CN114480518A - 一种酶法制备中长碳链甘油三酯的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种酶法制备中长碳链甘油三酯的方法，属于结构脂加工领域。本发明首先通过将天然油脂进行酶法醇解制备1,2‑甘油二酯，经柱层析和其他纯化方法纯化后，得到较高纯度的1,2‑甘油二酯，再以1,2‑甘油二酯作为酰基受体，以中链脂肪酸或其衍生物作为酰基供体进行酶促反应，即可合成中长碳链甘油三酯(MLCT)，产物中的MLCT主要是MLL甘油三酯的形式存在。本发明与现有MLCT的酶法制备方法相比，能得到含量更高的MLL型甘油三酯，这种甘油三酯在食品、药品和化妆品中有广泛的应用。
Description
技术领域
本发明属于油脂加工技术领域，具体涉及一种酶法制备中长碳链甘油三酯的方法，尤其是一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法。
背景技术
中长碳链甘油三酯(MLCT)是一类甘油骨架上同时含有中链脂肪酸(C6～C12)和长链脂肪酸(C14以上)的一类甘油三酯，MLCT具有多种生理活性和功能，例如，中链脂肪酸(MCFA)无需肉毒碱载体就可以直接进入线粒体进行氧化代谢功能，与长链脂肪酸(LCFA)相比，可以更为快速的为机体提供能量，此外，MCFA热量只有8.2kcal/g，小于LCFA(约9.3kcal/g)，经过人体摄入和消化后，更有利于控制肥胖和控制体重的作用，MCFA的其他功能包括降血脂和防止心血管疾病等等，因此，开发和制备含有MCFA的结构脂对中国人的健康具有重要意义。
一般来说，含有MCFA的甘油三酯包括MMM(甘油三酯中三个脂肪酸均为中链脂肪酸)、MML(甘油三酯中含有两个中链脂肪酸，一个长链脂肪酸)和MLL(甘油三酯中含有一个中链脂肪酸，两个长链脂肪酸)。多个研究表明，MMM和MML型的甘油三酯供能太快，不符合人体的生理需求，特别是MMM型甘油三酯，它缺乏必需脂肪酸，摄入过多可能还会造成酮体积累，甚至造成腹泻及肠胃病等消化系统的不适症状。与MMM和MML相比，MLL具有水解速度平稳，改善氮平衡等优点。目前，研究发现，母乳脂中主要的MLCT为MLL型甘油三酯，而MMM和MML型的含量极少，这种类型的MLCT为宝宝提供均匀和平稳的能量，符合宝宝的生理和生长发育需求。对一些手术后的病人来说，摄入MLL型甘油三酯，病人恢复的速度更快。
目前，人工合成MLCT的方法主要有化学法和酶法，通常采用富含MMM的中链甘油三酯(MCT)，例如椰子油、樟树籽油等和富含LLL型甘油三酯的普通食用油进行酯酯交换反应制备MLCT，这种方法得到的结构脂产物中含有MLL型MLCT的同时，也含有大量的MML型MLCT，不能得到含量较高的MLL甘油三酯，所以在婴幼儿等食品中的应用效果也有限。MLCT的其他的合成方法有酯化法，即中链脂肪酸和长链脂肪酸的混合物与甘油进行反应，得到MLCT，这种方法也是只能得到MML和MLL型甘油三酯的混合物，目前尚未发现专门针对合成MLL型甘油三酯而设计的合成路线或者工艺。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是现有方法合成的MLCT是MML和MLL的混合物，且MML的比例偏高，限制了MLCT的应用。
[技术方案]
本发明提供了一种酶法制备MLL型MLCT的方法，利用脂肪酶酶法醇解制备1,2-甘油二酯，随后，将纯化后的1,2-甘油二酯和中链脂肪酸或其衍生物进行反应，制备得到富含MLL的MLCT。
所述方法包括以下步骤：
(1)将天然油脂与乙醇混合，并添加一定量的有机溶剂，以脂肪酶为催化剂，在一定的温度下进行酶促醇解反应，反应一段时间后，纯化得到1,2-甘油二酯；
所述脂肪酶包括来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)或南极假丝酵母(Candidaantarctica)的脂肪酶中的一种或者多种；
所述有机溶剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮中的一种或多种，优选丙酮；
(2)将合成的1,2-甘油二酯和酰基供体混合，以脂肪酶为催化剂，在一定温度下反应一段时间，得到MLL型甘油三酯，其中，所述酰基供体包括中链脂肪酸和中链脂肪酸衍生物中的一种或者多种；所述脂肪酶的来源包括南极假丝酵母(Candidaantarctica)、米黑根霉菌(Rhizomucormiehei)、葱伯克霍尔德菌(Burkaholderiacepacia)、米根霉(Rhizopusoryzae)为来源中的一种或任几种。
在一个或多个实施方式中，步骤(1)所述天然油脂包括天然植物油脂、动物油脂、微生物油脂中的至少一种。
在一个或多个实施方式中，在步骤(1)中，所述天然油脂和乙醇的摩尔比为1:60～1:10，优选1:50～1:30。
在一个或多个实施方式中，在步骤(1)中，所述天然油脂与有机溶剂(除乙醇外)的比例为1:3～1:0.5(w/v，g/mL)，优选1:3～1:0.4(w/v)。
在一个或多个实施方式中，在步骤(1)中，所述酶促醇解反应的温度为20℃～45℃；所述酶促醇解反应的反应时间为1.5h～10h，或者2h～8h。
在一个或多个实施方式中，在步骤(1)中，所述酶促反应的体系水分活度为0～0.55，优选0.1～0.5，其中水分活度通过不同浓度的饱和盐溶液来控制。
在一个或多个实施方式中，在步骤(1)中，所述的纯化是去除有机溶剂、脂肪酸酯和甘油三酯等杂质，可选方法包括柱层析法和溶剂萃取法，其中，溶剂萃取法是向反应混合物中添加极性和非极性溶剂，极性溶剂包括82％～85％(体积比)的乙醇水溶液、93％～96％(体积比)的乙腈水溶液和92-96％(体积比)的甲醇水溶液；非极性溶剂包括己烷类溶剂，主要为正己烷；
在一个或多个实施方式中，在步骤(2)中，所述反应温度为0℃～60℃；所述反应时间为2h～10h。
在一个或多个实施方式中，在步骤(2)中，所述的酰基供体与1,2-甘油二酯的摩尔比大于1:1。在一个或多个实施方式中，步骤(2)所述中链脂肪酸可以选自：椰子油、棕榈仁油、樟树籽油、山苍子油；所述中链脂肪酸衍生物可以是脂肪酸甲酯、脂肪酸乙酯或者脂肪酸乙烯酯中的一种或者多种，例如癸酸乙酯、癸酸乙烯酯。
在一个或多个实施方式中，在步骤(1)中，所述脂肪酶包括来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)的脂肪酶Lipozyme TL IM和Lipozyme TL 100L中的一种或多种，来源于南极假丝酵母(Candidaantarctica)的脂肪酶Lipozyme 435、Novozym435和Lipase CL“Amano”IM中的一种或者多种。
在一个或多个实施方式中，在步骤(2)中，所述脂肪酶包括来源于米黑根霉菌(Rhizomucormiehei)的脂肪酶Lipozyme RM IM和Lipozyme RM中的一种或者多种，来源于葱伯克霍尔德菌(Burkaholderiacepacia)的脂肪酶Lipase PS和Lipase AK中的一种或多种，来源于米根霉(Rhizopus oryzae)的脂肪酶Lipase DF IM和Lipase DF 15中的一种或者多种。
本发明还提供了应用上述方法制备得到的中长碳链甘油三酯在食品和医药领域中的应用，可以用在婴幼儿食品中或者为患者提供持续平稳能量供给的药品中。
[有益效果]
(1)本发明提供一种制备MLCT的方法，在制备1,2-甘油二酯时，以Lipozyme TL IM在添加了乙醇及其它有机溶剂的混合体系中催化反应，实现了以更廉价易得的LipozymeTL IM制备1,2-甘油二酯，且1,2-甘油二酯得率可以达到64.3％；1,2-甘油二酯容易发生自发的酰基转移生产1,3-甘油二酯，从而造成1,2-甘油二酯得率降低，本发明通过调节反应体系的水分活度进一步提高1,2-甘油二酯的得率。
(2)本发明提供一种酶法制备中长碳链甘油三酯的方法，以1,2-甘油二酯作为底物之一，1,2-甘油二酯含有两个长链脂肪酸(即LL)，再利用脂肪酶催化酰基供体(中链脂肪酸和中链脂肪酸衍生物)与1,2-甘油二酯反应，使得1,2-甘油二酯空余的羟基位置接上一个中链脂肪酸，从而得到MLL型甘油三酯。通过这种方法，可以得到非常纯的MLL型甘油三酯，即使含有少量没有反应的1,2-甘油二酯，也可以利用沸点、极性等差异将1,2-甘油二酯除去，从而得到纯的MLL型甘油三酯。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
下述实施例所用脂肪酶均购自诺维信，Lipozyme TL IM酶活力250IUN/g，Lipozyme435酶活6000PLU/g，Lipase TL 100L酶活600IUN/g，Lipase CL"Amano"IM酶活40U/g，Lipozyme RM酶活275IUN/g，Lipozyme DF IM的酶活600U/g，Lipase PS(来源于Burkaholderiacepacia)酶活40U/mg，Lipase AY-30SD(来源于Candida cylindracea)酶活30U/mg，
HPLC-RID法测定甘油二酯含量的色谱条件：色谱柱Sepax HP-Silica(4.6mm×250mm×5μm)，柱温25℃；样品浓度约为20mg/mL，进样量为20μL；流动相正己烷：异丙醇：甲酸之比为15:1:0.003(v/v/v)，流速为1mL/min。取1滴油样于离心管，加入1mL流动相，振荡30s摇匀，使用注射器吸取过膜即制样完成，各脂质组分通过标准品定性，样品浓度与峰面积呈线性关系，各物质的相对组成通过面积归一法表示(％)。
反应产物得率计算公式：
一、1,2-甘油二酯的酶法制备
实施例1(溶剂的种类)
将新鲜菜籽油和有机溶剂的水分活度调节到0.53，随后，将3mmol菜籽油和120mmol的乙醇充分混合，加入3mL有机溶剂(油脂和有机溶剂之比约等于1:1.16，w/v)以及来源于Thermomyceslanuginosus的脂肪酶Lipozyme TL IM(该酶的酯交换活力为250IUN/g)，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，不是占底物总质量，w/w)为8％，在35℃下进行酶促反应，经磁力搅拌反应8h后离心或过滤去除脂肪酶，经HPLC-RID检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表1所示。
表1醇解反应中不同有机溶剂的种类对1,2-甘油二酯得率的影响
由表1结果可知，当加入丙酮、三氯甲烷或二氯甲烷与乙醇混合作为酶促醇解反应的有机溶剂时，得到的1,2-甘油二酯具有较高的得率，尤其当加入丙酮时，1,2-甘油二酯的得率可达64.3％，而当选用乙醇作为有机溶剂时，其1,2-甘油二酯的得率仅为49.5％，因此，采用丙酮作为溶剂能明显提高1,2-甘油二酯的得率。而当加入其他溶剂，例如正己烷(对比例1)或叔丁醇(对比例2)作为反应体系的有机溶剂时，1,2-甘油二酯的得率明显低于其他实验组。可见，添加不同溶剂到酶促反应体系中，1,2-甘油二酯的生成量明显不同。
实施例2(溶剂添加量)
将新鲜花生油和有机溶剂的水分活度调节到0.53，随后，将3mmol花生油和120mmol的乙醇充分混合，加入一定量的丙酮以及来源于Thermomyceslanuginosus的脂肪酶Lipozyme TL 100L，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为10％，在35℃下进行酶促反应，经磁力搅拌反应8h后离心或过滤去除脂肪酶，经HPLC-RID检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表2所示。
表2醇解反应中溶剂添加量对1,2-甘油二酯得率的影响
| 花生油：有机溶剂(w/v) | 1:0.4 | 1:0.8 | 1:1.2 | 1:1.6 |
| 1,2-甘油二酯得率(％) | 55.9 | 65.2 | 64.8 | 61.1 |
实施例3(水分活度)
用饱和盐溶剂将新鲜大豆油和有机溶剂的水分活度调节到一个固定的值，随后，将3mmol花生油和120mmol的乙醇充分混合，按油脂和丙酮1:1.2的比例加入丙酮以及来源于Thermomyceslanuginosus的脂肪酶Lipozyme TL IM，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为5％，在30℃下进行酶促反应，经磁力搅拌反应8h后离心或过滤去除脂肪酶，经HPLC-RID检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表3所示。
表3醇解反应中水分活度对1,2-甘油二酯得率的影响
实施例4(反应温度和时间)
用饱和盐溶液将新鲜菜籽油和有机溶剂的水分活度调节到0.53，随后，将3mmol菜籽油和120mmol的乙醇充分混合，按油脂和丙酮1:1.2的比例加入丙酮以及来源于Thermomyceslanuginosus的脂肪酶Lipozyme TL IM，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为5％，在一定温度下进行酶促反应，经磁力搅拌反应一段时间后离心或过滤去除脂肪酶，经HPLC-RID检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表4所示。
表4醇解反应中不同温度和时间对1,2-甘油二酯的得率的影响
实施例5(底物摩尔比)
用饱和盐溶液将新鲜葵花籽油和有机溶剂的水分活度调节到0.53，随后，将3mmol葵花籽油和一定量的乙醇充分混合，按油脂和丙酮1:1.2的比例加入丙酮以及来源于Candidaantarctica的脂肪酶Lipozyme435(酶活6000PLU/g)，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为6％，在30℃温度下进行酶促反应，经磁力搅拌5h后离心或过滤去除脂肪酶，经HPLC-RID检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表5所示。
表5醇解反应中不同底物摩尔比对1,2-甘油二酯得率的影响
实施例6脂肪酶种类
饱和盐溶液将新鲜葵花籽油和有机溶剂的水分活度调节到0.53，随后，将3 mmol葵花籽油和一定量的乙醇充分混合，按油脂和丙酮1:1.2的比例加入丙酮以及来源于不同菌种的脂肪酶，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为6％，在30℃温度下进行酶促反应，经磁力搅拌8h后离心或过滤去除脂肪酶，经HPLC-RID检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表5所示。
表6醇解反应中不同脂肪酶对1,2-甘油二酯得率的影响
对由上述实施例1～6得到的富含1,2-甘油二酯的混合物进行纯化，得到高纯度的1,2-甘油二酯。纯化方法采用柱层析纯化法(参考陆燕婷等的方法：陆燕婷等，硅胶柱层析精制中长链结构甘油三酯，中国油脂，2021，46，104-107)，以正己烷和无水乙醚(体积比5:1)为洗脱剂，等梯度洗脱，洗脱流速2.0mL/min，上样量4g，硅胶40g，收集700mL～820mL条件下的洗脱液，最终得到96％以上含量的1,2-甘油二酯。
二、中长碳链甘油三酯的酶法合成
实施例7(不同的酰基供体)
称取3mmol纯化后的1,2-甘油二酯(来源于实施例1，丙酮为有机溶剂)，与4mmol的不同的酰基供体进行混合，随后向反应体系加入来源于Candidaantarctica的脂肪酶Lipase CL“Amano”IM，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为10％，在50℃温度下，300Pa压力下进行酶促反应，磁力搅拌6h后结束酶促反应，反应后离心或过滤去除脂肪酶得到反应粗产物，粗产物经分子蒸馏(蒸馏条件：进料温度60℃，蒸馏温度190℃，压力2Pa，刮膜速度300rpm)去除酰基供体和部分偏甘油酯等，得到纯化产物。参考徐文迪(徐文迪等，酶法合成中长碳链甘油三酯，中国油脂，2019，44，51-56)的方法分析鉴定和计算纯化产物中MLL型甘油三酯的得率，结果如表7所示。
表7酶促反应中不同酰基供体对MLL型甘油三酯得率的影响
实施例8(不同的脂肪酶)
称取3mmol纯化后的1,2-甘油二酯(来源于实施例3，水分活度为0.53)，与4mmol的癸酸乙烯酯进行混合，随后向反应体系加入来源于不同菌种的脂肪酶，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为10％，在50℃温度下，300Pa压力下进行酶促反应，磁力搅拌6h后结束酶促反应，反应后离心或过滤去除脂肪酶得到反应粗产物，粗产物经分子蒸馏(蒸馏条件：进料温度60℃，蒸馏温度190℃，压力2Pa，刮膜速度300rpm)去除酰基供体和部分偏甘油酯等，得到纯化产物。参考徐文迪(徐文迪等，酶法合成中长碳链甘油三酯，中国油脂，2019，44，51-56)的方法分析鉴定和计算纯化产物中MLL型甘油三酯的得率，结果如表8所示。
表8酶促反应中不同脂肪酶对MLL型甘油三酯得率的影响
实施例9(不同的底物摩尔比)
称取3mmol纯化后的1,2-甘油二酯(来源于实施例3，水分活度为0.53)，与一定量的癸酸乙烯酯进行混合，随后向反应体系加入来源于Candidaantarctica的脂肪酶LipaseCL“Amano”IM，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为10％，在50℃温度下，300Pa压力下进行酶促反应，磁力搅拌6h后结束酶促反应，反应后离心或过滤去除脂肪酶得到反应粗产物，粗产物经分子蒸馏(蒸馏条件：进料温度60℃，蒸馏温度190℃，压力2Pa，刮膜速度300rpm)去除酰基供体和部分偏甘油酯等，得到纯化产物。参考徐文迪(徐文迪等，酶法合成中长碳链甘油三酯，中国油脂，2019，44，51-56)的方法分析鉴定和计算纯化产物中MLL型甘油三酯的得率，结果如表9所示。
表9酶促反应中不同底物摩尔比对MLL型甘油三酯得率的影响
实施例10(不同的反应温度)
称取3mmol纯化后的1,2-甘油二酯(来源于实施例3，水分活度为0.53)，与4mmol的癸酸乙烯酯进行混合，随后向反应体系加入来源于Candidaantarctica的脂肪酶Lipase CL“Amano”IM，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为10％，在一定的温度下，300Pa压力下进行酶促反应，磁力搅拌6h后结束酶促反应，反应后离心或过滤去除脂肪酶得到反应粗产物，粗产物经分子蒸馏(蒸馏条件：进料温度60℃，蒸馏温度190℃，压力2Pa，刮膜速度300rpm)去除酰基供体和部分偏甘油酯等，得到纯化产物。参考徐文迪(徐文迪等，酶法合成中长碳链甘油三酯，中国油脂，2019，44，51-56)的方法分析鉴定和计算纯化产物中MLL型甘油三酯的得率，结果如表10所示。
表10酶促反应中不同反应温度对MLL型甘油三酯得率的影响
实施例11(不同的反应时间)
称取3mmol纯化后的1,2-甘油二酯(来源于实施例5，底物摩尔比为1:40)，与4mmol的癸酸乙烯酯进行混合，随后向反应体系加入来源于Candidaantarctica的脂肪酶Novozym435，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为10％，在30℃的温度下，300Pa压力下进行酶促反应，磁力搅拌一段时间后结束酶促反应，反应后离心或过滤去除脂肪酶得到反应粗产物，粗产物经分子蒸馏(蒸馏条件：进料温度60℃，蒸馏温度190℃，压力2Pa，刮膜速度300rpm)去除酰基供体和部分偏甘油酯等，得到纯化产物。参考徐文迪(徐文迪等，酶法合成中长碳链甘油三酯，中国油脂，2019，44，51-56)的方法分析鉴定和计算纯化产物中MLL型甘油三酯的得率，结果如表11所示。
表11酶促反应中不同反应时间对MLL型甘油三酯得率的影响
实施例12(不同的操作压力)
称取3mmol纯化后的1,2-甘油二酯(来源于实施例5，底物摩尔比为1:40)，与4mmol的癸酸乙烯酯进行混合，随后向反应体系加入来源于Candidaantarctica的脂肪酶Novozym435，脂肪酶的添加量(相对于油脂的重量，w/w)为10％，在30℃的温度下，减压条件下进行酶促反应，磁力搅拌4h后结束酶促反应，反应后离心或过滤去除脂肪酶得到反应粗产物，粗产物经分子蒸馏(蒸馏条件：进料温度60℃，蒸馏温度190℃，压力2Pa，刮膜速度300rpm)去除酰基供体和部分偏甘油酯等，得到纯化产物。参考徐文迪(徐文迪等，酶法合成中长碳链甘油三酯，中国油脂，2019，44，51-56)的方法分析鉴定和计算纯化产物中MLL型甘油三酯的得率，结果如表12所示。
由表中结果可知，反应体系的压力越低，越有利于提高MLL型甘油三酯的得率，在常压条件下，反应底物之间反应不够充分(MLL得率仅为81.2％)，反应后，粗产物剩余初始底物较多。但不管MLL的得率是高，还是低，由于MLL和反应物之间很容易分离，所以，纯化产物中MLL的含量都较高。如果通过现有的酶法酯交换技术(徐文迪等，酶法合成中长碳链甘油三酯，中国油脂，2019，44，51-56))合成MLL，纯化后，产物中MLL的含量不超过30％。
表12酶促反应体系中操作压力对MLL型甘油三酯得率的影响
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法，其特征在于，利用脂肪酶催化1,2-甘油二酯与中链脂肪酸或其衍生物进行反应，制备得到MLL型中长碳链甘油三酯。
2.根据权利要求1所述的一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将天然油脂与乙醇混合，并添加有机溶剂，以脂肪酶为催化剂，进行酶促醇解反应，得到1,2-甘油二酯；
所述有机溶剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮中的一种或多种，优选丙酮；
(2)将步骤(1)合成的1,2-甘油二酯和酰基供体混合，以脂肪酶为催化剂，反应得到MLL型甘油三酯，所述酰基供体包括中链脂肪酸和中链脂肪酸衍生物中的一种或者多种。
3.根据权利要求2所述的一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法，其特征在于，步骤(1)所述天然油脂包括天然植物油脂、动物油脂、微生物油脂中的至少一种。
4.根据权利要求2或3所述的一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述天然油脂和乙醇的摩尔比为1:60～1:10，优选1:50～1:30；所述天然油脂与有机溶剂的质量体积比为1:3～1:0.5，优选1:3～1:0.4。
5.根据权利要求2或4所述的一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述酶促醇解反应的体系水分活度为0～0.55，反应温度为20℃～45℃，反应时间为1.5h～10h。
6.根据权利要求2～5任一所述的一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述反应温度为0℃～60℃；所述反应时间为2h～10h。
7.根据权利要求2～6任一所述的一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的酰基供体与1,2-甘油二酯的摩尔比大于1:1；步骤(2)所述中链脂肪酸选自：椰子油、棕榈仁油、樟树籽油、山苍子油；所述中链脂肪酸衍生物选自：脂肪酸甲酯、脂肪酸乙酯或者脂肪酸乙烯酯中的一种或者多种，例如癸酸乙酯、癸酸乙烯酯。
8.根据权利要求2～8任一所述的一种酶法制备MLL型中长碳链甘油三酯的方法，其特征在于，在一个或多个实施方式中，在步骤(1)中，所述脂肪酶包括来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)或南极假丝酵母(Candidaantarctica)的脂肪酶；在步骤(2)中，所述脂肪酶包括来源于南极假丝酵母(Candidaantarctica)、米黑根霉菌(Rhizomucormiehei)、葱伯克霍尔德菌(Burkaholderiacepacia)或米根霉(Rhizopusoryzae)的脂肪酶。
9.应用权利要求1～8任一所述方法制备得到的MLL型中长碳链甘油三酯及其在在食品和医药领域中的应用。
10.制备1,2-甘油二酯的方法，其特征在于，将天然油脂与乙醇混合，并添加有机溶剂，以脂肪酶为催化剂，进行酶促醇解反应，得到1,2-甘油二酯；
所述有机溶剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮中的一种或多种，优选丙酮；
所述天然油脂包括天然植物油脂、动物油脂、微生物油脂中的至少一种；
所述天然油脂和乙醇的摩尔比为1:60～1:10，优选1:50～1:30；所述天然油脂与有机溶剂的质量体积比为1:3～1:0.5，优选1:3～1:0.4；
所述酶促醇解反应的体系水分活度为0～0.55，反应温度为20℃～45℃，反应时间为1.5h～10h。
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|---|---|---|---|---|
| CN116042736A (zh) * | 2023-02-24 | 2023-05-02 | 江南大学 | 一种甘油二酯的酶法生产工艺 |
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| CN111763697A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-10-13 | 江南大学 | 一种中长碳链甘油三酯食用油及其制备方法 |
| JP2020174570A (ja) * | 2019-04-17 | 2020-10-29 | キユーピー株式会社 | 高度不飽和脂肪酸及び中鎖脂肪酸含有トリグリセリドの製造方法 |
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2022
- 2022-02-28 CN CN202210183617.6A patent/CN114480518B/zh active Active
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| CN116042736A (zh) * | 2023-02-24 | 2023-05-02 | 江南大学 | 一种甘油二酯的酶法生产工艺 |
| CN116042736B (zh) * | 2023-02-24 | 2024-06-07 | 江南大学 | 一种甘油二酯的酶法生产方法 |
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