CN114544604A - 一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡 - Google Patents

Abstract

本发明是一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，有效解决了现在技术中尿酸检测复杂、效率低、检测不准确的技术问题，包括试剂卡，所述试剂卡包括PVC背板，所述PVC背板上从左至右依次粘附有样本处理段、酶促反应段、底物混合段、酶促检测段，所述试剂卡上方设有卡壳，卡壳上开设有置于样本处理段上方的加样孔和置于酶促检测段上方的检测孔，本发明设计精巧，利用层析动力，血液样本依次通过样本处理段除去红细胞，在酶促反应段催化分解，在底物混合段与检测底物混合，达到检测段最后显色或发光，检测段使用的层析滤纸即是样本层析的动力，又是集反应产物做最后检测的载体。

Description

一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡

技术领域

本发明涉及医学体外诊断技术领域，具体的是一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡。

背景技术

尿酸（2,4,6-三羟基嘌呤，简称UA），是人体代谢产物，正常情况下70％的尿酸来自体内的新陈代谢，30％来自饮食，通过循环系统最终大部分由肾脏排出，该途径上任何环节出现问题，都可能导致高尿酸。痛风与血尿酸水平的升高明确相关。在无痛风症状高尿酸血症(Hyperuricemia，HUA)人群中，血尿酸大于9mg/dl组痛风的年发病率为4.9％，7-9mg/dl组年发病率为0.5％，7mg/dl以下组仅为0.1％，将痛风患者血尿酸降至6mg/dl以下，痛风发作与关节内晶体的沉积均可减少。近年的研究发现痛风与代谢综合征密切相关，痛风患者合并代谢综合征的比值是非痛风患者的3.05倍。痛风相关的HUA同时是糖尿病、慢性肾病、肥胖、高血压、肾结石、心梗、心衰和脑卒中等多种代谢相关疾病的危险因素。

血尿酸监测是目前治疗痛风等疾病的必要手段，痛风和HUA的长期管理的重要性引起了日益广泛的关注。但是现阶段痛风病人的尿酸检测，大部分都还是在急性发作期时去医院进行检测，这样为时已晚，会给病人带来极大的痛苦。因此尿酸检测进入基层医疗甚至家庭中有重要意义。目前医院检测尿酸仍旧采用生化分析仪检测，大型仪器贵重，定标麻烦无法进入基层诊所和家庭，不利于尿酸相关疾病的及时预防和治疗。

现在有用免疫学抗体-抗原法检测尿酸的研究，但是尿酸作为一种小分子化合物（分子量168），并且血液里的类似结构干扰分子比较多，其无论是单克隆抗体或者多克隆抗体现在都无法消除干扰，导致医学检测不准确，因此现阶段没有使用免疫学原理而获得医疗器械注册的ELISA或胶体金类试剂盒。

在此基础上，本发明提供一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡来解决此问题。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明提供一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，有效解决了现在技术中尿酸检测复杂、效率低、检测不准确的技术问题。

一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，其特征在于，包括试剂卡，所述试剂卡包括PVC背板，所述PVC背板上从左至右依次粘附有样本处理段、酶促反应段、底物混合段、酶促检测段，所述试剂卡上方设有卡壳，卡壳上开设有置于样本处理段上方的加样孔和置于酶促检测段上方的检测孔。

优选的，所述样本处理段的制作是采用玻璃纤维纸浸泡在样本处理液内，然后经过恒温鼓风干燥箱烘干，温度调整为30-35℃，而样本处理液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 20-50mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

乙二胺四乙酸二钠 0.1-0.2g/L

植物凝集素（如刀豆素A） 5-20ng/L

Proclin 300 1-5mL/L 。

优选的，所述酶促反应段的制作是将酶促反应液喷涂在醋酸纤维膜或硝酸纤维膜上，然后经过恒温鼓风干燥箱烘干，温度调整为30-35℃，而酶促反应液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 20-50mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

尿酸酶 5-10KU/L

Proclin 300 1-5mL/L 。

优选的，所述底物混合段的制作是将底物液喷涂在玻璃纤维纸上，然后经过恒温鼓风干燥箱烘干，温度调整为50℃以下，而底物液配方为：

PH为4.0的醋酸缓冲液 20-50mmol/L

甘油 10-20ml/L

TMB 0.1-0.5g/L 。

优选的，所述酶促检测段的制作是将检测液喷涂在层析滤纸上，然后经过恒温鼓风干燥箱烘干，温度调整为30-35℃，而检测液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 5-10mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

过氧化物酶 0.05-0.2KU/L

Proclin 300 1-5mL/L 。

优选的，所述PVC背板经不干胶分别与样本处理段、酶促反应段、底物混合段、酶促检测段粘贴。

优选的，所述试剂卡还配合有终止液，终止液为2mol/mL的硫酸或盐酸。

本发明与现有技术相比，具备如下技术效果：

1、本发明可以提供一种简单、快捷和准确的试剂卡。

2、本发明设计精巧，所有原料全部商品化，价格便宜，检测特异性强，灵敏度高。

3、本发明检测操作简单方便，可以使用指尖全血检测，使用显色底物时配备比色卡或读卡仪，家庭中即可简单的判定尿酸含量。

4、本发明在基层医院里使用发光底物，配备光电读数仪可以精确的测定尿酸含量。

附图说明

图1为本发明试剂卡整体结构立体示意图。

具体实施方式

有关本发明的前述及其他技术内容、特点与功效，在以下配合参考附图1对实施例的详细说明中，将可清楚的呈现。以下实施例中所提到的结构内容，均是以说明书附图为参考。

下面将参照附图描述本发明的各示例性的实施例。

本发明为一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，包括试剂卡1，试剂卡1呈长条形，试剂卡1包括PVC背板2，在PVC背板2上方从左至右依次通过不干胶粘附有样本处理段3、酶促反应段4、底物混合段5、酶促检测段6，而样本处理段3厚度高于酶促反应段4、酶促反应段4厚度低于底物混合段5、底物混合段5厚度高于酶促检测段6。

在试剂卡1的上方设有卡壳7，卡壳7为长条形，与试剂卡1相匹配，扣合在试剂卡1的上方，然后在卡壳7上开设有加样孔8和检测孔9，加样孔8置于样本处理段3的上方，检测孔9置于酶促检测段6的上方，加样孔8用来加注血液样本，检测孔9用来观察发光或显色，血液样本的流动方向为从左至右。

而该试剂卡的制作方法为：

1、制作样本处理段；

配置样本处理液，样本处理液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 20-50mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

乙二胺四乙酸二钠 0.1-0.2g/L

植物凝集素（如刀豆素A） 5-20ng/L

Proclin 300 1-5mL/L

然后将样本处理液均匀的喷涂在玻璃纤维纸上，再经过恒温鼓风干燥箱烘干，恒温鼓风干燥箱的烘干温度调整为30-35℃，烘干时间为4-8小时。

2、制备酶促反应段：

配置酶促反应液，酶促反应液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 20-50mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

尿酸酶 5-10KU/L

Proclin 300 1-5mL/L

然后将酶促反应液均匀的喷涂在醋酸纤维膜或硝酸纤维膜上，再经过恒温鼓风干燥箱烘干，恒温鼓风干燥箱的烘干温度调整为30-35℃，烘干时间为4-8小时。

3、制备底物混合段：

配置底物液，底物液的配方为：

显色底物：

PH为4.0的醋酸缓冲液 20-50mmol/L

甘油 10-20ml/L

TMB 0.1-0.5g/L

另一配方为：

发光底物：

PH为9.0的CB缓冲液 20-50mmol/L

对碘苯酚 10-20ml/L

异鲁米诺 0.1-0.5g/L

然后将底物液均匀的喷涂在玻璃纤维纸上，再经过恒温鼓风干燥箱烘干，恒温鼓风干燥箱的烘干温度调整为50℃以下，最好为30-35℃，烘干时间为4-8小时。

4、制备酶促检测段：

配置检测液，检测液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 5-10mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

过氧化物酶 0.05-0.2KU/L

Proclin 300 1-5mL/L

然后将检测液均匀的喷涂在层析滤纸上，再经过恒温鼓风干燥箱烘干，恒温鼓风干燥箱的烘干温度调整为30-35℃，烘干时间为4-8小时。

5、制备试剂卡：

然后将样本处理段3、酶促反应段4、底物混合段5、酶促检测段6依次通过不干胶粘附在PVC背板2上，形成宽度为3-8mm试剂卡1。

6、在试剂卡1上方安装卡壳7，卡壳7上预留加样孔8和检测孔9，加样孔8在样本处理段3的上方，检测孔9在酶促检测段6的上方，形成完整的尿酸检测试剂卡。

7、检测时，将80-120uL血液样本加注到加样孔，通过检测孔进行观察结果。

8、设定好时间，比如想看10分钟时的发光或显色程度，即在10分钟时，在试剂卡上加注终止液，终止液为2mol/mL的硫酸或盐酸，加入终止液后即可固定发光或显示的程度，以方便进行观察结果和对比。

尿酸检测主要用于痛风疾病的病情严重程度和药物治疗效果，监控病人体内尿酸的水平，传统方法就是生化法，仪器庞大，一般二级以上医院检验科才配备有，静脉血样本需要经过采集离心处理后才能检测，一般医院检验科样本报告只能出当天上午9-10点以前的样本结果，方法麻烦，不能及时检测。本发明试剂卡可以直接用眼观察判断，也可以使用CCD扫描成像仪器检测记录，仪器简单。采用指尖血立即检测，10-15分钟即可以出结果，可以广泛用于科室诊断、二级以下医院、社区医院甚至诊所等医院，方便慢性病的治疗监测，也可以装在体检车上进行慢性病调查等，极大的方便了因痛风行动不便人群就近诊断治疗。单检测卡和比色卡配合可以直接家庭使用，病人可以自己监测自己身体尿酸水平的波动合理调整饮食和用药。

本发明设计精巧，利用层析动力，血液样本依次通过样本处理段除去红细胞，在酶促反应段催化分解，在底物混合段与检测底物混合，达到检测段最后显色或发光，检测段使用的层析滤纸即是样本层析的动力，又是集反应产物做最后检测的载体。具体原理是全血样本在样本处理段红细胞在凝集素的作用下聚集凝结，凝集的红细胞被阻在样品处理段上不会影响后续反应，除去红细胞的血液继续层析到酶促反应段，液体里的尿酸在尿酸酶催化分解产生过氧化氢，在层析作用下液体携带着反应产物过氧化氢在底物混合段溶解底物并在层析过程中充分混合，最后混合液体到达检测段，在检测段过氧化物酶（HRP）催化分解过氧化氢同时氧化底物发光或显色，检测显色深度或发光强度计算过氧化氢的含量，进而间接的检测出尿酸的浓度。

本发明与现有技术相比，具备如下技术效果：

1、本发明可以提供一种简单、快捷和准确的试剂卡。

2、本发明设计精巧，所有原料全部商品化，价格便宜，检测特异性强，灵敏度高。

3、本发明检测操作简单方便，可以使用指尖全血检测，使用显色底物时配备比色卡或读卡仪，家庭中即可简单的判定尿酸含量。

4、本发明在基层医院里使用发光底物，配备光电读书仪可以精确的测定尿酸含量。

Claims (7)

1.一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，其特征在于，包括试剂卡(1)，所述试剂卡(1)包括PVC背板(2)，所述PVC背板(2)上从左至右依次粘附有样本处理段(3)、酶促反应段(4)、底物混合段(5)、酶促检测段(6)，所述试剂卡(1)上方设有卡壳(7)，卡壳(7)上开设有置于样本处理段(3)上方的加样孔(8)和置于酶促检测段(6)上方的检测孔(9)。

2.根据权利要求1所述的一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，其特征在于，所述样本处理段(3)的制作是采用玻璃纤维纸浸泡在样本处理液内，然后经过恒温鼓风干燥箱烘干，温度调整为30-35℃，而样本处理液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 20-50mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

乙二胺四乙酸二钠 0.1-0.2g/L

植物凝集素（如刀豆素A） 5-20ng/L

Proclin 300 1-5mL/L 。

3.根据权利要求1所述的一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，其特征在于，所述酶促反应段(4)的制作是将酶促反应液喷涂在醋酸纤维膜或硝酸纤维膜上，然后经过恒温鼓风干燥箱烘干，温度调整为30-35℃，而酶促反应液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 20-50mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

尿酸酶 5-10KU/L

Proclin 300 1-5mL/L 。

4.根据权利要求1所述的一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，其特征在于，所述底物混合段(5)的制作是将底物液喷涂在玻璃纤维纸上，然后经过恒温鼓风干燥箱烘干，温度调整为50℃以下，而底物液配方为：

PH为4.0的醋酸缓冲液 20-50mmol/L

甘油 10-20ml/L

TMB 0.1-0.5g/L 。

5.根据权利要求1所述的一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，其特征在于，所述酶促检测段(6)的制作是将检测液喷涂在层析滤纸上，然后经过恒温鼓风干燥箱烘干，温度调整为30-35℃，而检测液的配方为：

PH为7.4的PB缓冲液 5-10mmol/L

氯化钠 8.0-8.2g/L

牛血清白蛋白 10-25g/L

蔗糖 10-25g/L

过氧化物酶 0.05-0.2KU/L

Proclin 300 1-5mL/L 。

6.根据权利要求1所述的一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，其特征在于，所述PVC背板(2)经不干胶分别与样本处理段(3)、酶促反应段(4)、底物混合段(5)、酶促检测段(6)粘贴。

7.根据权利要求1所述的一种干化学酶法的尿酸检测试剂卡，其特征在于，所述试剂卡(1)还配合有终止液，终止液为2mol/mL的硫酸或盐酸。

Images