CN114544801B - 一种azabicyclo[3.1.0]hexane的GC-FID检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种(1R,5S)‑6,6‑dimethyl‑3‑azabicyclo[3.1.0]hexane的GC‑FID检测方法，采用CP‑Volamine色谱柱，直接进样，程序升温将(1R,5S)‑6,6‑dimethyl‑3‑azabicyclo[3.1.0]Hexane与其中间体进行有效分离，快速检测及其控制已知杂质含量；本发明采用百分面积法报告其结果，能简单、快速、准确的进行测定，控制方式简单易操作，提高了工作效率。

Description

一种azabicyclo[3.1.0]hexane的GC-FID检测方法
技术领域
本发明属于气相色谱法(GC-FID)检测技术领域，具体涉及一种(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane及其已知杂质含量的GC-FID检测方法。
背景技术
(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane的分子式为C7H9NO2，其结构为
Figure BDA0003479744480000011
在(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane制备过程中需要控制的已知杂质结构式为
Figure BDA0003479744480000012
分子式为C7H9NO2，化学名为6,6-Dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane-2,4-dione。
在定向合成终产品API的过程中，目标化合物(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]Hexane是极其关键的一步中间体，控制其自身与其可能残留的已知杂质6,6-Dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane-2,4-dione的含量对API合成过程中的质量控制有重要意义。
发明内容
针对现有技术的上述需求，本发明提供一种气相色谱检测方法，用于检测(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane与其已知杂质，从而测定(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane的含量。
本发明专利解决其技术问题所采用的技术方案是：一种(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane的GC-FID检测方法，包括以下步骤：
(1)，取定向合成的(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane用适量甲醇溶解，配制成浓度约为1mg/mL的样品溶液；
(2)，进样方式选用直接进样，升温程序为起始温度40℃保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃后保持10min，设置进样口温度为280℃，设置流速2mL/min，恒流模式下检测器温度260℃；
(3)，采用CP-Volamine色谱柱，步骤(1)的样品溶液的分流比为5：1，进样体积为2μL进行检测，记录色谱图，按照百分面积法检测杂质含量。
进一步，所述的色谱柱为Agilent CP-Volamine，30m×0.320mm。
进一步，所述的色谱柱是固定相表面涂敷了100％甲基聚硅氧烷的色谱柱。采用多功能去活技术生成对称峰。
进一步，所述的气相色谱仪为Agilent GC 8860with FID1A。
本发明的有益效果是：本发明采用分析挥发性胺类最稳定的CP-Volamine色谱柱，能有效分离挥发性胺；本发明进样体积选用2μL，分流比选用5:1，可根据样品浓度大小适当调整，流速选择2mL/min；本发明解决了(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane与已知杂质的含量检测问题，主峰峰型对称，出峰时间适宜；采用百分面积法报告结果，同时进行了专属性、溶液稳定性、检测限、工作曲线的测定，以保证该方法检测的准确可靠性。
附图说明
图1为本发明对比例1的CP-Sil8CB分离-GC图；
图2为本发明对比例2的CP-Volamine分离-GC图；
图3和图4为RS溶液分离-GC图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的说明。
申请人发现，采用CP-Volamine色谱柱，直接进样，程序升温，可以将(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane与其中间体进行有效分离，从而测定(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane的含量。
本发明的GC-FID分析检测方法，可按照以下方法实现：
(1)，取定向合成的(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane适量，用甲醇溶解，配制成浓度约1mg/mL的样品溶液。
(2)，选用直接进样，设置进样口温度为280℃，进样体积为2μL，分流比为5:1。恒流模式的流速为2mL/min，检测器温度为260℃。
(3)，设置程序升温：起始温度40℃保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃后保持10min。
对比例1
仪器与条件：
气相色谱仪：Agilent GC 8860with FID1A；
色谱柱：CP-Sil 8CB,30m,0.32mm，1μm；
恒流流速：6.5mL/min；
分流比：不分流；
检测器温度：300℃；
前进样口温度：280℃；
进样体积：0.2μL；
升温程序：起始温度50℃保持0.5min，再以15℃/min的速率升温至275℃后保持6min。
实验步骤：
取定向合成的(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane适量，用甲醇溶解，配制成浓度约1mg/mL的样品溶液。按上述条件进行气相色谱分析，记录结果，结果见附图1。
图1中1号峰(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane，2号峰为已知杂质峰。从图1中可看出，该条件下，主峰拖尾明显，且出峰时间过早。
实施例2
仪器与条件：
气相色谱仪：Agilent GC 8860with FID1A；
色谱柱：Agilent CP-Volamine,30m,0.320mm；
恒流流速：2mL/min；
分流比：5：1；
检测器温度：260℃；
前进样口温度：280℃；
进样体积：2μL；
升温程序：起始温度40℃保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃后保持10min；计算方法：百分面积法。
实验步骤：
取定向合成的(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane适量甲醇溶解,配制成1mL甲醇含1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane约1mg的样品溶液。按上述条件进行气相色谱分析，记录结果，结果见附图2。
图2中1号峰(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane，2号峰为其已知杂质的峰。从图中可看出，该条件下，主峰峰型对称，出峰时间适宜。
专属性、溶液稳定性、定量限、工作曲线的检查。
(1)专属性的检查：
取定向合成的(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane及其已知杂质适量，用甲醇溶解配制成RS溶液。对RS溶液进行测定，考察了分离度，结果如下表(专属性考察)和附图3附图4所示，图3为空白。
Figure BDA0003479744480000051
图4中1号峰1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane，2号峰为其已知杂质的峰。该方法分离度良好。
(2)溶液稳定性的测定：对SPL溶液分别在0h和1h测定，考察溶液稳定性，结果如下表(溶液稳定性考察)所示，样品溶液在室温下至少1h内稳定。
Figure BDA0003479744480000052
(3)检测限与工作曲线的测定：
用甲醇溶剂分别配制(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane的系列标准溶液，七级标线浓度分别为0.001mg/mL、0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.2mg/mL，分别标记为STD-0.10％、STD-2.5％、STD-5.0％、STD-10％、STD-50％、STD-100％、STD-120％，以各主峰的峰面积与对应的各标线浓度之比进行线性回归分析，得到标准工作曲线。
(1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane在线性浓度范围内，工作曲线线性良好，适合定量分析，见下表(检测限与工作曲线的检查)所示。
Figure BDA0003479744480000061
注：Y为各主峰的峰面积，X为相应的各标线浓度。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，以及部分运用的实施例，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种azabicyclo[3.1.0]hexane的GC-FID检测方法，其特征在于：包括以下步骤
（1），取 (1R,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane用甲醇溶解，配制成浓度为1mg/mL的样品溶液；
（2），直接进样，升温程序为起始温度40℃保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃后保持10min，设置进样口温度为280℃，设置流速2mL/min，恒流模式下检测器温度260℃；
（3），采用CP-Volamine色谱柱，样品溶液的分流比为5：1，进样体积为2μL进行检测，记录色谱图，按照百分面积法检测杂质含量。
2.根据权利要求1所述的一种azabicyclo[3.1.0]hexane的GC-FID检测方法，其特征在于，所述的色谱柱为Agilent CP-Volamine，30m×0.320mm。
3.根据权利要求2所述的一种azabicyclo[3.1.0]hexane的GC-FID检测方法，其特征在于，所述的色谱柱是固定相表面涂敷了100%甲基聚硅氧烷的色谱柱。
4.根据权利要求1或2或3所述的一种azabicyclo[3.1.0]hexane的GC-FID检测方法，其特征在于，所述的气相色谱仪为Agilent GC 8860 with FID1A。
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