CN114410518A - 一种含有链霉菌的复合微生物菌剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有链霉菌的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂包含链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉；所述的链霉菌包含细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌；所述的链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉的重量比为4‑6:1‑3:1；本发明制备的复合微生物菌剂各菌种合理配比，相互协同作用能够高效防治作物灰霉病和叶霉病；同时能刺激作物生长，提高作物产量和品质。
Description
技术领域
本发明属于微生物制剂领域，具体涉及一种含有链霉菌的复合微生物菌剂及其应用。
背景技术
随着我国农业经济的高速发展，大量的化学杀菌剂被应用于植物病虫害的防治；化学杀菌剂不仅防治了病害，而且其还杀死了有益生物，妨碍了生态环境的平衡发展；同时化学杀菌剂的长期使用造成了诱发植物病害的病原菌的抗药性，形成了一种恶性循环；利用生物防治菌剂作为生物杀菌剂来防治植物病原菌以减轻化学农药对生态环境的影响研究引起了广泛的关注。
灰霉病和叶霉病在我国大面积发生，其是番茄、黄瓜、辣椒、葡萄、西瓜等经济作物的主要病害；其显著影响着我国经济作物的产量。灰霉病属于一种广寄主性的真菌，其在植物花、果、叶、茎均可发病，能够引起多种植物幼苗、果实发生落叶、花腐以及烂果等现象；灰霉病的病原是灰葡萄孢菌，菌株产生的分生孢子借助气流、灌溉水或雨水传播，通过作物的伤口、花粉和茎基部、花瓣等处侵入，造成作物果实、茎部等部位表面出现灰白色霉层；叶霉病主要危害叶片，严重时也可以危害茎、花、果实等。叶片发病初期，叶面出现椭圆形或不规则淡黄色褪绿病斑，叶背面初生白霉层，而后霉层变为灰褐色至黑褐色绒毛状，严重时可引起全叶干枯卷曲，植株呈黄褐色干枯状。果实染病后，果蒂部附近形成圆形黑色病斑，并且硬化稍凹陷，造成果实大量脱落；作物一旦感染病害后，较难防治，将显著影响其正常生长，最终造成作物的产量降低，影响其经济价值。
目前，番茄灰霉病和叶霉病的防治大多采用化学药剂；因此研究获得一种能有效防治番茄灰霉病和叶霉病的生物菌剂具有广泛的应用价值。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种含有链霉菌的复合微生物菌剂，所述的复合微生物菌剂包含链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉；所述的链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉的重量比为：4-6:1-3:1；所述的链霉菌包含细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌；
本发明针对番茄灰霉病和叶霉病，筛选获得了对灰霉病菌和叶霉病菌具有良好抑制作用的多种微生物菌剂：细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉。通过实验发现，这些菌种以合理比例复配后，所获得的的复合微生物菌剂对灰霉病菌和叶霉病菌的抑制作用更强，可显著降低番茄灰霉病和叶霉病的发病率。
优选地，所述的细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌的重量比为：2-3:1-2:1；
优选地，所述的链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉的重量比为：5:2:1；
本发明还提供了一种含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法：具体包括以下步骤：
(1)菌种活化：将链霉菌接入高氏一号培养基中进行培养获得链霉菌菌悬液；将淡紫紫孢菌斜面接入PDA培养基中进行培养获得淡紫紫孢菌菌悬液；将哈茨木霉接入PDA培养基中进行培养获得哈茨木霉菌悬液；
(2)菌种扩大培养：将步骤(1)中的菌悬液接入发酵罐中进行发酵培养后减压干燥粉碎获得对应菌粉；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉菌粉混合均匀获得复合微生物菌剂；
优选地，步骤(1)所所述的链霉菌的培养为25-30℃培养，培养时间为24-48h；所述的淡紫紫孢菌培养温度为25-30℃，培养24-48h；所述的哈茨木霉的培养温度为25-30℃，培养时间为48-72h；
优选地，步骤(2)所述的发酵罐培养温度为28-30℃，发酵培养时间为6-8d；
所述的复合微生物菌剂在防治作物病害方面的应用。
进一步地，所述的作物病害为灰霉病或叶霉病。
有益效果
本发明筛选获得了对灰霉病菌、叶霉病菌具有较好抑制作用的多种微生物菌粉；将上述菌粉以合适比例混合后获得复合微生物菌剂，各菌剂相互协同发挥作用，显著提高了对作物灰霉病、叶霉病的防治效果；
本发明的含有链霉菌的复合微生物菌剂不仅具有高效防治病害的作用，还能平衡土壤中的微生物菌群，调节土壤微生态环境；且其代谢产物中还含有生长素、抗菌素、苯乙酸、琥珀酸及细胞分裂素等作物生长所必需的生长调节剂成分，刺激细胞分裂，促进生根、发芽、成熟，提高作物产量和品质。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作详细描述，但需要强调的是，本发明并不受限于所述的具体实施方式；下述实施例所用微生物菌种可自行分离或通过购买得到；下述实施例所述原料无特殊说明均可通过常规方法制备或购买获得。
实施例1
含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)菌种活化
将细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌菌种分别接入高氏一号培养基中25℃培养48h获得链霉菌菌悬液；
将淡紫紫孢菌菌种接入PDA培养基中25℃培养48h获得淡紫紫孢菌菌悬液；
将哈茨木霉菌种接入PDA培养基中25℃培养72h获得哈茨木霉菌悬液；
(2)菌种扩大培养：分别将步骤(1)中的各菌菌悬液接入发酵罐中28℃发酵培养8d后减压干燥粉碎即可获得各菌菌剂；各菌剂中活菌数不小于0.2亿个/g；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的4kg链霉菌、1kg淡紫紫孢菌、1kg哈茨木霉混合获得复合微生物菌剂；所述的链霉菌中包含2kg细黄链霉菌、1kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌；复合菌剂中的有效活菌数不小于0.2亿个/g；杂菌数小于1％，含水量小于10％。
实施例2
含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)菌种活化
将细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌菌种分别接入高氏一号培养基中28℃培养36h获得链霉菌菌悬液；
将淡紫紫孢菌菌种接入PDA培养基中28℃培养36h获得淡紫紫孢菌菌悬液；
将哈茨木霉菌种接入PDA培养基中28℃培养60h获得哈茨木霉菌悬液；
(2)菌种扩大培养：分别将步骤(1)中的各菌菌悬液接入发酵罐中28℃发酵培养8d减压干燥粉碎即可获得各菌菌粉；各菌粉中活菌数不小于0.2亿个/g；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的5kg链霉菌、2kg淡紫紫孢菌、1kg哈茨木霉混合均匀获得复合微生物菌剂；所述的链霉菌中包含2kg细黄链霉菌、2kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌；复合菌剂中的有效活菌数不小于0.2亿个/g；杂菌数小于1％，含水量小于10％。
实施例3
含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)菌种活化
将细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌菌种分别接入高氏一号培养基中28℃培养36h获得链霉菌菌悬液；
将淡紫紫孢菌菌种接入PDA培养基中28℃培养36h获得淡紫紫孢菌菌悬液；
将哈茨木霉菌种接入PDA培养基中28℃培养60h获得哈茨木霉菌悬液；
(2)菌种扩大培养：分别将步骤(1)中各菌菌悬液接入发酵罐中30℃发酵培养6d减压干燥粉碎即可获得各菌菌剂；各菌剂中活菌数不小于0.2亿个/g；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的5kg链霉菌、2kg淡紫紫孢菌、1kg哈茨木霉混合均匀获得复合菌剂；所述的链霉菌由2.5kg细黄链霉菌、1.5kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌组成。
实施例4
含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)菌种活化
将细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌菌种分别接入高氏一号培养基中28℃培养36h获得链霉菌菌悬液；
将淡紫紫孢菌菌种接入PDA培养基中28℃培养36h获得淡紫紫孢菌菌悬液；
将哈茨木霉菌种接入PDA培养基中28℃培养60h获得哈茨木霉菌悬液；
(2)菌种扩大培养：分别将步骤(1)中各菌菌悬液接入发酵罐中30℃发酵培养6d减压干燥粉碎即可获得各菌菌剂；各菌剂中活菌数不小于0.2亿个/g；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的5kg链霉菌、2kg淡紫紫孢菌、1kg哈茨木霉混合获得复合菌剂；所述的链霉菌由3kg细黄链霉菌、1kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌组成。
实施例5
含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)菌种活化
将细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌菌种分别接入高氏一号培养基中30℃培养24h获得链霉菌菌悬液；
将淡紫紫孢菌菌种接入PDA培养基中30℃培养24h获得淡紫紫孢菌菌悬液；
将哈茨木霉菌种接入PDA培养基中30℃培养72h获得哈茨木霉菌悬液；
(2)菌种扩大培养：分别将步骤(1)中各菌菌悬液接入发酵罐中30℃发酵培养6d减压干燥粉碎即可获得各菌菌剂；各菌剂中活菌数不小于0.2亿个/g；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的6kg链霉菌、3kg淡紫紫孢菌、1kg哈茨木霉混合获得复合菌剂；所述的链霉菌由3kg细黄链霉菌、2kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌组成。
对比例1
采用与实施例2相同的方法培养获得的细黄链霉菌单菌剂。
对比例2
采用与实施例2相同的方法培养获得的密旋链霉菌单菌剂。
对比例3
采用与实施例2相同的方法培养获得的娄彻氏链霉菌单菌剂。
对比例4
采用与实施例2相同的方法培养获得的淡紫紫孢菌单菌剂。
对比例5
采用与实施例2相同的方法培养获得的哈茨木霉单菌剂。
对比例6
采用与实施例2基本相同的方法获得复合菌剂；不同之处在于步骤(3)；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的2kg淡紫紫孢菌、1kg哈茨木霉混合均匀获得复合微生物菌剂；所述的链霉菌中包含2kg细黄链霉菌、2kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌；复合菌剂中的有效活菌数不小于0.2亿个/g；杂菌数小于1％，含水量小于10％。
对比例7
采用与实施例2基本相同的方法获得复合菌剂；不同之处在于步骤(3)；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的5kg链霉菌、1kg哈茨木霉混合均匀获得复合微生物菌剂；所述的链霉菌中包含2kg细黄链霉菌、2kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌；复合菌剂中的有效活菌数不小于0.2亿个/g；杂菌数小于1％，含水量小于10％。
对比例8
采用与实施例2基本相同的方法获得复合菌剂；不同之处在于步骤(3)；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的5kg链霉菌、2kg淡紫紫孢菌混合均匀获得复合微生物菌剂；所述的链霉菌中包含2kg细黄链霉菌、2kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌；复合菌剂中的有效活菌数不小于0.2亿个/g；杂菌数小于1％，含水量小于10％。
对比例9
采用与实施例2基本相同的方法获得复合菌剂；不同之处在于步骤(3)；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的5kg链霉菌、4kg淡紫紫孢菌、1kg哈茨木霉混合均匀获得复合微生物菌剂；所述的链霉菌中包含2kg细黄链霉菌、2kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌；复合菌剂中的有效活菌数不小于0.2亿个/g；杂菌数小于1％，含水量小于10％。
对比例10
采用与实施例2基本相同的方法获得复合菌剂；不同之处在于步骤(3)；
(3)复合菌剂制备：将步骤(2)获得的3kg链霉菌、3kg淡紫紫孢菌、1kg哈茨木霉混合均匀获得复合微生物菌剂；所述的链霉菌中包含2kg细黄链霉菌、2kg密旋链霉菌和1kg娄彻氏链霉菌；复合菌剂中的有效活菌数不小于0.2亿个/g；杂菌数小于1％，含水量小于10％。
本发明的复合菌剂对灰霉病菌、叶霉病菌的抑制效果评价
对本发明的实施例1-5以及对比例1-10制备的复合菌剂(依次记为A1-5组，B1-10组)对灰霉病菌、叶霉病菌抑制效果进行了测试。具体方法包括以下步骤：
(1)PDA平板准备：采用十字交叉法将制备好的PDA平板中央和周围分别用直径0.5cm的打孔器打孔，其中平板中央孔圆心距离周围4个孔圆心的距离均为4cm；
(2)菌种培养：在无菌条件下，在平板中央孔中用接种针接种灰葡萄孢菌、黄枝孢菌；在四周孔中接种复合菌剂，每个处理重复3板；其中，平板中央只接种灰葡萄孢菌(BC)、黄枝孢菌(CF)的处理作为空白对照；在28℃培养、观察，统计抑制效果；结果如表1所示。
表1.
由表1可以看出，本发明实施例1-5制备的复合菌剂对对灰葡萄孢菌、黄枝孢菌表现处较好的抑菌效果，且对灰葡萄孢菌的抑制效果优于黄枝孢菌；本发明实施例1-5对两种菌种的抑菌率均高于对比例1-10中单个菌种菌剂以及各菌种复配比例不在本发明记载的范围内获得的复合菌剂，且对比例9-10不在本发明的各菌种复配范围内的复合菌剂的抑菌率最低。
本发明复合菌剂对番茄病害的防治效果评价
将本发明的实施例1-5以及对比例1-10制备的复合菌剂(依次记为A1-5组，B1-10组)对番茄病害的防治效果进行了探究；
试验基地为商丘市某番茄种植试验基地，在播种番茄前进行整地处理，分别加入本发明的复合菌剂的基肥，分为16组(100m2/组)，；其中，空白对照组(A0)不施加复合菌剂；试验组分别施加不同复合菌剂；复合菌剂施加量为15kg/亩；番茄种植模式为：株距30cm、行距50cm，种植密度为3000株/亩；除施加不同的复合菌剂外，番茄均进行相同的田间管理至番茄完全收获；达到番茄坐果期(即种植番茄一个月后)，采用随机取样的方法对20m2地块的番茄进行计数；对发生灰霉病、叶霉病的番茄进行统计，计算番茄发病率；番茄完全收获后，记录番茄的产量；结果记录于表2。
表2.
由表2数据可以看出，本发明实施例1-5制备获得的复合菌剂表现处良好的抗番茄灰霉病、叶霉病效果，对番茄的生长表现出促进作用，显著提高了番茄的产量，增产率达到了30.7以上，且实施例2中链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉的重量比为；相较于对比例1-10；本发明的复合菌剂对番茄病害的防治效果优于对比例1-10；番茄的增产率高于对比例1-10；细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌、淡紫紫孢菌和哈茨木霉均表现出一定的防治番茄灰霉病和叶霉病的效果，四种菌种以一定比例复合后相互协同，对病原菌的防治效果提升，当链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉菌的重量比为5:2:1时，且链霉菌中细黄链霉菌、密旋链霉菌和娄彻氏链霉菌的重量比为2.5:1.5:1时；防治番茄病害的效果最好；当淡紫紫孢菌比例增加时，防治效果降低，其对链霉菌以及哈茨木霉菌具有抑制作用，降低了协同作用的效果。
以上实验例仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (9)
1.一种含有链霉菌的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂包含链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉 ；所述的链霉菌包含细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌。
2.如权利要求1所述的含有链霉菌的复合微生物菌剂，其特征在于，所述的链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉的重量比为4-6:1-3:1。
3.如权利要求1所述的含有链霉菌的复合微生物菌剂，其特征在于，所述的细黄链霉菌、密旋链霉菌、娄彻氏链霉菌的重量比为2-3:1-2:1。
4.如权利要求1所述的含有链霉菌的复合微生物菌剂，其特征在于，所述的链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉的重量比为5:2:1。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
（1）菌种活化：将链霉菌接入高氏一号培养基中进行培养获得链霉菌菌悬液；将淡紫紫孢菌斜面接入PDA培养基中进行培养获得淡紫紫孢菌菌悬液；将哈茨木霉接入PDA培养基中进行培养获得哈茨木霉菌悬液；
（2）菌种扩大培养：将步骤（1）中的菌悬液接入发酵罐中进行发酵培养后减压干燥粉碎获得对应菌粉；
（3）复合菌剂制备：将步骤（2）获得的链霉菌、淡紫紫孢菌、哈茨木霉菌粉混合均匀获得复合微生物菌剂。
6.如权利要求5所述的含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的链霉菌或淡紫紫孢菌的培养为25-30℃，培养时间为24-48 h；所述的哈茨木霉的培养温度为25-30℃，培养时间为48-72 h。
7.如权利要求5所述的含有链霉菌的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤（1）步骤（2）所述的发酵罐培养温度为28-30℃，发酵培养时间为6-8d。
8.权利要求1-4任一项所述的复合微生物菌剂在防治作物病害方面的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的作物病害为灰霉病或叶霉病。
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