CN114469988A - 一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂，属于生物医学技术领域。本发明所提供的瓜蒌皮多糖可以有效的促进小肠上皮细胞屏障功能，并且可以有效的逆转TNF‑a所导致的小肠上皮细胞屏障损伤，通过将瓜蒌皮与水溶性脂肪酸结合制成生物制剂可以实现同时促进肠道吸收和促进肠道健康。

Description

一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂。
背景技术
小肠是人体重要的消化器官，对于促进肠道的健康和吸收，一方面需要增加肠道中绒毛的长度来促进肠道的吸收功能，另一方面，需要增加肠黏膜的屏障功能来保护肠道的健康。肠黏膜屏障包括肠上皮细胞屏障，免疫屏障和微生物屏障，其中肠上皮细胞屏障是最主要的一道屏障，是肠黏膜屏障具有选择性通透的基础。但是随着年龄的增长或是不良的生活习惯，会导致肠道的屏障受损，进而导致肠道的透过性上升。此时，肠道内的细菌或其他有害物质会经由细胞间隙转移至生物体内，导致促炎因子释放，诱发炎症。
因此，有效的促进肠上皮细胞的屏障可以有效的促进肠道的健康。同时，将促进肠道吸收和促进肠道健康的物质相结合可以更好的促进人体健康。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以同时促进肠道吸收和肠道健康的生物制剂。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了瓜蒌皮多糖在制备促进小肠上皮细胞屏障功能的生物制剂中的应用，所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
优选地，所述瓜蒌皮多糖促进小肠上皮细胞中ZO-1蛋白和Claudin-1蛋白的表达。
其次，本发明提供了瓜蒌皮多糖在制备小肠上皮细胞ZO-1蛋白表达促进剂中的应用，所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
其次，本发明提供了瓜蒌皮多糖在制备小肠上皮细胞Claudin-1蛋白表达促进剂中的应用，所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
其次，本发明提供了瓜蒌皮多糖在制备小肠上皮细胞屏障损伤保护剂中的应用，所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括步骤如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
其次，本发明提供了一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂，其特征在于，其特征在于，所述生物制剂的有效成分为水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖，所述水溶性脂肪酸的化学式如下所示：
Figure 373013DEST_PATH_IMAGE001
；
所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
优选地，所述水溶性脂肪酸和所述瓜蒌皮多糖的质量比例为1:10-10:1。
优选地，所述水溶性脂肪酸和所述瓜蒌皮多糖占所述生物制剂总重量的1-90%。
优选地，所述生物制剂用于促进肠道吸收和促进肠道健康。
本发明的有益效果是：
本发明所提供的瓜蒌皮多糖可以有效的促进小肠上皮细胞屏障功能，并且可以有效的逆转TNF-a所导致的小肠上皮细胞屏障损伤，通过将瓜蒌皮与水溶性脂肪酸结合制成生物制剂可以实现同时促进肠道吸收和促进肠道健康。
附图说明
图1 瓜蒌皮多糖对于ZO-1和Claudin-1蛋白表达的促进作用；
图2 瓜蒌皮多糖逆转TNF-a所导致的ZO-1和Claudin-1的蛋白表达下降。
具体实施方式
为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
实施例1
（1）将100g干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）加入2000ml去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至400ml，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入1200ml 95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
实施例2
（1）将瓜蒌皮多糖使用DMEM培养基配置为0mg/ml， 25mg/ml和50mg/ml的瓜蒌皮多糖试剂；
（2）将Caco-2接种于Transwell小室中，制备单层上皮屏障；
（3）对照组加入0mg/ml瓜蒌皮多糖，实验组加入25mg/ml和50mg/ml的瓜蒌皮多糖处理Caco-2细胞24h，每组设置3个重复；
（4）处理结束后，加入RIPA裂解液，充分裂解后，提取总蛋白得到各组的蛋白样品并测定蛋白浓度；
（5）取30ug的蛋白样品进行电泳，电泳结束后进行转膜；
（6）转膜结束后，将膜置于封闭液中，封闭1h；
（7）将膜取出后，孵育ZO-1，Claudin-1和GAPDH一抗，4℃孵育过夜；
（8）一抗孵育结束后，洗膜进行二抗的孵育，室温孵育1.5h；
（9）二抗孵育结束后，进行曝光显影。
实验结果如图1所示，从图中可以看出，添加本发明所制备的瓜蒌糖多糖后可以有效的促进ZO-1和Claudin-1蛋白的表达，说明瓜蒌皮多糖能够促进小肠上皮的屏障功能。
实施例3
（1）将Caco-2接种于Transwell小室中，制备单层上皮屏障；
（2）对照组添加0mg/ml瓜蒌皮多糖+0ng/ml TNF-a处理细胞24h，实验组1添加100ng/ml TNF-a和0mg/ml瓜蒌皮多糖处理细胞24h，实验组2添加100ng/ml TNF-a和50mg/ml瓜蒌皮多糖处理细胞24h，每组设置3个重复；
（3）处理结束后，加入RIPA裂解液，充分裂解后，提取总蛋白得到各组的蛋白样品并测定蛋白浓度；
（4）取30ug的蛋白样品进行电泳，电泳结束后进行转膜；
（5）转膜结束后，将膜置于封闭液中，封闭1h；
（6）将膜取出后，孵育ZO-1，Claudin-1和GAPDH一抗，4℃孵育过夜；
（7）一抗孵育结束后，洗膜进行二抗的孵育，室温孵育1.5h；
（8）二抗孵育结束后，进行曝光显影。
实验结果如图2所示，从图中可以看出，在实验组1中，添加TNF-a后会导致ZO-1和Claudin-1的表达下调，在实验组2中，添加瓜蒌皮多糖实现了ZO-1和Claudin-1下调的逆转，说明瓜蒌皮多糖能够逆转TNF-a所导致的小肠上皮屏障损伤。
实施例4
（1）将5份瓜蒌皮多糖和5份水溶性脂肪酸混合均匀，得到生物制剂的活性成分；
（1）加入90份去离子水，搅拌均匀，得到一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂1。
实施例5
（1）将15份瓜蒌皮多糖和5份水溶性脂肪酸混合均匀，得到生物制剂的活性成分；
（1）加入80份去离子水，搅拌均匀，得到一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂2。
实施例6
（1）将5份瓜蒌皮多糖和15份水溶性脂肪酸混合均匀，得到生物制剂的活性成分；
（1）加入80份去离子水，搅拌均匀，得到一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂3。
本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述，当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.瓜蒌皮多糖在制备促进小肠上皮细胞屏障功能的生物制剂中的应用，其特征在于，所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述瓜蒌皮多糖促进小肠上皮细胞中ZO-1蛋白和Claudin-1蛋白的表达。
3.瓜蒌皮多糖在制备小肠上皮细胞ZO-1蛋白表达促进剂中的应用，其特征在于，所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
4.瓜蒌皮多糖在制备小肠上皮细胞Claudin-1蛋白表达促进剂中的应用，其特征在于，所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
5.瓜蒌皮多糖在制备小肠上皮细胞屏障损伤保护剂中的应用，其特征在于，所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括步骤如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
6.一种含有水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖的生物制剂，其特征在于，其特征在于，所述生物制剂的有效成分为水溶性脂肪酸和瓜蒌皮多糖，所述水溶性脂肪酸的化学式如下所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
；
所述瓜蒌皮多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的瓜蒌皮清洗干净并使用烘干机烘干后，使用粉碎机粉碎为粉末；
（2）按照1:20料液比加入去离子水，混合均匀后，500W超声提取3h，得到瓜蒌皮浸提液；
（3）离心15分钟后，收集上清，65℃蒸发至上清体积的20%，冷却至室温，得到瓜蒌皮多糖提取液；
（4）加入所述瓜蒌皮多糖提取液3倍量体积的95%乙醇,4℃放置24h，离心20min，收集沉淀；
（5）将所述沉淀使用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，得到瓜蒌皮多糖。
7.根据权利要求6所述的生物制剂，其特征在于，所述水溶性脂肪酸和所述瓜蒌皮多糖的质量比例为1:10-10:1。
8.根据权利要求6所述的生物制剂，其特征在于，所述水溶性脂肪酸和所述瓜蒌皮多糖占所述生物制剂总重量的1-90%。
9.根据权利要求6所述的生物制剂，其特征在于，所述生物制剂用于促进肠道吸收和促进肠道健康。
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