CN114470242A - 一种心梗用双模态成像介导治疗体系及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及心梗治疗领域，具体公开了一种心梗用双模态成像介导治疗体系及其制备方法和应用。一种心梗用双模态成像介导治疗体系包括miR‑TTB‑IO和MSC细胞衍生外泌体；MSC细胞衍生外泌体与miR‑TTB‑IO的体积比为3:（6～8）；miR‑TTB‑IO包括miR‑19a、穿膜肽和TTB‑IO，TTB‑IO与miR‑19a的体积比为（230～260）:1，miR‑19a与穿膜肽的体积比为1:1。其制备方法为：制备TTB‑IO水溶液；制备miR‑TTB‑IO；制备治疗体系。本申请的治疗体系用于心梗治疗和梗塞心脏内药物水平的实时监测，具有延长药物在梗塞心脏的停留时间，提高对心脏治疗效果的优点。
Description
技术领域
本申请涉及生物医药领域，更具体地说，它涉及一种心梗用双模态成像介导治疗体系及其制备方法和应用。
背景技术
急性心肌梗死是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死，临床上多有剧烈而持久的胸骨后疼痛，休息及硝酸酯类药物不能完全缓解，伴有血清心肌酶活性增高及进行性心电图变化，可并发心律失常、休克或心力衰竭，常可危及生命。
间充质干细胞源性外泌体(MSC-exosomes)是一种特殊类型的细胞外囊泡 (EV)，直径为 50至200nm，包含RNA和蛋白质，可介导靶向细胞间的信号传递，甚至遗传信息的功能性转移，可以减少梗塞面积，防止过度组织损失，并增强动物心肌梗死模型中的心脏功能。miR-19a也可用于促进离体心肌细胞增殖，在心脏再生和功能保护中发挥重要作用。
相关技术中，有联合使用MSC衍生的外泌体、miR-19a用于心肌梗塞治疗的方法，但是在将MSC衍生的外泌体和miR-19a注射到梗塞心脏后，大部分细胞立即从注射区域扩散出去，分布在循环系统中，目标位置含量极少，这更限制了治疗效果。并且，注射的药物在体内的含量水平测定麻烦，无法实时确定其在心脏位置的含量以及滞留时间。
发明内容
为了延长药物在梗塞心脏目标处的停留时间，从而提高药物对心肌梗塞心脏的治疗效果，本申请提供一种心梗用双模态成像介导治疗体系及其制备方法和应用。
第一方面，本申请提供一种心梗用双模态成像介导治疗体系，采用如下的技术方案：
一种心梗用双模态成像介导治疗体系，包括miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体，所述MSC细胞衍生外泌体与miR-TTB-IO的体积比为3:（6～8）；
所述miR-TTB-IO包括miR-19a、穿膜肽和TTB-IO，所述TTB-IO与miR-19a的体积比为（230～260）:1，所述miR-19a与穿膜肽的体积比为1:1。
通过采用上述技术方案，该治疗体系中含有的穿膜肽使得miR-TTB-IO与MSC细胞衍生外泌体顺利结合，联合MSC细胞衍生外泌体与miR-19a共同治疗心梗，提高心肌缺血缺氧治疗效果，同时由于引入氧化铁（IO）的磁引导效果，提高了MSC细胞衍生外泌体与miR-19a在梗塞心脏内的含量与保留时间，通过TTB的高荧光信号和氧化铁的超分辨技术MRI成像能力，实现梗塞心脏内药物水平的实时监测，构建了一种新型的治疗体系用于双模态成像介导的心脏梗塞联合治疗。因此，该治疗体系具有延长MSC细胞衍生外泌体和miR-19a在梗塞心脏目标位置的停留时间，从而提高对心肌梗塞心脏的治疗效果的优势。
可选的，所述TTB-IO包括包裹物、TTB和氧化铁，其中，所述包裹物的重量份为2.3～3.8份，所述TTB的重量份为0.6～0.91份，所述氧化铁的重量份为0.18～0.32份；
所述包裹物为DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000。
通过采用上述技术方案，DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000可以将TTB和氧化铁有效包裹在内，然后将miR-19a粘附在外，最终实现TTB、miR-19a、IO的结合。
可选的，所述DSPE-PEG2000-Mal的重量份为1.6～2.4份，所述DSPE-PEG2000的重量份为0.7～1.4份。
通过采用上述技术方案，当DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000采用上述配比复配使用时，对TTB和氧化铁的包覆效果更好，与miR-19a的结合性也更强，能够获得较高的miR-19a、TTB和氧化铁的装载率。
第二方面，本申请提供一种心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，采用如下的技术方案：
一种心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备TTB-IO水溶液：按照配比取包裹物、TTB、氧化铁，溶解、混合、分散；之后加入去离子水，进行破碎，透析去除杂质，得到TTB-IO水溶液；
（2）制备miR-TTB-IO：将TTB-IO水溶液进行浓缩，得到TTB-IO，取TTB-IO加入PBS缓冲液，PBS缓冲液的体积为TTB-IO体积的10%～12%，再加入miR-19a和穿膜肽，TTB-IO与miR-19a的体积比为（230～260）:1，miR-19a与穿膜肽的体积比为1:1，搅拌过夜，透析去除游离的miR-19a，得到miR-TTB-IO；
（3）制备治疗体系：按照配比取miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体制得治疗体系。
通过采用上述技术方案，依次制备TTB-IO水溶液、miR-TTB-IO，最终将miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体制得治疗体系，包裹物既可以将TTB和氧化铁包裹在内，还可以粘附miR-19a，穿膜肽实现了miR-TTB-IO与MSC细胞衍生外泌体的结合，形成治疗体系，TTB具有荧光效果，氧化铁具有MRI能力，便于实时监测梗塞心脏的治疗体系滞留水平，氧化铁还起到磁引导作用，使治疗体系在梗塞心脏内更长时间停留，减少miR-19a和MSC细胞衍生外泌体向心脏外的扩散，从而提高了治疗效果。
可选的，步骤（1）中具体为：按照配比取包裹物、TTB和氧化铁备用，将包裹物和TTB溶解于THF中，得到混合物1；将氧化铁溶解于氯仿中，得到混合物2；然后将混合物2加入到混合物1中，进行分散；之后加入去离子水，进行破碎，搅拌过夜，透析去除杂质THF，得到TTB-IO水溶液。
通过采用上述技术方案，将各物质混合后进行分散，使各物质混合均匀，之后加入去离子水进行破碎，实现均质的效果，搅拌过夜，包裹物对TTB和氧化铁进行有效地包覆，之后透析去除杂质THF，即可得到TTB-IO水溶液。
可选的，破碎采用超声破碎，破碎条件为55～65W，1～2分钟。
通过采用上述技术方案，在此条件下进行破碎时，产物的均质效果较好。
可选的，步骤（3）中具体为：步骤（3）中具体为：按照配比取miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体混合，通过磁力架去除游离产物，得到治疗体系。
通过采用上述技术方案，穿膜肽可以穿过MSC细胞衍生外泌体的膜，进入MSC细胞衍生外泌体内，使得miR-TTB-IO成功负载到MSC细胞衍生外泌体上，实现了miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体的结合。
第三方面，本申请提供一种心梗用双模态成像介导治疗体系的应用，采用如下的技术方案：
一种心梗用双模态成像介导治疗体系的应用，该治疗体系可用于心梗治疗和梗塞心脏内药物水平的实时监测。
通过采用上述技术方案，该治疗体系应用在心梗治疗中，能够提高MSC衍生的外泌体和miR-19a在梗塞心脏目标位置的停留时间，从而提高对心肌梗塞的治疗效果，同时，利用TTB荧光信号强度，并通过外部FL/MRI双模态成像，可以实时监测梗塞心脏内的药物（即MSC衍生的外泌体和miR-19a）水平。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、由于TTB的高荧光信号和氧化铁的超分辨技术MRI成像能力，可以通过活体荧光以及MRI双模态成像，从而实现梗塞心脏内药物水平的实时监测，构建了一种新型的治疗体系用于双模态成像介导的心脏梗塞联合治疗。因此，该治疗体系具有延长MSC衍生的外泌体和miR-19a在梗塞心脏目标位置的停留时间，从而提高对心肌梗塞心脏的治疗效果的优势。
2、本申请中优选采用具有亲疏水性的DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000混合，可以将TTB和氧化铁有效包裹在内，以及将miR-19a粘附在外，最终实现TTB、miR-19a、IO的结合，并且包裹物与穿膜肽结合，尤其是DSPE-PEG2000-Mal与穿膜肽上的疏基反应，对最终形成的miR-TTB-IO产生修饰作用。
3、本申请的方法，通过穿膜肽，使得miR-TTB-IO成功负载到MSC细胞衍生外泌体上，实现了miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体的结合。
附图说明
图1是本申请实施例2的治疗体系的整体结构示意图。
图2是本申请实施例2的治疗体系中miR-19a、氧化铁、TTB的封装效率评价图，是通过不同浓度下样本的OD值/荧光值，进行线性拟合绘制的标准曲线，通过测定载药后溶液中对应TTB/RNA/IO的OD值/荧光值计算出载量，再与投量进行比值计算出封装效率。TTB和miR-19a可直接通过紫外吸收OD值定量，氧化铁则是通过ICP-MS进行计算。
图3是本申请实施例2的治疗体系的投射电子显微镜图像。
图4是本申请实施例2的治疗体系处理H9C2细胞24h后，在磁场边界处的荧光分布情况。
图5是本申请实施例2的治疗体系处理缺血缺氧的H9C2细胞不同时间后细胞的存活情况。
图6是通过尾静脉给药，给小鼠注射本申请实施例2的治疗体系60小时后施加磁场引导与未施加磁场引导的荧光分布情况对比。
具体实施方式
以下结合附图1-6和实施例对本申请作进一步详细说明。予以特殊说明的是：以下实施例中未注明具体条件者按照常规条件或制造商建议的条件进行，以下实施例中所用原料除特殊说明外均可来源于普通市售。
各原料来源及规格如下：
DSPE-PEG2000-Mal，即磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺：CAS号为474922-22-0，购自Laysan Bio, Inc。
DSPE-PEG2000，即二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000：Cas为147867-65-0，购自Laysan Bio, Inc。
TTB，荧光材料。
穿膜肽，TAT，由国平药业有限公司合成。
THF，即四氢呋喃，购自Sigma-Aldrich。
IO，即氧化铁（Fe3O4），购自Nanoeast东纳。
氯仿，购自Sigma-Aldrich。
PBS缓冲液，购自Macklin。
miR-19a：来自the Stanford Protein and Nucleic Acid Facility (PAN)。
MSC细胞衍生外泌体，从MSC细胞培养上清中超离提取得到。
实施例
实施例1
一种心梗用双模态成像介导治疗体系，总体积300μL，包括miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体，miR-TTB-IO的体积为200μL，MSC细胞衍生外泌体的体积为100μL。
miR-TTB-IO包括miR-19a、穿膜肽和TTB-IO，TTB-IO的体积为10mL，miR-19a的体积为38.5μL，穿膜肽体积为38.5μL。
TTB-IO包括包裹物、TTB和氧化铁，本实施例中包裹物的添加量为2.3mg，包裹物包括DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000，DSPE-PEG2000-Mal的添加量为1.6mg，DSPE-PEG2000的添加量为0.7mg。TTB的添加量为0.6mg，氧化铁的添加量为0.18mg。
一种心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备TTB-IO水溶液：按照上述配比，取DSPE-PEG2000-Mal、 DSPE-PEG2000和TTB溶解在1.8mL的THF中，制得混合物1。取氧化铁溶解在1.8μL氯仿中后，制得混合物2。将混合物2加入到混合物1中，超声分散4min，静置27min。然后加入18mL去离子水，立刻用细胞破碎仪破碎（55W，2min），搅拌过夜.透析去除多余的杂质THF，获得TTB-IO水溶液。
（2）制备miR-TTB-IO：使用30kDa超滤管，将TTB-IO水溶液进行浓缩，浓缩到10mL，浓缩回收率为50%。加入1mL的10x PBS缓冲液，缓慢加入miR-19a和穿膜肽，搅拌过夜，透析去除游离的miR-19a。得到产物miR-TTB-IO，避光储存在4℃备用。
（3）制备治疗体系：按照配比取miR-TTB-IO与超离获得的MSC细胞衍生外泌体混合在一起，通过磁力架去除游离产物，避光储存在4℃备用，即可制得治疗体系。
实施例2
一种心梗用双模态成像介导治疗体系，总体积300μL，包括miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体，miR-TTB-IO的体积为210μL，MSC细胞衍生外泌体的体积为90μL。
miR-TTB-IO包括miR-19a、穿膜肽和TTB-IO，TTB-IO的体积为10mL，miR-19a的体积为40μL，穿膜肽体积为40μL。
TTB-IO包括包裹物、TTB和氧化铁，本实施例中包裹物的添加量为3mg，包裹物包括DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000，DSPE-PEG2000-Mal的添加量为2mg，DSPE-PEG2000的添加量为1mg。TTB的添加量为0.75mg，氧化铁的添加量为0.225mg。
一种心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备TTB-IO水溶液：按照上述配比，取DSPE-PEG2000-Mal、 DSPE-PEG2000和TTB溶解在2mL的THF中，制得混合物1。取氧化铁溶解在2μL氯仿中后，制得混合物2。将混合物2加入到混合物1中，超声分散5min，静置30min。然后加入18mL去离子水，立刻用细胞破碎仪破碎（60W，1.5min），搅拌过夜.透析去除多余的杂质THF，获得TTB-IO水溶液。
（2）制备miR-TTB-IO：使用30kDa超滤管，将TTB-IO水溶液进行浓缩，浓缩到10mL，浓缩回收率为50%。加入1.11mL的10x PBS缓冲液，缓慢加入miR-19a和穿膜肽，搅拌过夜，透析去除游离的miR-19a。得到产物miR-TTB-IO，避光储存在4℃备用。
（3）制备治疗体系：按照配比取miR-TTB-IO与超离获得的MSC细胞衍生外泌体混合在一起，通过磁力架去除游离产物，避光储存在4℃备用，即可制得治疗体系。
实施例3
一种心梗用双模态成像介导治疗体系，总体积300μL，包括miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体，MSC细胞衍生外泌体与miR-TTB-IO的体积比为3:8。
miR-TTB-IO包括miR-19a、穿膜肽和TTB-IO，TTB-IO的体积为10mL，miR-19a的体积为43.5μL，穿膜肽体积为43.5μL。
TTB-IO包括包裹物、TTB和氧化铁，本实施例中包裹物的添加量为3.8mg，包裹物包括DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000，DSPE-PEG2000-Mal的添加量为2.4mg，DSPE-PEG2000的添加量为1.4mg。TTB的添加量为0.91mg，氧化铁的添加量为0.32mg。
一种心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备TTB-IO水溶液：按照上述配比，取DSPE-PEG2000-Mal、 DSPE-PEG2000和TTB溶解在2.2mL的THF中，制得混合物1。取氧化铁溶解在2.2μL氯仿中后，制得混合物2。将混合物2加入到混合物1中，超声分散6min，静置32min。然后加入18mL去离子水，立刻用细胞破碎仪破碎（65W，1min），搅拌过夜.透析去除多余的杂质THF，获得TTB-IO水溶液。
（2）制备miR-TTB-IO：使用30kDa超滤管，将TTB-IO水溶液进行浓缩，浓缩到10mL，浓缩回收率为50%。加入1mL的10x PBS缓冲液，缓慢加入miR-19a和穿膜肽，搅拌过夜，透析去除游离的miR-19a。得到产物miR-TTB-IO，避光储存在4℃备用。
（3）制备治疗体系：按照配比取miR-TTB-IO与超离获得的MSC细胞衍生外泌体混合在一起，通过磁力架去除游离产物，避光储存在4℃备用，即可制得治疗体系。
实施例4
本实施例与实施例2的区别在于：本实施例中包裹物全部采用DSPE-PEG2000-Mal。
实施例5
本实施例与实施例2的区别在于：本实施例中包裹物全部采用DSPE-PEG2000。
实施例6
本实施例与实施例2的区别在于：本实施例中DSPE-PEG2000-Mal的重量份为1份，DSPE-PEG2000的重量份为2份。
实施例7
本实施例与实施例2的区别在于：本实施例中DSPE-PEG2000-Mal的重量份为2.7份，DSPE-PEG2000的重量份为0.3份。
对比例
对比例1
本对比例与实施例2的区别在于，本对比例中无氧化铁。
结果无法进行MRI双模态成像，没有磁引导效果，MSC衍生外泌体与miR-19a在梗塞心脏内的含量与保留时间减少。
对比例2
本对比例与实施例2的区别在于，本对比例中无TTB。
结果无法通过荧光信号来监测MSC衍生的外泌体和miR-19a在梗塞心脏目标位置的停留时间和含量。
对比例3
本对比例与实施例2的区别在于：本对比例中无穿膜肽。
结果miR-TTB-IO与MSC细胞衍生外泌体无法结合，无法构成治疗体系。
对比例4
本对比例与实施例2的区别在于：本对比例中无包裹物。
结果无法形成TTB-IO，TTB、氧化铁、miR-19a和MSC细胞衍生外泌体均无法结合而得到成型的产物，无法得到治疗体系。
性能检测试验
检测方法/试验方法
1、通过透射电镜观察产物形貌特征，同时测定各实施例和对比例制得的产物中TTB、miR-19a、氧化铁的封装效率，结果如表1所示，表征其荧光信号水平以及MRI成像能力。
表1治疗体系中miR-19a、氧化铁、TTB的封装效率
| 实施例/对比例 | TTB的封装效率 | miR-19a的封装效率 | 氧化铁的封装效率 |
| 实施例1 | 72.38% | 27.45% | 50.12% |
| 实施例2 | 75.28% | 30.62% | 53.75% |
| 实施例3 | 72.27% | 27.39% | 50.04% |
| 实施例4 | 65.26% | 21.34% | 43.52% |
| 实施例5 | 42.12% | 2.23% | 27.18% |
| 实施例6 | 55.68% | 18.73% | 35.62% |
| 实施例7 | 65.85% | 22.48% | 44.13% |
| 对比例1 | 73.56% | 28.92% | / |
| 对比例2 | / | 29.13% | 51.98% |
| 对比例3 | / | / | / |
| 对比例4 | / | / | / |
通过测定TTB、miR-19a、IO的封装效率，实施例2制得的治疗体系测试结果如图2所示，获得产物中TTB、miR-19a、IO的含量较高，可以用于后续治疗成像研究。通过透射电子显微镜观察实施例2制得的治疗体系，结果如图3所示，可以看到外泌体的典型TEM图像，同时可以确定miR-TTB-IO的成功包载，表明治疗体系的成功合成。
而根据表1得到的数据有如下分析：
与实施例2相比，实施例4制得的治疗体系中包裹物全部采用DSPE-PEG2000-Mal，实施例5制得的治疗体系中包裹物全部采用DSPE-PEG2000。由表1可得，与实施例2制得的治疗体系测得的封装效率相比，实施例4制得的治疗体系中TTB的封装效率下降了10.02%，miR-19a的封装效率下降了9.28%，氧化铁的封装效率下降了10.23%；实施例5制得的治疗体系中TTB的封装效率下降了33.16%，miR-19a的封装效率下降了28.39%，氧化铁的封装效率下降了26.57%。因此，只有当包裹物采用DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000复配使用时，才具有较好的装载TTB、miR-19a和氧化铁的效果。
实施例6与实施例2中采用的包裹物DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000的配比不同，实施例7与实施例2中采用的包裹物DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000的配比不同。由表1可以看出，与实施例2制得的治疗体系测得的封装效率相比，实施例6制得的治疗体系中TTB的封装效率下降了19.6%，miR-19a的封装效率下降了11.89%，氧化铁的封装效率下降了18.13%；实施例7制得的治疗体系中TTB的封装效率下降了9.43%，miR-19a的封装效率下降了8.14%，氧化铁的封装效率下降了9.62%。因此得出，当DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000采用一定的配比范围复配使用时，对TTB和氧化铁的包覆效果更好，与miR-19a的结合性也更强，能够获得较高的miR-19a、TTB和氧化铁的装载率。
2、细胞治疗效果评价
将H9C2细胞铺在96孔板里，3000 cells/well，过夜生长使其贴壁，制作3组。
更换培养基为缺血缺氧培养基（200μM DFO模拟缺氧环境，DMEM无血清无双抗模拟缺血环境）培养24小时。
选两组作为对照组，对照组继续缺血缺氧，在其中一组缺血缺氧培养基中加入实施例2制得的治疗体系，另一组加入实施例2中制得的miR-TTB-IO，稀释不同的浓度梯度进行治疗，测试不同时间点的细胞存活率，结果如图5所示。
通过CCK8细胞存活率评价miR-TTB-IO和治疗体系对于缺血缺氧H9C2细胞的治疗效果，结合实施例2，并结合图5，结果如图5所示，可以看到miR-TTB-IO的治疗效果不明显，联合MSC衍生外泌体后，治疗体系处理组的缺血缺氧H9C2细胞存活率大幅度上升，表明了治疗体系有着很好的联合治疗效果。
3. 磁引导效果评价
使用实施例2制得的治疗体系处理H9C2细胞，同时进行磁场引导，观察磁场与磁场外TTB荧光信号分布情况。
通过小鼠尾静脉注射治疗体系，在小鼠左腿处施加磁场引导60小时，比较小鼠左腿施加磁场引导与未施加磁场引导的荧光分布情况的不同，结果如图6所示。
通过荧光倒置显微镜观察磁场引导实施例2制得的治疗体系在H9C2细胞中的摄取时，在磁场边界处的荧光分布情况，结果如图4所示，可以看到，在磁场内的荧光分布强度明显高于无磁场引导区域，表明了磁场可以引导治疗体系在目标位置的摄取与保留。
对小鼠尾静脉注入治疗体系，在小鼠左腿处施加磁场引导，通过小动物活体成像，监测左腿的荧光信号分布，结果如图6所示，可以看到施加磁场引导的小鼠其荧光信号明显高于未施加磁场组，表明在小鼠体内磁场引导仍可以促进治疗体系在目标位置的摄取与保留，同时可以通过荧光信号的变化评价目标位置的药物水平。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (8)
1.一种心梗用双模态成像介导治疗体系，其特征在于：包括miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体，所述MSC细胞衍生外泌体与miR-TTB-IO的体积比为3:（6～8）；
所述miR-TTB-IO包括miR-19a、穿膜肽和TTB-IO，所述TTB-IO与miR-19a的体积比为（230～260）:1，所述miR-19a与穿膜肽的体积比为1:1。
2.根据权利要求1所述的心梗用双模态成像介导治疗体系，其特征在于：所述TTB-IO包括包裹物、TTB和氧化铁，其中，所述包裹物的重量份为2.3～3.8份，所述TTB的重量份为0.6～0.91份，所述氧化铁的重量份为0.18～0.32份；
所述包裹物为DSPE-PEG2000-Mal和DSPE-PEG2000。
3.根据权利要求2所述的心梗用双模态成像介导治疗体系，其特征在于：所述DSPE-PEG2000-Mal的重量份为1.6～2.4份，所述DSPE-PEG2000的重量份为0.7～1.4份。
4.一种权利要求1-3任一项所述的心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）制备TTB-IO水溶液：按照配比取包裹物、TTB、氧化铁，溶解、混合、分散；之后加入去离子水，进行破碎，透析去除杂质，得到TTB-IO水溶液；
（2）制备miR-TTB-IO：将TTB-IO水溶液进行浓缩，得到TTB-IO，取TTB-IO加入PBS缓冲液，PBS缓冲液的体积为TTB-IO体积的10%～12%，再加入miR-19a和穿膜肽，TTB-IO与miR-19a的体积比为（230～260）:1，miR-19a与穿膜肽的体积比为1:1，搅拌过夜，透析去除游离的miR-19a，得到miR-TTB-IO；
（3）制备治疗体系：按照配比取miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体制得治疗体系。
5.根据权利要求4所述的心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，其特征在于：步骤（1）中具体为：按照配比取包裹物、TTB和氧化铁备用，将包裹物和TTB溶解于THF中，得到混合物1；将氧化铁溶解于氯仿中，得到混合物2；然后将混合物2加入到混合物1中，进行分散；之后加入去离子水，进行破碎，搅拌过夜，透析去除杂质THF，得到TTB-IO水溶液。
6.根据权利要求4所述的心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，其特征在于：破碎采用超声破碎，破碎条件为55～65W，1～2分钟。
7.根据权利要求4所述的心梗用双模态成像介导治疗体系的制备方法，其特征在于：步骤（3）中具体为：按照配比取miR-TTB-IO和MSC细胞衍生外泌体混合，通过磁力架去除游离产物，得到治疗体系。
8.一种权利要求1-7任一项所述的心梗用双模态成像介导治疗体系的应用，其特征在于：该治疗体系可用于心梗治疗和梗塞心脏内药物水平的实时监测。
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Application publication date: 20220513 |