CN114456969A - 一种用于减肥降血糖的益生菌制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及食品领域，尤其涉及一种用于减肥降血糖的益生菌制剂及其制备方法和应用。所述益生菌制剂包括以下3株菌株：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)，其中，所述罗伊氏乳杆菌MRD01的保藏编号为GDMCC 62017。益生菌制剂经复配组成，经初步研究结果显示，该降血糖益生菌制剂对高血糖及并发症具有预防和辅助治疗的作用，可以用于降低血糖和缓解便秘，同时有助于减轻体重，具有广阔的市场前景。

Description

一种用于减肥降血糖的益生菌制剂及其制备方法和应用
技术领域
本申请涉及食品领域，尤其涉及一种用于减肥降血糖的益生菌制剂及其制备方法和应用。
背景技术
随着生活节奏变快，传统的减肥方法进行减肥所消耗的时间较长，部分人无法每天保持锻炼，人们就开始选择通过饮用或食用减肥产品进行减肥，但是现有的大多数减肥产品所使用的生产原料质量较差，加工环境恶劣，长期使用后对身体造成伤害。
肥胖的发病原因有多种，遗传、内分泌失调、饮食结构和生活方式等因素都可以诱发肥胖。但是绝大多数肥胖患者属于不良的饮食结构和生活习惯所致的单纯性肥胖。目前，肥胖症的治疗方法主要有饮食行为疗法、药物治疗和手术治疗等。节食和增加运动量等饮食行为疗法减肥效果不好，容易反复，多数肥胖患者倾向于接受药物治疗。通过药物，如常用的阿卡波糖、二甲双胍、胰岛素等进行血糖调节时会存在多种副作用，因此通过对肠道菌群的调节来预防或治疗由高脂饮食所引起的肥胖和高血糖是重点研究的方向。
发明内容
本申请提供了一种减肥降血糖的益生菌制剂及其制备方法和应用，以解决服用药物或减肥产品减肥和降低血糖带来副作用的技术问题。
第一方面，本申请提供了一种用于减肥降血糖的益生菌制剂，所述益生菌制剂包括以下 3株菌株：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)，其中，所述罗伊氏乳杆菌MRD01的保藏编号为 GDMCC 62017。
可选的，所述益生菌制剂中罗伊氏乳杆菌MRD01菌体浓度为109-1010cfu/ml。
可选的，所述3株菌株的菌株总数≥2×109cfu/g。
可选的，所述益生菌制剂为粉剂、片剂和胶囊中任意一种。
可选的，所述益生菌制剂的组分还包括原花青素和芦丁中至少一种。
第二方面，本申请提供了一种所述益生菌制剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：
得到活化的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis) 和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)；
将所述嗜酸乳杆菌、所述双歧杆菌和所述罗伊氏乳杆菌MRD01接种于培养基并厌氧培养，得到混合种子液；
将所述混合种子液进行适应性培养，得到混合菌液；
将所述混合菌液接种至发酵培养基中，得到复合微生物；
将所述复合微生物进行复配，加入剩余组分，得到益生菌制剂。
其中，所述嗜酸乳杆菌、所述双歧杆菌和所述罗伊氏乳杆菌MRD01的接种量比为3-5:2-4:3。
可选的，所述适应性培养的条件包括：
摇床的转速为100～200r/min；温度为20-30℃；时间为3～5天。
可选的，所述得到活化的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)，具体包括：将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)进行斜面活化，后进行平板纯化培养，得到活化的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)。
可选的，所述发酵培养基为不含琼脂的MRS液体培养基。
第二方面，本申请提供了第一方面所述的益生菌制剂的应用，其特征在于，所述应用包括将所述益生菌制剂用于预防及辅助降血糖的药物和食品中。
本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
本申请实施例提供的该方法，本发明的降血糖益生菌制剂，所述益生菌制剂包括以下3 株菌株：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)，经复配组成，经初步研究结果显示，该降血糖益生菌制剂对高血糖及并发症具有预防和辅助治疗的作用，可以用于降低血糖和缓解便秘，同时有助于减轻体重，具有广阔的市场前景。
附图说明
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本发明的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本申请实施例提供的一种所述益生菌制剂的制备方法的流程示意图；
图2为本申请中不同实验组1号剂量组、空白对照组和模型对照组的体重变化结果图；
图3为本申请中不同实验组2号剂量组、空白对照组和模型对照组的体重变化结果图；
图4为本申请中不同实验组3号剂量组、空白对照组和模型对照组的体重变化结果图；
图5为本申请中不同实验组4号剂量组、空白对照组和模型对照组的体重变化结果图；
图6为本申请中不同实验组5号剂量组、空白对照组和模型对照组的体重变化结果图；
图7为本申请中不同实验组1号剂量组、空白对照组和模型对照组的血糖变化结果图；
图8为本申请中不同实验组2号剂量组、空白对照组和模型对照组的血糖变化结果图；
图9为本申请中不同实验组3号剂量组、空白对照组和模型对照组的血糖变化结果图；
图10为本申请中不同实验组4号剂量组、空白对照组和模型对照组的血糖变化结果图；
图11为本申请中不同实验组5号剂量组、空白对照组和模型对照组的血糖变化结果图；
图12本申请实施例提供的罗伊氏乳杆菌MRD01(菌株在MRS培养基上的不同倍数下的菌落形态；
图13为本申请中罗伊氏乳杆菌MRD01依据16SrDNA的系统进化树。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)的保藏编号为：GDMCC 62017；分类命名为：罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)；保藏日期为：2021年11月12日；保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心；保藏单位地址为：中国广州广东省微生物菌种保藏中心。
嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)均为市售菌株。
下面将结合实施例、对比例及实验数据对本发明的方法进行详细说明。
实施例1
一种用于减肥降血糖的益生菌制剂，所述益生菌制剂包括以下3株菌株：嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01 (Lactobacillus reuteri)，其中，所述罗伊氏乳杆菌MRD01的保藏编号为GDMCC62017。
罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)菌株的分离和鉴定
罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)菌株从人体肠道中分离获得，分离后再 MRS培养基(MRS固体培养基以质量分数计包括：葡萄糖2.0％、柠檬酸铵0.2％、乙酸钠0.5％、磷酸氢二钾0.5％、硫酸锰0.02％、硫酸镁0.05％、蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％、土温-800.1％和琼脂粉1.5％，调pH6.2-6.6)中进行厌氧培养，挑取不同形态的菌株进行纯化，并传达培养20-30代后，得到单克隆活化菌株，并进行保藏。
菌株在MRS培养基上的形态特征，如图12：左图是在100倍镜下观察得到，中间的图是在400倍镜下中观察得到，右图是在培养基上观察得到。MRS培养基上接种罗伊氏乳杆菌MRD01，28℃恒温培养10d，观察菌株的基本特征如下：白色小菌落，饱满，边缘规则。
生理生化特性分析结果为：菌株的生理生化特征与常规罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)吻合；同时，分泌的非蛋白质类广谱抗菌物质，能广泛抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母、真菌和病原虫等的生长。
16SrDNA序列分析：采用酶解法，提取罗伊氏乳杆菌MRD01的总DNA，利用细菌16SrDNA通用引物(27F 5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'；1492R 5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3')进行PCR扩增，得到长度为1400～1500bp片段。扩增产物送上海生工股份有限公司测序。罗伊氏乳杆菌MRD01的16S rDNA序列全长1401bp，将所获得序列拼接校对后(如SEQ ID NO：1所示)，采用Blast方法从GenBank数据库中进行序列相似性搜索，调取与相似性较高的6株乳杆菌属相关典型菌株，ClustalX v2.2软件进行同源性分析，Mega 5.0软件中的Neighbor-Joining方法构建系统进化树。本申请要保护的菌株与罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)在同一系统进化分支上，如图13，一致性为 100％，平均相似性为98.3％。
综合，根据16SrDNA序列分析结果及形态、生理生化特征，将菌株鉴定为罗伊氏乳杆菌MRD01。
用于培养罗伊氏乳杆菌MRD01和本申请的益生菌制剂的MRS固体培养基配方为：葡萄糖：2.0％、柠檬酸铵：0.2％、乙酸钠：0.5％、磷酸氢二钾：0.5％、硫酸锰：0.02％、硫酸镁：0.05％、蛋白胨：1.0％、牛肉膏：1.0％、酵母膏：0.5％、土温-80：0.1％和琼脂粉：1.5％，余量为水，调节pH为6.2-6.6。液体培养基为不含琼脂的固体培养基配方。各成分均按质量分数添加。
用于培养嗜酸乳杆菌的液体培养基，每一升可以包含如下组分：蛋白胨12克、牛肉膏12克、酵母粉4克、葡萄糖5克、乙酸钠6克、柠檬酸二胺3克、吐温-80：1mL、磷酸氢二钾3克、硫酸镁0.3克、硫酸锰0.06克、碳酸钙20克、番茄汁20mL，土豆汁30mL，胡萝卜汁60mL，维生素C2克、弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH6.8；
用于培养双歧杆菌的液体培养基，每一升可以包含如下组分：蛋白胨16克、酵母粉3 克、葡萄糖22克、可溶性淀粉0.5克、氯化钠6克、6％半胱氨酸12.0mL、西红柿浸出液400.0mL、吐温801.0mL、肝提取液80.0mL、弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH7.0；
一种益生菌制剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将冰冻保藏的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis) 和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)分别接种于各自的培养基，进行斜面活化，后进行平板纯化培养，斜面活化和纯化培养都在厌氧条件下进行培养，得到活化的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01 (Lactobacillus reuteri)；
将所述嗜酸乳杆菌、所述双歧杆菌和所述罗伊氏乳杆菌MRD01接种于培养基并厌氧培养，得到混合种子液；
将所述混合种子液进行适应性培养，得到混合菌液，所述适应性培养的条件包括：
摇床的转速为100～200r/min；温度为20-30℃；时间为3～5天。
将所述混合菌液接种至发酵培养基中，得到复合微生物；
将所述复合微生物进行复配，加入剩余组分，并加入保护剂和低聚糖混合物，得到益生菌制剂。
其中，所述嗜酸乳杆菌、所述双歧杆菌和所述罗伊氏乳杆菌MRD01的接种量比为3-5:2-4:3。
实施例2
一种用于减肥降血糖的益生菌制剂，所述益生菌制剂包括以下3株菌株：嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01 (Lactobacillus reuteri)，其中，所述罗伊氏乳杆菌MRD01的保藏编号为GDMCC62017。
所述益生菌制剂的组分还包括原花青素，其他同实施例1。
实施例3
一种用于减肥降血糖的益生菌制剂，所述益生菌制剂包括以下3株菌株：嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01 (Lactobacillus reuteri)，其中，所述罗伊氏乳杆菌MRD01的保藏编号为GDMCC62017。
所述益生菌制剂还包括芦丁，其他同实施例1。
对比例1
一种用于减肥降血糖的益生菌制剂，所述益生菌制剂包括以下2株菌株：嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)和双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)，没有使用罗伊氏乳杆菌 MRD01(Lactobacillus reuteri)，所述罗伊氏乳杆菌MRD01的保藏编号为GDMCC 62017。其他同实施例1。
对比例2
一种用于减肥降血糖的益生菌制剂，所述益生菌制剂包括以下1株菌株：使用罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)，双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)，没有使用嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和，其中，所述罗伊氏乳杆菌MRD01的保藏编号为GDMCC 62017。其他同实施例1。
益生菌制剂耐受人工胃液能力测定
本申请益生菌制剂耐受人工胃液能力测定：进行人工胃液的配制，后对人工胃液进行耐受能力测定：益生菌制剂按2％(v/v)接种于模拟胃液中，在37℃条件下培养2h，取样进行平板菌落计数，以0h活菌数为对照，计算菌株存活率。3株菌在经过人工胃液测定后，存活率均在70％以上，耐受能力较强。
动物试验
材料：选用体重范围22±2gC57/6J雄性大鼠(实验动物及饲料均为市售)，每组20只，本申请制得的益生菌制剂，四氧嘧啶购自sigma公司。
实验设空白对照组、模型对照组和五个剂量组，高糖高脂适应性喂养10d后建模成功，得到高糖高脂模型的C57/6J小鼠，对空白对照组继续采用基础饲料饲喂，其余给予高热量饲料(基础饲料80％、猪油10％、蛋黄粉10％)喂养14d，称重淘汰1/3肥胖抵抗大鼠，随机分配为6组，分别为模型对照组和1-3号剂量组，继续采用高热量饲料喂养，1号剂量组给予高热量饲料，同时用实施例1制得的益生菌制剂进行灌胃；2号剂量组给予高热量饲料，同时用实施例2制得的益生菌制剂进行灌胃；3号剂量组给予高热量饲料，同时用实施例3制得的益生菌制剂进行灌胃，4号剂量组给予高热量饲料，同时用对比例1制得的益生菌制剂进行灌胃； 5号剂量组给予高热量饲料，同时用对比例2制得的益生菌制剂进行灌胃；空白对照组和模型对照组继续保持之前饲养条件，并给予等量的生理盐水。
每10天记录摄食量、称量体重，每10d称体重，1-5号剂量组和空白对照组、模型对照组的体重结果如图2-图6，横坐标为实验的时间，纵坐标为体重的变化量，由图2-4的体重变化图可知，1-3号剂量组可判定减肥功能结果阳性，效果最佳；由实验结果可知，1号剂量组最开始的减肥效果最佳，同时生活状态良好；2号剂量组具有减肥效果；3号剂量组最终减肥效果佳，同时生活状态良好；4号剂量组体重比模型对照组稍有下降，仍增重明显，5号剂量组重比模型对照组稍有下降，增重不明显，建模后期有腹泻现象，生活状态不佳；本申请的3 个菌株综合作用，具有降低高糖高脂模型小鼠体重的作用。
降低血糖功能实验
参照《保健食品检验与评价技术规范》进行辅助降血糖功能检验评价，选用体重范围 22±2g C57/6J雄性大鼠(实验动物及饲料均为市售)，每组20只，实验设空白对照组、模型对照组和五个剂量组，高糖高脂适应性喂养10d后建模成功，得到高糖高脂模型的C57/6J小鼠，对空白对照组继续采用基础饲料饲喂，其余给予高热量饲料(基础饲料80％、猪油10％、蛋黄粉10％)喂养10d，继续采用高热量饲料喂养，适应性喂养7d后，禁食24h，给予四氧嘧啶45mg/kg(BW·iv)造模，6d后禁食4h，采用血糖仪进行剪尾取血测定血糖，选定血糖值10-25mmol/L造模成功动物，按照血糖水平分配称重淘汰1/3肥胖抵抗大鼠，随机分配为 5组，分别为模型对照组和1-5号剂量组，继续采用高热量饲料喂养，1号剂量组给予高热量饲料，同时用实施例1制得的益生菌制剂进行灌胃；2号剂量组给予高热量饲料的同时，用实施例2制得的益生菌制剂进行灌胃；3号剂量组给予高热量饲料的同时，用实施例3制得的益生菌制剂进行饲养空白对照组和模型对照组继续保持之前饲养条件；4号剂量组给予高热量饲料，同时用对比例1制得的益生菌制剂进行灌胃；5号剂量组给予高热量饲料，同时用对比例2制得的益生菌制剂进行灌胃；空白对照组和模型对照组继续保持之前饲养条件，并给予等量的生理盐水。禁食4h，测定试验后空腹血糖值，计算实验前后血糖变化量。
血糖变化量＝(实验前血糖值-实验后血糖值)
糖耐量测定方法，禁食4h，不同组给予不同受试样品，15min后给予葡萄糖2.0g/kg，然后测定给葡萄糖后1h的血糖值，血糖的单位为mmol/L，1-5号剂量组和空白对照组、模型对照组的血糖结果如图7-图11，横坐标为实验的时间，纵坐标为血糖的变化量，由图5-7的血糖变化图可知，1-3号剂量组可判定降血糖成功，由实验可知，1号剂量组具有降血糖结果，小鼠生活状态良好；2号剂量组具有降血糖结果，小鼠生活状态良好；3号剂量组具有降血糖结果，小鼠生活状态良好；2号剂量组和3号剂量组降血糖效果最佳；4号剂量组初期降血糖效果差，后期有一些降血糖效果，总体降血糖效果不佳，5号剂量组初期降血糖效果差，后期有一些降血糖效果，总体降血糖效果不佳，1-3号剂量组具有明显的降血糖作用，本申请的3个菌株综合作用，具有降血糖的作用。
需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者任何其他变体意在涵盖非排他性地包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上所述仅是本发明的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所申请的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 安徽医科大学
<120> 一种用于减肥降血糖的益生菌制剂及其制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1401
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
actgattgat ggtgcttgca cctgattgac gatggatcac cagtgagtgg cggacgggtg 60
agtaacacgt aggtaacctg ccccggagcg ggggataaca tttggaaaca gatgctaata 120
ccgcataaca acaaaagcca catggctttt gtttgaaaga tggctttggc tatcactctg 180
ggatggacct gcggtgcatt agctagttgg taaggtaacg gcttaccaag gcgatgatgc 240
atagccgagt tgagagactg atcggccaca atggaactga gacacggtcc atactcctac 300
gggaggcagc agtagggaat cttccacaat gggcgcaagc ctgatggagc aacaccgcgt 360
gagtgaagaa gggtttcggc tcgtaaagct ctgttgttgg agaagaacgt gcgtgagagt 420
aactgttcac gcagtgacgg tatccaacca gaaagtcacg gctaactacg tgccagcagc 480
cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttatc cggatttatt gggcgtaaag cgagcgcagg 540
cggttgctta ggtctgatgt gaaagccttc ggcttaaccg aagaagtgca tcggaaaccg 600
ggcgacttga gtgcagaaga ggacagtgga actccatgtg tagcggtgga atgcgtagat 660
atatggaaga acaccagtgg cgaaggcggc tgtctggtct gcaactgacg ctgaggctcg 720
aaagcatggg tagcgaacag gattagatac cctggtagtc catgccgtaa acgatgagtg 780
ctaggtgttg gagggtttcc gcccttcagt gccggagcta acgcattaag cactccgcct 840
ggggagtacg accgcaaggt tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg 900
gagcatgtgg tttaattcga agctacgcga agaaccttac caggtcttga catcttgcgc 960
taaccttaga gataaggcgt tcccttcggg gacgcaatga caggtggtgc atggtcgtcg 1020
tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttgttactag 1080
ttgccagcat taagttgggc actctagtga gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg 1140
ggacgacgtc agatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggacg 1200
gtacaacgag tcgcaagctc gcgagagtaa gctaatctct taaagccgtt ctcagttcgg 1260
actgtaggct gcaactcgcc tacacgaagt cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg 1320
ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtttgta 1380
acgcccaaag tcggtggcct a 1401

Claims (10)

1.一种用于减肥降血糖的益生菌制剂，其特征在于，所述益生菌制剂包括以下3株菌株：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)，其中，所述罗伊氏乳杆菌MRD01的保藏编号为GDMCC 62017。
2.根据权利要求1所述的益生菌制剂，其特征在于，所述益生菌制剂中罗伊氏乳杆菌MRD01菌体浓度为109-1010cfu/ml。
3.根据权利要求1所述的益生菌制剂，其特征在于，所述3株菌株的菌株总数≥2×109cfu/g。
4.根据权利要求1所述的益生菌制剂，其特征在于，所述益生菌制剂为粉剂、片剂和胶囊中任意一种。
5.根据权利要求1所述的益生菌制剂，其特征在于，所述益生菌制剂的组分还包括原花青素和芦丁中至少一种。
6.一种如权利要求1-5中任意一种的所述益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
得到活化的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)；
将所述嗜酸乳杆菌、所述双歧杆菌和所述罗伊氏乳杆菌MRD01接种于培养基并厌氧培养，得到混合种子液；
将所述混合种子液进行适应性培养，得到混合菌液；
将所述混合菌液接种至发酵培养基中，得到复合微生物；
将所述复合微生物进行复配，加入剩余组分，得到益生菌制剂；
其中，所述嗜酸乳杆菌、所述双歧杆菌和所述罗伊氏乳杆菌MRD01的接种量比为3-5:2-4:3。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述适应性培养的条件包括：
摇床的转速为100～200r/min；温度为20-30℃；时间为3～5天。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述得到活化的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)，具体包括：将冷冻保藏的嗜酸乳杆(Lactobacillusacidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)进行斜面活化，后进行平板纯化培养，得到活化的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)和罗伊氏乳杆菌MRD01(Lactobacillus reuteri)。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基为不含琼脂的MRS液体培养基。
10.一种如权利要求1-5中任一项所述的益生菌制剂的应用，其特征在于，所述应用包括将所述益生菌制剂用于预防及辅助降血糖的药物和食品中。
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