CN114354947A - 一种下消化道功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种下消化道功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用，该试纸条包括支撑板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，其中，所述支撑板为长条结构，位于最底部，在支撑板上方依次设置样品垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维素膜上设置有FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线；所述玻璃硝酸纤维素膜包含有量子点标记的FOB抗体、TF抗体、CAL抗体和鸡IgY。本方案中以羧甲基纤维素钠系统进行量子点标记的FOB抗体、TF抗体、CAL抗体和鸡IgY混合物包被在玻璃纤维素膜上，作为检测探针，利用双抗体夹心法原理结合量子点的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法，同时对下消化道功能进行快速、特异、简便、灵敏的联合检测。

Description

一种下消化道功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种下消化道功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用。

背景技术

大便潜血(又称便隐血)是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。

1.消化道癌症早期,有20％的患者可出现潜血试验阳性,晚期病人的潜血阳性率可达到90％以上,并且可呈持续性阳性,因此粪便潜血检查可作为消化道肿瘤筛选的首选指标.

2.消化道出血,消化道溃疡病人粪便潜血试验多为阳性,或呈现间断性阳性.

3.可导致粪便中出现较多红细胞的疾病,如痢疾,直肠息肉,痔疮出血等也会导致潜血试验阳性反应。注意进一步结合胃肠镜的检查有无异常。

转铁蛋白又名运铁蛋白(transferrin，TRF，siderophilin)是血浆中主要的含铁蛋白质，负责运载由消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁。以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生成。TRF分子量约7.7万，为单链糖蛋白，含糖量约6％。TRF可逆地结合多价离子，包括铁、铜、锌、钴等。每一分子TRF可结合两个三价铁原子。TRF主要由肝细胞合成，半衰期为7天。血浆中TRF的浓度受铁供应的调节，在缺铁状态时，血浆TRF浓度上升，经铁有效治疗后恢复到正常水平。

血浆中TRF水平可用于贫血的诊断和对治疗的监测。在缺铁性的低血色素贫血中TRF的水平增高(由于其合成增加)，但其铁的饱和度很低(正常值在30％-38％)。相反，如果贫血是由于红细胞对铁的利用障碍(如再生障碍性贫血)，则血浆中TRF正常或低下，但铁的饱和度增高。在铁负荷过量时，TRF水平正常，但饱和度可超过50％，甚至达90％。

TRF在急性时相反应中往往降低。因此在炎症、恶性病变时常随着白蛋白、前白蛋白同时下降。在慢性肝疾病及营养不良时亦下降，因此可以作为营养状态的一项指标。

钙卫蛋白(calprotectin)是一种来源于中性粒细胞和巨噬细胞的含钙蛋白，其表达具有组织或细胞特异性，可作为急性炎性细胞活化的标志物。钙卫蛋白是一个分子量为36kD的钙、锌结合蛋白。由两条分子量为14kD的重链和一条分子量为8kD的轻链以共价键连接的钙结合蛋白质异三聚体组成。每条链可结合两个，从而具有耐热性和增强水解性的特性。钙卫蛋白广泛分布在人体细胞、组织以及体液中。它是粒细胞、单核细胞和角质细胞的主要蛋白质。嗜中性粒细胞钙卫蛋白分布在溶酶体外的细胞液中，约占细胞总蛋白的5％,并为中性粒细胞更新的标志物，在许多炎症情况下升高。它可以在血浆、尿液、粪便、脑脊液、唾液、滑膜液以及结肠活检中被检测。研究显示，钙卫蛋白具有许多生物学功能：

(1)参与细胞信号传递,钙卫蛋白是S-100样蛋白；它与细胞骨架的结合依赖于，这提示它具有细胞内信号传递的功能；

(2)抗微生物活性，Leher通过动物实验证明钙卫蛋白能够抑制老鼠体内白色念珠菌生长；

(3)免疫调节作用；

(4)抗增殖和诱导细胞凋亡；

(5)炎症反应中调节蛋白，Brun等发现在鼠的类风湿关节炎模型中注入钙卫蛋白后起保护作用，证实其在炎症反应中的调节作用。

由此可见，在对于下消化道功能检测过程中，对便隐血(FOB)、转铁蛋白(TF)和钙卫蛋白(CAL)进行检测有很关键的作用，现有技术中，多是采用独立的检测试纸，或者是采用普通的荧光分析检测手段。为此，需要找到一种准确性高、检测方便的联合检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种下消化道功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用，从而解决现有技术中存在的前述问题。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种下消化道功能联合检测用试纸条，包括支撑板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，其中，所述支撑板为长条结构，位于最底部，在所述支撑板上方依次设置所述样品垫、所述玻璃纤维素膜、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫；所述硝酸纤维素膜上设置有至少两条检测线和质控线；所述检测线包括FOB检测线、TF检测线和CAL检测线中的至少两个；所述玻璃硝酸纤维素膜包含有量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的鸡IgY。

优选的，所述硝酸纤维素膜上设置有FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线。

优选的，所述样品垫的顶端压住所述玻璃纤维素膜的底端并与之粘贴，所述玻璃纤维素膜的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。

优选的，检测线和检测线之间以及检测线和质控线的间隔为6-8mm。

本发明的另一个目的在于提供一种下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，包括以下步骤：

S1，制备量子点标记的FOB抗体：采用MES缓冲液稀释量子点微球颗粒，加入羧甲基纤维素钠和活化剂，活化10-20min后，加入终止剂后反应10-20min；按照抗体与量子点微球质量比为1：20的比例加入抗体，经混匀和离心处理后得到量子点标记的FOB抗体；

S2，制备量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的IgY:按照步骤S1中同样的方法分别制备量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的鸡IgY；

S3，制备包含有抗体混合物的玻璃纤维素膜：将量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的鸡IgY按质量比1：1：1：1混合后，喷涂于空白玻璃纤维素膜上，干燥后即得量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体混合物、量子点标记的CAL抗体混合物标记的玻璃纤维素膜；

S4，制备硝酸纤维素膜：取空白硝酸纤维素膜，按一定的间隔依次划分检测线和质控线，所述检测线至少FOB检测线、TF检测线和CAL检测线中的两个；然后分别取与检测线对应的抗体和羊抗鸡IgY，分别喷涂到对应的检测线和质控线上，干燥后即得硝酸纤维素膜；

S5，组装试纸条：在塑料板上放置步骤S4制备的硝酸纤维素膜,将步骤S3制备的玻璃纤维素膜压在所述硝酸纤维素膜靠近检测线的一端，然后在玻璃纤维素的一端放置样品垫，硝酸纤维素膜的另一端放置吸水垫，干燥后即完成试纸条的组装过程。

优选的，步骤S1中，量子点微球颗粒与MES缓冲液的体积比为1：10；活化剂采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；终止剂采用β巯基乙醇和赖氨酸。

更优选的，采用MES缓冲液稀释量子点微球颗粒，加入羧甲基纤维素钠和活化剂，活化10-20min后，加入终止剂后反应10-20min具体为：取0.02M，pH＝5.5～6.5的MES缓冲液100ul，混合加入10ul浓度100mg/ml的量子点微球颗粒，然后加入羧甲基纤维素钠100mg，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化10-20min后，加入β巯基乙醇，终浓度为5mM，加入赖氨酸，终浓度为10mM，反应10-20min。

优选的，步骤S1中，所述经混匀和离心处理后得到量子点标记的FOB抗体具体包括：混匀3-3.5h后，8000-15000rpm离心15-30min，将沉淀物颗粒用封闭液重悬，室温混匀1-1.5h，之后8000-15000rpm离心15-30min，沉淀颗粒物复溶于分散液，即得量子点标记的FOB抗体。

优选的，步骤S4中，分别取与检测线对应的抗体和羊抗鸡IgY，分别喷涂到对应的检测线和质控线上，具体包括：分别取浓度均为1mg/ml的抗体和羊抗鸡IgY，以1ul/cm，10cm/秒的速度分别喷涂到硝酸纤维膜对应的检测线和质控线上。

优选的，步骤S5中，组装过程中，所述吸水垫长度为40-45mm，所述吸水垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1mm；所述玻璃纤维素膜的长度为6-8mm，所述玻璃纤维素膜与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1-2mm；所述样品垫的长度为25-27mm，所述样品垫与所述玻璃纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1-2mm。

优选的，步骤S3、S4和S5中的干燥过程均采用37℃干燥3-5h。

本发明的最后一个目的在于提供一种下消化道功能联合检测用试纸条在下消化道检测试剂盒中的应用。

本发明的有益效果是：

本发明公开了一种下消化道功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用，该试纸条以羧甲基纤维素钠系统进行量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体和量子点标记的CAL抗体混合物包被在玻璃纤维素膜上，作为检测探针，同时将多个检测线设置在同一硝酸纤维素膜上，利用双抗体夹心法原理结合量子点的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法，从而实现对下消化道功能进行快速、特异、简便、灵敏的联合检测。

附图说明

图1是实施例1中提供的下消化道功能联合检测用试纸条结构示意图；

图2是实施例2中提供的下消化道功能联合检测用试纸条结构示意图；

1是样品垫，2是支撑板，3是玻璃纤维素膜，4是硝酸纤维素膜，5是吸水垫，6是FOB检测线，7是TF检测线，8是质控线，9是CAL检测线。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

本实施例提供了一种下消化道功能联合检测用试纸条，该试纸条结构如图1所示，包括支撑板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，其中，所述支撑板为长条结构，位于最底部，在所述支撑板上方依次设置所述样品垫、所述玻璃纤维素膜、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫；所述硝酸纤维素膜上依次设置有FOB检测线、TF检测线和质控线；所述玻璃硝酸纤维素膜包含有量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体和量子点标记的鸡IgY。

本实施例中的试纸条的结构中，所述样品垫的顶端压住所述玻璃纤维素膜的底端并与之粘贴，所述玻璃纤维素膜的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。硝酸纤维素膜上设置的所述FOB检测线、TF检测线和质控线之间分别间隔6-8mm，可根据实际的试纸条长度进行设置。

实施例2

本实施例提供了一种下消化道功能联合检测用试纸条，该试纸条结构如图2所示，包括支撑板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，其中，所述支撑板为长条结构，位于最底部，在所述支撑板上方依次设置所述样品垫、所述玻璃纤维素膜、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫；所述硝酸纤维素膜上依次设置有FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线；所述玻璃硝酸纤维素膜包含有量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的IgY。

本实施例中的试纸条的结构中，所述样品垫的顶端压住所述玻璃纤维素膜的底端并与之粘贴，所述玻璃纤维素膜的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。硝酸纤维素膜上设置的所述FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线之间分别间隔6-8mm，可根据实际的试纸条长度进行设置。

实施例3

本实施例提供了一种下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，该方法具体包括以下步骤：

S1，制备量子点标记的FOB抗体：取0.02M，pH＝6.1的MES缓冲液100ul,混合加入到10ul浓度为100mg/ml的量子点微球颗粒中，然后加入羧甲基纤维素钠100mg，加入活化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化15min后，加入β巯基乙醇，终浓度为5mM，加入赖氨酸，终浓度为10mM，反应15min。

按照FOB抗体与量子点微球质量比为1：20的比例在量子点微球颗粒中加入FOB抗体，混匀3h后，8000rpm离心20min，将沉淀物颗粒用封闭液重悬，室温混匀1h，之后8000rpm离心20min，沉淀颗粒物复溶于分散液，即得量子点标记的FOB抗体；

S2，制备量子点标记的TF抗体和IgY抗体:按照步骤S1中同样的方法分别制备量子点标记的TF抗体和IgY抗体；

S3，制备包含有抗体混合物的玻璃纤维素膜：将量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的鸡IgY抗体按照质量比为2：2:1混合，喷涂于玻璃纤维素膜上，37℃干燥4h，即得量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的鸡IgY抗体混合物标记的玻璃纤维素膜；

S4,制备硝酸纤维素膜：取硝酸纤维素膜，间隔6mm依次划分FOB检测线、TF检测线和质控线，然后分别取FOB抗体、TF抗体和羊抗鸡IgY，分别喷涂到对应的FOB检测线、TF检测线和质控线上，干燥后即得硝酸纤维素膜；

S5，组装试纸条：在塑料板上放置步骤S4制备的硝酸纤维素膜,将步骤S3制备的玻璃纤维素膜压在所述硝酸纤维素膜靠近检测线的一端，然后在玻璃纤维素的一端放置样品垫，硝酸纤维素膜的另一端放置吸水垫，干燥后即完成试纸条的组装过程。

其中，组装过程中，采用的所述吸水垫长度为40-45mm，所述吸水垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1mm；所述玻璃纤维素膜的长度为6mm，所述玻璃纤维素膜与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1mm；所述样品垫的长度为25mm，所述样品垫与所述玻璃纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1mm。

实施例4

本实施例提供了一种下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，该方法具体包括以下步骤：

S1，制备量子点标记的FOB抗体：取0.02M，pH＝6.5的MES缓冲液100ul,混合加入到10ul浓度为100mg/ml的量子点微球颗粒中，然后加入羧甲基纤维素钠100mg，加入活化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化15min后，加入β巯基乙醇，终浓度为5mM，加入赖氨酸，终浓度为10mM，反应15min。

按照FOB抗体与量子点微球质量比为1：20的比例在量子点微球颗粒中加入FOB抗体，混匀3h后，15000rpm离心10min，将沉淀物颗粒用封闭液重悬，室温混匀1h，之后15000rpm离心10min，沉淀颗粒物复溶于分散液，即得量子点标记的FOB抗体；

S2，制备量子点标记的TF抗体、CAL抗体和IgY抗体:按照步骤S1中同样的方法分别制备量子点标记的TF抗体、CAL抗体和IgY抗体；

S3，制备包含有抗体混合物的玻璃纤维素膜：将量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的鸡IgY抗体按照质量比为1：1：1:1混合，喷涂于玻璃纤维素膜上，37℃干燥4h，即得量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体、量子点标记的鸡IgY抗体混合物标记的玻璃纤维素膜；

S4,制备硝酸纤维素膜：取硝酸纤维素膜，间隔8mm依次划分FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线，然后分别取FOB抗体、TF抗体、CAL抗体和羊抗鸡IgY，分别喷涂到对应的FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线上，干燥后即得硝酸纤维素膜；

S5，组装试纸条：在塑料板上放置步骤S4制备的硝酸纤维素膜,将步骤S3制备的玻璃纤维素膜压在所述硝酸纤维素膜靠近检测线的一端，然后在玻璃纤维素的一端放置样品垫，硝酸纤维素膜的另一端放置吸水垫，干燥后即完成试纸条的组装过程。

其中，组装过程中，采用的所述吸水垫长度为45mm，所述吸水垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为2mm；所述玻璃纤维素膜的长度为8mm，所述玻璃纤维素膜与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为2mm；所述样品垫的长度为27mm，所述样品垫与所述玻璃纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为2mm。

实施例5

本实施例提供了本实施例提供了一种下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，该方法具体包括以下步骤：

S1，制备量子点标记的FOB抗体：取0.02M，pH＝5.5的MES缓冲液100ul,混合加入到10ul浓度为100mg/ml的量子点微球颗粒中，然后加入羧甲基纤维素钠100mg，加入活化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化10min后，加入β巯基乙醇，终浓度为5mM，加入赖氨酸，终浓度为10mM，反应10min。

按照FOB抗体与量子点微球质量比为1：20的比例在量子点微球颗粒中加入FOB抗体，混匀3.5h后，10000rpm离心20min，将沉淀物颗粒用封闭液重悬，室温混匀1.5h，之后10000rpm离心20min，沉淀颗粒物复溶于分散液，即得量子点标记的FOB抗体；

S2，制备量子点标记的TF抗体、CAL抗体和鸡IgY抗体:按照步骤S1中同样的方法分别制备量子点标记的TF抗体、CAL抗体和鸡IgY抗体；

S3，制备包含有抗体混合物的玻璃纤维素膜：将量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体、量子点标记的鸡IgY抗体按照质量比为1:1:1:1混合，喷涂于玻璃纤维素膜上，37℃干燥4h，即得量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体、量子点标记的鸡IgY抗体混合物标记的玻璃纤维素膜；

S4,制备硝酸纤维素膜：取硝酸纤维素膜，间隔7mm依次划分FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线，然后分别取FOB抗体、TF抗体、CAL抗体和羊抗鸡IgY，分别喷涂到对应的FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线上，37℃下干燥4h后即得硝酸纤维素膜；

S5，组装试纸条：在塑料板上放置步骤S4制备的硝酸纤维素膜,将步骤S3制备的玻璃纤维素膜压在所述硝酸纤维素膜靠近检测线的一端，然后在玻璃纤维素的一端放置样品垫，硝酸纤维素膜的另一端放置吸水垫，37℃下干燥5h后即完成试纸条的组装过程。

其中，组装过程中，采用的所述吸水垫长度为42mm，所述吸水垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm；所述玻璃纤维素膜的长度为7mm，所述玻璃纤维素膜与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm；所述样品垫的长度为26mm，所述样品垫与所述玻璃纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。

实施例6

本实施例提供一种下消化道标志物联合检测试剂盒，该试剂盒中包括实施例1中提供的FOB\TF\CAL联合检测用试纸条，使用该试剂盒，能够同时检测便隐血、转铁蛋白和钙卫蛋白含量。

首先将便隐血、转铁蛋白和钙卫蛋白稀释为多个梯度的标准品溶液，并同时配制空白溶液。分别取标准品和待测样品滴入试纸条样品槽中，将显色完成的试纸条放入荧光免疫层析读数仪中，读取并记录T/C线的发光值，绘制便隐血、转铁蛋白和钙卫蛋白标准曲线；将待测样品的T/C值带入标准曲线中，得到便隐血、转铁蛋白和钙卫蛋白浓度结果。

为了测试效果，本申请将实施例2中得到的便隐血、转铁蛋白和钙卫蛋白测试试剂盒进行测试，得到的数据如下表所示：

通过采用本发明公开的上述技术方案，得到了如下有益的效果：

本发明公开了一种下消化道功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用，该试纸条以羧甲基纤维素钠系统进行量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体混合物包被在玻璃纤维素膜上，作为检测探针，利用双抗体夹心法原理结合量子点的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法，同时对下消化道功能进行快速、特异、简便、灵敏的联合检测。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种下消化道功能联合检测用试纸条，其特征在于，包括支撑板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，其中，所述支撑板为长条结构，位于最底部，在所述支撑板上方依次设置所述样品垫、所述玻璃纤维素膜、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫；所述硝酸纤维素膜上设置有至少两条检测线和质控线；所述检测线包括FOB检测线、TF检测线和CAL检测线中的至少两个；所述玻璃硝酸纤维素膜包含有量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的IgY。

2.根据权利要求1所述的下消化道功能联合检测用试纸条，其特征在于，所述样品垫的顶端压住所述玻璃纤维素膜的底端并与之粘贴，所述玻璃纤维素膜的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。

3.根据权利要求1所述的下消化道功能联合检测用试纸条，其特征在于，检测线和检测线之间以及检测线和质控线的间隔为6-8mm。

4.权利要求1-3任一所述的下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，制备量子点标记的FOB抗体：采用MES缓冲液稀释量子点微球颗粒，加入羧甲基纤维素钠和活化剂，活化10-20min后，加入终止剂后反应10-20min；按照抗体与量子点微球质量比为1：20的比例加入抗体，经混匀和离心处理后得到量子点标记的FOB抗体；

S2，制备量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的鸡IgY:按照步骤S1中同样的方法分别制备量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的IgY；

S3，制备包含有抗体混合物的玻璃纤维素膜：将量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体、量子点标记的CAL抗体和量子点标记的鸡IgY按质量比1：1：1:1混合后，喷涂于空白玻璃纤维素膜上，干燥后即得量子点标记的FOB抗体、量子点标记的TF抗体混合物、量子点标记的CAL抗体混合物标记的玻璃纤维素膜；

S4，制备硝酸纤维素膜：取空白硝酸纤维素膜，按一定的间隔依次划分检测线和质控线，所述检测线至少包括FOB检测线、TF检测线和CAL检测线中的任意两个；然后分别取与检测线对应的抗体和羊抗鸡IgY，分别喷涂到对应的检测线和质控线上，干燥后即得硝酸纤维素膜；

S5，组装试纸条：在塑料板上放置步骤S4制备的硝酸纤维素膜,将步骤S3制备的玻璃纤维素膜压在所述硝酸纤维素膜靠近检测线的一端，然后在玻璃纤维素的一端放置样品垫，硝酸纤维素膜的另一端放置吸水垫，干燥后即完成试纸条的组装过程。

5.根据权利要求4所述的下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S1中，量子点微球颗粒与MES缓冲液的体积比为1：10；活化剂采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；终止剂采用β巯基乙醇和赖氨酸。

6.根据权利要求4所述的下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述经混匀和离心处理后得到量子点标记的FOB抗体具体包括：混匀3-3.5h后，8000-15000rpm离心15-30min，将沉淀物颗粒用封闭液重悬，室温混匀1-1.5h，之后8000-15000rpm离心15-30min，沉淀颗粒物复溶于分散液，即得量子点标记的FOB抗体。

7.根据权利要求4所述的下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S4中，分别取与检测线对应的抗体和羊抗鸡IgY，分别喷涂到对应的检测线和质控线上，具体包括：分别取浓度均为1mg/ml的抗体和羊抗鸡IgY，以1ul/cm，10cm/秒的速度分别喷涂到硝酸纤维膜对应的检测线和质控线上。

8.根据权利要求4所述的下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S5中，组装过程中，所述吸水垫长度为40-45mm，所述吸水垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1mm；所述玻璃纤维素膜的长度为6-8mm，所述玻璃纤维素膜与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1-2mm；所述样品垫的长度为25-27mm，所述样品垫与所述玻璃纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1-2mm。

9.根据权利要求4所述的下消化道功能联合检测用试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S3、S4和S5中的干燥过程均采用37℃干燥3-5h。

10.权利要求1-3任一所述的下消化道功能联合检测用试纸条在下消化道检测试剂盒中的应用。

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