CN114456914A - 一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统 - Google Patents

一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统，该检测系统利用微流控芯片进行检测，所述微流控芯片包括芯片本体，所述芯片本体设有加样孔、主流道、微流道、反应孔；所述反应孔包括阳性质控孔、阳性对照孔和至少一个检测孔；所述加样孔与所述主流道连通；每个反应孔分别通过所述微流道与所述主流道连通；每个所述检测孔中，含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组。通过该微流控监测系统，可以在等温条件下对十余种非结核分枝杆菌菌种同时进行特异性检测，具有特异性好、灵敏度高、操作简单、检测迅速等优点，具有良好的临床应用前景。

Description

一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统
技术领域
本发明涉及微生物检测技术领域，具体涉及一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统。
背景技术
非结核分枝杆菌(Non-tuberculous mycobacteria，NTM)是指除结核分枝杆菌复合群、麻风分枝杆菌外的分枝杆菌，广泛存在于自然的各种环境中，是人类条件致病菌种，已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题之一。非结核分枝杆菌易引起肺部及皮肤感染，引发肺部疾病最为常见。自20世纪90年代中期以来，特别是随着艾滋病的流行、器官移植以及免疫抑制剂应用的增多，非结核分枝杆菌的感染患病率不断上升。NTM病与结核病在临床表现和影像学表现上都非常相似，临床医生易将非结核分枝杆菌疾病误诊为结核分枝杆菌病或者真菌感染如“孢子丝菌病模式”，从而采取不当的治疗手段，对患者病情造成不良影响，因此，对感染菌株进行鉴定对于非结核分枝杆菌感染性疾病的诊疗至关重要。
微流控芯片技术(Microfluidic chip)又称芯片实验室(Lab-on-a-chip)，其最大特点是在一个芯片上可以形成多功能集成体系和数目众多的复合体系的微全分析系统。它的目标是把整个化验室的功能，包括采样、稀释、加试剂、反应、分离、检测等集成在微芯片上。具有检测通量高、样品量和实际消耗量小、污染小、成本低、且便携等诸多优点。
目前，NTM病主要依靠实验室病原学检测进行诊断，对硝基苯甲酸选择性培养基法和MPB64抗原检测法仅可初步鉴别MTBC与NTM；质谱技术可鉴别至菌种水平，但不可直接用于临床标本，只可用于培养阳性菌株，不利于临床及时诊断。因此，本领域亟需发展一种新的非结核分枝杆菌菌种鉴定方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统，通过该微流控监测系统，可以在等温条件下对十余种非结核分枝杆菌菌种同时进行特异性检测，具有特异性好、灵敏度高、操作简单、检测迅速等优点，具有良好的临床应用前景。
为此，第一方面，本发明提供一种微流控芯片，其包括芯片本体，所述芯片本体设有加样孔、主流道、微流道、反应孔；
所述反应孔包括阳性质控孔、阳性对照孔和至少一个检测孔；
所述加样孔与所述主流道连通；每个反应孔分别通过所述微流道与所述主流道连通；每个所述检测孔中，含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组。
进一步，所述反应孔与所述主流道之间还设有缓冲孔。
通过设置缓冲孔，从而使进样过程中先充满缓冲孔，再进入检测孔或阳性质控孔、阳性对照孔，可实现待测样本在不同反应孔均匀分配，同时各反应孔独立设置，可杜绝不同反应孔之间的交叉污染。
进一步，所述阳性质控孔和阳性对照孔相对于所述检测孔设置于所述加样孔的远端。
进一步，所述反应孔还包括阴性对照孔。
在一些实施方式中，所述芯片本体的水平截面为圆形，所述检测孔、阳性质控孔、阳性对照孔以芯片本体的圆心为基点阵列排布设置于所述芯片本体。
进一步，所述非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、龟分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、猿分枝杆菌、海分枝杆菌、土地分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌。
进一步，所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物组包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF、反向环引物LB。
进一步，所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物组包括：
胞内分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：1；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：2；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：3；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：4；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：5；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：6；
鸟分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：7；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：8；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：9；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：10；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：11；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：12；
龟分枝杆菌检测用引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：13；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：14；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：15；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：16；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：17；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：18；
苏尔加分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：19；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：20；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：21；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：22；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：23；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：24；
猿分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：25；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：26；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：27；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：28；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：29；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：30；
海分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：31；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：32；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：33；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：34；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：35；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：36；
土地分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：37；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：38；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：39；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：40；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：41；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：42；
戈登分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：43；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：44；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：45；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：46；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：47；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：48；
堪萨斯分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：49；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：50；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：51；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：52；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：53；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：54；
偶发分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：55；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：56；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：57；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：58；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：59；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：60。
进一步，每个检测孔含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组，其中，正向内引物FIP和反向内引物BIP的浓度为80μM，正向外引物F3和反向外引物B3的浓度为10μM，正向环引物LF和反向环引物LB的浓度为40μM。
本发明的第二方面，提供一种非结核分枝杆菌的特异性检测方法，包括采用本发明所述的微流控芯片进行检测。
进一步，所述检测方法包括：提供所述微流控芯片；通过所述加样孔加入待测样本溶液，使待测样本溶液分布于所述反应孔，进行等温扩增检测。
进一步，所述待测样本溶液包含待测模板DNA。
进一步，所述待测样本溶液包括：Tris，KCL，MgSO4，NaH2PO4，Tween，dNTPs，甜菜碱，Bst酶，SYTO-9绿色荧光核酸染色剂，待测模板DNA，灭菌水。
进一步，所述待测样本溶液中，Tris的浓度为15-25mM，KCL的浓度为7-15mM，MgSO4的浓度为5-10mM，NaH2PO4的浓度为5-15mM，Tween的浓度为0.4-1mM，dNTPs的浓度为1-2mM，甜菜碱的浓度为0.5-1.5M。
进一步，所述等温扩增的反应条件包括：于60-65℃反应40-50min。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明提供的微流控芯片，能够实现高通量检测，可同时对十余种非结核分枝杆菌进行特异性检测。该检测体系中，每个检测孔所需样本溶液仅2.5μL，因此只需要微量样本即可完成检测。
(2)本发明提供了非结核分枝杆菌的特异性检测引物组，可实现对胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、龟分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、猿分枝杆菌、海分枝杆菌、土地分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌的特异性检测。
(3)本发明提供了利用所述微流控芯片进行非结核分枝杆菌菌种检测的方法，该方法只需在恒温条件下借助特殊的酶即可实现恒温检测；并且在45min内实现可实现将对所有靶标的检测，特异性好、灵敏度高、操作简单、检测迅速等优点，具有良好的临床应用前景。
附图说明
通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。而且在整个附图中，用相同的参考符号表示相同的部件。在附图中：
图1为本发明提供的微流控芯片结构示意图；
其中，1-进样孔；2-主流道；3-检测孔；4-阳性质控孔；5-阳性对照孔；6-微流道；7-缓冲孔；
图2为胞内分枝杆菌特异性检测结果；
图3为鸟分枝杆菌特异性检测结果；
图4为龟分枝杆菌特异性检测结果；
图5为苏尔加分枝杆菌特异性检测结果；
图6为猿分枝杆菌特异性检测结果；
图7为海分枝杆菌特异性检测结果；
图8为土地分枝杆菌特异性检测结果；
图9为戈登分枝杆菌特异性检测结果；
图10为堪萨斯分枝杆菌特异性检测结果；
图11为偶发分枝杆菌特异性检测结果。
具体实施方式
下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施方式。虽然附图中显示了本公开的示例性实施方式，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。
实施例1
本实施例提供分别可特异性检测胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、龟分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、猿分枝杆菌、海分枝杆菌、土地分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌的引物组，委托测序公司进行引物合成，各引物组的序列分别为：
(1)胞内分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：GGATGCGGGTCAAGTACG(SEQ ID NO：1)；
反向外引物B3：CGTTATGCAGCGTGTTGAAG(SEQ ID NO：2)；
正向内引物FIP：
GTTTGAAGGCCACCTTGCGGTCTCCACCGAAGAATTCACCA(SEQ ID NO：3)；
反向内引物BIP：
GCAGCTATCGCGACGTCGACCTCCTCCTGGATACCTTCCT(SEQ ID NO：4)；
正向环引物LF：GCAGCGAGTTGATGAAGTCGT(SEQ ID NO：5)；
反向环引物LB：GTGCTGCTCGTCGATGACA(SEQ ID NO：6)；
(2)鸟分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：ACTGGGATCGGTGCGC(SEQ ID NO：7)；
反向外引物B3：AGGACCGGAAGTCGCG(SEQ ID NO：8)；
正向内引物FIP：
CTGTCGTCGTCGGACGCTGGGGGTGTCGTTCGGCTTC(SEQ ID NO：9)；
反向内引物BIP：
CTGCCCACCGATTACGTCTACCTGCCGGACGTACACCTAG(SEQ ID NO：10)；
正向环引物LF：TGATGCCCGTGCGGTTG(SEQ ID NO：11)；
反向环引物LB：CTGATGCCCGTGCGGTT(SEQ ID NO：12)；
(3)所述龟分枝杆菌检测用引物组包括：
正向外引物F3：GGAGGAGTTCTTCCACACCT(SEQ ID NO：13)；
反向外引物B3：TCTTGCGCAGAATCGCG(SEQ ID NO：14)；
正向内引物FIP
GTGGCCAGCTGTTTCGGCGTGCACAACGCCAACAAGC(SEQ ID NO：15)；
反向内引物BIP：
GGCTCCGCACACGGTTCGAGGGTCTCCAGTTCGGGT(SEQ ID NO：16)；
正向环引物LF：GTCCGAGGAGATCACGATCT(SEQ ID NO：17)；
反向环引物LB：GTGGGGACTGATCACCGA(SEQ ID NO：18)；
(4)苏尔加分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：TTGCTCTGCTGTCGGTTC(SEQ ID NO：19)；
反向外引物B3：GCGTCCTTATCCGATCCG(SEQ ID NO：20)；
正向内引物FIP：
GGTGGAGCGATGCGTACCGCACTCCGATCACCGATG(SEQ ID NO：21)；
反向内引物BIP：
ACGACGACAACGCACTCCGTCGGTTGTCGTGAAGGT(SEQ ID NO：22)；
正向环引物LF：CCGAGCTGGATCTCATGG(SEQ ID NO：23)；
反向环引物LB：CCCAAGACAGCACCTTCG(SEQ ID NO：24)；
(5)猿分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：CGCGAACCCGGTTCCA(SEQ ID NO：25)；
反向外引物B3：TCCACATCCATTTGTTGCCA(SEQ ID NO：26)；
正向内引物FIP：
AATCGGCCGTGCGCGACGCCAAGGCCGAAAACC(SEQ ID NO：27)；
反向内引物BIP：
AACGGTCGTTGTCCGGCCGGCCTTGTAATGCTCGAAGT(SEQ ID NO：28)；
正向环引物LF：GCTCATCACAACGGCGGAGA(SEQ ID NO：29)；
反向环引物LB：CTCATCACAACGGCGGAGATC(SEQ ID NO：30)；
(6)海分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：GTCACCGCGTTTGCCTC(SEQ ID NO：31)；
反向外引物B3：CACAGGTACATCGCGATCTG(SEQ ID NO：32)；
正向内引物FIP：
GGCGATCAGGTCACGCAGCACGTTGAACAAGACCCCCATCG(SEQ ID NO：33)；
反向内引物BIP：
GGCTGCCACCGCCGAATACTTCTCGCGACTGAGCCAGC(SEQ ID NO：34)；
正向环引物LF：ACACCACGGTCGAAGAGC(SEQ ID NO：35)；
反向环引物LB：GACACCACGGTCGAAGAGC(SEQ ID NO：36)；
(7)土地分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：TACGGCCCAGACTCCTAC(SEQ ID NO：37)；
反向外引物B3：CTGCTGGCACGTAGTTGG(SEQ ID NO：38)；
正向内引物FIP：
CAACCCGAAGGCCGTCATCCCAGCAGTGGGGAATATTGCA(SEQ ID NO：39)；
反向内引物BIP：
TTCAGTATCGGCGAAGCTCCGCCGGTGCTTCTTCTGTACC(SEQ ID NO：40)；
正向环引物LF：CAGGCTTGCGCCCATTG(SEQ ID NO：41)；
反向环引物LB：GTTTTCTGCGGGGTGACGGTA(SEQ ID NO：42)；
(8)戈登分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：TTTCACTGCCCAAGATCGG(SEQ ID NO：43)；
反向外引物B3：TCACAGCGGTACCCACAG(SEQ ID NO：44)；
正向内引物FIP：
GAAGATCTCGCGGCGTTCGGGATCACACCACGGTGATGT(SEQ ID NO：45)；
反向内引物BIP：
GCGCTCCAAGCGCTGAAAATCGCTCATGTGACTCAAGGGAG(SEQ ID NO：46)；
正向环引物LF：CATCTCGTTGCGGATCTTGC(SEQ ID NO：47)；
反向环引物LB：ACGTCCCGTCGGATATTTTTCC(SEQ ID NO：48)；
(9)堪萨斯分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：GCACACGATTGTGGTGCG(SEQ ID NO：49)；
反向外引物B3：CGCTGGCCAACGATGAG(SEQ ID NO：50)；
正向内引物FIP：
AGTCGAGCCCGAGCCAGCTGAACTCGTTGGGCAATCAGG(SEQ ID NO：51)；
反向内引物BIP：
TTCGGCCAGTGGCTCCTATGAGGGGAGGATTGTCCGAACG(SEQ ID NO：52)；
正向环引物LF：TCGGCTGCGCGCTTCTTT(SEQ ID NO：53)；
反向环引物LB：TCTTTCGACGGCGACGATC(SEQ ID NO：54)；
(10)偶发分枝杆菌特异性检测引物组包括：
正向外引物F3：TGATCCGGGTGACGGC(SEQ ID NO：55)；
反向外引物B3：GCTCGCGACACAGGTACA(SEQ ID NO：56)；
正向内引物FIP：
TGGTGGCATCGGCGATCAGATCGACCCGGATCGACAAGGC(SEQ ID NO：57)；
反向内引物BIP：
GCGGAGTACTTCGAGACCACGGCGATCTGGCGGGACT(SEQ ID NO：58)；
正向环引物LF：TCCGCGAGCTCGAGGGTGC(SEQ ID NO：59)；
反向环引物LB：GGCCGAAGTCGTTTTGCG(SEQ ID NO：60)。
实施例2
参照图1，本实施例提供一种微流控芯片。
所述微流控芯片包括芯片本体，所述芯片本体设有加样孔1、主流道2、微流道6和反应孔；所述反应孔包括阳性质控孔4、阳性对照孔5和至少一个检测孔3；加样孔1与主流道2连通；每个反应孔分别通过微流道6与主流道2连通；每个所述检测孔3中，含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组。
作为优选的方案，反应孔与主流道2之间还设有缓冲孔7。通过设置缓冲孔，从而使进样过程中待测样本溶液先充满缓冲孔7，再进入检测孔3或阳性质控孔4、阳性对照孔5，可实现待测样本溶液在不同反应孔均匀分配，同时各反应孔独立设置，可杜绝不同反应孔之间的交叉污染。
作为优选的方案，阳性质控孔4和阳性对照孔5相对于检测孔3设置于加样孔1的远端。反应孔还可包括阴性对照孔。
在本实施例中，芯片本体的水平截面为圆形，所述检测孔3、阳性质控孔4、阳性对照孔5以芯片本体的圆心为基点阵列排布设置于所述芯片本体。
向检测孔3中加入相应的非结核分枝杆菌的特异性检测引物组，具体地，将实施例1制备得到的引物组分别加入相应检测孔中，使每个检测孔含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组，其中，正向内引物FIP和反向内引物BIP的浓度为80μM，正向外引物F3和反向外引物B3的浓度为10μM，正向环引物LF和反向环引物LB的浓度为40μM。同时，向阳性质控孔加入阳性质控品(人内源基因B2M引物)，向阳性对照孔加入阳性对照品(沙门氏菌引物和核酸模板)。对于每个检测孔，具体制备方法如下：
取相应的非结核分枝杆菌的特异性检测引物组(包括：取20μL正向内引物FIP和反向内引物BIP，5μL正向外引物F3和反向外引物B3，10μL正向环引物LF和反向环引物LB，混合均匀)，取0.1μL混合均匀后的特异性检测引物组，与0.9μL 0.1％琼脂糖混合，点在对应检测孔中，自然晾干。
实施例3
本实施例提供一种利用本发明提供的微流控芯片进行非结核分枝杆菌菌种特异性检测的方法，包括：
(1)使用基因组提取试剂盒分别提取胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、龟分支杆菌、苏尔加分枝杆菌、猿分枝杆菌、海分枝杆菌、土地分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌的基因组DNA，作为待测模板DNA。
(2)配制待测反应溶液，包括：1μL Tris(20mM)，1μL KCL(10mM)，1μL MgSO4(5mM)，1μL NaH2PO4(10mM)，1μL Tween(0.5mM)，3.5μL dNTPs(1.5mM)，4μL甜菜碱(1M)，1μL Bst酶，0.5μL SYTO-9，2μL待测模板DNA，8μL灭菌水。
(3)将步骤(2)制备得到的待测反应溶液加入至微流控芯片上的点样孔1，使待测样本溶液分布于各反应孔，将微流控芯片置于ABI-7500检测设备，在温度为65℃的条件下反应45min进行等温扩增。
检测结果见图2-10所示，图2-10依次分别是胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、龟分支杆菌、苏尔加分枝杆菌、猿分枝杆菌、海分枝杆菌、土地分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌的特异性检测结果。根据图2-10，本发明提供的微流控芯片和检测方法可同时对上述非结核分枝杆菌菌种进行检测。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
序列表
<110> 广州迪澳生物科技有限公司
<120> 一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统
<141> 2022-03-02
<160> 60
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggatgcgggt caagtacg 18
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cgttatgcag cgtgttgaag 20
<210> 3
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gtttgaaggc caccttgcgg tctccaccga agaattcacc a 41
<210> 4
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gcagctatcg cgacgtcgac ctcctcctgg ataccttcct 40
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gcagcgagtt gatgaagtcg t 21
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gtgctgctcg tcgatgaca 19
<210> 7
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
actgggatcg gtgcgc 16
<210> 8
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
aggaccggaa gtcgcg 16
<210> 9
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ctgtcgtcgt cggacgctgg gggtgtcgtt cggcttc 37
<210> 10
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
ctgcccaccg attacgtcta cctgccggac gtacacctag 40
<210> 11
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
tgatgcccgt gcggttg 17
<210> 12
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ctgatgcccg tgcggtt 17
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
ggaggagttc ttccacacct 20
<210> 14
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
tcttgcgcag aatcgcg 17
<210> 15
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
gtggccagct gtttcggcgt gcacaacgcc aacaagc 37
<210> 16
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
ggctccgcac acggttcgag ggtctccagt tcgggt 36
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
gtccgaggag atcacgatct 20
<210> 18
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
gtggggactg atcaccga 18
<210> 19
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
ttgctctgct gtcggttc 18
<210> 20
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
gcgtccttat ccgatccg 18
<210> 21
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
ggtggagcga tgcgtaccgc actccgatca ccgatg 36
<210> 22
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
acgacgacaa cgcactccgt cggttgtcgt gaaggt 36
<210> 23
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
ccgagctgga tctcatgg 18
<210> 24
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
cccaagacag caccttcg 18
<210> 25
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
cgcgaacccg gttcca 16
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
tccacatcca tttgttgcca 20
<210> 27
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
aatcggccgt gcgcgacgcc aaggccgaaa acc 33
<210> 28
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
aacggtcgtt gtccggccgg ccttgtaatg ctcgaagt 38
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
gctcatcaca acggcggaga 20
<210> 30
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
ctcatcacaa cggcggagat c 21
<210> 31
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
gtcaccgcgt ttgcctc 17
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
cacaggtaca tcgcgatctg 20
<210> 33
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
ggcgatcagg tcacgcagca cgttgaacaa gacccccatc g 41
<210> 34
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
ggctgccacc gccgaatact tctcgcgact gagccagc 38
<210> 35
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
acaccacggt cgaagagc 18
<210> 36
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
gacaccacgg tcgaagagc 19
<210> 37
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
tacggcccag actcctac 18
<210> 38
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
ctgctggcac gtagttgg 18
<210> 39
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
caacccgaag gccgtcatcc cagcagtggg gaatattgca 40
<210> 40
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
ttcagtatcg gcgaagctcc gccggtgctt cttctgtacc 40
<210> 41
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
caggcttgcg cccattg 17
<210> 42
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
gttttctgcg gggtgacggt a 21
<210> 43
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
tttcactgcc caagatcgg 19
<210> 44
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
tcacagcggt acccacag 18
<210> 45
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
gaagatctcg cggcgttcgg gatcacacca cggtgatgt 39
<210> 46
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
gcgctccaag cgctgaaaat cgctcatgtg actcaaggga g 41
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
catctcgttg cggatcttgc 20
<210> 48
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
acgtcccgtc ggatattttt cc 22
<210> 49
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
gcacacgatt gtggtgcg 18
<210> 50
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
cgctggccaa cgatgag 17
<210> 51
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
agtcgagccc gagccagctg aactcgttgg gcaatcagg 39
<210> 52
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
ttcggccagt ggctcctatg aggggaggat tgtccgaacg 40
<210> 53
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
tcggctgcgc gcttcttt 18
<210> 54
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
tctttcgacg gcgacgatc 19
<210> 55
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
tgatccgggt gacggc 16
<210> 56
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
gctcgcgaca caggtaca 18
<210> 57
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
tggtggcatc ggcgatcaga tcgacccgga tcgacaaggc 40
<210> 58
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
gcggagtact tcgagaccac ggcgatctgg cgggact 37
<210> 59
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
tccgcgagct cgagggtgc 19
<210> 60
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
ggccgaagtc gttttgcg 18

Claims (10)

1.一种微流控芯片，其特征在于，包括芯片本体，所述芯片本体设有加样孔、主流道、微流道、反应孔；
所述反应孔包括阳性质控孔、阳性对照孔和至少一个检测孔；
所述加样孔与所述主流道连通；每个反应孔分别通过所述微流道与所述主流道连通；每个所述检测孔中，含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组。
2.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述反应孔与所述主流道之间还设有缓冲孔。
3.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述阳性质控孔和阳性对照孔相对于所述检测孔设置于所述加样孔的远端。
4.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，进一步，所述非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、龟分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、猿分枝杆菌、海分枝杆菌、土地分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌；
优选地，所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物组包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF、反向环引物LB。
5.如权利要求4所述的微流控芯片，其特征在于，所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物组包括：
胞内分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：1；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：2；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：3；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：4；
正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：5；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：6；
鸟分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：7；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：8；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：9；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：10；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：11；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：12；
龟分枝杆菌检测用引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：13；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：14；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：15；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：16；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：17；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：18；
苏尔加分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：19；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：20；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：21；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：22；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：23；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：24；
猿分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：25；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：26；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：27；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：28；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：29；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：30；
海分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：31；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：32；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：33；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：34；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：35；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：36；
土地分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：37；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：38；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：39；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：40；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：41；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：42；
戈登分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：43；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：44；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：45；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：46；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：47；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：48；
堪萨斯分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：49；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：50；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：51；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：52；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：53；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：54；
偶发分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：55；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：56；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：57；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：58；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：59；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：60。
6.如权利要求4或5所述的微流控芯片，其特征在于，每个检测孔含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组，其中，正向内引物FIP和反向内引物BIP的浓度为80μM，正向外引物F3和反向外引物B3的浓度为10μM，正向环引物LF和反向环引物LB的浓度为40μM。
7.一种非结核分枝杆菌的特异性检测方法，其特征在于，包括采用权利要求1-6任一项所述的微流控芯片进行检测。
8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，包括：提供所述微流控芯片；通过所述加样孔加入待测样本溶液，使待测样本溶液分布于所述反应孔，进行等温扩增检测。
9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述待测样本溶液包含待测模板DNA；
优选地，所述待测样本溶液包括：Tris，KCL，MgSO4，NaH2PO4，Tween，dNTPs，甜菜碱，Bst酶，SYTO-9绿色荧光核酸染色剂，待测模板DNA，灭菌水；
优选地，所述待测样本溶液中，Tris的浓度为15-25mM，KCL的浓度为7-15mM，MgSO4的浓度为5-10mM，NaH2PO4的浓度为5-15mM，Tween的浓度为0.4-1mM，dNTPs的浓度为1-2mM，甜菜碱的浓度为0.5-1.5M。
10.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述等温扩增的反应条件包括：于60-65℃反应40-50min。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115646563A (zh) * 2022-10-14 2023-01-31 广州迪澳医疗科技有限公司 一种微流控芯片及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090142757A1 (en) * 2007-11-30 2009-06-04 Asiagen Corporation Strip and method for detecting nucleotide amplification products of mycobacterium tuberculosis and non-tuberculous mycobacterium
CN112626273A (zh) * 2020-12-28 2021-04-09 无锡科智达科技有限公司 猪繁殖障碍病原体多联检测引物组合及含有该引物组的检测装置

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090142757A1 (en) * 2007-11-30 2009-06-04 Asiagen Corporation Strip and method for detecting nucleotide amplification products of mycobacterium tuberculosis and non-tuberculous mycobacterium
CN112626273A (zh) * 2020-12-28 2021-04-09 无锡科智达科技有限公司 猪繁殖障碍病原体多联检测引物组合及含有该引物组的检测装置

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHIH-HUNG WANG ET AL.: "Rapid molecular diagnosis of live Mycobacterium tuberculosis on an integrated microfluidic system", 《SENSORS AND ACTUATORS: B. CHEMICAL》, vol. 365, pages 1 - 9 *
陈闯等: "中国16省报告非结核分枝杆菌在抗酸染色阳性菌中的分离情况", 《预防医学情报杂志》, vol. 33, no. 8, pages 765 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115646563A (zh) * 2022-10-14 2023-01-31 广州迪澳医疗科技有限公司 一种微流控芯片及其制备方法

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