶(5g)中添加粘附剂羧甲基壳聚糖(200mg)。
将上述制得的负载紫杉醇脂质体与泊洛沙姆温敏凝胶按照质量比1:1000进行混合，即得负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶。
对比例1
与实施例1的区别在于：
DOPE：DOPC：CHEMS＝1:3:0.5
对比例2
与实施例1的区别在于：
DOPE：DOPC：CHOL＝＝1:2:2
对比例3
与实施例1的区别在于：
大豆卵磷脂：CHOL：DSPE-PEG3400-NHS＝5:4:1
对比例4
大豆卵磷脂：CHOL：DSPE-PEG2000-NHS＝6:3:1
对比例5
与实施例1的区别在于：
大豆卵磷脂：CHOL：DSPE-PEG2000-NHS＝9:1:1
实施例1和对比例1-5的脂质体的粒径分析
利用不同组成的脂质材料，通过薄膜水化法制备负载紫杉醇的脂质体，并对制得的脂质体的理化性质进行考察，利用激光粒度分析仪考察脂质体的粒径与电位。结果表明当脂质与总胆固醇比例为2:1时，粒径在200nm左右，可靶向到肿瘤部位，但电位依旧偏高，加入CHEMS之后可以明显降低脂质体的表面电位。改变CHOL与CHEMS的比例，最终确定了脂质体的最优处方，当DOPE：DOPC：CHEMS：CHOL＝1:3:1.5:0.5。旋蒸的温度会对脂质体的粒径和zeta电位产生一定的影响，随着旋蒸温度升高，粒径和电位有不同程度的降低，最终确定旋蒸温度为40℃。采用最优处方在旋蒸温度为40℃的条件下，所制得的紫杉醇脂质体所测得平均粒径为160.15±4.17nm，zeta电位为-25.7±2.28mV。实施例1和对比例1-5的脂质体的粒径、PDI和zeta电位如表1所示。
表1：
Figure BDA0003575455490000071
Figure BDA0003575455490000081
由表1可见，对比例1-5得到的负载紫杉醇脂质体的粒径和电位均不合适，无法达到预期的效果。
脂质体载药量、包封率的测定
采用高效液相法(HPLC)测定载药量和包封率。用处方中加入3mg/mL紫杉醇(PTX)储备液60mL，按照上述方法制备脂质体，将所制的脂质体溶液置于透析袋中透析24h，取出置于离心管，加入等体积甲醇超声30min破乳后3000rpm离心20min，吸取上清液，用直径为0.22μm的滤膜挤压过滤，用高效液相色谱仪进行测定。色谱条件：色谱柱为Thermo ODS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相为CH3OH：水(65:35)；流速为1mL/min检测波长为227nm；柱温为25℃；进样量为20μL。
包封率％＝包载药量/总药量×100％
载药量％＝包载药量/药物与材料总量×100％
综上，TEM结果显示脂质体形态圆整，分布均匀，平均粒径为160.15±4.17nm，PDI为0.235±0.021，zeta电位为-25.7±2.28mV。HPLC法测定脂质体包封率为52.48±2.70％，载药量为2.4±0.12％。
实施例1-3的泊洛沙姆凝胶的温敏性能：
胶凝温度过高，凝胶进入宫颈后保持液态，容易造成药物泄漏，影响治疗效果，合适的胶凝温度应当为35℃附近。胶凝温度过低，药物提前形成凝胶，难以给药。胶凝温度随泊洛沙姆P407比例的增大而下降，随泊洛沙姆P188比例的增大则上升。结果显示，实施例1制备的泊洛沙姆凝胶在略低于人体温度时(36℃)转变为凝胶，可有效实现宫颈处的局部化疗。
水的用量可以影响胶凝温度，水的用量越多即凝胶越稀，胶凝温度越高，反之水的用量越少，胶凝温度越低，若水所占的比例高于某个上限，凝胶就难以凝聚。
实施例3中添加了粘附剂羧甲基壳聚糖，少量的羧甲基壳聚糖对胶凝温度影响不大。随着羧甲基壳聚糖用量的增多，凝胶的流动性逐渐降低，粘稠度及粘附性明显增加；明适量的粘附剂可以在不影响胶凝温度的前提下增强凝胶的粘附性，从而增强凝胶在给药部位的滞留效果，减少药物泄露的可能性。
宫颈处的微环境呈酸性，所以本发明主要考察温敏凝胶的抗酸能力。将泊洛沙姆温敏性凝胶与水互为对照，明显看出泊洛沙姆温敏具有较强的缓冲能力。在凝胶缓冲范围内，加入定量的酸和蒸馏水胶凝温度的变化幅度相等，说明胶凝温度的升高主要是由于稀释作用。随着酸度不断增大，凝胶的pH值开始减小，胶凝温度也明显随之升高，说明酸度会对泊洛沙姆温敏凝胶的胶凝温度产生影响，但宫颈处的pH约为5，在凝胶缓冲范围内，因此宫颈给药时凝胶的胶凝温度变化很小，可忽略不计。
泊洛沙姆凝胶的稳定性能
不同配方(如表2所示)的胶凝温度在测定时间内都保持在一定范围内小幅度波动，表现出良好的稳定性，如图4所示。最佳处方F4胶凝温度变化范围较小且始终低于人体温度，可以运用到后续实验中。
表2不同配方泊洛沙姆凝胶
Figure BDA0003575455490000091
温敏凝胶的体外溶蚀
凝胶的溶蚀是控制药物释放的主要方式，采用醋酸盐缓冲液来模拟宫颈处的酸性环境，进行温敏凝胶的体外溶蚀考察，从而预测载药凝胶在宫颈处的溶蚀情况，如图5所示。在6h时，含有0.1g羧甲基壳聚糖的温敏凝胶溶蚀率达到约89.6％，而含有0.2g羧甲基壳聚糖的温敏凝胶溶蚀率仅为61.2％。说明泊洛沙姆温敏凝胶在弱酸性条件下可以长时间粘附，缓慢的释放药物，延长释放时间，使药物在体内的浓度波动更加平缓。此外在凝胶中增加粘附剂羧甲基壳聚糖的用量可明显增强其粘附性能，减缓凝胶在酸性介质中的溶蚀。
综上，泊洛沙姆温敏凝胶，w(P407)为15～20％，w(P188)为5％，蒸馏水为75～80％时，可在略低于人体温度(36℃)时转变为凝胶，在凝胶中加入粘附剂羧甲基壳聚糖可明显增强其粘附性能，减缓凝胶在酸性介质中的溶蚀。凝胶溶蚀实验证明负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆凝胶体系溶蚀缓慢，具有较好的缓释性能。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶，其特征在于，泊洛沙姆温敏凝胶作为载体，在所述载体上负载紫杉醇脂质体；
所述紫杉醇脂质体中脂质体的组成按摩尔比为，DOPE：DOPC：CHEMS：CHOL＝1:2.5～3.5:1～2:0.4～0.6；紫杉醇脂质体中紫杉醇与脂质体的质量比例为1:10～25；
所述泊洛沙姆温敏凝胶的组成，按质量份数计，泊洛沙姆P407 15～20份，泊洛沙姆P188 4～6份，蒸馏水75～80份；
所述DOPE：DOPC：CHEMS：CHOL的摩尔比1:3:1.5:0.5；
所述紫杉醇脂质体与泊洛沙姆温敏凝胶的质量比为1:500～2000；
所述泊洛沙姆温敏凝胶中还含有粘附剂，所述胶黏剂为羧甲基壳聚糖。
2.一种权利要求1所述负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶的制备方法，其特征在于，
(1)紫杉醇脂质体的制备：取二油酰基卵磷脂DOPC、二油酰磷脂酰乙醇胺DOPE和总胆固醇CHOL，加入紫杉醇，溶于三氯甲烷中，充分混匀后减压旋转蒸发，待溶液蒸干后，形成一层无色透明的薄膜；向其中加入PBS溶液，用滤膜挤压过滤，得到紫杉醇脂质体；
(2)泊洛沙姆温敏凝胶的制备：冷却法制备温敏凝胶：将泊洛沙姆P407和P188冰水浴中搅拌，得到表层有泡沫悬浮的凝胶，静止至泡沫消退，过夜得到无色透明的空白凝胶，所述泊洛沙姆温敏凝胶5g中添加粘附剂羧甲基壳聚糖200mg；
(3)将步骤(1)制得的紫杉醇脂质体与步骤(2)制备的泊洛沙姆温敏凝胶进行混合，即得负载紫杉醇脂质体的泊洛沙姆温敏凝胶。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中减压旋转蒸发的温度为35～45℃，转速为110～130rpm。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中PBS溶液为预热至35～45℃的PBS溶液；加入PBS溶液后水浴超声15s，超声次数不少于三次，置于35～45℃水浴中以1100～1300rpm的速度搅拌0.5～1.5h。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中滤膜为直径为0.20～0.24μm的滤膜。
6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中冰水浴中搅拌时间为3.5～4.5h。
7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中泊洛沙姆P407和P188加入水中搅拌的温度和过夜温度均为4℃。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116115557A (zh) * 2023-02-03 2023-05-16 安徽农业大学 一种常山酮温敏凝胶复合物及其制备方法与应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1764090A1 (en) * 2005-09-15 2007-03-21 Novosom AG Amphoteric liposomes for local drug applications

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102552922B (zh) * 2010-12-16 2013-05-15 国家纳米科学中心 药物组合物及其制备方法和应用
JP5490326B2 (ja) * 2012-03-22 2014-05-14 塩水港精糖株式会社 パクリタキセルモノグリコシド及び／又はドセタキセルモノグリコシドを内包するリポソームの製造方法
CN105796482B (zh) * 2016-04-19 2019-09-03 浙江工业大学 紫杉醇缓释温敏凝胶及其制备方法
CA3122098A1 (en) * 2018-12-11 2020-06-18 Glyciome, Llc Topical, isotonic compositions for genital use
CN110200916A (zh) * 2019-05-08 2019-09-06 北京大学 一种双重酸敏性脂质体、以其为载体的药物及其制备方法
US11938186B2 (en) * 2020-05-20 2024-03-26 Indian Institute Of Technology Hyderabad Thermosensitive hydrogel for cancer therapeutics and methods of preparation thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1764090A1 (en) * 2005-09-15 2007-03-21 Novosom AG Amphoteric liposomes for local drug applications

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
左甜甜 ; 林贵梅 ; 邵伟 ; .多西他赛pH敏感脂质体的制备及其理化性质评价.药物生物技术.(第01期),全文. *
项心妍 ; 杜爽 ; 丁杨 ; 周建平 ; .脂质体注射剂的应用现状及其发展趋势.中国药科大学学报.(第04期),全文. *

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