CN114377111B

CN114377111B - 一种化痰止咳的药物组合物

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Publication number: CN114377111B
Application number: CN202210052748.0A
Authority: CN
Inventors: 黄靖; 赖文君
Original assignee: Shanghai Pulmonary Hospital
Current assignee: Shanghai Pulmonary Hospital
Priority date: 2022-01-17
Filing date: 2022-01-17
Publication date: 2023-09-12
Anticipated expiration: 2042-01-17
Also published as: CN114377111A

Abstract

本申请涉及一种化痰止咳的药物组合物。具体涉及甘氨酰脯氨酰丝氨酸用于制备化痰止咳药物的用途及包含甘氨酰脯氨酰丝氨酸的化痰止咳的药物组合物和制备方法。本申请首次发现甘氨酰脯氨酰丝氨酸的化痰止咳作用，并将其进一步制备成口服制剂，通过小鼠毒性试验，小鼠咳嗽模型，豚鼠咳嗽模型，小鼠咳痰试验模型，比格犬咳嗽有痰试验模型证实，甘氨酰脯氨酰丝氨酸及制备成口服药物组合物后，具有显著的化痰止咳作用。

Description

一种化痰止咳的药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种化痰止咳的药物组合物和制备方法。

背景技术

随着城镇化和工业进程的加速，工业废气、汽车尾气、煤烟尘等污染物的无序排放，导致空气中的灰尘、细菌、病毒和可吸入颗粒物等污染物严重超标，它们与雾气结合在一起，形成雾霾，在这种天气下，当人们出行或在日常工作生活中，空气中的微小颗粒(主要指直径小于或等于2.5微米的颗粒物，即PM2.5)就会在人们毫无防范的时候侵入人体呼吸道和肺叶中。

“雾霾”成分中二氧化硫被人体吸入呼吸道后，因易溶于水，故大部分被阻滞在上呼吸道上，在湿润的粘膜上，生成具有腐蚀性的亚硫酸，一部分进而氧化为硫酸，使刺激作用增强，如果人体每天吸入浓度为100PPM的二氧化硫，8小时后，支气管和肺部将会出现明显的刺激症状，使肺部组织受到伤害，如果二氧化硫进入人体肺部深层，毒性将增加3-4千倍，导致肺泡壁纤维增生等疾病，由于PM2.5颗粒小，很容易通过人体的鼻腔、口腔、咽喉进入支气管、肺泡等组织进而造成人体呼吸系统疾病，如咽喉炎、过敏、气喘、鼻炎、鼻窦炎、肺气肿等，临床表现为咳嗽、咳痰、流鼻涕、鼻塞、打喷噎、咽干等，长期处于这种环境下，还会诱发肺癌、心肌缺血及损伤，对人体造成很大的危害。

在雾霾天气下，咳嗽是一种常见的呼吸道症状，一般由于气管、支气管黏膜或胸膜受炎症、异物、物理或化学性刺激引起。咳嗽具有清除呼吸道异物和分泌物的保护性作用。但如果咳嗽不停，由急性转为慢性，常给患者带来很大的痛苦，如胸闷、咽痒、气喘等，而持久剧烈的咳嗽不但影响休息，还易消耗体力，并可引起肺泡壁弹性组织的破坏，诱发肺气肿。咳嗽可伴随咳痰，因此一般止咳的同时也需祛痰、化痰。

慢性支气管炎是气管、支气管黏膜及周围组织的慢性非特异性炎症。临床以咳嗽、咳痰为主要症状，每年发病持续3个月，连续2年或2年以上。缓慢起病，病程长，反复急性发作而病情加重。主要症状为咳嗽、咳痰，或伴有喘息。急性加重系指咳嗽、咳痰、喘息等症状突然加重。急性加重的主要原因是呼吸道感染，病原体可以是病毒、细菌、支原体和衣原体等。

无论是支气管炎、气管炎，还是肺炎都会引起咳嗽有痰。支气管炎、气管炎、肺炎也往往因为长时间的咳嗽有痰而被检查发现。而且支气管炎等病症如不加注意自身体质加强，还容易恶化成年度周期性的复发。感冒也是引起肺炎、支气管炎的一种常见的病因。

丘角菱(学名：Trapa japonica Flerow)是菱科菱属植物，一年生浮水水生草本。根二型：着生水底泥中；同化根，茎圆柱形柔弱；叶二型：浮水叶互生，绿色或带紫红色，叶片呈菱形或卵状菱形，叶柄中上部膨大成海绵质气囊，被淡褐色短毛；沉水叶小，早落。果喙稍明显，果冠小，稍明显，5-10月开花，7-11月结果。

丘角菱分布于俄罗斯、朝鲜、日本和中国。在中国分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、河南、山东、安徽、江苏、浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、广西、四川、云南等省区水域。

丘角菱喜光照充足。环境荫蔽则植株生长不良。喜温暖，怕寒冷，在20-30℃的温度范围内生长良好。

该种植物适合露地栽培，为池塘水面的装饰材料。其茎、叶能够作为饲料；果实富含淀粉，可供食用、酿酒，还可入药，主治肾寒、腰痛、阳痿、滑精等症。

2019年，韩国科学家Young-Min Kim等，在《Scientific Reports》发表论文《Thepeptide AC2 isolated from Bacillus-treated Trapa japonica fruit extractrescues DHT(dihydrotestosterone)-treated human dermal papilla cells andmediates mTORC1 signaling for autophagy and apoptosis suppression(译为：经发酵的丘角菱果实提取物中鉴定的肽AC2拯救DHT(Dihydrotestorone)-Treated人类皮脂乳头细胞，并介导MTORC1信号传导进行自噬和凋亡抑制)的研究文章。

文章从发酵的丘角菱果实中分离鉴定了具有如下化学结果的小分子三肽化合物(AC2)：

论文指出，上述三肽化合物与细胞增殖和胶原蛋白合成有关。使用含有0.5％此化合物作为化妆品成分的眼霜进行了一项临床研究。经证实，使用该化妆品8周可改善与皮肤老化有关的皱纹。结果表明，含有此三肽化合物的化妆品显示出作为具有抗衰老作用的功能性化妆品的潜力。

论文中给出了上述三肽化合物的提取方法，如下：

用正己烷、CH₂Cl₂、乙酸乙酯、正丁醇和水进一步分馏Trapa japonica果实。分别获得五个级分。确认蛋白质含量后，使用旋转蒸发仪(Dlab，RE100-pro)在减压下浓缩水相部分。然后在硅胶柱(70-230目，Merck art 4*20cm)上进行柱层析，使用水-甲醇梯度(水∶甲醇＝90∶10，80∶20，70∶30，0∶100)和Sehpadex LH20柱层析(甲醇)得到五个馏分(Fr.1-5)。馏分2在RP硅胶柱上进行色谱分离，用水-甲醇梯度洗脱，并通过薄层色谱法(TLC MerckArt.)监测以分离五个馏分(Fr.2-1～2-5)。之后，通过高效液相色谱(HPLC)制备从馏分2-2中分离出单一化合物1至6。HPLC分析在Waters 2690分离模块和Waters 2487双吸光度检测器上进行。分析柱(Xterra C₁₈ ODS，0.5×250nm)填充Lichrospher 100RP-18(15μm，MerckCo，)，得到化合物1为白色无定形粉末；

EI-MS m/z 303.13[M]+。

1H-NMR(D₂O，600MHz)1.859(4H，m，13，6-CH₂)，1.941(3H，s，15-CH₃)，2.025(1H，m，7-CH₂)，2.138(1H，m，7-CH₂)，2.439(2H，m，14S-CH₂)，3.818(2H，s，2-CH₂)4.321，4.394(1H，m，8-CH)。

并给出了三肽AC2的合成方法，如下：

AC2肽合成机制。AC2通过以下过程合成了三种氨基酸(Fmoc丝氨酸、甘氨酸和脯氨酸)。首先，使用2-氯三苯甲基氯树脂和二氯甲烷(MC)对三种氨基酸进行充气和清洁。然后，在与氨基酸中的DMF(二甲酰甲酰胺)和DIPEA(N，N-二异丙基乙胺)反应后，通过与去封闭溶液(例如，2.5％二氯乙酸的二氯甲烷溶液)反应来连接一级氨基酸。接下来，用含有DMF的HOBt(1-羟基苯并三唑)溶解并与HBTU(O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯)混合，加入DIPEA以连接另一个氨基酸。合成的树脂用TFA(三氟乙酸)和MC浓缩。重复合成过程，在浓缩树脂中与三氟乙酸和蒸馏水反应，分布在乙醚中，干燥。将干燥的粉末溶解在蒸馏水中以使用制备型液相色谱合成纯度为95％或更高的AC2肽。

即以本领域技术人员之常识，以固相合成法，逐个加入三个氨基酸，顺序反应生成三肽化合物。

发明内容

发明人通过对化痰止咳类化合物的研究，尤其是上述文献中丘角菱中提取的化合物的研究。

首先，本发明提供一种具有止咳化痰作用的化合物，甘氨酰脯氨酰丝氨酸(AC2)，化学名：2-[[1-(2-氨基乙酰基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-羟基丙酸，分子量：259.26，化学式：C₁₀H₁₇N₃O₅，化学结构式如式(1)所示：

其次，提供甘氨酰脯氨酰丝氨酸在制备化痰止咳药物中的应用。

所述甘氨酰脯氨酰丝氨酸还可以是其旋光异构体。

所述甘氨酰脯氨酰丝氨酸还可以是其药用盐。

所述甘氨酰脯氨酰丝氨酸的药用盐是在化合物结构的羧基部分形成碱式盐。

所述药用盐选自碱金属或碱土金属盐等碱性化合物形成的盐。优选钾盐、钠盐、铵盐。

其中，所述化痰止咳，即促进痰的溶解和排除，并消除咳嗽症状。

所述痰是呼吸道受到刺激分泌的液体，也叫痰液，成分包含粘液、异物、病原微生物，各种炎症细胞、坏死脱落的粘膜上皮细胞等。

中医学定义：人体水液代谢障碍所形成的病理产物，属继发性病因，较浓稠者称为痰。其病因可以是肺炎，支气管炎，肺结核，肺部感染，肺癌等疾病。

所述咳嗽是由于感染，药物，外部刺激等因素诱发的咳嗽。

本发明的另一个目的在于提供一种以甘氨酰脯氨酰丝氨酸为活性成分的药物组合物。

本发明所述的活性成分所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药学上可接受的载体。

本发明的药物组合物可以制备成任何可药用的剂型，这些剂型包括：普通片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是片剂、散剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、口服液。

本发明的药物组合物，其口服给药的制剂含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、助流剂、矫味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素衍生物、淀粉及淀粉衍生物、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。

适宜的崩解剂包括干淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、淀粉衍生物，例如羧甲淀粉钠，交联羧甲基纤维素钠。

适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁，硬脂酰富马酸钠以及其他硬脂酸盐。

适宜的药物可接受的润湿剂包括十二烷基硫酸钠。

适宜的助流剂包括无水胶态二氧化硅、滑石粉等。

适宜的粘合剂包括聚乙烯比咯烷酮，羟丙基纤维素等粘性聚合物。

可通过混合、制粒(干法制粒或湿法制粒)、干燥、填充，压片，包衣等常用的方法制备固体口服组合物。

口服液体制剂的形式可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品，例如口服干混悬剂，干糖浆剂。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶；乳化剂，例如卵磷脂或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油脂肪酸酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如羟苯甲酯，羟苯乙酯，羟苯丙酯，苯甲酸或钠盐，山梨酸钾等，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。或在将药物装入安瓿或西林瓶后，再做终端灭菌。辅料例如注射用水、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去，即冷冻干燥。

综上，本发明所述的化痰止咳的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药学上可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、酸式碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖酐、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

通过如下试验进一步说明本申请的有益效果：

试验一、甘氨酰脯氨酰丝氨酸的急性毒性实验

试验动物：取昆明种小白鼠80只，体重约为20g，预试验20只，正式试验60只，每组20只雌雄各半，灌胃给药。

预试验：将甘氨酰脯氨酰丝氨酸加入蒸馏水，搅拌制备成最大浓度为0.4g/ml混悬液。参照霍恩(Horn)氏方法，取小鼠20只，雌雄各半，随机分成4组，每组5只，分别灌胃给予不同剂量的甘氨酰脯氨酰丝氨酸，0.1ml/10g，0.2ml/10g，0.3ml/10g，0.4ml/10g，连续观察72小时，未见明显毒性反应。提示灌胃给药难以测出其LD₅₀。

最大给药试验：取小鼠60只，雌雄各半，随机分成3组，每组20只，分别灌胃给予甘氨酰脯氨酰丝氨酸样品溶液，连续观察14天。给药剂量每次按0.2ml/10g，0.3ml/10g，0.4ml/10g给药，一日给药三次，连续给药14天。

观察指标：给药后立即观察动物活动情况包括(小鼠的呼吸、自主活动与行为活动、眼检指征、唾液分泌、竖毛、肌张力、粪便、尿液等)及死亡情况。每天观察上述指标。

试验结果：甘氨酰脯氨酰丝氨酸灌胃给药后，小鼠无明显中毒反应，呼吸正常，自主活动与行为活动无改变，未见眼球分泌物、眼球突出现象，粪便、尿液无异常。

观察期间，试验动物摄食正常，体重增加，一般情况良好。试验结束，离断颈椎处死小鼠进行解剖观察，心、肝、脾、肺、肾、睾丸、子宫等脏器未见明显病理改变。

试验结果提示，在最大给药剂量0.4ml/10g，即按小鼠体重(20g)，每次给予0.8g，每日三次，连续给予14天，对于试验动物是安全的。

试验二、口服甘氨酰脯氨酰丝氨酸对氨水引咳小鼠模型的止咳作用试验(参照文献实施：于兵兵，鱼腥草70％乙醇提取物止咳化痰抗炎镇痛活性研究，时珍国医国药2019年第30卷第4期，829-833)

试验样品制备同试验一(将甘氨酰脯氨酰丝氨酸加入蒸馏水，搅拌制备成最大浓度为0.4g/ml混悬液)。

在操作台上倒扣1000mL的大烧杯，内放一张滤纸，用注射器每次注射0.1mL的氨水在滤纸上，挥发30s后，迅速抽出滤纸，然后将小鼠迅速放至烧杯内，观察并记录小鼠咳嗽潜伏期以及2min内咳嗽次数。小鼠咳嗽潜伏期是指从将小鼠放进充满氨水挥发气体的烧杯开始至发生咳嗽所需的时间。小鼠咳嗽表现一般为腹肌收缩(缩胸)，同时张大口，有时有咳嗽声。

以上述方法筛选一批体重18～24g，咳嗽潜伏期不超过3min，咳嗽反应不过于剧烈的雄性小鼠50只，适应性喂养2天后，按体重随机分为5组，每组10只，即甘氨酰脯氨酰丝氨酸高剂量组(0.08g·kg^-1)、中剂量组(0.04g·kg^-1)、低剂量组(0.02g·kg^-1)、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(复方桔梗止咳片0.35g·kg^-1)，按0.01mL·g^-1灌胃，1次/d，连续给药5天后，最后一次给药前禁食12h，不禁水。给药1h后进行氨水引咳实验，观察并记录小鼠的咳嗽潜伏期以及2min内的咳嗽次数。试验结果如下：

表1口服甘氨酰脯氨酰丝氨酸溶液对小鼠氨水引咳模型的咳嗽次数和咳嗽潜伏期的影响

组别	n	剂量/g·kg^-1	咳嗽潜伏期/s	2min咳嗽次数
					阴性对照组	10	-	11.48±4.00	35.4±9.1
阳性对照组	10	0.35	14.14±2.05	18.8±6.7
					低剂量组	10	0.02	14.31±2.45	17.6±6.1
中剂量组	10	0.04	16.64±3.04	14.4±5.3
					高剂量组	10	0.08	19.84±3.34	11.4±5.6

。

如上表所示，低中高三个剂量组的甘氨酰脯氨酰丝氨酸溶液与阴性对照组相比，对于小鼠氨水引咳模型均存在显著的止咳作用。在低剂量下，即与阳性对照组作用较为接近，并且随着剂量的增加，止咳作用显著增加，具体表现为模型小鼠咳嗽潜伏期明显延长，以及2min咳嗽次数明显减少。

试验三、口服甘氨酰脯氨酰丝氨酸对枸橼酸溶液引咳豚鼠模型的止咳作用试验(参照文献实施：曾茂贵等，民族药蓝花参的止咳化痰药效研究，海峡药学2016年第28卷第3期，1431-1434)

按公式，按体重将试验二小鼠给药剂量折算成豚鼠剂量后，低中高剂量依次约为0.012g·kg^-1，0.0238g·kg^-1和0.0477g·kg^-1，

以多功能雾化器将17.5％的枸橼酸溶液以2mL·min^-1流速向4000mL密封玻璃容器喷雾至容器充满白色雾，依次放入体重250～300g的豚鼠，继续喷雾5min，喷雾终止后立即取出豚鼠，剔除5min内咳嗽次数低于10次者。

次日取筛选合格豚鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。给药组为甘氨酰脯氨酰丝氨酸高剂量组(0.048g·kg^-1)、中剂量组(0.024g·kg^-1)、低剂量组(0.012g·kg^-1)，阴性对照组按高剂量组溶液体积灌胃给予生理盐水；阳性对照组按高剂量组溶液体积灌胃给予等量蒸馏水，末次给吗啡20mg·kg^-1，各试验组每日给药1次，连续给药7d，使药物在模型动物体内达到稳态浓度。末次给药前各组动物禁食不禁水12h，给药后1h按上述方法让豚鼠接受枸橼酸喷雾刺激，时间为120s，观察并记录豚鼠咳嗽潜伏期及2min内咳嗽次数。同样每组实验结束后更换新鲜枸橼酸溶液。结果如下表所示：

表2口服甘氨酰脯氨酰丝氨酸溶液对豚鼠枸橼酸溶液引咳模型的咳嗽次数和咳嗽潜伏期的影响

组别	n	剂量/g·kg^-1	咳嗽潜伏期/s	2min咳嗽次数
					阴性对照组	10	-	66.80±4.15	24.40+3.1
阳性对照组	10	0.020	94.14±14.05	11.9±2.7
					低剂量组	10	0.007	99.33±6.22	10.3±2.8
中剂量组	10	0.015	113.52±7.43	9.4±3.3
					高剂量组	10	0.030	126.90±8.34	6.6±2.8

。

如上数据结果揭示：吗啡组豚鼠与各给药组均显示咳嗽潜伏期延长且2min咳嗽次数减少，与阴性组比较具有显著差异(P＜0.05)，表明口服甘氨酰脯氨酰丝氨酸溶液对豚鼠枸橼酸溶液引咳模型具有一定止咳药效。

试验四、口服甘氨酰脯氨酰丝氨酸溶液对模型小鼠的化痰活性实验(参照文献实施：于兵兵，鱼腥草70％乙醇提取物止咳化痰抗炎镇痛活性研究，时珍国医国药2019年第30卷第4期，829-833)

样品制备同试验一(将甘氨酰脯氨酰丝氨酸加入蒸馏水，搅拌制备成最大浓度为0.4g/ml混悬液)。

采用酚红祛痰法，筛选体重为18～24g小鼠50只，全雄，随机均分为5组，每组10只，即阴性对照组(生理盐水)、甘氨酰脯氨酰丝氨酸高剂量组(0.08g·kg^-1)、中剂量组(0.04g·kg^-1)、低剂量组(0.02g·kg^-1)，阳性对照组(复方桔梗止咳片0.35g·kg^-1)。

每日给药1次，连续给药5天，末次给药30min后，腹腔注射5％酚红0.01ml·g^-1。30min后，脱颈椎处死小鼠，分离气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，放进盛有5mL5％NaHCO₃溶液的试管中，振摇30min，将振摇下来的冲洗液移至试管内，使用紫外可见分光光度计于波长546nm处测定吸光度A，对实验结果进行统计学分析。

表3口服甘氨酰脯氨酰丝氨酸溶液对模型小鼠气管酚红排泌量的影响

上述实验结果显示，甘氨酰脯氨酰丝氨酸溶液口服后呈现出祛痰活性。与空白对照组相比，高中低三个剂量组和阳性药组均能增加小鼠气管酚红的排泌量(P＜0.05)，而甘氨酰脯氨酰丝氨酸高剂量组增加小鼠气管酚红排泌量的作用尤为显著(P＜0.01)，并且低剂量组与阳性药相比即有相似的酚红排泌量，中剂量和高剂量组更加显著增加了分红排泌量。说明口服甘氨酰脯氨酰丝氨酸对于模型小鼠具有较好的祛痰活性。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

实施例1甘氨酰脯氨酰丝氨酸口服溶液的制备(单位：g)

原辅料	处方1	处方2	处方3
				甘氨酰脯氨酰丝氨酸	2g	4g	8g
山梨醇	30g	30g	30g
				山梨酸钾	0.15g	0.15g	0.15g
一水枸橼酸	0.2g	0.2g	0.2g
				0.1M盐酸/氢氧化钠	适量	适量	适量
溶液pH	6.5-7.5	6.5-7.5	6.5-7.5
				纯化水定容至	100ml	100ml	100ml

。

说明：

据小鼠给药低中高三个剂量，按体重折算成成人剂量(成人体重按60kg即，折算系数0.11，每次服用5ml口服液，每次服用约0.1g，0.2g或0.4g)

口服液制备工艺如下：

1)取甘氨酰脯氨酰丝氨酸，山梨醇，山梨酸钾，一水枸橼酸，粉碎，过100目筛，备用；

2)取处方量70％的纯化水，依次加入处方量山梨醇，山梨酸钾，一水枸橼酸，甘氨酰脯氨酰丝氨酸，搅拌，溶解；

3)以0.1M盐酸/氢氧化钠调节步骤2)所得溶液pH至6.5-7.5；

4)加入纯化水定容至全量；

5)以0.45um微孔滤膜滤过，灌装，即得。

实施例2胶囊的制备

原辅料	处方1	处方2	处方3
				甘氨酰脯氨酰丝氨酸	100g	200g	400g
微晶纤维素	42g	84g	168g
				甘露醇	42g	84g	168g
交联羧甲基纤维素钠	10g	20g	40g
				微粉硅胶	4g	8g	16g
硬脂酰富马酸钠	2g	4g	8g
				单位制剂胶囊内容物重	200mg	400mg	800mg
HPMC胶囊壳	1000粒	1000粒	1000粒
				共制成	1000粒	1000粒	1000粒

。

据小鼠给药低中高三个剂量，按体重折算成成人剂量(成人体重按60kg即，折算系数0.11，每次服用一粒胶囊，每次服用0.1g，0.2g或0.4g)

制备工艺：

1)取处方量甘氨酰脯氨酰丝氨酸，微晶纤维素，甘露醇，粉碎，过80目筛，备用；

2)取处方量甘氨酰脯氨酰丝氨酸，微晶纤维素，甘露醇混合均匀，加入适量纯化水，制软材；

3)取步骤2)所得软材，以24目筛网制湿颗粒，60℃干燥，24目筛整粒，得载药颗粒；

4)取步骤3)所得载药颗粒，加入交联羧甲基纤维素钠，混合均匀；

5)取步骤4)所得载药物料，加入微粉硅胶，混合均匀；

6)取步骤5)所得载药物料，加入硬脂酰富马酸钠，混合均匀，得载药中间体；

7)取步骤6)所得载药中间体，灌入HPMC胶囊壳，得胶囊剂。

实施例3片剂的制备

据小鼠给药低中高三个剂量，按体重折算成成人剂量(成人体重按60kg即，折算系数0.11，每次服用一片，每次服用0.1g，0.2g或0.4g)

制备工艺：

5)取步骤4)所得载药物料，加入微粉硅胶，混合均匀；

7)取步骤6)所得载药中间体，压片，得素片；

8)取步骤7)所得素片，以欧巴代amb II包薄膜衣，按素片片中计，包衣增重3％-6％，即得。

实施例4实施例1-3各个口服制剂配方药物对比格犬咳嗽模型的化痰止咳作用

以二氧化硫吸入法制备比格犬咳嗽模型：

以比格犬为试验动物(33只，雌雄随机，年龄1.5-2岁，体重6.5-10.6kg)，顺应性饲养2周后，开始试验，将犬暴露于含500mg·L^-1浓度的二氧化硫混合空气中，应用脉冲荧光二氧化硫分析仪持续监测二氧化硫浓度，使二氧化硫气体流速为560L·min^-1，每日暴露2h，每周5d，其余时间正常饲养。室温维持在24～26℃，相对湿度20％～30％。连续暴露21周时咳嗽明显增多。动物呼气流速下降，呼吸阻力升高，气道黏液清除功能降低。

病理学检查表现为气管纤毛上皮减少、杯状细胞增生，以及黏液分泌增多(有痰)等一些与人类慢性支气管炎病理表现类似的特征。即得咳嗽有痰比格犬模型。

给药方法：将试验动物分为11组，每组3只，分为阴性对照组(口服给予生理盐水)，阳性对照组(口服给复方桔梗止咳片)，样品组(1-9)依次给予实施例1-3的低，中，高三种剂量配方组合物。每日给药三次，连续给药7天。与阳性对照组相比，统计样品组痊愈动物数量。

样品组给药的说明：

据小鼠给药低中高三个剂量，按体重折算成犬口服剂量(折算系数0.21，即按体重计算，低中高三个剂量分别为0.016g·kg^-1，0.008g·kg^-1和0.004g·kg^-1。按比格犬实际体重折算给药，口服液以天平或量筒量取适量体积口服液，胶囊取适量内容物，片剂则切割适当质量包衣片给药。

所得试验结果如下(n＝3)：

组别	动物数	痊愈数
			阴性对照组	3	1
阳性对照组	3	3
			样品组1(口服液配方1)	3	3
样品组2(口服液配方2)	3	3
			样品组3(口服液配方3)	3	3
样品组4(胶囊配方1)	3	3
			样品组5(胶囊配方2)	3	3
样品组6(胶囊配方3)	3	3
			样品组7(片剂配方1)	3	3
样品组8(片剂配方2)	3	3
			样品组9(片剂配方3)	3	3

。

说明：上表所述痊愈，意为连续观察试验动物4小时，即一个给药周期，无咳嗽和咳痰现象。

如上表数据可知，口服给予实施例1-3，低，中，高三个剂量的甘氨酰脯氨酰丝氨酸口服溶液或固体制剂，对于二氧化硫刺激引发的比格犬咳嗽有痰模型，具有显著的治疗作用，其作用至少相当于阳性对照药物(复方桔梗止咳片)。

以上发明内容和实施例描述了本发明专利申请的基本原理和主要特征及本发明专利申请优点，本领域的技术人员应该了解，本发明专利申请不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明专利申请的最优的技术方案，在不脱离本发明专利申请精神和范围的前提下，本发明专利申请还会有各种变化和改进，即含有甘氨酰脯氨酰丝氨酸的任何口服给药剂型及其处方组成，都落入要求保护的本发明专利申请范围内，本发明专利申请要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims

1.甘氨酰脯氨酰丝氨酸在制备化痰止咳药物中的应用，其特征在于，甘氨酰脯氨酰丝氨酸化学结构如下：

。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甘氨酰脯氨酰丝氨酸是其旋光异构体。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甘氨酰脯氨酰丝氨酸是其药用盐。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药用盐为甘氨酰脯氨酰丝氨酸的羧基部分形成的碱式盐。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药用盐为碱金属或碱土金属盐。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药用盐为钾盐、钠盐。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物通过口服给药。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为口服药物组合物。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述口服药物组合物为口服液。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述口服药物组合物为胶囊剂。

11.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述口服药物组合物为片剂。