CN111133315A - 用于治疗癌症转移的靶向激酶 - Google Patents

Abstract

本文中提供了用于通过施用靶向由体内激酶筛选确定的促进转移的激酶的激酶抑制剂来治疗脑转移的方法。

Description

用于治疗癌症转移的靶向激酶

本申请要求2018年8月11日提交的美国临时申请序列号62/544,597的优先权权益，其全部内容在此通过引用并入。

背景

本发明在国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的基金号R01CA112567和R01 CA184836的政府支持下完成。政府在本发明中具有一定的权利。

1.技术领域

本发明一般地涉及分子生物学和医学领域。更特别地，其涉及靶向激酶(targeting kinase)用于治疗癌症(特别是脑转移(brain metastasis))的方法。

2.背景技术

脑转移影响数百万癌症患者并且数目超过原发性脑肿瘤多于10比1。主要的肿瘤性疾病(例如，黑素瘤、肺癌、乳腺癌和结肠癌)具有高的脑转移发生率。脑转移诊断之后的一年存活小于20％。最近，靶向癌症治疗(例如，曲妥珠单抗、T-DM1)的进展通过更好地控制全身性疾病而延长了患者的存活。然而，当患者后来复发时，其以提高的速率(例如，超过30％)发生脑转移，这代表了在该成功靶向治疗时代中的新挑战。当前的治疗选择是有限的并且对于具有脑转移的患者仅是姑息性的。

构成大的酶家族的激酶催化ATP的γ-磷酸转移至蛋白质底物。可逆磷酸化在细胞信号传导过程中发挥最重要的作用并且受激酶和磷酸酶的调节。因此，激酶是大量信号转导过程的重要介质。异常的激酶活性与癌症以及代谢紊乱、免疫性疾病、神经系统疾病和其他病症相关。作为结果，激酶已成为对于人疾病重要的药物靶标类别。

许多激酶是癌细胞信号传导网络的中心节点。许多努力已使得成功开发了数种经FDA批准的针对多种促进癌症的激酶具有显著临床效力的抑制剂。已证明这些促进癌症的激酶是许多疾病环境中可靠的药物靶标，包括：曲妥珠单抗(Trastuzumab)(ErbB2)、拉帕替尼(Lapatinib)(ErbB2和EGFR)、伊马替尼(Imatinib)(BCR-Abl)、吉非替尼(Gefitinib)(EGFR)、依鲁替尼(Ibrutinib)(BTK)和维莫非尼(Vemurafenib)(BRAF)。然而，大多数现有的激酶抑制剂是基于原发性肿瘤中的靶标开发的；尚未做出努力来确定转移特异性的(尤其是脑转移特异性的)可成药分子靶标。因此，尽管当前经FDA批准的针对多种促进癌症的激酶的抑制剂可在抑制原发性肿瘤方面显示出显著的临床效力，但其在抑制脑转移方面显示出几乎没有或没有效力。因此，为了应对日益增长的脑转移临床挑战，存在尚未满足的确定其驱动因子(driver)并且在治疗上靶向它们以延长具有脑转移的患者的存活并改善其生活质量的需要。

发明内容

在第一个实施方案中，本公开内容提供了用于在患有癌症的对象中抑制脑转移的方法，其包括向所述对象施用有效量的激酶抑制剂，其中所述激酶抑制剂靶向选自以下的激酶：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、LIMK2、PAK4、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCI、TSSK6和ZC3HC1。在一些方面，对象是人。在某些方面，激酶抑制剂是siRNA或miRNA。在另一些方面，激酶抑制剂是选择性药理抑制剂。

在一些方面，癌症是乳腺癌。在一些特别的方面，乳腺癌进一步限定为三阴性乳腺癌。在另一些方面，癌症是肺癌。

在某些方面，在治疗之前不知道对象具有脑转移。在另一些方面，在治疗之前已知对象具有一个或更多个脑转移。

在一些方面，激酶抑制剂靶向CDK5或LIMK2。在某些方面，CDK5的激酶抑制剂是地那西利(dinaciclib)、双吲哚靛玉红(bis-indoleindirubin)、(S)-CR8、肯帕罗酮(kenpaullone)、PHA-793887、AT7519、罗斯考汀(roscovitine)、密西利(milciclib)、SNS-032或奥罗莫星(olomoucine)。在一些方面，LIMK2的激酶抑制剂是BMS-5、Pyr-1或T56-LIMKi。

在一些方面，BTK的激酶抑制剂是依鲁替尼(ibrutinib)、阿卡替尼(acalabrutinib)、ONO-4059、司培替尼(spebrutinib)、BGB-3111或HM71224。在某些方面，CAMK4的激酶抑制剂是KN-93。在一些方面，MAP2K7的激酶抑制剂是DTP3。在一些方面，PMVK的激酶抑制剂是CDDD_1633、CSDDD_2260、CSDDD_2419或木犀草素(luteolin)。在一些方面，PRKCI的激酶抑制剂是瑞得(ridaura)或RXDX-108。

在一些方面，激酶抑制剂经口、表面、静脉内、腹膜内、肌内、经内窥镜、经皮、皮下、局部或通过直接注射施用。在一些具体方面，激酶抑制剂静脉内施用。在一些特别的方面，激酶抑制剂被直接递送至脑。在一些方面，激酶抑制剂鞘内或鼻内施用。

在一些另外的方面，所述方法还包括至少施用第二治疗剂。在一些方面，第二治疗剂是化学治疗、放射治疗、基因治疗、手术、激素治疗、抗血管生成治疗或细胞因子治疗。在一些特别的方面，第二治疗剂是放射治疗、化学治疗、免疫治疗和/或代谢调节。在一些方面，第二治疗剂与激酶抑制剂同时施用。在某些方面，第二治疗剂与激酶抑制剂依次施用。

在另一个实施方案中，提供了用于在患有癌症的对象中治疗脑转移的方法，其包括向有此需要的对象施用有效量的与至少第二抗癌剂组合的激酶抑制剂，其中所述激酶抑制剂靶向选自以下的激酶：PCTK1、SPHK1、FRK、MAPK12、ERK5、MAP2K7、UCK2、DAK和PRKCD。在一些方面，癌症是乳腺癌。在一些特别的方面，乳腺癌进一步限定为三阴性乳腺癌。在另一些方面，癌症是肺癌。在一些方面，在治疗之前不知道对象具有脑转移。在另一些方面，在治疗之前已知对象具有一个或更多个脑转移。在一些方面，对象是人。

在一些特别的方面，激酶抑制剂靶向PCTK1、SPHK1、MAPK12或CDK5。在一些方面，MAPK12的激酶抑制剂是SB 203580、达马莫德(doramapimod)或LY2228820。在某些方面，PCTK1的激酶抑制剂是靛玉红E804、达拉菲尼(dabrafenib)或瑞巴替尼(rebastinib)。在一些特别的方面，PCTK1的激酶抑制剂是瑞巴替尼。在一些方面，SPHK1的激酶抑制剂是BML-258、SKI III、SKI 5C、MPA08、SKI 178、PF-543、芬戈莫德(fingolimod)或沙芬戈(safingol)。在一些特别的方面，SPHK1的激酶抑制剂是芬戈莫德或沙芬戈。在一些方面，CDK5的激酶抑制剂是地那西利、PHA-793887、AT7519、CYC-065、rocovitine或DCAM-422。在一些特别的方面，CDK5的激酶抑制剂是CYC-065或DCAM-422。

在一些方面，ERK5的激酶抑制剂是ERK5-IN-1、BIX 02189、XMD17-109或XMD 8-92。在某些方面，FRK的激酶抑制剂是达沙替尼(dasatinib)、莫特塞尼(motesanib)、达马莫德(doramapimod)、培利替尼(pelitinib)、索拉非尼(sorafenib)、凡德他尼(vandetanib)、卡奈替尼(canertinib)或伊马替尼(imatinib)。在某些方面，PAK4的激酶抑制剂是PF-3758309、LCH-7749944、乐园树酮(glaucarubinone)、KY-04031、KY-04045、1-菲基-四氢异喹啉衍生物、(-)-β-白毛莨碱((-)-β-hydrastine)、Inka1、GL-1196或GNE-2861。在一些方面，UCK2的激酶抑制剂是卡瓦胡椒素B(flavokawain B)或山姜素(alpinetin)。

在某些方面，激酶抑制剂经口、表面(topically)、静脉内、腹膜内、肌内、经内窥镜、经皮、皮下、局部或通过直接注射施用。在一些特别的方面，激酶抑制剂静脉内施用。在一些方面，激酶抑制剂鞘内或鼻内施用，例如用于向脑直接施用。

在一些方面，第二治疗剂是化学治疗、放射治疗、基因治疗、手术、激素治疗、抗血管生成治疗或细胞因子治疗。在一些特别的方面，第二治疗剂是放射治疗、化学治疗、免疫治疗和/或代谢调节。在一些方面，第二治疗剂与激酶抑制剂同时施用。在另一些方面，第二治疗剂与激酶抑制剂依次施用。

在另一个实施方案中，提供了用于在对象中抑制转移的方法，其包括向确定与对照相比具有提高的选自以下的至少2种激酶的活性的对象施用激酶抑制剂：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12、MAPK7、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1。在一些特别的方面，提高的活性是提高的表达水平、翻译后修饰或亚细胞定位的结果。在某些方面，提高的活性是通过提高的表达水平测量的。在一些方面，对象患有乳腺癌或肺癌。在一些特别的方面，转移进一步限定为脑转移。

在一些方面，与对照相比，对象被确定具有提高的选自以下的至少5种激酶(例如，6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23种激酶)的活性：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12、MAPK7、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1。在某些方面，与对照相比，对象被确定具有提高的选自以下的至少15种激酶的表达：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12、MAPK7、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1。在一些方面，与对照相比，对象被确定具有提高的选自以下的至少20种激酶的表达：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12、MAPK7、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1。

在另一个实施方案中，提供了用于在患有癌症的对象中治疗脑转移的组合物，其包含有效量的激酶抑制剂，其中所述激酶抑制剂靶向选自以下的激酶：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、LIMK2、PAK4、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCI、TSSK6和ZC3HC1。

本文中还提供了用于在患有癌症的对象中治疗脑转移的组合物，其包含有效量的激酶抑制剂和抗癌剂，其中所述激酶抑制剂靶向选自以下的激酶：PCTK1、SPHK1、FRK、MAPK12、ERK5、MAP2K7、UCK2、DAK和PRKCD。

在以上实施方案的某些方面，激酶抑制剂是地那西利、双吲哚靛玉红、(S)-CR8、肯帕罗酮、PHA-793887、AT7519、罗斯考汀、密西利、SNS-032、奥罗莫星、BMS-5、Pyr-1、T56-LIMKi、依鲁替尼、阿卡替尼、ONO-4059、司培替尼、BGB-3111、HM71224、DTP3、CDDD_1633、CSDDD_2260、CSDDD_2419、木犀草素、瑞得或RXDX-108、SB 203580、达马莫德、LY2228820、靛玉红E804、达拉菲尼、瑞巴替尼、BML-258、SKI III、SKI 5C、MP A08、SKI 178、PF-543、芬戈莫德、沙芬戈、芬戈莫德、沙芬戈、地那西利、PHA-793887、AT7519、CYC-065、DCAM-422、CYC-065或DCAM-422、ERK5-IN-1、BIX 02189、XMD17-109、XMD 8-92、达沙替尼、莫特塞尼、达马莫德、培利替尼、索拉非尼、凡德他尼、卡奈替尼、伊马替尼、PF-3758309、LCH-7749944、乐园树酮、KY-04031、KY-04045、1-菲基-四氢异喹啉衍生物、(-)-β-白毛莨碱、Inka1、GL-1196、GNE-2861、卡瓦胡椒素B或山姜素。

在以上实施方案的一些方面，癌症是乳腺癌。在某些方面，乳腺癌进一步限定为三阴性乳腺癌。在一些方面，癌症是肺癌。在某些方面，在治疗之前不知道对象具有脑转移。在另一些方面，在治疗之前已知对象具有一个或更多个脑转移。在一些方面，对象是人。

在某些方面，所述方法包括施用至少第二抗癌剂。在一些方面，第二抗癌剂是化学治疗、放射治疗、基因治疗、手术、激素治疗、抗血管生成治疗或细胞因子治疗。在一些特别的方面，第二治疗剂是放射治疗、化学治疗、免疫治疗或代谢调节。

从以下详细描述中，本发明的其他目标、特征和优点将变得明显。然而，应理解的是，虽然指示了本发明的一些优选实施方案，但是详细描述和具体实施例仅以举例说明的方式给出，因为对本领域技术人员而言，根据该详细描述，本发明的精神和范围内的多种变化和修改将变得明显。

附图说明

以下附图构成本说明书的一部分，并且被包含在内以进一步说明本发明的某些方面。通过参照与本文中呈现的具体实施方案的详细描述组合的这些附图中的一个或更多个可更好地理解本发明。

图1：脑转移生长驱动因子的体内激酶组(kinome)筛选的示意图。将稳定表达萤光素酶、GFP和多至24种激酶的合并物的MDA-MB-231亲本细胞(231p)(231p.萤光素酶.GFP)与表达TdTomato和空pWZL-Neo-Myr-Flag-DEST载体的231p细胞(231p.TdTomato)混合。将细胞以3∶1的激酶合并物∶载体比例混合，并且将2×10⁶个细胞注射到裸鼠的颈动脉中。当动物显示出神经症状并且其头通过IVIS确定为极度萤光素酶阳性时，处死小鼠，并基于GFP阳性使用解剖显微镜分离脑病灶。对病灶的一部分进行直接RNA提取，同时将其余部分解离并且将体外培养的细胞作为第0代。从回收的细胞提取gDNA，并通过靶向PCR扩增激酶载体序列。通过MiSeq对该DNA进行测序，从而产生体内选择的定量读出。

图2：体内选择之后相对序列富集的实例。在体内选择之前和之后的激酶序列读取计数的比较表明在体内大多数序列有明显丢失，那些被认为“命中(hit)”的激酶有显著的阳性选择。覆盖图是用MiSeq Reporter生成的。

图3A至3B：体内激酶过表达驱动的脑转移生长的验证。使用体内成像系统(Invivo imaging system，IVIS)量化由表达萤光素酶的癌细胞产生的发光信号。在第0天时每只动物注射1×10⁵个细胞并且将萤光素酶信号相对于第1天归一化。(A)CDK5、PCTK1、MAPK12和MARK4过表达的脑转移生长与相应载体对照的比较表明，除MARK4之外，所有激酶都被验证为脑转移的驱动因子。(B)SPHK1过表达的癌细胞与载体对照细胞的比较表明，SPHK1确实增强了脑转移生长。

图4A至4C：在实验性脑转移模型中，MDA-MB-231中的激酶过表达显著缩短了存活。比较了用激酶过表达细胞或相应载体细胞注射的小鼠的脑转移特异性存活。(A)PCTK1过表达将存活从中位时间128天缩短至60天。根据Mantel-Cox对数秩检验(log-rank test)，存活曲线显著地不同(p＝0.0004)。(B)SPHK1过表达将存活从中位时间131天缩短至102.5天。(C)CDK5过表达将存活从中位时间128天缩短至70天。

图5A至5B：在HCC1954Br实验性脑转移模型中，PCTK1敲低(knockdown)显著延迟了死亡。(A)显示颈动脉内注射之前shRNA介导的PCTK1的敲低效率的Western印迹。(B)用1×10⁵个细胞注射的裸鼠的存活分析显示PCTK1敲低将中位存活从57.5天延长至91天。

图6A至6B：在MDA-MB-435实验性脑转移模型中，SPHK1敲低显著延迟了死亡。(A)显示颈动脉内注射之前shRNA介导的SPHK1的敲低效率的Western印迹。(B)用1×10⁵个细胞注射的裸鼠的存活分析显示SPHK1敲低将中位存活从57.5天延长至77天。

图7A至7C：在4T1实验性脑转移模型中，在早期MAPK12敲低显著延迟了脑转移生长。(A)显示颈动脉内注射之前shRNA介导的MAPK12的敲低效率的Western印迹。(B)MAPK12敲低的癌细胞与载体对照细胞的比较表明MAPK12敲低延迟了脑转移生长。(C)用4T1细胞注射的BALB/c小鼠的存活分析显示MAPK12敲低将中位存活从15天延长至19天。根据Mantel-Cox对数秩检验，存活曲线显著地不同(p＝0.02)。

图8A至8D：在EO771实验性脑转移模型中，以CD8 T细胞依赖性方式，CDK5敲低在缺氧条件中降低了体外细胞增殖并显著延迟了死亡。(A)显示EO771细胞中shRNA介导的CDK5的敲低效率的Western印迹。(B)当与载体对照细胞相比时，MTT测定表明在缺氧条件下CDK5敲低细胞中的体外细胞增殖显著降低。(C)用EO771细胞注射的C57BL/6小鼠的存活分析显示，CDK5敲低将中位存活从19天延长至23.5天。(D)用对照或CDK5敲低的EO771细胞注射的C57BL/6小鼠的存活分析显示，当使用αCD8抗体耗尽CD8-T细胞时，这两组之间的小鼠存活没有显著性差异。

图9A至9B：EO771细胞中的CDK5敲低使其对罗斯考汀较不敏感并且对T细胞的细胞毒性更敏感。(A)细胞生存力曲线表明，与对照细胞相比，EO771细胞中的CDK5敲低使其对罗斯考汀(CDK5抑制剂)较不敏感。(B)细胞毒性T细胞杀伤测定表明，与EO771对照细胞相比，E0771细胞中的CDK5敲低对活化的T细胞的细胞毒性更敏感。在与肿瘤细胞共培养之前，将T细胞通过CD3/CD28抗体(100ng/mL)和IL-2(10ng/mL)活化。

图10A至10B：在缺氧条件下，LIMK2过表达促进体外细胞增殖。(A)显示MDA-MB-231细胞中LIMK2的过表达效率的Western印迹。(B)MTT测定表明与载体对照细胞相比，当LIMK2过表达时在缺氧条件下体外细胞增殖显著提高。

图11A至11C：在常氧和缺氧条件下二者，LKB1过表达促进体外细胞增殖。(A)显示MDA-MB-231细胞中LKB1的过表达效率的Western印迹。(B)如我们的MTT测定所示，当与载体对照细胞相比时，在常氧条件下，LKB1过表达的MDA-MB-231细胞显示出体外细胞增殖显著提高。(C)如我们的MTT测定所示，当与载体对照细胞相比时，在缺氧条件下，LKB1过表达的MDA-MB-231细胞显示出体外细胞增殖显著提高。

具体实施方式

为了通过利用激酶的可成药性(druggbility)来确定用于治疗脑转移的脑转移驱动激酶，本研究对人激酶组进行了无偏(unbiased)体内筛选以揭露促进乳腺癌脑转移并可充当用于有效抑制脑转移的治疗靶标的新激酶。虽然目前可用的激酶靶标已通过其在细胞培养皿中促进癌细胞生长的作用而被确定，但目前确定的激酶来源于专门在动物中寻找脑转移驱动因子的体内功能筛选。因此，通过该方法确定的靶标特别地在脑转移的生长中发挥作用。

具体地，在MDA-MB-231人三阴性乳腺癌细胞系中，将一个354种激酶的文库分成17个合并物，每个合并物包含21种激酶，并且将所得细胞注射到裸鼠的颈动脉中以诱导实验性脑转移。与231个载体对照细胞相比，数个这些激酶的合并物导致脑转移特异性死亡率的急剧提高。下一代测序(Next-generation sequencing，NGS)和遗传分析确定，这些侵袭性脑转移瘤富集有体内某些激酶。这些努力揭示了超过20种促进脑转移的激酶，其包含ADCK4(COQ8B)、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12(p38γ)、MAPK7(ERK5)、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1(表1)。

为了进一步测试这些激酶，对一些激酶进行基因敲低以测试靶向这些已确定的脑转移驱动激酶对抑制脑转移的效果。实际上，敲低一些最高命中抑制了实验性脑转移并显著延长了携带脑转移的小鼠的存活。具体地，在人癌细胞模型以及早期4T1小鼠乳腺肿瘤实验性脑转移模型中，敲低激酶(例如PCTK1、SPHK1、MAPK12和CDK5)导致细胞增殖降低和脑转移生长延迟。

在本研究中，还通过在实验性脑转移小鼠模型中过表达激酶来测定靶向筛选中确定的这些激酶中的一些来抑制脑转移的效力。CDK5、PCTK1、MAPK12、LIMK2和SPHK1的过表达导致脑转移生长的提高。特别地，在实验性脑转移小鼠模型中，激酶(例如SPHK1、PCTK1、LIMK2和CDK5)的过表达导致存活缩短。因此，可靶向本文中筛选中确定的激酶以用于抑制脑转移，例如乳腺癌脑转移。

因此，在某些实施方案中，本公开内容提供了靶向从激酶组筛选确定的脑转移驱动激酶以用于有效抑制脑转移的方法。本文中确定的激酶可被抑制剂(包括遗传、化学、免疫和代谢抑制剂)靶向。激酶抑制剂可与目前的脑转移护理标准(例如，放射治疗、化学治疗、免疫治疗和代谢调节)组合使用。

I.定义

如本文在说明书中使用的，没有数量词修饰的名词可意指一个/种或更多个/种。如本文在权利要求书中使用的，当与词语“包含/包括”联合使用时，没有数量词修饰的名词可意指一个/种或多于一个/种。

除非明确地指出仅指替代方案或者替代方案相互排斥，否则权利要求书中术语“或/或者”的使用用于意指“和/或”，但是本公开内容支持指仅替代方案和“和/或”的定义。本文中使用的“另一”可意指至少第二个或更多个。术语“约”、“基本上”和“大约”通常意指所述值加上或减去5％。

如本文中使用的术语“患者”或“对象”是指活的哺乳动物生物体，例如人、猴、牛、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠或其转基因物种。在某些实施方案中，患者或对象是灵长类。人患者的一些非限制性实例是成人、青少年、婴儿和胎儿。

“治疗”疾病或病症是指这样的执行方案，其可包括向患者施用一种或更多种药物，试图以减轻疾病的迹象或症状。可期望的治疗作用包括降低疾病进展的速度、改善或减轻疾病状态，以及缓解或改善预后。减轻可在疾病或病症的迹象或症状出现之前，以及在其出现之后发生。因此，“治疗”可包含“预防”疾病或不期望的病症。另外，“治疗”不需要完全减轻迹象或症状、不需要治愈，并且特别地包括仅对患者产生轻微作用的方案。

在说明书和/或权利要求书中使用的术语“有效的”意指足以实现期望的、预期的或想要的结果。当在用化合物治疗患者或对象的情况下使用时，“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”意指当向对象或患者施用以治疗或预防疾病时化合物的量是足以实现疾病的这样的治疗或预防的量。

“预防”包括：(1)在可能处于疾病风险之中和/或易患疾病但尚未经历或显示疾病的任何或所有病理状况或症状的对象或患者中抑制疾病的发作，和/或(2)在可能处于疾病风险之中和/或易患疾病但尚未经历或显示疾病的任何或所有病理状况或症状的对象或患者中减缓疾病之病理或症状的发作。

如本文中通常使用的“可药用”是指与合理的利益/风险比相称的在合理的医学判断范围内适合用于与人和动物的组织、器官和/或体液接触而无过度的毒性、刺激性、变应性应答或者其他问题或并发症的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

“可药用盐”意指本文中公开的化合物的盐，其是如上定义的可药用的并且其具有期望的药理学活性。这样的盐包括与无机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或者与有机酸形成的酸加成盐，所述有机酸例如1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、2-萘磺酸、3-苯基丙酸、4，4′-亚甲基双(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、4-甲基双环[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸、乙酸、脂肪族单羧酸和二羧酸、脂肪族硫酸、芳香族硫酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环戊烷丙酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、庚酸、己酸、羟基萘甲酸、乳酸、月桂基硫酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、黏康酸、邻(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、草酸、对氯苯磺酸、经苯基取代的烷酸、丙酸、对甲苯磺酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、叔丁基乙酸、三甲基乙酸等。可药用盐还包括碱加成盐，其可在存在的酸性质子能够与无机或有机碱反应时形成。可接受的无机碱包括氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化铝和氢氧化钙。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。应该认识到，形成本发明任何盐的一部分的特定阴离子或阳离子并不重要，只要盐整体上是药理学上可接受的即可。可药用盐的另外的实例及其制备和使用方法示于Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，and Use(P.H.Stahl&C.G.Wermuth eds.，Verlag Helvetica Chimica Acta，2002)中。

“可药用载体”、“药物载体”或简称“载体”是与活性成分药物一起配制的可药用物质，其参与携带、递送和/或运输化学试剂。药物载体可用于改善药物的递送和有效性，包括例如控制释放技术以调节药物生物利用度、降低药物代谢和/或降低药物毒性。一些药物载体可提高药物递送至特定靶部位的有效性。载体的一些实例包括：脂质体、微球(例如，由聚(乳酸-乙醇酸)共聚物制成)、白蛋白微球、合成聚合物、纳米纤维、蛋白质-DNA复合物、蛋白质缀合物、红细胞、病毒微体(virosome)和树枝状聚合物。

“抑制剂”或“拮抗剂”是降低或抑制给定靶标(例如激酶)的活性的化合物。

如本文中使用的术语“蛋白激酶”或“激酶”是根据其平常的普通含义使用的并且是指能够催化磷酸基团从高能、供磷酸分子(phosphate-donating molecule)向特定底物(例如磷酸化氨基酸残基，例如蛋白质上的氨基酸残基，或氨基醇)转移的酶。通常来说，特定的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基被磷酸化。因此，蛋白激酶涵盖丝氨酸蛋白激酶、苏氨酸蛋白激酶和酪氨酸蛋白激酶。“蛋白激酶的抑制剂”或“激酶抑制剂”是降低蛋白激酶活性的化合物或试剂。在一些实施方案中，“激酶抑制剂”是通过与蛋白激酶结合而降低蛋白激酶活性的化合物。因此，“激酶抑制剂”可以以竞争性或非竞争性方式抑制酶的活性。

“对照”或“对照实验”是根据其平常的普通含义使用的并且是指其中实验的对象或试剂如在平行实验中一样被处理只是省略了操作、试剂或实验变量的实验。在一些情况下，对照被用作评价实验作用的比较标准。

“接触”是根据其平常的普通含义使用的并且是指允许至少两种不同物质(例如，包括生物分子的化学化合物或细胞)变得足够接近以反应、相互作用或物理接触的过程。然而，应当理解的是，所得反应产物可直接从所添加试剂之间的反应产生，或者从来自可在反应混合物中产生的一种或更多种所添加试剂的中间体产生。术语“接触”包括将抑制剂与激酶一起孵育。

如本文中限定的关于激酶-抑制剂相互作用的术语“抑制”及其变化形式意指相对于在不存在抑制剂的情况下的激酶活性对激酶活性产生负面影响(例如，降低)。因此，抑制至少部分地包括部分或完全地阻断刺激；降低、防止或延迟活化；或者使信号转导失活、脱敏或下调。类似地，“抑制剂”是例如通过结合、部分或完全阻断刺激；降低、防止或延迟活化；或者使信号转导失活、脱敏或下调来抑制激酶活性的化合物。

“选择性”意指对给定激酶的亲和力比对其他激酶的亲和力高至少5倍至10倍，优选25倍，更优选100倍，仍优选150倍。

如本文中使用的短语“ATP结合囊(ATP-binding pocket)”是指结合ATP的激酶的活性位点。ATP结合的激酶的活性位点是能够与ATP分子或ATP竞争性抑制剂相互作用和或与之结合的一组氨基酸残基。

如本文中使用的术语“经突变”是指具有非天然(例如，非野生型)氨基酸序列的激酶。经突变激酶通常是重组的(例如，经改造的)。在如下所述的一些实施方案中，经突变激酶在看门人氨基酸位置处具有半胱氨酸残基替换。如本文中使用的术语“未经突变”是指其中不存在突变(例如，将半胱氨酸残基替换为看门人氨基酸位置)的相应的激酶(例如，天然或野生型序列)。因此，在一些情况下，未经突变是指野生型或天然激酶。在一些其他情况下，相应的激酶是具有类似但不同替换的另一种重组激酶。

“转移”是由癌细胞从原发性肿瘤向身体其他部分的播散所引起的与原发性肿瘤位置不同的癌细胞区域。在诊断原发性肿瘤团块时，可监测对象的转移的存在。转移最常通过单独或组合使用磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)扫描、计算机断层扫描(computed tomography，CT)扫描、血液和血小板计数、肝功能研究、胸部X射线和骨扫描以及对特定症状的监测来检测。“可检测的”转移是可通过磁共振成像、计算机断层扫描或正电子发射断层扫描(positron emission tomography)识别的细胞簇。在某些非限制性实施方案中，转移细胞簇可包含至少约1×10⁷个细胞。在某些实施方案中，可检测的转移可包含大小为大于约5mm或约10mm的细胞簇。

术语“小分子”是本领域的术语并且包括小于约1000分子量或小于约500分子量的分子。在一个实施方案中，小分子不是仅包含肽键。在另一个实施方案中，小分子不是寡聚的。可筛选活性的示例性小分子化合物包括但不限于肽、肽模拟物、核酸、碳水化合物、小的有机分子(例如，聚酮类)(Cane et al.，1998)和天然产物提取物文库。在另一个实施方案中，化合物是小的有机非肽化合物。在另一个实施方案中，小分子不是生物合成的。

II.靶向激酶

在某些实施方案中，本公开内容提供了通过施用通过本研究的体内激酶筛选确定为促进转移的激酶(表1)的激酶抑制剂来治疗(例如，抑制或降低)转移(例如脑转移)的方法。治疗可在患有原发性肿瘤的对象中进行以抑制转移(特别是脑转移)的发生。在另一些方面，对象可被诊断出患有转移性肿瘤(例如脑转移)，并且治疗使脑转移降低了例如至少10％，特别是20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。

可降低促进转移的激酶水平的治疗剂(例如激酶抑制剂)包括本领域众所周知的那些，例如反义核酸、shRNA、siRNA、小分子、多肽、抗体或抗体片段、多核苷酸、包括多糖的碳水化合物、脂质、药物，以及其模拟物、衍生物和组合。在一些特别的方面，激酶被对特定激酶具有选择性的激酶抑制剂所抑制。本文中公开了表1中每种激酶的示例性选择性激酶抑制剂；然而，本领域已知的任何选择性激酶抑制剂均可用于本发明方法。

表1：通过NGS测序确定的在体内富集的激酶序列。

A.PCTK1(CDK16)

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PCTAIRE-1(PCTK1)基因(也称为细胞周期蛋白依赖性激酶16(CDK16))编码在囊泡介导的转运过程和胞吐作用中发挥作用的激酶。其还调节神经元分化和树突发育。PCTK1可被RNAi和/或对PCTK1具有选择性的药理抑制剂抑制。例如，可在本方法中使用的对PCTK1具有选择性的一种抑制剂是靛玉红E804或其类似物(Hoessel etal.，1999；Cweik et al.，2015；二者均通过引用并入本文)。抑制剂通过经由H键相互作用与铰链区相互作用而与ATP位点结合。可用于抑制PCTK1的另一些抑制剂包括I型激酶抑制剂，例如三唑-二胺化合物Cdk1/2抑制剂III、阿特波龙(Alsterpaullone)、2-氰乙基、靛玉红E804和氨基嘧啶基化合物Cdk2/9抑制剂。CDK2抑制剂(例如羟吲哚GW300657X和GW416981X，以及吡唑并[1，5-b]哒嗪化合物GW779439X)也可用于抑制PCTK1。

在一些特别的方面，达拉菲尼或瑞巴替尼用于抑制PCTK1。瑞巴替尼是多靶标II型激酶抑制剂，其已被开发为抑制BCR-ABL以及药物抗性看门人突变型ABL。达拉菲尼是突变型BRAF^V600E的ATP竞争性I型抑制剂，其已被批准用于晚期黑素瘤的临床使用。在一个具体方面，PCTK1的抑制剂是瑞巴替尼。

靛玉红E804可通过以下方法合成。简单地说，在氮气下向吲哚乙酸酯2(5.00g，28.5mmol)在无水甲醇(70mL)中的溶液添加靛红1(4.20g，28.8mmol)和碳酸钠(6.50g，61.3mmol)。搅拌30分钟并静置24小时之后，将浆料过滤并用冷甲醇和冷水洗涤。将获得的靛玉红3(2.50g，9.5mmol)和盐酸羟胺(1.7g，24.7mmol)在吡啶(60mL)中一起回流1.5小时。随后，将混合物倒入1M盐酸溶液(100mL)中。过滤掉红色/橙色沉淀物，重新溶解在1M氢氧化钠(70mL)中，并用1M盐酸(150mL)重新沉淀。将粗产物过滤、干燥并从乙醇/水(7∶2)重结晶以得到作为鲜红色/橙色结晶的产物。最后，将靛玉红-3’-肟4(55.4mg，0.20mmol)和4-溴丁烷-1，2-二醇5(40.1mg，0.24mmol)溶解在无水二甲基甲酰胺(1.5mL)中。向其中添加三乙胺(33μL，0.24mmol)。将反应在氮气下搅拌4小时，然后在真空中去除溶剂以产生粗制棕色油，将其经由柱色谱纯化以得到作为红色固体的产物(36mg，41％产率)。

B.SPHK1

鞘氨醇激酶(SPHK1)促进细胞生长和存活并且是调节S1P/神经酰胺变阻器的关键酶。SPHK的非同功酶特异性抑制剂(例如L-苏式-二氢鞘氨醇(沙芬戈)和N，N-二甲基鞘氨醇(N，N-dimethylsphingosine，DMS))可用于本方法。在一些方面，SPHK1被以下所抑制：如美国专利No.8,372,888中所述的BML-258；如美国专利公布No.20080167352中所述的[3-(4-氯-苯基)-金刚烷-1-羧酸(吡啶-4-基甲基)-酰胺；[(2R)-1-[[4-[[3-(苯磺酰基甲基)-5-甲苯氧基]甲基]苯基]甲基]吡咯烷-2-基]甲醇(PF-543)；鞘氨醇激酶抑制剂2(SKI II；4-[[4-(4-氯苯基)-2-噻唑基]氨基]苯酚)；SKI 5C(CAY10621)；N，N-二甲基鞘氨醇((2S，3R，4E)-2-(二甲基氨基)-4-十八烯-1，3-二醇)；MP A08(4-甲基-N-[2-[[[2-[[(4-甲苯基)磺酰基]氨基]苯基]亚氨基]甲基]苯基]苯磺酰胺)；SKI 178(N’-(1-(3，4-二甲氧基苯基)亚乙基)-3-(4-甲氧苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼)；或者其类似物、衍生物或可药用盐。在一些特别的方面，SPHK1的抑制剂是芬戈莫德(Gilenya)或沙芬戈。

C.MAPK12(p38γ)

丝裂原活化蛋白激酶12(Mitogen-activated protein kinase 12，MAP激酶12)(也称为胞外信号调节激酶6(extracellular signal-regulated kinase6，ERK6)或应激活化蛋白激酶3(stress-activated protein kinase 3，SAPK3))是在人中由MAPK12基因编码的酶。丝裂原活化蛋白激酶家族成员的活化是用于转导胞外信号的主要机制。应激活化蛋白激酶是MAP激酶的一个亚类。该基因编码的蛋白质在成肌细胞向肌管的分化期间发挥信号转导物的作用。MAPK12可被SB 203580、达马莫德(BIRB 796)、LY2228820，或本领域已知的其他MAPK12抑制剂抑制。

D.CDK5和CDK5R1

细胞分裂蛋白激酶5是在人中由CDK5基因编码的酶。CDK5是大脑正常发育所必需的并且要被活化，CDK5则必须与CDK5R1或CDK5R2缔合。在本发明的方法中，CDK5或CDK5R1可被地那西利(SCH727965)、双吲哚靛玉红、(S)-CR8、肯帕罗酮、PHA-793887、AT7519、罗斯考汀(塞利西利(seliciclib)，CYC202)、密西利(PHA-848125)、SNS-032(BMS-387032)或奥罗莫星抑制。在一些特别的方面，CDK5的抑制剂是CYC-065或DCAM-422。

E.LIMK2

LIM激酶2(LIM kinase 2，LIMK2)是肌动蛋白细胞骨架的调节物。LIMK2磷酸化并因此使肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizing factor，ADF)家族的成员丝切蛋白(cofilin)灭活。LIMK2的示例性抑制剂包括但不限于BMS-5(CAS No.1338247-35-0)、Pyr-1(LIMNIB)、虎刺醛(damnacanthal)、Par-3、T56-LIMKi和LX7101。LX7101是基于吡咯并嘧啶的表面递送的LIM结构域激酶2(LIMK2)的抑制剂，LIM结构域激酶2是与眼内压调节相关的激酶。

F.ADCK4(COQ8B)

辅酶Q8B(Coenzyme Q8B，COQ8B)或包含AarF结构域的蛋白激酶4(AarF Domain-Containing Protein Kinase 4，ADCK4)是用于有氧细胞呼吸的脂溶性电子转运蛋白。ADCK4可被RNAi或本领域已知的抑制剂抑制。

G.BTK

布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton′s tyrosine kinase，Btk或BTK)(也称为酪氨酸蛋白激酶BTK)是在人中由BTK基因编码的酶。BTK是在B细胞发育中发挥作用的激酶。BTK在被B细胞受体(B cell receptor，BCR)和肥大细胞上的FCER1的接合所活化的信号传导通路中的功能已充分建立。BTK在人中的功能性突变导致原发性免疫缺陷病，其特征在于B细胞发育在祖B细胞和前B细胞(pro-and pre-B cell)阶段之间存在阻碍的缺陷。BTK的示例性抑制剂包括但不限于依鲁替尼(PCI-32765)、阿卡替尼、ONO-4059、司培替尼(AVL-292、CC-292)、BGB-3111和HM71224。

H.CAMK4

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV型是在人中由CAMK4基因编码的酶。该基因的产物属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，并且属于Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶亚家族。该酶是具有有限的组织分布的多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其已经参与淋巴细胞、神经元和雄性生殖细胞中的转录调节。CAMK4的示例性抑制剂是KN-93(N-[2-[[[3-(4-氯苯基)-2-丙烯基]甲基氨基]甲基]苯基]-N-(2-羟基乙基)-4-甲氧基苯磺酰胺)。

I.CLK3

CDC样激酶3(CDC Like Kinase 3，CLK3)是核双特异性激酶，其调节富丝氨酸/精氨酸(serine/arginine-rich，SR)的剪接因子家族的核内分布。CLK3的示例性抑制剂是KH-CB19。可使用的另一些抑制剂包括R547、A-674563、NVP-TAE684和AT-7519。

J.DAK

三激酶/FMN环化酶或二羟基丙酮激酶2同源物(Dihydroxyacetone Kinase2Homolog，DAK)是在人中由DAK基因编码的酶。DAK使二羟基丙酮磷酸化，并且还催化从FAD形成核黄素4′，5′-磷酸(又名细胞周期蛋白FMN)。DAK可被RNAi或本领域已知的抑制剂抑制。

K.ERK5(MAPK7)

丝裂原活化蛋白激酶7(也称为MAP激酶7和ERK5)是MAP激酶家族的成员。MAP激酶充当多个生物化学信号的整合点，并且参与多种细胞过程，例如增殖、分化、转录调节和发育。该激酶由丝裂原活化蛋白激酶激酶5(mitogen-activated protein kinase kinase 5，MAP2K5/MEK5)特异性活化。其参与多种受体分子包括受体酪氨酸激酶和G蛋白偶联受体的下游信号传导过程。响应于胞外信号，该激酶易位至细胞核，在此其通过磷酸化并活化不同的转录因子来调节基因表达。ERK5的示例性抑制剂包括但不限于ERK5-IN-1(11-环戊基-2-[[2-乙氧基-4-[[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]羰基]苯基]氨基]-5，11-二氢-5-甲基-6H-嘧啶并[4，5-b][1，4]苯二氮

-6-酮)、BIX 02189、XMD 17-109和XMD 8-92。

L.FRK(PTK5)

Fyn相关激酶(Fyn-related kinase，FRK)属于TYR蛋白激酶家族。该酪氨酸激酶是核蛋白并且可在细胞周期的G1和S期期间发挥功能并抑制生长。FRK的示例性抑制剂包括但不限于酪氨酸激酶抑制剂，例如达沙替尼、莫特塞尼(A1VIG-706)、达马莫德(BIRB 796)、培利替尼(EKB-569)、索拉非尼、凡德他尼、卡奈替尼(CI-1033)和伊马替尼(STI-571)。

M.MAP2K7(MKK7/GADD45b)

双特异性丝裂原活化蛋白激酶激酶7(也称为MAP激酶激酶7或MKK7)是在人中由MAP2K7基因编码的酶。该蛋白质是丝裂原活化蛋白激酶激酶家族的成员。MKK7参与介导细胞对促炎性细胞因子和环境应激的应答的信号转导。MAP2K7可被DTP3((R)-2-((R)-2-乙酰胺基-3-(4-羟苯基)丙酰胺基)-N-((R)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷)-2-基)-5-胍基戊酰胺三氟乙酸盐)抑制。

N.PAK4

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PAK 4是PAK丝氨酸/苏氨酸激酶家族的六个成员之一。PAK4定位在细胞质和细胞核的亚细胞结构域中。PAK4调节细胞骨架重塑、表型信号传导和基因表达，并且影响定向运动、侵入、转移和生长。PAK4可被PF-3758309、LCH-7749944、乐园树酮、KY-04031、KY-04045、1-菲基-四氢异喹啉衍生物、(-)-β-白毛莨碱、Inka1、GL-1196、GNE-2861和微RNA(例如miR-145、miR-433和miR-126)抑制。

O.PMVK

磷酸甲羟戊酸激酶(Phosphomevalonate kinase，PMVK)处于甲羟戊酸途径中并且其催化甲羟戊酸5-磷酸转化为甲羟戊酸5-二磷酸，其是类异戊二烯生物合成的甲羟戊酸途径中的第五步骤。PMVK可通过施用以下来抑制：CSDDD_1633(1，4-双((2-((γ¹-氧代烷基)二氧代-γ⁶-硫烷基)-4-甲基苯基)氨基)-5，8-二羟基-4a，9a-二氢蒽-9，10-二酮)、CSDDD_2260(2，2′-((4-((2-(γ¹-氧代烷基)-2-氧乙基)硫代)-[1，1′-联苯]-2，6-二基)双(硫二烷基))二乙酸盐、CSDDD_2419((E)-4-((2，4-二羟基苯基)二氮烯基)-5-甲基萘-2，7-二磺酸盐)或木犀草素(luteolin)，如Boonsri et al.，2013中所述(通过引用并入本文)。

P.PRKACB和PRKACG

cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基β(cAMP-dependent protein kinase catalyticsubunit beta，PRKACB)是具有多种细胞功能的信号传导分子。cAMP通过活化蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)而发挥其作用，该蛋白激酶A通过不同靶蛋白的磷酸化转导信号。PKA的失活全酶是由两个调节亚基和两个催化亚基构成的四聚体。cAMP导致失活全酶解离为与四个cAMP结合的调节亚基和两个游离单体催化亚基的二聚体。AMP依赖性蛋白激酶催化亚基γ(AMP-dependent protein kinase catalytic subunit gamma，PRKACG)在巨噬细胞的CCR5途径和缝隙连接的信号传导中发挥作用。PRKACB或PRKACG可被RNAi或本领域已知的抑制剂抑制。

Q.PRKCI和PRKCD

蛋白激酶Cι型(Protein kinase C iota type，PRKCI)和蛋白激酶Cδ型(Proteinkinase C delta type，PRKCD)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的蛋白激酶C(protein kinaseC，PKC)家族的成员。PKC家族包含至少八个成员，这些成员差异表达且参与多种细胞过程。该蛋白激酶是钙非依赖性和磷脂依赖性的。其不被佛波酯或二酰甘油活化。该激酶可通过与小GTP酶RAB2直接相互作用而被募集到囊泡管簇(vesicle tubular cluster，VTC)中，其中该激酶使甘油醛3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPD/GAPDH)磷酸化并在早期分泌途径中的微管动力学中发挥作用。发现该激酶是BCL-ABL介导的针对药物诱导的细胞凋亡的抗性所必需的并因此保护白血病细胞免受药物诱导的细胞凋亡。这些激酶的示例性抑制剂包括但不限于蛋白激酶抑制剂，例如双吲哚基马来酰亚胺II、Calphostin C、二氢鞘氨醇和LY 333531盐酸盐。在一些具体方面，PRKCI的抑制剂是金诺芬(auranofin)或RXDX-108。

R.TSSK6

睾丸特异性丝氨酸激酶6(Testis-specific serine kinase 6，TSSK6)。编码的激酶具有广泛的表达模式，但由于对生育力的作用而被描述为睾丸特异性。TSSK6可被RNAi或本领域已知的抑制剂抑制。

S.UCK2

尿苷-胞苷激酶2(Uridine-cytidine kinase 2，UCK2)分别催化尿苷和胞苷磷酸化为尿苷一磷酸(uridine monophosphate，UMP)和胞苷一磷酸(cytidine monophosphate，CMP)。这是产生RNA和DNA合成所需的嘧啶核苷三磷酸中的第一步骤。在一些方面，UCK2的抑制剂是卡瓦胡椒素B或山姜素(Malami et al.，2016)。

T.ZC3HC1

ALK的核相互作用伴侣(Nuclear-interacting partner of ALK，NIPA)(也称为锌指C3HC型蛋白1(zinc finger C3HC-type protein 1，ZC3HC1))在许多组织和细胞类型中普遍表达，尽管仅在核亚细胞位置中表达。NIPA是skp1 cullin F-box(SCF)型泛素E3连接酶(skp1 cullin F-box-type ubiquitin E3 ligase，SCFNIPA)复合蛋白质，其参与调节进入有丝分裂。ZC3HC1可被RNAi或本领域已知的抑制剂抑制。

U.RNA干扰

在一些实施方案中，激酶可被RNA干扰(例如siRNA或miRNA)所抑制。RNA可以是siRNA、shRNA、质粒、mRNA、miRNA或ncRNA，特别是siRNA或miRNA治疗剂。miRNA可以是miRNA模拟物或miRNA前体。RNA大小在长度上可少于100个核苷酸，例如在长度上少于75个核苷酸，特别是少于50个核苷酸。例如，RNA的长度可为约10至100个核苷酸，例如20至50个核苷酸，特别是10至20个、15至25个、20至30个、25至35个、30至40个，或45至50个核苷酸。

RNA可以是经修饰或未经修饰的。RNA可包含一个或更多个核苷酸的改变。这样的改变可包括添加非核苷酸材料，例如添加至RNA的末端或内部(在RNA的一个或更多个核苷酸处)。在某些方面，RNA分子包含3’-羟基。本公开内容的RNA分子中的核苷酸还可包含非标准核苷酸，包括非天然存在的核苷酸或脱氧核糖核苷酸。双链寡核苷酸可包含经修饰骨架，例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或本领域中已知的其他经修饰骨架，或者可包含非天然的核苷间键联。siRNA的另外的修饰(例如，2’-O-甲基核糖核苷酸、2’-脱氧-2’-氟核糖核苷酸、“通用碱基”核苷酸、5-C-甲基核苷酸、一个或更多个硫代磷酸酯核苷酸间键联和反向脱氧无碱基残基(deoxyabasic residue)引入)可见于美国公布No.20040019001和美国专利No.6,673,611(其各自通过引用整体并入)。上述所有这样的改变的核酸或RNA被统称为经修饰siRNA。

优选地，RNAi能够使蛋白质的表达降低至少10％、20％、30％或40％，更优选地降低至少50％、60％或70％，并且甚至更优选地降低至少75％、80％、90％、95％或更多。

如本文中所述的方法或组合物中使用的siRNA可包含与由所述激酶的NCBI参照序列编码的mRNA序列互补的部分。在一个实施方案中，siRNA包含双链部分(双链体(duplex))。在一个实施方案中，siRNA的长度为20至25个核苷酸。在一个实施方案中，siRNA包含19至21个核心RNA双链体，其独立地在一条或两条链上具有一个或2个核苷酸3’突出端。在一个实施方案中，突出端是UU。siRNA可被5’磷酸化或不被5’磷酸化，并且可用任何本领域中已知的修饰进行修饰以提高效力和/或针对核酸酶降解的抗性。在一个非限制性实施方案中，可施用siRNA以使得其被转染到一个或更多个细胞中。在一个实施方案中，siRNA可包含含有第一和第二链的双链RNA，其中RNA的一条链与基因的RNA转录物的一部分80％、85％、90％、95％或100％互补。

在一个实施方案中，本公开内容的siRNA的单链组件的长度为14至50个核苷酸。在另一个实施方案中，siRNA的单链组件的长度为14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个核苷酸。在另一个实施方案中，本公开内容的siRNA的单链组件的长度为21个核苷酸。在另一个实施方案中，本公开内容的siRNA的单链组件的长度为22个核苷酸。在另一个实施方案中，本公开内容的siRNA的单链组件的长度为23个核苷酸。在一个实施方案中，本公开内容的siRNA的长度为28至56个核苷酸。

III.治疗方法

本文中提供了用于在个体中治疗或延迟癌症，特别是癌症转移的进展的方法，其包括向个体施用有效量的激酶抑制剂，例如本公开内容中确定的促进转移的激酶(表1)的抑制剂。本公开内容的某些实施方案涉及在对象中治疗或预防疾病的方法，其包括施用促进转移的激酶的抑制剂。所述疾病可以是可影响对象的任何疾病。在一些特别的实施方案中，疾病是过度增殖性疾病。在一些更特别的实施方案中，疾病是癌症。

在一些实施方案中，提供了用于在对象的脑中抑制转移性癌细胞的生长和/或存活的方法，其包括用治疗有效量的表1的激酶的抑制剂治疗所述对象。在某些实施方案中，提供了确定对象中的脑肿瘤或转移性脑肿瘤是否将从用表1的激酶的抑制剂进行的治疗中获得治疗益处的方法，例如通过测量所述激酶在对象中(例如在所述对象的血液中)的表达。

癌症可以是实体瘤、转移癌或非转移癌。在某些实施方案中，癌症可起源于膀胱、血液、骨、骨髓、脑、乳腺、结肠、食管、胃肠、牙龈(gum)、头、肾、肝、肺、鼻咽、颈、卵巢、前列腺、皮肤、胃、睾丸、舌或子宫。在某些实施方案中，癌症是人卵巢癌或乳腺癌。另外，癌症可特别地为以下组织学类型，尽管其并不限于这些：恶性赘生物；癌；未分化的癌；巨细胞和梭形细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛母质癌；移行细胞癌；乳头状移行细胞癌；腺癌；恶性胃泌素瘤；胆管癌；肝细胞癌；混合肝细胞癌和胆管癌；小梁腺癌；腺样囊性癌；腺瘤性息肉中的腺癌；腺癌，家族性结肠息肉；实体癌；恶性类癌瘤；细支气管-肺泡腺癌；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸细胞癌；嗜酸性腺癌；嗜碱细胞癌；透明细胞腺癌；颗粒细胞癌；滤泡腺癌；乳头和滤泡腺癌；非包膜硬化性癌；肾上腺皮质癌；子宫内膜癌；皮肤附属物癌；顶浆分泌腺癌；皮脂腺癌；耵聍腺癌；黏液表皮样癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；黏液性囊腺癌；黏液性腺癌；印戒细胞癌；浸润性导管癌；髓样癌；小叶癌；炎性癌；乳腺佩吉特病(paget′s disease，mammary)；腺泡细胞癌；腺鳞癌；具有鳞状上皮化生的腺癌；恶性胸腺瘤；恶性卵巢间质瘤；恶性卵泡膜细胞瘤；恶性粒层细胞瘤；恶性睾丸母细胞瘤；支持细胞瘤(sertoli cell carcinoma)；恶性睾丸间质细胞瘤(leydigcell tumor)；恶性脂细胞瘤；恶性副神经节瘤；恶性乳房外副神经节瘤；嗜铬细胞瘤；皮肤丝球肉瘤(glomangiosarcoma)；恶性黑素瘤；无黑色素性黑素瘤；浅表扩散性黑素瘤；巨大色素痣中的恶性黑素瘤；上皮样细胞黑素瘤；恶性蓝色痣；肉瘤；纤维肉瘤；恶性纤维性组织细胞瘤；黏液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；腺泡状横纹肌肉瘤；间质肉瘤；恶性混合瘤；缪氏混合瘤(mullerian mixed tumor)；肾母细胞瘤；肝母细胞瘤；癌肉瘤；恶性间叶瘤；恶性布伦纳瘤(brenner tumor)；恶性叶状瘤；滑膜肉瘤；恶性间皮瘤；无性细胞瘤；胚胎性癌；恶性畸胎瘤；恶性卵巢甲状腺瘤；绒毛膜癌；恶性中肾瘤；血管肉瘤；恶性血管内皮瘤；卡波西肉瘤(kaposi′s sarcoma)；恶性血管外皮细胞瘤；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；皮质旁骨肉瘤；软骨肉瘤；恶性软骨母细胞瘤；间叶性软骨肉瘤；骨巨细胞瘤；尤因肉瘤(ewing's sarcoma)；恶性牙源性肿瘤；成釉细胞牙肉瘤；恶性成釉细胞瘤；成釉细胞纤维肉瘤；恶性松果体瘤；脊索瘤；恶性神经胶质瘤；室管膜瘤；星形细胞瘤；原浆性星形细胞瘤；纤维性星形细胞瘤；星形母细胞瘤；成胶质细胞瘤；少突神经胶质瘤；成少突神经胶质细胞瘤；原始神经外胚层；小脑肉瘤；节细胞神经母细胞瘤；神经母细胞瘤；视网膜母细胞瘤；嗅神经源性肿瘤；恶性脑膜瘤；神经纤维肉瘤；恶性神经鞘瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性淋巴瘤；霍奇金病(hodgkin's disease)；霍奇金氏病；类肉芽肿(paragranuloma)；小淋巴细胞性恶性淋巴瘤；弥散性大细胞恶性淋巴瘤；滤泡性恶性淋巴瘤；蕈样肉芽肿病(mycosisfungoides)；其他指定的非霍奇金淋巴瘤；恶性组织细胞增生症；多发性骨髓瘤；肥大细胞肉瘤；免疫增生性小肠病；白血病；淋巴性白血病；浆细胞白血病；红白血病；淋巴肉瘤细胞白血病；髓样白血病；嗜碱性粒细胞白血病；嗜酸性粒细胞白血病；单核细胞性白血病；肥大细胞白血病；巨核细胞白血病；髓样肉瘤；以及毛细胞白血病。尽管如此，还应认识到，本公开内容也可用于治疗非癌性疾病(例如，真菌感染、细菌感染、病毒感染和/或神经退行性疾病)。

可用本发明治疗方法治疗的肿瘤包括任何恶性细胞类型，例如在实体瘤或血液肿瘤中发现的那些。示例性实体瘤可包括但不限于选自以下的器官的肿瘤：胰腺、结肠、盲肠、胃、脑、头、颈、卵巢、肾、喉、肉瘤、肺、膀胱、黑素瘤、前列腺和乳房。示例性血液肿瘤包括骨髓瘤、T或B细胞恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤、母细胞瘤、骨髓瘤等。可使用本文中提供的方法治疗的癌症的另一些实例包括但不限于肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状癌)、腹膜癌、胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomach cancer)(包括胃肠道癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney cancer)或肾癌(renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、多种类型的头颈癌以及黑素瘤。

本发明方法的激酶抑制剂可降低过表达激酶的水平，所述过表达激酶包括本领域众所周知的那些，例如抗体、反义、shRNA、siRNA或小分子抑制剂。可通过注射(例如，静脉内、鞘内、肌内或皮下)、鼻内和经口施用。在许多情况下，并且特别是在已检测到脑转移的情况下，可期望使用穿过血脑屏障或避免这种需要的施用(例如鞘内或鼻内)的治疗性组合物。也可使用提供治疗剂的全身和脑可用性二者的治疗组合。

治疗有效量的治疗剂可通过多种途径施用，所述途径包括肠胃外施用，例如静脉内、腹膜内、肌内、胸骨内或关节内注射或输注。在一些特别的方面，治疗剂直接施用至转移部位(例如脑)，或通过穿过血脑屏障的方法(例如鞘内或鼻内)施用。在一些方面，治疗剂全身施用以及直接施用至转移部位(例如脑)。

激酶抑制剂的治疗有效量是在所治疗的对象中实现期望作用的量。例如，这可以是抑制进展，或引起癌症消退，或能够缓解由癌症引起的症状所必需的激酶抑制剂的量。

激酶抑制剂可在符合疾病的治疗方案中施用，例如在一至数天内的单次或数次剂量以改善疾病状态或者在长时间内的周期性剂量以抑制疾病进展并防止疾病复发。制剂中使用的精确剂量还将取决于施用途径以及疾病或病症的严重程度，并且应根据从业者的判断和每个患者的情况来决定。激酶抑制剂的治疗有效量将取决于所治疗的对象、痛苦的严重程度和类型，以及施用方式。激酶抑制剂的确切量可由本领域技术人员基于对象的年龄、体重、性别和生理状况容易地确定。可从来自体外或动物模型测试系统的剂量-响应曲线外推有效剂量。

A.药物组合物

本文中所示的某些方法属于涉及施用药学有效量的组合物的方法，所述组合物包含本公开内容中确定的促进转移的激酶的抑制剂。

介质和药剂用于药物活性物质的用途是本领域中公知的。除非任何常规介质或药剂与活性成分不相容，否则考虑其在治疗组合物中的用途。也可将补充活性成分并入到组合物中，并且这些将在以下更详细地讨论。对于人施用，制剂优选地符合FDA生物制品局标准要求的无菌性、致热原性、一般安全性和纯度标准。

本公开内容考虑了使用这样的组合物的方法，该组合物是用于注射或用于通过任何其他途径施加的无菌溶液，如以下更详细讨论的。本领域普通技术人员将熟悉用于产生用于注射或通过任何其他途径施加的无菌溶液的技术。通过将所需量的活性化合物并入到具有本领域技术人员熟悉的多种其他成分的适当的溶剂中来制备无菌可注射溶液。

组合物的制剂可根据施用途径而改变。例如，对于在水溶液中的肠胃外施用，溶液应适当缓冲，并且液体稀释剂首先用足够的盐水或葡萄糖使其等张。在这一点上，根据本公开内容，可使用的无菌水性介质将是本领域技术人员已知的。

除了配制用于肠胃外施用(例如静脉内或肌内注射)的化合物之外，其他可药用形式包括用于经由可植入药物递送装置施用的制剂以及任何其他形式。在本公开内容中也可使用鼻用溶液或喷剂、气雾剂或吸入剂。

经口制剂包含这样的通常使用的赋形剂，例如，药用级的甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这些组合物采取溶液剂、混悬剂、片剂、丸剂、胶囊剂、持续释放制剂或散剂的形式。本领域普通技术人员将熟悉用于制备经口制剂的公知技术。

在某些实施方案中，药物组合物包含按重量计至少约0.1％的活性剂。组合物可包含例如约0.01％。在另一些实施方案中，药物组合物包含例如组合物重量的约2％至约75％，或组合物重量的约25％至约60％，以及可从其中来源的任何范围。

药物组合物可包含多种抗氧化剂以延迟一种或更多种组分的氧化。另外，防止微生物作用可通过防腐剂(例如多种抗细菌剂和抗真菌剂)来实现，所述防腐剂包括但不限于对羟基苯甲酸酯类(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞或其组合。组合物在制造和储存条件下可以是稳定的，并且防止微生物(例如细菌和真菌)的污染作用。将理解的是，内毒素污染应在安全水平下保持最低，例如小于0.5ng/mg蛋白质。

在其中组合物为液体形式的一些实施方案中，载体可以是溶剂或分散介质，包括但不限于水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、脂质(例如，甘油三酯、植物油、脂质体)及其组合。在许多情况下，将优选包含等张剂，例如糖、氯化钠或其组合。

在另一些实施方案中，在本公开内容中可使用鼻用溶液或喷剂、气雾剂或吸入剂。鼻用溶液可以是旨在以滴剂或喷剂施用于鼻部通道的水性溶液。

通过将所需量的纳米颗粒并入到具有以上列举的多种其他成分(根据需要)的适当溶剂中，然后灭菌来制备无菌可注射溶液。

2.施用途径

在配制之后，将激酶抑制剂以与剂量制剂相容的方式并以例如治疗有效的量施用。

可使用本领域普通技术人员已知的任何方法将激酶抑制剂施用于对象。例如，药学有效量的包含纳米颗粒的组合物可如下施用：静脉内；脑内；颅内；鞘内；黑质或黑质区域中；皮内；动脉内；腹膜内；病灶内；气管内；鼻内；表面；肌内；腹膜内；皮下；经口；表面；局部；吸入(例如，气雾剂吸入)；注射；输注；连续输注；直接、经由导管、经由灌洗局部灌注使靶细胞浸浴在乳脂(cremes)中、脂质组合物(例如，脂质体)中；或者通过如本领域普通技术人员已知的其他方法或前述方法的任意组合(Remington’s，1990)。在一些特别的实施方案中，使用药物递送装置将组合物施用于对象。

3.剂量

基于预期目标(例如抑制细胞死亡)确定激酶抑制剂的药学有效量。根据治疗次数和剂量二者，待施用的量取决于待治疗对象、对象的状态、期望的保护和施用途径。治疗剂的精确量还取决于从业者的判断并且对每个个体是特有的。

例如，治疗剂的剂量可以为每剂约0.0001毫克至约1.0毫克，或约0.001毫克至约0.1毫克，或约0.1毫克至约1.0毫克，或甚至约10毫克左右。也可施用多剂量。在一些实施方案中，剂量为至少约0.0001毫克。在另一些实施方案中，剂量为至少约0.001毫克。在另一些实施方案中，剂量为至少0.01毫克。在另一些实施方案中，剂量为至少约0.1毫克。在一些更特别的实施方案中，剂量可以为至少1.0毫克。在一些甚至更特别的实施方案中，剂量可以为至少10毫克。在另一些实施方案中，剂量为至少100毫克或更高。

在另一些非限制性实施例中，剂量还可包含每次施用约1微克/kg/体重、约5微克/kg/体重、约10微克/kg/体重、约50微克/kg/体重、约100微克/kg/体重、约200微克/kg/体重、约350微克/kg/体重、约500微克/kg/体重、约1毫克/kg/体重、约5毫克/kg/体重、约10毫克/kg/体重、约50毫克/kg/体重、约100毫克/kg/体重、约200毫克/kg/体重、约350毫克/kg/体重、约500毫克/kg/体重，至约1000mg/kg/体重或更多，以及从中可推导出的任何范围。在从本文中所列数字可推导出的范围的非限制性实例中，基于上述数字，可施用约5mg/kg/体重至约100mg/kg/体重、约5微克/kg/体重至约500毫克/kg/体重等。

如本领域普通技术人员所确定的，剂量可重复。因此，在本文中所示方法的一些实施方案中，考虑了单剂量。在另一些实施方案中，考虑了两个或更多个剂量。当向对象施用多于一个剂量时，剂量之间的时间间隔可以是如本领域普通技术人员确定的任何时间间隔。例如，剂量之间的时间间隔可以是约1小时至约2小时、约2小时至约6小时、约6小时至约10小时、约10小时至约24小时、约1天至约2天、约1周至约2周或更长时间，或者可从任何所述范围内获得的任何时间间隔。

在某些实施方案中，方法可向患者提供药物组合物的连续供应。这可通过导管插入术随后连续施用治疗剂来实现。施用可在手术期间或手术后进行。

B.组合治疗

本公开内容的某些实施方案提供了一种或更多种第二治疗形式的施用或施加以用于治疗或预防疾病。例如，疾病可以是过度增殖性疾病，例如癌症。

第二治疗形式可以是施用可用于治疗或预防癌症的一种或更多种第二药理学药剂。如果第二治疗是药理学药剂，则其可在激酶抑制剂的施用之前、同时或之后施用。

激酶抑制剂的施用与第二治疗的施用之间的间隔可以是本领域普通技术人员确定的任何间隔。例如，间隔可以是数分钟至数周。在分开施用药剂的一些实施方案中，通常应确保每次递送时间之间的长时间段没有期满，使得每种治疗剂仍能够对对象发挥有利的组合作用。例如，治疗剂之间的间隔可以为彼此的约12小时至约24小时，并且更优选地，彼此的约6小时至约12小时内。然而，在其中各施用之间间隔数天(2、3、4、5、6或7)至数周(1、2、3、4、5、6、7或8)的一些情况下，可延长治疗的时间段。在一些实施方案中，基于对象对纳米颗粒的响应来确定第二治疗剂的施用时机。

可使用多种组合。对于以下实例，激酶抑制剂组合物是“A”，并且抗癌治疗是“B”：

考虑到药剂的毒性(如果有的话)，向患者施用本公开内容的任何化合物或治疗将遵循用于施用这样的化合物的一般方案。因此，在一些实施方案中，存在可归因于组合治疗的监测毒性的步骤。预期可重复治疗周期。还考虑到可将多种标准治疗以及手术干预与所述治疗组合应用。

在一些具体的方面，考虑到标准治疗将包括化学治疗、放射治疗、免疫治疗、手术治疗或基因治疗并且可与基因表达抑制剂治疗、抗癌治疗或者基因表达抑制剂治疗和抗癌治疗二者组合使用，如本文中所述。

1.化学治疗

可使用的化学治疗剂的实例包括：烷化剂，例如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯类，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，例如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimine)和甲基蜜胺类(methylamelamine)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱类(camptothecin)(包括合成类似物拓扑替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；卡利抑素(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(cryptophycin)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；海兔毒素(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustard)，例如氯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、异磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)和尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；硝基脲类(nitrosurea)，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，例如烯二炔类(enediyne)抗生素(例如，加利车霉素，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；二膦酸盐类(bisphosphonate)，例如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新抑癌菌素(neocarzinostatin)生色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素生色团、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素、氨茴霉素(authramycin)、氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素、放线菌素C(cactinomycin)、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯代-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、依达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(例如丝裂霉素C)、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfimromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素(streptozocin)、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁和佐柔比星；抗代谢物类，例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸、蝶罗呤和三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、多西氟尿啶(doxifluridine)、依诺他滨和氟尿苷；雄激素类，例如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷和睾内酯；抗肾上腺类，例如米托坦(mitotane)和曲洛司坦；叶酸补充剂，例如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；恩尿嘧啶；氨苯吖啶(amsacrine)；阿莫斯汀(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛；地吖醌(diaziquone)；依氟鸟氨酸(elformithine)；醋酸羟吡咔唑(elliptiniumacetate)；埃博霉素类(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登素生物碱类(maytansinoid)，例如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁；苯来美特(phenamet)；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSK多糖复合体；雷佐生(razoxane)；根毒素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌(triaziquone)；2，2’，2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯类(trichothecene)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A(verracurinA)、杆孢菌素A和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；紫杉烷类，例如紫杉醇和多西他赛(docetaxel)；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；铂配位复合体，例如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；铂类；依托泊苷(VP-16)；异磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺安托(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙；柔红霉素；氨基蝶呤；希罗达(xeloda)；伊拜膦酸(ibandronate)；伊立替康(例如，CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(difluorometlhylornithine，DMFO)；类视黄醇，例如视黄酸；卡培他滨；卡铂、丙卡巴肼、普卡霉素(plicomycin)、吉西他滨、诺维本、法呢基蛋白转移酶抑制剂、反铂；以及以上任一种的可药用盐、酸或衍生物。

2.放射治疗

导致DNA损伤并已广泛使用的另一些因素包括通常被称为γ射线、X射线的那些和/或向肿瘤细胞定向递送放射性同位素。还考虑了另一些形式的DNA损伤因素，例如微波、质子束辐照和UV辐照。最有可能所有这些因素对DNA、DNA前体、DNA的复制和修复以及染色体的组装和维持引起广泛的损害。X射线的剂量范围从对于长时间段(3至4周)的50至200伦琴(roentgen)的日剂量到2000至6000伦琴的单剂量变化。放射性同位素的剂量范围变化很大，且取决于同位素的半衰期、发出的辐射的强度和类型以及赘生性细胞的摄取。

3.免疫治疗

技术人员将理解的是，免疫治疗可与一些实施方案的方法组合或结合使用。在癌症治疗的情况下，免疫治疗剂通常依赖于使用免疫效应细胞和分子以靶向并破坏癌细胞。利妥昔单抗

就是这样一个实例。免疫效应物可以是例如对肿瘤细胞表面上的一些标志物具有特异性的抗体。抗体单独可充当治疗的效应物，或者其可募集其他细胞以实际影响细胞杀伤。抗体还可与药物或毒素(化学治疗剂、放射性核素、蓖麻毒素A链、霍乱毒素、百日咳毒素等)缀合并且充当靶向剂。或者，效应物可以是携带与肿瘤细胞靶标直接或间接地相互作用的表面分子的淋巴细胞。多种效应物细胞包括细胞毒性T细胞和NK细胞。

抗体-药物缀合物(Antibody-drug conjugate，ADC)包含与细胞杀伤药物共价连接的单克隆抗体(monoclonal antibody，MAb)并且可用于组合治疗。该方法将Mab针对其抗原靶标的高特异性与高效细胞毒性药物组合，产生将有效载荷(药物)递送至具有丰富水平抗原的肿瘤细胞的“武装”MAb。药物的靶向递送还使其在正常组织中的暴露最小化，导致毒性降低和治疗指数提高。示例性ADC药物包括

(本妥昔单抗(brentuximabvedotin))和

(曲妥珠单抗美坦新偶联物(trastuzumab emtansine)或T-DM1)。

在免疫治疗的一个方面，肿瘤细胞必须具有可进行靶向的一些标志物，即，该标志物不存在于大多数其他细胞上。存在许多肿瘤标志物，并且这些肿瘤标志物中的任一种可能适合于本发明实施方案的上下文中的靶向。常见的肿瘤标志物包括CD20、癌胚抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、TAG-72、HMFG、唾液酸化的路易斯抗原、MucA、MucB、PLAP、层黏连蛋白受体、erb B和p155。免疫治疗的一个替代方面是将抗癌作用与免疫刺激作用组合。还存在免疫刺激分子，其包括：细胞因子，例如IL-2、IL-4、IL-12、GM-CSF、γ-IFN；趋化因子，例如MIP-1、MCP-1、IL-8；以及生长因子，例如FLT3配体。

免疫治疗的实例包括免疫佐剂，例如牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、二硝基氯苯和芳香化合物)；细胞因子治疗，例如干扰素α、β和γ；IL-1、GM-CSF和TNF；基因治疗，例如TNF、IL-1、IL-2和p53；以及单克隆抗体，例如抗CD20、抗神经节苷脂GM2和抗p185。考虑一种或更多种抗癌治疗可与本文中所述的抗体治疗一起使用。

在一些实施方案中，免疫治疗可以是免疫检查点抑制剂。免疫检查点调高信号(例如共刺激分子)或调低信号。可通过免疫检查点阻断被靶向的抑制性免疫检查点包括腺苷A2A受体(A2A receptor，A2AR)、B7-H3(也称为CD276)、B和T淋巴细胞衰减剂(B and Tlymphocyte attenuator，BTLA)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4，CTLA-4，也称为CD152)、吲哚胺2，3-双加氧酶(indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO)、杀伤细胞免疫球蛋白(killer-cellimmunoglobulin，KIR)、淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3，LAG3)、程序性死亡1(programmed death 1，PD-1)、T-细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域3(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain 3，TIM-3)和T细胞活化的V结构域Ig抑制物(V-domain Ig suppressor of T cell activation，VISTA)。特别地，免疫检查点抑制剂靶向PD-1轴和/或CTLA-4。

免疫检查点抑制剂可以是药物，例如小分子、重组形式的配体或受体，或者特别是抗体，例如人抗体。可使用已知的免疫检查点蛋白抑制剂或其类似物，特别是可使用嵌合、人源化或人形式的抗体。如本领域技术人员将知晓的，替代和/或等同名称可用于本公开内容中提及的某些抗体。在本公开内容的上下文中，这样的替代和/或等同名称是可互换的。例如，已知，兰罗利珠单抗(lambrolizumab)也以替代和等同名称MK-3475和派姆单抗为人所知晓。

在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1与其配体结合配偶体结合的分子。在一个具体方面，PD-1配体结合配偶体是PDL1和/或PDL2。在另一个实施方案中，PDL1结合拮抗剂是抑制PDL1与其结合配偶体结合的分子。在一个具体方面，PDL1结合配偶体是PD-1和/或B7-1。在另一个实施方案中，PDL2结合拮抗剂是抑制PDL2与其结合配偶体结合的分子。在一个具体方面，PDL2结合配偶体是PD-1。拮抗剂可以是抗体、其抗原结合片段、免疫黏附蛋白、融合蛋白或寡肽。

在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体选自纳武单抗、派姆单抗和CT-011。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是免疫黏附蛋白(例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PDL1或PDL2的胞外或PD-1结合部分的免疫黏附蛋白)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。纳武单抗(也称为MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558和

)是可使用的抗PD-1抗体。派姆单抗(也称为MK-3475、Merck 3475、兰罗利珠单抗、

和SCH-900475)是示例性抗PD-1抗体。CT-011(也称为hBAT或hBAT-1)也是抗PD-1抗体。AMP-224(也称为B7-DCIg)是PDL2-Fc融合可溶性受体。

可在本文中提供的方法中被靶向的另一种免疫检查点是细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4，CTLA-4)，也称为CD152。人CTLA-4的完整cDNA序列的Genbank登录号为L15006。CTLA-4在T细胞表面上发现并且当与抗原呈递细胞表面上的CD80或CD86结合时充当“关闭”开关。CTLA4是免疫球蛋白超家族的成员，其在辅助T细胞的表面上表达并向T细胞传递抑制信号。CTLA4与T细胞共刺激蛋白CD28类似，并且这两种分子均与抗原呈递细胞上的CD80和CD86(也分别称为B7-1和B7-2)结合。CTLA4向T细胞传递抑制信号，而CD28传递刺激信号。胞内CTLA4也在调节性T细胞中发现并且可能对其功能很重要。通过T细胞受体和CD28的T细胞活化导致CTLA-4(B7分子的抑制性受体)的表达提高。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体(例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫黏附蛋白、融合蛋白或寡肽。

可使用本领域中公知的方法来产生适用于本发明方法的抗人CTLA-4抗体(或来源于其的VH和/或VL结构域)。或者，可使用本领域公认的抗CTLA-4抗体。示例性抗CTLA-4抗体是伊匹单抗(也称为10D1、MDX-010、MDX-101和

)或其抗原结合片段和变体。在另一些实施方案中，抗体包含伊匹单抗的重链和轻链CDR或VR。因此，在一个实施方案中，抗体包含伊匹单抗的VH区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及伊匹单抗的VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施方案中，抗体竞争与CTLA-4上的与上述抗体相同的表位的结合，和/或与CTLA-4上的与上述抗体相同的表位结合。在另一个实施方案中，抗体与上述抗体具有至少约90％的可变区氨基酸序列同一性(例如，与伊匹单抗具有至少约90％、95％或99％的可变区同一性)。

4.手术

约60％的患有癌症的人将经历某种类型的手术，其包括预防性、诊断性或分期、治愈性和姑息性手术。治愈性手术包含其中全部或一部分癌组织被物理去除、切除和/或破坏的切除术，并且可与其他治疗(例如本发明实施方案的治疗、化学治疗、放射治疗、激素治疗、基因治疗、免疫治疗和/或替代治疗)结合使用。肿瘤切除术是指物理移除肿瘤的至少一部分。除肿瘤切除术之外，通过手术的治疗包括激光手术、冷冻手术、电外科手术和用显微镜控制的手术(莫氏手术(Mohs’surgery))。

在切除部分或全部癌细胞、组织或肿瘤之后，可在体内形成腔。治疗可通过灌注、直接注射或向该区域局部施用另外的抗癌治疗来完成。这样的治疗可例如每1、2、3、4、5、6或7天进行重复，或者每1、2、3、4和5周进行重复，或者每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月进行重复。这些治疗也可使用不同的剂量。

5.其他药剂

考虑可将其他药剂与本发明实施方案的某些方面组合使用以改善治疗的治疗效力。这些另外的药剂包括影响细胞表面受体与GAP连接的上调的药剂、细胞抑制剂和分化剂、细胞黏附抑制剂、提高过度增殖细胞对细胞凋亡诱导剂或其他生物药剂之敏感性的药剂。通过提高GAP连接数提高细胞间信号传导将提高相邻过度增殖细胞群的抗过度增殖性作用。在另一些实施方案中，细胞抑制剂或分化剂可与本发明实施方案的某些方面组合使用以改善治疗的抗过度增殖效力。考虑细胞黏附抑制剂以改善本发明实施方案的效力。细胞黏附抑制剂的实例是黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)抑制剂和洛伐他汀。

IV.试剂盒

在一些实施方案的多个方面，设想试剂盒包含治疗剂和/或其他治疗剂和递送剂。在一些实施方案中，本发明实施方案考虑用于制备和/或施用实施方案的激酶抑制剂组合物的试剂盒。试剂盒可包含一个或更多个密封的小瓶，其包含本发明实施方案的任何药物组合物。试剂盒可包含例如激酶抑制剂以及用于制备、配制和/或施用实施方案的组成部分或进行本发明方法的一个或更多个步骤的试剂。在一些实施方案中，试剂盒还可包含合适的容器，所述容器是不会与试剂盒的组分反应的容器，例如eppendorf管、测定板、注射器、瓶或管。容器可由可灭菌材料(例如塑料或玻璃)制成。

试剂盒还可包含说明单，其概述了本文中所述方法的程序性步骤，并且将遵循与本文中所述或本领域普通技术人员已知的基本上相同的程序。指令信息可在包含机器可读指令的计算机可读介质中，当使用计算机执行该机器可读指令时，导致显示递送药学有效量的治疗剂的真实或虚拟程序。

V.实施例

包含以下实施例以说明本发明的一些优选实施方案。本领域技术人员应理解的是，以下实施例中公开的技术表示本发明人发现的在本发明的实践中很好地发挥功能的技术，并因此可认为构成用于其实施的优选模式。然而，根据本公开内容，本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可对所公开的一些具体实施方案进行许多改变并仍然获得相同或类似的结果。

实施例1-驱动激酶筛选

在体内进行激酶过表达筛选以确定新的脑转移驱动因子(图1)。进行测定以确定激酶是否增强脑转移的生长。在所筛选的17个激酶合并物中，有14个使小鼠存活降低了至少20％。

为了进行筛选，编码反转录病毒质粒的活化的激酶开放阅读框(open readingframe，ORF)在MDA-MB-2131三阴性乳腺亲本癌细胞(231p)中稳定地过表达，并将该细胞注射到免疫妥协小鼠的颈动脉中。将表达萤光素酶、GFP，和多至24种激酶的合并物的MDA-MB-231亲本细胞(231p.萤光素酶.GFP)与表达TdTomato和空pWZL-Neo-Myr-Flag-DEST载体的231p细胞(231p.TdTomato)混合。将细胞以3∶1的激酶合并物∶载体比例混合并将2×10⁶个细胞注射到裸鼠的颈动脉中。

当动物显示出神经症状并且其头通过IVIS确定为极度萤光素酶阳性时，处死小鼠，并基于GFP阳性使用解剖显微镜分离脑病灶。对病灶的一部分进行直接RNA提取，同时将其余部分解离并且将体外培养的细胞作为第0代。从回收的细胞提取gDNA，并通过靶向PCR扩增激酶载体序列。通过MiSeq对该DNA进行测序，从而产生体内选择的定量读出。

从快速生长的脑转移瘤分离肿瘤细胞，并进行下一代测序(NGS)以确定哪些激酶造成脑转移的加速生长，并确定在体内富集的24种激酶(表1)。由于筛选是以合并的过表达形式进行以模拟人癌症中的异质性，因此接下来验证了使用体内功能获得实验性脑转移测定，通过富集确定的单独激酶确实可加速脑转移的生长。

一些新确定的激酶在萤光素酶标记的MDA-MB-231亲本细胞中单独过表达。相对于载体对照细胞，分析了激酶过表达的脑转移的生长(图3)。使用体内成像系统(IVIS)量化表达荧光素酶的癌细胞产生的发光信号。在第0天时每只动物注射1×10⁵个细胞并且将萤光素酶信号相对于第1天归一化。验证了CDK5、PCTK1、MAPK12、LIMK2和SPHK全都显著增强了脑转移的生长，而MARK4没有引起显著生长优势(即，不是作为单激酶的功能性命中)。

比较用激酶过表达细胞或相应载体细胞注射的小鼠的脑转移特异性存活。PCTK1过表达将存活从中位时间128天缩短至60天(图4A)。根据Mantel-Cox对数秩检验，存活曲线显著地不同(p＝0.0004)。SPHK1过表达将存活从中位时间131天缩短至102.5天(图4B)。CDK5过表达将存活从中位时间128天缩短至70天(图4C)。

为了测试新确定的脑转移生长激酶驱动因子的治疗潜力，对其中四种基因PCTK.1、SPHK.1和CDK5进行功能缺失实验性脑转移测定。对于PCTK1，PCTK1基因在HCC1954.Br脑寻求系(brain-seeking line)(形成侵袭性脑转移并具有高内源性PCTKI表达的HER2阳性系)中被shRNA稳定地敲低。分别将PCTK1敲低HCC1954.Br细胞和对照shRNA转导的HCC1954.Br细胞颈动脉内注射到裸鼠中，并比较两组小鼠的存活。相对于载体对照shRNA组，PCTK1敲低组具有从57.5天到91天的显著延长的中位存活时间(图5B)。

对于SPHK.1，选择了高侵袭性脑转移系MDA-MB-435，因为其具有高内源性SPHK1表达。在稳定的shRNA介导的SPHK.1敲低之后，相对于用对照MDA-MB-435细胞注射的小鼠，比较了用SPHK.1敲低细胞注射的小鼠的实验性脑转移驱动的死亡率。实际上，相对于对照，SPHK1敲低将小鼠中位存活从57.5天延长至77天(图6B)。因此，清楚地证明了靶向两种脑转移驱动激酶(PCTKI和SPHK1)有效地抑制了脑转移并延长了携带脑转移的小鼠的存活。

此外，发现，在4T1实验性脑转移模型中，在早期MAPK12敲低显著延迟了脑转移生长。MAPK12敲低的癌细胞与载体对照细胞的比较表明MAPK12敲低延迟了脑转移生长(图7B)。使用体内成像系统(IVIS)量化由表达萤光素酶的癌细胞产生的发光信号。在Balb/c具有免疫能力的小鼠模型中，每只动物注射1×10⁵个细胞。(C)用4T1细胞注射的BALB/c小鼠的存活分析显示MAPK12敲低将中位存活从15天延长至19天(图7C)。

另外，在EO771实验性脑转移模型中，CDK5敲低在缺氧条件中降低了体外细胞增殖并且以CD8 T细胞依赖性方式显著延迟了死亡。当与载体对照细胞相比时，MTT测定表明在缺氧条件下CDK5敲低细胞中的体外细胞增殖显著降低(图8B)。用EO771细胞注射的C57BL/6小鼠的存活分析显示，CDK5敲低将中位存活从19天延长至23.5天(图8C)。用对照或CDK5敲低的EO771细胞注射的C57BL/6小鼠的存活分析显示，当使用αCD8抗体耗尽CD8-T细胞时，这两组之间的小鼠存活没有显著性差异，表明CDK5驱动的脑转移是通过免疫系统(尤其是适应性T细胞区室)部分地介导的(图8D)。

EO771细胞中的CDK5敲低使其对罗斯考汀较不敏感并且对T细胞的细胞毒性更敏感。与对照细胞相比，EO771细胞中的CDK5敲低使其对罗斯考汀(CDK5抑制剂)较不敏感(图9A)。细胞毒性T细胞杀伤测定表明，与EO771对照细胞相比，E0771细胞中的CDK5敲低对活化的T细胞的细胞毒性更敏感(图9B)。在与肿瘤细胞共培养之前，将细胞通过CD3/CD28抗体(100ng/mL)和IL-2(10ng/mL)活化。

最后，在缺氧条件下，LIMK2过表达促进体外细胞增殖。MTT测定表明与载体对照细胞相比，当LIMK2过表达时在缺氧条件下体外细胞增殖显著提高(图10B)。如该MTT测定所示，当与载体对照细胞相比，在缺氧条件下，LKB1过表达的MDA-MB-231细胞显示出体外细胞增殖显著提高(图11B)。

因此，抑制通过筛选确定的激酶显著延迟了脑转移相关的死亡并且是脑转移的有效治疗靶标。

***

根据本公开内容，本文中公开和要求保护的所有方法均可在不进行过度实验的情况下做出和执行。尽管已经以一些优选实施方案的方式描述了本发明的组合物和方法，但对于本领域技术人员来说明显的是，可对本文中所述方法以及所述方法的步骤或步骤顺序作出改变而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地，将明显的是，可用化学和生理学二者相关的某些试剂替代本文中所述的试剂而实现相同或类似的结果。对于本领域技术人员显而易见的所有这样的类似替代和改变被视为在由所附权利要求书所限定的本发明的精神、范围和概念内。

参考文献

以下参考文献就其提供补充本文中阐述的那些的示例性操作或其他细节而言具体地通过引用并入本文。

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Claims (76)

1.用于在患有癌症的对象中抑制脑转移的方法，其包括向所述对象施用有效量的激酶抑制剂，其中所述激酶抑制剂靶向选自以下的激酶：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDKSR1、CLK3、LIMK2、PAK4、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCI、TSSK6和ZC3HC1。

2.权利要求1所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。

3.权利要求2所述的方法，其中所述乳腺癌进一步限定为三阴性乳腺癌。

4.权利要求1所述的方法，其中所述癌症是肺癌。

5.权利要求1所述的方法，其中在治疗之前不知道所述对象具有脑转移。

6.权利要求1所述的方法，其中在治疗之前已知所述对象具有一个或更多个脑转移。

7.权利要求1所述的方法，其中所述对象是人。

8.权利要求1所述的方法，其中所述激酶抑制剂靶向CDK5或LIMK2。

9.权利要求1所述的方法，其中所述激酶抑制剂靶向CDK5。

10.权利要求1所述的方法，其中所述激酶抑制剂靶向LIMK2。

11.权利要求1所述的方法，其中所述激酶抑制剂是siRNA或miRNA。

12.权利要求1所述的方法，其中所述激酶抑制剂是选择性药理抑制剂。

13.权利要求9所述的方法，其中CDK5的激酶抑制剂是地那西利、双吲哚靛玉红、(S)-CR8、肯帕罗酮、PHA-793887、AT7519、罗斯考汀、密西利、SNS-032或奥罗莫星。

14.权利要求10所述的方法，其中LIMK2的激酶抑制剂是BMS-5、Pyr-1或T56-LIMKi。

15.权利要求1所述的方法，其中BTK的激酶抑制剂是依鲁替尼、阿卡替尼、ONO-4059、司培替尼、BGB-3111或HM71224。

16.权利要求1所述的方法，其中CAMK4的激酶抑制剂是KN-93。

17.权利要求1所述的方法，其中MAP2K7的激酶抑制剂是DTP3。

18.权利要求1所述的方法，其中PMVK的激酶抑制剂是CDDD_1633、CSDDD_2260、CSDDD_2419或木犀草素。

19.权利要求1所述的方法，其中PRKCI的激酶抑制剂是瑞得或RXDX-108。

20.权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述激酶抑制剂被直接递送至脑。

21.权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述激酶抑制剂经口、表面、静脉内、腹膜内、肌内、经内窥镜、经皮、皮下、局部或通过直接注射施用。

22.权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述激酶抑制剂静脉内施用。

23.权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述激酶抑制剂鞘内或鼻内施用。

24.权利要求1至19中任一项所述的方法，其还包括至少施用第二治疗剂。

25.权利要求24所述的方法，其中所述第二治疗剂是化学治疗、放射治疗、基因治疗、手术、激素治疗、抗血管生成治疗或细胞因子治疗。

26.权利要求24所述的方法，其中所述第二治疗剂是放射治疗、化学治疗、免疫治疗和/或代谢调节。

27.权利要求24所述的方法，其中所述第二治疗剂与所述激酶抑制剂同时施用。

28.权利要求24所述的方法，其中所述第二治疗剂与所述激酶抑制剂依次施用。

29.用于在患有癌症的对象中治疗脑转移的方法，其包括向有此需要的所述对象施用有效量的与至少第二抗癌剂组合的激酶抑制剂，其中所述激酶抑制剂靶向选自以下的激酶：PCTK1、SPHK1、FRK、MAPK12、ERK5、MAP2K7、UCK2、DAK和PRKCD。

30.权利要求29所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。

31.权利要求30所述的方法，其中所述乳腺癌进一步限定为三阴性乳腺癌。

32.权利要求29所述的方法，其中所述癌症是肺癌。

33.权利要求1所述的方法，其中在治疗之前不知道所述对象具有脑转移。

34.权利要求29所述的方法，其中在治疗之前已知所述对象具有一个或更多个脑转移。

35.权利要求29所述的方法，其中所述对象是人。

36.权利要求29所述的方法，其中所述激酶抑制剂靶向PCTK1、SPHK1、MAPK12或CDK5。

37.权利要求29所述的方法，其中所述激酶抑制剂靶向PCTK1。

38.权利要求29所述的方法，其中所述激酶抑制剂靶向SPHK1。

39.权利要求29所述的方法，其中所述激酶抑制剂靶向MAPK12。

40.权利要求29所述的方法，其中MAPK12的激酶抑制剂是SB203580、达马莫德或LY2228820。

41.权利要求29所述的方法，其中PCTK1的激酶抑制剂是靛玉红E804、达拉菲尼或瑞巴替尼。

42.权利要求29所述的方法，其中PCTK1的激酶抑制剂是瑞巴替尼。

43.权利要求29所述的方法，其中SPHK1的激酶抑制剂是BML-258、SKIIII、SKI 5C、MPA08、SKI 178、PF-543、芬戈莫德或沙芬戈。

44.权利要求29所述的方法，其中SPHK1的激酶抑制剂是芬戈莫德或沙芬戈。

45.权利要求29所述的方法，其中CDK5的激酶抑制剂是地那西利、PHA-793887、AT7519、CYC-065或DCAM-422。

46.权利要求29所述的方法，其中CDK5的激酶抑制剂是CYC-065或DCAM-422。

47.权利要求29所述的方法，其中ERK5的激酶抑制剂是ERK5-IN-1、BIX 02189、XMD17-109或XMD 8-92。

48.权利要求29所述的方法，其中FRK的激酶抑制剂是达沙替尼、莫特塞尼、达马莫德、培利替尼、索拉非尼、凡德他尼、卡奈替尼或伊马替尼。

49.权利要求29的方法，其中PAK4的激酶抑制剂是PF-3758309、LCH-7749944、乐园树酮、KY-04031、KY-04045、1-菲基-四氢异喹啉衍生物、(-)-β-白毛莨碱、Inka1、GL-1196或GNE-2861。

50.权利要求29所述的方法，其中UCK2的激酶抑制剂是卡瓦胡椒素B或山姜素。

51.权利要求29至51中任一项所述的方法，其中所述激酶抑制剂经口、表面、静脉内、腹膜内、肌内、经内窥镜、经皮、皮下、局部或通过直接注射施用。

52.权利要求29至51中任一项所述的方法，其中所述激酶抑制剂静脉内施用。

53.权利要求29至51中任一项所述的方法，其中所述激酶抑制剂鞘内或鼻内施用。

54.权利要求29至51中任一项所述的方法，其中所述第二治疗剂是化学治疗、放射治疗、基因治疗、手术、激素治疗、抗血管生成治疗或细胞因子治疗。

55.权利要求29至51中任一项所述的方法，其中所述第二治疗剂是放射治疗、化学治疗、免疫治疗和/或代谢调节。

56.权利要求29至51中任一项所述的方法，其中所述第二治疗剂与所述激酶抑制剂同时施用。

57.权利要求29至51中任一项所述的方法，其中所述第二治疗剂与所述激酶抑制剂依次施用。

58.用于在对象中抑制转移的方法，其包括向确定与对照相比具有提高的选自以下的至少2种激酶的活性的对象施用激酶抑制剂：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12、MAPK7、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1。

59.权利要求58所述的方法，其中提高的活性是提高的表达水平、翻译后修饰或亚细胞定位的结果。

60.权利要求59所述的方法，其中提高的活性是通过提高的表达水平测量的。

61.权利要求58所述的方法，其中所述对象患有乳腺癌或肺癌。

62.权利要求58所述的方法，其中所述转移进一步限定为脑转移。

63.权利要求58所述的方法，其中与对照相比，所述对象被确定具有提高的选自以下的至少5种激酶的活性：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12、MAPK7、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1。

64.权利要求58所述的方法，其中与对照相比，所述对象被确定具有提高的选自以下的至少15种激酶的表达：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12、MAPK7、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1。

65.权利要求58所述的方法，其中与对照相比，所述对象被确定具有提高的选自以下的至少2O种激酶的表达：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、DAK、FRK、LIMK2、MAP2K7、MAPK12、MAPK7、PAK4、PCTK1、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCD、PRKCI、SPHK1、TSSK6、UCK2和ZC3HC1。

66.用于在患有癌症的对象中治疗脑转移的组合物，其包含有效量的激酶抑制剂，其中所述激酶抑制剂靶向选自以下的激酶：ADCK4、BTK、CAMK4、CDK5、CDK5R1、CLK3、LIMK2、PAK4、PMVK、PRKACB、PRKACG、PRKCI、TSSK6和ZC3HC1。

67.用于在患有癌症的对象中治疗脑转移的组合物，其包含有效量的激酶抑制剂和抗癌剂，其中所述激酶抑制剂靶向选自以下的激酶：PCTK1、SPHK1、FRK、MAPK12、ERK5、MAP2K7、UCK2、DAK和PRKCD。

68.权利要求66或67所述的组合物，其中所述癌症是乳腺癌。

69.权利要求66或67所述的方法，其中所述乳腺癌进一步限定为三阴性乳腺癌。

70.权利要求66或67所述的方法，其中所述癌症是肺癌。

71.权利要求66或67所述的方法，其中在治疗之前不知道所述对象具有脑转移。

72.权利要求66或67所述的方法，其中在治疗之前已知所述对象具有一个或更多个脑转移。

73.权利要求66或67所述的方法，其中所述对象是人。

74.权利要求66所述的方法，其还包括至少施用第二抗癌剂。

75.权利要求67或74所述的方法，其中所述第二抗癌剂是化学治疗、放射治疗、基因治疗、手术、激素治疗、抗血管生成治疗或细胞因子治疗。

76.权利要求67或74所述的方法，其中所述第二治疗剂是放射治疗、化学治疗、免疫治疗或代谢调节。

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