CN114470079B - 一种用于治疗胰腺癌的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于治疗胰腺癌的中药组合物及其制备方法和应用。所述的中药组合物由以下重量份的各原料药制成：鹿蹄草10‑15重量份、绿萼梅1‑5重量份、旋覆花6‑7重量份、石南叶7‑8重量份、千年健7‑9重量份、葎草15‑25重量份。所述的中药组合物具有益肾理气、化痰除湿、祛风消瘀的基本功效。研究结果显示，中药组合物高、中剂量会明显改善人类胰腺癌BxPC‑3裸鼠移植瘤动物模型小鼠肿瘤抑制率和人类胰腺癌BxPC‑3裸鼠移植瘤动物模型小鼠细胞凋亡水平，还可以改善人类胰腺癌BxPC‑3裸鼠移植瘤动物模型小鼠Shh和Gli1蛋白和基因表达水平，并且对模型小鼠主要脏器指数和体重无影响，说明本发明的中药组合物治疗胰腺癌有效并且无副作用。

Description

一种用于治疗胰腺癌的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和用途，特别涉及一种用于治疗胰腺癌的中药组合物及其制备方法和应用。本发明属于中药研究技术领域。
背景技术
胰腺癌是临床上非常常见的消化系统恶性肿瘤(Torphy RJ，Fujiwara Y，Schulick RD.Pancreatic cancer treatment better but a long way to go[J].SurgToday，2020，50(10)：1117-1125.)。近几年来这类消化系统肿瘤的发病率及其死亡率逐年上升，尤其是我们国家农村地区(Segel JE，Hollenbeak CS，Gusani NJ.Rural-UrbanDisparities in Pancreatic Cancer Stage of Diagnosis Understanding theInteraction With Medically Underserved Areas[J].J Rural Health，2020，36(4)：476-483.)，这类肿瘤的发病率相对城市而言是比较高的，因此，我们国家需要高度重视胰腺癌。
实际上，早期诊断出胰腺癌可以有效降低胰腺癌的死亡率(Ariston Gabriel AN，Wang F，Jiao Q，et al.The involvement of exosomes in the diagnosis andtreatment of pancreatic cancer[J].Mol Cancer，2020，19(1)：132.)，但是很多胰腺癌患者多是无法进行早期诊断的，因为很多胰腺癌患者发现后多为中期胰腺癌、晚期胰腺癌(Iglesia D，Avci B，Kiriukova M，et al.Pancreatic exocrine insufficiency andpancreatic enzyme replacement therapy in patients with advanced pancreaticcancer A systematic review and meta-analysis[J].United European GastroenterolJ，2020，8(9)：1115-1125.)，此时胰腺癌多已经转移到机体局部淋巴结、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏等。尽管针对胰腺癌可以采用常规的手术治疗(Liu S，Zhou X，Song A，etal.Clinical characteristics and surgical treatment of spinal metastases frompancreatic cancer a single center retro spective study[J].Ann Palliat Med，2021，10(2)：1276-1284.)、放射治疗、化学药物治疗等，但是手术治疗、放射治疗(Grossberg AJ，Chu LC，Deig CR，et al.Multi disciplinary standards of care andrecent progress in pancreatic ductal adenocarcinoma[J].CACancer J Clin，2020，70(5)：375-403.)、化学药物治疗等之后非常容易出现复发，这与中期胰腺癌、晚期胰腺癌出现不同器官包括局部淋巴结、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏等转移有一定关系，可见，针对胰腺癌的治疗选择新的方法、新的策略是有必要的。
研究资料显示，机体Hedgehog(双H)信号通路与多种肿瘤如胰腺癌(Bausch D，Fritz S，Bolm L，et al.Hedgehog signaling promotes angiogenesis directly andindirectly in pancreatic cancer[J].Angiogenesis，2020，23(3)：479-492.)、肝癌、肺癌、胃癌、膀胱癌、前列腺癌(Ishii A，Shigemura K，Kitagawa K，et al.Anti-tumorEffect of Hedgehog Signaling Inhibitor Vismodegib on Castration-resistantProstate Cancer[J].Anticancer Res，2020，40(9)：5107-5114.)、直肠癌、食管癌、卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌等均相关，尤其是中期胰腺癌、晚期胰腺癌多与机体Hedgehog(双H)信号通路关系极为密切，针对机体的Hedgehog(双H)信号通路关键蛋白，如Hedgehog(双H)信号通路的配体蛋白(Shh)(Guo Y，Tong Y，Zhu H，et al.Quercetin suppresses pancreaticductal adenocarcinoma progression via inhibition of SHH and TGF-beta/Smadsignaling pathways[J].Cell Biol Toxicol，2021，37(3)：479-496.)及其Hedgehog(双H)信号通路的核转录因子(G1i家族)逐渐被人类重视。
一般而言，中期胰腺癌、晚期胰腺癌常常会出现Hedgehog(双H)信号通路的配体蛋白(Shh)及其Hedgehog(双H)信号通路的核转录因子(G1i家族)(Hu X，Xiao Y，Sun J，etal.New possible silver lining for pancreatic cancer therapy：Hydrogen sulfideand its donors[J].Acta Pharm Sin B，2021，11(5)：1148-1157.)活化，导致Hedgehog(双H)信号通路活化。Hedgehog(双H)信号通路的核转录因子(G1i家族)可以通过核转录因子(G1i家族)的靶基因而发挥作用，会加重Hedgehog(双H)信号通路活化水平。可见，针对胰腺癌的治疗可以考虑选择针对Hedgehog(双H)信号通路的配体蛋白(Shh)(Su YH，Hsu TW，Chen HA，et al.ERK-mediated transcriptional activation of Dicer is involved ingemcitabine resistance of pancreatic cancer[J].J Cell Physiol，2021，236(6)：4420-4434.)及其Hedgehog(双H)信号通路的核转录因子(G1i家族)开展实验研究。
已经证实，5-氟尿嘧啶(Pishvaian MJ，Wang H，He AR，et al.A Phase I/IIStudy of Veliparib ABT-888in Combination with 5-Fluorouracil and Oxaliplatinin Patients with Metastatic Pancreatic Cancer[J].Clin Cancer Res，2020，26(19)：5092-5101.)、白藜芦醇、抗细胞凋亡药物、顺铂(Hou X，Yang L，Wang K，et al.HELLS，achromatin remodeler is highly expressed in pancreatic cancer anddownregulation of it impairs tumor growth and sensitizes to cisplatin byreexpressing the tumor suppressor TGFBR3[J].Cancer Med，2021，10(1)：350-364.)等多种常规抗肿瘤药物对中期胰腺癌、晚期胰腺癌也是有效的，但是5-氟尿嘧啶、白藜芦醇、抗细胞凋亡药物、顺铂(Wang Y，Park JYP，Pacis A，et al.APreclinical Trial andMolecularly Annotated Patient Cohort Identify Predictive Biomarkers inHomologous Recombination deficient Pancreatic Cancer[J].Clin Cancer Res，2020，26(20)：5462-5476.)等药物常伴有一定的副作用，因此，基于中医理论选择毒副作用小、具有整体调节特点、药物成分相互协同作用的中医中药就显得具有较大的实际意义了(陈钧泽，齐元富.中医药治疗胰腺癌应用研究进展[J].山东中医杂志，2021，40(3)：315-318.)。
中医理论基础，肾主水，脾主运化。胰腺癌多因肾气不足而虚、脾失运化而气滞所致水代谢障碍及其水谷精微运化失调，瘀毒、湿毒、痰毒、风毒常常会积聚而诱发机体出现病症，所以治疗胰腺癌多采用益肾、理气的基本方法。肾与脾是紧密联系的，肾气充足，运化水谷和运化水液正常，脾主运化正常发挥功能(姜菊玲，袁奕昕，刘瑞，等.从“气机升降”与“传舍”理论浅析胰腺癌转移的病机[J].北京中医药，2020，39(11)：1184-1188.)，脏腑、经络等营养供应正常，气血运行通畅，瘀毒、湿毒、痰毒、风毒不会积聚，避免机体出现各类疾病。一旦瘀毒、湿毒、痰毒、风毒积聚，就提示机体肾气不足、脾失运化，将会促进胰腺癌的发生发展。如果瘀毒、湿毒、痰毒、风毒多积聚于脾，机体就会出现胰腺癌(庞博，姜晓晨，刘福栋，等.胰腺癌中医药防治研究述评[J].北京中医药，2020，39(8)：795-799.)，进而影响机体健康，所以治疗胰腺癌需要化痰除湿、祛风消瘀(陈瑞，程悦蕾，李琦，等.疏肝健脾法治疗胰腺癌研究进展[J].河北中医，2020，42(9)：1429-1434.)。综合分析，基于中医基础理论和中药基本特点，有效治疗胰腺癌需要益肾理气、化痰除湿、祛风消瘀。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于治疗胰腺癌的中药组合物及其制备方法和应用。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
本发明的一种用于治疗胰腺癌的中药组合物，其由鹿蹄草、绿萼梅、旋覆花、石南叶、千年健以及葎草组成。其中鹿蹄草，性温，味甘、味苦，归属于肾经、肝经等经络，具有益肾、除湿、壮骨、止血、疏筋的基本功效；绿萼梅，别名绿梅花，性平，味涩、味微酸，归属于胃经、肝经等经络，具有理气、化痰、解郁、疏肝、和中、解渴的基本功效；旋覆花，别名金沸花，性微温，味咸、味辛、味苦，归属于大肠经、胃经、肺经、脾经等经络，具有化痰、止呕、行水、降气、除痞的基本功效；石南叶，性平，味苦、味辛，归属于肾经、肝经等经络，具有除湿、通经、祛风、消痒的基本功效；千年健，别名一包针，性温，味苦、味辛，归属于肾经、肝经等经络，具有祛风、消肿、强筋、止痛的基本功效；葎草，性寒，味苦，味甘，归属于肾经、肺经等经络，具有消瘀、清热、解毒、利尿的基本功效。因此，本发明选择由鹿蹄草、绿萼梅、旋覆花、石南叶、千年健、葎草组成的中药组合物具有益肾理气、化痰除湿、祛风消瘀的基本功效。本发明根据中医理论基础关于胰腺癌的病机分析，选择君药鹿蹄草、绿萼梅可以发挥益肾理气的基本功效，选择臣药旋覆花、石南叶可以发挥化痰除湿的基本功效，选择佐药千年健可以发挥祛风的基本功效，选择使药葎草可以发挥消瘀的基本功效。
具体的，一种用于治疗胰腺癌的中药组合物，其由以下重量份的各原料药制成：鹿蹄草10-15重量份、绿萼梅1-5重量份、旋覆花6-7重量份、石南叶7-8重量份、千年健7-9重量份、葎草15-25重量份。
其中，优选的，所述的中药组合物由以下重量份的各原料药制成：鹿蹄草12.5重量份、绿萼梅3.5重量份、旋覆花6.5重量份、石南叶7.5重量份、千年健8重量份、葎草20重量份。
进一步的，本发明还提出了所述的中药组合物在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
更进一步的，本发明还提出了一种制备所述的中药组合物的方法，包括以下步骤：
(1)按照本发明所述的重量份称取各原料药，将各原料药混合均匀后，加入药物重量30-35倍的蒸馏水，浸泡2.5-3.5h后，100℃下煎煮2-3h，冷却；
(2)将步骤(1)冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液；
(3)步骤(2)剩余的药物残渣，重复步骤(1)和(2)得到第二次滤液；
(4)合并第一次滤液及第二次滤液，使用干燥箱60-70℃烘烤6-8天，获得中药组合物干膏；
(5)将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，过筛，得到所述中药组合物的干粉。
其中，优选的，步骤(2)中所述的用纱布过滤是指依次用3层纱布、6层纱布、10层纱布、17层纱布过滤。
按照所述的方法制备得到的中药组合物干粉也在本发明的保护范围之内。
更进一步的，本发明还提出了一种临床上适宜的用于治疗胰腺癌的中药制剂，其特征在于，由所述的中药组合物干粉加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。
其中，优选的，所述的制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或口服液。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
本发明针对胰腺癌的治疗提供了一种中药组合物及其制备方法。该中药组合物具有益肾理气、化痰除湿、祛风消瘀的基本功效。研究结果显示，中药组合物高剂量(15.08g/kg)、中药组合物中剂量(7.54g/kg)会明显改善人类胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤动物模型小鼠肿瘤抑制率和人类胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤动物模型小鼠细胞凋亡水平，中药组合物高剂量(15.08g/kg)、中药组合物中剂量(7.54g/kg)还可以改善人类胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤动物模型小鼠Shh和Gli1蛋白和基因表达水平，并且中药组合物对人类胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤动物模型小鼠主要脏器指数和体重无影响，说明本发明中药组合物治疗胰腺癌有效并且无副作用。
附图说明
图1为中药组合物对小鼠肿瘤质量的影响；
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05，纵坐标是肿瘤质量(g)
图2为中药组合物对小鼠细胞凋亡率的影响；
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05，纵坐标是细胞凋亡率(％)
图3为中药组合物对小鼠Shh表达的影响；
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05，纵坐标是Shh(OD值)
图4为中药组合物对小鼠Gli1表达的影响；
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05，纵坐标是Gli1(OD值)
图5为中药组合物对小鼠Shh基因的影响；
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05，纵坐标是Shh(基因表达量)；
图6为中药组合物对小鼠Gli1基因的影响；
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05，纵坐标是Gli1(基因表达量)；
图7为中药组合物对小鼠肝指数、肾指数的影响；
注：与模型对照组比较：#P＞0.05，纵坐标是脏器指数(mg/g)；
图8为中药组合物对小鼠肺指数、心指数的影响；
注：与模型对照组比较：#P＞0.05，纵坐标是脏器指数(mg/g)；
图9为中药组合物对小鼠体重的影响；
注：与模型对照组比较：#P＞0.05，纵坐标是体重(g)。
具体实施方式
下面进一步描述本发明，本描述中介绍的实施案例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成限制。本专业技术人员应该理解的是，在不偏离本发明原理和方法的情况下，对本发明技术方案的细节和形式进行部分修改或替换，但基于此修改或替换均属于本发明的保护范围内。
以下实施例中的鹿蹄草、绿萼梅、旋覆花、石南叶、千年健、葎草购买于黑龙江中医药大学第一附属医院，符合药材基本标准。
实施例1一种用于治疗胰腺癌的中药组合物的制备
所述的中药组合物由以下重量的各原料药制成：鹿蹄草12.5重量份、绿萼梅3.5重量份、旋覆花6.5重量份、石南叶7.5重量份、千年健8重量份、葎草20重量份。
实施例2一种用于治疗胰腺癌的中药组合物的制备
所述的中药组合物由以下重量的各原料药制成：鹿蹄草10重量份、绿萼梅5重量份、旋覆花6重量份、石南叶8重量份、千年健7.5重量份、葎草18重量份。
实施例3一种用于治疗胰腺癌的中药组合物的制备
所述的中药组合物由以下重量的各原料药制成：鹿蹄草15重量份、绿萼梅2重量份、旋覆花7重量份、石南叶7重量份、千年健9重量份、葎草22重量份。
实施例4一种用于治疗胰腺癌的中药组合物(干粉)的制备
(1)鹿蹄草12.5g、绿萼梅3.5g、旋覆花6.5g、石南叶7.5g、千年健8g、葎草20g，共6种原药材，每份58g。选择4份232g，放入圆底烧瓶，加入双蒸水7500mL，浸泡3小时，100℃下煎煮3h，冷却；
(2)将步骤(1)冷却后的药液依次经过3层纱布过滤、6层纱布过滤、10层纱布、17层纱布过滤，得到第一次滤液；
(3)步骤(2)剩余的药物残渣放入大容量圆底烧瓶中，加入药物重量20倍的蒸馏水，浸泡3小时，100℃下煎煮2小时，依次经过6层纱布过滤、8层纱布过滤、12层纱布过滤，获得第二次滤液；
(4)合并第一次滤液及第二次滤液，使用干燥箱60-70℃烘烤7天，获得中药组合物干膏45g；
(5)粉碎机粉碎干膏45g，获得干粉42g(相当于1g中药组合物得到0.18g干粉)，分装10g/袋，最后一袋2g，-80℃冰箱进行冷冻保存。
实施例5药效试验
1实验材料
1.1实验动物及其药物
BALB/c裸鼠(SCXK(沪)2017-0019)，5周龄，70只，雄性，(19.1249±1.4237)g，由黑龙江中医药大学周忠光提供，常规方法饲养于黑龙江中医药大学实验动物中心。中药组合物干粉按照实施例4方法制备。5-氟尿嘧啶购买于美国Sigma公司。
1.2实验试剂及其仪器
BxPC-3细胞株，上海酶研生物公司；Gli1抗体、GAPDH抗体、Shh抗体，INT公司；胰蛋白酶，上海雅心生物公司；RPMI-1640培养基，Sigma公司；Tween20，厦门锐珂公司；其他国产分析纯，均由周忠光教授提供。干燥箱，西安圣达公司；医学图文分析系统，武汉千屏公司；制冰机，Leica公司；离心机，上海安亭公司；培养箱，BD公司；其他仪器由周忠光教授提供。
2实验方法
2.1药物计量换算
中药组合物包括鹿蹄草12.5g、绿萼梅3.5g、旋覆花6.5g、石南叶7.5g、千年健8g、葎草20g，共6种原药材，每份58g。按照比值0.0026：1进行计算，获得中药组合物剂量是7.54g(相当于1.36g干粉)，这是中药组合物中剂量。中药组合物高剂量是中药组合物中剂量2倍，即15.08g(相当于2.72g干粉)，中药组合物低剂量是中药组合物中剂量的一半，即3.77g(相当于0.68g干粉)。同样方法计算5-氟尿嘧啶的给药剂量是0.03g/kg。
2.2细胞培养及其生长观察
复苏BxPC-3细胞株，使用培养箱常规培养BxPC-3细胞株，待BxPC-3细胞株生长达到最佳时期后，使用胰蛋白酶处理传代，使用台盼蓝染色观察细胞的生长状态，评估BxPC-3细胞株的综合水平。
2.3建立常规细胞模型及其分组给药
评估BxPC-3细胞株的综合水平最佳时，收集BxPC-3细胞株，按照每只裸鼠右腋部皮下注射BxPC-3细胞株大约细胞数5×106个，经过10天后，裸鼠右腋部出现圆形肿块，此即常规细胞模型建立成功。针对BxPC-3细胞株移植瘤模型，确定50只裸鼠均出现圆形肿块，随机分为模型对照组、组合物低剂量组、组合物高剂量组、西药治疗对照组、组合物中剂量组，同时选择背景相同的裸鼠设定为正常空白对照组作为参考。西药治疗对照组(0.03g/kg)灌胃5-氟尿嘧啶，模型对照组给予生理盐水，组合物高剂量组(15.08g/kg)灌胃中药组合物，组合物中剂量组(7.54g/kg)灌胃中药组合物；组合物低剂量组(3.77g/kg)灌胃中药组合物。连续给药28天。
2.4测定肿瘤抑制率
各组小鼠连续给药(中药组合物、5-氟尿嘧啶、生理盐水)28天后称重，常规处死小鼠，酒精消毒，无菌操作剥离小鼠瘤体，生理盐水冲洗，滤纸吸干小鼠瘤体的水分。各组小鼠肿瘤抑制率(％)＝(模型对照组小鼠肿瘤质量-各个实验组肿瘤质量)/模型对照组平均肿瘤质量×100％；
2.5测定细胞凋亡水平
各组小鼠连续给药(中药组合物、5-氟尿嘧啶、生理盐水)28天后，常规处死小鼠，酒精消毒，无菌操作剥离小鼠瘤体，生理盐水冲洗，滤纸吸干小鼠瘤体的水分，制备BxPC-3的单细胞悬液(2×106/mL)，接种在6孔板，干预处理24小时，加入染液，孵育30min，按照试剂盒方法进行测定，分析细胞凋亡水平。
2.6测定Shh、Gli1蛋白表达水平
各组小鼠连续给药(中药组合物、5-氟尿嘧啶、生理盐水)28天后，无菌操作剥离小鼠瘤体，经过固定、脱水、透明、包埋、切片、脱蜡、修复、加一抗、冲洗、加二抗、冲洗、显色、复染、封片等基本过程，用OD值评估Hedgehog(双H)信号通路重要相关靶点Shh、Gli1蛋白表达水平。
2.7测定Shh、Gli1基因表达水平
各组小鼠连续给药(中药组合物、5-氟尿嘧啶、生理盐水)28天后，无菌操作剥离小鼠瘤体。按照说明书提取mRNA，分别设计Shh、Gli1、GAPDH引物。引物Shh：上游的引物5’-GTTCCG TCA ATG CTG ACA ACT-3’，下游的引物5’-CTA GCA ATG TCA GCA ACT CG-3’；Gli1：上游的引物5’-ACC CCT ATC TTC CTA CTT CCG C-3’，下游的引物5’-CTA ATT TTT GTC TCTTTC TCT A-3’；GAPDH：上游的引物5’-ATA ACG CCG GTG CCC ACT CG-3’，下游的引物5’-ATG GTC CCT CTA CTG TGT CC-3’。配制针对Shh、Gli1、GAPDH的PCR反应体系进行测定，采用2-△△Ct法数据处理Shh、Gli1、GAPDH的相关数据，评估Hedgehog(双H)信号通路重要相关靶点Shh、Gli1基因表达水平。
2.8检测体重和脏器指数
各组小鼠连续给药(中药组合物、5-氟尿嘧啶、生理盐水)28天后，称量小鼠体重，分析体重数据变化，无菌解剖小鼠，称量心、肺、肾、肝脏器质量，计算脏器指数，评估中药组合物、5-氟尿嘧啶、生理盐水对各组小鼠的副作用。各组小鼠的脏器指数(mg/g)＝各组小鼠的脏器质量(mg)/各组小鼠的小鼠体重(g)。
2.9数据统计分析
采用SPSS19.0软件分析各组小鼠的相关数据多组间比较采用单因素方差分析。
3结果
3.1中药组合物对小鼠肿瘤质量和肿瘤抑制率的影响
结果表明，与模型对照组小鼠肿瘤质量比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠明显降低(P<0.05)，组合物低剂量组小鼠肿瘤质量改变不明显(P＞0.05)。见表1、图1。
表1中药组合物对小鼠肿瘤质量和肿瘤抑制率的影响(n＝10)
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05
3.2中药组合物对小鼠细胞凋亡率的影响
结果表明，与模型对照组小鼠细胞凋亡率比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠均明显增加(P＜0.05)，组合物低剂量组小鼠肿瘤细胞凋亡率改变不明显(P＞0.05)。见表2、图2。
表2中药组合物对小鼠细胞凋亡率的影响
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05
3.3中药组合物对小鼠Shh蛋白表达的影响
结果表明，与模型对照组小鼠比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠Shh蛋白表达OD值明显降低(P＜0.05)，而组合物低剂量组小鼠Shh蛋白表达OD值改变不明显(P＞0.05)。见表3、图3。
表3中药组合物对小鼠Shh表达的影响
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05
3.4中药组合物对小鼠Gli1蛋白表达的影响
结果表明，与模型对照组小鼠比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠Gli1蛋白表达OD值明显降低(P＜0.05)，而组合物低剂量组小鼠Gli1蛋白表达OD值改变不明显(P＞0.05)。见表4、图4。
表4中药组合物对小鼠Gli1表达的影响
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05
3.5中药组合物对小鼠Shh基因的影响
结果表明，与模型对照组小鼠比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠Shh基因表达量明显降低(P＜0.05)，而组合物低剂量组小鼠Shh基因表达量改变不明显(P＞0.05)。见表5、图5。
表5中药组合物对小鼠Shh基因的影响(2-△△Ct)
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05
3.6中药组合物对小鼠Gli1基因的影响
结果表明，与模型对照组小鼠比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠Gli1基因表达量明显降低(P＜0.05)，而组合物低剂量组小鼠Gli1基因表达量改变不明显(P＞0.05)。见表6、图6。
表6中药组合物对小鼠Gli1基因的影响(2-△△Ct)
注：与模型对照组比较：#P＜0.05，*P＞0.05
3.7中药组合物对小鼠肝指数、肾指数的影响
结果表明，与模型对照组小鼠比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、组合物低剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠肝指数、肾指数改变不明显(P＞0.05)。见表7、图7。
表7中药组合物对小鼠肝指数、肾指数的影响(n＝8)
注：与模型对照组比较：#P＞0.05
3.8中药组合物对小鼠肺指数、心指数的影响
结果表明，与模型对照组小鼠比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、组合物低剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠肺指数、心指数改变不明显(P＞0.05)。见表8、图8。
表8中药组合物对小鼠肺指数、心指数的影响(n＝8)
注：与模型对照组比较：#P＞0.05
3.9中药组合物对小鼠体重的影响
结果表明，与模型对照组小鼠0天、14天、28天比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、组合物低剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠0天、14天、28天体重改变不明显(P＞0.05)。见表9、图9。
表9中药组合物对小鼠体重的影响(n＝8)/>
注：与模型对照组比较：#P＞0.05
4讨论
治疗胰腺癌一直是世界性难题，采用中医中药治疗对胰腺癌具有自身的优势，不仅可以减少副作用，还具有整体调节作用。胰腺癌Hedgehog(双H)信号通路逐渐被重视，这为研究胰腺癌的发病机制奠定了坚实的基础。
针对肿瘤抑制率指标，结果表明，与模型对照组小鼠肿瘤质量比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠明显降低(P<0.05)，组合物低剂量组小鼠肿瘤质量改变不明显(P＞0.05)，说明中药组合物高剂量(15.08g/kg)、中药组合物中剂量(7.54g/kg)会明显改善人类胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤动物模型小鼠肿瘤抑制率水平。
针对肿瘤细胞凋亡指标，结果表明，与模型对照组小鼠细胞凋亡率比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠均明显增加(P＜0.05)，组合物低剂量组小鼠肿瘤细胞凋亡率改变不明显(P＞0.05)，说明中药组合物高剂量(15.08g/kg)、中药组合物中剂量(7.54g/kg)会明显改善人类胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤动物模型小鼠肿瘤细胞凋亡水平。
针对胰腺癌Hedgehog(双H)信号通路Shh、Glil指标，结果表明，与模型对照组小鼠比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠Shh蛋白表达OD值和基因表达量明显降低(P＜0.05)，而组合物低剂量组小鼠Shh蛋白表达OD值和基因表达量改变不明显(P＞0.05)，说明中药组合物高剂量(15.08g/kg)、中药组合物中剂量(7.54g/kg)会明显改善人类胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤动物模型小鼠胰腺癌Hedgehog(双H)信号通路Shh、Glil指标水平。
针对脏器指数和体重指标，结果表明，与模型对照组小鼠比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、组合物低剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠肝指数、肾指数、心指数、肺指数改变不明显(P＞0.05)；结合与模型对照组小鼠0天、14天、28天比较，组合物高剂量组小鼠、组合物中剂量组小鼠、组合物低剂量组小鼠、西药治疗对照组小鼠0天、14天、28天体重改变不明显(P＞0.05)，说明不同剂量的中药组合物治疗胰腺癌时对机体无副作用。
综上所述，由鹿蹄草、绿萼梅、旋覆花、石南叶、千年健、葎草组成的中药组合物可以有效治疗胰腺癌且无副作用。

Claims (8)

1.一种用于治疗胰腺癌的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由以下重量份的各原料药制成：鹿蹄草10-15重量份、绿萼梅1-5重量份、旋覆花6-7重量份、石南叶7-8重量份、千年健7-9重量份、葎草15-25重量份。
2.如权利要求1所述的用于治疗胰腺癌的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由以下重量份的各原料药制成：鹿蹄草12.5重量份、绿萼梅3.5重量份、旋覆花6.5重量份、石南叶7.5重量份、千年健8重量份、葎草20重量份。
3.权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
4.一种制备权利要求1或2所述的中药组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)按照权利要求1或2所述的重量份称取各原料药，将各原料药混合均匀后，加入药物重量30-35倍的蒸馏水，浸泡2.5-3.5h后，100℃下煎煮2-3h，冷却；
(2)将步骤(1)冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液；
(3)步骤(2)剩余的药物残渣，重复步骤(1)和(2)得到第二次滤液；
(4)合并第一次滤液及第二次滤液，使用干燥箱60-70℃烘烤6-8天，获得中药组合物干膏；
(5)将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，过筛，得到所述中药组合物的干粉。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的用纱布过滤是指依次用3层纱布、6层纱布、10层纱布、17层纱布过滤。
6.按照权利要求4或5所述的方法制备得到的中药组合物干粉。
7.一种临床上适宜的用于治疗胰腺癌的中药制剂，其特征在于，由权利要求6所述的中药组合物干粉加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。
8.如权利要求7所述的中药制剂，其特征在于所述的制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或口服液。
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