CN114558055B - 一种抑制痤疮丙杆菌的组合物及其应用 - Google Patents

一种抑制痤疮丙杆菌的组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抑菌组合物及其应用。本发明抑菌组合物包括以下重量份的组分：苦参外泌体10～20份，桑叶外泌体10～15份，油橄榄外泌体15～25份，黄芩提取物5～10份，甘草提取物5～10份。本发明通过将苦参外泌体、桑叶外泌体、油橄榄外泌体、黄芩提取物和甘草提取物合理复配，有效利用这五种组分对痤疮丙酸杆菌的协同抑制作用，对祛痘具有很好的疗效。

Description

一种抑制痤疮丙杆菌的组合物及其应用
技术领域
本发明属于化妆品领域，涉及一种抑菌组合物及其应用。
背景技术
痤疮，又名青春痘，是一种毛囊、皮脂腺的慢性炎症，主要发生在面部及胸背等多脂区，表现为粉刺、丘疹、脓疱、结节等。痤疮发病率高达70％～87％，因其损容性的特点而易对患者的生活造成影响，甚至使患者产生焦虑、抑郁等心理问题。
痤疮丙酸杆菌，是造成痤疮的主要细菌，其不仅会分解皮脂中的甘油三酯，产生大量的游离脂肪酸，刺激毛囊及其周边组织发生炎症，还会诱导单核细胞及角质形成细胞分泌细胞因子，引起或加剧痤疮炎症。痤疮丙酸杆菌通过获取皮脂中三酰甘油的甘油部分作为自身能量的来源，而去酯化的游离脂肪酸可明显刺激毛囊皮脂腺开口处上皮的增生和角化过度。另外由痤疮丙酸杆菌本身产生的一些低分子多肽可驱化体内的中性粒细胞，后者产生的水解酶也可使毛囊壁损伤破裂，引发炎症。因此，能够抑制或杀死痤疮丙酸杆菌的产品可达到一定的祛痘效果。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术不足，提供一种抑菌组合物及其应用，以有效抑制痤疮丙酸杆菌，达到良好的祛痘效果。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种抑菌组合物，其包括以下重量份的组分：苦参外泌体10～20份，桑叶外泌体10～15份，油橄榄外泌体15～25份，黄芩提取物5～10份，甘草提取物5～10份。
苦参是一种传统的草药，有效成分为苦参碱和氧化苦参碱，具有抗菌消炎的功效，能用于治疗湿疹和皮炎。桑叶含有还原糖、多缩戊糖及半乳糖酐、鞣质、黄酮类等，对荧光素酶的活性有促进作用，说明其具有抗炎的功效，能很好地防治因雄性激素偏高引发的痤疮。油橄榄中含有裂环烯醚萜及其苷、黄酮及其苷、双黄酮及其苷、低分子单宁等成分，对致痤疮的细菌有抑制作用，可以用作粉刺的防治剂，同时还能抑制组胺的释放，具有舒缓抗敏的作用。黄芩对多种皮肤致病菌均有抑制作用，并有抗炎、抗变态反应作用。甘草对多种细菌都有明显的抑制作用，可以用作抗炎剂。所述抑菌组合物通过将苦参外泌体、桑叶外泌体、油橄榄外泌体、黄芩提取物和甘草提取物合理复配，有效利用这五种组分对痤疮丙酸杆菌的协同抑制作用，从而达到良好的祛痘效果。
优选地，所述抑菌组合物包括以下重量份的组分：苦参外泌体13～16份，桑叶外泌体12～15份，油橄榄外泌体20～25份，黄芩提取物5～7份，甘草提取物5～7份，以使其对痤疮丙酸杆菌的抑制作用更强，祛痘效果更好。
优选地，所述苦参外泌体、桑叶外泌体和油橄榄外泌体的制备方法均包括以下步骤：
(1)将植物原料制成粉后加入PBS缓冲液中进行溶解，过滤，离心，取上清液；
(2)将所得上清液进行超速离心，所得沉淀即为目标外泌体
制备所述苦参外泌体时，所用植物原料为苦参根；
制备所述桑叶外泌体时，所用植物原料为桑叶；
制备所述油橄榄叶外泌体时，所用植物原料为油橄榄叶。
优选地，步骤(1)中离心转速为8000～9500rpm；步骤(2)中超速离心的离心力为90000×g～110000×g，超速离心温度为0～8℃，超速离心时间为60～80min。
优选地，所述黄芩提取物和甘草提取物的制备方法均包括以下步骤：将植物原料粉碎后，加入乙醇溶液中进行浸泡，再加热回流提取1～3次，过滤，收集合并滤液，减压浓缩，干燥制粉，即得目标提取物
制备所述黄芩提取物时，所用植物原料为黄芩根；
制备所述甘草提取物时，所用植物原料为甘草根茎。
优选地，所述浸泡的时间为30～60min，乙醇溶液的体积浓度为60～85％(乙醇溶液的体积浓度是指乙醇溶液中乙醇的体积浓度，下同)，加热回流温度为70～85℃，每次加热回流时间为30～90min。
第二方面，本发明提供了所述抑菌组合物在制备化妆品中的应用。
第三方面，本发明还提供了一种化妆品，其包含所述抑菌组合物。添加所述抑菌组合物的化妆品具有抑制痤疮丙酸的效果。
优选地，所述抑菌组合物的重量为所述化妆品重量的1～5％。当化妆品含1～5wt％的所述抑菌组合物，即能获得良好的抑制痤疮丙酸杆菌和祛痘功效。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明通过将苦参外泌体、桑叶外泌体、油橄榄外泌体、黄芩提取物和甘草提取物合理复配，有效利用这五种组分对痤疮丙酸杆菌的协同抑制作用，对祛痘具有很好的疗效。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
各实施例和对比例所用原料中，苦参外泌体、桑叶外泌体和油橄榄外泌体均通过如下制备方法制备而成：
(1)将苦参根、桑叶或油橄榄叶研磨成粉后加入PBS缓冲液中进行溶解，过滤，在9000rpm的转速下离心，取上清液；
(2)将所得上清液在4℃下超速离心60min，离心力为100000×g，所得沉淀即为相应的外泌体。
各实施例和对比例所用原料中，黄芩提取物和甘草提取物均通过如下制备方法制备而成：将黄芩根或甘草根茎粉碎至100目，加入体积浓度为75％的乙醇溶液中浸泡30min，再在80℃下加热回流提取2次，过滤，收集合并滤液，减压浓缩，喷雾干燥，即得相应提取物。
实施例1
本实施例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体10份，桑叶外泌体10份，油橄榄外泌体15份，黄芩提取物10份，甘草提取物10份。
实施例2
本实施例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体13份，桑叶外泌体12份，油橄榄外泌体20份，黄芩提取物7份，甘草提取物7份。
实施例3
本实施例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体14份，桑叶外泌体14份，油橄榄外泌体22份，黄芩提取物6份，甘草提取物6份。
实施例4
本实施例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体16份，桑叶外泌体15份，油橄榄外泌体25份，黄芩提取物5份，甘草提取物5份。
实施例5
本实施例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体20份，桑叶外泌体15份，油橄榄外泌体25份，黄芩提取物5份，甘草提取物5份。
对比例1
本对比例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体10份，桑叶外泌体10份，油橄榄外泌体15份，黄芩提取物20份，甘草提取物20份。
对比例2
本对比例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体20份，桑叶外泌体15份，油橄榄外泌体25份，黄芩提取物2份，甘草提取物2份。
对比例3
本对比例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：桑叶外泌体14份，油橄榄外泌体22份，黄芩提取物6份，甘草提取物6份。
对比例4
本对比例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体14份，油橄榄外泌体22份，黄芩提取物6份，甘草提取物6份。
对比例5
本对比例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体14份，桑叶外泌体14份，黄芩提取物6份，甘草提取物6份。
对比例6
本对比例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体14份，桑叶外泌体14份，油橄榄外泌体22份，甘草提取物6份。
对比例7
本对比例提供了一种抑菌组合物，其包含以下重量份的组分：苦参外泌体14份，桑叶外泌体14份，油橄榄外泌体22份，黄芩提取物6份。
效果例1——痤疮丙酸杆菌体外抑菌试验
将各实施例和对比例的抑菌组合物配制成浓度为100mg/mL的样品溶液，备用；将活化后的痤疮丙酸杆菌配制成浓度约5×107CFU/mL的悬浮液，备用；配制含2wt％琼脂的改良GAM培养基，加热熔化，保温备用。每组取9支无菌试管，第1管加入3mL 20mg/mL的样品溶液，第2～9管分别加入3mL蒸馏水，第2管再加入3mL 20mg/mL的样品溶液，第2～9管依次做二倍稀释，再分别向各试管中加入12mL上述液体培养基(各试管对应抑菌组合物浓度分别为20mg/mL、10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、0.3125mg/mL、0.15625mg/mL、0.078125mg/mL)，将各试管中的液体培养基全部倒入培养皿中，待冷却凝固后加入200μL悬浮液，用涂布棒涂布分散均匀，干燥后盖上平皿，于37℃下培养48h，观察结果，确定各样品的MIC(最小抑菌浓度)，同时设置空白对照组(15mL培养基)和阳性对照组(3mL0.5wt％DP-300+12mL培养基)，每组每个样品重复试验3次，结果见表1。
表1
样品 MIC mg/mL
实施例1 0.625
实施例2 0.3125
实施例3 0.15625
实施例4 0.3125
实施例5 0.625
对比例1 1.25
对比例2 1.25
对比例3 2.5
对比例4 2.5
对比例5 1.25
对比例6 1.25
对比例7 1.25
由表1可知，本发明抑菌组合物在苦参外泌体、桑叶外泌体、油橄榄外泌体、黄芩提取物和甘草提取物协同作用下，对痤疮丙酸杆菌具有良好的抑菌作用，MIC在0.625mg/mL以下，但当苦参外泌体、桑叶外泌体、油橄榄外泌体、黄芩提取物和甘草提取物的配比不在本发明范围内时，如对比例1和2，这五种组分未表现出明显的协同增效作用。
效果例2——人体调查试验
受试人群：面部出现脓疱，年龄18～25岁，身体健康；
受试人数：共80人，随机平分为8组；
测试方法：将各实施例抑菌组合物以0～5wt％的添加用于制备化妆品，所得化妆品配方包含以下重量百分含量组分：抑菌组合物以0～5％，鲸蜡硬脂醇醚-22％，鲸蜡硬脂醇醚-21 2.5％，角鲨烷2％，辛酸/癸酸甘油三酯3％，聚二甲基硅氧烷2％，二甲基甘氨酸1.5％，丙二醇2％，香精0.1％，双(羟甲基)咪唑烷基脲0.1％，碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1％，余量的去离子水。受试者将所得化妆品在每日早晚洁面后涂抹面部，一日2次，持续使用15天后收集受试者的反馈，其中无效表示脓疱加重或者没有好转，有效表示脓疱好转但没有完全消失；治愈表示脓包消除，测试结果见表2。
表2
由表2可知，在化妆品中添加1～5wt％本发明抑菌组合物即能有效祛痘。
效果例3——人体皮肤斑贴试验
将效果例2制得的化妆品进行人体皮肤斑贴试验，具体为根据《化妆品安全技术规范2015版》中的皮肤封闭型贴斑试验方法和分级标准进行测试，选取30名满足要求的受试者，每隔两天进行一轮测试，每轮采用一种样品，如果受试者在上轮中的评分等级大于0，那么需要间隔一周才能进行下轮测试。结果发现这些化妆品评分等级均为0级，即皮肤反应呈阴性，说明这些化妆品使用安全无刺激。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种抑制痤疮丙酸杆菌的组合物，其特征在于，由以下重量份的组分组成：苦参外泌体10~20份，桑叶外泌体10~15份，油橄榄叶外泌体15~25份，黄芩提取物5~10份，甘草提取物5~10份。
2.如权利要求1所述的抑制痤疮丙酸杆菌的组合物，其特征在于，由以下重量份的组分组成：苦参外泌体13~16份，桑叶外泌体12~15份，油橄榄叶外泌体20~25份，黄芩提取物5~7份，甘草提取物5~7份。
3.如权利要求1或2所述的抑制痤疮丙酸杆菌的组合物，其特征在于，所述苦参外泌体、桑叶外泌体和油橄榄叶外泌体的制备方法均包括以下步骤：
（1）将植物原料制成粉后加入PBS缓冲液中进行溶解，过滤，离心，取上清液；
（2）将所得上清液进行超速离心，所得沉淀即为目标外泌体；
制备所述苦参外泌体时，所用植物原料为苦参根；
制备所述桑叶外泌体时，所用植物原料为桑叶；
制备所述油橄榄叶外泌体时，所用植物原料为油橄榄叶。
4.如权利要求3所述的抑制痤疮丙酸杆菌的组合物，其特征在于，步骤（1）中离心转速为8000~9500rpm；步骤（2）中超速离心的离心力为90000×g~110000×g，超速离心温度为0~8℃，超速离心时间为60~80min。
5.如权利要求1或2所述的抑制痤疮丙酸杆菌的组合物，其特征在于，所述黄芩提取物和甘草提取物的制备方法均包括以下步骤：将植物原料粉碎后，加入乙醇溶液中进行浸泡，再加热回流提取1~3次，过滤，收集合并滤液，减压浓缩，干燥制粉，即得目标提取物；
制备所述黄芩提取物时，所用植物原料为黄芩根；
制备所述甘草提取物时，所用植物原料为甘草根茎。
6.如权利要求5所述的抑制痤疮丙酸杆菌的组合物，其特征在于，所述浸泡的时间为30~60min，乙醇溶液的体积浓度为60~85%，加热回流温度为70~85℃，每次加热回流时间为30~90min。
7.如权利要求1~6任一项所述的抑制痤疮丙酸杆菌的组合物在制备化妆品中的应用。
8.一种化妆品，其特征在于，包含如权利要求1~6任一项所述的抑制痤疮丙酸杆菌的组合物。
9.如权利要求8所述的化妆品，其特征在于，所述抑制痤疮丙酸杆菌的组合物的重量为所述化妆品重量的1~5%。
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