CN114437973B

CN114437973B - 一株碳酸盐矿化菌及其应用

Info

Publication number: CN114437973B
Application number: CN202210101356.9A
Authority: CN
Inventors: 谢婧婧; 宋天顺; 李湘
Original assignee: Nanjing Tech University
Current assignee: Nanjing Tech University
Priority date: 2022-01-27
Filing date: 2022-01-27
Publication date: 2023-04-28
Anticipated expiration: 2042-01-27
Also published as: CN114437973A

Abstract

本发明公开了一株碳酸盐矿化菌及其应用，其分类命名为表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis），菌株号X‑NM1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 20211021，保藏日期为2021年8月13日。本发明所筛选的菌株具有良好的碳酸钙沉积性能，能用于重金属去除和砂土固化，利用对铜、铅、锌和镉等重金属进行去除，其中对Pb²⁺去除率达99.55%。本发明的碳酸盐矿化菌进一步可作为生物粘结剂，用于砂土固化，降低砂土材料的孔隙率，增强材料的抗剪强度、抗压强度等工程性能。

Description

一株碳酸盐矿化菌及其应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株碳酸盐矿化菌及其应用。

背景技术

微生物诱导碳酸钙沉淀(MICP)是近年来发展起来的新型岩土工程加固技术，尤其是尿素水解MICP技术，机理简单，快速高效，容易控制，成本低廉，环境耐受性好，并且微生物诱导生成的碳酸钙往往具有特殊的微观结构，从而表现出较高的强度、粘结性等特征，具有很多传统方法无法比拟的优势，从而得到广泛关注和研究。尽管国外在MICP技术方面开展了一系列探索研究，但目前还处于实验室或小规模应用研究阶段。目前MICP技术使用的菌种大多是自然界分离筛选出的细菌，为了分离到环境适应性、脲酶活性、碳酸钙沉淀能力等方面较为理想的尿素分解菌，全世界很多研究者进行了菌种分离筛选工作，得到的菌株在MICP技术应用中表现各不相同。目前，国内所使用的菌种基本上从国外引进，在实际工程应用中还存在外来物种入侵的风险。

土壤重金属污染在世界范围内广泛存在且日趋严重，根据《全国土壤污染状况调查公报》，我国土壤总污染物超标率为16.1％，耕地占其中19.4％，主要污染物以无机型为主，铜、铅、锌、镉点位超标率分别为2.1％、1.5％、0.9％、7.0％，环境质量堪忧，由于重金属不易被降解，易富集在活的生物机体中，重金属超标将严重危害着包括人类在内的各种生命体的健康与生存。因此，土壤中的重金属污染已经成为环境保护领域中的一个突出问题。利用传统的物理化学方法处理重金属污染通常存在高能耗、治理规模小且易造成二次污染等缺点，而植物修复技术受环境影响大、生长周期过长和活化重金属能力有限等方面的制约。这些治理技术的固有缺点使得人们不断追求一种安全性更高、费用更低、对土壤环境犹动更小的修复技术。而微生物修复技术，因具有良好的社会、生态综合效益，正逐渐成为目前重金属污染土壤修复的研究重点。

同样在当前全球气候变暖的大背景下，各国积极采取了一系列措施以减少CO₂等温室气体的排放。MICP作为一种新型环保的岩土体处理技术可以在利用生物诱导生成的碳酸盐达到土体加固目的的同时，实现生物固碳。利用MICP技术进行土体固化改良，其原理是通过微生物催化水解尿素得到的碳酸根离子与土体中的钙离子结合生成的碳酸钙沉淀，将土颗粒包裹、黏结或填充孔隙，在固化土体的同时还可降低地层的渗透性。由于利用MICP技术生成的碳酸钙具有一定的粘结性，其可用于重金属的固化，还可以将其用于混凝土裂缝的修复与加固、石灰质石材的修复和历史建筑的修复、生物降解、生物沉积、扬尘控制、控制土壤、土壤加固、实现地基加固、边坡加固维护、砂堤建立、沙漠固化等侵蚀和冲刷、减少堤坝和防渗墙渗水等。因此筛选出具有本国特色的，可高效诱导碳酸钙沉淀的碳酸盐矿化菌，对重金属污染环境治理和砂土固化具有重要意义。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种具有诱导碳酸钙沉淀的碳酸盐矿化菌，其可用于环境中重金属离子去除及砂土固化。

具体地，本发明筛选出了一株高效碳酸盐矿化菌，其分类命名为表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)，菌株号X-NM1，已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为中国.武汉.武汉大学，邮编为430072，保藏编号为CCTCC NO：M 20211021，保藏日期为2021年8月13日。

本发明的高效碳酸盐矿化菌具有下述性质：

1、菌落形态学特征：

在蛋白胨琼脂培养基上37℃培养3天后显微镜观察到营养细胞为单细胞，球状。在上述培养基中37℃培养12h菌体可以大量生长。菌落呈圆点状、白色不透明、四周光滑、有隆起、表面湿润无褶皱。

2、生理生化特性：

(1)培养温度：20～40℃；

(2)在pH4～10范围内生长；

(3)在盐度1％～17％范围内生长；

(4)革兰氏染色：阳性，如图2所示；

(5)过氧化氢酶：阳性；

(6)V-P反应：阳性；

(7)运动性能：阳性；

(8)柠檬酸盐利用：阴性；

(9)M-R反应：阳性；

(10)葡萄糖反应：阳性；

(11)硝酸盐还原反应：阳性。

3、遗传学特征：

测得16S rDNA大部分序列，如SEQ ID No：1所示。将所测序列用NCBI网站的BLAST进行碱基序列的比对，构建16S rDNA全序列为基础的系统进化树。结果表明：菌株与表皮葡萄球菌达到98％同源。所以认定本发明使用的是表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)，具体为表皮葡萄球菌Staphylococcus epidermidis X-NM1。

本发明的碳酸盐矿化菌具有较好的诱导碳酸盐沉积为碳酸钙的能力，在相同条件下与国外通用菌株S.pasteurii(ATCC11859)及Bacillus subtilis(ATCC6051-U)相比能更好的诱导碳酸钙沉积，同时诱导生成的沉积物晶体类型为方解石。

本发明还提出了上述碳酸盐矿化菌在去除环境中重金属上的应用。这一功能得益于该碳酸盐矿化菌能将尿素分解为NH₄ ⁺和CO₃ ^2-，有着高效的诱导碳酸钙沉积能力，其中CO₃ ^2-可与环境中的部分金属离子结合生成沉淀，利用此性质可对环境中的重金属污染水土进行修复。

在一个具体的实施方式中，将所述碳酸盐矿化菌在LB液体培养基中培养得到碳酸盐矿化菌菌液，将所述碳酸盐矿化菌菌液与尿素溶液混合后，加入到含有重金属的水体中继续培养。

在一个具体的实施方式中，将菌株活化，涂布于LB固体培养基上，37℃培养16～24h；挑取LB固体培养基上的单菌落，接种于LB液体培养基中，37℃培养16～24h，得新鲜菌液；取OD₆₀₀为1的菌液1～2mL加入等体积0.3～0.5mol/L的尿素溶液制成混合溶液，分别加入1mL浓度为1.5～2g/L的重金属离子溶液，于25～40℃、100～200r/min条件下培养48h，最终重金属的去除率在49.9％～99.5％。(目前此实施方法用于实验室小规模测试，在反应体系中pH、重金属离子浓度及种类、温度对重金属离子的去除效果均有影响)。

其中，所述的LB固体培养基的配方为：蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g、琼脂粉15g、纯净水1000mL。

本发明的碳酸盐矿化菌对于重金属离子铜、铅、锌、镉等具有较好的去除作用。

本发明进一步提出了上述碳酸盐矿化菌在砂土固化方面的应用。

在一个具体的实施方式中，将碳酸盐矿化菌菌株活化，培养至OD₆₀₀值为0.8～1.2，采用50mLPVC无菌注射器作为微生物灌浆的模具，其内径约为30mm，填充颗粒的高度约为80mm，注射器两头分别用纱布和滤纸作为过滤片，利用氧气泵增加营养盐中氧含量，按初始吸水率15％～25％的比例将菌液与灭菌的标准中砂混合，装样砂土干密度为1.462g/cm³，利用灌浆法向注射器中持续通入0.3～0.5M营养盐(CaCl₂、尿素)，通氧量0～2L/min，养护5～7天后烘干脱模，测定砂柱的力学性能。在此反应体系中菌液脲酶活性、砂颗粒级配、粒径、灌浆批次、营养盐浓度、灌浆速度、温度、通气量等多种因素对砂土固化效果均有影响，目前考察了通气量对砂土固化效果的影响，通过调整通氧量对砂土固化工艺进行优化，试样单轴抗剪强度由0.12～0.23MPa提高至1.60～1.86MPa。

有益效果：本发明从土壤中筛选出具有诱导碳酸盐沉积性能的碳酸盐矿化菌Staphylococcus epidermidis X-NM1。该碳酸盐矿化菌能将尿素分解为NH₄ ⁺和CO₃ ^2-，有着高效的碳酸钙诱导能力，其中CO₃ ^2-可与环境中的部分金属离子结合生成沉淀，利用此性质可对环境中的重金属污染水土进行修复，同时，本发明提供的碳酸盐矿化菌，适应性强、易培养，并且其耐盐性高达17％。在砂土固化方面，该菌株诱导生成具有粘结作用的碳酸钙晶体，其在菌株与砂颗粒之间产生凝结桥结构。以细菌为晶核开始矿化，所形成的晶体镶嵌在砂土颗粒和细菌之间使砂土颗粒粘结在一起，增加细菌和沙的黏附程度，从而降低砂土材料的孔隙率，增强材料的抗剪强度、抗压强度等工程性能。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。

图1为X-NM1在LB平板上菌落形态；

图2为X-NM1革兰氏染色图；

图3为X-NM1诱导生成的晶体沉淀的X射线衍射光谱；

图4为X-NM1引起晶体沉淀的SEM显微照片；

图5为X-NM1引起晶体沉淀的X射线能量色散谱；

图6为X-NM1诱导碳酸钙沉积制备微生物砂柱(单轴抗剪实验)加菌实验组；

图7为微生物砂柱不加菌空白对照组；

图8为不同试样单轴抗剪强度实验曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施方式进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1表皮葡萄球菌X-NM1的筛选。

(1)土壤样品来源：中国西台吉乃尔(绿湖)；

(2)菌株筛选：取5g土壤加到50mL的生理盐水中震荡，制备土壤浸出液，将浸出液接种至LB液体培养基中，接种量为1％，培养条件37℃、160r/min培养24h；取富集培养液按10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6梯度稀释于CaCl₂-尿素固体培养基上涂布，待长出单菌落后，挑取单菌落接种于装有20mL尿素液体分离培养基的试管中，37℃、160r/min培养，待浑浊后，挑选有红色产生的管，取菌悬液于尿素琼脂分离培养基上划线，37℃培养至有菌落产生，挑取尿素琼脂分离培养基上清晰呈红色的单菌落再接种于尿素分离培养基中培养。以此方法反复纯化几次，直至固体平板上的菌落单一，形态稳定，从而获得可诱导碳酸盐沉积的纯化菌株。

CaCl₂-尿素固体培养基的培养基成分为尿素20g、酵母粉0.6g、蛋白胨1.2g、琼脂15g、NaCl 1.2g、NaHCO₃ 2.12g、NH₄Cl 10g、CaCl₂·2H₂O 4.41g、水1000mL。

尿素琼脂分离培养基的培养基成分为NaCl 5g、KH₂PO₄ 2g、葡萄糖1g、酚红0.012g、蛋白胨0.2g、琼脂15g、40％尿素50mL、水1000mL。

尿素液体分离培养基的培养基成分为NaCl 5g、KH₂PO₄ 2g、葡萄糖1g、酚红0.012g、蛋白胨0.2g、40％尿素50mL、水1000mL。

(3)X-NM1菌株的菌落形态观察

将筛选到的X-NM1菌株在LB固体培养基上37℃培养3天后进行革兰氏染色，通过显微镜观察到营养细胞为单细胞，球状。在上述培养基中37℃培养12h菌体可以大量生长。菌落呈圆点状、白色不透明、四周光滑、有隆起、表面湿润无褶皱。如图1所示。

(4)生理生化特性：

a)培养温度：20～40℃；

b)在pH5～10范围内生长；

c)在盐度1％～17％范围内生长；

d)革兰氏染色：阳性；

e)过氧化氢酶：阳性；

f)V-P反应：阳性；

g)运动性能：阳性；

h)柠檬酸盐利用：阴性；

i)M-R反应：阳性；

j)葡萄糖反应：阳性；

k)硝酸盐还原反应：阳性。

(5)菌种鉴定：

16sDNA序列分析法：PCR扩增采用细菌16sDNA通用引物：

27F：5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’

1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)

PCR反应体系(20μL)：Taq DNA聚合酶(10μL)、去离子水(8.5μL)、引物27F(0.5μL)、引物1492R(0.5μL)、基因组DNA(0.5μL)。反应条件：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环，72℃充分延伸7min。

测得16S rDNA大部分序列，如SEQ ID No：1所示。将所测序列用NCBI网站的BLAST进行碱基序列的比对，构建16S rDNA全序列为基础的系统进化树，经鉴定此菌X-NM1为表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为中国.武汉.武汉大学，邮编为430072，保藏编号为CCTCC NO：M 20211021，保藏日期为2021年8月13日。

实施例2菌株的生长特性。

配制盐度质量百分比为1％、5％、10％、15％、17％、19％的LB培养基，各梯度在每个试管中分装15ml培养基，并做空白对照后灭菌，然后接种X-NM1菌液，在37℃、160r/min摇床中培养1～3天，观察其是否能生长。

配制250ml LB培养基，于每个试管中分装15ml培养基，于超净台中接种菌株后，分别与空白对照放入20℃、30℃、40℃、50℃的摇床中160r/min培养1～3天，观察菌株是否能生长。

配制1mol/L的NaOH溶液和HCl溶液用于调配LB培养基的pH值，将LB培养基、NaOH溶液与HCl溶液灭菌，于超净台中调配pH为4、5、6、7、8、9、10、11的LB溶液，各梯度在每个灭菌试管中分装15ml培养基，并做空白对照，在37℃、160r/min摇床中培养1-3天，观察其是否能生长。

表1 X-NM1的生长特性

盐度范围

1％

5％

10％

15％

17％

19％

是否能生长

+

-

温度(℃)

20

30

40

50

是否能生长

+

-

pH范围

4

5

6

7

8

9

10

11

能否生长

+

-

由表1可知，菌株X-NM1能够在pH为4～10、盐度质量百分比17％以内、生长温度为20～40℃的范围下生长。

实施例3菌株的脲酶活性测定。

将菌株X-NM1接种于LB培养基活化后接至发酵培养基中，于37℃、200r/min条件下培养48h，取菌液，10 000r/min离心10min，上清液即为粗酶液。按照表3中的剂量加入相应试剂，混匀后将其定容至25mL，根据625nm波长处的吸光度值绘制标准曲线。采用Berthelot反应法及比色法测定脲酶活性。定义在上述反应条件下，每分钟分解尿素产生1μmol铵离子的酶量为1个酶活单位“U”。

每组粗酶液取两支试管各加入0.2mL酶液，其中一支加入枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis ATCC6051-U)粗酶液作为对照。然后在两管中分别加入0.8mL 5％的尿素溶液，在37℃恒温水浴箱中反应15min后，在两管各加入1mL终止剂，混匀后取0.2mL待测样于试管中，加入1mL的显色剂I充分混匀，再加入1mL显色剂Ⅱ，充分混匀，混匀后将其定容至25mL，继续在37℃恒温水浴箱中保温20min后取出，以空白样为对照在625nm测吸光度。根据标准曲线计算脲酶活性。

表2脲酶活性测定结果

由表2可知，菌株X-NM1的脲酶活性可达170U。

液体发酵培养基，培养基成分为酵母粉2.5g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 1g、可溶性淀粉5g、KH₂PO₄ 0.3g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、水1000mL。

上述各类试剂配置方法如下：

底物:0.05mol/L柠檬酸缓冲液(pH值为6.5)，用其配制质量分数为5％的尿素溶液。

显色剂Ⅰ：苯酚60g/L、亚硝基铁氰化钠2.5g/L,置深棕色瓶于冰箱内保存，有效期1个月。

显色剂Ⅱ：氢氧化钠52.5g/L、3％次氯酸钠溶液(活性氯大于5.2％)，有效期1个月。

NH₄ ⁺标准溶液：2.67g氯化铵溶于0.05mol/L的柠檬酸盐缓冲液定容至500mL，配成0.1mo l/L的NH₄ ⁺溶液，并以此溶液为母液,用缓冲液配制成50、100、150、200、250μmol/L的NH₄ ⁺标准溶液。

终止剂:10％的三氯乙酸溶液。

表3铵离子标准试剂配制参数

实施例4菌株诱导碳酸钙沉积能力测定。

使用一次性50mL塑料离心管进行菌株诱导碳酸钙沉积能力测定。将存于-20℃的碳酸盐矿化菌活化后，分别取1M尿素9mL，0.5M CaCl₂ 9mL，菌悬液2mL(控OD₆₀₀值)置于试管中，在30℃，150r/min摇床培养7天，观察钙沉积量。生成的CaCO₃主要附着在离心管底部及管壁上，还有一部分未附着的(极少量)沉淀在离心管底部。培养结束后使用定量滤纸过滤掉离心管中溶液，用去离子水冲洗，将滤纸和离心管一起放入烘箱烘干，称重记为m₁。然后将其放入0.1 M的盐酸溶液中浸泡洗涤数次至无明显气泡生成，再用去离子水冲洗，重新放入烘箱干燥，记录此时重量为m₂。这两个重量的差值为MICP生成的CaCO₃重量。本菌株与枯草芽孢杆菌模式菌(Bacillussubtilis ATCC6051-U)、国内外通用菌株S.pasteuriiATCC11859诱导碳酸钙沉积能力的比较如表4所示。

表4培养7天后菌株诱导碳酸钙沉淀能力的比较

由表4可知，在相同条件下与S.pasteurii ATCC11859及Bacillus subtilisATCC6051-U相比，菌株X-NM1具有良好的诱导碳酸钙沉积性能，能更好的诱导碳酸钙沉积。

分别取1M尿素45 mL，0.5M CaCl₂ 45 mL，菌悬液10 mL置于试管中，在30℃，150r/min摇床培养7天，过滤烘干后取固体样品送测。利用XRD对沉积产物的成分和晶体类型分析，根据出峰位置判断菌株诱导形成的沉积物晶体类型为方解石，见图3。在SEM下观察沉积产物，见图4。图4(a)表示在100μm的尺寸下沉积晶体的显微结构，图4(b)表示图4(a)的局部放大图。根据SEM判断菌株诱导形成的沉积晶体为球状晶体。利用EDX验证出沉积晶体的组成为CaCO₃，见图5。

实施例5菌株X-NM1重金属去除能力测定。

将存于-20℃的碳酸盐矿化菌活化后取菌液2 mL，加入等体积0.5 mol/L的尿素溶液制成混合溶液，制备3个平行样，再向体积为4 mL的混合溶液中分别加入1 mL浓度为2g/L的CuCl₂、Pb(NO₃)₂、ZnSO₄、Cd(NO₃)₂溶液于30℃、150r/min条件下培养48h，培养结束后于8000r/min条件下离心10分钟，收集上清液备样，采用ICP分别测原重金属离子溶液及上清液中重金属离子浓度，计算菌株对不同种类重金属的去除率。

表5 X-NM1对不同种类重金属去除能力测定

由表5可知，菌株X-NM1对铜、铅、锌和镉等重金属均具有一定的固化效果，最终重金属的去除率在49.9％～99.5％，其中对Pb²⁺去除率达99.55％。

实施例6菌株X-NM1砂土固化能力。

将存于-20℃的碳酸盐矿化菌活化，培养至OD₆₀₀值为0.8～1.2，采用50mLPVC无菌注射器作为微生物灌浆的模具，其内径约为30mm，填充颗粒的高度约为80mm，注射器两头分别用纱布和滤纸作为过滤片，利用氧气泵增加营养盐中氧含量，按初始吸水率15％～25％的比例将菌液与灭菌的标准中砂混合，装样砂土干密度为1.462g/cm³，利用灌浆法向注射器中持续通入0.3～0.5M营养盐(CaCl₂、尿素)，通氧量0～2L/min，养护5～7天后烘干脱模，测定砂柱的力学性能。试样1采用OD₆₀₀为1的菌液，初始吸水率为15％，0.3M营养盐，通氧量0L/min，养护5天，其单轴抗剪强度为0.12Mpa；试样2采用OD₆₀₀为1的菌液，初始吸水率为15％，0.5M营养盐，通氧量0L/min，养护7天，其单轴抗剪强度为0.23Mpa；试样3采用OD₆₀₀为1.2的菌液，初始吸水率为25％,0.5M营养盐，通氧量1.5L/min，养护7天，其单轴抗剪强度为1.86Mpa；试样4采用OD₆₀₀为1.2的菌液，初始吸水率为20％，通氧量1.5L/min，0.5M营养盐，养护7天，其单轴抗剪强度为1.60Mpa；实验对照组不添加菌液，其他与实验组一致，养护结束后空白对照组均不成型。实验组成型砂柱样品如图6，对照组松散不成型如图7。

表6砂柱单轴抗剪实验

由表6可知，利用菌株X-NM1对标准砂土进行固化，通氧量为0L/min时试样单轴抗剪强度为0.12～0.23MPa，通氧量为1.5L/min时试样单轴抗剪强度提高至1.60～1.86MPa，，对照组松散不成形，即菌株X-NM1对砂土具有一定的固化效果。

序列表

<110> 南京工业大学

<120> 一株碳酸盐矿化菌及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1000

<212> DNA

<213> 表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidisArtificial Sequence)

<400> 1

tgctatacat gcagtcgagc gaacagacga ggagcttgct cctctgacgt tagcggcgga 60

cgggtgagta acacgtggat aacctaccta taagactggg ataacttcgg gaaaccggag 120

ctaataccgg ataatatatt gaaccgcatg gttcaatagt gaaagacggt tttgctgtca 180

cttatagatg gatccgcgcc gcattagcta gttggtaagg taacggctta ccaaggcaac 240

gatgcgtagc cgacctgaga gggtgatcgg ccacactgga actgagacac ggtccagact 300

cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc gcaatgggcg aaagcctgac ggagcaacgc 360

cgcgtgagtg atgaaggtct tcggatcgta aaactctgtt attagggaag aacaaatgtg 420

taagtaacta tgcacgtctt gacggtacct aatcagaaag ccacggctaa ctacgtacca 480

gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttatccggaa ttattgggcg taaagcgcgc 540

gtaggcggtt ttttaagtct gatgtgaaag cccacggctc aaccgtggag ggtcattgga 600

aactggaaaa cttgagtgca gaagaggaaa gtggaattcc atgtgtagcg gtgaaatgcg 660

cagagatatg gaggaacacc agtggcgaag gcgactttct ggtctgtaac tgacgctgat 720

gtgcgaaagc gtggggatca aacaggatta gataccctgg tagtccacgc cgtaaacgat 780

gagtgctaag tgttaggggg tttccgcccc ttagtgctgc agctaacgca ttaagcactc 840

cgcctgggga gtacgaccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa ttgacgggga cccgcacaag 900

cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaaat cttgacaatc 960

ctcttgaccc ctctagagat agagttttcc ccttcggggg 1000

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 27F(Artificial Sequence)

<400> 2

agagtttgat cmtggctcag 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 引物1492R(Artificial Sequence)

<400> 3

ggttaccttg ttacgactt 19

Claims

1.一株碳酸盐矿化菌，其分类命名为表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis），菌株号X-NM1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20211021，保藏日期为2021年8月13日。

2.根据权利要求1所述的碳酸盐矿化菌在诱导碳酸盐沉积为碳酸钙上的应用。

3.权利要求1所述的碳酸盐矿化菌在去除环境中重金属上的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，所述重金属为铜、铅、锌、镉中的任意一种。

5.权利要求1所述的碳酸盐矿化菌在砂土固化方面的应用。