CN114486646A - 细胞分析方法和系统及定量方法和系统 - Google Patents

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Abstract

一种细胞分析方法和系统，所基于显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；细胞悬浮液样品中的参比粒子实际尺寸DR1或参比粒子实际面积SR1已知；基于已知的参比粒子特征信息进行细胞分析，细胞分析包括细胞尺寸、细胞分类、细胞计数、参比粒子计数、显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积的定量、细胞悬浮液样品中的细胞浓度、原始的身体液体样本中的细胞浓度。利用参比粒子参与成像的显微图像，参与成像的细胞悬浮液样品能定量计算，简化了细胞分类方法和细胞计数方法，提高了计数准确性。

Description

细胞分析方法和系统及定量方法和系统
技术领域
本申请属于细胞分析方法和系统领域；尤其涉及基于细胞悬浮液样品的成像后获得的显微图像进行细胞分析的方法和系统。
背景技术
如图3所示，是现有技术中一个血涂片的制作过程示意图，由图可见其包括血涂片制作的步骤和血涂片染色的步骤。
血涂片制作的步骤中包括四个小步骤：分别是，步骤1.1：将血样滴加至载玻片上；步骤1.2：取另一载玻片，按30°～45°角倾斜，匀速向另一边推动；步骤1.3：血膜涂布均匀，呈“火焰”状为合格的涂片；步骤1.4：等待血膜干燥，并准备染色。
涂片染色的步骤中包括五个小步骤：分别是，步骤2.1：铅笔作标记，将血涂片平放在染色架上,蜡笔划线可防液体外溢；步骤2.2：血涂片自然干燥后，滴染液1～2滴覆盖血片,染约1分钟；步骤2.3：滴加稍多体积如2～4滴）的缓冲液，用洗耳球将其与染液吹匀,染约5分钟；步骤2.4：慢慢摇动玻片，然后用细的自来水流从玻片的一侧冲去染液(注意，需要不要先倒去染液再冲水)，持续约1分钟；步骤2.5：终止冲洗，将血片自然干燥后或用滤纸吸干，即可用于镜检。
用于镜检的涂片上的细胞数量是通过人工在显微镜下进行观察和计数，观察效率极低。不光是在明场镜检的场景中，在一些荧光成像镜检的场景中，也存在明场检测类似的问题，观察和计数都效率低下。且在观察过程中，每次成像图片的放大倍数可能不同，对只能根据经验进行细胞分类和计数；无法对图像中的细胞尺寸进行精确的计算。
现有技术中，有利用染色后的细胞悬浮液样品进行细胞计数的场景中，其计数逻辑是通过引入可承载独立细胞的计数承载面网进行细胞计数；承载面网上与单个隔间尺寸相应的细胞才能被很好的承载展示，并用于细胞识别和计数。由于细胞的种类繁多，不同的细胞需要设计适应不同细胞尺寸的承载面网。且其计数的准确性更多依赖于计数板即形成观察层的承载面网的结构和加工精度，尤其是细胞平铺区或分布区域的体积，当加工精度不够时，误差很大，相应地细胞的识别和分类计数误差也大大增加。
迫切需要采用数字化手段进行图像的处理，对图像中的各种信息进行精确处理和分析；在现在智能算法快速发展的背景下，在图像中识别出单一的细胞或进行细胞计数是容易的，但要通过单幅照片获取原始样本中的细胞浓度却并比较困难；最关键的问题是单幅照片所对应的细胞悬浮液样品的量无法准确获取。而在本发明中，由于参比粒子的引入，可以通过参比粒子在照片或图像中的分布情况获取单幅照片对应的细胞悬浮液样品体积，从而以此为基础进行更准确的细胞计数和细胞浓度计算。
本申请中um是微米；ul是微升；ml是毫升。
发明内容
本申请要解决的技术问题在于避免现有技术上述不足之处，提出了一种简单高效的细胞分析方法，通过参比粒子参与形成观察层，能利用参比粒子进行细胞分析，提高细胞分析尤其是细胞计数和细胞浓度计算的综合效率，且提高了计算的准确性，能降低系统误差在细胞分析中的影响。
本申请解决上述问题的技术方案一种用于获取细胞悬浮液样品中细胞实际尺寸，基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；细胞悬浮液样品中的参比粒子实际尺寸DR1或参比粒子实际面积SR1已知；在同一显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；根据参比粒子实际尺寸DR1或参比粒子实际面积SR1、参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2、细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2，计算获得细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析方法，用于细胞分类，基于上述获得的细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1；按照细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1的大小区间进行细胞分类。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析方法，用于细胞分类，基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；在同一显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；依据细胞图像尺寸DC2和参比粒子图像尺寸DR2的大小关系，进行细胞分类；或依据细胞图像面积SC2和参比粒子图像面积SR2的大小关系，进行细胞分类。
所述细胞分析方法，将细胞图像尺寸DC2小于等于参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第一类细胞，即DC2≤DR2的细胞分类为第一类细胞；或将细胞图像面积SC2小于等于参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第一类细胞，即SC2≤SR2的细胞分类为第一类细胞；将细胞图像尺寸DC2大于参比粒子图像尺寸DR2，且细胞图像尺寸DC2小于等于两倍参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第二类细胞，即1DR2＜DC2≤2DR2的细胞分类为第二类细胞；或将细胞图像面积SC2大于参比粒子图像面积SR2，且细胞图像面积SC2小于等于两倍参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第二类细胞，即1SR2＜SC2≤2SR2的细胞分类为第二类细胞；将细胞图像尺寸DC2大于两倍参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第三类细胞，即2DR2＜DC2的细胞分类为第三类细胞；或将细胞图像面积SC2大于两倍参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第三类细胞，即2SR2＜SC2的细胞分类为第三类细胞。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析方法，用于获取显微图像中的细胞数量，基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；在所述显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；在所述显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像尺寸DC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC；或根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像面积SC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析方法，用于获取显微图像中的参比粒子数量，基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；在所述显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；在所述显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像尺寸DR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR；或根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像面积SR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种定量方法，用于细胞悬浮液样品的定量，即计算获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积，基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；获取显微图像中的参比粒子数量GR；参比粒子在细胞悬浮液样品中的浓度RC已知；获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积VM=GR/RC。
所述定量方法，获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：在所述显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；在所述显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像尺寸DR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR；或根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像面积SR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR。
获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：根据参比粒子形态或参比粒子大小直接识别出参比粒子后，对所有参比粒子计数获得。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析方法，用于获取细胞悬浮液样品中的细胞浓度，基于上述获得显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积VM；获取显微图像中的细胞数量GC；根据显微图像中的细胞数量GC和细胞悬浮液样品体积VM，计算获取细胞悬浮液样品中的细胞浓度CC。计算公式为CC=GC/VM。
所述细胞分析方法，获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：在所述显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；在所述显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像尺寸DC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC；或根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像面积SC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC。
所述细胞分析方法，获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：根据细胞形态或细胞大小直接识别出细胞后，对所有细胞计数获得。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析方法，用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度，基于权利要求10获得的细胞悬浮液样品中的细胞浓度CC；制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本的稀释比率X已知；原始的身体液体样本中的细胞浓度CCF=CC/X。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析方法，用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度，基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；在显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；在显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；在显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；在显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；原始参比粒子溶液的浓度CRF已知；制备细胞悬浮液样品时，加入原始参比粒子溶液体积VR已知；制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本细胞浓度CCF未知；制备细胞悬浮液样品时，加入原始的身体液体样本的体积V1已知；依据已知的ASC2、ASR2、V1、DC2、CRF、VR、DR2，获取原始的身体液体样本的细胞浓度CCF；或依据ASC2、ASR2、V1、SC2、CRF、VR、SR2，获取原始的身体液体样本的细胞浓度CCF。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析方法，用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度，基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；在显微图像中，获取所有细胞个数GC；在显微图像中，获取参比粒子个数GR；原始参比粒子溶液的浓度CRF已知；制备细胞悬浮液样品时，加入原始参比粒子溶液体积VR已知；制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本浓度CCF未知；制备细胞悬浮液样品时，加入原始的身体液体样本体积V1已知；根据已知的CRF、VR、V1、GR、GC计算获得CCF。
所述细胞分析方法，获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：在所述显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；在所述显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像尺寸DC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC；或根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像面积SC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC。
获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：根据细胞形态或细胞大小直接识别出细胞后，对所有细胞计数获得。
获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：在所述显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；在所述显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像尺寸DR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR；或根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像面积SR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR。
获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：根据参比粒子形态或参比粒子大小直接识别出参比粒子后，对所有参比粒子计数获得。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是一种细胞分析系统，包括分析用显微图像获取单元和显微图像分析单元；分析用显微图像获取单元，获取用于细胞分析的显微图像；显微图像分析单元利用上述的细胞分析方法，基于分析用显微图像获取单元获取的显微图像完成细胞分析。
本申请解决上述问题的技术方案还可以是.一种定量系统，包括定量分析显微图像获取单元和定量分析单元；定量分析显微图像获取单元，获取用于定量分析的显微图像；定量分析单元利用上述述的定量方法，基于定量分析显微图像获取单元获取的显微图像，计算获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积。
同现有技术相比较，本申请的有益效果是：1.基于包括参比粒子和细胞的显微图像进行细胞分析，由于参比粒子参与成像，参比粒子可以用作细胞计数数量标尺，简化细胞计数逻辑，提升计数准确性；可直接通过计数显微图片中参比粒子与细胞的数量，来计算原始样本中的细胞浓度或数量;消除了承载面所处空间即细胞核参比粒子平铺区域的深度、视野的大小对细胞计数结果的影响。
附图说明
图1是细胞分析系统的框架示意图；
图2是细胞定量系统的框架示意图；
图3是现有技术中血涂片制作过程示意图;
图4是包括细胞和参比粒子的观察层获得的照片之一；
图5是包括细胞和参比粒子的观察层获得的照片之二；
图6是细胞实际尺寸表格。
具体实施方式
以下结合各附图对本申请的实施方式做进一步详述。
用于获取细胞悬浮液样品中细胞实际尺寸的一种细胞分析方法的实施例中，其所基于显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；细胞悬浮液样品中的参比粒子实际尺寸DR1或参比粒子实际面积SR1已知；在同一显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；根据参比粒子实际尺寸DR1或参比粒子实际面积SR1、参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2、细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2，计算获得细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1。
计算细胞实际尺寸DC1的公式是：DC1=DR1×DC2/DR2；计算细胞实际面积SC1的公式是：SC1=SR1×SC2/SR2。细胞悬浮液样品中包括细胞和参比粒子；细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层；获取观察层部分或全部的至少一幅显微图像，用于细胞分析。
参比粒子和细胞同时在一副显微图像中，使每一副图像都具有一个已知参数的参比粒子，因此每一幅显微图像都能借助已知参数的参比粒子进行其他图像信息进行解析。若参比粒子大小已知，则根据参比粒子大小和图像中细胞大小之间的相对关系，进行细胞分析。
细胞悬浮液样品中包括动物或人的身体液体样本；所述身体液体样本包括血液、尿液、精液、唾液、痰液、妇科分泌物、乳汁、粪便、腹水液、脑脊液、骨髓、泪液、鼻涕中的任意一种或多种。
细胞悬浮液样品中,包括稀释液和或染色液；细胞悬浮液样品中,体液和稀释液混合均匀；或细胞悬浮液样品中,体液和染色液混合均匀；或细胞悬浮液样品中体液、稀释液和染色液三者混合均匀。
染色液包括荧光染色液。细胞悬浮液样品中包括微生物。
参比粒子包括金粒子、银粒子、碳粒子、四氧化三铁粒子、氧化硅粒子、聚苯乙烯粒子、聚丙烯粒子、聚碳酸酯粒子、陶瓷粒子、壳聚糖粒子、纤维素粒子中的任意一种或多种。参比粒子中包括磁珠粒子；磁珠粒子中包括四氧化三铁Fe3O4粒子。
参比粒子的材质可以根据不同的场景进行选择，不同的身体液体样本中所包含的细胞特征不同，如细胞的大小、细胞的电学特性不同；所述参比粒子的形状包括球体、锥体、长方体中的任意一种或多种。
参比粒子的形状可以根据待分析细胞的特征进行选择，可以选择和细胞特征差异大的形状，也可以选择和细胞特征相似的形状。参比粒子的形状和细胞的形状差异大时，可以利用形状差异特征进行细胞分析和鉴别。参比粒子形状和细胞形状相似时，也可以用来进行细胞分析和鉴别。
参比粒子为球形，球形的直径用作参比粒子的实际尺寸DR1；参比粒子的图像尺寸DR2是所述球形的直径在图像中的尺寸；参比粒子的图像面积SR2是球形的平面投影的面积。在显微图像中获得的投影可能是椭圆形的非正投影，也可能是圆形的正投影；实际计算中可以取近似面积。
参比粒子的形状为锥体，锥体的高度或锥体的底面宽度用作参比粒子的实际尺寸DR1；参比粒子的图像尺寸DR2是所述锥体的高度或所述锥体的底面宽度在图像中的尺寸。参比粒子的图像面积SR2可以是锥体的椭圆形的非正投影，也可能是圆形的正投影；实际计算中可以取近似面积。
参比粒子的形状为长方体，长方体任意边长用作的参比粒子的实际尺寸DR1；参比粒子的图像尺寸DR2是所述长方体在图像中的尺寸。参比粒子的图像面积SR2可以是长方体的投影面积。长方体也包括正方体；当长方体为立方体时，只有一个边长尺寸。
参比粒子在细胞悬浮液样品中的浓度CR已知。参比粒子实际尺寸DR1或参比粒子实际面积SR1已知。
参比粒子实际尺寸DR1范围是1μm-100μm。参比粒子实际面积SR1可以根据尺寸范围和形状进行计算。
不同形状的参比粒子可以存在于同一次的细胞悬浮液样品中，不同的形状的参比粒子尺寸可以相同也可以不同；不同形状或不同尺寸的参比粒子在同一次的细胞悬浮液样品中用作不同的细胞分类或计数的参比识别。
细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2，是指细胞在图像中显示的大小，不同形态的细胞，可以取平面图像中的最大宽度用作细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2。当然对球形细胞，取图像中圆形投影的直径用作细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2，细胞面积是π×DC2×DC2/4。对其他形态的细胞，取图像中方形投影的边长用作细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2，细胞面积是DC2×DC2。细胞图像的面积可以采用方形面积计算公式也可以采用圆形面积计算公式。
图4和图5是包括细胞和参比粒子的观察层获得的两幅图像，图4和图5中正方形选框中的为红细胞；圆形选框中的为参比粒子。图4中的圆形选框中有两个参比粒子。图5中椭圆形框中为白细胞。
形成图4的样本为猫静脉全血样本，参比粒子为直径为3um的磁性微米球形颗粒。将10ul上述血液样本，与10ul包括参比粒子的原始参比粒子溶液，加入到980ul总体积的染色试剂中，颠倒混匀1分钟，然后将混合液加入到观察载体上，用光学显微镜成像后进行拍照即获得一定数量的显微照片即显微图像，图5为其中之一。
形成图5的样本为猫静脉全血样本，参比粒子为直径为5微米的聚苯乙烯球形颗粒。将10ul上述血液样本，与10ul包括参比粒子的原始参比粒子溶液，加入到980ul总体积的染色试剂中，颠倒混匀1分钟，然后将混合液加入到观察载体上，用光学显微镜成像后进行拍照即获得一定数量的显微照片即显微图像，图5为其中之一。
用于获取细胞悬浮液样品中细胞实际尺寸的一种细胞分析方法的实施例中，其所基于的显微图像和上述实施例相同，且显微图像的放大倍数A已知；在显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；根据显微图像的放大倍数A和细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2，计算获得细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1；DC1=DC2/A，SC1=SC2/A。
用于细胞分类的一种细胞分析方法的一个实施例中，上述获得的细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1；按照细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1的大小区间进行细胞分类。各种不同的教科书或其他参考书中，有用于细胞分类的的细胞直径范围数据。上述获得的细胞实际尺寸获得后，可根据细胞尺寸对应的数据分类将细胞归类。
用于细胞分类的一种细胞分析方法的一个实施例中，其所基于的显微图像和上述实施例中相同；在同一显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；依据细胞图像尺寸DC2和参比粒子图像尺寸DR2的大小关系，或依据细胞图像面积SC2和参比粒子图像面积SR2的大小关系，进行细胞分类。
用于细胞分类的一种细胞分析方法的一个实施例中，将细胞图像尺寸DC2小于等于参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第一类细胞，即DC2≤DR2的细胞分类为第一类细胞；将细胞图像尺寸DC2大于参比粒子图像尺寸DR2，且细胞图像尺寸DC2小于等于两倍参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第二类细胞，即1DR2＜DC2≤2DR2的细胞分类为第二类细胞；将细胞图像尺寸DC2大于两倍参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第三类细胞，即2DR2＜DC2的细胞分类为第三类细胞。
用于细胞分类的一种细胞分析方法的一个实施例中，将细胞图像面积SC2小于等于参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第一类细胞，即SC2≤SR2的细胞分类为第一类细胞；将细胞图像面积SC2大于参比粒子图像面积SR2，且细胞图像面积SC2小于等于两倍参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第二类细胞，即1SR2＜SC2≤2SR2的细胞分类为第二类细胞；将细胞图像面积SC2大于两倍参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第三类细胞，即2SR2＜SC2的细胞分类为第三类细胞。
在一些实施例中，选择实际直径尺寸为5um(微米)的参比粒子；用于细胞分类。从显微图像中，获取显微图像中各细胞的直径数据，按照参比粒子图像尺寸DR2和细胞图像尺寸DC2之间的大小关系进行细胞分类，或按照或参比粒子图像面积SR2和细胞图像面积SC2之间的大小关系进行细胞分类。DC2≤DR2的细胞分类为第一类细胞；1DR2＜DC2≤2DR2的细胞分类为第二类细胞；2DR2＜DC2的细胞分类为第三类细胞。若细胞悬浮液样品中包括人身体液体样本是血液样本，则第一类细胞可以是血小板，第二类细胞可以是红细胞，第三类细胞可以是白细胞。当然不同的生物体其样本中的细胞大小不同，可以根据实际应用场景，灵活选择参比粒子的大小。
如图6所示，细胞实际尺寸表格。表格中的数据是AI图像识别系统，基于系统中的比例尺，与显微图像中每个细胞直径维度上所占像素点的多少获得的。其中用的样本是猫血液；
根据《犬猫血液学手册》参考标准中给出的红细胞（RBC）尺寸范围是6.0um至7.0um；白细胞（WBC）尺寸范围是9.0um至20.0um；血小板（PLT）尺寸范围是2.2um至2.7um。
从图6中获得的数据如表格所示，根据表格中的数据即可获得不同细胞的分类计数结果：图片中细胞总数120个；红细胞（RBC）116个，白细胞（WBC）1个，血小板（PLT）13个。
也可以根据上述不同类细胞和参比粒子的尺寸关系进行细胞计数。
显然利用参比粒根据大小关系进行计数，更为简便，无需关注每个细胞的具体尺寸，只需关注相对尺寸大小关系即可进行细胞分类。对不同的细胞分类场景可以选择不同尺寸大小的参比粒子即可。
用于获取显微图像中的细胞数量的一种细胞分析方法的实施例中，其所基于的显微图像和上述实施例中的相同；在显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；在显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像尺寸DC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC；或根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像面积SC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC。显微图像中的细胞数量GC的计算公式可以是GC=ASC2/SC2，也可以是GC=ASC2/(DC2×DC2)，还可以是GC=ASC2×π/(4×DC2×DC2)。
用于获取显微图像中的参比粒子数量的一种细胞分析方法的实施例中，其所基于的显微图像和上述实施例中的相同；在显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；在所述显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像尺寸DR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR；或根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像面积SR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR。显微图像中的参比粒子数量GR的计算公式可以是GR=ASR2/SR2，也可以是GR=ASR2/(DR2×DR2)，还可以是GR=ASR2×π/(4×DR2×DR2)。
用于细胞悬浮液样品的定量的一种定量方法的实施例中，用于计算获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积，其所基于的显微图像和上述实施例中的相同；获取显微图像中的参比粒子数量GR；参比粒子在细胞悬浮液样品中的浓度RC已知；获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积VM=GR/RC。参比粒子在细胞悬浮液样品中的浓度RC单位为个/ml，即个每毫升。
以犬新鲜EDTA.K2静脉抗凝全血为样本，选择材质为Fe3O4(四氧化三铁)，形状为圆球形，直径为3.0um，浓度为2.15×109个/ml的粒子作为本实施例的参比粒子。取10.0ul充分混匀的血液样本以及10.0 ul包括参比粒子的原始参比粒子溶液加入980.0 ul染色液中，充分混匀后，将混合液图加入观察平铺装置中，并置于显微成像系统中一次获取350张显微图片。
基于显微图像获取单元，获取到的350张图片中的参比粒子数量GR=31605个，由“参比粒子原始浓度×加入试剂中的体积×VM=获取显微图像中的参比粒子数量GR”,则VM=31605/（2.15×109×0.01）=1.47×10-3ml。参比粒子原始浓度是指参比粒子在原始参比粒子溶液中的浓度，单位是个/ml。
用于获取细胞悬浮液样品中的细胞浓度的一种细胞分析方法的实施例中，基于上述获得显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积VM；获取显微图像中的细胞数量GC；根据显微图像中的细胞数量GC和细胞悬浮液样品体积VM，计算获取细胞悬浮液样品中的细胞浓度CC。细胞浓度CC的计算公式是CC=GC/VM。
以犬新鲜EDTA.K2静脉抗凝全血为样本，选择材质为Fe3O4(四氧化三铁)，形状为圆球形，直径为3.0 um，浓度为2.15×109个/ml的粒子作为本实施例的参比粒子。取10.0ul充分混匀的血液样本以及10.0ul的包括参比粒子的原始参比粒子溶液加入980.0ul染色液中，充分混匀后，将混合液图加入观察平铺装置中，并置于显微成像系统中一次获取350张显微图片。
基于本实施例体系，显微图像获取单元获取到的350张图片中的细胞数量GC=103600个，基于上述实施例获得显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积VM=1.47×10- 3ml；由细胞浓度CC=GC/VM公式，计算CC=103600/1.47×10-3=7.04××107个/ml
用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度的一种细胞分析方法的实施例中，基于上述获得细胞悬浮液样品中的细胞浓度CC；制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本的稀释比率X已知；原始的身体液体样本中的细胞浓度CCF=CC/X。
以犬新鲜EDTA.K2静脉抗凝全血为样本，选择材质为Fe3O4(四氧化三铁)，形状为圆球形，直径为3.0um，浓度为2.15×109个/ml的粒子作为本实施例的参比粒子。取10.0ul充分混匀的血液样本以及10.0ul的包括参比粒子的原始参比粒子溶液加入980.0ul染色液中，充分混匀后，将混合液图加入观察平铺装置中，并置于显微成像系统中一次获取350张显微图片。
基于本实施例体系，原始的身体液体样本的稀释比率X=0.01；基于上述实施例计算得CC=7.04××107个/ml,所以，CCF=CC/X=7.04×107/0.01=7.04×109（个/ml）。
用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度的一种细胞分析方法的实施例中，其所基于的显微图像和上述实施例中的相同；在显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；在显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；在显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；在显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；原始参比粒子溶液的浓度CRF已知；制备细胞悬浮液样品时，加入原始参比粒子溶液体积VR已知；制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本细胞浓度CCF未知；制备细胞悬浮液样品时，加入原始的身体液体样本的体积V1已知；依据ASC2/ASR2=CCF×V1×DC2×DC2/（CRF×VR×DR2×DR2），求得原始的身体液体样本的细胞浓度CCF。或依据ASC2/ASR2=CCF×V1×SC2/（CRF×VR×SR2），求得原始的身体液体样本的细胞浓度CCF。
以犬新鲜EDTA.K2静脉抗凝全血为样本，选择材质为Fe3O4(四氧化三铁)，形状为圆球形，直径为3.0um，浓度为2.15×109个/ml的粒子作为本实施例的参比粒子。取10.0ul充分混匀的血液样本以及10.0ul的包括参比粒子的原始参比粒子溶液加入980.0ul染色液中，充分混匀后，将混合液图加入观察平铺装置中，并置于显微成像系统中一次获取350张显微图片。
基于显微图像获取单元，获取所有细胞占据面积ASC2=38.5×10-3 cm2；获取单一细胞的细胞图像尺寸DC2=6.1×10-4cm；获取所有参比粒子占据面积ASR2=2.7×10-3 cm2；获取单一参比粒子的参比粒子图像尺寸DR2=3.0×10-4cm；已知原始参比粒子溶液的浓度为CRF=2.15×109个/ml；原始参比粒子溶液体积Va与原始样本液体积V1的加入量相等，均为10ul。
由公式：ASC2/ASR2=CCF×V1×DC2×DC2/（CRF×VR×DR2×DR2）可知CCF=ASC2×CRF×Va×DR2×DR2/(ASR2×V1×DC2×DC2)；即CCF=38.5×10-3×2.15×1012×0.01×10-3×3.0×10-4×3.0×10-4/(2.7×10-3×0.01×10-3×6.1×10-4×6.1×10-4)=7.41×109（个/ml）。
或者，基于显微图像获取单元，获取所有细胞占据面积ASC2=38.5×10-3 cm2；获取单一细胞的面积SC2=117.61×10-8cm2；获取所有参比粒子占据面积ASR2=2.7×10-3cm2；获取单一参比粒子的参比粒子图像尺寸SR2=29.59×10-8cm2；已知原始参比粒子溶液的浓度为CRF=2.15×109个/ml；原始参比粒子溶液体积Va与原始样本液体积V1的加入量相等，均为10ul。
由公式：ASC2/ASR2=CCF×V1×SC2/（CRF×VR×SR2）可知CCF=ASC2×CRF×VR×SR2/(ASR2×V1×SC2)=38.5×10-3×2.15×109×0.01×10-3×29.59×10-8/(2.7×10-3×0.01×10-3×117.61×10-8)=7.71×109（个/ml）。
用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度的一种细胞分析方法的实施例中，其所基于的显微图像和上述实施例中的相同；在显微图像中，获取所有细胞个数GC；在显微图像中，获取参比粒子个数GR；原始参比粒子溶液的浓度CRF已知；制备细胞悬浮液样品时，加入原始参比粒子溶液体积VR已知；制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本浓度CCF未知；制备细胞悬浮液样品时，加入原始的身体液体样本体积V1已知；根据已知的CRF、VR、V1、GR、GC，以及公式CRF×VR/（CCF×V1）=GR/GC，计算获得CCF。
以犬新鲜EDTA.K2静脉抗凝全血为样本，选择材质为Fe3O4(四氧化三铁)，形状为圆球形，直径为3.0um，浓度为2.15×109个/ml的粒子作为本实施例的参比粒子。取10.0ul充分混匀的血液样本以及10.0ul的包括参比粒子的原始参比粒子溶液加入980.0ul染色液中，充分混匀后，将混合液图加入观察平铺装置中，并置于显微成像系统中一次获取350张显微图片。
基于显微图像获取单元，获取到的350张图片中的细胞数量GC=103600；获取参比粒子数量GR=31605;已知原始参比粒子溶液体积Va与原始样本液体积V1的加入量相等，均为10ul；已知粒子浓度CRa=2.15×109个/ml;由公式：CRF×VR/（CCF×V1）=GR/GC可得CCF=GC×CRF×VR/GR；即CCF=103600×2.15×109×0.01×10-3 /（29750×0.01×10-3）=7.49×109（个/ml）
在上述用于获取细胞悬浮液样品中的细胞浓度的一种细胞分析方法或定量方法的实施例中，获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：在所述显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；在所述显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像尺寸DC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC；或根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像面积SC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC。
在上述用于获取细胞悬浮液样品中的细胞浓度的一种细胞分析方法或定量方法的实施例中，获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：根据细胞形态或细胞大小直接识别出细胞后，对所有细胞计数获得。
用于细胞悬浮液样品的定量的一种细胞分析方法或定量方法的实施例中，获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：在显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；在显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像尺寸DR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR；或根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像面积SR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR。
用于细胞悬浮液样品的定量的一种细胞分析方法或定量方法的实施例中，获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：根据参比粒子形态或参比粒子大小直接识别出参比粒子后，对所有参比粒子计数获得。
测量显微图像中多个细胞图像尺寸，取多个细胞图像尺寸的统计数值用作细胞图像尺寸DC2；或测量显微图像中多个细胞图像面积，取多个细胞图像尺寸的统计数值用作细胞图像面积SC2；或测量显微图像中单一细胞的图像尺寸或面积，用作细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；或测量多幅显微图像中每一幅显微图像中的单一细胞的图像尺寸或面积，用作细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；或测量多幅显微图像中每一幅图像中的多个细胞图像尺寸或面积，取每一幅图像中的多个细胞图像尺寸的统计数值用作该幅图像的细胞图像尺寸，取多幅显微图像的细胞图像尺寸的统计数值用作细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2。
即细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2可以有多种来源，其中之一是单幅显微图像中的单一的具有尺寸代表性的细胞图像尺寸；其中之二是多幅显微图像中多个单一的具有尺寸代表性的细胞图像尺寸的统计数值；其中之三是单幅显微图像中的多个细胞图像尺寸的统计数值，统计数值包括取平均数，统计数值也包括其他统计方式，如按照分布概率或置信区间进行统计处理；其中之四是在第三种的基础上，取多幅显微图像中各单幅显微图像中多个细胞图像尺寸的统计数值，再取统计数值。
参比粒子的图像尺寸DR2或图像面积SR2也采用上述方法获得。
如图1所示，细胞分析系统的一个实施例中，包括分析用显微图像获取单元和显微图像分析单元；分析用显微图像获取单元，获取用于细胞分析的显微图像；显微图像分析单元利用上述细胞分析方法，基于分析用显微图像获取单元获取的显微图像完成细胞分析。
如图2所示，定量系统的一个实施例中，包括定量分析显微图像获取单元和定量分析单元；定量分析显微图像获取单元用于获取用于定量分析的显微图像；定量分析单元利用上述定量方法，基于定量分析显微图像获取单元获取的显微图像，计算获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积。
如图1和图2中的细胞分析系统或定量系统中，都可以包括细胞悬浮液样品成像子系统。细胞悬浮液样品成像子系统向分析用显微图像获取单元或量分析显微图像获取单元提供显微图像。分析用显微图像获取单元和细胞悬浮液样品成像子系统之间可有线电连接或无线电连接获取显微图像信息；同样定量分析显微图像获取单元和细胞悬浮液样品成像子系统之间可有线电连接或无线电连接获取显微图像信息。
在一些附图中未显示的一种细胞悬浮液样品成像子系统实施例中，细胞悬浮液样品中包括细胞和参比粒子；载体，用于承载细胞悬浮液样品；载体包括承载面；细胞悬浮液样品进入载体后，细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层；显微图像获取单元，用于获取包括细胞和参比粒子的观察层的至少一幅图像。显微图像获取单元包括具有成像功能的装置，如CCD成像装置或其他能数字化记录或呈现显微图像的装置。这些装置能将显微镜获得的显微图像拍摄记录下来形成电子文件。显微图像获取单元包括荧光显微镜或普通光学显微镜。
参比粒子参与成像后，参比粒子可以用作后续计算的数量标尺，简化了计算逻辑和计算的准确性。在固定体积的细胞悬浮液样品中，细胞悬浮液样品中包括了试剂，样本和参比粒子，三者充分混匀后，参比粒子在观察层的平铺、分布规律与待测样本中的细胞一致，可直接通过计数显微图片中参比粒子与细胞的之间的尺寸、面积或数量关系，来计算原始样本中的细胞浓度或数量，无需考虑其它因素，如观察区的容积和面积；即承载面所处空间即细胞核参比粒子平铺区域的深度、视野的大小对成像以及后续计算的影响大大降低。
参比粒子参与成像后，利用成像图片进行细胞计数时，提升了计数准确性。在传统计数逻辑中，更多依赖于计数板的加工精度，尤其是平铺、分布区域体积。平铺、分布区域体积的工艺误差直接影响细胞的数量，从而计数结果；而加入内标的参比粒子，使细胞计数逻辑已与平铺、分布区域体积的体积无关。
参比粒子参与成像后，可利用参比粒子作为自动对焦参照物，校正成像质量；参比粒子具有尺寸均一性，在一个样本的检测过程中，会涉及多个视野的观察与计数，此时以具有标准尺寸的参比粒子，作为对焦参考点，实现图像对焦的均一性，从而增强图片质量，提升结果准确性。
以上所述仅为本申请的实施例，并非因此限制本申请的专利范围，凡是利用发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本申请的专利保护范围内。

Claims (21)

1.一种细胞分析方法，用于获取细胞悬浮液样品中细胞实际尺寸，其特征在于，
基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；细胞悬浮液样品中的参比粒子实际尺寸DR1或参比粒子实际面积SR1已知；
在同一显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；
根据参比粒子实际尺寸DR1或参比粒子实际面积SR1、参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2、细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2，计算获得细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1。
2.一种细胞分析方法，用于细胞分类，其特征在于，
基于权利要求1获得的细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1；按照细胞实际尺寸DC1或细胞实际面积SC1的大小区间进行细胞分类。
3.一种细胞分析方法，用于细胞分类，其特征在于，
基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；
在同一显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；
依据细胞图像尺寸DC2和参比粒子图像尺寸DR2的大小关系，进行细胞分类；
或依据细胞图像面积SC2和参比粒子图像面积SR2的大小关系，进行细胞分类。
4.根据权利要求3所述细胞分析方法，其特征在于，
将细胞图像尺寸DC2小于等于参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第一类细胞，即DC2≤DR2的细胞分类为第一类细胞；
或将细胞图像面积SC2小于等于参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第一类细胞，即SC2≤SR2的细胞分类为第一类细胞；
将细胞图像尺寸DC2大于参比粒子图像尺寸DR2，且细胞图像尺寸DC2小于等于两倍参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第二类细胞，即1DR2＜DC2≤2DR2的细胞分类为第二类细胞；
或将细胞图像面积SC2大于参比粒子图像面积SR2，且细胞图像面积SC2小于等于两倍参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第二类细胞，即1SR2＜SC2≤2SR2的细胞分类为第二类细胞；
将细胞图像尺寸DC2大于两倍参比粒子图像尺寸DR2的细胞分类为第三类细胞，即2DR2＜DC2的细胞分类为第三类细胞；
或将细胞图像面积SC2大于两倍参比粒子图像面积SR2的细胞分类为第三类细胞，即2SR2＜SC2的细胞分类为第三类细胞。
5.一种细胞分析方法，用于获取显微图像中的细胞数量，其特征在于，
基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；
在所述显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；
在所述显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；
根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像尺寸DC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC；
或根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像面积SC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC。
6.一种细胞分析方法，用于获取显微图像中的参比粒子数量，其特征在于，
基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；
在所述显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；在所述显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；
根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像尺寸DR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR；
或根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像面积SR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR。
7.一种定量方法，用于细胞悬浮液样品的定量，即计算获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积，其特征在于，
基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；
获取显微图像中的参比粒子数量GR；
参比粒子在细胞悬浮液样品中的浓度RC已知；
获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积VM=GR/RC。
8.根据权利要求7所述定量方法，其特征在于，
获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：
在所述显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；
在所述显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；
根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像尺寸DR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR；
或根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像面积SR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR。
9.根据权利要求7所述定量方法，其特征在于，
获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：
根据参比粒子形态或参比粒子大小直接识别出参比粒子后，对所有参比粒子计数获得。
10.一种细胞分析方法，用于获取细胞悬浮液样品中的细胞浓度，其特征在于，
基于权利要求7获得显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积VM；
获取显微图像中的细胞数量GC；
根据显微图像中的细胞数量GC和细胞悬浮液样品体积VM，计算获取细胞悬浮液样品中的细胞浓度CC，CC=GC/VM。
11.根据权利要求10所述细胞分析方法，其特征在于，
获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：
在所述显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；
在所述显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；
根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像尺寸DC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC；
或根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像面积SC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC。
12.根据权利要求10所述细胞分析方法，其特征在于，
获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：
根据细胞形态或细胞大小直接识别出细胞后，对所有细胞计数获得。
13.一种细胞分析方法，用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度，其特征在于，
基于权利要求10获得的细胞悬浮液样品中的细胞浓度CC；
制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本的稀释比率X已知；
原始的身体液体样本中的细胞浓度CCF=CC/X。
14.一种细胞分析方法，用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度，其特征在于，
基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；
在显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；
在显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；
在显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；
在显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；
原始参比粒子溶液的浓度CRF已知；
制备细胞悬浮液样品时，加入原始参比粒子溶液体积VR已知；
制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本细胞浓度CCF未知；
制备细胞悬浮液样品时，加入原始的身体液体样本的体积V1已知；
依据已知的ASC2、ASR2、V1、DC2、CRF、VR、DR2，获取原始的身体液体样本的细胞浓度CCF；
或依据ASC2、ASR2、V1、SC2、CRF、VR、SR2，获取原始的身体液体样本的细胞浓度CCF。
15.一种细胞分析方法，用于获取原始的身体液体样本中的细胞浓度，其特征在于，
基于显微图像；所述显微图像是细胞悬浮液样品中的细胞和参比粒子沉降在载体的承载面上形成包括细胞和参比粒子的观察层的部分或全部的至少一幅显微图像；
在显微图像中，获取所有细胞个数GC；
在显微图像中，获取参比粒子个数GR；
原始参比粒子溶液的浓度CRF已知；
制备细胞悬浮液样品时，加入原始参比粒子溶液体积VR已知；
制备细胞悬浮液样品时，原始的身体液体样本浓度CCF未知；
制备细胞悬浮液样品时，加入原始的身体液体样本体积V1已知；
根据已知的CRF、VR、V1、GR、GC计算获得CCF。
16.根据权利要求15所述细胞分析方法，其特征在于，
获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：
在所述显微图像中，获取细胞图像尺寸DC2或细胞图像面积SC2；
在所述显微图像中，获取所有细胞占据面积ASC2；
根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像尺寸DC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC；
或根据所有细胞占据面积ASC2和细胞图像面积SC2，计算获取显微图像中的细胞数量GC。
17.根据权利要求15所述细胞分析方法，其特征在于，
获取显微图像中的细胞数量GC的方法是：
根据细胞形态或细胞大小直接识别出细胞后，对所有细胞计数获得。
18.根据权利要求15所述细胞分析方法，其特征在于，
获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：
在所述显微图像中，获取参比粒子图像尺寸DR2或参比粒子图像面积SR2；
在所述显微图像中，获取所有参比粒子占据面积ASR2；
根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像尺寸DR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR；
或根据所有参比粒子占据面积ASR2和参比粒子图像面积SR2，计算获取显微图像中的参比粒子数量GR。
19.根据权利要求15所述细胞分析方法，其特征在于，
获取显微图像中的参比粒子数量GR的方法是：
根据参比粒子形态或参比粒子大小直接识别出参比粒子后，对所有参比粒子计数获得。
20.一种细胞分析系统，其特征在于，
包括分析用显微图像获取单元和显微图像分析单元；
分析用显微图像获取单元，获取用于细胞分析的显微图像；
显微图像分析单元利用上述权利要求1至6，或权利要求10至19中任意一项所述的细胞分析方法，基于分析用显微图像获取单元获取的显微图像完成细胞分析。
21.一种定量系统，其特征在于，
包括定量分析显微图像获取单元和定量分析单元；
定量分析显微图像获取单元，获取用于定量分析的显微图像；
定量分析单元利用上述权利要求7至9中任意一项所述的定量方法，基于定量分析显微图像获取单元获取的显微图像，计算获取显微图像成像对应的细胞悬浮液样品体积。
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