CN114556101A - 癌的检查方法 - Google Patents
癌的检查方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114556101A CN114556101A CN202080071169.XA CN202080071169A CN114556101A CN 114556101 A CN114556101 A CN 114556101A CN 202080071169 A CN202080071169 A CN 202080071169A CN 114556101 A CN114556101 A CN 114556101A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- molecule
- binding
- cancer
- antibody
- lcn
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/548—Carbohydrates, e.g. dextran
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4724—Lectins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/81—Protease inhibitors
- G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- G01N2333/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- G01N2333/8121—Serpins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/81—Protease inhibitors
- G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- G01N2333/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- G01N2333/8121—Serpins
- G01N2333/8125—Alpha-1-antitrypsin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/02—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates involving antibodies to sugar part of glycoproteins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种方法,该方法为了预测对象是否患有癌而检测从该对象得到的生物样品(例如,血液样品)中的特定成分。根据本发明,提供一种方法,该方法包括分离出生物样品中的选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分。根据本发明,还提供一种方法,该方法包括通过使用选自由与BC2LCN结合性糖链结合的分子、与SerpinA3结合的分子、以及与Gal3BP结合的分子组成的组中的第1分子和与BC2LCN结合性糖链结合的第2分子来实施的检定,检测包括在从对象得到的生物样品(例如,血液样品)中的糖蛋白。
Description
技术领域
本发明涉及一种癌的检查方法及其检查试剂盒。
背景技术
BC2LCN是糖结合蛋白,即凝集素的一种,根据以前的报告,明确了对作为糖蛋白糖链的H-type1(Fucα1-2Galβ1-3GlcNAc)及H-type3(Fucα1-2Galβ1-3GalNAc)具有亲和性,能够用作显现具有H-type3糖链的足细胞标志蛋白(podocalyxin)的人ES细胞或iPS细胞的未分化标志物检测用探针(专利文献1)。并且,根据以前的报告,明确了BC2LCN与癌组织牢固地结合,能够用作癌标志物检测探针(专利文献2)。根据专利文献2,通过BC2LCN和与角蛋白硫酸结合的抗体的夹心检定,确认到在一部分癌患者的血液成分中存在由BC2LCN和角蛋白硫酸识别的蛋白质。
SerpinA3也被称为α1-抗胰凝乳蛋白酶,已知与若干肿瘤等疾病相关。SerpinA3作为血液检查标志物正在被开发(非专利文献1)。
Gal3BP也被称为LGAL3SBP或MAC-2-BP,在乳腺癌、肺癌、直肠结肠癌、卵巢癌及子宫内膜癌患者的血清中以高浓度发现(非专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:WO2014/126146
专利文献2:WO2017/061449
非专利文献
非专利文献1:Nie,S.etal.,J.Proteome Res.13:1873-1884,2014
非专利文献2:Koths,K.etal.,J.Biol.Chem.268:14245-14249,1993
发明内容
本发明涉及一种癌的检查方法及其检查试剂盒。
根据本发明,提供以下发明。
(1)一种方法,其分析从对象得到的血液样品的内部,所述方法包括:
通过使用选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的抗体、以及与Gal3BP结合的抗体组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子来实施的夹心检定或免疫色谱检定,分析包含在血液样品中的血液成分。
(2)根据上述(1)所述的方法,其中,第1分子是与SerpinA3结合的抗体。
(3)根据上述(1)所述的方法,其中,第1分子是与Gal3BP结合的抗体。
(4)根据上述(1)所述的方法,其中,第1分子是BC2LCN。
(5)根据上述(1)~(4)中任一项所述的方法,其中,对象患有癌或有其可能性。
(6)根据上述(5)所述的方法,其中,对象患有胰腺癌或有其可能性。
(7)根据上述(6)所述的方法,其中,对象患有1阶段或2阶段的胰腺癌或有其可能性。
(8)一种夹心检定用或免疫色谱检定用试剂盒,其包含选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的抗体、以及与Gal3BP结合的抗体组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子,并能够使用第1分子和第2分子来测定对象的血液样品中的糖蛋白的量。
(9)根据上述(8)所述的试剂盒,其中,第1分子是与SerpinA3结合的抗体,糖蛋白中的蛋白质部分是SerpinA3。
(10)根据上述(8)所述的试剂盒,其中,第1分子是与Gal3BP结合的抗体,糖蛋白中的蛋白质部分是Gal3BP。
(11)根据上述(8)所述的试剂盒,其包含:第2分子,其为固相化BC2LCN;及已标记的第1分子,选自由已标记的BC2LCN、与已标记的SerpinA3结合的抗体、以及与已标记的Gal3BP结合的抗体组成的组。
(12)根据上述(8)~(11)中任一项所述的试剂盒,其用于检测癌。
(13)根据上述(12)所述的试剂盒,其中,癌是选自由胰腺癌及大肠癌组成的组中的癌。
(14)根据上述(13)所述的试剂盒,其中,癌是1阶段或2阶段的胰腺癌。
(15)一种方法,其预测对象是否患有癌,所述方法包括实施上述(1)~(7)中任一项所述的方法。
(16)一种方法,其分析从对象得到的血液样品的内部,
所述方法包括分析在血液样品中血液成分的有无或浓度,血液成分是能够同时结合两个BC2LCN的成分、以及选自由BC2LCN结合性SerpinA3及BC2LCN结合性Gal3BP组成的组中的成分。
根据本发明,还可以提供以下发明。
(1A)一种方法,其分析从对象得到的生物样品,所述方法包括:
通过使用选自由与BC2LCN结合性糖链结合的分子、与SerpinA3结合的分子、以及与Gal3BP结合的分子组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子来实施的检定,分析包含在生物样品中的成分。
(2A)根据上述(1A)所述的方法,其中,第1分子是与SerpinA3结合的抗体。
(3A)根据上述(1A)所述的方法,其中,第1分子是与Gal3BP结合的抗体。
(4A)根据上述(1A)所述的方法,其中,第1分子是BC2LCN。
(5A)根据上述(1A)~(4A)中任一项所述的方法,其中,对象患有癌或有其可能性。
(6A)根据上述(5A)所述的方法,其中,对象患有胰腺癌或有其可能性。
(7A)根据上述(6A)所述的方法,其中,对象患有1阶段或2阶段的胰腺癌或有其可能性。
(8A)一种夹心检定用试剂盒、免疫色谱检定用试剂盒、凝集素电泳用试剂盒、质谱分析用试剂盒、凝集素亲和层析用试剂盒或μTAS用试剂盒,其包含选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的分子、以及与Gal3BP结合的分子组成的组中的第1分子和作为与BC2LCN结合性糖链结合的分子的第2分子,并能够使用第1分子和第2分子来测定对象的生物样品中的糖蛋白的量。
(9A)根据上述(8A)所述的试剂盒,其中,第1分子是与SerpinA3结合的抗体,糖蛋白中的蛋白质部分是SerpinA3。
(10A)根据上述(8A)所述的试剂盒,其中,第1分子是与Gal3BP结合的抗体,糖蛋白中的蛋白质部分是Gal3BP。
(11A)根据上述(8A)所述的试剂盒,其包含:第2分子,其为固相化BC2LCN;及已标记的第1分子,选自由已标记的BC2LCN、与已标记的SerpinA3结合的抗体、以及与已标记的Gal3BP结合的抗体组成的组。
(12A)根据上述(8A)~(11A)中任一项所述的试剂盒,其用于检测癌。
(13A)根据上述(12A)所述的试剂盒,其中,癌是胰腺癌。
(14A)根据上述(13A)所述的试剂盒,其中,癌是1阶段或2阶段的胰腺癌。
(15A)一种方法,其预测对象是否患有癌,所述方法包括实施上述(1A)~(7A)中任一项所述的方法。
(16A)一种方法,其在从对象得到的生物样品中检测特定成分,
特定成分是能够同时结合两个BC2LCN的成分、以及选自由BC2LCN结合性SerpinA3及BC2LCN结合性Gal3BP组成的组中的成分。
(17A)一种方法,其包括从获得自对象的生物样品中分离能够与两个BC2LCN同时结合的成分、以及选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分。
(18A)根据上述(17A)所述的方法,其中,对象是患有胰腺癌或可能患有胰腺癌的对象。
(19A)根据上述(17A)所述的方法,其中,胰腺癌是I阶段或II阶段的胰腺癌。
(20A)根据上述(17A)~(19A)中任一项所述的方法,其还包括测量分离出的成分的量。
(21A)根据上述(20A)所述的方法,其还包括比较截止值与所述测定出的成分的量。
(22A)根据上述(21A)所述的方法,其中,截止值是与健康者的所述测定出的成分对应的成分的量的平均值以上的值,并且是与胰腺癌患者的所述测定出的成分对应的成分的量的平均值以下的值。
(23A)根据上述(17A)~(19A)中任一项所述的方法,其还包括检测分离出的成分。
附图说明
图1是在患有各种癌的患者和健康者的血液样品中,测定出由两个分子的BC2LCN同时能够识别的血液因子的浓度的夹心检定的结果。
图2表示使用BC2LCN使得与BC2LCN结合的血液成分从血液样品沉淀,然后进行凝胶电泳并使用BC2LCN进行了免疫印迹的结果(左)及进行了银染的结果(右)。
图3表示使用BC2LCN使得与BC2LCN结合的血液成分从血液样品沉淀,然后进行凝胶电泳并分别用针对SeprinA3的抗体(左)及针对Gal3BP的抗体(右)进行了免疫印迹的结果。
图4表示在患有各种癌的患者和健康者的血液样品中,使用BC2LCN和与SerpinA3结合的抗体进行了夹心检定的结果。
图5表示在患有各种癌的患者和健康者的血液样品中,使用BC2LCN和与Gal3BP结合的抗体进行了夹心检定的结果。
图6表示在胰腺癌患者和健康者的血液样品中,由两个分子的BC2LCN同时能够识别的血液因子的浓度、BC2LCN结合性SerpinA3的浓度、BC2LCN结合性Gal3BP的浓度、以及使用两种不同的抗SerpinA3抗体测定出的SerpinA3的浓度的结果。
图7是表示以胰腺癌患者和健康者的血液样品中的由两个分子的BC2LCN同时能够识别的血液因子的浓度、BC2LCN结合性SerpinA3的浓度、BC2LCN结合性Gal3BP的浓度、以及使用两种不同的抗SerpinA3抗体测定出的SerpinA3的浓度为指标来检测胰腺癌的评价系统中的灵敏度(Sensitivity)及特异性(Specificity)的关系的ROC曲线。
图8A表示将由两个分子的BC2LCN同时能够识别的血液因子的胰腺癌患者的血液样品中的浓度按UICC TMN分类中的各阶段测定出的结果。
图8B表示将BC2LCN结合性SerpinA3的胰腺癌患者的血液样品中的浓度按UICCTMN分类中的各阶段测定出的结果。
图8C表示将BC2LCN结合性Gal3BP的胰腺癌患者的血液样品中的浓度按UICC TMN分类中的各阶段测定出的结果。
图8D表示将使用两种不同的抗SerpinA3抗体测定出的SerpinA3的胰腺癌患者的血液样品中的浓度按UICC TMN分类中的各阶段测定出的结果。
图9表示使用正常(normal)及包括胰腺癌的胰脏的组织切片的rBC2LCN(图中,有时简称为“rBC2”)的组织学染色、以及针对SerpinA3及Gal3BP的免疫组织学染色的结果。
图10表示使用两个分子的BC2LCN的夹心检定、使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、使用BC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定、使用抗SerpinA3抗体的ELISA、使用抗Gal3BP抗体的ELISA的系统中的、健康者、慢性胰腺炎患者及胰腺癌患者的血液样品的分析结果。
图11表示使用两个分子的BC2LCN的夹心检定、使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、使用BC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定、使用抗SerpinA3抗体的ELISA、使用抗Gal3BP抗体的ELISA的系统中的、对健康者及慢性胰腺炎患者检测胰腺癌患者的ROC曲线。使用血液样品进行了分析。
图12表示使用两个分子的BC2LCN的夹心检定、使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、使用BC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定、使用抗SerpinA3抗体的ELISA、使用抗Gal3BP抗体的ELISA的系统中的、对健康者检测I阶段的胰腺癌患者的ROC曲线。使用血液样品进行了分析。
图13表示使用两个分子的BC2LCN的夹心检定、使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、使用BC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定、使用抗SerpinA3抗体的ELISA、使用抗Gal3BP抗体的ELISA的系统中的、对健康者检测II阶段的胰腺癌患者的ROC曲线。使用血液样品进行了分析。
图14表示使用两个分子的BC2LCN的夹心检定、使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、使用BC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定的系统中的、对健康者检测III阶段的胰腺癌患者的ROC曲线。使用血液样品进行了分析。
图15表示使用两个分子的BC2LCN的夹心检定、使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、使用BC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定的系统中的、对健康者检测IV阶段的胰腺癌患者的ROC曲线。使用血液样品进行了分析。
图16表示通过使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定对胰腺癌切除手术前、该手术30天后(30POD)及该手术3个月后(3m)的患者的血液样品进行了分析的结果。
图17表示通过使用BC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定对胰腺癌切除手术前、该手术30天后(30POD)及该手术3个月后(3m)的患者的血液样品进行了分析的结果。
图18表示通过使用CA19-9的ELISA对胰腺癌切除手术前、该手术30天后(30POD)及该手术3个月后(3m)的患者的血液样品进行了分析的结果。
图19表示通过使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定对胰腺癌切除术前、该手术1天后(1POD)、该手术7天后(7POD)、该手术30天后(30POD)、以及复发后患者(患者A)的血液样品进行了分析的结果。
具体实施方式
在本说明书中,“对象”意味着哺乳动物,尤其意味着包括人类的哺乳类。在本说明书中,“对象”可以是健康者,或者可以是患有癌的患者,或者可以是可能患有癌的患者。
在本说明书中,“肿瘤”意味着表示独立性增殖的细胞群。独立性增殖意味着摆脱体内正常的细胞增殖控制而自主持续增殖的细胞的性质。肿瘤大致分为良性肿瘤和恶性肿瘤(癌)。良性肿瘤是独立性增殖,但不会引起转移、浸润及恶病质的肿瘤。恶性肿瘤除了自主增殖以外,还会引起向正常组织的浸润、转移及恶病质中的任一种以上。
在本说明书中,“生物样品”意味着从对象得到的样品(例如,组织、细胞、细胞外液及体液)。作为体液,可以举出血液、尿、腹水、胸水及分泌液(例如内分泌液及外分泌液,例如胰液等消化液)。在本说明书中,“血液样品”是从对象得到的血液(例如外周血)或源自血液的样品(例如血清及血浆)。在本说明书中,“血液成分”是包含在血液中的成分,尤其是包含在血液中的液体成分。在本说明书中,如后所述,在生物样品是血液样品的情况下,成分是血液成分。
在本说明书中,“抗体”意味着免疫球蛋白。抗体是对抗原具有结合特性的活体分子。抗体对抗原可以具有特异性。抗体可以是单克隆抗体,也可以是多克隆抗体。抗体可以包括双特异性抗体。抗体可以是全长抗体和对抗原具有结合性的其片段。
在本说明书中,“BC2LCN”是源自Burkholderia cenocepacia的凝集素,即BC2L-C的N末端域(Sulak,O.,etal.,Structure,18(1):59-72,2010)。根据以前的报告,明确了BC2LCN对作为糖蛋白糖链的H-type1(Fucα1-2Galβ1-3GlcNAc)及H-type3(Fucα1-2Galβ1-3GalNAc)具有亲和性,并且明确了BC2LCN能够用作显现具有H-type3糖链的足细胞标志蛋白的人ES细胞或iPS细胞的未分化标志物(WO2014/1236146)。并且,根据以前的报告,明确了BC2LCN在癌组织中特异性地显现,并且用于检测癌(WO2017/061449)。根据WO2017/061449,通过BC2LCN和与角蛋白硫酸结合的抗体的夹心检定,在一部分癌患者的血液成分中确认到存在由BC2LCN和角蛋白硫酸识别的蛋白质。在本说明书中,有时将使用大肠杆菌等B.cenocepacia以外的宿主产生的BC2LCN称为重组BC2LCN或rBC2LCN。在本说明书中,将BC2LCN结合的糖链或蛋白质称为BC2LCN结合性糖链或蛋白质。BC2LCN结合性蛋白质由BC2LCN结合性糖链修饰。BC2LCN结合性糖链可以是H-type1糖链和/或H-type3糖链。作为BC2LCN,例如,可以举出在美国国立生物工学信息中心(NCBI)中注册为YP_002232818的凝集素。作为BC2LCN,只要是对糖链具有结合能力就可以使用,但是作为BC2LCN,也能够使用改变(例如,提高)对JP2020-146027中所公开的糖链的结合能力的BC2LCN。可以使用BC2LCN的变体。作为BC2LCN,可以举出具有与注册为YP_002232818的凝集素的氨基酸序列相同90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上或100%的氨基酸序列的蛋白质(BC2LCN)。BC2LCN至少与选自由H-type3糖链及H-type1糖链组成的组中的一种以上结合。
在本说明书中,“SerpinA3”是也作为α1抗胰凝乳蛋白酶(AACT)被已知的丝氨酸蛋白酶抑制剂(丝氨酸)。在人类中,例如,可以是通过从具有注册为GenBank注册编号K01500.1的碱基序列的mRNA翻译得到的蛋白质。在人类中,SerpinA3蛋白质通过由第1~第23个氨基酸序列组成的信号肽从423个氨基酸长度的前体(例如,NCBI参考编号:NP_001076.2)被切断而可以生成。
在本说明书中,“Gal3BP”是半乳凝素-3-结合蛋白。Gal3BP可以是通过从具有注册为美国国立生物工学信息中心(NCBI)参考编号NM_005567.4的碱基序列的mRNA翻译得到的蛋白质。在人类中,Gal3BP蛋白质例如通过由第1~第18个氨基酸序列组成的信号肽从585个氨基酸长度的前体(例如,具有注册为NCBI参考编号:NP_005558.1的氨基酸序列)被切断而可以生成。Gal3BP在血清中具有90kDa的分子量,在乳腺癌、肺癌、直肠结肠癌、卵巢癌及子宫内膜癌患者的血清中以高浓度发现(Koths,K.etal.,J.Biol.Chem.268:14245-14249,1993)。
在本说明书中,“夹心检定”是用于检测包含在样品中的目标成分的检定。若为本领域技术人员,则能够通过常规方法实施夹心检定。夹心检定通常是如下检定:使目标成分接触到与在支撑体(例如,基板及珠子)上固相化的该目标成分结合的捕捉分子A,在支撑体上捕捉目标成分,然后去除(或分离)未结合的该目标成分,然后使得与已标记的该目标成分结合的捕捉分子B接触,以检测捕捉到支撑体上的目标成分的标记作为指标。作为在本发明中可以使用的支撑体,只要是在通常的免疫学测定法中使用的支撑体(尤其,不溶性支撑体),则均可以使用,例如可以举出聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯、聚丙烯、聚烯烃、聚酰亚胺、聚氨酯、聚酯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚氯碳酸酯、硅树脂、硅橡胶、琼脂糖、葡聚糖、乙烯-马来酸酐共聚物等有机物;玻璃、氧化硅、硅藻、多孔性玻璃、磨砂玻璃、氧化铝、硅胶、金属氧化物等无机物质;铁、钴、镍、磁铁矿、铬矿等磁性体等;以及以这些磁性体合金为材料制备出的支撑体。固相化可以对固相(例如,珠子、磁珠、膜、板等的所有表面)进行。能够使用市售的各种磁珠。作为磁珠,例如,可以使用在WO2012/173002A中公开的磁珠。在夹心检定中,通常,固相化的上述捕捉分子A和已标记的上述捕捉分子B在与目标成分的结合中互不竞争,而需要同时与目标成分结合。捕捉分子A可以是以下说明的第1分子,捕捉分子B可以是第2分子。捕捉分子A可以是以下说明的第2分子,捕捉分子B可以是第1分子。
夹心检定也能够通过微流控芯片(micro-total analysis systems;μTAS)进行。微流控芯片具备流路,流路具有样品导入口,例如,在样品导入口中,使结合有聚阳离子或聚阴离子(例如,DNA)的捕捉分子X与样品接触而形成捕捉分子X与目标成分的复合体,施加电场以使复合体移动,若存在于流路中途的已标记的捕捉分子Y和复合体接触,则形成目标成分、捕捉分子X及捕捉分子Y的复合体,进而,复合体通过电场在流路中移动并到达流路上检测部,因此根据与捕捉分子Y结合的标记可以被检测。例如,通过激光等以光学方式可以实施检测。捕捉分子X可以是以下说明的第1分子,捕捉分子Y可以是第2分子。捕捉分子X可以是以下说明的第2分子,捕捉分子Y可以是第1分子。也能够使用μTAS并行检测多个生物标志物的存在。
作为其他夹心检定,可以举出如下检定(例如,AlphaLISA):捕捉分子N与捕捉分子M分别在不同的珠子A及B上被固相化,当存在目标分子时,目标分子、捕捉分子N及珠子A和捕捉分子M及珠子B形成复合体,通过对包括通过激励而释放单线态氧的光敏化器的珠子A照射激励光,仅在形成有复合体时(当珠子A与B接近时)单线态氧到达珠子B,由此使珠子B化学发光,通过检测来自珠子B的光而检测目标分子的存在。从而,在本发明中,可以提供包括BC2LCN固相化的珠子和与SerpinA3或Gal3BP结合的抗体固相化的珠子的AlphaLISA检定试剂盒。在本发明中,也可以使用利用由第1荧光分子标记的BC2LCN和与由第2荧光分子标记的SerpinA3或Gal3BP结合的抗体之间的荧光共振能量转移(FRET)及活体发光共振能量转移(BRET)等检测目标分子的存在的检定试剂盒。在该情况下,不需要用于固相化的珠子或支撑体。在本发明中,可以提供这种检定用试剂盒。
在本说明书中,“免疫色谱检定”是用于检测包含在样品中的目标成分的检定,通常是如下检定:使由胶体金等标记来标记的捕捉分子C与包含在液体试样中的目标成分接触,形成标记捕捉分子C与目标成分的复合体,然后,使复合体在色谱膜上移动,并与在测试线上固相化的捕捉分子D接触,以将标记捕捉分子C与目标成分的复合体捕捉到测试线上,并检测测试线上的标记作为指标。在免疫色谱检定中,通常,已标记的捕捉分子C和在测试线上被固相化的捕捉分子D在与目标成分互不竞争,而需要同时与目标成分结合。在免疫色谱检定中,除了测试线以外,还设置对照线,在对照线上,与捕捉分子C结合的分子(是抗体等,在捕捉分子C是IgG抗体的情况下,可以是抗IgG抗体)被固相化,能够捕捉未与目标成分结合的标记捕捉成分C。在免疫色谱检定中,提供依次包括包含样品的样品垫、存在标记捕捉分子C的缀合物垫、样品中的目标成分与捕捉分子C的复合体移动的移动层即膜、吸收样品中的水分的吸收垫的条带,在膜上存在捕捉分子D被固相化的测试线和对捕捉分子C的抗体被固相化的对照线。若使样品包含在样品垫中,则在样品包含目标成分的情况下,可以在条带上朝向吸收垫移动。当移动到缀合物垫时,标记捕捉分子C与目标成分形成复合体,复合体捕捉到在测试线上被固相化的捕捉分子D,并且还捕捉到对照线上。在样品不包含目标成分的情况下,样品朝向吸收垫移动,标记捕捉分子C不形成复合体,不会捕捉到测试线上,而仅捕捉到对照线上。结果,在对照线显色且测试线显色的情况下,表示在样品中包含有目标成分,在对照线显色且测试线不显色的情况下,表示在样品中不包含目标成分。在对照线不显色的情况下,能够判断为基于免疫色谱的评价系统未正确地运作。捕捉分子C可以是以下说明的第1分子,捕捉分子D可以是第2分子。捕捉分子C可以是以下说明的第2分子,捕捉分子D可以是第1分子。
在本说明书中,“凝集素电泳”是使用包含凝集素的凝胶的电泳,是利用了在电泳中与凝集素相互作用的分子的移动速度比不相互作用的分子慢的凝集素结合分子的分离方法。凝集素在凝胶中游离,或者在凝胶上被固相化。凝集素几乎不会因电泳而移动,因此仅通过与凝胶材料混合而制作凝胶,能够使糖蛋白的电泳速度降低。或者,凝集素由非共价键或共价键连结于凝胶。在将BC2LCN结合性分子与BC2LCN非结合性分子分离的情况下,通过将BC2LCN用作凝集素的凝集素电泳,能够分离生物样品。具有BC2LCN结合性糖链的分子在电泳中与在凝胶上被固相化的凝集素重复相互作用,因此电泳延迟。另一方面,BC2LCN非结合性分子不与在凝胶上被固相化的凝集素相互作用,电泳快。若利用该原理,则通过电泳能够分离具有BC2LCN结合性糖链的分子和BC2LCN非结合性分子。若为本领域技术人员,则能够适当地实施凝集素电泳。
在本说明书中,“凝集素亲和层析”是利用了凝集素具有与糖链特异性地结合的性质的层析。在凝集素亲和层析中,例如,使用包含将凝集素固相化的不溶性支撑体的柱对试样进行亲和层析。在试样中的成分对凝集素具有亲和性的情况下,该成分从其他成分被分离。在本发明中,作为凝集素,例如,能够使用BC2LCN。
根据本发明,在分析了患有各种癌的患者的血清时,在使用固相化BC2LCN和已标记的BC2LCN的夹心检定中,发现了存在能够同时结合两个BC2LCN的血液成分、以及有患有癌的患者中的该血液成分在血清中的量比健康者高的倾向。
根据本发明,还分析了患有各种癌的患者的血清时,在使用BC2LCN和与SerpinA3结合的抗体的夹心检定中,还发现了BC2LCN结合性SerpinA3作为血液成分而存在、以及有患有癌的患者中的BC2LCN结合性SerpinA3在血清中的量比健康者高的倾向。
根据本发明,在进一步分析了患有各种癌的患者的血清时,在使用BC2LCN和与Gal3BP结合的抗体的夹心检定中,还发现了BC2LCN结合性Gal3BP作为血液成分而存在、以及有患有癌的患者中的BC2LCN结合性Gal3BP在血清中的量比健康者高的倾向。
根据本发明,提供一种方法,其分析从对象得到的生物样品,所述方法包括:检测从对象得到的生物样品中的选自由SerpinA3(例如,BC2LCN结合性SerpinA3)及Gal3BP(例如,BC2LCN结合性Gal3BP)组成的组中的一种以上的成分(有时称为“目标成分”)。
在本发明的方法中,可以包括准备生物样品。在本发明的方法中,还可以包括测定上述成分的量。
根据本发明,选自由SerpinA3(例如,BC2LCN结合性SerpinA3)及Gal3BP(例如,BC2LCN结合性Gal3BP)组成的组中的一种以上的成分能够使用与该成分结合的分子进行检测。
在某一方式中,在将上述一种以上的成分从除此以外的成分中分离之后,能够检测所述一种以上的成分。
例如,SerpinA3能够使用与SerpinA3结合的分子进行检测。也可以使用能够与SerpinA3同时结合的两个不同分子。若使用能够与SerpinA3同时结合的两个不同分子,则能够通过免疫色谱检定或夹心检定检测SerpinA3。SerpinA3还能够通过质谱分析进行检测。在任何情况下,都能够使用SerpinA3标准物质得到校准曲线。并且,对于所得到的验证线,能够适用与SerpinA3有关的测定值来定量SerpinA3。
并且,BC2LCN结合性SerpinA3能够使用与BC2LCN结合性糖链结合的分子和与SerpinA3结合的分子进行检测。与BC2LCN结合性糖链结合的分子可以包括使用与BC2LCN结合性糖链结合的分子将BC2LCN结合性分子与除此以外的成分进行分离,也可以包括在与BC2LCN结合性糖链结合的分子是BC2LCN的情况下,使用凝集素亲和层析或凝集素电泳将BC2LCN结合性分子与除此以外的成分进行分离。并且,也可以包括将SerpinA3与除此以外的成分进行分离。SerpinA3的分离和BC2LCN结合性成分的分离可以先实施任一个。
例如,Gal3BP能够使用与Gal3BP结合的分子进行检测。也可以使用能够与Gal3BP同时结合的两个不同分子。若使用能够与Gal3BP同时结合的两个不同分子,则能够通过免疫色谱检定或夹心检定来检测Gal3BP。Gal3BP还能够通过质谱分析进行检测。在任何情况下,都能够使用Gal3BP标准物质得到校准曲线。并且,对于所得到的验证线,能够适用与Gal3BP有关的测定值来定量Gal3BP。
并且,BC2LCN结合性Gal3BP能够使用与BC2LCN结合性糖链结合的分子和与Gal3BP结合的分子进行检测。与BC2LCN结合性糖链结合的分子可以包括使用与BC2LCN结合性糖链结合的分子将BC2LCN结合性分子与除此以外的成分进行分离,也可以包括在与BC2LCN结合性糖链结合的分子是BC2LCN的情况下,使用凝集素电泳将BC2LCN结合性分子与除此以外的成分进行分离。并且,还可以包括将Gal3BP与除此以外的成分进行分离。Gal3BP的分离和BC2LCN结合性成分的分离可以先实施任一个。
根据本发明,提供一种方法,其分析从对象得到的生物样品,所述方法包括:通过使用选自由与BC2LCN结合性糖链结合的分子、与SerpinA3结合的分子、以及与Gal3BP结合的分子组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子来实施的检定,分析包含在生物样品中的成分(有时称为“目标成分”)。
生物样品是从上述对象得到的生物样品。对象可以是患有癌或可能患有癌的对象。癌例如可以是胰腺癌。胰腺癌例如可以是选自由I、II、III及IV阶段组成的组中的阶段的胰腺癌,例如可以是I阶段的胰腺癌,例如也可以是II阶段的胰腺癌。作为生物样品,例如,可以举出组织、细胞及体液。作为体液,可以举出血液(例如,血浆及血清)、汗、唾液、尿、腹水、胸水及分泌液(例如内分泌液及外分泌液,例如胰液等消化液)。组织及细胞分别可以是例如癌或怀疑是癌的组织及细胞。组织及细胞分别包括例如癌或怀疑是癌的部分。
作为与BC2LCN结合性糖链结合的分子,可以举出与BC2LCN结合性糖链结合的抗体或其抗原结合性片段。作为与BC2LCN结合性糖链结合的分子,还可以举出与BC2LCN结合性糖链结合的适体(例如,选自由DNA及RNA组成的组中的核酸适体)。作为与BC2LCN结合性糖链结合的分子,还可以举出环状肽等中等分子。与这些BC2LCN结合性糖链结合的分子能够通过本领域技术人员公知的方法获得。例如,与BC2LCN结合性糖链结合的抗体能够从免疫了BC2LCN结合性糖链的非人类哺乳动物得到。与BC2LCN结合性糖链结合的适体能够利用对BC2LCN结合性糖链的亲和性从核酸池中获得。与BC2LCN结合性糖链结合的环状肽能够利用对BC2LCN结合性糖链的亲和性从环状肽池中获得。与BC2LCN结合性糖链结合的分子例如可以是BC2LCN。
作为与SerpinA3结合的分子,可以举出与SerpinA3结合的抗体或其抗原结合性片段。作为与SerpinA3结合的分子,还可以举出与SerpinA3结合的适体(例如,选自由DNA及RNA组成的组中的核酸适体)。作为与SerpinA3结合的分子,还可以举出环状肽等中等分子。与这些SerpinA3结合的分子能够通过本领域技术人员公知的方法获得。例如,与SerpinA3结合的抗体能够从免疫了SerpinA3的非人类哺乳动物得到。与SerpinA3结合的适体能够利用对SerpinA3的亲和性从核酸池中获得。与SerpinA3结合的环状肽能够利用对SerpinA3的亲和性从环状肽池中获得。SerpinA3有时在活体试样中与其他成分形成复合体。在本发明中,可以检测这种复合体。例如,作为与SerpinA3形成复合体的其他成分,可以举出PSA。从而,也能够使用与PSA结合的分子和与SerpinA3结合的分子来检测SerpinA3。或者,也能够使用已标记的重组PSA并利用SerpinA3与PSA结合的性质来检测SerpinA3。
作为与Gal3BP结合的分子,可以举出与Gal3BP结合的抗体或其抗原结合性片段。作为与Gal3BP结合的分子,还可以举出与Gal3BP结合的适体(例如,选自由DNA及RNA组成的组中的核酸适体)。作为与Gal3BP结合的分子,还可以举出环状肽等中等分子。与这些Gal3BP结合的分子能够通过本领域技术人员公知的方法获得。例如,与Gal3BP结合的抗体能够从免疫了Gal3BP的非人类哺乳动物得到。与Gal3BP结合的适体能够利用对Gal3BP的亲和性从核酸池中获得。与Gal3BP结合的环状肽能够利用对Gal3BP的亲和性从环状肽池中获得。Gal3BP有时在活体试样中与其他成分形成复合体。在本发明中,可以检测这种复合体。例如,作为与Gal3BP形成复合体的其他成分,可以举出半乳凝素(尤其是半乳凝素3)。从而,也能够使用与半乳凝素(尤其是半乳凝素3)结合的分子和与Gal3BP结合的分子来检测Gal3BP。或者,还能够使用已标记的重组半乳凝素(尤其是半乳凝素3)并利用Gal3BP与半乳凝素(尤其是半乳凝素3)结合的性质来检测Gal3BP。
根据本发明,提供一种方法,其分析从对象得到的生物样品(例如血液样品),所述方法包括分析生物样品(例如血液样品)中的成分(特定成分,例如血液成分)的有无或浓度,成分(例如血液成分)是能够同时结合两个BC2LCN的成分、以及选自由SerpinA3(例如,BC2LCN结合性SerpinA3)及Gal3BP(例如,BC2LCN结合性Gal3BP)组成的组中的成分(有时称为目标成分(例如,目标血液成分))。在本发明的分析方法中,在检测出上述成分中的一种、两种或全部的情况下,表示对象可能患有癌。在本发明的分析方法中,在上述成分之一的浓度大于截止值的情况下,表示对象可能患有癌。
在本发明的分析方法中,对象可以是人,例如,健康者、患有癌的患者、以及可能患有癌的患者。
在某一方式中,癌可以是选自由胰腺癌、大肠癌、直肠腺癌、膀胱癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、子宫颈癌、子宫体癌、肝细胞癌、甲状腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、食道癌、卵巢癌、胆管癌、非霍奇金淋巴瘤及慢性骨髓性白血病组成的组中的一种以上的癌。在某一方式中,癌可以是胰腺癌。在某一方式中,胰腺癌可以是选自由I阶段及II阶段组成的组中的阶段的胰腺癌。在某一方式中,胰腺癌可以是I阶段。在某一方式中,胰腺癌可以是II阶段。
在某一方式中,目标成分或目标血液成分是能够同时结合两个BC2LCN的成分。在某一方式中,目标成分或目标血液成分是BC2LCN结合性SerpinA3。在某一方式中,目标成分或目标血液成分是BC2LCN结合性Gal3BP。在这些方式中,癌可以是如上所述的癌,但是例如也可以是选自由胰腺癌、大肠癌、直肠腺癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫体癌、肝细胞癌、甲状腺癌、黑色素瘤、食道癌、胆管癌、卵巢癌、非霍奇金淋巴瘤及慢性骨髓性白血病组成的组中的一种以上的癌。在某一方式中,癌可以是胰腺癌。在某一方式中,胰腺癌可以是选自由I阶段及II阶段组成的组中的阶段的胰腺癌。在某一方式中,胰腺癌可以是I阶段。在某一方式中,胰腺癌可以是II阶段。在某一方式中,截止值例如可以是0、健康者群的目标成分(例如,目标血液成分)浓度的第1四分位值、平均值、第3四分位值或最大值、或者其中任意两个值之间的值(例如,第3四分位值或最大值、或者其间的值)。在某一方式中,截止值例如可以是0、癌患者群的目标成分(例如,目标血液成分)浓度的第1四分位值、平均值、第3四分位值或最大值、或者其中任意两个之间的值。
在某一方式中,截止值可以是与ROC曲线上的灵敏度1及特异性1的点的距离最近的点上的截止值、大于该截止值的值、或者小于该截止值的值。在某一方式中,截止值还可以是YoudenIndex为最大值的点上的截止值、大于该截止值的值、或者小于该截止值的值。
截止值能够通过灵敏度与假阳性率的平衡来确定。即使假阳性多,也想要尽可能多地检测癌患者的情况下(想要提高灵敏度的情况),截止值能够设定得较低,在想要减少假阳性(相反,灵敏度可以降低的情况)时,能够设定得较高,若为本领域技术人员,则根据检查目的能够适当地设定。
在本发明的分析方法中,在从对象得到的生物样品(例如,血液样品)中的目标成分(例如,目标血液成分)的浓度大于截止值的情况下,能够得到该对象可能患有癌的信息。从而,本发明的分析方法可以包括:在从对象得到的生物样品(例如,血液样品)中的目标成分(例如,目标血液成分)的浓度大于截止值的情况下,提供表示该对象可能患有癌的信息。
在本发明的分析方法中,在从对象得到的生物样品(例如,血液样品)中的目标成分(例如,目标血液成分)的浓度大于截止值的情况下,能够得到该对象可能患有胰腺癌的信息。从而,本发明的分析方法可以包括:在从对象得到的生物样品(例如,血液样品)中的目标成分(例如,目标血液成分)的浓度大于截止值的情况下,提供表示该对象可能患有胰腺癌的信息。
在本发明的分析方法中,即使在患有早期癌(I阶段及II阶段)的患者的生物样品(例如,血液样品)中,也可以检测目标成分(例如,目标血液成分)。从而,本发明的分析方法可以包括:在从对象得到的生物样品(例如,血液样品)中的目标成分(例如,目标血液成分)的浓度大于截止值的情况下,提供表示该对象可能患有早期癌的信息。早期癌可以是早期胰腺癌。胰腺癌的阶段分类能够由医生根据UICC TNM分类(UICC:TNM Classification ofMalignant Tumours,8th Edn.Wiley-Blackwell;2017.94-95)确定。I阶段包括1A阶段及1B阶段,II阶段包括2A阶段和2B阶段。III阶段及IV阶段分别与3阶段及4阶段的含义相同。
[表1]
表1:胰脏癌的阶段分类(UICC TMN分类、第8版)
信息的提供能够通过信息的发送或输出来进行。信息的输出可以在显示器或印刷物上进行。
本发明的分析方法还可以包括确定为对象可能患有癌。
根据本发明,提供一种治疗癌的方法,该方法包括将在本发明的分析方法中确定为可能患有癌的对象的至少一部分提供给癌疗法。作为癌疗法,可以举出选自由放射线疗法、化学疗法及外科疗法组成的组中的一种以上。癌疗法可以是标准疗法。放射线疗法可以包括对癌照射放射线。化学疗法可以包括向对象投用抗癌剂。外科疗法可以包括切除癌。作为对癌(例如,胰腺癌)的化学疗法,例如,可以举出FOLFIRINOX疗法、吉西他滨/纳布-紫杉醇(nab-paclitaxel)疗法(GnP疗法)、吉西他滨/S1疗法(GS疗法)、脂质体-伊立替康/5FU/LV疗法(Nal-IRI/FL疗法)、吉西他滨疗法及S1疗法等,能够通过这些疗法中的任一种以上来治疗对象。作为抗癌剂,例如,可以举出选自由奥沙利铂等铂制剂、伊立替康、脂质体型伊立替康、Revo Folinate、吉西他滨、纳布-紫杉醇、5-氟尿嘧啶(5-FU)及S-1组成的组中的一种以上。
根据本发明,可以提供一种医药组合物,其包含选自由上述抗癌剂组成的组中的一种以上的治疗上有效量,所述医药组合物在本发明的分析方法中用于对确定为可能患有癌的对象治疗癌。医药组合物除了医药有效成分以外,还包含药学上可接受的赋形剂。若为本领域技术人员,则能够适当地选择药学上可接受的赋形剂。
在本发明的分析方法的某一方式中,提供一种方法,其分析从对象得到的生物样品(例如,血液样品)的内部,所述方法包括:通过使用选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的抗体、以及与Gal3BP结合的抗体组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子来实施的夹心检定或免疫色谱检定,分析包括在生物样品(例如,血液样品)中的成分(例如,血液成分)。
在某一方式中,第1分子在支撑体(例如基板)上被固相化,第2分子可以被标记。在某一方式中,第1分子可以被标记,第2分子在支撑体上可以被固相化。
固相化能够利用例如直接法、聚苯乙烯标签法(WO2018/190357)、生物素-链霉亲和素法、HaloTag法、胺偶联法等使用化学键的方法、以及V5标签法等公知的固相化法。在直接法中,被固相化的捕捉分子直接与支撑体接触,由此在支撑体上被固相化。在聚苯乙烯标签法中,经由与捕捉分子融合的聚苯乙烯标签在聚苯乙烯板上被固相化。在生物素-链霉亲和素法中,用生物素修饰的捕捉分子结合于被链霉亲和素包覆的支撑体上,由此捕捉分子在支撑体上被固相化。在HaloTag法中,捕捉分子经由与捕捉分子融合的HaloTag蛋白质在被HaloTag包覆的支撑体上被固相化。在胺偶联法中,能够将形成于固相表面上的羧基进行活性酯化,并经由氨基通过化学键来固定化蛋白质等。在V5标签法中,将连结有V5标签的捕捉分子结合于被抗V5标签抗体包覆的支撑体,由此捕捉分子在支撑体上被固相化。
作为标记,在夹心检定中,能够使用基质(显色基质、荧光基质及发光基质)和在酶抗体法中使用的酶(例如,过氧化物酶、葡萄糖氧化酶及碱磷酸酶)。若为本领域技术人员,则能够利用常规方法进行标记。例如,能够共价键性地进行标记。例如,可以使生物素连结抗体与抗生物素蛋白连结标记反应而进行标记。作为基质,例如,可以举出荧光基质。作为过氧化物酶,例如,可以使用西洋辣根过氧化物酶。西洋辣根过氧化物酶通过添加显色基质、荧光基质或发光基质而产生显色、荧光或化学发光。从而,能够检测以显色、荧光或化学发光为指标标记的捕捉分子的存在。作为西洋辣根过氧化物酶的显色基质,例如,可以举出四甲基联苯胺(TMB)、邻苯二胺(OPD)、2,2’-联氮双[3-乙基苯并-噻唑啉-6-磺酸(ABTS)及Amplex(商标)Red,在存在过氧化氢的情况下,能够用于标记分子的检测。作为碱磷酸酶的发光基质,可以举出对硝基苯磷酸(pNPP)、4-甲基伞形酮磷酸酯(4-MUP)及AttoPhos(商标),能够用于捕捉分子的检测。葡萄糖氧化酶将葡萄糖进行氧化,产生葡萄糖酸和过氧化氢。过氧化氢例如能够使用过氧化氢检测用比色探针(例如,过氧化物酶)容易检测。过氧化氢例如在过氧化物酶及其显色基质存在下能够显色。
作为标记,在免疫色谱检定中能够使用色素(例如着色剂,例如胶体金)。
在某一方式中,第1分子是BC2LCN。在该方式中,作为BC2LCN,能够使用重组BC2LCN。BC2LCN可以直接固相化,或者例如在生物素标记且被链霉亲和素(或中性链亲和素)包覆的支撑体上固相化。此外,在使BC2LCN与HaloTag蛋白质融合的基础上,可以在被HaloTag配体包覆的支撑体上固相化。并且,在使聚苯乙烯标签融合于BC2LCN的基础上,可以在聚苯乙烯板上直接固相化。无论在夹心检定中,还是在免疫色谱检定中,在第1分子是BC2LCN的情况下,目标成分与作为第1分子的BC2LCN和作为第2分子的BC2LCN两者同时结合。从而,通过第1分子为BC2LCN的夹心检定及免疫色谱检定来检测的目标成分是能够与多个BC2LCN同时结合的成分。在免疫色谱检定中,在对照线上,针对BC2LCN的抗体、H-type1糖链抗原或H-type3糖链抗原等与BC2LCN结合的糖链抗原可以被固相化。
在某一方式中,第1分子是与SerpinA3结合的抗体。在该方式中,可以认为检测出具有BC2LCN结合性糖链的SerpinA3。与SerpinA3结合的抗体能够以针对SerpinA3的结合性为指标并通过常规方法进行制备。
与SerpinA3结合的抗体可以通过针对具有BC2LCN结合性糖链的SerpinA3具有结合性来进一步确认。如实施例中所用,具有BC2LCN结合性糖链的SerpinA3能够作为与固相化BC2LCN和与SerpinA3结合的抗体反应的成分进行纯化。与SerpinA3结合的抗体可以以是否与该纯化的成分结合为指标进行选择。
在第1分子是与SerpinA3结合的抗体的方式中,第1分子在支撑体(例如基板或珠子)上被固相化,第2分子可以被标记,或者第1分子可以被标记,第2分子可以在支撑体上被固相化。
在某一方式中,第1分子是与Gal3BP结合的抗体。在该方式中,可以认为检测出具有BC2LCN结合性糖链的Gal3BP。与Gal3BP结合的抗体能够以针对Gal3BP的结合性为指标并通过常规方法进行制备。
与Gal3BP结合的抗体可以通过针对具有BC2LCN结合性糖链的Gal3BP具有结合性来进一步确认。如实施例中所用,具有BC2LCN结合性糖链的Gal3BP能够作为与固相化BC2LCN和与Gal3BP结合的抗体反应的成分进行纯化。与Gal3BP结合的抗体可以以是否与该纯化的成分结合为指标进行选择。
在第1分子是与Gal3BP结合的抗体的方式中,第1分子在支撑体(例如,基板或珠子)上被固相化,第2分子可以被标记,或者第1分子可以被标记,第2分子可以在支撑体上被固相化。
根据本发明,提供一种方法,该方法为预测对象是否患有癌的方法、得到对象是否患有癌的预备信息的方法、判定对象是否患有癌的方法、用于预测对象是否患有癌的方法或预备方法、在对象中检测癌的方法、在对象中检测癌细胞的方法、在对象中检测癌的生物标志物的方法(生物标志物是能够同时结合两个BC2LCN的成分、选自由BC2LCN结合性SerpinA3、及BC2LCN结合性Gal3BP组成的组中的成分)、或者分析对象是否患有癌的方法,
该方法包括:分析生物样品(例如,血液样品)中的成分(例如,血液成分)的有无或浓度,成分(例如,血液成分)是否为能够同时结合两个BC2LCN的成分、选自由BC2LCN结合性SerpinA3及BC2LCN结合性Gal3BP组成的组中的成分;或通过选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的抗体、以及与Gal3BP结合的抗体组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子来实施的夹心检定或免疫色谱检定,分析包含在生物样品(例如,血液样品)中的成分(例如,血液成分)。
根据本发明,提供一种方法,该方法为在对象的生物样品(例如,血液样品)中检测成分(例如,血液成分)的方法,成分(例如,血液成分)是能够同时结合两个BC2LCN的成分、选自由BC2LCN结合性SerpinA3及BC2LCN结合性Gal3BP组成的组中的成分。该方法可以包括:使选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的抗体、以及与Gal3BP结合的抗体组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子与生物样品(例如,血液样品)接触,其结果,检测所形成的成分(例如,血液成分)、第1分子及第2分子的复合体。该方法可以包括:通过使用选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的抗体、以及与Gal3BP结合的抗体组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子来实施的夹心检定或免疫色谱检定来检测所述成分(例如,血液成分)。
根据本发明,提供一种夹心检定用或免疫色谱检定用试剂盒,其包含选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的抗体、以及与Gal3BP结合的抗体组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子,能够使用第1分子和第2分子来测定对象的生物样品(例如,血液样品)中的糖蛋白的量。在本发明的试剂盒中,在某一方式中,第1分子在基板或条带上被固相化,第2分子被标记。在本发明的试剂盒中,在某一方式中,第1分子被标记,第2分子在基板或条带上被固相化。在某一方式中,第1分子被标记,第2分子包含在凝胶中,或者在凝胶上被固相化。在标记是用于酶抗体法的酶的情况下,本发明的试剂盒还可以包含显色基质。在生物样品是血液样品的情况下,成分是血液成分。
在本发明的试剂盒的某一方式中,第1分子是BC2LCN。在本发明的某一方式中,第1分子是与SerpinA3结合的抗体。在本发明的某一方式中,第1分子是与Gal3BP结合的抗体。
本发明的试剂盒能够用于目标分子的检测或癌的检测、判定、预测,或者诊断的用途。
根据本发明,提供选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的抗体、以及与Gal3BP结合的抗体组成的组中的第1分子与作为BC2LCN的第2分子的组合。本发明的组合能够用于在样品中(例如,生物样品或生物样品(例如,血液样品))检测能够同时结合两个BC2LCN的成分、以及选自由BC2LCN结合性SerpinA3及BC2LCN结合性Gal3BP组成的组中的成分。在上述组合中,第1分子及第2分子中的一个可以在支撑体上被固相化,并且另一个可以被标记以用于检测。上述组合能够用于使用生物样品(例如,血液样品)诊断癌。根据本发明,提供一种包含上述组合的用于使用生物样品(例如,血液样品)诊断癌的试剂盒。上述组合可以是夹心检定用试剂盒、免疫色谱检定用试剂盒、凝集素电泳用试剂盒、质谱分析用试剂盒、凝集素亲和层析用试剂盒或μTAS用试剂盒。凝集素电泳用试剂盒能够包括包含凝集素的凝胶。凝集素亲和层析用试剂盒能够包括包含凝集素被固相化的支撑体的柱。在这些试剂盒中,作为标准物质,还可以包含纯化的SerpinA3、纯化的BC2LCN结合性SerpinA3、纯化的Gal3BP、或纯化的BC2LCN结合性Gal3BP等。μTAS用试剂盒可以包括微流控芯片。微流控芯片具有检测部,在检测部中,将选自由SerpinA3、BC2LCN结合性SerpinA3、Gal3BP及BC2LCN结合性Gal3BP、以及包括这些的蛋白质复合体组成的组中的一种以上结合的分子能够被固相化。
本发明中的方法,其分析从对象得到的生物样品,所述方法包括:通过使用选自由与BC2LCN结合性糖链结合的分子、与SerpinA3结合的分子、以及与Gal3BP结合的分子组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子来实施的检定,分析包含在生物样品中的成分(有时称为“目标成分”,在所述方法中,通过检定而得到的信号因体内的癌减少(例如,癌被切除)而可以减少。从而,在本发明的方法中,检定信号可以表示体内癌的量。并且,在上述方法中,通过检定而得到的信号因复发而可以增大。从而,在本发明的方法中,信号增大可以表示癌的复发。
根据本发明,提供一种方法,该方法包括从获得自对象的生物样品中分离能够与两个BC2LCN同时结合的成分、以及选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分。根据本发明,提供一种方法,该方法还包括从获得自对象的生物样品中检测能够与两个BC2LCN同时结合的成分、以及选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分。根据本发明,还提供一种方法,其分析从对象得到的生物样品,所述方法包括:分离从对象得到的生物样品中的能够与两个BC2LCN同时结合的成分、以及选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分。
分离意味着从除此以外的成分的至少一种以上的成分中分离目标成分。分离可以包括目标成分的浓缩、富集及纯化。浓缩意味着提高浓度。富集及纯化意味着相对于其他成分选择性地提高目标成分的存在比率。富集及纯化可以伴随目标成分的浓缩。分离还可以包括与固相化的分子结合。在该情况下,通过与固相化的分子结合,从未结合的其他成分中分离。分离除了目标成分吸附到固相化表面以外,还可以包括去除未吸附成分。未吸附成分的去除能够通过清洗所述表面而进行。未吸附成分的去除还能够通过去除液相而进行。在固相存在于珠子表面上的情况下,未吸附成分的去除还可以通过回收珠子而进行。在该方式中,本发明还可以包括测定分离出的成分的量。测定能够由各种本领域技术人员通过公知的检定来进行,由此能够得到检定信号。所测定的量能够与成为指标的其他量(例如,截止值)进行比较。截止值可以如上述说明。
在本发明的方法中,在所测定的量比成为指标的其他量多的情况下,可以表示生物样品的来源的对象可能患有癌。从而,本发明的方法可以是检测癌的方法、检测癌细胞的方法、诊断为癌的方法、用于诊断为癌的非诊断方法、得到用于诊断为癌的预备信息的方法、预测为癌的方法、或用于预测为癌的非诊断方法。在本发明的方法中,通过检定而得到的信号因体内的癌减少(例如,癌被切除)而可以减少。从而,在本发明的方法中,检定信号可以表示体内癌的量。并且,在上述方法中,通过检定而得到的信号因复发而可以增大。从而,在本发明的方法中,信号增大可以表示癌的复发。本发明的方法能够对在不同时刻回收的两种以上的生物样品实施。从而,在某一方式中,生物样品可以是在不同时刻回收的两种以上的生物样品。在某一方式中,本发明的方法还可以包括将通过检定而得到的信号(对应于所测定的量)与该不同时刻可以在回收的另一样品中所得到的信号进行比较。由此,本发明能够用于监测患者的癌的治疗过程和/或复发过程。
本发明的方法可以与现有方法组合而实施。例如,作为现有方法,已知有包括测定体液样品中的CA19-9的量的方法。CA19-9在患有癌的体液样品中提高浓度。并且,若癌的量增加,则浓度提高,若癌的量减少,则其浓度降低。如此,通过组合CA19-9和本发明的方法,可以提高通过分析体液样品而检测癌的精度和/或特异性。CA19-9可以成为胰腺癌尤其III阶段及IV阶段等的胰腺癌的指标。从而,本发明还可以包括测定生物样品中的CA19-9的浓度。
选自由被测定的SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分以具有BC2LCN结合性糖链修饰为指标进一步分析。选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分是否具有BC2LCN结合性糖链修饰,如上所述,能够使用与该糖修饰(糖链)结合的因子进行确定。或者,选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分可以在使用与该糖修饰(糖链)结合的因子分离之后被检测。选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分可以在使用与SerpinA3结合的分子及与Gal3BP结合的分子分离之后被检测。
实施例
实施例1:使用rBC2LCN检测癌患者的血清中的糖蛋白
通过基于rBC2LCN的夹心检定检测到患有各种癌的患者的血清中的糖蛋白。
首先,将生物素化rBC2LCN用PBS稀释为0.3μg/mL,以50μL/well添加到抗生物素蛋白板(无粘连型)(Sumitomo Bakelite Co.,Ltd.、BS-X7603)中,在室温下孵化了1小时。在将所得到的rBC2LCN固相化板用PBS/0.1%Tween20清洗5次之后,使其与用PBS稀释100倍的各种癌患者的稀释血清50μL/well(n=3)反应。在室温反应1小时之后,用PBS/0.1%Tween20清洗5次板,将HRP标记rBC2LCN(1μg/mL)加入50μL/well,使其在室温反应了1小时。在以PBS/0.1%Tween20清洗5次之后,将TMB solution(FUJIFILM Wako Pure ChemicalCorporation)加入50μL/well,使其在室温显色30分钟,使1NHCl反应50μL/well以停止显色反应,测定出OD450/620。示出所得到数值的平均值。在基于该rBC2LCN的夹心检定中,OD450/620的值越高,意味着与rBC2LCN结合的糖蛋白越大量存在。
结果如图1所示。如图1所示,明确了通过基于rBC2LCN的夹心检定而检测的糖蛋白在胰腺癌患者、结肠癌患者、膀胱癌患者、乳癌患者、非霍奇金淋巴瘤患者、子宮体癌患者、卵巣癌患者及慢性骨髓性白血病患者中,具有比在健康者群中观察到的最大值高的浓度。
所检测出的糖蛋白必须与固相化的rBC2LCN和检测用rBC2LCN两个分子同时结合。由本实施例的结果明确了,能够同时与两个分子的rBC2LCN结合的成分(例如,血液成分)在癌患者中广泛地具有比健康者高的浓度,从而对成分(例如,血液成分)分析是有用的。
实施例2:由rBC2LCN识别的糖蛋白的鉴定
在本实施例中,用rBC2LCN结合珠子使胰腺癌患者及健康者的血清中的糖蛋白分别沉淀,用rBC2LCN溶出沉淀的糖蛋白,将所得到的溶出液进行电泳,通过质谱分析鉴定了胰腺癌固有的糖蛋白。
使生物素化rBC2LCN与DynabeadsM280 Streptavidin(Invitrogen)结合。然后,与胰腺癌及健康者血清在4℃下孵化一夜,清洗后添加0.2M岩藻糖,通过在室温孵化1小时而溶出与rBC2LCN结合的糖蛋白。将所得到的溶出液进行电泳,在转印到PVDF膜之后,用HRP标记rBC2LCN进行了印迹。其结果,在健康者血清中,在rBC2LCN印迹上未发现反应性,然而在胰腺癌血清中,在75-150kDa附近观察到反应性。因此,从电泳而银染的凝胶中切出由100-150kDa红色包围的部分。从切出的各凝胶片,经过胰蛋白酶加水分解而得到肽混合物。将肽混合物提供给LC-MS/MS,获得MS/MS数据。将MS/MS数据的氨基酸序列数据库检索结果作为肽鉴定列表而输出。其结果,获得SerpinA3和Gal3BP作为由rBC2LCN在癌患者中检测的候选蛋白质。
因此,从胰腺癌及健康者血清中将对rBC2LCN固定化珠子显示出结合性的糖蛋白进行电泳,使用针对SerpinA3的抗体及针对Gal3BP的抗体和HRP标记2次抗体进行了蛋白免疫印迹。其结果,如图3所示,与健康者相比,在胰腺癌患者血清中,SerpinA3及Gal3BP明显更强烈地检测到。SerpinA3和Gal3BP作为通过rBC2LCN吸附到珠子上的蛋白质而得到,因此可知这些糖蛋白对rBC2LCN具有反应性。
从患者得到正常胰脏组织和胰腺癌组织,提供于免疫组织化学染色。免疫组织化学染色根据常规方法进行。作为一次抗体,对于SerpinA3染色,使用抗SerpinA3抗体(R&DSystems制造,产品编号:MAB12945、稀释倍率:200倍),对于Gal3BP染色,使用抗Gal3BP抗体(R&D Systems制造,产品编号:AF2226、1μg/mL)。并且,作为二次抗体,分别使用生物素化抗小鼠IgG(NICHIREI CORPORATION.制造、产品编号:424021、稀释倍率:原液)、及生物素化抗山羊IgG(NICHIREI CORPORATION.制造、产品编号:414011、稀释倍率:原液)。结果如图9所示。如图9所示,明确了在正常胰脏组织中几乎未发现染色图像,相对于此,在胰腺癌组织中,SerpinA3和Gal3BP在胰管中强烈地显现。
表明在血液中检测的SerpinA3及Gal3BP源自胰腺癌组织的胰管。
实施例3:使用rBC2LCN和SerpinA3抗体或Gal3BP抗体在夹心检定中分析癌患者的
血清
因此,构建rBC2LCN和SerpinA3抗体的夹心检定,对健康者及包括胰腺癌的各种癌患者的血清进行了分析。将生物素化rBC2LCN用PBS稀释为0.3μg/mL,以50μL/well添加到抗生物素蛋白板(无粘连型)(Sumitomo Bakelite Co.,Ltd.、BS-X7603)中,在室温下孵化了1小时。在将所得到的rBC2LCN固相化板用PBS/0.1%Tween20清洗5次之后,使其与用PBS稀释100倍的各种癌患者的稀释血清50μL/well(n=3)反应。在室温反应1小时后,用PBS/0.1%Tween20清洗5次板,将HRP标记SerpinA3抗体(1μg/mL;R&D Systems,Cat#:AF1295)加入50μL/well,使其在室温反应了1小时。在以PBS/0.1%Tween20清洗5次之后,将TMB solution(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)加入50μL/well,使其在室温显色30分钟,使1N HCl反应50μL/well以停止显色反应,测定出OD450/620。示出所得到数值的平均值。
结果如图4所示。如图4所示,通过rBC2LCN和SerpinA3抗体的夹心检定来检测的糖蛋白(即,具有与BC2LCN凝集素结合的特定糖链的SerpinA3)在健康者中几乎未能检测到,另一方面,在结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、非霍奇金淋巴瘤、子宫颈癌、直肠腺癌、肝细胞癌、甲状腺癌、前列腺癌、子宫体癌、黑色素瘤、食道癌、卵巢癌、胆管癌及慢性骨髓性白血病所有癌(所有检查的癌)中强烈地检测到。
接着,构建rBC2LCN和Gal3BP抗体的夹心检定,对健康者、包括胰腺癌的各种癌患者的血清进行了分析。将生物素化rBC2LCN用PBS稀释为0.3μg/mL,以50μL/well添加到抗生物素蛋白板(无粘连型)(Sumitomo Bakelite Co.,Ltd.、BS-X7603)中,在室温下孵化了1小时。在将所得到的rBC2LCN固相化板用PBS/0.1%Tween20清洗5次之后,使其与用PBS稀释100倍的各种癌患者的稀释血清50μL/well(n=3)反应。在室温反应1小时之后,用PBS/0.1%Tween20清洗5次,将HRP标记Gal3BP抗体(1μg/mL;R&D Systems,Cat#:AF2226)加入50μL/well,使其在室温反应了1小时。在以PBS/0.1%Tween20清洗5次之后,将TMB solution(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)加入50μL/well,使其在室温显色30分钟,使1N HCl反应50μL/well以停止显色反应,测定出OD450/620。由所得到数值的平均值创建了图表。示出所得到数值的平均值。
结果如图5所示。如图5所示,通过rBC2LCN和Gal3BP抗体的夹心检定来检测的糖蛋白(即,具有与BC2LCN凝集素结合的特定糖链的Gal3BP)在健康者中几乎未能检测到,另一方面,在结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、非霍奇金淋巴瘤、子宫颈癌、直肠腺癌、肝细胞癌、甲状腺癌、前列腺癌、子宫体癌、黑色素瘤、食道癌、卵巢癌、胆管癌及慢性骨髓性白血病所有癌(所有检查的癌)中强烈地检测到。
并且,在图10中,对健康者、胰腺炎患者及胰腺癌患者分别进行了比较。其结果,在rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定、rBC2LCN与抗SerpinA3抗体的夹心检定、与rBC2LCN及抗Gal3BP抗体的夹心检定、抗SerpinA3抗体与抗SerpinA3抗体的夹心检定中,与健康者或胰腺炎患者相比,在胰腺癌患者中检查出强烈的信号。由此,表明了通过这些检定从健康者或胰腺炎患者中能够区分胰腺癌患者。
由此,明确了在癌患者的血清中广泛地存在具有与BC2LCN凝集素结合的特定糖链的SerpinA3、以及具有与BC2LCN凝集素结合的特定糖链的Gal3BP。
此外,使用其他健康者的血清受检体及胰腺癌患者的血清受检体,通过上述记载的方法实施了基于rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定、基于rBC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、基于rBC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定、以及基于抗SerpinA3抗体(R&D Systems,Cat#:AF1295)和抗SerpinA3抗体(R&D Systems,Cat#:AF1295)的夹心检定。
结果如图6所示。如图6所示,在基于rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定、基于rBC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、以及基于rBC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定中,与健康者的血清相比,在胰腺癌患者的血清中,在夹心检定中得到更高的测定强度。相对于此,在基于抗SerpinA3抗体和抗SerpinA3抗体的夹心检定中,在健康者和胰腺癌患者的血清中测定强度相等。这是表明如下内容的结果,即,无论在健康者血清中,还是在胰腺癌患者的血清中,都存在SerpinA3,但是在胰腺癌患者中,SerpinA3特异性地受到通过rBC2LCN可识别的糖的修饰。
分析上述得到的结果,以特异性(Specificity)为横轴,以灵敏度(Sensitivity)为纵轴而绘制了ROC曲线。结果如图7所示。
如图7的左上面板所示,在基于rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定(rBC2-rBC2)中,ROC曲线下面积(AUC)为0.679,该ROC曲线中的截止值(由与灵敏度1、特异性1的最短距离处的ROC曲线状点求出)为0.329,此时的特异性为0.820,灵敏度为0.575。
如图7的右上面板所示,在基于rBC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定(rBC2-SerpinA3)中,ROC曲线下面积(AUC)为0.892,该ROC曲线中的截止值(由与灵敏度1、特异性1的最短距离处的ROC曲线状点求出)为0.014,此时的特异性为0.840,灵敏度为0.825。
如图7的左下面板所示,在基于rBC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定(rBC2-Gal3BP)中,ROC曲线下面积(AUC)为0.743,该ROC曲线中的截止值(由与灵敏度1、特异性1的最短距离处的ROC曲线状点求出)为0.01,此时的特异性为0.900,灵敏度为0.575。
此外,如图7的右下面板所示,在基于抗SerpinA3抗体和抗SerpinA3抗体的夹心检定(SerpinA3-SerpinA3)中,ROC曲线下面积(AUC)为0.718,该ROC曲线中的截止值(由与灵敏度1、特异性1的最短距离处的ROC曲线状点求出)为1.056,此时的特异性为0.8,灵敏度为0.65。
由上述结果,明确了基于rBC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定(rBC2-SerpinA3)具有最优异的精度,基于rBC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定(rBC2-Gal3BP)显示出最优异的特异性。并且,明确了在基于rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定(rBC2-rBC2)、或基于抗SerpinA3抗体和抗SerpinA3抗体的夹心检定(SerpinA3-SerpinA3)中,显示出具有一定有用性的精度。
此外,创建ROC曲线并研究了能否区分健康者(n=49)及胰腺炎患者(n=9)与胰腺癌患者(n=85)。于是,如图11所示,明确了基于rBC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定(rBC2-SerpinA3)、以及基于rBC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定(rBC2-Gal3BP)显示出最优异的AUC。并且,明确了在基于rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定(rBC2-rBC2)、或基于抗SerpinA3抗体和抗SerpinA3抗体的夹心检定(SerpinA3-SerpinA3)中具有一定的有用性。
实施例5:各阶段胰腺癌患者的血清分析
在本实施例中,通过夹心检定评价了患有1A阶段至4阶段的各种胰腺癌的患者的血清受检体。
癌的阶段由医生根据UICC TNM分类(UICC:TNM Classification of MalignantTumours,8th Edn.Wiley-Blackwell;2017.94-95)确定。如实施例1及3的记载,将癌患者的血清分别提供于基于rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定、基于rBC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、基于rBC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定、以及基于抗SerpinA3抗体和抗SerpinA3抗体的夹心检定。结果如图8A~8D所示。
如图8A~8C所示,在基于rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定、基于rBC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、以及基于rBC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定中,在1阶段至4阶段的所有阶段中发现了显示出高的测定强度的样品。
如图8D所示,在基于抗SerpinA3抗体和抗SerpinA3抗体的夹心检定中,与图6所示同样地,在所有样品中显示出高的测定强度。
在I阶段的胰腺癌患者(n=9)与健康者(n=49)之间创建了ROC曲线。结果如图12所示。如图12所示,在任何夹心检定中,都能够良好地检测I阶段的胰腺癌患者。在II阶段的胰腺癌患者(n=51)与健康者(n=49)之间创建了ROC曲线。结果如图13所示。如图13所示,在任何夹心检定中,都能够良好地检测II阶段的胰腺癌患者。在III阶段的胰腺癌患者(n=8)与健康者(n=49)之间创建了ROC曲线。结果如图14所示。如图14所示,在所示的任何夹心检定中,都能够良好地检测III阶段的胰腺癌患者。创建了在IV阶段的胰腺癌患者(n=17)与健康者(n=49)之间的ROC曲线。结果如图15所示。如图15所示,在所示的任何夹心检定中,都能够良好地检测IV阶段的胰腺癌患者。
对胰腺癌患者实施了胰腺癌切除手术。关于手术前和手术后的血液样品(n=38),通过夹心检定进行了分析。rBC2LCN与抗SerpinA3抗体的夹心检定的结果示于图16中,rBC2LCN与抗Gal3BP抗体的夹心检定的结果示于图17中,CA19-9检定的结果示于图18中。在各图中,30POD意味着手术后30天,3m意味着手术后3个月。如图16~18所示,各夹心检定的信号通过癌切除术而降低。从而,能够理解在这些检定中癌切除的结果影响到血液中的成分含量。
此外,对复发患者的血液样品进行了经时检定。检定为使用BC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定。结果如图19所示。如图19所示,在患者A中,手术后检定信号随时间的经过而降低。然而,若分析复发患者A的血液,则信号明显增大。由此,表明本发明的检定系统能够用于检测复发。
由此,在基于rBC2LCN和rBC2LCN的夹心检定、基于rBC2LCN和抗SerpinA3抗体的夹心检定、以及基于rBC2LCN和抗Gal3BP抗体的夹心检定中,通过适当地设定截止值,能够大范围地检测1阶段及2阶段等早期胰腺癌至4阶段胰腺癌。
Claims (23)
1.一种方法,其分析从对象得到的生物样品,所述方法包括:
通过使用选自由与BC2LCN结合性糖链结合的分子、与SerpinA3结合的分子、以及与Gal3BP结合的分子组成的组中的第1分子和作为BC2LCN的第2分子来实施的检定,分析包含在生物样品中的成分。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,
第1分子是与SerpinA3结合的抗体。
3.根据权利要求1所述的方法,其中,
第1分子是与Gal3BP结合的抗体。
4.根据权利要求1所述的方法,其中,
第1分子是BC2LCN。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中,
对象患有癌或有其可能性。
6.根据权利要求5所述的方法,其中,
对象患有胰腺癌或有其可能性。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,
对象患有1阶段或2阶段的胰腺癌或有其可能性。
8.一种夹心检定用试剂盒、免疫色谱检定用试剂盒、凝集素电泳用试剂盒、质谱分析用试剂盒、凝集素亲和层析用试剂盒或μTAS用试剂盒,其包含选自由BC2LCN、与SerpinA3结合的分子、以及与Gal3BP结合的分子组成的组中的第1分子和作为与BC2LCN结合性糖链结合的分子的第2分子,并能够使用第1分子和第2分子来测定对象的生物样品中的糖蛋白的量。
9.根据权利要求8所述的试剂盒,其中,
第1分子是与SerpinA3结合的抗体,糖蛋白中的蛋白质部分是SerpinA3。
10.根据权利要求8所述的试剂盒,其中,
第1分子是与Gal3BP结合的抗体,糖蛋白中的蛋白质部分是Gal3BP。
11.根据权利要求8所述的试剂盒,其包含:
第2分子,其为固相化BC2LCN;及
已标记的第1分子,选自由已标记的BC2LCN、已标记的与SerpinA3结合的抗体、以及已标记的与Gal3BP结合的抗体组成的组。
12.根据权利要求8至11中任一项所述的试剂盒,其用于检测癌。
13.根据权利要求12所述的试剂盒,其中,
癌是胰腺癌。
14.根据权利要求13所述的试剂盒,其中,
癌是1阶段或2阶段的胰腺癌。
15.一种方法,其预测对象是否患有癌,
所述方法包括实施权利要求1至7中任一项所述的方法。
16.一种方法,其在从对象得到的生物样品中检测特定成分,
特定成分是能够同时结合两个BC2LCN的成分、选自由BC2LCN结合性SerpinA3及BC2LCN结合性Gal3BP组成的组中的成分。
17.一种方法,其包括从获得自对象的生物样品中分离能够与两个BC2LC N同时结合的成分、选自由SerpinA3及Gal3BP组成的组中的一种以上的成分。
18.根据权利要求17所述的方法,其中,
对象是患有胰腺癌或可能患有胰腺癌的对象。
19.根据权利要求17所述的方法,其中,
胰腺癌是I阶段或II阶段的胰腺癌。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的方法,其还包括测定分离出的成分的量。
21.根据权利要求20所述的方法,其还包括比较截止值与所述测定出的成分的量。
22.根据权利要求21所述的方法,其中,
截止值是与健康者的所述测定出的成分对应的成分的量的平均值以上的值,并且是与胰腺癌患者的所述测定出的成分对应的成分的量的平均值以下的值。
23.根据权利要求17至22中任一项所述的方法,其中,
所述成分是选自由BC2LCN结合性SerpinA3及BC2LCN结合性Gal3BP组成的组中的成分。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019-187197 | 2019-10-11 | ||
JP2019187197 | 2019-10-11 | ||
PCT/JP2020/038300 WO2021070934A1 (ja) | 2019-10-11 | 2020-10-09 | がんの検査方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114556101A true CN114556101A (zh) | 2022-05-27 |
Family
ID=75438180
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202080071169.XA Pending CN114556101A (zh) | 2019-10-11 | 2020-10-09 | 癌的检查方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220236275A1 (zh) |
EP (1) | EP4043881A4 (zh) |
JP (1) | JPWO2021070934A1 (zh) |
KR (1) | KR20220079855A (zh) |
CN (1) | CN114556101A (zh) |
WO (1) | WO2021070934A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022182394A (ja) * | 2021-05-28 | 2022-12-08 | 独立行政法人国立病院機構 | 抗原固相化デバイス |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103597353B (zh) | 2011-06-15 | 2016-03-02 | 三洋化成工业株式会社 | 使用磁性二氧化硅颗粒的测定方法和该测定方法用试剂 |
EP2957630B1 (en) | 2013-02-14 | 2018-11-14 | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology | Undifferentiated cell elimination method |
JP6795813B2 (ja) | 2015-10-05 | 2020-12-02 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | がん細胞の検出方法、がん細胞内に物質を導入するための試薬、及びがん治療用組成物 |
US11078254B2 (en) | 2017-04-11 | 2021-08-03 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Method for immobilizing lectin |
JP7386647B2 (ja) | 2018-08-13 | 2023-11-27 | 東ソー株式会社 | 糖鎖への親和性が向上したフコース結合性タンパク質、およびその製造方法 |
-
2020
- 2020-10-09 KR KR1020227012018A patent/KR20220079855A/ko unknown
- 2020-10-09 CN CN202080071169.XA patent/CN114556101A/zh active Pending
- 2020-10-09 JP JP2021551720A patent/JPWO2021070934A1/ja active Pending
- 2020-10-09 EP EP20873535.7A patent/EP4043881A4/en active Pending
- 2020-10-09 WO PCT/JP2020/038300 patent/WO2021070934A1/ja unknown
-
2022
- 2022-04-11 US US17/717,764 patent/US20220236275A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20220236275A1 (en) | 2022-07-28 |
JPWO2021070934A1 (zh) | 2021-04-15 |
EP4043881A1 (en) | 2022-08-17 |
WO2021070934A1 (ja) | 2021-04-15 |
KR20220079855A (ko) | 2022-06-14 |
EP4043881A4 (en) | 2022-11-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5787389B2 (ja) | 肝内胆管がんの検出、判別方法 | |
WO2022083673A1 (zh) | 食管癌的生物标志物及其应用 | |
WO2022063156A1 (zh) | 乳腺癌的生物标志物及其应用 | |
WO2022083603A1 (zh) | 半胱氨酸蛋白酶抑制剂与Cathepsin复合物作为肿瘤诊断标志物的应用 | |
JP7490007B2 (ja) | レクチンベースのがんの診断 | |
EP1678503A2 (en) | Specific method for cancer detection | |
US20030138860A1 (en) | Cancer detection methods and reagents | |
US20220236275A1 (en) | Cancer test method | |
WO2016195051A1 (ja) | 膵がんを診断するための血漿バイオマーカーパネル | |
KR101144324B1 (ko) | 대장암 예후진단용 단백질 마커 디펜신?5와 rod1단백질의 조합 및 이들 각각에 대한 항체를 포함하는 대장암 예후진단키트 | |
CN115372616A (zh) | 胃癌相关的生物标志物及其应用 | |
WO2020184550A1 (ja) | がんマーカーおよびその用途 | |
US20230375550A1 (en) | Method for diagnosing breast cancer by using biomarker | |
CN115877006B (zh) | 卵巢癌相关的生物标志物及其应用 | |
WO2021246153A1 (ja) | 膵臓がんの検出方法及び検出試薬 | |
WO2022186318A1 (ja) | がん検出方法、がん検査方法、及びこれらに用いるキット | |
CN113267626B (zh) | 一种用于高危人群贲门腺癌早期筛查的试纸条 | |
KR102325742B1 (ko) | 암의 진단용 조성물 | |
US20230400466A1 (en) | Methods and systems for risk stratification and management of bladder cancer | |
US20230305012A1 (en) | Cancer antigen for early cancer detection | |
JP2024066398A (ja) | がんの検査方法、試薬、キット及び装置 | |
KR20210109464A (ko) | 암의 진단용 조성물 | |
KR20240068432A (ko) | 혈액 내 단백질 바이오마커를 포함하는 암 진단용 키트 | |
JP2011107064A (ja) | クラスリン重鎖に対する自己抗体の免疫測定方法、それに用いるキット、及びそれを用いた癌判定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |