CN114514245A - 新颖的抗TCRδ可变1抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗Vδ1抗体或其片段。

Description

新颖的抗TCRδ可变1抗体
技术领域
本发明涉及针对γδT细胞的T细胞受体的抗体及其片段。
背景技术
针对癌症的T细胞免疫疗法越来越受到关注，其集中在CD8+和CD4+αβ(αβ)T细胞的子集识别癌细胞和介导宿主保护功能潜能的明显能力上，特别是当PD-1、CTLA-4和其它受体施加的抑制途径受到临床介导的拮抗作用去抑制时。然而，αβT细胞是MHC限制性的，这可能导致移植物抗宿主疾病。
γδT细胞(γδT细胞)表示T细胞的子集，所述γδT细胞在其表面上表达独特的定义的γδT细胞受体(TCR)。此TCR由一个γ(γ)链和一个δ(δ)链构成，所述每个链都经历链重排，但与αβT细胞相比，V基因的数量有限。对Vγ进行编码的主要TRGV基因区段是TRGV2、TRGV3、TRGV4、TRGV5、TRGV8、TRGV9和TRGV11以及非功能性基因TRGV10、TRGV11、TRGVA和TRGVB。最常见的TRDV基因区段对Vδ1、Vδ2和Vδ3，以及若干具有Vδ和Vα指定两者的V区段进行编码(Adams等人,296:30-40(2015)《细胞免疫学(Cell Immunol.)》)。人γδT细胞可以基于其TCR链广泛分类，因为某些γ类型和δ类型更普遍地，尽管不是排他地，存在于呈一种或多种组织类型的细胞上。例如，大多数血液驻留的γδT细胞表达Vδ2TCR，通常是Vγ9Vδ2，然而这在组织驻留的γδT细胞，如皮肤中的那些γδT细胞中不太常见，所述γδT细胞更频繁地使用Vδ1TCR与γ链配对，例如通常与肠道中的Vγ4配对。
要利用γδT细胞进行免疫疗法，需要一种原位扩增细胞的方法，或在重新输注之前采集所述细胞并且将γδT细胞离体扩增的装置。后一种方法先前已经使用添加外源性细胞因子进行了描述，例如参见WO2017/072367和WO2018/212808。用于扩增患者自身γδT细胞的方法已经使用羟甲-甲基丁-2-烯基焦磷酸酯(HMBPP)或临床批准的氨基二膦酸的药理学修饰形式进行了描述。通过这些方法，超过250名癌症患者已经进行了治疗，这看似安全，但完全缓解的发生率只有很少。然而，仍然需要经证实能够扩增大量γδT细胞的活化剂。
发明内容
根据本发明的第一方面，提供了一种人的分离的抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体或其片段，其与γδT细胞受体(TCR)的可变δ1(Vδ1)链的表位结合，所述表位包括
(i)SEQ ID NO:1的氨基酸区：3-20；和/或
(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸区：37-77内的一个或多个氨基酸残基。
根据本发明的另外的方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段包括以下中的一个或多个：
包括与SEQ ID NO:2-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3；
包括与SEQ ID NO:26-37和序列：A1-A12(表2)中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2；和/或
包括与SEQ ID NO:38-61中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
根据本发明的另外的方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段包括与SEQ ID NO:62-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
根据本发明的另一方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段包括与SEQ ID NO:86-97中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
根据本发明的另外的方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段在结合时针对γδTCR下调的EC50值小于0.5μg/ml，如小于0.06μg/ml。
根据本发明的另外的方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段在结合时针对γδT细胞脱粒的EC50值小于0.05μg/ml，如小于0.005μg/ml，具体地小于0.002μg/ml。
根据本发明的另外的方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段在结合时针对γδT细胞杀伤的EC50值小于0.5μg/ml，如小于0.055μg/ml，具体地小于0.020μg/ml。
根据本发明的另外的方面，提供了一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列对包括与SEQ ID NO:99-110具有至少70％序列同一性的序列的所述抗Vδ1抗体或其片段进行编码。
根据本发明的另外的方面，提供了一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列对由SEQID NO:99-110的序列组成的所述抗Vδ1抗体或其片段进行编码。
根据本发明的另外的方面，提供了一种表达载体，所述表达载体包括SEQ IDNO99-110的VH区。
根据本发明的另外的方面，提供了一种表达载体，所述表达载体包括SEQ IDNO99-110的VL区。
根据本发明的另外的方面，提供了包括如本文所定义的多核苷酸序列或表达载体的细胞。
根据本发明的另外的方面，提供了包括如本文所定义的抗体或其片段的组合物。
根据本发明的另外的方面，提供了包括如本文所定义的抗体或其片段连同药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。
因此，根据本发明的另外的方面，提供了一种分离的抗原，所述分离的抗原包括与SEQ ID NO:123具有至少80％序列同一性的用于产生抗Vδ1抗体或其片段的氨基酸序列。
根据本发明的另外的方面，提供了一种产生抗Vδ1抗体或其片段的方法，所述方法包括：
(i)设计包括TCRδ可变1(Vδ1)氨基酸序列的一系列抗原，其中所述Vδ1的CDR3序列对于所述系列中的所有抗原都是相同的；
(ii)使步骤(i)中设计的第一抗原暴露于抗体文库；
(iii)分离与所述抗原结合的所述抗体或其片段；
(iv)使分离的抗体或其片段暴露于步骤(i)中设计的第二抗原；以及
(v)分离与所述第一抗原和所述第二抗原两者结合的所述抗体或其片段。
根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体，所述抗体通过如本文所定义的方法获得。
附图说明
图1：用抗Vδ1Ab对直接包被的抗原进行的ELISA检测(REA173，美天旎生物公司(Miltenyi Biotec))。仅在使用那些含有Vδ1结构域的抗原的情况下检测到。亮氨酸拉链(LZ)格式似乎比Fc格式更有效，这与基于细胞的流动竞争测定一致(数据未示出)。
图2：用于DV1选择的多克隆噬菌体DELFIA数据。A)异源二聚体选择：第1轮和第2轮中的异源二聚体LZ TCR格式，两轮均取消选择异源二聚体LZ TCR。B)同源二聚体选择：使用同源二聚体Fc融合TCR执行第1轮，其中取消选择人IgG1 Fc，随后对异源二聚体LZ TCR执行第2轮，其中取消选择异源二聚体LZ TCR。每个图含有每个靶标的两个条以表示来自不同文库的选择。
图3：IgG捕获：左)抗L1 IgG与L1的相互作用的传感图，右)稳态拟合，如果可用的话。所有实验均在室温下在MASS-2仪器上执行。根据朗缪尔1:1结合进行稳态拟合。
图4：针对克隆1245_P01_E07、1252_P01_C08、1245_P02_G04、1245_P01_B07和1251_P02_C05(A)或克隆1139_P01_E04、1245_P02_F07、1245_P01_G06 1245_P01_G09、1138_P01_B09、1251_P02_G10和1252_P01_C08(B)的TCR下调测定结果。
图5：针对克隆1245_P01_E07、1252_P01_C08、1245_P02_G04、1245_P01_B07和1251_P02_C05(A)或克隆1139_P01_E04、1245_P02_F07、1245_P01_G06、1245_P01_G09、1138_P01_B09和1251_P02_G10(B)的T细胞脱粒测定结果。
图6：针对克隆1245_P01_E07、1252_P01_C08、1245_P02_G04、1245_P01_B07和1251_P02_C05(A)或克隆1139_P01_E04、1245_P02_F07、1245_P01_G06、1245_P01_G09、1138_P01_B09和1251_P02_G10(B)的杀伤测定(THP-1基于流动的测定)结果。
图7：针对1245_P01_E07的表位作图数据。SEQ ID NO:1上的1245_P01_E07的表位结合位点的图形表示。
图8：针对1252_P01_C08的表位作图数据。SEQ ID NO:1上的1252_P01_C08的表位结合位点的图形表示。
图9：针对1245_P02_G04的表位作图数据。SEQ ID NO:1上的1245_P02_G04的表位结合位点的图形表示。
图10：针对1251_P02_C05的表位作图数据。SEQ ID NO:1上的1251_P02_C05的表位结合位点的图形表示。
图11：针对1141_P01_E01的表位作图数据。SEQ ID NO:1上的1141_P01_E01的表位结合位点的图形表示。
具体实施方式
定义
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。如本文所使用的，以下术语具有赋予其的含义。
γδ(γδ)T细胞表示T细胞的小的子集，所述γδT细胞在其表面上表达独特的定义的T细胞受体(TCR)。此TCR由一个γ(gamma)链和一个δ(delta)链构成。每个链含有可变(V)区、恒定(C)区、跨膜区和胞质尾区。V区含有抗原结合位点。存在人γδT细胞的两种主要的亚型：在外周血中占主导地位的一种亚型；以及在非造血组织中占主导地位的一种亚型。这两种亚型可以通过细胞上存在的δ和/或γ的类型定义。例如，在外周血中占主导地位的γδT细胞主要表达δ可变2链(Vδ2)。在非造血组织(即，是组织驻留的)中占主导地位的γδT细胞主要表达δ可变1链。对“Vδ1T细胞”的提及是指具有Vδ1链的γδT细胞，即，Vδ1+细胞。
对“δ可变1”的提及也可以称为Vδ1或Vd1，而对含有此区的TCR链进行编码的核苷酸可以称为“TRDV1”。与γδTCR的Vδ1链相互作用的抗体或其片段都是有效的抗体或其片段，所述抗体或其片段与Vδ1结合并且可以称为“抗TCRδ可变1抗体或其片段”或“抗Vδ1抗体或其片段”。
本文对其它δ链，如“δ可变2”链进行了另外的参考。这些可以以类似的方式指代。例如，δ可变2链也可以称为Vδ2，而对含有此区的TCR链进行编码的核甘酸可以称为“TRDV2”。在优选实施例中，抗体或其片段与γδTCR的Vδ1链相互作用，但不与如Vδ2等其它δ链相互作用。
本文也对“γ可变链”进行了参考。这些也可以称为γ链或Vγ，而对含有此区的TCR链进行编码的核甘酸可以称为TRGV。例如，TRGV4是指Vγ4链。在优选实施例中，抗体或其片段与γδTCR的Vδ1链相互作用，但不与γ链如Vγ4相互作用。
术语“抗体”包含任何抗体蛋白质构建体，所述抗体蛋白质构建体包括至少一个抗体可变结构域，所述抗体可变结构域包括至少一个抗原结合位点(ABS)。抗体包含但不限于IgA、IgG、IgE、IgD、IgM类(以及其亚型)的免疫球蛋白。由两个相同的重(H)链和两个相同的轻(L)链组合而成的免疫球蛋白G(IgG)抗体的整体结构在哺乳动物内良好建立并且高度保存(Padlan(1994)《分子免疫学(Mol.Immunol.)》31:169-217)。
常规的抗体或免疫球蛋白(Ig)是包括以下四个多肽链的蛋白质：两个重(H)链和两个轻(L)链。每个链被分成恒定区和可变结构域。重(H)链可变结构域在本文中缩写为VH，并且轻(L)链可变结构域在本文中缩写为VL。这些结构域、与其相关的结构域和源自其的结构域在本文中可以称为免疫球蛋白链可变结构域。VH和VL结构域(也称为VH和VL区)可以进一步细分成被称作互补决定区(CDR)的区，所述区散布有更保守的被称作框架区(FR)的区。框架区和互补决定区已经被精确定义(Kabat等人,(1991)《免疫学关注的蛋白质的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》第五版,美国卫生与公共事业部(U.S.Department of Health and Human Services)，NIH公开号91-3242)。对于CDR序列还存在替代性编号惯例，例如陈述于Chothia等人,(1989)《自然(Nature)》342:877-883中的那些。在常规的抗体中，每个VH和VL由按照以下顺序从氨基端到羧基端布置的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。两个免疫球蛋白重链和两个免疫球蛋白轻链的常规抗体四聚体由通过例如二硫键相互连接的免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链构成，并且重链也类似地连接。重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。轻链恒定区包含一个结构域CL。重链的可变结构域和轻链的可变结构域是与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主组织或因子的结合，包含免疫系统的不同细胞(例如，效应细胞)以及经典补体系统的第一组分(C1q)。
如本文所使用的，抗体的片段(其也可以称为“抗体片段”、“免疫球蛋白片段”“抗结合片段”或“抗结合多肽”)是指抗体的一部分(或者含有所述部分的构建体)，所述抗体的一部分与靶标，即γδT细胞受体的δ可变1(Vδ1)链(例如，其中一个或多个免疫球蛋白链非全长，但与靶标特异性结合的分子)特异性结合。术语抗体片段内涵盖的结合片段的实例包含：
(i)Fab片段(由VL结构域、VH结构域、CL结构域和CH1结构域组成的单价片段)；
(ii)F(ab')2片段(由在铰链区处由二硫桥连接的两个Fab片段组成的二价片段)；
(iii)Fd片段(由VH结构域和CH1结构域组成)；
(iv)Fv片段(由抗体单臂的VL结构域和VH结构域组成)；
(v)单链可变片段scFv(由使用重组方法通过使所述结构域能够成为单个蛋白链的合成接头来接合的VL结构域和VH结构域组成，在所述单个蛋白链中，VL区和VH区配对以形成单价分子)：
(vi)VH(由VH结构域组成的免疫球蛋白链可变结构域)；
(vii)VL(由VL结构域组成的免疫球蛋白链可变结构域)；
(viii)结构域抗体(dAb，由VH结构域或VL结构域组成)；
(ix)微型抗体(由通过CH3结构域连接的一对scFv片段组成)；以及
(x)双功能抗体(由scFv片段的非共价二聚体组成，所述scFv片段由来自一个抗体的VH结构域通过小肽接头连接来自另一个抗体的VL结构域而组成)。
“人抗体”是指具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。施用所述人抗体的人受试者不会对所述抗体内含有的原代氨基酸产生跨物种抗体应答(例如，被称为HAMA应答-人抗鼠抗体)。所述人抗体可以包含并非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过随机或位点特异性突变或通过体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中，并且具体地在CDR3中。然而，术语不旨在包含其中源自如小鼠等另一种哺乳动物物种的种系的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。通过重组方式制备、表达、产生或分离的人抗体，如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体、从重组的组合人抗体文库中分离的抗体、从对人免疫球蛋白基因而言是转基因的动物(例如，小鼠)中分离的抗体或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接成其它DNA序列的任何其它方式制备、表达、产生或分离的抗体也可以称为“重组人抗体”。
用来自人可变结构域的对应残基取代非人免疫球蛋白可变结构域的框架区中的至少一个氨基酸残基被称为“人源化”。可变结构域的人源化可以降低人的免疫原性。
“特异性”是指特定抗体或其片段可以结合的不同类型的抗原或抗原决定簇的数量。抗体的特异性是抗体识别特定抗原作为独特的分子实体并且将其与另一个区分开的能力。与抗原或表位“特异性结合”的抗体是本领域熟知的术语。如果分子与特定靶抗原或表位比其与替代性靶标更频繁地、更快速地、持续时间更长地和/或亲和力更大地反应，则所述分子被称为表现出“特异性结合”。如果抗体比其与其它物质亲和力更大地、亲合力更高地、更容易地和/或持续时间更长地结合，则所述抗体与靶抗原或表位“特异性结合”。
“亲和力”由抗原与抗原结合多肽(KD)解离的平衡常数表示，是抗原决定簇与抗体(或其片段)上的抗原结合位点之间结合强度的量度：KD值越低，抗原决定簇与抗原结合多肽之间的结合强度越大。可替代地，亲和力也可以表达为亲和常数(KA)，其为1/KD。亲和力可以根据所关注的特异性抗原通过已知的方法确定。
低于10-6的任何KD值被认为指示结合。可以通过已知的任何合适的方式和本领域已知的其不同变体来确定抗体或其片段与抗原或抗原决定簇的特异性结合，所述合适的方式包含例如斯卡查德分析(Scatchard analysis)和/或竞争性结合测定，如放射免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和三明治竞争测定法、平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共振或光谱学(例如，使用荧光测定)。
“亲合力”是抗体或其片段与相关抗原之间的结合强度的量度。亲和力与以下二者有关：抗原决定簇与抗体上的其抗原结合位点之间的亲和力，以及存在于抗体上的相关结合位点的数量。
“人组织Vδ1+细胞”和“造血和血液Vδ1+细胞”以及“肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)Vδ1+细胞”被定义为分别含在或源自人组织或造血系统或人肿瘤中的Vδ1+细胞。所有所述细胞类型都可以通过其(i)位置或其所源自的位置和(ii)其Vδ1+TCR表达来鉴定。
“调节抗体”是在与表达与抗体结合的靶标的细胞接触或结合之后赋予可测量变化的抗体，所述变化包含但不限于细胞周期和/或细胞数量和/或细胞活力和/或一种或多种细胞表面标志物和/或在一种或多种分泌性分子(例如，细胞因子、趋化因子、白三烯等)的分泌和/或功能(如针对靶细胞或患病细胞的细胞毒性)中的可测量变化。
一种“调节”细胞或其群体的方法是指这样一种方法，其中在所述一个或多个细胞中或从其分泌的至少一个可测量变化被触发以产生一个或多个“调节细胞”。
“免疫应答”是在添加调节抗体之后，免疫系统中的至少一个细胞、或一种细胞类型、或一种内分泌途径或一种外分泌途径中的可测量变化(包含但不限于细胞介导的应答、体液应答、细胞因子应答、趋化因子应答)。
“免疫细胞”被定义为免疫系统的细胞，包含但不限于CD34+细胞、B细胞、CD45+(淋巴细胞共同抗原)细胞、α-βT细胞、细胞毒性T细胞、辅助T细胞、血浆细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、红细胞、血小板、树突状细胞、吞噬细胞、粒细胞、先天性淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞和γδT细胞。通常，借助组合细胞表面分子分析(例如，通过流式细胞术)对免疫细胞进行分类，以鉴定或分组或聚类以将免疫细胞分化为亚群。然后仍可以用另外的分析进一步细分这些免疫细胞。例如，CD45+淋巴细胞可以进一步细分成vδ阳性群体和vδ阴性群体。
“模型系统”是旨在辅助理解如抗体或其片段等药品如何可以充当改善疾病的体征或症状中的药物的生物模型或生物表示。此类模型通常包含使用体外、离体和体内患病细胞、非患病细胞、健康细胞、效应细胞和组织等，并且其中研究和比较所述药物的性能。
“患病细胞”表现出与疾病进展相关的表型，如癌症、如病毒感染等感染、或炎性病状或炎性疾病。例如，患病细胞可以是肿瘤细胞、自身免疫组织细胞或病毒感染的细胞。因此，所述患病细胞可以被定义为肿瘤细胞、病毒感染的细胞或炎性细胞。
“健康细胞”是指未患病的正常细胞。所述健康细胞也可以称为“正常细胞”或“非患病”细胞。非患病细胞包含非癌细胞、或未感染的细胞或非炎性细胞。所述细胞通常与相关患病细胞一起采用以确定由药物赋予的患病细胞特异性和/或更好地理解药物的治疗指数。
“患病细胞特异性”是效应细胞或其群体(例如，Vδ1+细胞群体)如何有效区分和杀伤患病细胞(如癌细胞)同时保留非患病细胞或健康细胞的量度。此潜力可以在模型系统中测量，并且与所述效应细胞杀伤或裂解非患病细胞或健康细胞的潜力相比，可能涉及比较效应细胞或效应细胞群体选择性杀伤或裂解患病细胞的倾向。所述患病细胞特异性可以告知药物的潜在治疗指数。
“增强的患病细胞特异性”描述了效应细胞，例如Vδ1+细胞或其群体的表型，其已被调节以进一步增加其特异性杀伤患病细胞的能力。此增强可以通过多种方式进行测量，包含患病细胞杀伤特异性或选择性的变化倍数或百分比增加。
适当地，本发明的抗体或其片段(即，多肽)是分离的。“分离的”多肽是从其原始环境中去除的多肽。术语“分离的”可以用于指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体(例如，特异性结合Vδ1的分离的抗体或其片段基本上不含特异性结合除了Vδ1之外的抗原的抗体)。术语“分离的”也可以用于指当被调配成药物组合物的活性成分时，分离的抗体的纯度足以进行治疗性施用，或纯度为至少70-80％(w/w)，更优选地，纯度为至少80-90％(w/w)，甚至更优选地，纯度为90-95％；并且最优选地，纯度为至少95％、96％、97％、98％、99％或100％(w/w)的制剂。
适当地，本发明中所使用的多核苷酸是分离的。“分离的”多核苷酸是从其原始环境中去除的多肽。例如，如果天然存在的多核苷酸与天然系统中的一些或全部共存材料分离，则所述多核苷酸是分离的。例如，如果多核苷酸被克隆到不属于其自然环境的一部分的载体中，或者如果其包括在cDNA中，则所述多核苷酸被认为是分离的。
抗体或其片段可以是“功能活性变体”，所述功能活性变体还包含天然存在的等位基因变体，以及突变体或任何其它非天然存在的变体。如本领域已知的，等位基因变体是(多)肽的替代性形式，其特征在于具有一个或多个基本上不改变多肽的生物学功能的氨基酸的取代、缺失或添加。作为非限制性实例，当含有CDR的框架被修饰时，当CDR本身被修饰时，当所述CDR被移植到替代性框架时，或者当N端或C端延伸被并入时，所述功能活性变体仍然可以起作用。进一步地，含有结合结构域的CDR可以与不同的配偶体链配对，如与另一抗体共享的那些。在与所谓的“共同”轻链或“共同”重链共享时，所述结合结构域可能仍起作用。进一步地，当多聚化时，所述结合结构域可以起作用。进一步地，“抗体或其片段”还可以包括功能变体，其中VH结构域或VL结构域或恒定结构域已经远离或朝向不同的典型序列(例如在IMGT.org上列出)进行修饰并且仍然起作用。
出于比较两个密切相关的多肽序列的目的，可以使用NCBI BLAST v2.0，使用多肽序列的标准设置(BLASTP)计算第一多肽序列与第二多肽序列之间的“序列同一性％”。出于比较两个密切相关的多核苷酸序列的目的，可以使用NCBI BLAST v2.0，使用核苷酸序列的标准设置(BLASTN)计算第一核苷酸序列与第二核苷酸序列之间的“序列同一性％”。
如果多肽序列或多核苷酸序列在其整个长度上共享100％的序列同一性，则所述多肽序列或所述多核苷酸序列被称为与其它多肽或多核苷酸序列相同或“相同”。序列中的残基从左到右编号，即，针对多肽，从N端到C端编号；针对多核苷酸，从5'端到3'端编号。
序列之间的“差异”是指与第一序列相比，第二序列的位置中的单个氨基酸残基的插入、缺失或取代。两个多肽序列可以含有一个、两个或更多个此类氨基酸差异。在其它方面与第一序列相同(100％的序列同一性)的第二序列中的插入、缺失或取代导致序列同一性％降低。例如，如果相同序列的长度为9个氨基酸残基，则第二序列中的一个取代产生88.9％的序列同一性。如果第一多肽序列和第二多肽序列的长度为9个氨基酸残基并且共享6个相同的残基，则第一多肽序列和第二多肽序列共享大于66％的同一性(第一多肽序列和第二多肽序列共享66.7％的同一性)。
可替代地，出于对第一参考多肽序列与第二比较多肽序列进行比较的目的，可以确定对第一序列进行的用于产生第二序列的添加、取代和/或缺失的数量。“添加”是将一个氨基酸残基添加到第一多肽的序列中(包含在第一多肽的任一末端处添加)。“取代”是用一个不同的氨基酸残基取代第一多肽的序列中的一个氨基酸残基。所述取代可以是保守的或非保守的。“缺失”是使第一多肽的序列中缺失一个氨基酸残基(包含在第一多肽的任一末端处的缺失)。
“保守”氨基酸取代是其中一个氨基酸残基被另一个具有类似化学结构的并且预期对多肽的功能、活性或其它生物学性质几乎没有影响的氨基酸残基置换。此类保守取代适当地是其中以下组内的一个氨基酸被来自同一组中的另一氨基酸残基取代的取代：
Figure BDA0003552215320000101
适当地，疏水性氨基酸残基是非极性氨基酸。更适当地，疏水性氨基酸残基选自V、I、L、M、F、W或C。
如本文所使用的，多肽序列的编号以及CDR和FR的定义如根据Kabat系统(Kabat等人,1991,其以全文引用的方式并入本文)所定义。第一多肽序列与第二多肽序列之间的“对应”氨基酸残基是第一序列中与第二序列中的氨基酸残基共享根据Kabat系统的相同位置的氨基酸残基，同时第二序列中的氨基酸残基可能与第一序列中的氨基酸残基不同。适当地，如果根据Kabat定义的框架和CDR的长度相同，则对应残基将共享相同的数字(和字母)。比对可以手动实现，或者通过使用例如用于序列比对的已知计算机算法，如使用标准设置的NCBI BLAST v2.0(BLASTP或BLASTN)来实现。
本文对“表位”的提及是指由抗体或其片段特异性结合的靶标的部分。表位也可以被称为“抗原决定簇”。当抗体识别相同或空间重叠的表位时，所述抗体与另一抗体结合“基本上相同的表位”。确定两种抗体是否与相同或重叠表位结合的常用方法是竞争测定，其可以使用标记的抗原或标记的抗体以多种不同的格式进行配置(例如，使用放射性或酶标记的孔板，或对抗原表达细胞进行流式细胞术)。
存在于蛋白靶标上的表位可以被定义为“线性表位”或“构象表位”。线性表位由蛋白抗原中的连续氨基酸序列形成。构象表位由蛋白序列中的不连续的氨基酸形成，但在蛋白质折叠成其三维结构时聚集在一起。
如本文所使用的，术语“载体”旨在指能够转运其连接到的另一个核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，是指另外的DNA区段可以连接到其中的环状双链DNA环。另一种类型的载体是病毒载体，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组中。某些载体能够在其被引入到其中的宿主细胞中进行自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体以及游离型哺乳动物和酵母载体)。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)在引入宿主细胞中时可以被整合到宿主细胞的基因组中，并且由此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与其操作性地连接的基因的表达。此类载体在本文中被称为“重组表达载体”(或简单地，“表达载体”)。一般而言，可用于重组DNA技术的表达载体通常呈质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明旨在包含提供同等功能的此类其它形式的表达载体以及噬菌体和噬菌粒系统，所述表达载体如病毒载体(例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。如本文所使用的，术语“重组宿主细胞”(或简称为“宿主细胞”)旨在指已引入到重组表达载体中的细胞。此类术语旨在不仅指特定的受试者细胞，而且指此类细胞的后代，例如，当采用所述后代制备细胞系或细胞库时，所述细胞系或细胞库随后被任选地储存、提供、出售、转移，或采用所述后代制备如本文所描述的抗体或其片段。
对“受试者”、“患者”或“个体”的提及是指要治疗的受试者，具体地哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包含人、非人灵长类动物、农场动物(如奶牛)、运动动物或宠物动物，如狗、猫、豚鼠、兔子、大鼠或小鼠。在一些实施例中，受试者是人。在替代性实施例中，受试者是非人哺乳动物。
术语“足够量”意指足以产生期望效果的量。术语“治疗有效量”是有效改善疾病或病症的症状的量。治疗有效量可以是“预防有效量”，因为预防可以被认为是疗法。
如果疾病或病症的体征或症状的严重程度、受试者经历此类体征或症状的频率或两者都降低，则疾病或病症“改善”。
如本文所使用的，“治疗疾病或病症”意指降低受试者经历的疾病或病症的至少一种体征或症状的频率和/或严重程度。
如本文所使用的，“癌症”是指细胞的异常生长或分裂。通常，癌细胞的生长和/或寿命超过了其周围正常细胞和组织的生长和/或寿命，并且与其不协调。癌症可以是良性的、恶变前的或恶性的。癌症发生在多种细胞和组织中，包含口腔(例如，嘴、舌、咽等)、消化系统(例如，食道、胃、小肠、结肠、直肠、肝、胆管、胆囊、胰腺等)、呼吸系统(例如，喉、肺、支气管等)、骨、关节、皮肤(例如，基底细胞、鳞状细胞、脑膜瘤等)、乳房、生殖系统(例如，子宫、卵巢、前列腺、睾丸等)、泌尿系统(例如，膀胱、肾、输尿管等)、眼睛、神经系统(例如，脑等)、内分泌系统(例如，甲状腺等)和造血系统(例如，淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、慢性髓样白血病等)。
如本文所使用的，术语“约”在本文中使用时包含至多指定值并包含比所述指定值高10％，并且包含至多指定值并包含比所述指定值低10％，适当地至多指定值并包含比所述指定值高5％并且至多指定值并包含比所述指定值低5％，具体地指定值。术语“之间”包含指定边界的值。
抗体或其片段
本文提供了能够与γδT细胞受体(TCR)的δ可变1链(Vδ1)特异性结合的抗体或其片段。
在一个实施例中，抗体或其片段是scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、可变结构域(例如，VH或VL)、双功能抗体、微型抗体或单克隆抗体。在另外的实施例中，抗体或其片段是scFv。
本发明的抗体可以是任何类别的，例如，IgG、IgA、IgM、IgE、IgD或其同种型，并且可以包括κ轻链或λ轻链。在一个实施例中，抗体是IgG抗体，例如，同种型、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中的至少一种。在另外的实施例中，抗体可以是一种格式，如IgG格式，其已经被修饰以赋予期望的性质，如使Fc突变以降低效应子功能，延长半衰期，改变ADCC或改善铰链稳定性。此类修饰在本领域是众所周知的。
在一个实施例中，抗体或其片段是人的。因此，抗体或其片段可以源自人免疫球蛋白(Ig)序列。抗体(或其片段)的CDR、框架和/或恒定区可以源自人Ig序列，具体地人IgG序列。CDR、框架和/或恒定区对于人Ig序列，具体地人IgG序列可以基本上相同。使用人抗体的一个优点在于其在人中是低免疫原性的或非免疫原性的。
抗体或其片段也可以是嵌合的，例如，小鼠-人抗体嵌合体。
可替代地，抗体或其片段源自非人物种，如小鼠。此类非人抗体可以被修饰以增加其与人中天然产生的抗体变体的相似性，因此抗体或其片段可以部分地或完全地人源化。因此，在一个实施例中，抗体或其片段是人源化的。
如本文所描述的抗vδ1抗体或其片段可以用于调节δ可变1链(Vδ1)T细胞。
Vδ1T细胞的调节可以包含：
-扩增Vδ1T细胞，例如，通过选择性增加Vδ1T细胞的数量或促进Vδ1T细胞的存活率；
-刺激Vδ1T细胞，例如，通过增加Vδ1T细胞效力，即增加靶细胞杀伤；
-防止Vδ1T细胞耗竭，例如，通过增加Vδ1T细胞的持久性；
-使Vδ1T细胞脱粒；
-对Vδ1T细胞进行免疫抑制，例如，通过下调Vδ1TCR细胞表面表达，即通过引起Vδ1TCR内化或降低Vδ1TCR蛋白的表达，或阻断Vδ1TCR的结合；
-减少Vδ1T细胞数量，例如，通过抑制Vδ1T细胞增殖或通过诱导Vδ1T细胞死亡(即杀伤Vδ1T细胞)。
Vδ1T细胞的此类调节可以包含例如Vδ1T细胞活化或Vδ1T细胞抑制。在一个实施例中，Vδ1T细胞在向患者施用如本文所定义的抗Vδ1抗体或其片段时被活化。在替代性实施例中，Vδ1T细胞在向患者施用如本文所定义的抗Vδ1抗体或其片段时被抑制。在替代性实施例中，Vδ1T细胞在向患者施用如本文所定义的抗Vδ1抗体或其片段时未被抑制。
靶向表位的抗体
本文提供了与γδTCR的Vδ1链的表位结合的抗体(或其片段)。此类结合可以任选地对γδTCR活性产生影响，如活化或抑制。
在一个实施例中，表位可以γδT细胞的活化表位。“活化”表位可以包含例如刺激TCR功能，如细胞脱粒、TCR下调、细胞毒性、增殖、动员、增加的存活率或对耗竭的抗性、胞内信号传导、细胞因子或生长因子分泌、表型改变或基因表达的改变。例如，活化表位的结合可以刺激γδT细胞群，优选地Vδ1+T细胞群的扩增(即，增殖)。因此，这些抗体可以用于调节γδT细胞活化，并且由此调节免疫应答。因此，在一个实施例中，活化表位的结合使γδTCR下调。在另外的或替代性实施例中，活化表位的结合使γδT细胞的脱粒活化。在进一步另外的或替代性实施例中，活化表位的结合使γδT细胞杀伤活化。
可替代地，抗体(或其片段)可以通过阻止另一抗体或分子的结合或相互作用而具有阻断作用。在一个实施例中，本发明提供了阻断Vδ1并阻止TCR结合(例如，通过空间位阻)的分离的抗体或其片段。通过阻断Vδ1，抗体可以阻止TCR活化和/或信号传导。表位可以是γδT细胞的抑制表位。“抑制”表位可以包含例如阻断TCR功能，由此抑制TCR活化。
表位优选地包含γδTCR的Vδ1链的至少一个胞外部分、可溶性部分、亲水性部分、外部部分或胞质部分。
具体地，表位不包括存在于γδTCR的Vδ1链的高变区，具体地Vδ1链的CDR3中的表位。在优选实施例中，表位位于γδTCR的Vδ1链的非可变区内。将理解的是，此类结合允许对Vδ1链的独特识别，而不受高度可变的TCR序列(具体地CDR3)的限制。可以通过这种方式，仅通过Vδ1链的存在识别各种识别MHC样肽或抗原的γδTCR复合物。如此，将理解的是，可以使用如本文所定义的抗体或其片段识别任何包括Vδ1链的γδTCR，而不管γδTCR的特异性。在一个实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区1-24和/或35-90内的一个或多个氨基酸残基，例如Vδ1链中的不属于CDR1和/或CDR3序列部分的一部分。在一个实施例中，表位不包括SEQ ID NO:1的氨基酸区91-105(CDR3)内的氨基酸残基。
与充分表征的αβT细胞的方式类似，γδT细胞利用一组不同的体细胞重排可变(V)基因、多样性(D)基因、接合(J)基因和恒定(C)基因，尽管与αβT细胞相比，γδT细胞含有较少V区段、D区段和J区段。在一个实施例中，由抗体(或其片段)结合的表位不包括存在于Vδ1链的J区(例如，在人δ1链种系中编码的四个J区之一)：SEQ ID NO:131(J1*0)或132(J2*0)或133(J3*0)或134(J4*0))。在一个实施例中，由抗体(或其片段)结合的表位不包括存在于Vδ1链的C区(例如，SEQ ID NO:135(C1*0)，其含有C端近膜/跨膜区)。在一个实施例中，由抗体(或其片段)结合的表位不包括存在于Vδ1链的N端前导序列(例如，SEQ ID NO:129)中的表位。因此，抗体或片段可能仅在Vδ1链的V区(例如，SEQ ID NO:130)中结合。因此，在一个实施例中，表位由γδTCR的V区(例如，SEQ ID NO:1的氨基酸残1-90)中的表位组成。
相对于源自以下的Vδ1序列以下对表位进行引用：Luoma等人,(2013)《免疫(Immunity)》39:1032-1042中所描述的序列，以及RCSB蛋白质数据库条目：4MNH和3OMZ，如SEQ ID NO:1：
AQKVTQAQSSVSMPVRKAVTLNCLYETSWWSYYIFWYKQLPSKEMIFLIRQGSDEQNAKSGRYSVNFKKAAKSVALTISALQLEDSAKYFCALGESLTRADKLIFGKGTRVTVEPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESS(SEQ ID NO:1)所示。
SEQ ID NO:1表示包括V区(也被称为可变结构域)、D区、J区和TCR恒定区的可溶性TCR。V区包括氨基酸残基1-90，D区包括氨基酸残基91-104，J区包括氨基酸残基105-115，并且恒定区包括氨基酸残基116-209。在V区内，CDR1被定义为SEQ ID NO:1的氨基酸残基25-34，CDR2被定义为SEQ ID NO:1的氨基酸残基50-54，并且CDR3被定义为SEQ ID NO:1的氨基酸残基93-104(Xu等人,《美国国家科学院院刊(PNAS USA)》108(6):2414-2419(2011))。
因此，根据本发明的一个方面，提供了一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段与γδT细胞受体(TCR)的可变δ1(Vδ1)链的表位结合，所述表位包括
(i)SEQ ID NO:1的氨基酸区：3-20；和/或
(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸区：37-77内的一个或多个氨基酸残基。
在另外的实施例中，抗体或其片段另外识别包括SEQ ID NO:128的氨基酸残基1-90表位的多态V区。因此，当定义本文所描述的表位时，SEQ ID NO:1的氨基酸1-90和多态种系变体序列(氨基酸1-90SEQ ID NO:128)可以被认为是可互换的。本发明的抗体可以识别此种系序列的两种变体。举例来说，当陈述如本文所定义的抗体或其片段识别包括SEQ IDNO:1的氨基酸区1-24和/或35-90内的一个或多个氨基酸残基的表位时，这也指SEQ ID NO:128的相同区；具体地SEQ ID NO:128的氨基酸区1-24和/或35-90。
在一个实施例中，抗体或其片段识别SEQ ID NO:1的氨基酸区1-90内的一个或多个氨基酸残基和SEQ ID NO:128中的区1-90的等效定位的氨基酸。更具体地，在一个实施例中，如本文定义的抗体或其片段识别人种系表位，其中所述种系在SEQ ID NO:1的位置71处编码丙氨酸(A)或缬氨酸(V)。
在一个实施例中，表位包括所描述的区内的一个或多个，如两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个氨基酸残基。
在另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区3-20内的一个或多个(如5个或更多个，如10个或更多个)氨基酸残基。在替代性实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区37-77(如氨基酸区50-54)内的一个或多个(如5个或更多个，如10个或更多个)氨基酸残基。在又另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区3-20(如5-20或3-17)内的一个或多个(如5个或更多个，如10个或更多个)氨基酸残基和氨基酸区37-77(如62-77或62-69)内的一个或多个(如5个或更多个，如10个或更多个)氨基酸残基。
将进一步理解的是，所述抗体(或其片段)不需要与所定义范围内的所有氨基酸结合。此类表位可以被称为线性表位。例如，与包括SEQ ID NO:1的氨基酸区5-20内的氨基酸残基的表位结合的抗体可以仅与所述范围内的氨基酸残基中的一个或多个氨基酸残基结合，例如，范围的每一端处的氨基酸残基(即，氨基酸5和20)，任选地包含范围内的氨基酸(即，氨基酸5、9、16和20)。
在一个实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸残基3、5、9、10、12、16、17、20、37、42、50、53、59、62、64、68、69、72或77中的至少一个氨基酸残基。在另外的实施例中，表位包括选自SEQ ID NO:1的氨基酸残基3、5、9、10、12、16、17、20、37、42、50、53、59、62、64、68、69、72或77中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个或十二个氨基酸。
在一个实施例中，表位包括SEQ ID NO:1(或SEQ ID NO:128，如上文所描述的)的以下氨基酸区内的一个或多个氨基酸残基：
(i)3-17；
(ii)5-20；
(iii)37-53；
(iv)50-64；
(v)59-72；
(vi)59-77；
(vii)62-69；和/或
(viii)62-77。
在另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的以下氨基酸区内的一个或多个氨基酸残基：5-20和62-77；50-64；37-53和59-72；59-77；或3-17和62-69。在另外的实施例中，表位由SEQ ID NO:1的以下氨基酸区内的一个或多个氨基酸残基组成：5-20和62-77；50-64；37-53和59-72；59-77；或3-17和62-69。
在另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸残基：3、5、9、10、12、16、17、62、64、68和69，或者适当地由SEQ ID NO:1的氨基酸残基：3、5、9、10、12、16、17、62、64、68和69组成。在另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸残基：5、9、16、20、62、64、72和77，或者适当地由SEQ ID NO:1的氨基酸残基：5、9、16、20、62、64、72和77组成。在又另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸残基：37、42、50、53、59、64、68、69、72、73和77，或者适当地由SEQ ID NO:1的氨基酸残基：37、42、50、53、59、64、68、69、72、73和77组成。在另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸残基：50、53、59、62和64，或者适当地由SEQID NO:1的氨基酸残基：50、53、59、62和64组成。在另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸残基：59、60、68和72，或者适当地由SEQ ID NO:1的氨基酸残基：59、60、68和72。
在一个实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区5-20和/或62-77内的一个或多个氨基酸残基。在另外的实施例中，表位由SEQ ID NO:1的氨基酸区5-20和62-77内的一个或多个氨基酸残基组成。在替代性另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区5-20或62-77内的一个或多个氨基酸残基。具有此类表位的抗体或其片段可以具有1245_P01_E07的一些或全部序列，或者此类抗体或其片段可以源自1245_P01_E07。例如，具有1245_P01_E07的一个或多个CDR序列或1245_P01_E07的VH序列和VL序列之一或两者的抗体或其片段可以结合此类表位。
在一个实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区50-64内的一个或多个氨基酸残基。在另外的实施例中，表位由SEQ ID NO:1的氨基酸区50-64内的一个或多个氨基酸残基组成。具有此类表位的抗体或其片段可以具有1252_P01_C08的一些或全部序列，或者此类抗体或其片段可以源自1252_P01_C08。例如，具有1252_P01_C08的一个或多个CDR序列或1252_P01_C08的VH序列和VL序列之一或两者的抗体或其片段可以结合此类表位。
在一个实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区37-53和/或59-77内的一个或多个氨基酸残基。在另外的实施例中，表位由SEQ ID NO:1的氨基酸区37-53和59-77内的一个或多个氨基酸残基组成。在替代性另外的实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区37-53或59-77内的一个或多个氨基酸残基。具有此类表位的抗体或其片段可以具有1245_P02_G04的一些或全部序列，或者此类抗体或其片段可以源自1245_P02_G04。例如，具有1245_P02_G04的一个或多个CDR序列或1245_P02_G04的VH序列和VL序列之一或两者的抗体或其片段可以结合此类表位。
在一个实施例中，表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区59-72内的一个或多个氨基酸残基。在另外的实施例中，表位由SEQ ID NO:1的氨基酸区59-72内的一个或多个氨基酸残基组成。具有此类表位的抗体或其片段可以具有1251_P02_C05的一些或全部序列，或者此类抗体或其片段可以源自1251_P02_C05。例如，具有1251_P02_C05的一个或多个CDR序列或1251_P02_C05的VH序列和VL序列之一或两者的抗体或其片段可以结合此类表位。
在一个实施例中，表位不包括SEQ ID NO:1的氨基酸区11-21内的氨基酸残基。在一个实施例中，表位不包括SEQ ID NO:1的氨基酸区21-28内的氨基酸残基。在一个实施例中，表位不包括SEQ ID NO:1的氨基酸区59和60内的氨基酸残基。在一个实施例中，表位不包括SEQ ID NO:1的氨基酸区67-82内的氨基酸残基。
在一个实施例中，表位与由可商购获得的抗Vδ1抗体，如TS-1或TS8.2结合的表位不同。如WO 2017197347中所描述的，当δ1链包含Vδ1J1序列和Vδ1J2序列但不包含Vδ1J3链时，检测到TS-1和TS8.2与可溶性TCR的结合，表明TS-1和TS8.2的结合涉及δJ1区和δJ2区中的关键残基。
本文对“在……内”的提及包含所定义范围的极限。例如，“在氨基酸区5-20内”是指从并包含残基5直到并包含残基20的所有氨基酸残基。
本领域已知多种技术来确立哪个表位由抗体结合。示例性技术包含例如常规交叉阻断测定、丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析、肽裂解分析、晶体学研究和NMR分析。另外，可以采用如抗原的表位切除、表位提取和化学修饰等方法。可以用于鉴定与抗体相互作用的多肽内的氨基酸的另一种方法是通过质谱法检测的氢/氘交换(如实例9所描述的)。一般而言，氢/氘交换方法涉及对所关注的蛋白质进行氘标记，然后将抗体与经氘标记的蛋白质结合。接下来，将蛋白质/抗体复合物转移到水中，并且受抗体复合物保护的氨基酸内的可交换质子以比并非是界面的一部分的氨基酸内的可交换质子慢的速率经历氢-氘反交换。因此，形成蛋白质/抗体界面的一部分的氨基酸可以保留氘，并且因此表现出与并未包含在界面中的氨基酸相比相对较高的质量。在解离抗体后，对靶蛋白进行蛋白酶切割和质谱分析，由此揭示与抗体相互作用的特定氨基酸相对应的经氘标记的残基。
抗体序列
本发明的分离的抗Vδ1抗体或其片段可以参考其的CDR序列进行描述。
根据本发明的一个方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段包括以下中的一个或多个：
包括与SEQ ID NO:2-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3；
包括与SEQ ID NO:26-37和序列：A1-A12中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2；和/或
包括与SEQ ID NO:38-61中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
根据本发明的一个方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段包括包含与SEQ ID NO:2-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括包含与SEQ ID NO:26-37和序列：A1-A12(表2)中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2。在一个实施例中，抗体或其片段包括包含与SEQ ID NO:38-61中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
在一个实施例中，抗体或其片段包括包含与SEQ ID NO:2-25中的任何一个具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％序列同一性的序列的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括包含与SEQ ID NO:26-37和序列：A1-A12(表2)中的任何一个具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％序列同一性的序列的CDR2。在一个实施例中，抗体或其片段包括包含与SEQ ID NO:38-61中的任何一个具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％序列同一性的序列的CDR1。
在一个实施例中，抗体或其片段包括由与SEQ ID NO:2-25中的任何一个具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％序列同一性的序列组成的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括由与SEQ ID NO:26-37和序列：A1-A12(表2)中的任何一个具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％序列同一性的序列组成的CDR2。在一个实施例中，抗体或其片段包括由与SEQ ID NO:38-61中的任何一个具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％序列同一性的序列组成的CDR1。
根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:2-13中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:14-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:2-13中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:14-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列组成的CDR3。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ IDNO:2-13中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQID NO:14-25中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:2-13中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:14-25中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列组成的CDR3。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ IDNO:2-13中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQID NO:14-25中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:2-13中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:14-25中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列组成的CDR3。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括包含与SEQ IDNO:2-13中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQID NO:14-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:2-13中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:14-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列组成的CDR3。
根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:2-7，具体地SEQ ID NO:2-6，如SEQ ID NO:2、3或4中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:14-19，具体地SEQ ID NO:14-18，如SEQ ID NO:14、15或16中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:2-7，具体地SEQ ID NO:2-6，如SEQ ID NO:2、3或4中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:14-19，具体地SEQ ID NO:14-18，如SEQ ID NO:14、15或16中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列组成的CDR3。
根据本发明的特定方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:2-7，具体地SEQ ID NO:2-6，如SEQ ID NO:2、3或4中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:14-19，具体地SEQ ID NO:14-18，如SEQ ID NO:14、15或16中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列的CDR3。根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:2-7，具体地SEQ ID NO:2-6，如SEQ ID NO:2、3或4中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:14-19，具体地SEQ ID NO:14-18，如SEQ ID NO:14、15或16中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列组成的CDR3。
根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:2-7，具体地SEQ ID NO:2-6，如SEQ ID NO:2、3或4中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:14-19，具体地SEQ ID NO:14-18，如SEQ ID NO:14、15或16中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列的CDR3。根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:2-7，具体地SEQ ID NO:2-6，如SEQ ID NO:2、3或4中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:14-19，具体地SEQ ID NO:14-18，如SEQ ID NO:14、15或16中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列组成的CDR3。
根据本发明的特定方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:8-13，具体地SEQ ID NO:8、9、10或11中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:20-25，具体地SEQ ID NO:20、21、22或23中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。根据本发明的另一方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:8-13，具体地SEQ ID NO:8、9、10或11中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:20-25，具体地SEQ ID NO:20、21、22或23中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列组成的CDR3。
根据本发明的特定方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:8-13，具体地SEQ ID NO:8、9、10或11中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:20-25，具体地SEQ ID NO:20、21、22或23中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列的CDR3。根据本发明的另一方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:8-13，具体地SEQ ID NO:8、9、10或11中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:20-25，具体地SEQ ID NO:20、21、22或23中的任何一个具有至少90％序列同一性的序列组成的CDR3。
根据本发明的特定方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:8-13，具体地SEQ ID NO:8、9、10或11中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列的CDR3，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:20-25，具体地SEQ ID NO:20、21、22或23中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列的CDR3。根据本发明的另一方面，提供了一种抗体或其片段，其包括VH区和/或VL区，所述VH区包括由与SEQ ID NO:8-13，具体地SEQ ID NO:8、9、10或11中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列组成的CDR3，所述VL区包括由与SEQ ID NO:20-25，具体地SEQ ID NO:20、21、22或23中的任何一个具有至少95％序列同一性的序列组成的CDR3。
本文提及“至少80％”或“80％或更高”的实施例将被理解为包含等于或大于80％的所有值，如85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一个实施例中，本发明的抗体或片段包括与指定序列具有至少85％，如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。
代替百分比序列同一性，还可以用一个或多个氨基酸改变来定义实施例，例如，一个或多个添加、取代和/或缺失。在一个实施例中，序列可以包括至多五个氨基酸变化，如至多三个氨基酸变化，具体地至多两个氨基酸变化。在另外的实施例中，序列可以包括至多五个氨基酸取代，如至多三个氨基酸取代，具体地至多一个或两个氨基酸取代。例如，本发明的抗体或其片段的CDR3包括与SEQ ID NO:2-25中的任何一个相比具有不超过2个、更适当地不超过1个取代的序列或更适当地由其组成。
CDR1、CDR2或CDR3的与其在SEQ ID NO:2-61和序列：A1-A12中的对应残基不同的任何残基适当地是相对于其相应残基的保守取代。例如，CDR3的与其在SEQ ID NO:2-25中的对应残基不同的任何残基是相对于其对应残基的保守取代。
在一个实施例中，抗体或其片段包括：
(i)包括包含与SEQ ID NO:2-13中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3的VH区；
(ii)包括包含与SEQ ID NO:26-37中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2的VH区；
(iii)包括包含与SEQ ID NO:38-49中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1的VH区；
(iv)包括包含与SEQ ID NO:14-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3的VL区；
(v)包括包含与序列：A1-A12中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2的VL区；和/或
(vi)包括包含与SEQ ID NO:50-61中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1的VL区。
在一个实施例中，抗体或其片段包括具有以下的重链：
(i)包括包含与SEQ ID NO:2-13中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3的VH区；
(ii)包括包含与SEQ ID NO:26-37中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2的VH区；以及
(iii)包括包含与SEQ ID NO:38-49中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1的VH区。
在一个实施例中，抗体或其片段包括具有以下的轻链：
(i)包括包含与SEQ ID NO:14-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3的VL区；
(ii)包括包含与序列：A1-A12中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2的VL区；以及
(iii)包括包含与SEQ ID NO:50-61中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1的VL区。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区(由其组成)，所述VH区包括包含与SEQID NO:2、3、4、5或6，如2、3、4或5，具体地2、3或4中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区(由其组成)，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:26、27、28、29或30，如26、27、28或29，具体地26、27或28中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区(由其组成)，所述VH区包括包含与SEQID NO:38、39、40、41或42，如38、39、40或41，具体地38、39或40中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区(由其组成)，所述VH区包括包含与SEQID NO:8、9、10或11中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区(由其组成)，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:32、33、34或35中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2。在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区(由其组成)，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:44、45、46或47中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:2的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:26的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:38的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQID NO:2的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:26的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:38的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:3的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:27的CDR2序列；以及包括SEQ ID NO:39的CDR1序列。在一个实施例中，CDR3由SEQ IDNO:3的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:27的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:39的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:4的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:28的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:40的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQID NO:4的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:28的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:40的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:5的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:29的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:41的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQID NO:5的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:29的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:41的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:6的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:30的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:42的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQID NO:6的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:30的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:42的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:8的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:32的CDR2序列；以及包括SEQ ID NO:44的CDR1序列。在一个实施例中，CDR3由SEQ IDNO:8的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:32的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:44的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:9的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:33的CDR2序列；以及包括SEQ ID NO:45的CDR1序列。在一个实施例中，CDR3由SEQ IDNO:9的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:33的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:45的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:10的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:34的CDR2序列；以及包括SEQ ID NO:46的CDR1序列。在一个实施例中，CDR3由SEQ IDNO:10的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:34的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:47的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:11的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:35的CDR2序列；以及包括SEQ ID NO:47的CDR1序列。在一个实施例中，CDR3由SEQ IDNO:11的序列组成，CDR2由SEQ ID NO:35的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:47的序列组成。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VL区(由其组成)，所述VL区包括包含与SEQID NO:14-25，如SEQ ID NO:14、15、16、17或18，如SEQ ID NO:14、15、16或17，具体地SEQ IDNO:14、15或16中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。在一个实施例中，抗体或其片段包括VL区(由其组成)，所述VL区包括包含与序列：A1-A12(表2)，如序列：A1、A2、A3、A4或A5，如A1、A2、A3或A4，具体地A1、A2或A3中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2。在一个实施例中，抗体或其片段包括VL区(由其组成)，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:50-61，如SEQ ID NO:50、51、52、53或54，如50、51、52或53，具体地50、51或52中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:14的序列的CDR3；包括序列：A1的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:50的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:14的序列组成，CDR2由序列：A1的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:50的序列组成。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:15的序列的CDR3；包括序列：A2的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:51的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:15的序列组成，CDR2由序列：A2的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:51的序列组成。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:16的序列的CDR3；包括序列：A3的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:52的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:16的序列组成，CDR2由序列：A3的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:52的序列组成。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:17的序列的CDR3；包括序列：A4的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:53的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:17的序列组成，CDR2由序列：A4的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:53的序列组成。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:18的序列的CDR3；包括序列：A5的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:54的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:18的序列组成，CDR2由序列：A5的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:54的序列组成。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:20的序列的CDR3；包括序列：A7的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:56的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:20的序列组成，CDR2由序列：A7的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:56的序列组成。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:21的序列的CDR3；包括序列：A8的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:57的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:21的序列组成，CDR2由序列：A8的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:57的序列组成。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:22的序列的CDR3；包括序列：A9的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:58的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:22的序列组成，CDR2由序列：A9的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:58的序列组成。
在一个实施例中，VL区包括以下：包括SEQ ID NO:23的序列的CDR3；包括序列：A10的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:59的序列的CDR1。在一个实施例中，CDR3由SEQ ID NO:23的序列组成，CDR2由序列：A10的序列组成，并且CDR1由SEQ ID NO:59的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:2的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:26的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:38的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:14的序列的CDR3；包括序列：A1的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:50的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:2的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:26的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:38的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:14的序列组成，LCDR2由序列：A1的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:50的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:3的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:27的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:39的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:15的序列的CDR3；包括序列：A2的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:51的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:3的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:27的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:39的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:15的序列组成，LCDR2由序列：A2的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:51的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:4的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:28的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:40的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:16的序列的CDR3；包括序列：A3的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:52的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:4的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:28的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:40的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:16的序列组成，LCDR2由序列：A3的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:52的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:5的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:29的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:41的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:17的序列的CDR3；包括序列：A4的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:53的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:5的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:29的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:41的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:17的序列组成，LCDR2由序列：A4的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:53的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:6的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:30的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:42的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:18的序列的CDR3；包括序列：A5的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:54的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:6的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:30的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:42的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:18的序列组成，LCDR2由序列：A5的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:54的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:7的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:31的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:43的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:19的序列的CDR3；包括序列：A6的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:55的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:7的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:31的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:43的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:19的序列组成，LCDR2由序列：A6的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:55的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:8的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:32的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:44的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:20的序列的CDR3；包括序列：A7的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:56的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:8的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:32的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:44的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:20的序列组成，LCDR2由序列：A7的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:56的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:9的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:33的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:45的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:21的序列的CDR3；包括序列：A8的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:57的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:9的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:33的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:45的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:21的序列组成，LCDR2由序列：A8的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:57的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:10的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:34的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:46的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:22的序列的CDR3；包括序列：A9的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:58的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:10的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:34的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:46的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:22的序列组成，LCDR2由序列：A9的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:58的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:11的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:35的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:47的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:23的序列的CDR3；包括序列：A10的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:59的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:11的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:35的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:47的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:23的序列组成，LCDR2由序列：A10的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:59的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:12的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:36的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:48的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:24的序列的CDR3；包括序列：A11的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:60的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:12的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:36的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:48的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:24的序列组成，LCDR2由序列：A11的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:60的序列组成。
在一个实施例中，VH区包括以下：包括SEQ ID NO:13的序列的CDR3；包括SEQ IDNO:37的序列的CDR2；包括SEQ ID NO:49的序列的CDR1；并且VL区包括以下：包括SEQ IDNO:25的序列的CDR3；包括序列：A12的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:61的序列的CDR1。在一个实施例中，HCDR3由SEQ ID NO:13的序列组成，HCDR2由SEQ ID NO:37的序列组成，HCDR1由SEQ ID NO:49的序列组成，LCDR3由SEQ ID NO:25的序列组成，LCDR2由序列：A12的序列组成，并且LCDR1由SEQ ID NO:61的序列组成。
在一个实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的一个或多个CDR序列。在另外的实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1252_P01_C08的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1245_P01_E07的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1245_P02_G04的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1245_P02_B07的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1251_P02_C05的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1139_P01_E04的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1245_P02_F07的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1245_P01_G06的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1245_P01_G09的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1138_P01_B09的一个或多个(如所有)CDR序列。在替代性实施例中，抗体或其片段包括如表2中所描述的克隆1251_P02_G10的一个或多个(如所有)CDR序列。
适当地，上文所陈述的VH区和VL区各自包括四个框架区(FR1-FR4)。在一个实施例中，抗体或其片段包括框架区(例如，FR1、FR2、FR3和/或FR4)，所述框架区包括与SEQ IDNO:62-85中的任何一个中的框架区具有至少80％序列同一性的序列。在一个实施例中，抗体或其片段包括框架区(例如，FR1、FR2、FR3和/或FR4)，所述框架区包括与SEQ ID NO:62-85中的任何一个中的框架区具有至少90％，如至少95％、97％或99％序列同一性的序列。在一个实施例中，抗体或其片段包括框架区(例如，FR1、FR2、FR3和/或FR4)，所述框架区包括SEQ ID NO:62-85中的任何一个中的序列。在一个实施例中，抗体或其片段包括框架区(例如，FR1、FR2、FR3和/或FR4)，所述框架区由SEQ ID NO:62-85中的任何一个中的序列组成。
本文所描述的抗体可以由其完整的轻链可变序列和/或重链可变序列定义。因此，根据本发明的另外的方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段包括与SEQ ID NO:62-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。根据本发明的另外的方面，提供了一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，所述分离的抗Vδ1抗体或其片段由与SEQ ID NO:62-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区包括与SEQ ID NO:62-73中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区由与SEQ ID NO:62-73中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。在另外的实施例中，VH区包括与SEQ ID NO:62、63、64、65或66，如62、63、64或65，具体地62、63或64中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的氨基酸序列。在另外的实施例中，VH区由与SEQ ID NO:62、63、64、65或66，如SEQ ID NO:62、63、64或65，具体地SEQ IDNO:62、63或64中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。在另外的实施例中，VH区包括与SEQ ID NO:68、69、70、71、72或73，如SEQ ID NO:68、69、70或71中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在另外的实施例中，VH区由与SEQ ID NO:68、69、70、71、72或73，如SEQ ID NO:68、69、70或71中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区包括与SEQ ID NO:74-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区由与SEQ ID NO:74-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。在另外的实施例中，VL区包括与SEQ ID NO:74、75、76、77或78，如74、75、76或77，具体地74、75或76中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的氨基酸序列。在另外的实施例中，VL区由与SEQ ID NO:74、75、76、77或78，如74、75、76或77，具体地74、75或76中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的氨基酸序列组成。在另外的实施例中，VL区包括与SEQ ID NO:81、82、83、84或85，如SEQ ID NO:80、81、82或83中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在另外的实施例中，VL区由与SEQ ID NO:81、82、83、84或85，如SEQID NO:80、81、82或83中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。
在另外的实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括与SEQ ID NO:62-73中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，所述VL区包括包含与SEQ IDNO:74-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在另外的实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区由与SEQ ID NO:62-73中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:74-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区包括SEQ ID NO:63的氨基酸序列(1252_P01_C08)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区包括SEQ IDNO:62的氨基酸序列(1245_P01_E07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区包括SEQ ID NO:64的氨基酸序列(1245_P02_G04)。在一个实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:68的氨基酸序列(1139_P01_E04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区包括SEQ ID NO:69的氨基酸序列(1245_P02_F07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区包括SEQ ID NO:70的氨基酸序列(1245_P01_G06)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区包括SEQ ID NO:71的氨基酸序列(1245_P01_G09)。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区由SEQ ID NO:63的氨基酸序列组成(1252_P01_C08)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区由SEQ IDNO:62的氨基酸序列组成(1245_P01_E07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区由SEQ ID NO:64的氨基酸序列组成(1245_P02_G04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区由SEQ ID NO:68的氨基酸序列组成(1139_P01_E04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区由SEQ ID NO:69的氨基酸序列组成(1245_P02_F07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区由SEQ ID NO:70的氨基酸序列组成(1245_P01_G06)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区，所述VH区由SEQ ID NO:71的氨基酸序列组成(1245_P01_G09)。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列(1252_P01_C08)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区包括SEQ IDNO:74的氨基酸序列(1245_P01_E07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列(1245_P02_G04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列(1139_P01_E04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列(1245_P02_F07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区包括SEQ ID NO:82的氨基酸序列(1245_P01_G06)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区包括SEQ ID NO:83的氨基酸序列组成(1245_P01_G09)。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区由SEQ ID NO:75的氨基酸序列组成(1252_P01_C08)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区由SEQ IDNO:74的氨基酸序列组成(1245_P01_E07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区由SEQ ID NO:76的氨基酸序列组成(1245_P02_G04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区由SEQ ID NO:80的氨基酸序列组成(1139_P01_E04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区由SEQ ID NO:81的氨基酸序列组成(1245_P02_F07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区由SEQ ID NO:82的氨基酸序列组成(1245_P01_G06)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VL区，所述VL区由SEQ ID NO:83的氨基酸序列组成(1245_P01_G09)。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:63的氨基酸序列(1252_P01_C08)，所述VL区包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列(1252_P01_C08)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:62的氨基酸序列(1245_P01_E07)，所述VL区包括SEQ ID NO:74的氨基酸序列(1245_P01_E07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:64的氨基酸序列(1245_P02_G04)，所述VL区包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列(1245_P02_G04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:68的氨基酸序列(1139_P01_E04)，所述VL区包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列(1139_P01_E04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:69的氨基酸序列(1245_P02_F07)，所述VL区包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列(1245_P02_F07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:70的氨基酸序列(1245_P01_G06)，所述VL区包括SEQ ID NO:82的氨基酸序列(1245_P01_G06)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:71的氨基酸序列(1245_P01_G06)，所述VL区包括SEQ ID NO:83的氨基酸序列(1245_P01_G09)。
在一个实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区由SEQ ID NO:63的氨基酸序列组成(1252_P01_C08)，所述VL区由SEQ ID NO:75的氨基酸序列组成(1252_P01_C08)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区由SEQ ID NO:62的氨基酸序列组成(1245_P01_E07)，所述VL区由SEQ ID NO:74的氨基酸序列组成(1245_P01_E07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区由SEQ ID NO:64的氨基酸序列组成(1245_P02_G04)，所述VL区由SEQ ID NO:76的氨基酸序列组成(1245_P02_G04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区由SEQ ID NO:68的氨基酸序列组成(1139_P01_E04)，所述VL区由SEQ ID NO:80的氨基酸序列组成(1139_P01_E04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区由SEQ ID NO:69的氨基酸序列组成(1245_P02_F07)，所述VL区由SEQ ID NO:81的氨基酸序列组成(1245_P02_F07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区由SEQ ID NO:70的氨基酸序列组成(1245_P01_G06)，所述VL区由SEQ ID NO:82的氨基酸序列组成(1245_P01_G06)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括VH区和VL区，所述VH区由SEQ ID NO:71的氨基酸序列组成(1245_P01_G06)，所述VL区由SEQ ID NO:83的氨基酸序列组成(1245_P01_G09)。
对于包括VH区和VL区两者的片段，其可以共价连接(例如，通过二硫键或接头)或非共价连接。本文所描述的抗体片段可以包括scFv，即包括通过接头接合的VH区和VL区的片段。在一个实施例中，VH区和VL区通过(例如，合成的)多肽接头接合。多肽接头可以包括(Gly4Ser)n接头，其中n＝1到8，例如，2、3、4、5或7。多肽接头可以包括[(Gly4Ser)n(Gly3AlaSer)m]p接头，其中n＝1到8，例如，2、3、4、5或7，m＝1到8，例如，0、1、2或3，并且p＝1到8，例如，1、2或3。在另外的实施例中，接头包括SEQ ID NO:98。在另外的实施例中，接头由SEQ ID NO:98组成。
在一个实施例中，抗体或其片段包括与SEQ ID NO:86-97中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在另外的实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:86-97中的任何一个的氨基酸序列。在又另外的实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:87的氨基酸序列(1252_P01_C08)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:86的氨基酸序列(1245_P01_E07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:88的氨基酸序列(1245_P02_G04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:92的氨基酸序列(1139_P01_E04)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:93的氨基酸序列(1245_P02_F07)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:94的氨基酸序列(1245_P01_G06)。在替代性实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:95的氨基酸序列(1245_P01_G09)。
在一个实施例中，抗体或其片段由与SEQ ID NO:86-97中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。在另外的实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:86-97中的任何一个的氨基酸序列组成。在又另外的实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:87的氨基酸序列组成(1252_P01_C08)。在替代性实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:86的氨基酸序列组成(1245_P01_E07)。在替代性实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:88的氨基酸序列组成(1245_P02_G04)。在替代性实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:92的氨基酸序列组成(1139_P01_E04)。在替代性实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:组成93的氨基酸序列组成(1245_P02_F07)。在替代性实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:94的氨基酸序列组成(1245_P01_G06)。在替代性实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:95的氨基酸序列组成(1245_P01_G09)。
本领域技术人员将理解，scFv构建体可以被设计成和制备成包含N端和C端修饰以辅助翻译、纯化和检测。例如，在scFv序列的N端处，可以在典型VH序列之前包含另外的甲硫氨酸残基和/或丙氨酸氨基酸残基(例如，起始QVQ或EVQ)。在C端(即，根据IMGT定义的典型VL结构域序列结束的C端)处，可以包含另外的序列，如(i)恒定结构域的部分序列和/或(ii)另外的合成序列，包含标签，如His标签和Flag标签，以辅助纯化和检测。在一个实施例中，将SEQ ID NO:124添加到SEQ ID NO:86、88-90、92-97中的任何一个的C端。在一个实施例中，将SEQ ID NO:125添加到SEQ ID NO:86、88-90、92-97中的任何一个的C端。在一个实施例中，将SEQ ID NO:126添加到SEQ ID NO:87或91中的任何一个的C端。在一个实施例中，将SEQ ID NO:127添加到SEQ ID NO:87或91中的任何一个的C端。众所周知，如果采用替代性scFv设计、翻译、纯化或检测策略，所述scFv N端或C端序列是任选的并且可以被去除、修饰或取代。
如本文所描述的，抗体可以呈任何格式。在优选实施例中，抗体呈IgG1格式。因此，在一个实施例中，抗体或其片段包括与SEQ ID NO:111-122中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在另外的实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:111-122中的任何一个的氨基酸序列。在又另外的实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:111-116，如SEQID NO:111-113和116中的氨基酸序列。在又另外的实施例中，抗体或其片段包括SEQ IDNO:117-122，如SEQ ID NO:117-120中的氨基酸序列。在又另外的实施例中，抗体或其片段包括SEQ ID NO:111、112、116-120，如SEQ ID NO:111、112或116或SEQ ID NO:117-120中的氨基酸序列。
在一个实施例中，抗体或其片段由与SEQ ID NO:111-122中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。在另外的实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:111-122中的任何一个的氨基酸序列组成。在又另外的实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:111-116，如SEQ ID NO:111-113和116中的氨基酸序列组成。在又另外的实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:117-122，如SEQ ID NO:117-120中的氨基酸序列组成。在又另外的实施例中，抗体或其片段由SEQ ID NO:111、112、116-120，如SEQ ID NO:111、112或116或SEQID NO:117-120中的氨基酸序列组成。
在一个实施例中，抗体与如本文所定义的抗体或其片段结合于相同或基本上相同的表位或者与所述抗体或其片段竞争。通过使用本领域已知的常规方法，可以容易地确定抗体是否与参考抗Vδ1抗体结合于相同的表位或者与所述参考抗Vδ1抗体竞争结合。例如，为了确定测试抗体是否与本发明的参考抗Vδ1抗体结合于相同的表位，使参考抗体在饱和条件下与Vδ1蛋白或肽结合。接下来，评估测试抗体与Vδ1链结合的能力。如果在用参考抗Vδ1抗体进行饱和结合后，测试抗体能够与Vδ1结合，则可以得出结论，测试抗体与参考抗Vδ1抗体结合于不同的表位。另一方面，如果在用参考抗Vδ1抗体进行饱和结合后，测试抗体不能与Vδ1链结合，则测试抗体可以与和由本发明的参考抗Vδ1抗体结合的表位相同的表位结合。
本发明还包含与如本文所定义的抗体或其片段竞争与Vδ1结合的抗Vδ1抗体，或具有本文所描述的示例性抗体中的任何示例性抗体的CDR序列的抗体。例如，可以用本发明的抗体执行竞争性测定，以便确定哪些蛋白质、抗体和其它拮抗剂与本发明的抗体竞争与Vδ1链结合和/或共享表位。这些测定是本领域技术人员容易知道的；他们评估拮抗剂或配体之间对蛋白质上有限数量的结合位点的竞争，例如，Vδ1。抗体(或其片段)在竞争之前或之后是固定或不溶的，并且与Vδ1链结合的样品与未结合的样品例如，通过倾析(其中抗体是预先不溶的)或通过离心(其中抗体在竞争性反应后沉淀)分离。而且，竞争性结合可以通过功能是否因抗体与蛋白质的结合或缺乏所述结合而改变来确定，例如，抗体分子是否抑制或增强例如标记的酶活性。如本领域已知和本文所描述的，可以使用ELISA和其它功能测定。
如果两个抗体中的每个抗体竞争性地抑制(阻断)另一个与靶抗原的结合，则所述两个抗体与相同或重叠的表位结合。换言之，一个抗体的1倍、5倍、10倍、20倍或100倍过量将另一种抗体的结合抑制至少50％，但优选地75％、90％或者甚至99％，如在竞争性结合测定中所测量的。可替代地，如果靶抗原中减少或消除一种抗体的结合的基本上所有氨基酸突变减少或消除另一种的结合，则两种抗体具有同一表位。
然后可以执行另外的常规实验(例如，肽突变和结合分析)，以确认所观察到的测试抗体的结合缺乏是否实际上是由于与参考抗体结合于相同的表位或者是否是空间阻断(或另一种现象)导致所观察到的结合缺乏。可以使用ELISA、RIA、表面等离子体共振、流式细胞术或本领域可用的任何其它定量或定性抗体结合测定执行这种实验。
在一些实施例中，抗体或其片段通过改变连接到Asn 297(EU编号方案)的糖而含有经修饰的效应子功能。在另外的所述修饰中，Asn 297是未岩藻糖基化或者表现出降低的岩藻糖基化(即，去岩藻糖基化的抗体或非岩藻糖基化的抗体)。岩藻糖基化包含将糖岩藻糖添加到分子中，例如，将岩藻糖与N-聚糖、O-聚糖和糖脂连接。因此，在去岩藻糖基化抗体中，岩藻糖不与恒定区的糖链连接。抗体可以被修饰以预防或抑制抗体的岩藻糖基化。通常，糖基化修饰涉及通过靶向工程化或通过靶向或偶然宿主或克隆选择在含有替代性糖基化加工能力的宿主细胞中表达所述抗体或其片段(例如，参见实例13)。这些和其它效应子修饰在最近的综述中进行了进一步讨论，如Xinhua Wang等人,(2018)《蛋白质与细胞(Protein&Cell)》9:63-73和Pereira等人,(2018)mAb 10(5):693-711，并且其特此并入。
抗体序列修饰
抗体及其片段可以使用已知方法来修饰。本领域技术人员可以容易地并入对本文所描述的抗体分子进行的序列修饰。以下实例是非限制性的。
在从噬菌体文库中发现抗体和恢复序列期间，可以通过亚克隆将期望的抗体可变结构域重新格式化到全长IgG中。为了加速这一过程，通常使用限制酶转移可变结构域。这些独特的限制性位点可能会引入另外的/替代性氨基酸并远离典型序列(例如可以在国际\ImMunoGeneTics[IMGT]信息系统中找到此类典型序列，参见http://www.imgt.org)。这些可以引入作为κ轻链序列修饰或λ轻链序列修饰。
κ轻链修饰
在重新格式化到全长IgG中期间，可以使用限制性位点(例如，Nhe1-Not1)克隆可变κ轻链可变序列。更具体地，在κ轻链N端处，引入了另外的Ala-Ser序列以支持克隆。优选地，然后在进一步开发期间去除此另外的AS序列，以产生典型N端序列。因此，在一个实施例中，本文所描述的含有κ轻链的抗体在其N端处不含有AS序列，即SEQ ID NO:74、76-78和80-85不包括初始AS序列。在另外的实施例中，SEQ ID NO:74和76-78不包括初始AS序列。应当理解，此实施例也适用于本文包含的含有此序列的其它序列(例如，SEQ ID NO:86、88-90和92-97)。
可以进行另外的氨基酸改变以支持克隆。例如，对于本文所描述的抗体，在κ轻链可变结构域/恒定结构域边界处引入缬氨酸到丙氨酸改变以支持克隆。这产生了κ恒定结构域修饰。具体地，这会导致恒定结构域以RTAAAPS开始(从NotI限制性位点开始)。优选地，此序列可以在进一步开发期间被修饰以产生以RTVAAPS开始的典型κ轻链恒定区。因此，在一个实施例中，本文所描述的含有κ轻链的抗体含有以序列RTV开始的恒定结构域。因此，在一个实施例中，SEQ ID NO:111-114和117-122的序列RTAAAPS被序列RTVAAPS置换。
λ轻链修饰
与上文的κ实例类似，在重新格式化到全长IgG中期间，也可以通过引入限制性位点(例如，Nhe1-Not1)来克隆λ轻链可变结构域。更具体地，在λ轻链N端处，可以引入另外的Ala-Ser序列以支持克隆。优选地，然后在进一步开发期间去除此另外的AS序列，以产生典型N端序列。因此，在一个实施例中，本文所描述的含有λ轻链的抗体在其N端处不含有AS序列，即SEQ ID NO:75和79不包括初始AS序列。应当理解，此实施例也适用于本文包含的含有此序列的其它序列(例如，SEQ ID NO:87、91、115和116)。在一个实施例中，SEQ ID NO:75不含有最初的六个残基，即去除了ASSYEL序列。
作为另一个实例，对于本文所描述的抗体，在λ轻链可变结构域/恒定结构域边界处引入赖氨酸到丙氨酸的序列改变以支持克隆。这产生了λ恒定结构域修饰。具体地，这会导致恒定结构域以GQPAAAPS开始(从NotI限制性位点开始)。优选地，此序列可以在进一步开发期间被修饰以产生以GQPKAAPS开始的典型λ轻恒定区。因此，在一个实施例中，本文所描述的含有λ轻链的抗体含有以序列GQPK开始的恒定结构域。因此，在一个实施例中，SEQID NO:115或116的序列GQPAAAPS被序列GQPKAAPS置换。
重链修饰
通常，人可变重链序列以碱性谷氨酰胺(Q)或酸性谷氨酸(E)开始。然而，然后已知这两种序列都会转化为酸性氨基酸残基焦谷氨酸(pE)。Q到pE的转化导致抗体的电荷发生改变，而E到pE的转化不会改变抗体的电荷。因此，为了避免随时间推移的可变电荷变化，一个选项是首先将起始重链序列从Q修饰为E。因此，在一个实施例中，本文所描述的抗体的重链在N端处含有Q到E修饰。具体地，SEQ ID NO:62、64和/或67-71的起始残基可以从Q修饰为E。将理解的是，此实施例也适用于本文包含的含有此序列的其它序列(例如，SEQ ID NO:86、88、91-97和111、112、115、117-120)。
此外，IgG1恒定结构域的C端以PGK结束。然而，末端碱性赖氨酸(K)通常在表达期间被切割(例如，在CHO细胞中)。这进而通过C端赖氨酸残基的不同损失导致抗体的电荷改变。因此，一个选项是首先去除赖氨酸，从而产生以PG结束的统一且一致的重链C端序列。因此，在一个实施例中，本文所描述的抗体的重链具有从其C端去除的末端K。具体地，本发明的抗体可以包括其中末端赖氨酸残基已被去除的SEQ ID NO:111-122中的任何一个。
任选的同种异型修饰
在抗体发现期间，可以采用特定的人同种异型。任选地，抗体可以在开发期间转换为不同的人同种异型。作为非限制性实例，对于κ链，存在被指定为Km1、Km1,2和Km3的三个人同种异型，其定义了三个Km等位基因(使用同种异型编号)：Km1与缬氨酸153(IMGTV45.1)和亮氨酸191(IMGT L101)相关；Km1,2与丙氨酸153(IMGT A45.1)和亮氨酸191(IMGTL101)相关；并且Km3与丙氨酸153(IMGT A45.1)和缬氨酸191(IMGT V101)相关。任选地，因此可以通过标准克隆方法将序列从一种同种异型修饰为另一种同种异型。例如，L191V(IMGT L101V)改变将Km1,2同种异型转化为Km3同种异型。对于此类同种异型的另外的参考，参见Jefferis和Lefranc(2009)MAbs 1(4):332-8，其通过引用并入本文中。
因此，在一个实施例中，本文所描述的抗体含有源自相同基因的另一种人同种异型的氨基酸取代。在另外的实施例中，抗体含有对κ链的L191V(IMGT L101V)取代，以将c-结构域从km1,2转化为km3同种异型。
抗体结合
本发明的抗体或其片段可以以如通过表面等离子体共振测量的小于1.5×10-7M(即，150nM)的结合亲和力(KD)与γδTCR的Vδ1链结合。在优选实施例中，KD小于1.5×10-7M(即150nM)。在另外的实施例中，KD为1.3×10-7M(即，130nM)或更小，如1.0×10-7M(即，100nM)或更小。在又另外的实施例中，KD小于5.0×10-8M(即，50nM)，如小于4.0×10-8M(即，40nM)、小于3.0×10-8M(即，30nM)或小于2.0×10-8M(即，20nM)。例如，根据一个方面，提供了一种人抗Vδ1抗体，所述人抗Vδ1抗体以如通过表面等离子体共振测量的小于1.5×10-7M(即，150nM)的结合亲和力(KD)与γδTCR的Vδ1链结合。
在本发明的一方面，提供了一种抗体或其片段，所述抗体或其片段以如通过表面等离子体共振测量的以下结合亲和力(KD)与γδTCR的Vδ1链结合：小于4.0×10-8M(即，40nM)、小于3.0×10-8M(即，30nM)或小于2.0×10-8M(即，20nM)。
在一个实施例中，抗体或其片段的结合亲和力是通过将抗体或其片段直接或间接(例如，通过用抗人IgG Fc捕获)包被到传感器(例如，胺高容量芯片或等效物)的表面上来确立的，其中由抗体或其片段结合的靶标(即，γδTCR的Vδ1链)流过芯片以检测结合。适当地，在25℃下在PBS+0.02％Tween 20运行缓冲液中以30微升/分钟使用MASS-2仪器(也可以称为Sierra SPR-32)。
本文描述了可以用于定义抗体功能的其它测定。例如，本文所描述的抗体或其片段可以通过γδTCR接合，例如测量抗体结合后γδTCR的下调来评估。可以例如通过流式细胞术测量应用抗体或其片段(任选地呈现在细胞表面上)后的γδTCR的表面表达。还可以通过测量γδT细胞脱粒来评估本文所描述的抗体或其片段。例如，CD107a(细胞脱粒的标志物)的表达可以在将抗体或其片段应用于γδT细胞(任选地存在于细胞表面上)后例如通过流式细胞术来测量。还可以通过测量γδT细胞杀伤活性来评估本文所描述的抗体或其片段(以测试抗体是否对γδT细胞的杀伤活性有影响)。例如，靶细胞可以在存在抗体或其片段(任选地存在于细胞的表面上)的情况下与γδT细胞一起温育。在温育后，可以用细胞活力染料对培养物进行染色，以区分活靶细胞与死靶细胞。然后可以例如通过流式细胞术测量死细胞的比例。
如本文所描述的，用于测定的抗体或其片段可以存在于表面上，例如，细胞表面，如包括Fc受体的细胞。例如，抗体或其片段可以存在于THP-1细胞，如TIB-202TM细胞(可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得)的表面上。可替代地，抗体或其片段可以直接用于测定。
在此类功能测定中，可以通过计算半最大浓度，也被称为“EC50”或“50％的有效浓度”来测量输出。术语“IC50”是指抑制浓度。EC50和IC50都可以使用本领域已知的方法测量，如流式细胞术方法。为避免疑义，本申请中的EC50值使用IgG1格式化的抗体提供。此类值可以根据抗体格式的分子量轻松转化为等效值，如下所示：
(μg/ml)/(以kDa为单位的MW)＝μM
在抗体(或片段)结合时针对γδTCR下调的EC50可以小于0.50μg/ml，如小于0.40μg/ml、0.30μg/ml、0.20μg/ml、0.15μg/ml、0.10μg/ml、0.06μg/ml或0.05μg/ml。在优选实施例中，在抗体(或片段)结合时针对γδTCR下调的EC50小于0.10μg/ml。具体地，在抗体(或片段)结合时针对γδTCR下调的EC50可以小于0.06μg/ml，如小于0.05μg/ml、0.04μg/ml或0.03μg/ml。具体地，所述EC50值是当以IgG1格式测量抗体时。例如，EC50γδTCR下调值可以使用流式细胞术测量(例如，如实例6的测定中所描述的)。
在抗体(或片段)结合时针对γδT细胞脱粒的EC50可以小于0.050μg/ml，如小于0.040μg/ml、0.030μg/ml、0.020μg/ml、0.015μg/ml、0.010μg/ml或0.008μg/ml。具体地，在抗体(或片段)结合时针对γδT细胞脱粒的EC50可以小于0.005μg/ml，如小于0.002μg/ml。在优选实施例中，在抗体(或片段)结合时针对γδT细胞脱粒的EC50小于0.007μg/ml。具体地，所述EC50值是当以IgG1格式测量抗体时。例如，可以通过使用流式细胞术检测CD107a表达(即，细胞脱粒的标志物)来测量γδT细胞脱粒EC50值(例如，如实例7的测定中所描述的)。在一个实施例中，CD107a表达是使用抗CD107a抗体，如抗人CD107a BV421(克隆H4A3)(BD生物科学公司(BD Biosciences))来测量的。
在抗体(或片段)结合时针对γδT细胞杀伤的EC50可以小于0.50μg/ml，如小于0.40μg/ml、0.30μg/ml、0.20μg/ml、0.15μg/ml、0.10μg/ml或0.07μg/ml。在优选实施例中，在抗体(或片段)结合时针对γδT细胞杀伤的EC50小于0.10μg/ml。具体地，在抗体(或片段)结合时针对γδT细胞杀伤的EC50可以小于0.060μg/ml，如小于0.055μg/ml，具体地小于0.020μg/ml或0.010μg/ml。具体地，所述EC50值是当以IgG1格式测量抗体时。例如，EC50γδT细胞杀伤值可以通过在抗体、γδT细胞和靶细胞温育后使用流式细胞术检测死细胞的比例来测量(即，使用细胞活力染料)(例如，如实例8的测定中所描述的)。在一个实施例中，使用细胞活力染料，即活力染料eFluorTM520(赛默飞世尔公司(ThermoFisher))来测量靶细胞的死亡。
在这些方面所描述的测定中，抗体或其片段可以存在于细胞的表面上，如THP-1细胞，例如，TIB-202TM(ATCC)。THP-1细胞任选地用染料标记，如CellTrackerTMOrange CMTMR(赛默飞世尔公司)。
免疫缀合物
本发明的抗体或其片段可以与治疗部分，如细胞毒素或化学治疗剂缀合。此类缀合物可以称为免疫缀合物。如本文所使用的，术语“免疫缀合物”是指与另一部分，如细胞毒素、放射性试剂、细胞因子、干扰素、靶标或报告部分、酶、毒素、肽或蛋白质或治疗剂化学或生物连接的抗体。抗体可以沿分子能够结合其靶标的长度在任何位置处连接到细胞毒素、放射性药剂、细胞因子、干扰素、靶标或报告基因部分、酶、毒素、肽或蛋白质或治疗剂。免疫缀合物的实例包含抗体药物缀合物和抗体毒素融合蛋白。在一个实施例中，药剂可以是针对Vδ1的第二不同抗体。在某些实施例中，抗体可以与对肿瘤细胞或病毒感染的细胞具有特异性的试剂缀合。可以与抗Vδ1抗体缀合的治疗部分的类型并且将考虑要治疗的病状和要实现的期望的治疗效果。在一个实施例中，药剂可以是与除Vδ1之外的分子结合的第二抗体或其片段。
多特异性抗体
本发明的抗体可以是单特异性的，或者所述抗体可以结合另外的靶标并且因此是双特异性或多特异性的。多特异性抗体可以对一个靶多肽的不同表位具有特异性或者可以对多于一个靶多肽具有特异性。因此，在一个实施例中，抗体或其片段包括对Vδ1的第一结合特异性和对第二靶表位的第二结合特异性。
第二结合特异性可以靶向与Vδ1相同的细胞上或相同组织类型或不同组织类型的不同细胞上的抗原。在某些实施例中，靶表位可以位于不同的细胞上，包含不同的T细胞、B细胞、肿瘤细胞、自身免疫组织细胞或病毒感染的细胞。可替代地，靶表位可以位于同一细胞上。
多核苷酸和表达载体
在本发明的一方面，提供了一种对本发明的抗Vδ1抗体或片段进行编码的多核苷酸。在一个实施例中，多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-110具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的序列。在一个实施例中，表达载体包括SEQ ID NO:99-110的VH区。在另一个实施例中，表达载体包括SEQ IDNO:99-110的VL区。在另外的实施例中，多核苷酸包括SEQ ID NO:99-110或由其组成。在另外的方面中，提供了包括所述多核苷酸的cDNA。
在本发明的一方面，提供了一种对本发明的抗Vδ1抗体或片段进行编码的多核苷酸。在一个实施例中，多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-101或105-108具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的序列。在一个实施例中，表达载体包括SEQ ID NO:99-101或105-108的VH区。在另一个实施例中，表达载体包括SEQ ID NO:99-101或105-108的VL区。在另外的实施例中，多核苷酸包括SEQ IDNO:99-101或105-108或由其组成。在另外的方面中，提供了包括所述多核苷酸的cDNA。
在一个实施例中，多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-101具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的序列。在一个实施例中，表达载体包括SEQ ID NO:99-101的VH区。在另一个实施例中，表达载体包括SEQ IDNO:99-101的VL区。在另外的实施例中，多核苷酸包括SEQ ID NO:99-101或由其组成。在另外的方面中，提供了包括所述多核苷酸的cDNA。
在本发明的一方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-110的部分中的任何一个具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的对经编码的免疫球蛋白链可变结构域的CDR1、CDR2和/或CDR3进行编码的序列。在一个实施例中，多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-101或105-108的部分中的任何一个具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的对经编码的免疫球蛋白链可变结构域的CDR1、CDR2和/或CDR3进行编码的序列。在一个实施例中，多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-101的部分中的任何一个具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的对经编码的免疫球蛋白链可变结构域的CDR1、CDR2和/或CDR3进行编码的序列。
在本发明的一方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-110的部分中的任何一个具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的对经编码的免疫球蛋白链可变结构域的FR1、FR2、FR3和/或FR4进行编码的序列。在一个实施例中，多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-101或105-108的部分中的任何一个具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的对经编码的免疫球蛋白链可变结构域的FR1、FR2、FR3和/或FR4进行编码的序列。在一个实施例中，多核苷酸包括以下或由以下组成：与SEQ ID NO:99-101的部分中的任何一个具有至少70％，如至少80％、如至少90％、如至少95％、如至少99％的序列同一性的对经编码的免疫球蛋白链可变结构域的FR1、FR2、FR3和/或FR4进行编码的序列。
本发明的多核苷酸和表达载体也可以参考所编码的氨基酸序列进行描述。因此，在一个实施例中，多核苷酸包括对SEQ ID NO:62到85中的任何一个的氨基酸序列进行编码的序列或由其组成。在一个实施例中，表达载体包括对SEQ ID NO:62到73中的任何一个的氨基酸序列进行编码的序列。在另一个实施例中，表达载体包括对SEQ ID NO:74到85中的任何一个的氨基酸序列进行编码的序列。
为了表达抗体或其片段，如本文所描述的，将对部分或全长轻链和重链进行编码的多核苷酸插入到表达载体中，使得基因操作性地连接到转录控制序列和翻译控制序列。因此，在本发明的一方面，提供了包括如本文所定义的多核苷酸序列的表达载体。在一个实施例中，表达载体包括SEQ ID NO:99-110，如SEQ ID NO:99、100、101、105、106、107或108的VH区。在另一个实施例中，表达载体包括SEQ ID NO:99-110，如SEQ ID NO:99、100、101、105、106、107或108的VL区。
将理解的是，本文所描述的核苷酸序列包括对氨基酸残基进行编码的另外的序列以辅助翻译、纯化和检测，然而，根据所使用的表达系统可以使用替代性序列。例如，SEQ IDNO:99-110的起始(5'端)九个核苷酸和SEQ ID NO:99-100、102-103、105-110的最后(3'端)36个核苷酸或SEQ ID NO:101和104的最后(3'端)39个核苷酸是任选的序列。如果采用替代性设计、翻译、纯化或检测策略，则可以去除、修饰或取代这些任选的序列。
可以将对多肽进行编码的DNA或cDNA进行突变，所述突变对多肽的氨基酸序列是沉默的，但提供了在特定宿主中翻译的优选的密码子。例如大肠杆菌和酿酒酵母以及哺乳动物，具体地人中的用于翻译核酸的优选的密码子是已知的。
多肽的突变可以例如通过将对多肽进行编码的核酸进行取代、添加或缺失来实现。对多肽进行编码的核酸的取代、添加或缺失可以通过多种方法引入，包含例如易错PCR、改组、寡核苷酸定向诱变、装配PCR、PCR诱变、体内诱变、盒式诱变、递归整体诱变、指数整体诱变、位点特异性诱变、基因重装配、人工基因合成、基因位点饱和诱变(GSSM)、合成连接重装配(SLR)或这些方法的组合。对核酸的修饰、添加或缺失也可以通过包括以下的方法来引入：重组、递归序列重组、硫代磷酸酯修饰的DNA诱变、含尿嘧啶的模板诱变、缺口双重诱变、点错配修复诱变、修复缺陷型宿主菌株诱变、化学诱变、放射引起的诱变、缺失诱变、限制选择诱变、限制纯化诱变、整体诱变、嵌合核酸多聚体创建和/或其组合。
具体地，可以使用人工基因合成。对本发明的多肽进行编码的基因可以通过例如固相DNA合成合成产生。整个基因可以从头合成，不需要前体模板DNA。为了获得期望的寡核苷酸，按照产物序列所需的顺序将构建块与不断增长的寡核苷酸链顺序地偶联。在链装配完成后，产物从固相释放到溶液中，脱保护并收集。产物可以通过高效液相色谱(HPLC)进行分离，以获得期望的高纯度寡核苷酸。
表达载体包含例如质粒、逆转录病毒、粘粒、酵母人工染色体(YAC)和爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)源性的游离体。将多核苷酸连接到载体中，使得载体内的转录控制序列和翻译控制序列发挥其调节多核苷酸转录和翻译的预期功能。表达和/或控制序列可以包含启动子、增强子、转录终止子、编码序列的起始密码子(即，ATG)5'、内含子和终止密码子的剪接信号。选择要与所使用的表达宿主细胞相容的表达载体和表达控制序列。SEQ ID NO:99-110包括对本发明的单链可变片段进行编码的核苷酸序列，包括通过合成接头(对SEQ IDNO:98进行编码)接合的VH区和VL区。将理解的是，本发明的多核苷酸或表达载体可以包括VH区、VL区或两者(任选地包含接头)。因此，可以将对VH区和VL区进行编码的多核苷酸插入到单独的载体中，可替代地，将对这两个区进行编码的序列插入到相同的表达载体中。通过标准方法将多核苷酸插入到表达载体中(例如，连接多核苷酸和载体上的互补限制性位点，或者如果不存在限制性位点则平端连接)。
方便的载体是对功能完整的人CH或CL免疫球蛋白序列进行编码的载体，其中适当限制性位点被工程化使得可以容易地插入和表达任何VH或VL序列，如本文所描述的。表达载体还可以对促进抗体(或其片段)从宿主细胞分泌的信号肽进行编码。可以将多核苷酸克隆到载体中，使得信号肽框内连接到抗体的氨基末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白蛋白质的信号肽)。
在本发明的一方面，提供了包括如本文所定义的多核苷酸或表达载体的细胞(例如，宿主细胞)。将理解的是，细胞可以包括对抗体或其片段的轻链进行编码的第一载体和对抗体或其片段的重链进行编码的第二载体。可替代地，重链和轻链两者均在导入细胞的同一表达载体上编码。
在一个实施例中，多核苷酸或表达载体对与抗体或其片段融合的膜锚或跨膜结构域进行编码，其中抗体或其片段存在于细胞的细胞外表面上。
转化可以通过用于将多核苷酸引入到宿主细胞中的任何已知方法进行。用于将异源多核苷酸引入到哺乳动物细胞中的方法是本领域公知的并且包含葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、将多核苷酸包封在脂质体中、基因枪注射(biolistic injection)以及直接将DNA显微注射到细胞核中。另外，可以通过病毒载体将核酸分子引入哺乳动物细胞。
作为用于表达的宿主的可获得的哺乳动物细胞系是本领域众所周知的，并且包含可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得的许多永生化细胞系。这些尤其包含中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞、小仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)、A549细胞、3T3细胞和许多其它细胞系。哺乳动物宿主细胞包含人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。通过确定哪些细胞系具有高表达水平来选择特定优选的细胞系。可以使用的其它细胞系是如Sf9细胞等昆虫细胞系、两栖动物细胞、细菌细胞、植物细胞和真菌细胞。可以使用本领域已知的方法在大肠杆菌中分离和表达抗体的抗原结合片段，如scFv和Fv片段。
通过将宿主细胞培养持续足以允许抗体在宿主细胞中表达或更优选地将抗体分泌到宿主细胞在其中生长的培养基中的一定时间段来产生抗体。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。
本发明的抗体(或其片段)可以使用例如Green和Sambrook,《分子克隆：实验室手册分子克隆(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》(2012)第4版,冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbour Laboratory Press)中所公开的技术来获得和操纵。
通过将产生特异性抗体的B细胞与骨髓瘤(B细胞癌)细胞融合，可以使用杂交瘤技术产生单克隆抗体，所述骨髓瘤细胞因其在组织培养中的生长能力和不存在抗体链合成而被选择。
可以例如通过以下来获得针对所确定的抗原的单克隆抗体：
a)使从用所确定的抗原预先免疫的动物的外周血获得的具有永生化细胞，并且优选地具有骨髓瘤细胞的淋巴细胞永生化，以便形成杂交瘤；
b)培养形成的永生化细胞(杂交瘤)并回收产生具有期望的特异性的抗体的细胞。
可替代地，不需要使用杂交瘤细胞。可以通过常规实践例如使用本领域已知的噬菌体展示、酵母展示、核糖体展示或哺乳动物展示技术从合适的抗体文库中分离如本文所描述的能够结合靶抗原的抗体。因此，例如，可以通过包括以下的步骤的过程获得单克隆抗体：
a)将从淋巴细胞尤其是动物的外周血淋巴细胞中获得的DNA或cDNA序列(适当地用所确定的抗原预先免疫)克隆到载体中，特别是克隆到噬菌体中，并且更特别是丝状噬菌体；
b)在允许产生抗体的条件下用上述载体转化原核细胞；
c)通过对抗体进行抗原亲和力选择来选择所述抗体；
d)回收具有期望的特异性的抗体。
药物组合物
根据本发明的另外的方面，提供了包括如本文所定义的抗体或其片段的组合物。在此类实施例中，组合物可以包括抗体，任选地与其它赋形剂组合。还包含包括一种或多种另外的活性剂(例如，适于治疗本文提及的疾病的活性剂)的组合物。
根据本发明的另外的方面，提供了包括如本文所定义的抗体或其片段连同药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。本发明的抗体可以掺入到适于施用于受试者的药物组合物中。通常，药物组合物包括本发明的抗体和药学上可接受的载体。如本文所使用的，“药学上可接受的载体”包含生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载体的实例包含水、盐水、盐、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等，以及其组合中的一种或多种。在许多情况下，将优选的是在组合物中包含等渗剂，例如糖、如甘露醇、山梨糖醇等多元醇或氯化钠。药学上可接受的物质，如润湿物质或少量辅助物质，如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强抗体或其片段的保质期或有效性。
本发明的组合物可以是多种形式。这些包含例如液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)、分散体或悬浮液、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的施用模式和治疗应用。典型的优选的组合物呈可注射或可输注溶液的形式。
优选的施用方式是肠胃外(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内、鞘内)。在优选实施例中，通过静脉输注或注射施用抗体。在另一个优选实施例中，通过肌内或皮下注射施用抗体。
治疗组合物通常在制造以及储存条件下必须是无菌和稳定的。组合物可以被调配为溶液、微乳液、分散体、脂质体，或适合于高药物浓度的其它有序结构。
在用于治疗如本文所描述的疾病的治疗方法中使用本发明的药物组合物作为通常用于治疗此类疾病的其它已确立的疗法的辅助或与其结合落入本发明的范围内。
在本发明的另外的方面中，抗体、组合物或药物组合物与至少一种活性剂顺序、同时或单独施用。
抗体或其片段的用途
根据本发明的另外的方面，提供了如本文所描述的抗Vδ1抗体或其片段的用途，所述抗Vδ1抗体或其片段用于研究γδT细胞(具体地Vδ1T细胞)的抗原识别、活化、信号转导或功能。如本文所描述的，已显示出抗体在可以用于研究γδT细胞功能的测定中具有活性。此类抗体还可以用于诱导γδT细胞的增殖，因此可以在扩增γδT细胞(如Vδ1T细胞)的方法中使用。
与Vδ1链结合的抗体可以用于检测γδT细胞。例如，抗体可以用可检测标记或报告分子标记或用作捕获配体以选择性检测和/或分离样品中的Vδ1T细胞。经标记的抗体可用于本领域已知的许多方法，例如，免疫组织化学和ELISA。
可检测的标记或报告分子可以是放射性同位素，如3H、14C、32P、35S或125I；荧光或化学发光部分，如异硫氰酸荧光素或罗丹明；或酶，如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶或荧光素酶。应用于本发明的抗体的荧光标记然后可以用于荧光活化细胞分选(FACS)方法。
产生抗体或其片段的方法
本文描述了用于产生抗体的可溶性TCR。因此，根据本发明的一个方面，提供了一种分离的抗原，所述分离的抗原包括与SEQ ID NO:123具有至少80％序列同一性的用于产生抗Vδ1抗体或其片段的氨基酸序列。还提供了一种分离的抗原的用途，所述分离的抗原包括与SEQ ID NO:123具有至少80％序列同一性的用于产生抗Vδ1抗体或其片段的氨基酸序列。在一个实施例中，分离的抗原包括SEQ ID NO:123。
根据本发明的一个方面，提供了一种产生抗Vδ1抗体或其片段的方法，所述方法包括：
(i)设计包括TCRδ可变1(Vδ1)氨基酸序列的一系列抗原，其中所述Vδ1的CDR3序列对于所述系列中的所有抗原都是相同的；
(ii)使步骤(i)中设计的第一抗原暴露于抗体文库(例如，通过噬菌体展示)；
(iii)分离与所述抗原结合的所述抗体或其片段；
(iv)使分离的抗体或其片段暴露于步骤(i)中设计的第二抗原；以及
(v)分离与所述第一抗原和所述第二抗原两者结合的所述抗体或其片段。
分离与第一抗原和第二抗原结合的抗体(或其片段)旨在提供识别可变结构域内的序列的抗体，所述序列是种系编码的并且因此在所有克隆中都相同，由此提供识别更广泛的γδT细胞的子集的抗体。本文所描述的抗原系列还可以包括不同格式的抗原(即TCRδ可变1链)。因此，所述抗原可以是合成/重组抗原。例如，抗原可以以亮氨酸拉链或Fc融合体的形式存在。在一个实施例中，TCRδ可变1(TRDV1)氨基酸序列包括SEQ ID NO:123。例如，可以使用在免疫遗传学信息系统数据库(http://www.imgt.org)中描述的序列来设计合适的抗原序列。
抗原还可以包括有助于蛋白质表达的另外的特征。例如，本文所描述的重组TCR抗原可以与TCRα或TCRβ恒定区融合(参见Xu等人,(2011)《美国国家科学院院刊》108:2414-2419)。
在一个实施例中，方法进一步包括：将分离的抗体或其片段暴露于第二系列抗原，所述第二系列抗原包括具有不同δ可变链，如δ可变2(Vδ2)或δ可变3(Vδ3)的γδTCR，以及然后取消选择也与第二系列抗原结合的抗体或其片段。
在另外的实施例中，包括具有不同δ可变链的γδTCR的第二系列抗原包括与第一系列抗原相同的CDR3序列。因此，所有抗原都包括相同的CDR3序列(来自Vδ1)。
在一个实施例中，第一系列抗原和/或第二系列抗原以亮氨酸拉链和/或Fc融合物的形式存在。
在一个实施例中，抗原系列呈异源二聚体和/或同源二聚体格式。
在另外的实施例中，所述一系列抗原与靶标(即TCRδ可变1链)一起包括配对的TCR可变链。在某些实施例中，配对的TCR可变链是可变γ(Vγ)链(即，抗原呈异源二聚体格式)。在一个实施例中，Vδ1链和Vγ链通过至少一个二硫键共价连接。在另外的实施例中，Vδ1链和Vγ链通过特异性异源二聚化相互作用(例如，亮氨酸拉链)配对。在替代性实施例中，Vδ1链和Vγ链包括单链框内融合。在某个实施例中，Vδ1链在Vγ链的N端。在替代性实施例中，Vδ1链在Vγ链的C端。在另外的实施例中，单链框内融合包括内部接头序列。在一个实施例中，第一系列中的抗原呈异源二聚体形式，包括Vδ1链和不同的Vγ链，如Vγ2、Vγ4或Vγ8。选择与所有格式结合的抗体确保所述分离的抗体或其片段独立于异源二聚体中存在的配偶体链识别Vδ1链。
在替代性实施例中，配对的TCR可变链是另一个Vδ链。在另一个实施例中，Vδ链与靶标相同(即，抗原呈同源二聚体格式)。
本文提供的实例2描述了可以使用的一系列抗原的一个实例。将理解的是，(第一)系列抗原包括其中存在TRDV1(Vδ1)的抗原(例如，L1、L2、L3、F1、F2、F3和Fc1/1)，并且第二系列抗原包括其中不存在Vδ1的抗原(例如，L4、F9、Fc3/3、Fc4/4、Fc8/8)。
在另外的实施例中，所述一系列抗原包括与TCR恒定区框内融合的靶标(即，TCRδ可变1链)。例如，所述TCR恒定区可以与Vδ1链的C端框内融合。在一个实施例中，TCR恒定区可以是人TCR恒定区。在一个实施例中，TCR恒定区选自TCRα或TCRβ恒定区。在另一个实施例中，恒定区是TCRγ恒定区。在又另外的实施例中，所述一系列抗原可以包括另外的第二TCR恒定区，其中第二TCR恒定区与配对的TCR可变链框内融合。在另外的实施例中，第二TCR恒定区选自TCRα或TCRβ恒定区。在另外的实施例中，恒定区是TCRγ恒定区。
应当理解，如本文所描述的一系列抗原可以以可溶的或连接/融合的形式或与细胞膜相关的形式存在。例如，为了展示的目的，可以将一系列抗原与无机或有机材料(例如，珠粒、板、柱或噬菌体)融合或拴系到所述材料或在细胞表面上表达。
根据本发明的各个实施例，包括TCRδ可变1(Vδ1)氨基酸序列的所述一系列抗原包括Vδ1的对于所有抗原都相同的CDR3序列。在一个实施例中，CDR3序列源自RCSB蛋白质数据库条目：3OMZ的CDR3序列。
根据本发明的另外的方面，提供了一种抗体，所述抗体通过如本文所定义的方法获得。
条款
定义本发明和其优选方面的一组条款如下：
条款1.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括以下中的一个或多个：
包括与SEQ ID NO:2-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3；
包括与SEQ ID NO:26-37和序列：A1-A12(表2)中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2；和/或
包括与SEQ ID NO:38-61中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
条款2.根据条款1所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:2-13，如SEQ ID NO:2、3或4中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。
条款3.根据条款1或条款2所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:26-37，如SEQ ID NO:26、27或28中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2。
条款4.根据条款1到3中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区，所述VH区包括包含与SEQ ID NO:38-49，如SEQ ID NO:38、39或40中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
条款5.根据条款1到4中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VH区：包括SEQ ID NO:2的序列的CDR3；包括SEQ ID NO:26的序列的CDR2；以及包括SEQID NO:38的序列的CDR1。
条款6.根据条款1到4中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VH区：包括SEQ ID NO:3的序列的CDR3；包括SEQ ID NO:27的序列的CDR2；以及包括SEQID NO:39的序列的CDR1。
条款7.根据条款1到4中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VH区：包括SEQ ID NO:4的序列的CDR3；包括SEQ ID NO:28的序列的CDR2；以及包括SEQID NO:40的序列的CDR1。
条款8.根据条款1到4中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VH区：包括SEQ ID NO:5的序列的CDR3；包括SEQ ID NO:29的序列的CDR2；以及包括SEQID NO:41的序列的CDR1。
条款9.根据条款1到8中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VL区，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:14-25，如SEQ ID NO:14、15或16中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3。
条款10.根据条款1到9中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VL区，所述VL区包括包含与序列：A1-A12，如SEQ ID NO:A1、A2或A3中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2。
条款11.根据条款1到10中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VL区，所述VL区包括包含与SEQ ID NO:50-61，如SEQ ID NO:50、51或52中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
条款12.根据条款1到11中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VL区：包括SEQ ID NO:14的序列的CDR3；包括序列：A1的序列的CDR2；以及包括SEQID NO:50的序列的CDR1。
条款13.根据条款1到11中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VL区：包括SEQ ID NO:15的序列的CDR3；包括序列：A2的序列的CDR2；以及包括SEQID NO:51的序列的CDR1。
条款14.根据条款1到11中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VL区：包括SEQ ID NO:16的序列的CDR3；包括序列：A3的序列的CDR2；以及包括SEQID NO:52的序列的CDR1。
条款15.根据条款1到11中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VL区：包括SEQ ID NO:17的序列的CDR3；包括序列：A4的序列的CDR2；以及包括SEQID NO:53的序列的CDR1。
条款16.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括根据条款5所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，所述VL区包括根据条款12所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列。
条款17.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括根据条款6所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，所述VL区包括根据条款13所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列。
条款18.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括根据条款7所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，所述VL区包括根据条款14所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列。
条款19.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括根据条款8所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，所述VL区包括根据条款15所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列。
条款20.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括与SEQ ID NO:62-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
条款21.根据条款20所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区，所述VH区包括与SEQ ID NO:62-73中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
条款22.根据条款21所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述VH区包括与SEQID NO:62、63或64中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的氨基酸序列。
条款23.根据条款20到22中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VL区：与SEQ ID NO:74-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
条款24.根据条款23所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述VL区包括与SEQID NO:74、75或76中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的氨基酸序列。
条款25.根据条款20到24中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:62的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:74的氨基酸序列。
条款26.根据条款20到24中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:63的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列。
条款27.根据条款20到24中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:64的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列。
条款28.根据条款20到24中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:68的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列。
条款29.根据条款20到24中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:69的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列。
条款30.根据条款20到24中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:70的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:82的氨基酸序列。
条款31.根据条款20到24中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:71的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
条款32.根据条款20到31中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述VH区和所述VL区通过接头，如多肽接头接合。
条款33.根据条款32所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述接头包括(Gly4Ser)n格式，其中n＝1到8。
条款34.根据条款32或条款33所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述接头包括[(Gly4Ser)n(Gly3AlaSer)m]p接头，其中n、m和p＝1到8。
条款35.根据条款32到34中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述接头包括SEQ ID NO:98。
条款36.根据条款35所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述接头由SEQ IDNO:98组成。
条款37.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括与SEQ ID NO:86-97中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
条款38.根据条款37所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ ID NO:86-97中的任何一个的氨基酸序列。
条款39.根据条款37或条款38所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ IDNO:86。
条款40.根据条款37或条款38所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ IDNO:87。
条款41.根据条款37或条款38所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ IDNO:88。
条款42.根据条款37或条款38所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ IDNO:92。
条款43.根据条款37或条款38所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ IDNO:93。
条款44.根据条款37或条款38所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ IDNO:94。
条款45.根据条款37或条款38所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ IDNO:95。
条款46.一种分离的抗vδ1抗体或其片段，其与根据条款1到45中任一项所述的抗体或其片段结合于相同或基本上相同的表位或者与所述抗体或其片段竞争。
条款47.一种人的分离的抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体或其片段，其与γδT细胞受体(TCR)的可变δ1(Vδ1)链的表位结合，所述表位包括
(i)SEQ ID NO:1的氨基酸区：3-20；和/或
(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸区：37-77内的一个或多个氨基酸残基。
条款48.根据条款47所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸残基3、5、9、10、12、16、17、20、37、42、50、53、59、62、64、68、69、72或77中的氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基。
条款49.根据条款47或条款48所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ ID NO:1的以下氨基酸区内的一个或多个氨基酸残基：5-20和62-77；50-64；37-53和59-72；59-77；或3-17和62-69。
条款50.根据条款49所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位由SEQID NO:1的以下氨基酸区内的一个或多个氨基酸残基组成：5-20和62-77；50-64；37-53和59-72；59-77；或3-17和62-69。
条款51.根据条款47到50中任一项所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区5-20和62-77内的一个或多个氨基酸残基。
条款52.根据条款47到50中任一项所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区50-64内的一个或多个氨基酸残基。
条款53.根据条款47到50中任一项所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区37-53和59-77内的一个或多个氨基酸残基。
条款54.根据条款46到53中任一项所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位是γδT细胞的活化表位。
条款55.根据条款54所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述活化表位的结合：(i)下调γδTCR；(ii)活化γδT细胞的脱粒；和/或(iii)活化γδT细胞杀伤。
条款56.根据条款47到55中任一项所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其仅与γδTCR的Vδ1链的V区中的表位结合。
条款57.根据条款47到56中任一项所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其不与存在于γδTCR的Vδ1链的CDR3中的表位结合。
条款58.根据条款57所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其不与SEQ ID NO:1的氨基酸区91-105(CDR3)内的表位结合。
条款59.根据条款1到58中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其以如通过表面等离子体共振测量的小于1.5×10-7M的结合亲和力(KD)与γδT细胞受体(TCR)的可变δ1(Vδ1)链结合。
条款60.根据条款59所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述KD小于1.3×10- 7M或更小，如小于1.0×10-7M，具体地小于5.0×10-8M。
条款61.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其在结合时针对γδTCR下调的EC50值小于0.5μg/ml。
条款62.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其在结合时针对γδTCR下调的EC50值小于0.06μg/ml。
条款63.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其在结合时针对γδT细胞脱粒的EC50值小于0.05μg/ml。
条款64.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其在结合时针对γδT细胞脱粒的EC50值小于0.005μg/ml，如小于0.002μg/ml。
条款65.根据条款63或条款64所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中γδT细胞脱粒EC50值是通过检测CD107a表达来测量的。
条款66.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其在结合时针对γδT细胞杀伤的EC50值小于0.5μg/ml。
条款67.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其在结合时针对γδT细胞杀伤的EC50值小于0.055μg/ml，如小于0.020μg/ml。
条款68.根据条款61到67中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述EC50值是使用流式细胞术测量的。
条款69.根据条款1到68中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其是scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、可变结构域(例如，VH或VL)、双功能抗体、微型抗体或全长抗体。
条款70.根据条款69所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其是scFv或全长抗体，如IgG1。
条款71.根据条款70所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括与SEQ ID NO:111-122中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
条款72.根据条款70或条款71所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:111-122中的任何一个的氨基酸序列。
条款73.根据条款71或条款72所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:111。
条款74.根据条款71或条款72所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:112。
条款75.根据条款71或条款72所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:116。
条款76.根据条款71或条款72所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:117。
条款77.根据条款71或条款72所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:118。
条款78.根据条款71或条款72所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:119。
条款79.根据条款71或条款72所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:120。
条款80.根据条款1到79中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其是人的。
条款81.一种多核苷酸序列，其对根据条款1到80中任一项所述的抗Vδ1抗体或其片段进行编码。
条款82.一种多核苷酸序列，其对包括与SEQ ID NO:99-110具有至少70％序列同一性的序列的所述抗Vδ1抗体或其片段进行编码。
条款83.一种多核苷酸序列，其对由SEQ ID NO:99-110的序列组成的所述抗Vδ1抗体或其片段进行编码。
条款84.一种表达载体，其包括根据条款81到83中任一项所述的多核苷酸序列。
条款85.一种表达载体，其包括SEQ ID NO:99-110的VH区。
条款86.一种表达载体，其包括SEQ ID NO:99-110的VL区。
条款87.一种表达载体，其包括条款85的VH区和条款86的VL区。
条款88.一种细胞，其包括根据条款81到条款83中任一项所述的多核苷酸序列或根据条款84到条款87中任一项所述的表达载体。
条款89.一种细胞，其包括根据条款85所述的第一表达载体和根据条款86所述的第二表达载体。
条款90.一种细胞，其包括根据条款87所述的表达载体。
条款91.根据条款88到90中任一项所述的细胞，其中所述多核苷酸或所述表达载体对与所述抗体或其片段融合的膜锚或跨膜结构域进行编码，其中所述抗体或其片段存在于所述细胞的细胞外表面上。
条款92.一种组合物，其包括根据条款1到80中任一项所述的抗体或其片段。
条款93.一种药物组合物，其包括根据条款1到80中任一项所述的抗体或其片段，连同药学上可接受的稀释剂或载体。
条款94.一种分离的抗原，其包括与SEQ ID NO:123具有至少80％序列同一性的用于产生抗Vδ1抗体或其片段的氨基酸序列。
条款95.一种产生抗Vδ1抗体或其片段的方法，所述方法包括：
(i)设计包括TCRδ可变1(TRDV1)氨基酸序列的一系列抗原，其中所述TRDV1的CDR3序列对于所述系列中的所有抗原都是相同的；
(ii)使步骤(i)中设计的第一抗原暴露于抗体文库；
(iii)分离与所述抗原结合的所述抗体或其片段；
(iv)使分离的抗体或其片段暴露于步骤(i)中设计的第二抗原；以及
(v)分离与所述第一抗原和所述第二抗原两者结合的所述抗体或其片段。
条款96.根据条款95所述的方法，其进一步包括：使所述分离的抗体或其片段暴露于第二系列抗原，所述第二系列抗原包括具有不同δ可变链的γδTCR，如TCRδ可变2(TRDV2)或TCRδ可变3(TRDV3)；以及然后取消选择也与所述第二系列抗原结合的所述抗体或其片段。
条款97.根据条款95或条款96所述的方法，其中所述第一系列抗原和/或所述第二系列抗原以亮氨酸拉链和/或Fc融合物的形式存在。
条款98.根据条款95到97中任一项所述的方法，其中所述一系列抗原呈异源二聚体和/或同源二聚体格式。
条款99.一种抗体，其通过根据条款95到98中任一项所述的方法获得。
本发明的其它特征和优点将根据本文所提供的描述而显而易见。然而，应当理解尽管描述和具体实例指示本发明的优选实施例，但仅以说明的方式给出，因为各种变化和修改对本领域技术人员来说是显而易见的。现在将使用以下非限制性实例描述本发明：
实例
实例1：材料和方法
人抗体发现
采用人噬菌体展示来产生如本文所描述的人抗人可变Vδ1+结构域抗体。文库按照Schofield等人(《基因组生物学(Genome Biology)》2007,8(11):R254)中的描述构建，并且包括展示约400亿个人克隆的文库的单链可变片段(scFv)。使用如本文所描述的抗原、方法、选择、取消选择、筛选和表征策略来筛选此文库。
抗原制备
以下实例中使用的包括TCRα和TCRβ恒定区的可溶性yδTCR异源二聚体的设计是根据Xu等人,(2011)《美国国家科学院院刊》108:2414-2419产生的。Vγ或Vδ结构域与缺乏跨膜结构域的TCRα或TCRβ恒定区，然后是亮氨酸拉链序列或Fc序列，以及组氨酸标签/接头框内融合。
将表达构建体瞬时转染到哺乳动物EXPI HEK293悬浮细胞中(作为异源二聚体的单一转染物或共转染物)。通过亲和色谱法从培养物上清液中回收分泌的重组蛋白并对其进行纯化。为确保单体抗原的良好回收，使用制备型尺寸排阻色谱(SEC)进一步对样品进行纯化。通过SDS-PAGE分析经纯化的抗原的纯度，并通过分析型SEC分析聚集状态。
抗原功能验证
含有δ可变1(Vδ1)链的抗原的特异性在DELFIA免疫测定(珀金埃尔默格式(PerkinElmer))和使用REA173-美天旎生物科技公司(Miltenyi Biotec)抗Vδ1抗体与γδT细胞竞争的基于流动的测定中得到证实。
解离增强的镧系元素荧光免疫测定(DELFIA)
为了证实抗原的特异性，DELFIA免疫测定是用直接包被到板上的抗原(在4℃下3μg/mL抗原于50μL PBS中过夜(Nunc编号437111))和从300nM开始的一级抗体的连续稀释液来执行的。对于检测，将DELFIA Eu-N1抗人IgG(珀金埃尔默公司编号1244-330)用作二级抗体，在50μL 3％MPBS(PBS+3％(w/V)脱脂奶粉)中以1/500稀释。用50μL DELFIA增强溶液(珀金埃尔默公司编号4001-0010)进行显色。
使用DELFIA免疫测定对所关注的抗体进行亲和力排序，在所述免疫测定中，抗体通过包被在板上的蛋白G捕获，并在50μL(3MPBS)中以5nM添加可溶性生物素化L1(DV1-GV4)抗原。对于检测，使用50μL链霉亲和素-Eu(以1:500在测定缓冲液中，珀金埃尔默公司)进行，并用DELFIA增强溶液产生信号。D1.3 hIgG1(描述于England等人,(1999)《免疫学杂志(J.Immunol.)》162:2129-2136)用作阴性对照。
噬菌体展示选择输出被亚克隆到scFv表达载体pSANG10(Martin等人,(2006)《BMC生物技术(BMC Biotechnol.)》6:46)。可溶性scFv被表达并在DELFIA中筛选与直接固定的靶标的结合。命中被定义为超过3000个荧光单位的DELFIA信号。
抗体制备
使用可商购获得的质粒将所选scFv亚克隆到IgG1框架中。将expi293F悬浮细胞用所述质粒转染以用于抗体表达。为了方便起见，除非另有说明，否则这些实例中表征的抗体是指选自作为scFv的噬菌体展示的IgG1格式化的抗体。然而，本发明的抗体可以呈如先前所讨论的任何抗体格式。
抗体纯化
使用蛋白A色谱法从上清液对IgG抗体分批进行纯化。然后使用尺寸排阻色谱法(SEC)对浓缩的蛋白A洗脱液进行纯化。使用ELISA、SDS-PAGE和SEC-HPLC分析经纯化的IgG的质量。
γδT细胞制备
根据WO2016/198480(即，血液源性的γδT细胞)或WO2020/095059(即，皮肤源性的γδT细胞)中描述的方法制备富集的γδT细胞群。简而言之，对于血液源性的γδT细胞，从血液中获得PBMC并对其进行αβT细胞的磁耗竭。然后在存在OKT-3(或相应抗Vδ1抗体)、IL-4、IFN-γ、IL-21和IL-1β的情况下，将αβ耗竭的PBMC在CTS OpTmiser培养基(赛默飞世尔公司)中培养7天。在培养的第7天，培养基补充有OKT-3(或相应抗Vδ1抗体)、IL-21和IL-15，以培养另外4天。在培养的第11天，培养基补充有OKT-3(或相应抗Vδ1抗体)和IL-15，以培养另外3天。在培养的第14天，将一半培养基更换为新鲜的完整OpTmiser，并补充了OKT-3(或相应抗Vδ1抗体)、IL-15和IFN-γ。从培养的第17天开始，培养物每3到4天补充有OKT-3(或相应抗Vδ1抗体)和IL-15；每7天将一半培养基更换为新鲜培养基。
对于皮肤源性的γδT细胞，通过去除皮下脂肪制备皮肤样品，并使用3mm活检穿孔器进行多次穿孔。穿孔器放置于碳矩阵网格上并放置于G-REX6(威尔森沃尔夫公司(WilsonWolf))的孔中。每个孔都填充有完整的分离的培养基，其含有AIM-V培养基(Gibco，生命科技公司(Life Technologies))、CTS免疫血清替代物(生命科技公司)、IL-2和IL-15。对于培养的前7天，使用含有两性霉素B(生命科技公司)的完整的分离的培养基(“+AMP”)。每7天更换一次培养基，轻轻抽吸上层培养基并更换为2X完整的分离的培养基(不含AMP)，尽量不干扰板或生物反应器底部的细胞。在培养三周后，在采集之前，然后将所得流出的细胞传代到新鲜组织培养容器和新鲜培养基中(例如，AIM-V培养基或TexMAX培养基(美天旎公司))，加上重组IL-2、IL-4、IL-15和IL-21。任选地，然后在αβT细胞耗竭试剂盒和相关方案，如美天旎公司提供的那些的辅助下去除也存在于培养物中的αβT细胞。对于另外的参考，参见WO2020/095059。
γδ T细胞结合测定
通过将固定浓度的经纯化的抗体与250000个γδT细胞一起温育来测试抗体与γδT细胞的结合。此温育在阻断条件下执行以防止抗体通过Fc受体进行非特异性结合。通过添加针对人IgG1的二级荧光染料缀合的抗体执行检测。对于阴性对照，使用a)仅同种型抗体(重组人IgG)，b)仅荧光染料缀合的抗人IgG抗体和c)a)和b)的组合制备细胞。还制备并分析了完全未染色的细胞的对照孔。作为阳性对照，以两种不同的浓度使用经纯化的鼠单克隆IgG2抗人CD3抗体和经纯化的鼠单克隆IgG1抗人TCR Vδ1抗体，并用荧光染料缀合的山羊抗小鼠二级抗体染色。如果FITC通道中较低浓度的阳性对照的平均荧光强度是最高阴性对照的平均荧光强度的至少十倍，则接受所述测定。
SPR分析
使用带有胺高容量芯片的MASS-2仪器(均来自德国塞拉传感器公司(SierraSensors,Germany))执行SPR分析。通过蛋白G将15nM IgG捕获到胺高容量芯片(针对TS8.2，为100nM)。以下列参数将L1(DV1-GV4)抗原从2000nM到15.625nM以1:2稀释系列流过细胞：180秒缔合，600秒解离，流速为30微升/分钟，运行缓冲液为PBS+0.02％Tween 20。所有实验均在室温下在MASS-2仪器上执行。使用软件塞拉分析仪(Sierra Analyzer)3.2根据朗缪尔(Langmuir)1:1结合确定稳态拟合。
比较抗体
在所描述的测试测定中将本发明的抗体与可商购获得的抗体进行比较。
Figure BDA0003552215320000591
γδ TCR下调和脱粒测定
将负载有或未负载有测试抗体的THP-1(TIB-202TM，ATCC)靶细胞用CellTrackerTMOrange CMTMR(赛默飞世尔公司，C2927)标记，并在存在CD107a抗体(抗人CD107aBV421(克隆H4A3)，BD生物科学公司562623)的情况下与γδT细胞以2:1的比率温育。在温育2小时之后，使用流式细胞术评估γδTCR的表面表达(以测量TCR下调)和CD107a在γδT细胞上的表达(以测量脱粒)。
杀伤测定
通过流式细胞术评估γδT细胞杀伤活性和测试抗体对γδT细胞杀伤活性的影响。在体外共培养4小时之后，将呈20:1的比率的γδT细胞和CellTrackerTMOrange CMTMR(赛默飞世尔公司，C2927)标记的THP-1细胞(负载或未负载有抗体)用活力染料eFluorTM520(赛默飞世尔公司，520 65-0867-14)染色以区分活的与死的靶THP-1细胞。在样品采集期间，在CellTrackerTMOrange CMTMR阳性上对靶细胞进行门控，并根据活力染料的摄取检查细胞死亡。CMTMR和eFluorTM520双阳性细胞被识别为死靶细胞。γδT细胞的杀伤活性以死靶细胞的百分比表示。
表位作图
用于表位作图的所有蛋白质样品(抗原L1(DV1-GV4)和抗体1245_P01_E07、1245_P02_G04、1252_P01_C08、1251_P02_C05和1141_P01_E01)都使用高质量MALDI分析蛋白质完整性和聚集水平。
为了以高分辨率确定L1(DV1-GV4)/1245_P01_E07、L1(DV1-GV4)/1245_P02_G04、L1(DV1-GV4)/1252_P01_C08、L1(DV1-GV4)/1251_P02_C05和L1(DV1-GV4)/1141_P01_E01复合物的表位，将蛋白质复合物与氘化交联剂一起温育，并使用胰蛋白酶、糜蛋白酶、Asp-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶进行多酶蛋白水解。在交联肽富集之后，通过高分辨率质谱(nLC-LTQ-Orbitrap MS)分析样品，并使用XQuest和Stavrox软件分析生成的数据。
实例2：抗原设计
γδ(γδ)T细胞是多克隆的，具有CDR3多克隆性。为了避免针对CDR3序列选择所产生的抗体的情况(因为CDR3序列在TCR克隆与TCR克隆之间不同)，抗原设计涉及以不同格式维持一致的CDR3。此设计旨在产生识别可变结构域内的序列的抗体，所述序列是种系编码的并且因此在所有克隆中都相同，由此提供识别更广泛的γδT细胞的子集的抗体。
抗原制备过程的另一个重要方面是设计适合作为蛋白质表达的抗原。γδTCR是涉及具有链间二硫键和链内二硫键的异源二聚体的复杂的蛋白质。亮氨酸拉链(LZ)格式和Fc格式用于产生要用于噬菌体展示选择的可溶性TCR抗原。LZ格式和Fc格式两者均良好表达并成功显示了TCR(具体地异源二聚体TCR，例如，Vδ1Vγ4)。
发现来自γδTCR的公共数据库条目的CDR3序列作为蛋白质表达良好(RCSB蛋白质数据库条目：3OMZ)。因此，这被选择用于抗原制备。
含有δ可变1链的抗原以LZ格式表达为异源二聚体(即与不同的γ可变链组合——“L1”、“L2”、“L3”)和以Fc形式表达为异源二聚体(“F1”、“F2”、“F3”)或表达为同源二聚体(即与另一个δ可变1链组合——“Fc1/1”)。抗原的所有δ可变1链都含有3OMZ CDR3。使用类似格式的另一系列γδTCR抗原被设计成含有不同的δ可变链(如δ可变2和δ可变3)，并用于取消选择具有非特异性或脱靶结合的抗体(“L4”、“F9”、“Fc4/4”、“Fc8/8”)。这些抗原还被设计成包含3OMZ CDR3，以确保在CDR3区结合的抗体也被取消选择。
执行抗原功能验证以确认所设计的抗原适合产生抗TRDV1(TCRδ可变1)抗体。仅对含有δ1结构域的抗原进行检测(图1)。
实例3：噬菌体展示
在第1轮和第2轮中使用异源二聚体LZ TCR格式针对人scFv文库进行噬菌体展示选择，其中在两轮中都取消选择异源二聚体LZ TCR。或使用同源二聚体Fc融合TCR执行第1轮，其中取消选择人IgG1 Fc，随后对异源二聚体LZ TCR执行第2轮，其中取消选择异源二聚体LZ TCR(参见表1)。
表1：概述噬菌体展示选择
靶标 第1轮选择 第1轮取消选择 第2轮选择 第2轮取消选择
DV1 bt-L1(DV1-GV4) L4(DV2-GV4) bt-L3(DV1-GV8) L4(DV2-GV4)
DV1 bt-Fc1/1(DV1-DV1) Fc bt-L1(DV1-GV4) L4(DV2-GV4)
bt＝生物素。
使用100nM生物素化蛋白质在溶液相中执行选择。使用1μM非生物素化蛋白质执行取消选择。
噬菌体展示选择的成功通过多克隆噬菌体ELISA(DELFIA)进行分析。所有DV1选择输出均显示出与靶标Fc 1/1、L1、L2、L3、F1和F3的期望结合。检测到与非靶标L4、F9、Fc 4/4、Fc 8/8和Fc的不同程度结合(参见图2A和B)。
实例4：抗体选择
对实例3中获得的命中进行测序(使用本领域已知的标准方法)。鉴定了130个独特的克隆，这显示出VH和VL CDR3的独特组合。在这130个独特的克隆中，125个显示出独特的VH CDR3，并且109个显示出独特的VL CDR3。
重新排列独特的克隆并通过ELISA(DELFIA)分析特异性。从选择中鉴定了一组94种独特的人scFv结合物，其结合TRDV1(L1、L2、L3、F1、F2、F3)但不结合TRDV2(L4)。
所选结合剂的亲和力排序包含在内，以辅助继续选择克隆。大量结合剂显示出纳摩尔范围内的亲和力，从而与25到100nM生物素化的抗原反应。少数结合剂显示出与5nM抗原的强烈反应，表明可能具有个位数的纳摩尔亲和力。一些结合剂与100nM抗原没有反应，表明微摩尔范围内的亲和力。
对于选择继续进行IgG转化的克隆，目标是包含尽可能多的种系谱系和尽可能多的不同CDR3。进一步地，避免了如糖基化、整联蛋白结合位点、CD11c/CD18结合位点、未配对的半胱氨酸等序列责任。另外，还包含各种亲和力。
使用从不同供体获得的皮肤源性的γδT细胞筛选所选克隆与天然细胞表面表达的γδTCR的结合。所选择的要转化为IgG的克隆示出于表2中。
表2：用于IgG转化的DV1结合剂
Figure BDA0003552215320000611
Figure BDA0003552215320000621
实例5：抗体SPR分析
所制备的IgG抗体通过γδ细胞结合测定，选择5种进行进一步的功能和生物物理表征。执行SPR分析以确定平衡解离常数(KD)。所测试的抗体与分析物相互作用的传感图以及稳态拟合(如果可用的话)呈现于图3中。未检测到TS8.2的结合，其中在芯片上捕获了80RU的IgG。结果总结在表3中。
表3：IgG捕获结果
分析物 克隆ID K<sub>D</sub>(nM) K<sub>D</sub>(M)
L1(DV1-GV4) 1245_P01_E07 12.4 1.24e-08
L1(DV1-GV4) 1252_P01_C08 100 1.00e-07
L1(DV1-GV4) 1245_P02_G04 126 1.26e-07
L1(DV1-GV4) 1245_P01_B07 341 3.41e-07
L1(DV1-GV4) 1251_P02_C05 1967<sup>*</sup> 1.97e-06
L1(DV1-GV4) 1139_P01_E04 251 2.51e-07
L1(DV1-GV4) 1245_P02_F07 193 1.93e-07
L1(DV1-GV4) 1245_P01_G06 264 2.64e-07
L1(DV1-GV4) 1245_P01_G09 208 2.08e-07
L1(DV1-GV4) 1138_P01_B09 290 2.90e-07
L1(DV1-GV4) 1251_P02_G10 829 8.29e-07
L1(DV1-GV4) TS8.2(商业抗Vδ1抗体) 44 4.40e-08
*1252_P02_C05的结合没有达到饱和，因此数据是外推的
实例6：TCR接合测定
发明人设计了若干种测定法以用于所选抗体的功能表征。第一测定通过测量抗体结合时γδTCR的下调来评估γδTCR接合。针对用作阳性对照的商业抗CD3抗体和抗Vδ1抗体或针对作为阳性对照的1252_P01_C08(对于1139_P01_E04、1245_P02_F07、1245_P01_G06和1245_P01_G09)测试所选抗体。商业抗panγδ用作阴性对照，因为其是panγδ抗体，识别所有γδT细胞而不论可变链，并且因此可能具有不同的作用模式。
使用从三个不同供体样品(纯度为94％、80％和57％的样品)中获得的皮肤源性的γδT细胞执行测定。结果示出在图4中。EC50值总结在下表4中。
实例7：T细胞脱粒测定
第二测定评估了γδT细胞的脱粒。据认为，γδT细胞可以通过穿孔素-颗粒酶介导的细胞凋亡活化来介导靶细胞杀伤。γδT细胞的细胞质内的裂解颗粒可以在T细胞活化后朝向靶细胞释放。因此，用针对CD107a的抗体标记靶细胞并通过流式细胞术测量表达可以用于鉴定脱粒γδT细胞。
关于实例6，针对作为阳性对照的商业抗CD3抗体和抗Vδ1抗体或针对作为阳性对照的1252_P01_C08(对于1139_P01_E04、1245_P02_F07、1245_P01_G06和1245_P01_G09)测试所选抗体。IgG2a抗体、IgG1抗体和D1.3抗体用作阴性对照。使用从三个不同供体样品(纯度为94％、80％和57％的样品)中获得的皮肤源性的γδT细胞执行测定。结果示出在图5中。EC50值总结在下表4中。
实例8：杀伤测定
第三测定评估了用所选抗体活化的γδT细胞杀伤靶细胞的能力。
关于实例6，针对作为阳性对照的商业抗CD3抗体和抗Vδ1抗体或针对作为阳性对照的1252_P01_C08(对于1139_P01_E04、1245_P02_F07、1245_P01_G06和1245_P01_G09)和作为阴性对照的抗panγδ测试所选抗体。IgG2a抗体、IgG1抗体和D1.3抗体还用作同种型对照。使用从两个供体(纯度为94％和80％)获得的皮肤源性的γδT细胞执行测定，结果如图6所示。
来自实例6-8中测试的三种功能测定的结果总结在表4中。
表4：从功能测定中获得的结果的总结
Figure BDA0003552215320000631
Figure BDA0003552215320000641
N/D：无法确定；N/D*：无法确定，滴定曲线未达到平稳期；N/D**：降低的杀伤曲线，EC50未确立
实例9：表位作图
为了以高分辨率确定抗原/抗体复合物的表位，将蛋白质复合物与氘化交联剂一起温育并进行多酶裂解。在交联肽富集之后，通过高分辨率质谱(nLC-LTQ-Orbitrap MS)分析样品，并使用XQuest(版本2.0)和Stavrox(版本3.6)软件分析生成的数据。
在用氘化d0d12对蛋白质复合物L1(DV1-GV4)/1245_P01_E07进行胰蛋白酶、糜蛋白酶、Asp-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白水解之后，nLC-orbitrap MS/MS分析检测到L1(DV1-GV4)与抗体1245_P01_E07之间的13个交联肽。结果呈现在图7中。
在用氘化d0d12对蛋白质复合物L1(DV1-GV4)/1252_P01_C08进行胰蛋白酶、糜蛋白酶、Asp-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白水解之后，nLC-orbitrap MS/MS分析检测到L1(DV1-GV4)与抗体1252_P01_C08之间的5个交联肽。结果呈现在图8中。
在用氘化d0d12对蛋白质复合物L1(DV1-GV4)/1245_P02_G04进行胰蛋白酶、糜蛋白酶、Asp-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白水解之后，nLC-orbitrap MS/MS分析检测到L1(DV1-GV4)与抗体1245_P02_G04之间的20个交联肽。结果呈现在图9中。
在用氘化d0d12对蛋白质复合物L1(DV1-GV4)/1251_P02_C05进行胰蛋白酶、糜蛋白酶、Asp-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白水解之后，nLC-orbitrap MS/MS分析检测到L1(DV1-GV4)与抗体1251_P02_C05之间的5个交联肽。结果呈现在图10中。
还测试了与另一种抗体克隆ID 1141_P01_E01的表位结合。在用氘化d0d12对蛋白质复合物L1(DV1-GV4)/1141_P01_E01进行胰蛋白酶、糜蛋白酶、Asp-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白水解之后，nLC-orbitrap MS/MS分析检测到L1(DV1-GV4)与抗体1141_P01_E01之间的20个交联肽。结果呈现在图11中。
表位作图结果的汇总呈现于表5中。
表5：抗原/抗体复合物的表位作图结果
克隆ID SEQ ID NO:1的表位作图氨基酸编号
1245_P01_E07 5、9、16、20、62、64、72、77
1252_P01_C08 50、53、59、62、64
1245_P02_G04 37、42、50、53、59、64、68、69、72、73、77
1251_P02_C05 59、60、68、72
1141_P01_E01 3、5、9、10、12、16、17、62、64、68、69
序列表
<110> 伽马三角洲疗法有限公司
<120> 新颖的抗TCR δ可变1抗体
<130> P73816KST
<150> GB1911799.3
<151> 2019-08-16
<150> GB2010760.3
<151> 2020-07-13
<160> 135
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 209
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Ala Gln Lys Val Thr Gln Ala Gln Ser Ser Val Ser Met Pro Val Arg
1 5 10 15
Lys Ala Val Thr Leu Asn Cys Leu Tyr Glu Thr Ser Trp Trp Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile Phe Trp Tyr Lys Gln Leu Pro Ser Lys Glu Met Ile Phe Leu
35 40 45
Ile Arg Gln Gly Ser Asp Glu Gln Asn Ala Lys Ser Gly Arg Tyr Ser
50 55 60
Val Asn Phe Lys Lys Ala Ala Lys Ser Val Ala Leu Thr Ile Ser Ala
65 70 75 80
Leu Gln Leu Glu Asp Ser Ala Lys Tyr Phe Cys Ala Leu Gly Glu Ser
85 90 95
Leu Thr Arg Ala Asp Lys Leu Ile Phe Gly Lys Gly Thr Arg Val Thr
100 105 110
Val Glu Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg
115 120 125
Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp
130 135 140
Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr
145 150 155 160
Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser
165 170 175
Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe
180 185 190
Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser
195 200 205
Ser
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 2
Val Asp Tyr Ala Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 3
Pro Ile Glu Leu Gly Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 4
Thr Trp Ser Gly Tyr Val Asp Val
1 5
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 5
Glu Asn Tyr Leu Asn Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 6
Asp Ser Gly Val Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 7
His Gln Val Asp Thr Arg Thr Ala Asp Tyr
1 5 10
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 8
Ser Trp Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 9
Asp Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Val
1 5
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 10
His Ser Trp Asn Asp Ala Phe Asp Val
1 5
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 11
Asp Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Val
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 12
His Ser Trp Ser Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 13
His Ser Trp Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 14
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Leu Leu Thr
1 5
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 15
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val
1 5 10
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 16
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Gln Val Thr
1 5 10
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 17
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 18
Gln Gln Phe Lys Arg Tyr Pro Pro Thr
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 19
Ser Ser Tyr Thr Ser Thr Ser Thr Leu Val
1 5 10
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 20
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 21
Gln Gln Ser His Ser His Pro Pro Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 22
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asp Thr
1 5
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 23
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Val Thr
1 5
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 24
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 25
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 25
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Leu Leu Thr
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 26
Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 27
Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 28
Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Ser Thr
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 29
Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 30
Ile Ser Gly Gly Gly Gly Thr Thr
1 5
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 31
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 32
Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn
1 5
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 33
Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn
1 5
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 34
Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 35
Thr Tyr Tyr Gly Ser Lys Trp Tyr Asn
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 36
Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 37
Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 38
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 39
Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 40
Gly Asp Ser Val Ser Ser Lys Ser Ala Ala
1 5 10
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 41
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 42
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 43
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 44
Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 45
Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala
1 5 10
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 46
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 47
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 47
Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala
1 5 10
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 48
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 49
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 49
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 50
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 50
Gln Ser Ile Gly Thr Tyr
1 5
<210> 51
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 51
Asn Ile Gly Ser Gln Ser
1 5
<210> 52
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 52
Gln Asp Ile Asn Asp Trp
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 53
Gln Ser Leu Ser Asn Tyr
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 54
Gln Asn Ile Arg Thr Trp
1 5
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Arg Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Gln Ser Ile Ser Thr Trp
1 5
<210> 57
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 57
Gln Ser Ile Ser Ser Trp
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 58
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 59
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 59
Gln Ser Ile Ser Thr Trp
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 61
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 61
Gln Ser Ile Ser Ser His
1 5
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<211> 118
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asp Tyr Ala Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 63
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 63
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser Pro Ile Glu Leu Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 64
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 64
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Lys
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Ser Thr Asp Tyr Ala
50 55 60
Ala Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Leu Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Trp Ser Gly Tyr Val Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 65
<211> 118
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 65
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Leu Asn Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 66
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 66
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Thr Thr Tyr Ser Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Gly Val Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 67
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gln Val Asp Thr Arg Thr Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 68
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
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Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
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<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 69
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
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Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
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Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
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Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
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Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Ser Trp Asn Asp Ala Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 71
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 71
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Gly Ser Lys Trp Tyr Asn Glu Tyr Ala
50 55 60
Leu Ser Val Lys Ser Arg Ile Ile Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 72
<211> 118
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 72
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Ser Trp Ser Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 73
<211> 118
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Ser Trp Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 74
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 74
Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Arg Ala Gly Gln Ser Ile Gly
20 25 30
Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr
85 90 95
Leu Leu Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 75
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 75
Ala Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro
1 5 10 15
Gly Lys Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Gln
20 25 30
Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu
65 70 75 80
Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser
85 90 95
Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 76
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 76
Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Pro Ala Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn
20 25 30
Asp Trp Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
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Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr
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100 105 110
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<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 77
Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Leu Ser
20 25 30
Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr
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Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 78
Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser
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Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg
20 25 30
Thr Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu
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Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
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Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
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<211> 112
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 79
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1 5 10 15
Gly Gln Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Arg Ser Asp Val Gly
20 25 30
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<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 80
Ala Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ile Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Gly Gln Ser Ile Ser
20 25 30
Thr Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
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100 105
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<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 81
Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
20 25 30
Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
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Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
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<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 82
Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
20 25 30
Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
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Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
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<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 83
Ala Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ile Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Gly Gln Ser Ile Ser
20 25 30
Thr Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Leu Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr
85 90 95
Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 84
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 84
Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser
20 25 30
Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr
85 90 95
Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 85
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 85
Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
20 25 30
Ser His Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
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85 90 95
Leu Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 86
<211> 240
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 86
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
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Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Arg Ala Gly Gln
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Ser Ile Gly Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro
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Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
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Tyr Ser Thr Leu Leu Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235 240
<210> 87
<211> 240
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 87
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser Pro Ile Glu Leu Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Ala Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val
130 135 140
Ala Pro Gly Lys Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly
145 150 155 160
Ser Gln Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met
165 170 175
Leu Val Ile Tyr Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg
195 200 205
Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser
210 215 220
Ser Ser Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
<210> 88
<211> 243
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 88
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Lys
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Ser Thr Asp Tyr Ala
50 55 60
Ala Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Leu Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Trp Ser Gly Tyr Val Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Asp Ile Asn Asp Trp Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly
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Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly
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Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Gln Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 89
<211> 240
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 89
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Asn Tyr Leu Asn Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln
145 150 155 160
Ser Leu Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
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Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro
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Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
210 215 220
Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235 240
<210> 90
<211> 239
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 90
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
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Ser Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Thr Thr Tyr Ser Ser Asp Ser Val
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130 135 140
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Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
180 185 190
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195 200 205
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Lys
210 215 220
Arg Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Leu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 91
<211> 244
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 91
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
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65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Ala Arg His Gln Val Asp Thr Arg Thr Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Ala Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val
130 135 140
Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Arg
145 150 155 160
Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His His Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Pro Ser
180 185 190
Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ser Ser Tyr Thr Ser Thr Ser Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu
<210> 92
<211> 242
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 92
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Trp Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser
130 135 140
Thr Leu Ser Ala Ser Ile Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
145 150 155 160
Gly Gln Ser Ile Ser Thr Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly
180 185 190
Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
225 230 235 240
Ile Lys
<210> 93
<211> 242
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 93
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
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Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
130 135 140
Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly
180 185 190
Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Ser His Ser His Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp
225 230 235 240
Ile Lys
<210> 94
<211> 240
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 94
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Ser Trp Asn Asp Ala Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
210 215 220
Tyr Ser Thr Pro Asp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235 240
<210> 95
<211> 242
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 95
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Gly Ser Lys Trp Tyr Asn Glu Tyr Ala
50 55 60
Leu Ser Val Lys Ser Arg Ile Ile Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser
130 135 140
Thr Leu Ser Ala Ser Ile Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
145 150 155 160
Gly Gln Ser Ile Ser Thr Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly
180 185 190
Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu
195 200 205
Ala Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
225 230 235 240
Ile Lys
<210> 96
<211> 240
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 96
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Ser Trp Ser Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln
145 150 155 160
Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
210 215 220
Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235 240
<210> 97
<211> 240
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 97
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Ser Trp Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Ser Ile Ser Ser His Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
210 215 220
Tyr Ser Thr Leu Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235 240
<210> 98
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成接头
<400> 98
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
1 5 10
<210> 99
<211> 765
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 99
gccatggccc aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tggtcaagcc tggagggtcc 60
ctgagactct cctgtgcagc ctctggattc accttcagtg actactacat gagctggatc 120
cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtttcataca ttagtagtag tggtagtacc 180
atatactacg cagactctgt gaagggccga ttcaccatct ccagggacaa cgccaagaac 240
tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggctgtgta ttactgtgca 300
agggtggact acgctgatgc atttgatatc tggggccagg gcaccctggt caccgtctcg 360
agtggtggag gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcgctagcga catccagatg 420
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cgcttgccgg 480
gcaggtcaga gcattggcac ctatttaaat tggtatcagc agaaaccagg gaaagcccct 540
aaactcctga tctatgttgc atccagtttg caaagtgggg tcccgtcacg gttcagtggc 600
agtggatctg ggacagaatt cactctcacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgca 660
acttactact gtcaacagag ttacagtacc ctcctcactt tcggcagagg gaccaaggtg 720
gaaatcaaac gtaccgcggc cgcatccgca catcatcatc accat 765
<210> 100
<211> 768
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 100
gccatggccg aggtgcagct gttggagtct gggggaggct tggtacagcc tggcaggtcc 60
ctgagactct cctgtgcagc ctctgggttc accgtcagta gcaactacat gagctgggtc 120
cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtctcagtta tttatagcgg tggtagcaca 180
tactacgcag actccgtgaa gggccgattc accatctcca gagacaattc caagaacacg 240
ctgtatcttc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ctgtgtatta ctgtgcgagc 300
cccatagagc tgggtgcttt tgatatctgg ggccaaggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360
ggtggaggcg gttcaggcgg aggtggctct ggcggtggcg ctagctccta tgagctgact 420
cagccaccct cagtgtcagt ggccccagga aagacggcca ggattacctg tgggggaaac 480
aacattggaa gtcaaagtgt gcactggtac cagcagaagc caggccaggc ccctatgctg 540
gtcatctatt atgatagcga ccggccctca gggatccctg agcgattctc tggctccaac 600
tctgggaaca cggccaccct gaccatcagc agggtcgaag ccggggatga ggccgactat 660
tactgtcagg tgtgggatag tagtagtgat catgtggtat tcggcggcgg gaccaagctg 720
accgtcctag gtcagcccgc ggccgcatcc gcacatcatc atcaccat 768
<210> 101
<211> 774
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 101
gccatggccc aggtacagct gcagcagtca ggtccaggac tggtgaagcc ctcgcagacc 60
ctctcactca cctgtgccat ctccggggac agtgtctcca gcaaaagtgc tgcttggaac 120
tggatcaggc agtccccatc gagaggcctt gagtggctgg gaaggacata ctacaggtcc 180
aagtggtcta ctgattatgc agcatctgtg aaaagtcgaa taaccatcaa cccagacaca 240
tccaagaacc agctctccct gcagttaaac tctgtgactc ccgaggacac ggctgtgtat 300
tactgtgcaa gaacgtggag tggttatgtg gacgtctggg gccaaggaac cctggtcacc 360
gtctcgagtg gtggaggcgg ttcaggcgga ggtggctctg gcggtggcgc tagcgacatc 420
cagatgaccc agtcccctcc cgccctgtct gcatctgtgg gagacagagt caccatcact 480
tgccgggcca gtcaagatat taatgactgg ttggcctggt atcagcataa acctgggaaa 540
gcccctaagc tcctgatcta tgatgcctcc agtttggaaa gtggggtccc atcaaggttc 600
agcggcagtg gatctgggac agaattcact ctcaccatca gcagcctgca gcctgatgat 660
tttgcaactt actactgtca acagagttac agtacccctc aggtcacttt tggccagggg 720
acacgactgg agatcaaacg taccgcggcc gcatccgcac atcatcatca ccat 774
<210> 102
<211> 765
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 102
gccatggccg aggtgcagct gttggagtct gggggaggct tggtcaagcc tggagggtcc 60
ctgagactct cctgtgcggc ctctggattc accttcagtg actactacat gagctggatc 120
cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtttcataca ttagtagtag tggtagtacc 180
atatactacg cagactctgt gaagggccga ttcaccatct ccagggacaa cgccaagaac 240
tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggccgtgta ttactgtgcg 300
agagaaaact atctaaatgc ttttgatatc tggggccgtg gcaccctggt caccgtctcg 360
agtggtggag gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcgctagcga catccagatg 420
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 480
acaagtcaga gccttagtaa ttacttaaat tggtatcagc agaaaccagg gaaagcccct 540
aagctcctga tctatgctgc atccagtttg caaagtgggg tcccatcaag gttcagtggc 600
agtggatctg ggacagattt cactctcacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgcg 660
acttactact gtcaacagag ttacagtacc cctctcactt tcggcggagg gaccaagcta 720
gagatcaaac gtaccgcggc cgcatccgca catcatcatc accat 765
<210> 103
<211> 762
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 103
gccatggccg aggtgcagct gttggagtct gggggaggct tggtacagcc tggggggtcc 60
ctgagactct cctgtgcagc ctctggattc acctttagca gctatgccat gagctgggtc 120
cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtctcagcta ttagtggtgg tggtggtacc 180
acatactcct cagactccgt gaagggccgg ttcaccatct ccagagacaa ttccaagaac 240
acgctgtatc tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggctgtgta ttactgtgcg 300
agagattcag gggttgcttt tgatatctgg ggccaaggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360
ggtggaggcg gttcaggcgg aggtggctct ggcggtggcg ctagcgacat ccagatgacc 420
cagtctccat ccttcctgtc tgcatctgta ggagacagag tcaccatcac ttgccgggcc 480
agtcagaata tacgtacctg gttggcctgg tatcagcaga aaccagggag agcccctaag 540
ctcctgatct atgatgcctc cagtttggaa agtggggtcc catcaaggtt cagcggcagt 600
ggatctggga ctgatttcac tctcaccatc agcagcctgc agcctgaaga ttttgcaact 660
tattactgtc aacagtttaa acgttaccct ccgacgtttg gcctggggac caaggtggag 720
atcaaacgta ccgcggccgc atccgcacat catcatcacc at 762
<210> 104
<211> 780
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 104
gccatggccc aggtccagct ggtacagtct ggagcagagg tgaaaaagcc cggggagtct 60
ctgaagatct cctgtaaggg ttctggatac agctttacca gctactggat cggctgggtg 120
cgccagatgc ccgggaaagg cctggagtgg atggggatca tctatcctgg tgactctgat 180
accagataca gcccgtcctt ccaaggccag gtcaccatct cagccgacaa gtccatcagc 240
accgcctacc tgcagtggag cagcctgaag gcctcggaca ccgccatgta ttattgtgcg 300
agacatcagg ttgatacacg gacggctgat tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcgagtggtg gaggcggttc aggcggaggt ggctctggcg gtggcgctag ccagtctgcg 420
ctgactcagc ctgcctccgt gtctgggtct cctggacagt cggtcaccat ctcctgcact 480
ggaaccagga gtgacgttgg tggttataac tatgtctcct ggtaccaaca ccacccaggc 540
aaagccccca aactcatgat ttatgaggtc agtaatcggc cctcaggggt ttctaatcgc 600
ttctctggct ccaagtctgg caacacggcc tccctgacca tctctgggct ccaggctgag 660
gacgaggctg attattactg cagctcatat acaagcacca gcactctggt attcggcgga 720
gggaccaagc tgaccgtcct aggtcagccc gcggccgcat ccgcacatca tcatcaccat 780
<210> 105
<211> 771
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 105
gccatggccc aggtacagct gcagcagtca ggtccaggac tggtgaagcc ctcgcagacc 60
ctctcactca cctgtgccat ctccggggac agtgtctcta gcaacagtgc tgcttggaac 120
tggatcaggc agtccccatc gagaggcctt gagtggctgg gaaggacata ctacaggtcc 180
aagtggtata atgattatgc agtatctgtg agaagtcgaa taaccatcaa cccagacaca 240
tccaagaacc agttctccct gcagctgaac tctgtgactc ccgaggacac ggctgtgtat 300
tactgtgcaa gaagctggaa tgatgctttt gatatctggg ggcaagggac cacggtcacc 360
gtctcgagtg gtggaggcgg ttcaggcgga ggtggctctg gcggtggcgc tagcgatatt 420
gtgatgacac agtctccttc caccctgtct gcatctatag gagacagagt caccatcact 480
tgccgggccg gtcagagtat tagtacctgg ttggcctggt atcagcagaa accagggaaa 540
gcccctaagc tcctgatcta tgatgcctcc agtttggaaa gtggggtccc attaaggttc 600
agcggcagtg gatctgggac agatttcact ctcaccatca gcagtctgca acctgaagat 660
tttgcaactt actactgtca acagagttac agtaccccgc tcactttcgg cggagggacc 720
aaggtggaga tcaaacgtac cgcggccgca tccgcacatc atcatcacca t 771
<210> 106
<211> 771
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 106
gccatggccc aggtacagct gcagcagtca ggtccaggcc tggtgaagcc ctcgcagacc 60
ctctcactca cctgtgtcat ctccggggac agtgtctcta gcaacagtgc tgcttggaac 120
tggatcaggc agtccccatc gcgaggcctt gagtggctgg gaaggacata ctacaggtcc 180
aagtggtata atgattatgc agtatctgtg aaaagtcgaa taaccatcaa cccagacaca 240
tccaagaacc agttctccct gcagctgaac tctgtgactc ccgaggacac ggctgtctat 300
tattgtgcaa gagactacta ctacagtatg gacgtctggg gccaagggac aatggtcacc 360
gtctcgagtg gtggaggcgg ttcaggcgga ggtggctctg gcggtggcgc tagcgacatc 420
cagatgaccc agtctccctc caccctgtct gcatctgtag gagacagagt caccatcact 480
tgccgggcca gtcagagtat tagtagctgg ttggcctggt atcagcagaa accagggaaa 540
gcccctaagc tcctgatcta tgatgcctcc agtttggaaa gtggggtccc attaaggttc 600
agcggcagtg gatctgggac agaattcact ctcaccatca gcagcctgca gcctgatgat 660
tttgcaactt attactgtca acagagtcac agtcaccccc ctactttcgg ccctgggacc 720
aaagtggata tcaaacgtac cgcggccgca tccgcacatc atcatcacca t 771
<210> 107
<211> 765
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 107
gccatggccc aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tggtcaagcc tggagggtcc 60
ctgagactct cctgtgcagc ctctggattc accttcagtg actactacat gagctggatc 120
cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtttcataca ttagtagtag tggtagtacc 180
atatactacg cagactctgt gaagggccga ttcaccatct ccagggacaa cgccaagaac 240
tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggccgtgta ttactgtgcg 300
agacatagct ggaatgatgc ttttgatgtc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360
agtggtggag gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcgctagcga catccagatg 420
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtctccat cacctgccgg 480
gcaagtcaga gcattagcag ctatttaaat tggtatcagc agaaaccagg gaaagcccct 540
aagctcctga tctatgctgc atccagtttg caaagtgggg tcccatcaag gttcagtggc 600
agtggatctg ggacagattt cactctcacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgca 660
acttactact gtcagcagag ttacagtacc cccgacactt tcggcggagg gaccaaggtg 720
gaaatcaaac gtaccgcggc cgcatccgca catcatcatc accat 765
<210> 108
<211> 771
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 108
gccatggccc aggtacagct gcagcagtca ggtccaggac tggtgaagcc ctcgcagacc 60
ctctcactca cctgtgccat ctccggggac agtgtctcta gcaacagtgc tgcttggaac 120
tggatcaggc agtccccatc gagaggcctt gagtggctgg gaaggacata ctacgggtcc 180
aagtggtata atgagtatgc actatctgtg aaaagtcgaa taatcatcaa cccagacaca 240
tccaagaacc agttctccct gcagctgaac tctgtgactc ccgaggacac ggctgtctat 300
tattgtgcaa gagactacta ctacagtatg gacgtctggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcgagtg gtggaggcgg ttcaggcgga ggtggctctg gcggtggcgc tagcgatatt 420
gtgatgactc agtctccttc caccctgtct gcatctatag gagacagagt caccatcact 480
tgccgggccg gtcagagtat tagtacctgg ttggcctggt atcagcagaa accagggaaa 540
gcccctaagc tcctgatcta tgatgcctcc agtttggaaa gtggggtccc attaaggttc 600
agcggcagtg gatctgggac agaattcact ctcgccatca gcagcctgca gcctgatgat 660
tttgcaactt actactgtca acagagttac agtaccccgg taacttttgg ccaggggacc 720
aaggtggaga tcaaacgtac cgcggccgca tccgcacatc atcatcacca t 771
<210> 109
<211> 765
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 109
gccatggccg aggtgcagct gttggagtct gggggaggct tggtcaagcc tggagggtcc 60
ctgagactct cctgtgcagc ctctggattc accttcagtg actactacat gagctggatc 120
cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtttcataca ttagtagtag tggtagtacc 180
atatactacg cagactctgt gaagggccga ttcaccatct ccagggacaa cgccaagaac 240
tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggccgtgta ttactgtgcg 300
agacatagct ggagtgatgc ttttgatatc tggggccaag gaaccctggt caccgtctcg 360
agtggtggag gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcgctagcga catccagatg 420
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccag 480
gcgagtcagg acattagcaa ctatttaaat tggtatcagc agaaaccagg gaaagcccct 540
aagctcctga tctacgatgc atccaatttg gaaacagggg tcccatcaag gttcagtgga 600
agtggatctg ggacagattt cactctcacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgca 660
acttactact gtcaacagag ttacagtact cctctcactt tcggcggagg gaccaaggtg 720
gagatcaaac gtaccgcggc cgcatccgca catcatcatc accat 765
<210> 110
<211> 765
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 110
gccatggccg aagtgcagct ggtggagtcc gggggaggct tagttcagcc tggggggtcc 60
ctgagactct cctgtgcagc ctctggattc accttcagtg actactacat gagctggatc 120
cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtttcataca ttagtagtag tggtagtacc 180
atatactacg cagactctgt gaagggccga ttcaccatct ccagggacaa cgccaagaac 240
tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggccgtgta ttactgtgcg 300
agacatagct ggaatgatgc ttttgatatc tggggccgtg gcaccctggt caccgtctcg 360
agtggtggag gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcgctagcga catccagatg 420
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 480
gcaagtcaga gcattagcag ccatttaaat tggtatcagc agaaaccagg gaaagcccct 540
aagctcctga tctatgctgc atccagtttg caaagtgggg tcccatccag gttcagtgcc 600
agtggatctg ggacagattt cactctcacc atcagcagcc tgcagcctga agattttgca 660
acttactact gtcaacagag ttacagtacc ctgctcactt tcggcggagg gaccaaggtg 720
gaaatcaaac gtaccgcggc cgcatccgca catcatcatc accat 765
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<400> 117
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Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
405 410 415
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
420 425 430
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
435 440 445
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
450 455 460
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
465 470 475 480
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
485 490 495
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
500 505 510
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
515 520 525
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
530 535 540
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
545 550 555 560
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
565 570 575
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
580 585 590
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
595 600 605
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
610 615 620
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
625 630 635 640
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
645 650 655
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
660
<210> 123
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TRDV1（3OMZ）TRAC抗原序列
<400> 123
Ala Gln Lys Val Thr Gln Ala Gln Ser Ser Val Ser Met Pro Val Arg
1 5 10 15
Lys Ala Val Thr Leu Asn Cys Leu Tyr Glu Thr Ser Trp Trp Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile Phe Trp Tyr Lys Gln Leu Pro Ser Lys Glu Met Ile Phe Leu
35 40 45
Ile Arg Gln Gly Ser Asp Glu Gln Asn Ala Lys Ser Gly Arg Tyr Ser
50 55 60
Val Asn Phe Lys Lys Ala Ala Lys Ser Val Ala Leu Thr Ile Ser Ala
65 70 75 80
Leu Gln Leu Glu Asp Ser Ala Lys Tyr Phe Cys Ala Leu Gly Glu Ser
85 90 95
Leu Thr Arg Ala Asp Lys Leu Ile Phe Gly Lys Gly Thr Arg Val Thr
100 105 110
Val Glu Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg
115 120 125
Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp
130 135 140
Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr
145 150 155 160
Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser
165 170 175
Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe
180 185 190
Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser
195 200 205
Ser Cys Thr Thr Ala Pro Ser Ala Gln Leu Lys Lys Lys Leu Gln Ala
210 215 220
Leu Lys Lys Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu Gln Ala Leu Lys
225 230 235 240
Lys Lys Leu Ala Gln Gly Ser Gly His His His His His His
245 250
<210> 124
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 任选的scFv标签序列（κ序列+His标签）
<400> 124
Arg Thr Ala Ala Ala Ser Ala His His His His His
1 5 10
<210> 125
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 任选的scFv标签序列（κ序列+His和FLAG标签）
<400> 125
Arg Thr Ala Ala Ala Ser Ala His His His His His His Lys Leu Asp
1 5 10 15
Tyr Lys Asp His Asp Gly Asp Tyr Lys Asp His Asp Ile Asp Tyr Lys
20 25 30
Asp Asp Asp Asp Lys
35
<210> 126
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 任选的scFv标签序列（λ序列+His标签）
<400> 126
Gly Gln Pro Ala Ala Ala Ser Ala His His His His His
1 5 10
<210> 127
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 任选的scFv 标签序列（λ序列+His和FLAG标签）
<400> 127
Gly Gln Pro Ala Ala Ala Ser Ala His His His His His His Lys Leu
1 5 10 15
Asp Tyr Lys Asp His Asp Gly Asp Tyr Lys Asp His Asp Ile Asp Tyr
20 25 30
Lys Asp Asp Asp Asp Lys
35
<210> 128
<211> 254
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 128
Ala Gln Lys Val Thr Gln Ala Gln Ser Ser Val Ser Met Pro Val Arg
1 5 10 15
Lys Ala Val Thr Leu Asn Cys Leu Tyr Glu Thr Ser Trp Trp Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile Phe Trp Tyr Lys Gln Leu Pro Ser Lys Glu Met Ile Phe Leu
35 40 45
Ile Arg Gln Gly Ser Asp Glu Gln Asn Ala Lys Ser Gly Arg Tyr Ser
50 55 60
Val Asn Phe Lys Lys Ala Val Lys Ser Val Ala Leu Thr Ile Ser Ala
65 70 75 80
Leu Gln Leu Glu Asp Ser Ala Lys Tyr Phe Cys Ala Leu Gly Glu Ser
85 90 95
Leu Thr Arg Ala Asp Lys Leu Ile Phe Gly Lys Gly Thr Arg Val Thr
100 105 110
Val Glu Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg
115 120 125
Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp
130 135 140
Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr
145 150 155 160
Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser
165 170 175
Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe
180 185 190
Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser
195 200 205
Ser Cys Thr Thr Ala Pro Ser Ala Gln Leu Lys Lys Lys Leu Gln Ala
210 215 220
Leu Lys Lys Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu Gln Ala Leu Lys
225 230 235 240
Lys Lys Leu Ala Gln Gly Ser Gly His His His His His His
245 250
<210> 129
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 129
Met Leu Phe Ser Ser Leu Leu Cys Val Phe Val Ala Phe Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Gly Ser Ser Val
20
<210> 130
<211> 95
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 130
Ala Gln Lys Val Thr Gln Ala Gln Ser Ser Val Ser Met Pro Val Arg
1 5 10 15
Lys Ala Val Thr Leu Asn Cys Leu Tyr Glu Thr Ser Trp Trp Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile Phe Trp Tyr Lys Gln Leu Pro Ser Lys Glu Met Ile Phe Leu
35 40 45
Ile Arg Gln Gly Ser Asp Glu Gln Asn Ala Lys Ser Gly Arg Tyr Ser
50 55 60
Val Asn Phe Lys Lys Ala Ala Lys Ser Val Ala Leu Thr Ile Ser Ala
65 70 75 80
Leu Gln Leu Glu Asp Ser Ala Lys Tyr Phe Cys Ala Leu Gly Glu
85 90 95
<210> 131
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 131
Thr Asp Lys Leu Ile Phe Gly Lys Gly Thr Arg Val Thr Val Glu Pro
1 5 10 15
<210> 132
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 132
Leu Thr Ala Gln Leu Phe Phe Gly Lys Gly Thr Gln Leu Ile Val Glu
1 5 10 15
Pro
<210> 133
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 133
Ser Trp Asp Thr Arg Gln Met Phe Phe Gly Thr Gly Ile Lys Leu Phe
1 5 10 15
Val Glu Pro
<210> 134
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 134
Arg Pro Leu Ile Phe Gly Lys Gly Thr Tyr Leu Glu Val Gln Gln
1 5 10 15
<210> 135
<211> 153
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 135
Xaa Ser Gln Pro His Thr Lys Pro Ser Val Phe Val Met Lys Asn Gly
1 5 10 15
Thr Asn Val Ala Cys Leu Val Lys Glu Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Arg
20 25 30
Ile Asn Leu Val Ser Ser Lys Lys Ile Thr Glu Phe Asp Pro Ala Ile
35 40 45
Val Ile Ser Pro Ser Gly Lys Tyr Asn Ala Val Lys Leu Gly Lys Tyr
50 55 60
Glu Ser Asn Ser Val Thr Cys Ser Val Gln His Asp Asn Lys Thr Val
65 70 75 80
His Ser Thr Asp Phe Glu Val Lys Thr Asp Ser Thr Asp His Val Lys
85 90 95
Pro Lys Glu Thr Glu Asn Thr Lys Gln Pro Ser Lys Ser Cys His Lys
100 105 110
Pro Lys Ala Ile Val His Thr Glu Lys Val Asn Met Met Ser Leu Thr
115 120 125
Val Leu Gly Leu Arg Met Leu Phe Ala Lys Thr Val Ala Val Asn Phe
130 135 140
Leu Leu Thr Ala Lys Leu Phe Phe Leu
145 150

Claims (40)

1.一种人的分离的抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体或其片段，其与γδT细胞受体(TCR)的可变δ1(Vδ1)链的表位结合，所述表位包括
(i)SEQ ID NO:1的氨基酸区：3-20；和/或
(ii)SEQ ID NO:1的氨基酸区：37-77内的一个或多个氨基酸残基。
2.根据权利要求1所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ IDNO:1的氨基酸残基3、5、9、10、12、16、17、20、37、42、50、53、59、62、64、68、69、72或77中的氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区5-20和62-77内的一个或多个氨基酸残基。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区50-64内的一个或多个氨基酸残基。
5.根据权利要求1或权利要求2所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位包括SEQ ID NO:1的氨基酸区37-53和59-77内的一个或多个氨基酸残基。
6.根据权利要求1到5中任一项所述的人的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述表位是γδT细胞的活化表位。
7.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括以下中的一个或多个：
包括与SEQ ID NO:2-25中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR3；
包括与SEQ ID NO:26-37和序列：A1-A12(表2)中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR2；和/或
包括与SEQ ID NO:38-61中的任何一个具有至少80％序列同一性的序列的CDR1。
8.根据权利要求7所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VH区：包括SEQID NO:2的序列的CDR3；包括SEQ ID NO:26的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:38的序列的CDR1。
9.根据权利要求7所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VH区：包括SEQID NO:3的序列的CDR3；包括SEQ ID NO:27的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:39的序列的CDR1。
10.根据权利要求7所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VH区：包括SEQ ID NO:4的序列的CDR3；包括SEQ ID NO:28的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:40的序列的CDR1。
11.根据权利要求7所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VL区：包括SEQ ID NO:14的序列的CDR3；包括序列：A1的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:50的序列的CDR1。
12.根据权利要求7所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VL区：包括SEQ ID NO:15的序列的CDR3；包括序列：A2的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:51的序列的CDR1。
13.根据权利要求7所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括包含以下的VL区：包括SEQ ID NO:16的序列的CDR3；包括序列：A3的序列的CDR2；以及包括SEQ ID NO:52的序列的CDR1。
14.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括与SEQ ID NO:62-85中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
15.根据权利要求14所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:62的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:74的氨基酸序列。
16.根据权利要求14所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:63的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列。
17.根据权利要求14所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括VH区和VL区，所述VH区包括SEQ ID NO:64的氨基酸序列，所述VL区包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列。
18.根据权利要求7到17中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其中所述抗vδ1抗体或其片段包括VH区和VL，并且其中所述VH区和所述VL区通过接头，如多肽接头接合。
19.一种分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括与SEQ ID NO:86-97中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
20.根据权利要求19所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ ID NO:86。
21.根据权利要求19所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ ID NO:87。
22.根据权利要求19所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其包括SEQ ID NO:88。
23.根据权利要求1到22中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其以如通过表面等离子体共振测量的小于1.5×10-7M的结合亲和力(KD)与γδT细胞受体(TCR)的可变δ1(Vδ1)链结合。
24.根据权利要求1到23中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其是scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、可变结构域(例如，VH或VL)、双功能抗体、微型抗体或全长抗体。
25.根据权利要求24所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其是scFv或全长抗体，如IgG1。
26.根据权利要求25所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括与SEQ ID NO:111-122中的任何一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
27.根据权利要求26所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:111。
28.根据权利要求26所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:112。
29.根据权利要求26所述的分离的抗Vδ1抗体，其包括SEQ ID NO:116。
30.根据权利要求7到29中任一项所述的分离的抗Vδ1抗体或其片段，其是人的。
31.一种多核苷酸序列，其对根据权利要求1到30中任一项所述的抗Vδ1抗体或其片段进行编码。
32.一种多核苷酸序列，其对包括与SEQ ID NO:99-110具有至少70％序列同一性的序列的抗Vδ1抗体或其片段进行编码。
33.一种表达载体，其包括根据权利要求31或权利要求32所述的多核苷酸序列。
34.一种细胞，其包括根据权利要求31或权利要求32所述的多核苷酸序列或根据权利要求33所述的表达载体。
35.一种组合物，其包括根据权利要求1到30中任一项所述的抗体或其片段。
36.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到30中任一项所述的抗体或其片段，连同药学上可接受的稀释剂或载体。
37.一种产生抗Vδ1抗体或其片段的方法，所述方法包括：
(i)设计包括TCRδ可变1(TRDV1)氨基酸序列的一系列抗原，其中所述TRDV1的CDR3序列对于所述系列中的所有抗原都是相同的；
(ii)使步骤(i)中设计的第一抗原暴露于抗体文库；
(iii)分离与所述抗原结合的所述抗体或其片段；
(iv)使分离的抗体或其片段暴露于步骤(i)中设计的第二抗原；以及
(v)分离与所述第一抗原和所述第二抗原两者结合的所述抗体或其片段。
38.根据权利要求37所述的方法，其进一步包括：使所述分离的抗体或其片段暴露于第二系列抗原，所述第二系列抗原包括具有不同δ可变链的γδTCR，如TCRδ可变2(TRDV2)或TCRδ可变3(TRDV3)；以及然后取消选择也与所述第二系列抗原结合的所述抗体或其片段。
39.根据权利要求37或权利要求38所述的方法，其中所述一系列抗原呈异源二聚体和/或同源二聚体格式。
40.一种抗体，其通过根据权利要求37到39中任一项所述的方法获得。
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