CN114365805A - 一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料及制备方法，配方包括：芒果、百香果、猴头菇、猴头菇多糖、木糖醇。制备方法具体包括以下步骤：1)制备芒果汁；2)制备百香果汁；3)制备猴头菇汁；4)猴头菇粗多糖的提取；5)混合调配；6)杀菌装罐。本发明与现有技术相比的优点在于：步骤清晰，制备方便。猴头菇多糖具有增强免疫、保护心血管、抗肿瘤、抗疲劳、抗抑郁以及延迟衰老等功效，对人体十分有益，极具有药用价值。添加猴头菇粗多糖，以木糖醇代替蔗糖，在颜色、气味、口感、营养及保健功效等方面优势互补、取长补短，细胞试验和饮用试验表明本饮料具有增强细胞免疫活性和提高机体免疫力的的功能。
Description
技术领域
本发明涉及饮料技术领域，具体是指一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料及制备方法。
背景技术
芒果有着清香风味以及良好的口感，且营养价值高，富含多种人体需要的营养物质，如蛋白质、 Vc、胡萝卜素、粗纤维等。据研究发现，100g果肉里，维生素C的含量为14mg到41mg,蛋白质的含量为0.65g到1.31g。芒果在药用价值方面，有抗衰老、抗氧化、防高血压、降低甘油三脂、胆固醇等功效，加工制成芒果汁，有解渴利尿、清热生津的功效。
关于芒果饮料的研究，近年来有一些报道。丁培峰等(姜汁、芒果汁复合饮料的研制.食品研究与开发,2010,31(09):110-112.)以生姜、芒果研发出一款具微辣、酸酸甜甜、适合大部分人群饮用的健康饮料；蒋桂芳等(陈皮芒果果奶的加工工艺及稳定性研究.中国食品添加剂,2020,31(02):119-125.)以陈皮、芒果与脱脂乳粉为原料，通过单因素试验和正交试验，研制出一款营养健康、口味独特的果奶饮料。
百香果是著名的果汁型热带水果，富含营养，香气独特，适合加工成果汁，其酸酸甜甜的口感受到大多数人们的喜欢。据研究表明百香果汁的主要营养成分为:蛋白质2.15％,VC29.9mg/100g,总糖 8.68％,β-胡萝卜素41.2μg/100g,铁1.51mg/100g,磷47.97mg/100g,钙6.3mg/100g,总多酚67.35mg/100g FW，
百香果饮料的研究也由一些报道，卢利平等(百香果茅岩莓茶饮料的研制.食品工业科技,2020,41(18): 117-122.)将百香果和茅岩莓结合,添加冰糖调节甜度，研发出具有百香果和茅岩莓独特滋味的百香果茅岩莓茶饮料。余森艳等(甘蔗百香果热带复合果汁饮料的生产工艺.轻工科技,2020,36(04):1-4.)研发出配方为甘蔗原汁：百香果原汁4：1，添加2％白砂糖和0.20％柠檬酸，并加入0.10％CMC-Na、0.15％黄原胶作为稳定剂，得到的复合果汁饮料在组织状态、气味、色泽、滋味等方面感官评价俱佳。张丹等(甘蔗百香果热带复合果汁饮料的生产工艺.轻工科技,2020,36(04):1-4.)以百香果和枸杞为主要原料研发复合饮料,百香果汁与枸杞汁的比例为1∶3，添加8％白砂糖、0.06％柠檬酸。研发出的饮料质地均匀、酸甜可口、具有百香果、枸杞独特清香的复合饮料。
猴头菇鲜美可口、富含多糖，是中国的名贵菜肴之一，有“山珍猴头、海味燕窝”美誉。是一种高蛋白、低脂肪、富含矿物质和维生素的优良食品，且药用价值高，具有防癌、防溃疡、抗辐射、延迟衰老等功效。猴头菇多糖具有显著的保健功效，如养胃、增强免疫功能、降血糖、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳等功能。目前，市场上以猴头菇为原料的深加工产品较为少见。
这几年有一些学者对猴头菇饮料进行研究。叶俊等(猴头菇枸杞复合饮料的制备工艺.农产品加工, 2019(23):40-42.)以猴头菇、枸杞为主要原料，研制出营养美味、稳定性良好的猴头菇枸杞复合饮料。薛露等(猴头菇枸杞复合饮料的制备工艺.农产品加工,2019(23):40-42.)以猴头菇、枸杞和蓝莓为主要原料，研发出口感优良、风味独特的蓝莓枸杞猴头菇混合饮料。郝涤非等(猴头菇葡萄汁保健饮料的研制.农产品加工,2011(07):73-75.)以猴头菇、新鲜葡萄为原料,并添加蔗糖、柠檬酸,研制的猴头菇葡萄汁保健饮料营养丰富、具有较高的保健价值。
上述复合饮料的研究中，制作工艺中均有蔗糖或者冰糖的添加，不利于血糖偏高的人群饮用，而且没有添加菌菇活性多糖，也没有对饮料的饮用效果进行研究。随着经济发展和生活节奏的不断加快，人们对食品的要求也发生了改变，从以前的好吃管饱发展为要求健康、富含营养、能增强人体素质。而营养丰富、健康美味、绿色纯天然的果蔬饮料日益受到人们的欢迎。从文献调研情况可知，尚未见有将芒果汁、百香果汁与猴头菇汁进行复合调配并添加猴头菇多糖的复合营养饮料的研究报道。以芒果、百香果和猴头菇为原料，添加柠檬酸、木糖醇为辅料，并从猴头菇中提取猴头菇多糖添加入饮料中，研制出的一款低糖、富含猴头菇多糖和多种维生素和的健康营养饮料，优势互补了三种食材的营养成分，额外添加的猴头菇多糖，强化了该饮料提高免疫的功效，而且制作过程不添加蔗糖、色素和香精，非常符合当今人们崇尚绿色、天然的健康饮食理念。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料，以解决上述背景技术中提出的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料，包括以下重量份的成分：80份芒果汁、10份百香果汁、10份猴头菇汁、7％木糖醇、1％猴头菇粗多糖。
一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)芒果汁制备
挑选新鲜芒果：选用八至九成熟的百色小台芒，外表无斑点且无腐烂为最佳，清洗之后去皮去核、称量果肉重量；根据果肉重量计算水量(纯净水)，料液比为1:1.5。将果肉投入配好的4％Vc溶液护色，然后倒入破壁机匀浆，得到芒果原浆；离心过滤：用离心机5000转离心3分钟后，倒出芒果汁上清液，得到澄清芒果汁。
(2)百香果汁制备
挑选九成熟的百香果，且表面无黑斑、损伤；切半，挖出果肉后称量果肉重量；按果肉：水1:2比例加入纯净水，榨汁机打浆2到4秒，使果肉里的果汁融到水里；用无菌纱布过滤，得到百香果果汁。
(3)猴头菇汁制备
挑选猴头菇(可用干猴头菇)、称重、清洗；将猴头菇清洗干净，按1：30比例加入纯净水，浸泡20min，浸泡完成后，用破壁机匀浆，得到原浆；将原浆装入烧杯中，放入90℃恒温水浴锅中浸提 60min；离心过滤：待猴头菇汁冷却至室温时，用无菌纱布过滤，滤去粗纤维，再用离心机离心5000转 6分钟后，倒出上清液，再用无菌细纱布过滤得到澄清菇汁。
(4)猴头菇粗多糖提取
将猴头菇烘干、粉碎过筛→加入一定体积50℃蒸馏水→微波处理→酶解处理→灭酶处理→离心取上清液→浓缩、醇沉→离心、干燥→猴头菇粗多糖
(5)复合果汁调配
将准备好的芒果汁、百香果汁与猴头菇汁按比例混合、加入木糖醇和猴头菇多糖，通过单因素、正交等实验，得出芒果百香果猴头菇复合饮料的最佳配方。
(6)杀菌及冷却
灭菌的时间和温度会影响饮料的口感和营养，所以将灭菌温度固定为100度，将灭菌时间设为单因素。产品灭菌后冷却至室温。
本发明与现有技术相比的优点在于：步骤清晰，制备方便，芒果香味甜而不腻，果肉香甜可口且富含维生素；百香果香气宜人，口感独特；猴头菇营养丰富，富含游离氨基酸和活性多糖，猴头菇多糖具有提高免疫力、保护心血管、抗肿瘤、抗疲劳、抗抑郁以及延迟衰老等功效,极具有药用价值。将芒果汁、百香果汁、猴头菇汁以及富含生物活性的猴头菇粗多糖按一定比例混合调配，在颜色、气味、口感、营养及保健功效等方面可以优势互补、取长补短，具有很好的市场推广价值。
附图说明
图1是LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型。
具体实施方式
下面用具体实施例说明本发明，并不是对本发明的限制。
(1)芒果汁制备
挑选新鲜芒果：选用八至九成熟的百色小台芒，外表无斑点且无腐烂为最佳，清洗之后去皮去核、称量果肉重量；根据果肉重量计算水量(纯净水)，料液比为1:1.5。将果肉投入配好的4％Vc溶液护色，然后倒入破壁机匀浆，得到芒果原浆；离心过滤：用离心机5000转离心3分钟后，倒出芒果汁上清液，得到澄清芒果汁。
(2)百香果汁制备
挑选九成熟的百香果，且表面无黑斑、损伤；切半，挖出果肉后称量果肉重量；按果肉：水1:2比例加入纯净水，榨汁机打浆2到4秒，使果肉里的果汁融到水里；用无菌纱布过滤，得到百香果果汁。
(3)猴头菇汁制备
挑选猴头菇(可用干猴头菇)、称重、清洗；将猴头菇清洗干净，按1：30比例加入纯净水，浸泡 20min，浸泡完成后，用破壁机匀浆，得到原浆；将原浆装入烧杯中，放入90℃恒温水浴锅中浸提 60min；离心过滤：待猴头菇汁冷却至室温时，用无菌纱布过滤，滤去粗纤维，再用离心机离心5000转 6分钟后，倒出上清液，再用无菌细纱布过滤得到澄清菇汁。
(4)猴头菇多糖提取
将猴头菇烘干、粉碎过筛→加入一定体积50℃蒸馏水→微波处理→酶解处理→灭酶处理→离心取上清液→浓缩、醇沉→离心、干燥→猴头菇粗多糖
(5)复合果汁调配
将准备好的芒果汁、百香果汁与猴头菇汁按比例混合、加入木糖醇和猴头菇多糖，通过单因素、正交等实验，得出芒果百香果猴头菇复合饮料的最佳配方。
(6)杀菌及冷却
灭菌的时间和温度会影响饮料的口感和营养，所以将灭菌温度固定为100度，将灭菌时间设为单因素。产品灭菌后冷却至室温。
单因素实验
(1)芒果汁、百香果汁与猴头菇汁体积的确定
通过预实验，得知芒果、百香果和猴头菇汁比例用量范围，设定芒果汁、百香果汁与猴头菇汁的比例分别取60:20:20、70:15:15、80:10:10、90:5:5，木糖醇的添加量为7％，灭菌时间为8min。进行单因素实验。通过感官评价的分数高低选出最佳芒果汁、百香果汁与猴头菇汁体积比。
(2)木糖醇添加量的确定
通过预实验得出木糖醇添加量范围，设定木糖醇添加量为6％、7％、8％、9％。固定芒果汁、百香果汁和猴头菇汁的比例为80:10:10、灭菌时间为8min。通过感官评价的评分选出最佳木糖醇的添加量。
(3)灭菌时间的确定
通过预实验的出灭菌时间的大概范围，设定灭菌时间为6min、8min、10min、12min。固定芒果汁、百香果汁和猴头菇汁的比例为80:10:10、木糖醇添加量为7％。通过感官评价的评分选出最佳灭菌时间。
正交实验
通过单因素实验得到最佳因素设定值，并进行L9(34)正交实验，得到芒果百香果猴头菇最优配方。
表1 3因素3水平设计表
感官评价标准
请20位同学品尝饮料，根据芒果百香果猴头菇营养复合饮料评价表对饮料进行风味评价。
表2芒果百香果猴头菇营养复合饮料感官评价表
猴头菇粗多糖添加量
取100g芒果百香果猴头菇饮料，多次添加猴头菇多糖，每次重量为0.1g，直至猴头菇多糖无法溶解，记录猴头菇多糖添加量，确定猴头菇多糖在100g饮料中最大溶解度，结果为：在饮料中猴头菇多糖的最大添加量为1％。
结果与分析
单因素实验结果及分析
芒果汁、百香果汁、猴头菇汁混合比例的确定
由表3可知，芒果汁所占比例越大，感官评分越高。说明不同芒果汁、百香果汁和猴头菇汁的比例会影响饮料的感官。当比例为60:20:20时，可能由于百香果汁和猴头菇汁较多，感官评分最低，百香果香味较重，口感较酸，酸甜比例不协调，饮料色泽较暗淡。比例为70:15:15时也有上述情况。比例为 90:5:5时，只有芒果味，无百香果味。当比例为80:10:10时，感官评分最高，饮料香气以芒果香味为主，有较淡的百香果香气，饮料颜色明黄澄亮、酸甜适宜。由此可得出芒果汁、百香果汁、猴头菇汁最佳比例为80:10:10。
表3芒果汁、百香果汁、猴头菇汁混合比例感官评价得分
木糖醇添加量的确定
本产品以木糖醇代替蔗糖，调节饮料的甜酸比。木糖醇对饮料的颜色、气味和组织状态无明显影响。后减小。当木糖醇添加量为5％时，感官评分最低，饮料偏酸。当木糖醇添加量为8％时，饮料口感偏甜，且回味过于甜腻。当木糖醇添加量为7％时，感官评分最高，饮料酸甜比例适宜，口感最佳，因此确定饮料最佳木糖醇添加量为7％。
表4木糖醇添加量的感官评分
灭菌时间的确定
灭菌时间对饮料的滋味和气味有一定的影响，由表5可知，随灭菌时间的延长，感官评分先是增长，在灭菌时间为10min时评分最高，而后下降。灭菌时间为6min时，饮料滋味评分最低，口感略酸，回味有点生涩。当灭菌时间为12min时，饮料滋味偏甜，且香气混杂。而灭菌时间为10min时，饮料颜色橙黄明亮，芒果香气和百香果香气协调，酸甜比例适宜。由此得出，最佳灭菌时间为10min。
表5灭菌时间与感官评价得分关系表
正交实验结果的分析
表6正交实验结果
注：上数据为3次平行实验的均值
由上表知，通过极差分析，可得出结论在产品中影响感官评价因素，影响最大的是芒果汁、百香果汁与菇汁比，其次是灭菌时间，影响最小的是木糖醇的添加量。在A列中最大值为k2，即芒果汁、百香果汁与猴头菇汁的比应为8:1:1，在B列中最大值为k2，即木糖醇的添加量应为7％，在C列中最大值为 k1，即灭菌时间为9min。
对比验证试验结果分析
由表6可观察出，芒果百香果猴头菇复合营养饮料的感官评分最高为第6组，即A2B2C，与优方案 A4B3C3不符合，所以需要进行对比验证实验，通过感官评价得分确定最佳实验结果。对比验证结果如下。
表7验证实验分析结果
由表7可看出，优方案组的感官评价得分比正交实验中感官最高组的得分要高，由此可确定芒果百香果猴头菇复合营养饮料的最佳工艺条件是：芒果汁：百香果：猴头菇汁为8:1:1、木糖醇添加量为7％、灭菌时间为9min。
猴头菇粗多糖添加量的确定
通过往100g饮料中添加猴头菇多糖试验发现，猴头菇粗多糖在100g饮料中最大溶解量为1g，因此确定饮料配方中猴头菇粗多糖的添加量为1％，猴头菇粗多糖的平均提取率为5％，即100克干的猴头菇粉，能提取出来的猴头菇粗多糖为5克，按照100克饮料添加1g粗多糖，则相当于100g饮料中加入了 20g干的猴头菇粉中的精华成分，提取出来的粗多糖中除了含有纯的多糖成分，还含有大量的与多糖成分结合的糖蛋白，这些成分都是对提高机体免疫力有益的活性成分。
将饮料产品送到第三方检测机构进行活性多糖含量的检测，检测结果为产品中猴头菇纯多糖含量 (以葡萄糖计)为162.0mg/100g。
产品理化指标检测结果
饮料的营养指标和卫生指标检测结果
表8理化指标测试结果及方法
产品的卫生指标符合国家相关标准。
功能研究试验——细胞试验
1多糖纯化和含量检测
1.1多糖的纯化
利用Sevage法去除多糖溶液中的蛋白质。将Sevage试剂(三氯甲烷：正丁醇＝4:1)加入粗多糖溶液中，多糖水溶液与Sevage试剂的体积比例为3:1充分混匀，涡旋震荡5min后，在高速冷冻离心机中以4500r/min的转速离心15min，吸取上清液，弃去游离蛋白产生的凝胶状沉淀。如此重复多次直至无蛋白质凝胶层析出。收集好每次除蛋白后的上清液，混合上清液后加入无水乙醇得到沉淀的多糖，烘干去除溶剂再用去离子水溶解，得到去除蛋白的粗多糖溶液。
将粗多糖溶液装入透析袋中，置于水缸中透析24h后，取出烘干备用。
1.2采用硫酸—苯酚法测定多糖的含量
2多糖抗炎活性检测
2.1细胞的培养
将巨噬细胞RAW246.7培养于含有10％胎牛血清、1％100mg/L链霉素和100U/mL青霉素的RPMI 高糖培养基中，放置于37℃、5％CO2、95％湿度的培养箱中培养，每隔一天用PBS清洗后再用 0.02％EDTA和0.25％的胰蛋白酶细胞消化液进行传代培养。
2.2利用LPS诱导巨噬细胞RAW246.7建立炎症模型
取对数生长期细胞按照1×104个/孔的数目接种到96孔板中，放置于37℃、5％的CO2、95％水分的养箱中培养24h后用PBS清洗3次后，分别设置空白组和炎症模型组,炎症组加入不同浓度的脂多糖溶液，每个组分别设置3个复孔，每个孔终浓度分别为1、3、5、7、9μg/mL，空白组则加入等体积的细胞培养液，收集细胞上清液，按照ELISA试剂盒说明书操作,测定TNF-α浓度水平。因为TNF-α是细胞达到炎症状态最初产生的细胞因子，所以我们选择TNF-α的分泌水平最高的一组来作为脂多糖的最佳诱发炎症的浓度。
2.3多糖纯品对RAW264.7炎症细胞活力的影响
取对数生长期细胞按照8×103个/孔的数目接种到96孔板中，放置于37℃、5％的CO2、95％水分的养箱中培养24h后用PBS清洗3次，分别设置空白组、炎症组和给药组,除空白组外加入终浓度为5 μg/mL的LPS溶液诱导细胞形成炎症，将不同作用浓度的多糖提取物加入培养板中，不加多糖的处理作为空白组,每组设置3个重复孔，炎症组、空白组加入同等体积的细胞培养液,放置于37℃、5％CO2、95％水分培养箱培养24h,采用MTT法测定细胞存活率，筛选出细胞活力最高的作用浓度作为抗炎功能研究的作用剂量。
2.4中性红试验观察细胞吞噬活性
取对数生长期细胞按照1×104个/孔的数目接种到96孔板中，放置于37℃、5％CO2、95％水分培养箱中培养24h用PBS清洗3次后，分别设置空白组、炎症组和给药组,除空白组外加入终浓度为5 μg/mL的LPS溶液诱导细胞形成炎症，再过2h后给药组加入用细胞培养液稀释的多糖，每组设置3个重复孔，炎症组、空白组加入同等体积的细胞培养液,置于37℃、5％CO2、95％水分培养箱中培养24h, 弃去培养液,用PBS清洗3次，加入0.09％中性红溶液200μL置于培养箱中培养4h,吸弃中性红培养液，用PBS清洗3次，加入200μL细胞裂解液(体积比为1：1＝冰醋酸：无水乙醇)裂解10min，用酶标仪在690nm波长处测定吸光度，计算细胞吞噬活性。
2..5一氧化氮合酶的测定
取对数生长期细胞按照3×106个/孔的数目接种到24孔板中，置于37℃、5％的CO2、95％水分的培养箱中培养24h用PBS清洗3次后，设置空白组、炎症组和给药组,除空白组外加入终浓度为5μg/mL 的LPS溶液诱导细胞形成炎症,2h后给药组分别加入用细胞培养液稀释的多糖纯品，炎症组和空白组加入同等体积的培养液,置于37℃、5％的CO2培养箱中培养24h后收集细胞上清液,按照一氧化氮合酶试剂盒说明书操作，测定OD值并换算成NOS酶活力值。
2.6细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的测定
取对数生长期细胞按照3×107个/孔的数目接种到6孔板中放置于37℃、5％的CO2培养箱中培养24 h后用PBS清洗3次，分别设置空白组、炎症组和给药组,除空白组外加入终浓度为5μg/mL的LPS溶液诱导细胞形成炎症,再过2h后给药组加入用细胞培养液稀释的多糖，每组设置3个重复孔，炎症组和空白组加入同等体积的细胞培养液，放置于37℃、5％的CO2培养箱中培养24h后收集细胞上清液，按照ELISA试剂盒说明书操作,测定各细胞因子的浓度水平。
3.细胞试验结果与分析
3.1多糖含量
多糖含量检测结果如表9。
表9.多糖含量
3.2多糖对RAW264.7细胞活性的影响
通过MTT法检测猴头菇多糖对RAW264.7细胞的活性影响，结果表明，与空白组相比较，在 12.5～200μg/mL的浓度下猴头菇多糖对RAW264.7细胞具有一定的增殖,说明猴头菇多糖对细胞无毒性。
表10多糖对RAW264.7细胞的活性影响
3.3 LPS诱导RAW2647细胞建立炎症模型
TNF-ɑ是细胞产生炎症反应的始发因子，当一定浓度的LPS刺激巨噬细胞RAW264.7后能使细胞过量且持续地产生TNF-ɑ引起炎症反应，由图1可以看出，当LPS浓度为5μg/mL时，细胞分泌TNF-ɑ含量水平最高，所以我们后续试验选择LPS浓度为5μg/mL作为炎症最佳模型浓度。
3.3多糖对RAW264.7炎症细胞活力的影响
通过MTT法检测猴头菇多糖对炎症细胞的活性影响，结果表明，在12.5～200μg/mL的浓度下猴头菇多糖对炎症细胞的存活均具有一定的抑制作用，说明猴头菇多糖可以缓解LPS对炎症细胞的刺激增殖作用，筛选200μg/mL作为炎症研究剂量。
表11多糖对炎症细胞的影响
3.4炎症因子的检测
3.4.1猴头菇多糖对IL-1β分泌水平的影响
见表12，与炎症组相比猴头菇菌多糖为浓度为200μg/mL时对炎症细胞分泌IL-1β的水平有显著抑制作用。
表12猴头菇多糖对IL-1β分泌水平的影响
3.4.2猴头菇多糖对IL-6分泌水平的影响
见表13，与炎症组相比猴头菇糖为浓度为200μg/mL时对炎症细胞分泌IL-6的水平均有显著抑制作用，抑制率达到34％，(49.42-31.9)/48.42*100％＝34％。
表13多糖对IL-6分泌水平的影响
3.4.3猴头菇多糖对TNF-α分泌水平的影响
见表14，与炎症组相比猴头菇多糖为200μg/mL时对炎症细胞分泌TNF-α的水平有抑制作用，抑制率为38.7％。
表14猴头菇多糖对TNF-α分泌水平的影响
3.4.4猴头菇多糖对NOS分泌水平的影响
见表15，与炎症组相比猴头菇多糖为200μg/mL时对炎症细胞分泌NOS的水平有抑制作用，抑制率为61.3％。
表15多糖对NOS分泌水平的影响
3.5中性红吞噬试验检测细胞吞噬能力
见表16，与炎症组相比猴头菇多糖为200μg/mL时对炎症细胞的吞噬能力有抑制作用，抑制率为 20.9％，说明猴头菇多糖对LPS刺激巨噬细胞有缓解作用。
表16多糖对细胞吞噬能力的影响
本试验通过Sevage法除蛋白、再利用透析袋透析法纯化多糖，采用硫酸-苯酚法测定出猴头菇多糖的含量，然后通过LPS刺激RAW264.7细胞建立炎症模型，筛选出浓度为5μg/mL的LPS作为建立炎症模型的最佳浓度；用不同浓度的猴头菇多糖处理RAW264.7细胞，再使用MTT法测定细胞的存活率，结果显示，在12.5～200μg/mL时多糖对细胞均无毒害作用，在多糖浓度为200μg/mL时RAW264.7细胞有一定的增殖，所以本实验选择多糖浓度为200μg/mL作为炎症模型的研究剂量。
在细胞抗炎试验的研究中，发现纯化后的猴头菇多糖可以通过抑制炎症因子、NOS的分泌水平及炎症细胞的吞噬能力来达到抗炎作用，表明纯化的猴头菇多糖具有提高免疫细胞的抗炎作用，从而具有增强细胞免疫的功能。
在纯猴头菇多糖细胞抗炎的基础上，进行了复合饮料的细胞试验研究，将饮料按照多糖含量终浓度为200μg/mL进行稀释后处理正常细胞和炎症细胞，发现含有猴头菇多糖的饮料可以通过抑制炎症因子 NOS的分泌水平及炎症细胞的吞噬能力来达到抗炎作用，表明本产品具有提高免疫细胞的抗炎作用，具有调节细胞免疫功能的作用。
功能研究试验—饮用试验
本试验以芒果百香果猴头菇复合饮料的产品进行饮用试验。招募了80名自愿者，免疫力低下人群40 人，健康人群40人。年龄段为20-60岁，饮用芒果百香果猴头菇复合饮料，每人每天饮用300ml，连续服用45天。饮用后效果如下：
表17产品对人体免疫力改善试验
试验结果表明，饮用本品后，能有效改善免疫力低下人群的多种症状，增强其对疾病的抵抗力，使其气血充足，精力充沛，气色得到提升，并能有效改善免疫力低下人群的睡眠、记忆力、肠胃功能等问题，使其身体更健康，精神状态更好。健康人群服用本品后，身体和精神状态更好。因此，本发明的产品能有效改善饮用人群的亚健康状态，增强机体免疫力的效果。
总结
本发明使用芒果、百香果、猴头菇作为主要原料，添加提取的猴头菇多糖，并用木糖醇作为辅助材料，研制出一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料。以单因素实验得出芒果汁、百香果汁、猴头菇汁的比例、木糖醇在饮料中的添加量。通过试验发现100g芒果百香果猴头菇饮料中，猴头菇粗多糖最大溶解度为1g，并且不影响饮料的色泽、气味、组织形态和口感。并且在单因素实验的基础上，进行正交试验、验证实验得出芒果双菇复合营养饮料的工艺最佳配方：A2B2C1，即芒果汁：百香果汁：猴头菇汁比例为8:1:1、木糖醇添加量为7％、猴头菇多糖添加量为1％、灭菌时间为9min，既达到灭菌效果同时可以保持饮料的口感和风味。本方法制得的芒果百香果猴头菇复合营养饮料不论在色泽、气味、滋味和组织形态上都是非常好，是一款能把芒果、百香果、猴头菇营养和风味中和到一起的果蔬汁饮料，添加的猴头菇多糖具有显著的保健功效，具有增强机体免疫功能、降血糖、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳等功能，经过饮用试验表明该饮料具有提高机体免疫力的功效。而且饮料的制作工艺以木糖醇作为甜味添加剂，真正做到蔗糖、色素和香精的零添加，非常符合现代人的健康理念，具有很好的市场前景，对芒果、百香果、猴头菇的深加工产业的进一步发展具有积极的意义。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料，其特征在于，包括以下重量份的成分：80份芒果汁、10份百香果汁、10份猴头菇汁、猴头菇粗多糖1％、木糖醇7％。
2.一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)芒果汁制备
挑选新鲜芒果：选用八至九成熟的百色小台芒，外表无斑点且无腐烂为最佳，清洗之后去皮去核、称量果肉重量；根据果肉重量计算水量(纯净水)，料液比为1:1.5。将果肉投入配好的4％Vc溶液护色)后倒入破壁机匀浆，得到芒果原浆；离心过滤：用离心机5000转离心7分钟后，倒出芒果汁上清液，得到澄清芒果汁。
2)百香果汁的工艺流程
挑选九成熟的百香果，且表面无黑斑、损伤；切半，挖出果肉后称量果肉重量；按果肉：水1:2比例加入纯净水，快速搅拌1分钟，使果肉里的果汁融到水里；用无菌纱布过滤，得到百香果果汁。
3)猴头菇汁的工艺流程
挑选猴头菇(可用干猴头菇)、称重、清洗；将猴头菇清洗干净，按1：30比例加入纯净水，浸泡20min，浸泡完成后，用破壁机匀浆，得到原浆；将原浆装入烧杯中，放入90℃恒温水浴锅中浸提60min；离心过滤：待猴头菇汁冷却至室温时，用无菌纱布过滤，滤去粗纤维，再用离心机离心5000转6分钟后，倒出上清液，再用无菌细纱布过滤得到澄清菇汁。
4)猴头菇粗多糖提取
将猴头菇烘干、粉碎过筛→加入一定体积50℃蒸馏水→微波处理→酶解处理→灭酶处理→离心取上清液→浓缩、醇沉→离心、干燥→猴头菇粗多糖
5)复合果汁调配
将准备好的芒果汁、百香果汁与猴头菇汁按比例混合、加入木糖醇和猴头菇粗多糖，通过单因素、正交等实验，得出芒果百香果猴头菇复合饮料的最佳配方。
6)杀菌及冷却
装罐灭菌后冷却至室温。
3.根据权利要求2所述的一种提高免疫力的芒果百香果猴头菇复合饮料的制备方法，其特征在于：所述步骤6)中所述的杀菌采用蒸汽灭菌法，杀菌时长为9min。
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|---|---|---|---|---|
| CN115581268A (zh) * | 2022-10-08 | 2023-01-10 | 广东鲜活果汁生物科技有限公司 | 一种猴头菇和松茸混合饮料及其制备方法 |
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