CN114410778B - Pf543在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 - Google Patents
Pf543在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114410778B CN114410778B CN202111634204.7A CN202111634204A CN114410778B CN 114410778 B CN114410778 B CN 114410778B CN 202111634204 A CN202111634204 A CN 202111634204A CN 114410778 B CN114410778 B CN 114410778B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tumor
- sphk1
- mta3
- melanoma
- expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title abstract description 137
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 title abstract description 65
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 title abstract description 65
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 34
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 101000967192 Homo sapiens Metastasis-associated protein MTA3 Proteins 0.000 claims description 50
- 102100040617 Metastasis-associated protein MTA3 Human genes 0.000 claims description 50
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 28
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 abstract 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 68
- 102100039024 Sphingosine kinase 1 Human genes 0.000 description 64
- 101000663635 Homo sapiens Sphingosine kinase 1 Proteins 0.000 description 62
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 38
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 38
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 26
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 15
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 14
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 14
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 11
- 101150023558 MTA3 gene Proteins 0.000 description 10
- 101150080374 Sphk1 gene Proteins 0.000 description 10
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 10
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 9
- 108010035597 sphingosine kinase Proteins 0.000 description 9
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- ZDRVLAOYDGQLFI-UHFFFAOYSA-N 4-[[4-(4-chlorophenyl)-1,3-thiazol-2-yl]amino]phenol;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC(O)=CC=C1NC1=NC(C=2C=CC(Cl)=CC=2)=CS1 ZDRVLAOYDGQLFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 7
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 7
- 101000651197 Homo sapiens Sphingosine kinase 2 Proteins 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 7
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 7
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 7
- 102100027662 Sphingosine kinase 2 Human genes 0.000 description 6
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 6
- 101100150085 Caenorhabditis elegans sphk-1 gene Proteins 0.000 description 5
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 5
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 5
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000002487 chromatin immunoprecipitation Methods 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 4
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000001358 Pearson's chi-squared test Methods 0.000 description 3
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- DUYSYHSSBDVJSM-KRWOKUGFSA-N sphingosine 1-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O DUYSYHSSBDVJSM-KRWOKUGFSA-N 0.000 description 3
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 108010007005 Estrogen Receptor alpha Proteins 0.000 description 2
- 102100038595 Estrogen receptor Human genes 0.000 description 2
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 206010029098 Neoplasm skin Diseases 0.000 description 2
- 101710094000 Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010201 enrichment analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 238000011502 immune monitoring Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 208000012584 pre-descemet corneal dystrophy Diseases 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 2
- WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N sphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N (-)-D-erythro-Sphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCC=CC(O)C(N)CO WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012275 CTLA-4 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030808 Clear cell renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 1
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 102000002499 Mi-2 Nucleosome Remodeling and Deacetylase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108010068261 Mi-2 Nucleosome Remodeling and Deacetylase Complex Proteins 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101100268917 Oryctolagus cuniculus ACOX2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012269 PD-1/PD-L1 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108091007744 Programmed cell death receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 206010038019 Rectal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940123928 Sphingosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- UCONUSSAWGCZMV-UHFFFAOYSA-N Tetrahydro-cannabinol-carbonsaeure Natural products O1C(C)(C)C2CCC(C)=CC2C2=C1C=C(CCCCC)C(C(O)=O)=C2O UCONUSSAWGCZMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004833 X-ray photoelectron spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000003766 bioinformatics method Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 206010073251 clear cell renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- OTKJDMGTUTTYMP-UHFFFAOYSA-N dihydrosphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(N)CO OTKJDMGTUTTYMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000008622 extracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005065 mining Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229940125645 monoclonal antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940121653 pd-1/pd-l1 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 201000001281 rectum adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 102200055464 rs113488022 Human genes 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- OTKJDMGTUTTYMP-ZWKOTPCHSA-N sphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@@H](N)CO OTKJDMGTUTTYMP-ZWKOTPCHSA-N 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000017572 squamous cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 description 1
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical compound [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Abstract
本发明属于PD‑L1/PD‑1单抗肿瘤免疫治疗领域，提供了PD‑L1/PD‑1单抗肿瘤免疫检测或者免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。具体本发明提供了PF543在制备PD‑L1/PD‑1单抗肿瘤免疫辅助治疗药物中的应用，所述肿瘤为实体肿瘤，进一步的所述实体肿瘤为黑素瘤。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗领域。
背景技术
皮肤肿瘤是所有肿瘤中最常见的一类癌症，其中，皮肤恶性黑素瘤(Skincutaneous melanoma,SKCM)是黑素细胞来源的高度恶性皮肤肿瘤。侵袭性黑素瘤发病率仅占皮肤肿瘤病例的1％但却导致了极高的病死率。在过去的几十年间，黑素瘤发病率在过去几十年里呈上升趋势，据统计，在北美、北欧、澳大利亚等地区的高加索人种中，黑素瘤发病率以每年4％至6％的速度攀升。美国癌症协会最新统计显示，皮肤黑素瘤发病率仍然在持续上升，在2020年，美国诊断出约100350例黑素瘤新发病例，约6850例患者死于黑素瘤。皮肤黑素瘤死亡率在近年来显著下降，主要得益于新疗法及新型药物应用于转移性黑素瘤使患者的生存率提高。监测、流行病学与最终结果数据库(Surveillance,Epidemiology,andEnd Results Program,SEER)分析显示，在2011年美国食品药品监督管理局(FDA)批准首个细胞毒性T细胞相关蛋白4(Cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4,CTLA-4)免疫检查点抑制剂，(Ipilimumab)及针对BRAF V600E基因突变的靶向治疗药物(Vemurafenib)应用于进展期黑素瘤治疗后，患者的1年相对生存率从2008年至2010年的42％上升到2013年至2015年的55％。
鞘氨醇激酶(Sphingosine kinases,SPHKs)是一类重要的限速酶，主要包括SPHK1和SPHK2同型，可以催化和磷酸化鞘氨醇(Sphingosine,SPH)生成鞘氨醇-1-磷酸(Sphingosine-1phosphate,S1P)。虽然两种同型的底物相同，氨基酸序列高度相似，但SPHK1和SPHK2在表达水平和亚细胞定位上存在显著差异。SPHK1位于各器官的细胞质中，而SPHK2主要分布在细胞核和特异细胞器中。目前积累的证据表明，在细胞质中经SPHK1催化合成的S1P可以通过G蛋白偶联受体输出到细胞膜上，调节细胞生理功能，并参与炎症及肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)形成。SPHK1在S1P的细胞内外信号传输中起着重要的作用，因此，靶向SPHK1可能是阻断肿瘤进展的关键环节。最近的研究已经阐明了SPHK1在癌症进展中的功能，然而，SPHK1在肿瘤免疫逃逸中的具体机制尚未明确。
MTA3被认为是核小体改构复合体(Nucleosome remodeling complex,NuRD)的重要组分，参与形成NuRD的组蛋白去乙酰酶核心亚复合物。此外，有研究报道了MTA3基因在乳腺癌中的生物学特性。大量研究表明雌激素受体α(Estrogen receptor-α,ER-α)通过与MTA3启动子结合对MTA3进行直接的转录调控，但它在黑素瘤免疫反应中的具体作用机制仍不清楚。
程序性细胞死亡配体1(Programmed cell death ligand 1,PD-L1)，又称B7-H1(B7 homolog1)或CD274是一中细胞表面糖蛋白，属于B7家族的共刺激分子。在恶性黑素瘤中，PD-L1能够通过先天和适应性机制诱导上调。PD-L1在肿瘤细胞上的异常高表达被认为是免疫耐受和逃避免疫监控的重要因素。肿瘤细胞表面的PD-L1与肿瘤浸润淋巴细胞上表达的同源程序性死亡受体1(Programmed cell death protein 1,PD-1)结合后，PD-L1 诱导的抑制信号通路可负向调节T细胞的激活和增殖，抑制细胞因子分泌，促进T细胞的衰竭，使肿瘤细胞逃避免疫监视。由于PD-1/PD-L1相关的抑制剂具有持久的抗肿瘤作用，尤其是在一些难治性恶性肿瘤中，自2014年起，多个靶向PD-L1/PD-1通路的药物相继获得了FDA的批准用于治疗多种恶性肿瘤，其适应症相较于CTLA-4抑制剂更广泛，但由于各类肿瘤的病因学及发病机制不同，肿瘤微环境复杂，个体差异等因素， PD-1/PD-L1抑制剂只能使部分患者获益，约80％患者在使用药物后出现获得性耐药或不应答。因此在制定具体的治疗方案之前，根据生物标志物预测免疫检查点抑制剂适用人群，避免药物导致的免疫相关不良反应是目前亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫检测或者免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。
本发明的技术方案是：
本发明的技术方案一：
SPHK1的检测试剂在制备治疗PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫用药的检测试剂盒中的应用。
SPHK1的抑制剂在制备PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用。
本发明的技术方案二：
PF543在制备PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用。
优选的，所述PF543作为靶向鞘氨醇激酶SPHK1抑制剂在制备PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用。
PF543与PD-L1/PD-1单抗药物联用在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。
本发明的技术方案三：
MTA3的检测试剂在制备治疗PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗用药的检测试剂盒中的应用。
MTA3的抑制剂与PD-L1/PD-1单抗药物联用在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。
SPHK1-MTA3轴的检测试剂在制备治疗PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗药物试剂盒中的应用。
SPHK1-MTA3轴的抑制剂与PD-L1/PD-1单抗药物联用在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。
前面是三种技术方案中：所述肿瘤优先为实体肿瘤。所述肿瘤进一步优选为皮肤恶性黑素瘤。
与现有技术相比，本发明的优势是：
以下结合附图和具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。
实施例1中，如图1及表1所示，我们使用TCGA公共数据库针对不同类型的肿瘤进行基因集变异分析，结果显示SPHK1与SPHK2在肿瘤组织中普遍存在表达异常。我们发现SPHK1在绝大多数的癌症类型中显著高表达。为了进一步探究SPHK1在肿瘤微环境中的潜在功能，我们针对33类癌症中SPHK1与免疫检查点表达水平进行相关性分析，发现SPHK1基因与多数具有免疫抑制功能的检查点存在显著正相关性。包括皮肤黑色素瘤在内的多类肿瘤中，我们发现PD-1(PDCD1)及PD-L1(CD274)作为肿瘤微环境中定义明确的免疫抑制通路，与SPHK1基因表达量存在显著的正相关性。上述生信分析结果显示SPHK1可能是重要的免疫抑制分子。如图2所示，我们构建了皮下移植瘤(黑素瘤)免疫小鼠模型，通过SPHK1特异性抑制剂PF543治疗小鼠肿瘤，我们发现靶向抑制鞘氨醇激酶可显著抑制小鼠肿瘤增殖，且无显著毒副表现。如图3所示，采用流式细胞术进一步分析SPHK1在黑素瘤局部微环境的功能，我们发现PF543处理能够诱导肿瘤局部CD4以及CD8+T细胞浸润。其中分泌颗粒酶GZMB的CD8+T淋巴细胞(CTL)比例在药物处理组显著增加。由于GZMB是能够对靶细胞发挥杀伤功能的重要标志物，上述结果表明PF543处理后可能通过增加肿瘤微环境中特异性CTL细胞发挥抗肿瘤作用。此外我们发现肿瘤细胞PD-L1膜蛋白表达量在药物处理组中显著降低。
实施例2中，如图4、表4及表5所示，通过mRNA测序结果我们发现抑制SPHK1 活性可显著下调PD-L1的表达，体外研究进一步证实基因敲降SPHK1或者PF543抑制鞘氨醇激酶活性可显著抑制下游MTA3表达；通过生物信息学分析肿瘤TCGA数据库我们还发现在多种肿瘤类型中，MTA3与PD-L1的表达存在显著正相关。进一步通过ChIP检测，我们发现MTA3可直接与c-Myc启动子结合，从而进一步转录调控肿瘤PD-L1的表达。如图5所示，我们发现在体外发现基因敲降MTA3确实能够引起肿瘤PD-L1的表达下调。下调MTA3表达可抑制c-Myc介导的PD-L1表达，而MTA3这一转录因子对肿瘤 PD-L1的直接调控作用尚无研究报道，而通过靶向抑制MTA3我们认为可达到类似于 PD-L1/PD-1单抗的作用，从而抑制PD-L1/PD-1这一对免疫检查点对肿瘤免疫逃逸的促进作用。
实施例3中，如图6所示，我们构建了基因过表达转录因子MTA3皮下移植瘤(黑素瘤)免疫小鼠模型，通过联合PD-1单克隆抗体治疗小鼠肿瘤，我们发现联合干预组较单药组或对照组抗小鼠肿瘤增殖能力更强，且无显著毒副表现。如图7所示，通过流式细胞术进一步探究了SPHK1-MTA3过表达在黑素瘤局部微环境中的免疫特征，SPHK1及 MTA3均能够使肿瘤细胞PD-L1膜蛋白表达显著上调。同时我们发现PD-1单抗作用于 SPHK1或MTA3高表达黑素瘤模型后，肿瘤局部GZMB+CD8+淋巴细胞比例显著上调，该结果表明PD-1单抗能够有效逆转SPHK1以及MTA3诱导PD-L1表达引起的肿瘤免疫逃逸，从而使肿瘤生长速度减慢。从以上结果均可提示我们针对靶向SPHK1抑制剂的开发，可为PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗提供免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。如图8所示，为了探究黑色素瘤患者MTA3表达的预后特征，我们在 TCGA公共数据库中检索黑色素瘤患者生存相关数据并进行生存分析。在未接受免疫治疗的黑素瘤患者中，MTA3基因表达对总生存期无显著影响。而在接受免疫治疗的患者中， MTA3高表达组的死亡风险显著降低。我们同时观察了临床上已接受PD-1单抗(特瑞普利单抗)治疗的皮素黑素瘤患者的组织病理染色结果以及临床预后，通过比较SPHK1与 MTA3在肿瘤中的表达，并关联患者的无进展生存时间，我们发现SPHK1及MTA3表达较高的黑素瘤患者接受PD-1单抗的应答效果更好，患者无进展生存时间更长，且均有显著统计学差异。从以上结果均可提示我们针对SPHK1-MTA3轴，可为PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗提供新的免疫检测靶点，开发检测试剂或者提供免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。如图9所示，我们的研究表明，靶向鞘氨醇激酶1可通过下调下游转录因子MTA3调控c-Myc介导的肿瘤PD-L1转录水平，从而抑制肿瘤的免疫逃逸，阻断肿瘤生长。该机制直接探讨了PD-1阻断剂作用的现存问题，为提供 PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫检测或者免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发了新的联合用药的模式。
名称解释：PD-L1/PD-1中的“/”代表“和”或者“或”的意思。
附图说明
图1为实施例1对鞘氨醇激酶在肿瘤组织的表达与功能分析图，其中图1A为TCGA数据库中分析SPHK1与SPHK2在不同癌症中的表达水平图，与正常样本相比，SPHK1 和SPHK2基因在16类癌症中的差异表达情况。数据采用基因差异倍数对数值(LogFC) 表示，检验水准α＝0.05。右侧饼图表示基因表达在肿瘤组织中不显著(灰色)或显著上调(红色)及下调(蓝色)的癌症比例；图1B为SPHK1基因与抑制性免疫检查点在不同癌症中的相关性分析图数据采用斯皮尔曼相关系数(Rs)表示，检验水准α＝0.05；图 1C为SPHK1与PD-L1(CD274)表达在各类癌症中的相关性分析图，数据采用斯皮尔曼相关系数表示，检验水准α＝0.05。
图2为实施例1的小鼠模型实验数据图，其中图2A为小鼠实验流程示意图；图2B为不同剂量(5mg/kg、10mg/kg)PF543处理黑素瘤小鼠模型9天后分离肿瘤图；图2C为处死当天小鼠皮下移植瘤瘤体体积体外测量散点统计图，数据用均数±标准误表示，结果统计学分析采用单因素方差分析进行整体组间比较，并采用Tukey HSD检验进一步进行两组间比较，NS,P>0.05；*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；图2D为实时测量的小鼠皮下移植瘤瘤体体积变化曲线图，从干预开始，每两天测量一次小鼠瘤体体积，并绘制体积曲线，于处死当天取出小鼠离体进行体外测量并绘制柱状统计图，数据用均数±标准误表示，结果统计学分析采用单因素方差分析进行整体组间比较，并采用Tukey HSD检验法进一步进行两组间比较，NS,P>0.05；*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；图2E为实时测量的小鼠体重变化曲线图，从干预开始，每两天观察一次小鼠一般状态并测量小鼠体重，并绘制体重曲线，数据用均数±标准误表示，结果统计学分析采用单因素方差分析进行整体组间比较，并采用TukeyHSD检验法进一步进行两组间比较。
图3为实施例1的体内抑制SPHK1活性后细胞膜蛋白及胞内标志物染色流式细胞术分析图，其中图3A、3B分别为黑素瘤小鼠经PF543处理后肿瘤局部淋巴细胞分布的代表性散点图(左)及统计分析(右)；图3C、3D分别为黑素瘤小鼠经PF543处理后黑素瘤组织中肿瘤细胞表面PD-L1表达的代表性散点图(左)及统计分析(右)。数据采用均值±均值标准误表示，NS,P>0.05；*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001。
图4为实施例2的转录组测序、生物信息机制探究图，其中图4A为转录组测序分析后筛选出候选转录因子在不同样本中的表达量，共两组，每组三个独立重复样本；图 4B为qRT-PCR验证测序样本中PD-L1及转录因子的表达情况。数据采用均值±均值标准误表示。NS,P>0.05；*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；****,P<0.0001；图4C为GDSC 公共数据库中获取52个黑素瘤细胞株的转录组数据，采用皮尔森积矩相关系数及显著性检验分析SPHK1与候选转录因子的相关性，检验水准α＝0.05；图4D为使用皮尔森积矩相关系数及显著性检验分析评价MTA3基因表达与MsigDB癌症标志物相关通路相关性，检验水准α＝0.05；图4E为对转录组测序中SPHK1下游的差异基因进行GSEA富集分析；图4F为使用Westernblot检测MTA3稳定过表达黑素瘤细胞株中Flag-MTA3转染效率；图4G为预测的c-Myc启动子区MTA3结合位点的引物序列设计图谱；图4H为在黑素瘤细胞系中，使用anti-Flag抗体，SYBR RT-PCR使用c-Myc引物，通过染色质免疫沉淀技术(Chromatin immunoprecipitationassay,ChIP)检测证明MTA3与c-Myc启动子有明显结合。
图5为实施例2的SPHK1-MTA3轴调控肿瘤PD-L1表达水平的体外研究实验数据图，其中图5A、5B为黑素瘤细胞经不同浓度PF543和IFN-γ(200ng/mL)处理后24-36 小时后，提取蛋白并使用Western blot检测MTA3、c-Myc表达水平。图5A为Western blot 代表性图片；图5B为经三次重复实验对蛋白条带灰度值进行统计分析；图5C、5D为使用Western blot检测siSPHK1干扰沉默黑素瘤细胞SPHK1基因后敲降效率及MTA3、c-Myc 表达水平。图5C为Western blot代表性图片；图5D为经三次重复实验对蛋白条带灰度值进行统计分析。图5E、5F为黑素瘤细胞系经siMTA3干扰沉默MTA3基因后使用Western blot检测敲降效率、c-Myc和PD-L1表达。图5E为Western blot代表性图片；图5F为经三次重复实验对蛋白条带灰度值进行统计分析。数据均采用均值±均值标准误表示。NS, P>0.05；*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；****,P<0.0001。
图6为实施例3的小鼠模型实验数据图，其中图6A为小鼠实验流程示意图；图6B 为PD-1单抗处理黑素瘤小鼠模型14天后分离肿瘤图；图6C为处死当天小鼠皮下移植瘤瘤体体积体外测量散点统计图，数据用均数±标准误表示，结果统计学分析采用单因素方差分析进行整体组间比较，并采用Tukey HSD检验进一步进行两组间比较，NS,P>0.05；*, P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；图6D为实时测量的小鼠皮下移植瘤瘤体体积变化曲线图，从干预开始，每两天测量一次小鼠瘤体体积，并绘制体积曲线，于处死当天取出小鼠离体进行体外测量并绘制柱状统计图，数据用均数±标准误表示，结果统计学分析采用单因素方差分析进行整体组间比较，并采用Tukey HSD检验法进一步进行两组间比较，NS, P>0.05；*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；图6E为实时测量的小鼠体重变化曲线图，从干预开始，每两天观察一次小鼠一般状态并测量小鼠体重，并绘制体重曲线，数据用均数±标准误表示，结果统计学分析采用单因素方差分析进行整体组间比较，并采用Tukey HSD 检验法进一步进行两组间比较。
图7为实施例3的高表达SPHK1或MTA3黑素瘤细胞经PD-1单克隆抗体处理后对肿瘤微环境影响流式细胞术分析图，其中图7A、7B分别为高表达SPHK1或MTA3基因黑素瘤小鼠模型经PD-1单克隆抗体处理后黑素瘤组织中肿瘤浸润淋巴稀细胞比例肿瘤细胞PD-L1膜蛋白表达的代表性散点图及数据统计分析图。数据采用均值±均值标准误表示， NS,P>0.05；*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001。
图8为实施例3对免疫治疗黑素瘤患者肿瘤组织进行公共数据数生物信息学分析及免疫荧光染色标记肿瘤SPHK1与MTA3表达水平。从TCGA公共数据库获取皮肤黑素瘤患者的总生存期，根据既往治疗方案将患者分为(图8A)未使用免疫治疗组与(图8B) 免疫治疗组，患者MTA3基因基于表达量分为高表达(前65％)和低表达组(后35％)，采用乘积极限法(Kaplan-Meier,K-M)对黑素瘤患者总生存时间进行生存分析，使用 Log-rank检验比较组间统计学差异；图8C、8D分别为根据SPHK1、MTA3基因表达量中位数将患者分组，采用K-M法对黑素瘤患者无进展生存时间进行生存分析，使用 Log-rank检验比较组间统计学差异。
图9为SPHK1-MTA3信号轴通过调控黑素瘤PD-L1促进肿瘤免疫逃逸模式图。
具体实施方式
实施例1
1、鞘氨醇激酶在肿瘤组织的表达与功能分析。
1.1实验方法：从癌症基因组图谱(TCGA)数据库(http://gdac.broadinstitute.org/)中使用FPKM(Fragments Per Kilobase per Million)算法获取33类癌症(包括10205个肿瘤样本)的基因转录组数据。使用limma1.4.5分析基因在肿瘤及相应正常组织中的差异倍数(Fold change,FC)，筛选阈值为|Log2(FC)|>0.58，采用Benjamini-Hochberg(BH) 方法对假设检验概率P值进行校正。采用斯皮尔曼相关系数及其显著性检验进行肿瘤组织中基因间的相关性分析，检验水准α＝0.05。
1.2实验结果：
通过比较癌症基因组图谱(TCGA)公共数据库中不同癌症类型的肿瘤和正常组织进行基因集变异分析，并计算SPHKs的相对表达水平。结果显示SPHK1与SPHK2在多类癌症中的显著差异表达，二者在在肿瘤组织中普遍存在表达异常。如图1A所示，SPHK1 在12种癌症类型中显著高表达，包括乳腺浸润性癌(BRCA,LogFC＝0.52,P＜0.001、食管癌(ESCA,LogFC＝2.38,P＜0.001)、头颈部鳞状细胞癌(HNSC,LogFC＝1.30,P＜0.001)，肝细胞癌(LIHC,LogFC＝1.23,P＝0.002)、肺腺癌(LUAD,LogFC＝0.68,P＝0.001)、直肠腺癌(READ,LogFC＝1.24,P＝0.02)、胃癌(STAD,LogFC＝1.32,P＜0.001)、结肠癌 (COAD,LogFC＝1.19,P＜0.001)、肾透明细胞癌(KIRC,LogFC＝1.35,P＜0.001)、肾乳头状细胞癌(KIRP,LogFC＝2.31,P＜0.001)、肺鳞癌(LUSC,LogFC＝1.32,P＜0.001)，甲状腺癌(THCA,LogFC＝1.17,P＜0.001)。为了进一步探究SPHK1在肿瘤微环境中的潜在功能，针对33类癌症中SPHK1与抑制类免疫检查点表达水平进行相关性分析。如图 1B所示，SPHK1基因与多种具有免疫抑制功能的免疫检查点存在相关性，其中我们发现 PD-1(PDCD1)及PD-L1(CD274)作为肿瘤微环境中定义明确的免疫抑制通路，与SPHK1 基因表达量在包括皮肤恶性黑素瘤在内的多类肿瘤中存在显著的正相关性(见图1C)。
2、靶向鞘氨醇激酶SPHK1抑制小鼠移植瘤(黑素瘤)增殖的体内研究。
2.1组别设置：
Vehicle(溶剂对照组)
PF543(5mg/kg)(PF543低浓度组)
PF543(10mg/kg)(PF543高浓度组)
2.2实验流程，见图1A：
实验前6天左右：对6-8周C57BL/6小鼠分别于右侧背翼处皮下注射B16F10黑素瘤细胞株8*105个，每组各10只小鼠。
实验第0天：记录小鼠体重及肿瘤体积，当肿瘤体积生长至50-100mm3开始，对成瘤小鼠分别进行PF543(5mg/kg)/小鼠/2天或PF543(10mg/kg)/小鼠/2天，腹腔注射，并设置溶剂对照组，共三组，每组10只小鼠。
实验第2、4、6、8天：每两天称量一次小鼠体重及瘤体体积，体积＝(长×宽×宽×π)/6 公式计算。
实验第8天：处死一半小鼠，获取肿瘤拍照并保存组织样本，进行后续数据分析。
2.3实验结果：
由图2B、2C、2D所示，与溶剂对照组相比，药物处理组肿瘤体积显著低于溶剂对照组，其中高剂量给药组(10mg/kg)肿瘤体积较低剂量组(5mg/kg)更低；
由图2E所示，在给药期间各组小鼠的体重无明显波动，体重增长在组间无统计学差异，表明PF543对荷瘤小鼠无明显毒副作用。
以上结果提示，使用鞘氨醇激酶抑制剂PF543可抑制黑素瘤生长。
3、靶向SPHK1促进肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性的体内研究。
3.1实验方法：细胞膜蛋白及胞内标志物染色。
3.2实验结果：
如图3A、3B所示，PF543药物处理能够显著诱导肿瘤局部CD4+T细胞及CD8+T 细胞浸润。其中生成颗粒酶B(GZMB)的CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)比例在药物处理组显著增加。由于GZMB是能够对靶细胞发挥杀伤功能的重要生物标志物，上述结果表明PF543药物处理后可能通过增加肿瘤微环境中特异性CD8+CTL细胞发挥抗肿瘤作用；
如图3C、3D所示，我们发现肿瘤细胞PD-L1表面蛋白表达量在药物处理组中显著降低。
以上结果提示，SPHK1可能在皮肤黑素瘤局部微环境中发挥了免疫抑制功能，抑制SPHK1酶活性可能通过下调肿瘤细胞PD-L1膜蛋白表达逆转肿瘤浸润淋巴细胞的功能失调状态从而促进肿瘤的免疫应答。
4、回顾性观察黑素瘤患者中肿瘤PD-L1与SPHK1表达水平的相关性分析
实验结果如表1所示，黑素瘤患者中肿瘤PD-L1与SPHK1表达水平呈显著正相关，存在统计学差异，P<0.05。
附表1说明：表1为对黑素瘤患者肿瘤组织样本石蜡切片进行免疫荧光染色标记肿瘤 PD-L1与SPHK1表达水平，表1中总结了每种类别的患者数量，根据这些数据，用皮尔森卡方检验(双边检验)进行变量间的关联性分析并评估两者相关性的显著性。
实施例2
1、SPHK1-MTA3轴调控肿瘤PD-L1表达水平的体外研究。
1.1实验方法：转录组测序、TCGA数据库生信分析、基因编辑，细胞基因干预、PF543药物干预、Western blot、ChIP检测
靶基因siRNA Oligo序列如表2所示：
根据扩增曲线判断引物特异性，对于特异性不佳的基因引物需重新设计合成。经优化的基因引物序列如下表3所示：
1.2实验结果：
见图4A，与对照组相比，在给药组检测到的4182个显著下调基因中，根据基因差异表达倍数确定了九个候选转录因子；
见图4B，为了评价测序分析结果的可靠性，我们使用相同批次的RNA样本进行qRT-PCR检测候选转录因子表达情况；
见图4C，通过在GDSC公共数据库中获取的黑素瘤细胞相关转录组数据，我们发现SPHK1基因与九个候选转录因子中的MTA3存在显著的正相关性；
见图4D，MTA3表达与促进癌症的靶点相关，如G2M、c-Myc等；
见图4E，通过基因富集分析，我们发现SPHK1下游的下调基因显著富集于c-Myc 相关通路。
见图4F、4G、4H，ChIP检测MTA3是否与c-Myc启动子结合，相较于对照组，MTA3 与c-Myc启动子有显著结合，统计学存在差异。
以上结果提示，MTA3作为SPHK1的下游基因可能参与了c-Myc介导的PD-L1的表达。
见图5A、5B、5C、5D，黑素瘤细胞经SPHK1特异性抑制剂处理或敲低SPHK1基因均能够显著下调MTA3及c-Myc表达量；
见图5E、5F，在黑素瘤细胞系中敲低MTA3基因后能够显著降低c-Myc及经IFN-γ诱导的PD-L1表达量。
上述结果提示SPHK1能够通过MTA3正向调控PD-L1表达。
2、回顾性观察黑素瘤患者中肿瘤MTA3与SPHK1表达水平的相关性分析
实验结果如表4所示，黑素瘤患者中肿瘤MTA3与SPHK1表达水平呈显著正相关，存在统计学差异，P<0.05。
附表4说明：表4为对黑素瘤患者肿瘤组织样本石蜡切片进行免疫荧光染色标记肿瘤 MTA3与SPHK1表达水平，表4中总结了每种类别的患者数量，根据这些数据，用皮尔森卡方检验(双边检验)进行变量间的关联性分析并评估两者相关性的显著性。
3、回顾性观察黑素瘤患者中肿瘤PD-L1与MTA3表达水平的相关性分析。
实验结果如表5所示，黑素瘤患者中肿瘤PD-L1与MTA3表达水平呈显著正相关，存在统计学差异，P<0.05。
附表5说明：表5为对黑素瘤患者肿瘤组织样本石蜡切片进行免疫荧光染色标记肿瘤 PD-L1与MTA3表达水平，表5中总结了每种类别的患者数量，根据这些数据，用皮尔森卡方检验(双边检验)进行变量间的关联性分析并评估两者相关性的显著性。
实施例3
1、SPHK1与MTA3诱导的肿瘤PD-L1表达的体内研究。
1.1组别设置：
CTL+IgG2α同型对照组(对照组)
CTL+PD-1单抗组(PD-1单抗治疗组)
SPHK1-OE+IgG2α同型对照组(SPHK1过表达组)
SPHK1-OE+PD-1单抗组(SPHK1过表达PD-1单抗组)
MTA3-OE+IgG2α同型对照组(MTA3过表达组)
MTA3-OE+PD-1单抗组(MTA3过表达PD-1单抗组)
1.2实验流程，见图6A：
实验前6天左右：对6-8周C57BL/6小鼠分别于右侧背翼处皮下注射B16F10黑素瘤SPHK1过表达细胞株、MTA3过表达细胞株8*105个及相同数量CTL细胞株(空载对照组)各20只小鼠。
SPHK1基因过表达序列SEQ ID NO:037所示。
MTA3基因过表达序列如SEQ ID NO:038所示。
实验第0天：记录小鼠体重及肿瘤体积，当肿瘤体积生长至50-100mm3开始，对成瘤小鼠分别进行PD-1单抗200μg/小鼠/3天，腹腔注射，并设置IgG2α同型对照组，共六组，每组10只小鼠。
实验第2、4、6、8、10、12、14天：每两天称量一次小鼠体重及瘤体体积，体积＝(长×宽×宽×π)/6公式计算。
实验第14天：处死一半小鼠，获取肿瘤拍照并保存组织样本，进行后续数据分析。
1.3实验结果：
见图6B、6C、6D，PD-1单克隆抗体处理组肿瘤体积大小显著低于同型对照IgG2α组，其中PD-1单克隆抗体处理后能够显著抑制SPHK1及MTA3介导的肿瘤生长；
见图6E，在给药期间各组小鼠的体重无明显波动，体重增长在组间无统计学差异，表明PD-1单克隆抗体与IgG2α同型对照对荷瘤小鼠无明显毒性。
以上结果提示，PD-1单克隆抗体处理组肿瘤体积大小显著低于同型对照IgG2α组，其中PD-1单克隆抗体处理后能够显著抑制SPHK1及MTA3介导的肿瘤生长。
2、高表达SPHK1或MTA3黑素瘤细胞经PD-1单克隆抗体处理后对肿瘤微环境影响的体内研究。
2.1实验方法：细胞膜蛋白及胞内标志物染色。
2.2实验结果：
见图7A、7B，SPHK1及MTA3均能够使肿瘤细胞表面PD-L1蛋白显著上调。同时与IgG2a对照组相比，我们发现PD-1单克隆抗体作用于SPHK1或MTA3高表达黑素瘤模型后，肿瘤局部GZMB+CD8+淋巴细胞比例显著上调，该结果表明PD-1单克隆抗体能够逆转SPHK1及MTA3诱导PD-L1表达引起的肿瘤免疫逃逸，从而使肿瘤生长速度减慢。
3、回顾性临床观察免疫治疗黑素瘤患者中肿瘤SPHK1及MTA3表达水平与患者预后(总生存时间或无进展生存时间)相关性研究。
见图8A，在未接受免疫治疗的黑素瘤患者中，MTA3基因表达量对总生存期无显著影响(风险比1.20,95％可信区间0.87-1.64)；
见图8B，在接受免疫治疗的患者中，MTA3高表达组的死亡风险显著降低(风险比0.40,95％可信区间0.19-0.85)；
见图8C、8D，SPHK1(风险比0.30,95％可信区间0.13-0.72)、MTA3(风险比0.44,95％可信区间0.20-0.95)高表达的黑素瘤患者在接受PD-1单克隆抗体治疗后的无进展生存时间显著延长。
上述结果表明SPHK1-MTA3轴可通过上调肿瘤细胞PD-L1表达逆转对PD-1单克隆抗体治疗的耐药性。
以上所述为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围不局限于此，任何熟悉技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明权利要求的保护范围之内。
序列表
<110> 中南大学湘雅医院
<120> PF543在制备PD-L1/PD-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用
<141> 2021-12-28
<160> 38
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 1
gcgucaugca ucuguucuat t 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 2
uagaacagau gcaugacgct t 21
<210> 3
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 3
gugcacccaa acuacuucut t 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 4
agaaguaguu ugggugcact t 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 5
gugcaacaga aacgucuaat t 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 6
uuagacguuu cuguugcact t 21
<210> 7
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 7
ccaaauagcc cacuuacggt t 21
<210> 8
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 8
ccguaagugg gcuauuuggt t 21
<210> 9
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 9
uucuccgaac gugucacgut t 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 10
acgugacacg uucggagaat t 21
<210> 11
<211> 19
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 11
gcccaatacg accaaatcc 19
<210> 12
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 12
ctctgctcct cctgttcgac 20
<210> 13
<211> 18
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 13
tgctgtcacc catgaacc 18
<210> 14
<211> 18
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 14
cccagacgcc gatacttc 18
<210> 15
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 15
attggtggtg gtggtcttac 20
<210> 16
<211> 18
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 16
ccagtctctg aacatgaa 18
<210> 17
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 17
agcccactta cggatcgaca ga 22
<210> 18
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 18
caaactaggc tgcctcacag aac 23
<210> 19
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 19
ctaccagcag cagcagcaga g 21
<210> 20
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 20
ggtgtgaccg caacgtagga g 21
<210> 21
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 21
accacaacca cactctggag ga 22
<210> 22
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 22
tcggtttctg gtctggatgc ct 22
<210> 23
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 23
tcagaagtac tccatggaca ac 22
<210> 24
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 24
gtcctcgatg atgagttcga t 21
<210> 25
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 25
ttggcacagt ctgtgaacca tgg 23
<210> 26
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 26
gtaacatcct ggcggtggta ttc 23
<210> 27
<211> 17
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 27
gctgttgccc acgtttc 17
<210> 28
<211> 19
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 28
ctgtccaccc accatatcc 19
<210> 29
<211> 18
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 29
gccatcctct ccaacacc 18
<210> 30
<211> 18
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 30
ccgatgtccg tctctcct 18
<210> 31
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 31
ccgaatgtgg aacgacctgt ct 22
<210> 32
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 32
gatctcctca gctcttttgg gg 22
<210> 33
<211> 17
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 33
gcagccattc tccagca 17
<210> 34
<211> 18
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 34
tcgtcctccc agatgtcc 18
<210> 35
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 35
ggacctggaa actgaccatc ag 22
<210> 36
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 36
cagtgaggtc tcatagcgtg ac 22
<210> 37
<211> 1187
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 37
tctagaatgg aaccagtaga atgccctcga ggactgctcc cacggccatg cagagtgctg 60
gtgctgctga acccccaggg tggcaagggc aaggctctgc agctcttcca gagccgtgtg 120
cagcccttcc tggaggaggc agagataacc tttaaactga tactcaccga acggaagaac 180
catgccaggg agctggtgtg tgcagaggag ttgggtcact gggacgccct ggcagtcatg 240
tccggtgatg gtctgatgca tgaggtggtg aatgggctaa tggaacggcc agactgggag 300
actgccatcc agaaacccct gtgtagcctc cctggaggct ccggcaatgc gctggcagct 360
tctgtgaacc actatgctgg gtacgagcag gtgactaatg aagacctgct catcaactgc 420
acactgctgt tgtgccgccg gcgcctgtca cccatgaacc tgctgtccct gcacactgct 480
tctgggctgc ggctctattc tgtgctcagt ctgtcctggg gctttgttgc tgacgtggac 540
ctcgagagtg agaagtacag gcgcttgggg gagattcgtt tcacagtggg caccttcttt 600
cgcctagcaa gcctgcgcat ctaccaaggc caactggcct accttcctgt aggaactgtg 660
gcctctaaga gacccgcctc tacactggtg cagaagggcc ccgtcgacac acaccttgtt 720
cctctggagg agccagtgcc ttctcattgg actgtggtac cagaacagga cttcgtcctg 780
gtgctggtgc tgctacacac ccacctgagc tccgagctgt ttgcagcacc catgggccgc 840
tgtgaggctg gtgttatgca tctgttctac gtacgtgcgg gggtgtcaag ggctgcgctg 900
ctgcgcctct tcctggccat gcagaagggc aagcatatgg aacttgactg tccatacctg 960
gttcatgtgc ccgtggttgc tttccgcctg gagcccagga gccagagggg cgtgttttct 1020
gtggatggag agctgatggt atgtgaagct gtgcagggcc aagtgcaccc aaactacctt 1080
tggatggtct gtggcagcag agatgcccca tccggccggg actcccggcg ggggccacct 1140
ccagaagaac cagattacaa ggacgacgat gacaagtaag cggccgc 1187
<210> 38
<211> 1799
<212> DNA/RNA
<213> null
<400> 38
gctagcatgg cggccaacat gtaccgggtc ggagactacg tttattttga gaattcctcc 60
agcaacccgt acctcatcag acggatagag gagctcaaca agactgcaag tggcaatgtg 120
gaagcaaaag tcgtctgctt ttacagaaga cgggacatct ccaacacgct tatcatgctc 180
gccgacaagc atgctaaaga aactgaggag gagtcggaga cgccagttga ggccgacttg 240
acggagaagc agaagcacca gctgaaacac agggagctct ttctgtcgcg ccagtacgag 300
tcactgcctg cgacacatat cagggggaag tgcagcgtgg ccctgctgaa tgagacagaa 360
tccgtgttgt cataccttga caaggaggat accttcttct actcactggt atacgaccct 420
tcagtgaaaa cattattggc tgacaaaggt gaaatcagag tgggcccaaa gtaccaagct 480
gacattccag acatgctacc agaaggagac tcagatgaga gggaacaatc aaaattggaa 540
gttaaggttt gggaccccaa tagcccactt acggatcgac agattgacca gtttttagtt 600
gtagcccgtg ccgtgggaac atttgcccga gccctggact gcagcagctc cgtgaggcaa 660
cccagccttc acatgagtgc agccgcagcc tcccgagaca tcaccttgtt tcatgccatg 720
gacacactgt acaggcacgg ctatgacctc agcagcgcca tcagtgtgct ggtgccgctc 780
ggagggccag tcctctgcag ggacgagatg gaggagtggt cggcctctga agcctgccta 840
ttcgaagaag cactggaaaa atacggcaaa gatttcaacg acattcgtca ggactttctc 900
ccgtggaaat ccttgactag catcattgaa tattattaca tgtggaaaac tactgacaga 960
tacgtgcagc agaagcgcct aaaggccgca gaagccgaga gcaaactgaa acaagtgtac 1020
atcccgactt acaaaccaaa tcccaaccaa atctccagca gcaacggcaa ggctggcact 1080
gtgaatggag ctgtggggac ccagtttcag ccccagagcg ccctcctagg gcgagcctgc 1140
gagagctgct acgccacaca gtctcatcag tggtattcct ggggcccacc taacatgcag 1200
tgtagactct gcgcgacctg ttggctgtat tggaaaaagt atggaggtct gaaaatgcct 1260
acccagtcag acgaagagaa gtctcccagc ccgactgcag aggacccgcg cgcaagaagc 1320
cacatgtccc ggcaggcctt gcagggcatg ccggtccgga acaccggaag ccccaagtct 1380
gcagtgaaga cccgccaagc tttcttcctt cgtactacgt atttcacaaa aattgctcgt 1440
caggtctgca aaagcaccct gcggctgcgg caggcagcga gacggccgtt tgttgctatt 1500
aattatgctg ccattagggc agaatatgca gacagacatg ccgaactttc tggaagccca 1560
ctgaaaagca gaagcaccag gaaacctttg tcgtgtatca ttgggtattt agagatccat 1620
cccgcaaaga aacctaatgt aattcggtct ccaccaagcc tgcaaactcc agctaccaag 1680
aggatgctcg ccgctccgaa tcacacatct ctgagcattc tggggaaaag aaactacagc 1740
catcacaatg gtctagatgg tacggattac aaggacgacg atgacaagta agcggccgc 1799
Claims (1)
1.MTA3的siRNA在制备黑素瘤治疗药物中的应用，所述siRNA如SEQ ID NO:007和SEQID NO:008所示，具体为：5’-ccaaauagcccacuuacggtt-3’ 、5’-ccguaagugggcuauuuggtt-3’。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111634204.7A CN114410778B (zh) | 2021-12-29 | 2021-12-29 | Pf543在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111634204.7A CN114410778B (zh) | 2021-12-29 | 2021-12-29 | Pf543在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114410778A CN114410778A (zh) | 2022-04-29 |
| CN114410778B true CN114410778B (zh) | 2024-03-19 |
Family
ID=81269352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111634204.7A Active CN114410778B (zh) | 2021-12-29 | 2021-12-29 | Pf543在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114410778B (zh) |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1473202A (zh) * | 2001-03-09 | 2004-02-04 | Ŧب������˾ | Rna序列扩增的方法和组合物 |
| CN1852974A (zh) * | 2003-06-09 | 2006-10-25 | 密歇根大学董事会 | 用于治疗和诊断癌症的组合物和方法 |
| CN105999250A (zh) * | 2011-05-24 | 2016-10-12 | 生物技术公司 | 用于癌症的个体化疫苗 |
| CN106817904A (zh) * | 2014-02-27 | 2017-06-09 | 博德研究所 | T细胞平衡基因表达、物质组合物及其使用方法 |
| WO2018055145A1 (en) * | 2016-09-26 | 2018-03-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Predicting response to pd-1 axis inhibitors |
| WO2019008001A1 (en) * | 2017-07-04 | 2019-01-10 | Curevac Ag | NEW NUCLEIC ACID MOLECULES |
| CN110974965A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-10 | 中南大学湘雅医院 | Atf3在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 |
| CN111133315A (zh) * | 2017-08-11 | 2020-05-08 | 得克萨斯州大学系统董事会 | 用于治疗癌症转移的靶向激酶 |
| WO2021048292A1 (en) * | 2019-09-11 | 2021-03-18 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and compositions for treating melanoma |
| CN113018447A (zh) * | 2021-03-17 | 2021-06-25 | 中山大学 | 一种基于SphK1抑制剂联合AAV9-SphK2病毒的新药物及其应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20200397816A1 (en) * | 2019-06-24 | 2020-12-24 | The Trustees Of Indiana University | Methods to treat inflammatory and smooth muscle cell proliferation disorders |
| US20210077582A1 (en) * | 2019-09-13 | 2021-03-18 | Duke University | Compositions and methods for increasing the efficacy of anti-pd-1 antibody immunotherapy |
-
2021
- 2021-12-29 CN CN202111634204.7A patent/CN114410778B/zh active Active
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1473202A (zh) * | 2001-03-09 | 2004-02-04 | Ŧب������˾ | Rna序列扩增的方法和组合物 |
| CN1852974A (zh) * | 2003-06-09 | 2006-10-25 | 密歇根大学董事会 | 用于治疗和诊断癌症的组合物和方法 |
| CN105999250A (zh) * | 2011-05-24 | 2016-10-12 | 生物技术公司 | 用于癌症的个体化疫苗 |
| CN106817904A (zh) * | 2014-02-27 | 2017-06-09 | 博德研究所 | T细胞平衡基因表达、物质组合物及其使用方法 |
| WO2018055145A1 (en) * | 2016-09-26 | 2018-03-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Predicting response to pd-1 axis inhibitors |
| WO2019008001A1 (en) * | 2017-07-04 | 2019-01-10 | Curevac Ag | NEW NUCLEIC ACID MOLECULES |
| CN111133315A (zh) * | 2017-08-11 | 2020-05-08 | 得克萨斯州大学系统董事会 | 用于治疗癌症转移的靶向激酶 |
| WO2021048292A1 (en) * | 2019-09-11 | 2021-03-18 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and compositions for treating melanoma |
| CN110974965A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-10 | 中南大学湘雅医院 | Atf3在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 |
| CN113018447A (zh) * | 2021-03-17 | 2021-06-25 | 中山大学 | 一种基于SphK1抑制剂联合AAV9-SphK2病毒的新药物及其应用 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| Caroline Imbert等.Resistance of melanoma to immune checkpoint inhibitors is overcome by targeting the sphingosine kinase-1.NATURE COMMUNICATIONS.2020,第11卷1-14. * |
| Joel C. Sunshine等.PD-L1 Expression in Melanoma: A Quantitative Immunohistochemical Antibody Comparison.Clin Cancer Res.2017,第23卷4938-4944. * |
| MTA1在肿瘤中的作用机制研究进展;黄春蓓;胡国华;;局解手术学杂志;20120831(第04期);423-424 * |
| Paramita Chakraborty等.Pro-Survival Lipid Sphingosine-1-Phosphate Metabolically Programs T Cells to Limit Anti-tumor Activity.Cell Rep.2019,第28卷1879-1893. * |
| Sphingosine kinase 1 promotes tumor immune evasion by regulating the MTA3-PD-L1 axis;Poyee Lau等;Cellular & Molecular Immunology;20220901;第19卷;1153-1167 * |
| 黑色素瘤靶向及免疫治疗新进展;陈欣琪等;肿瘤预防与治疗;20201231;第33卷;936-942 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114410778A (zh) | 2022-04-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Interactions between EGFR and PD-1/PD-L1 pathway: implications for treatment of NSCLC | |
| Pu et al. | Cyclooxygenase-2 inhibitor: a potential combination strategy with immunotherapy in cancer | |
| Jing et al. | BRD4 inhibition suppresses PD-L1 expression in triple-negative breast cancer | |
| AU2017224232B2 (en) | Whole-cell cancer vaccines and methods for selection thereof | |
| Zhong et al. | CAR-T cell therapy for lung cancer: a promising but challenging future | |
| Amaro et al. | Evidence of epidermal growth factor receptor expression in uveal melanoma: inhibition of epidermal growth factor-mediated signalling by Gefitinib and Cetuximab triggered antibody-dependent cellular cytotoxicity | |
| Hao et al. | MST4 inhibits human hepatocellular carcinoma cell proliferation and induces cell cycle arrest via suppression of PI3K/AKT pathway | |
| Zhuo et al. | CSTP1 inhibits IL-6 expression through targeting Akt/FoxO3a signaling pathway in bladder cancer cells | |
| WO2005075681A1 (ja) | 抗癌剤に対する癌細胞の感受性を検定する方法 | |
| Wang et al. | MicroRNA expression levels as diagnostic biomarkers for intraductal papillary mucinous neoplasm | |
| Guo et al. | CASP6 predicts poor prognosis in glioma and correlates with tumor immune microenvironment | |
| US20170252364A1 (en) | Compositions for treatment of acute lymphoblastic leukemia and methods of use thereof | |
| CN110974969B (zh) | Adora1在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 | |
| CN110974965B (zh) | Atf3在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 | |
| CN114410778B (zh) | Pf543在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 | |
| CN114350800B (zh) | Sphk1在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 | |
| JP6397765B2 (ja) | プロテアソーム阻害剤に応答するバイオマーカー | |
| CN110974964A (zh) | Dpcpx抑制剂在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用 | |
| Yang et al. | MALAT1 promotes tumorigenesis and increases cellular sensitivity to herceptin in HER2-positive breast cancer | |
| CN116474095A (zh) | 小g蛋白rbj的抑制剂的应用 | |
| CN114354928A (zh) | Mta3在制备pd-l1/pd-1单抗肿瘤免疫治疗用药中的应用 | |
| CN113274502A (zh) | 用于特定型三阴乳腺癌免疫治疗的组合物 | |
| CN106554962B (zh) | 过表达gpr160的癌症的预防、诊断和治疗 | |
| CN105671195B (zh) | miR-520c核苷酸的用途、药物组合物和试剂盒 | |
| Liu et al. | QDPR deficiency drives immune suppression in pancreatic cancer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |