CN114480589A - 一种pcr反应体系稳定剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种PCR反应体系稳定剂及其应用。包括蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜，且蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜的摩尔比为0.5～1:1～2:0.1～1:0.1～1:0.5～1。本发明制备得到的稳定剂在加入至PCR预混液后，可以使其在室温条件下存放至少6个月，且已然可以保持酶高效的活性和特异性，对于PCR反应体系的运输和保存条件降低了成本，对于PCR反应效率和特异性有着很大的提高。

Description

一种PCR反应体系稳定剂及其应用
技术领域
本发明属于PCR技术领域，具体涉及一种PCR反应体系稳定剂及其应用。
背景技术
聚合酶链式反应(以下简称PCR)，PCR反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，PCR反应体系包含PCR缓冲液、MgCl2、dNTP、TaqDNA聚合酶，引物，以及DNA模板，传统的PCR反应体系在实际中，会遇到低扩增、弥散、特异性差等问题，为了保持酶的活性，和工作效率，需存放在-20℃，这样对于产品的运输和储存条件都有一定的限制，会增加成本，现有的PCR试剂虽然有了很便利的产品，可以将PCR缓冲液、MgCl2、dNTP、TaqDNA聚合酶做成一个PCR预混液体系，但是预混液的运输和储存依然会受到条件限制，需要低温保存和运输，因此，如何反应体系的稳定性等特性显得尤为重要。
发明内容
针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种PCR反应体系稳定剂及其应用，能够有效的提升PCR的反应效率和特异性。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种PCR反应体系稳定剂，包括蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜中的至少四种。
进一步地，蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜的摩尔比为0.5～1:1～2:0.1～1:0.1～1:0.5～1。
进一步地，蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜的摩尔比为1:1.5:0.5:0.4:0.6。
进一步地，蔗糖的浓度为0.1～0.5M，海藻糖的浓度为0.1～0.5M，聚乙烯亚胺的浓度为0.01～0.1M，二硫苏糖醇的浓度为0.01～1M，二甲基亚砜的浓度为0.01～0.5M。
进一步地，蔗糖的浓度为0.1M，海藻糖的浓度为0.15M，聚乙烯亚胺的浓度为0.05M，二硫苏糖醇的浓度为0.04M，二甲基亚砜的浓度为0.06M。
一种PCR反应体系，包括上述稳定剂。
进一步地，稳定剂为PCR预混液反应体系的20～30％。
进一步地，稳定剂为PCR预混液反应体系的20％。
一种试剂盒，该试剂盒包括上述稳定剂，或PCR反应体系。
本发明的有益效果：
本发明制备得到的稳定剂在加入至PCR预混液后，可以使其在室温条件下存放至少6个月，且已然可以保持酶高效的活性和特异性，对于PCR反应体系的运输和保存条件降低了成本，对于PCR反应效率和特异性有着很大的提高。
附图说明
图1为单个成分对于PCR预混液的影响；
图2为室温下1个月PCR预混液保存对比结果；
图3为室温下3个月PCR预混液保存对比结果；
图4为室温下6个月PCR预混液保存对比结果。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。
实施例1
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为1:1.5:0.5:0.4:0.6。
实施例2
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为0.5:1:0.1:0.1:0.5。
实施例3
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为1:2:1:1:1。
对比例1
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为1:1:1:1:1。
对比例2
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为1:1.5:1.5:1.5:1.5。
对比例3
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为1:0.5:0.5:0.4:0.6。
对比例4
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为1:1.5:1:0.4:0.6。
对比例5
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为1:1.5:0.5:0.5:0.6。
对比例6
一种PCR反应体系稳定剂，由蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜混合而成，其摩尔比为1:1.5:0.5:0.4:0.5。
实验例
1、将与实施例1中等量的蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜分别单独添加至PCR预混液中，分别标记为1～5组，添加量为PCR预混液的20％，再以不添加任何组分的PCR预混液作为对照，标记为6组。室温下存放4天的效果对比，观察温度环境对于PCR稳定剂的影响，同时增加第7组，组分为不添加任何组分的PCR预混液保存在-20℃。4天为时间节点，将各组PCR预混液配置反应体系，2×PCR预混液10μL，DNA模板1μL引物F、R各1μL，ddH2O 7μL，按照常规PCR进行扩增并检测，如图1所示1-6组PCR预混液在室温下存放4天，对比第7组的PCR预混液，其他组PCR预混液已经无法正常实验不能使用。
2、将实施例1(图2～4中的第7组)和对比例1～6制备得到的稳定剂添加至PCR预混液中，占比均为20％，室温下存放1月，3月，6月，将各组PCR预混液配置反应体系，2×PCR预混液10μL，DNA模板1μL引物F、R各1μL，ddH2O 7μL，按照常规PCR进行扩增并检测，检测结果分别见图2～4。
如图2所示，室温下1个月的结果显示按照1-6组的各种配比和本申请实施例1制备得到的稳定剂没有太大的差异。
如图3所示，室温下3个月的PCR结果显示按照1-6组的各种配比和本申请实施例1制备得到的稳定剂的结果开始有个别差异。与室温下1个月时PCR反应的实验(图2)相比3个月时(图3)各组的PCR稳定性都有所降低(电泳结果条带变浅)，尤其是3组和5组的配比结果其影响PCR稳定性的效果和其他各组比要差很多，并且2组产生了引物二聚体(箭头所指)，这是PCR反应特异性变差的结果，说明实验1-6组如果在室温下放置3个月，除了PCR稳定性变差以外，当蔗糖浓度不变，其他浓度提高到0.15M时会产生引物二聚体，使得PCR反应的特异性变差，但在7组中并没有产生这样的结果。
如图4所示，室温下6个月的结果显示按照1-6组的各种配比和本申请实施例1制备得到的稳定剂的结果开始有显著差异。1-6组的配比在室温下不能保证酶的活性，相比较室温三个月的试剂同一组分我们可以看出原本2组，但是对于第七组的配比其结果有效的保证了酶的活性和特异性
对于PCR预混液的稳定剂实验首先时要保证预混液中Taq酶的活性不要失去，其次才是在反应中的特异性，不要产生引物二聚体，影响实验结果的真实性。由于传统的Taq酶保存条件要求在-20℃条件下可以保存1-2年，在2-8℃可以保存1个月。加了本申请制备的稳定剂后预混液可以在室温即高于8℃的条件下存放至少6个月，其依然可以保持酶高效的活性和特异性。

Claims (9)

1.一种PCR反应体系稳定剂，其特征在于，包括蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜中的至少四种。
2.根据权利要求1所述的PCR反应体系稳定剂，其特征在于，所述蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜的摩尔比为0.5～1:1～2:0.1～1:0.1～1:0.5～1。
3.根据权利要求2所述的PCR反应体系稳定剂，其特征在于，所述蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜的摩尔比为1:1.5:0.5:0.4:0.6。
4.根据权利要求1～3所述的PCR反应体系稳定剂，其特征在于，所述蔗糖的浓度为0.1～0.5M，海藻糖的浓度为0.1～0.5M，聚乙烯亚胺的浓度为0.01～0.1M，二硫苏糖醇的浓度为0.01～1M，二甲基亚砜的浓度为0.01～0.5M。
5.根据权利要求4所述的PCR反应体系稳定剂，其特征在于，所述蔗糖的浓度为0.1M，海藻糖的浓度为0.15M，聚乙烯亚胺的浓度为0.05M，二硫苏糖醇的浓度为0.04M，二甲基亚砜的浓度为0.06M。
6.一种PCR反应体系，其特征在于，包括权利要求1～5任一项所述的稳定剂。
7.根据权利要求6所述的PCR反应体系，其特征在于，所述稳定剂为PCR预混液反应体系的20～30％。
8.根据权利要求7所述的PCR反应体系，其特征在于，所述稳定剂为PCR预混液反应体系的20％。
9.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～5任一项所述的稳定剂，或权利要求6～8任一项所述的PCR反应体系。
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