CN114350787B - 一种ATE1的RNA m6A修饰作为γ射线辐射标志物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种ATE1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在检测或辅助检测是否遭受γ射线辐射中系统的应用。本发明采用上述的一种ATE1的RNA m6A修饰作为γ射线辐射标志物的应用，可以更精确、迅速和灵敏的检测或辅助检测待测对象是否遭受了γ射线的辐照。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种ATE1的RNA m6A修饰作为γ射线辐射标志物的应用。
背景技术
核辐射事故和核灾难中放射伤员的准确、长时程诊断是事故救援和医学救治的重要基础。目前，可用于检测是否遭受γ射线辐射的生物学方法，包括临床指征、外周血淋巴细胞计数和细胞遗传学技术。其中，蛋白γ-H2AX的表达量是一个特异性很高的辐射标志物，是一个常用的生物剂量计，在各类辐射样品的检测中发挥了“金标准”的作用。
但是，由于的双链断裂能够很快得到修复，γ-H2AX表达量随时间延后而逐渐消失，无法应用于照射后期的剂量估算。因此，亟需一种稳定长时效的生物标志物。
发明内容
本发明的目的是提供一种ATE1的RNA m6A修饰作为γ射线辐射标志物的应用，可以更精确、迅速和灵敏的检测或辅助检测待测对象是否遭受了γ射线的辐照。
为实现上述目的，本发明提供了一种ATE1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在检测或辅助检测是否遭受γ射线辐射中系统的应用。
一种ATE1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在评估待测对象遭受γ射线辐照的剂量或受照射后时间中的应用。
一种ATE1的RNA m6A修饰作为γ射线辐射检测的系统，所述检测ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平的系统为利用RNA m6A芯片技术检测所述ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平的系统或利用MeRIP-qPCR技术检测所述ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平的系统。
优选的，检测所述ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平的系统包括引物和/或试剂和/或试剂盒和/或仪器。
优选的，所述MeRIP-qPCR技术检测所述ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平的系统包括引物、RNA模板量、试剂盒和/或进行定量PCR所需的其他试剂和/或仪器。
优选的，还包括数据处理系统，所述数据处理系统用于将来自待测对象的所述RNAm6A修饰水平或相对修饰水平转换为所述待测对象的检测结果。
优选的，所述ATE1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平为血液或细胞中ATE1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平。
优选的，所述ATE1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平为小鼠的外周血分离的外周血单个核细胞或人的Hela细胞中Ate1/ATE1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平。
优选的，扩增小鼠外周血单个核细胞的Ate1由两对引物对组组成，包括Seq IDNo.1和Seq ID No.2所示的两个单链DNA组成的引物对1、Seq ID No.3和Seq ID No.4所示的两个单链DNA组成的引物对2。
优选的，扩增Hela细胞的ATE1由六对引物对组成，包括Seq ID No.5和Seq IDNo.6所示的两个单链DNA组成的引物对1、Seq ID No.7和Seq ID No.8所示的两个单链DNA组成的引物对2、Seq ID No.9和Seq ID No.10所示的两个单链DNA组成的引物对3、Seq IDNo.11和Seq ID No.12所示的两个单链DNA组成的引物对4、Seq ID No.13和Seq ID No.14所示的两个单链DNA组成的引物对5、Seq ID No.15和Seq ID No.16所示的两个单链DNA组成的引物对6。
优选的，Ate1/ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平是Ate1/ATE1的RNA m6A修饰经m6A抗体富集后(m6A-IP)相对于RNA量(Input)的m6A修饰的百分比。
优选的，遭受γ射线辐射是指遭受钴60-γ射线辐射。
其中，所述数据处理系统包括数据输入模块、数据比较模块和结论输出模块；所述数据输入模块用于将待测对象的所述ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平的数值输入；所述数据比较模块用于将待测对象的所述ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平与未遭受γ射线辐射的对象进行比较；结论输出模块用于输出结论：若待测对象的ATE1的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平大于未遭受γ射线辐射对象的ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，则结论是待测对象遭受了γ射线辐射；若待测对象的ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平小于或等于未遭受γ射线辐射对象的ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，则结论是待测对象未遭受γ射线辐射。
本发明提出了Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平随γ射线辐照剂量的变化特征和相同的辐照剂量下Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平随时间的变化特征，并用于评估待测对象遭受γ射线辐照的剂量或受照射后的时间。
与未遭受γ射线辐射的正常组相比，Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平随辐射剂量的增加显著升高，后随时间逐渐降低。与未遭受γ射线辐射的正常组相比，当辐射剂量为1Gy时，Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在受辐射后3天内显著升高，7天后恢复正常；与未遭受γ射线辐射的正常组相比，当辐射剂量为2Gy、4Gy时，Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在受辐射后7天内显著升高，14天恢复正常；当辐射剂量为6.5Gy时，Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在1-28天内均显著高于未遭受γ射线辐射组。
因此，本发明采用上述一种ATE1的RNA m6A修饰作为γ射线辐射标志物的应用，ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平能检测到待测对象是否遭受γ射线辐射和受辐射剂量的评估，有助于及时进行事故救援和伤员处理，对辐射处理具有重要的意义。
下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
图1是对不同批次处理的小鼠外周血单个核细胞进行MeRIP-qPCR实验检测Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平的结果图；
图2是对不同批次处理的Hela细胞进行MeRIP-qPCR实验检测ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平的结果图。
具体实施方式
以下通过附图和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
除非另外定义，本发明使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。
下述实施例中用到的材料、试剂和试验技术的来源如下：
小鼠的RNA m6A-Seq芯片为上海康成生物信息技术有限公司提供。
MeRIP实验所需m6A抗体[m6A(D9D9W)Rabbit mAb，货号为：56593]、IgG(Normalrabbit IgG，货号为：2729s)为美国CST公司产品；Protein A/G PLUS-Agarose为美国SantaCruz公司产品，货号为：sc-2003；荧光定量检测试剂盒(KAPA
FAST qRT-PCR试剂盒)为美国KAPA Biosystems公司产品，货号为：KK4601。
实施例一
辐射后Ate1基因的RNA m6A修饰水平
选择雄性6-8周龄、健康状态良好的C57BL/6N小鼠，来源于北京维通利华实验动物技术有限公司，对C57BL/6N小鼠给予6.5Gy钴60-γ射线照射后，在不同的时间点(0d、1d、3d、7d、14d、28d)分别取外周血分离得到的外周血单个核细胞后提取RNA，对6组总RNA样品进行RNA m6A芯片实验。RNA m6A芯片实验采用m6A-mRNA&lncRNA芯片完成。
在进行RNA m6A芯片测序之前对外周血单个核细胞的总RNA进行质量检测，经检测后发现RNA质量完好，将RNA随机打断成100nt左右的片段。将RNA m6A修饰的特异性抗体与RNA片段进行共孵育，抓取有甲基化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照(Input)样本，对照样本只含有打断的RNA片段，并不添加RNA甲基化特异性抗体与其共孵育。
m6A芯片经扫描仪扫描，数据信号提取，进行归一化处理以及m6A信号差异峰分析，比较照射前后RNA m6A修饰的变化，结果显示在辐射后不同时间点m6A修饰上调的RNA分别为第一天110个、第三天1487个、第七天74个、第十四天183个、第二十八天45个，m6A修饰下调的RNA分别为第一天1843个、第三天244个、第七天865个、第十四天3819个、第二十八天317个，经过比较得到在辐射后5个时间点均上调比较明显的Ate1基因的RNA m6A修饰，如表1所示，即Ate1的RNA m6A修饰可以作为γ射线辐射检测的标志物分子，Ate1的mRNA序列号：ENSMUST00000094017，通过Ate1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平能检测到待测对象是否遭受γ射线辐射。
表1小鼠外周血单个核细胞照射后Ate1基因的RNA m6A芯片分析结果
实施例二
利用RNA m6A芯片验证辐射前后Ate1基因的RNA m6A修饰水平
选择雄性6-8周龄、健康状态良好的C57BL/6N小鼠(来源于北京维通利华实验动物技术有限公司)，对C57BL/6N小鼠照射前(对照组)给予2Gy钴60-γ射线，并且在照射后不同的时间点(1d、14d)取外周血分离得到的外周血单个核细胞后提取RNA，对3组总RNA样品进行RNA m6A芯片实验。RNA m6A芯片实验采用m6A-mRNA&lncRNA芯片完成。
在进行RNA m6A芯片测序之前对外周血单个核细胞的总RNA进行质量检测，经检测后发现RNA质量完好，将RNA随机打断成100nt左右的片段。将RNA m6A修饰的特异性抗体与RNA片段进行共孵育，抓取有甲基化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照(Input)样本，对照样本只含有打断的RNA片段，并不添加RNA甲基化特异性抗体与其共孵育。
m6A芯片经扫描仪扫描，数据信号提取，进行归一化处理以及m6A信号差异峰分析，比较照射前后RNA m6A修饰的变化，结果显示在辐射后不同时间点m6A修饰上调的RNA分别为第一天88个、第十四天248个；m6A修饰下调的RNA分别为第一天43个、第十四天550个。
经过比较发现，在辐射后2个时间点均上调比较明显的Ate1基因的RNA m6A修饰(如表2所示)，说明遭受γ射线的辐射的小鼠相对于未遭受γ射线的辐射的小鼠，其外周血单个核细胞中Ate1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平显著升高。
表2小鼠外周血单个核细胞照射后Ate1基因的RNA m6A芯片分析结果
实施例三
利用MeRIP-qPCR实验检测小鼠外周血单个核细胞中Ate1基因的RNA m6A修饰水平
1、采用钴60-γ射线照射小鼠并进行分组
雄性6-8周龄C57BL/6N小鼠来源于北京维通利华实验动物技术有限公司，健康状态良好的C57BL/6N小鼠给予钴60-γ射线照射。照射条件为室温，照射距离为3米，剂量率为69.1cGy/min。根据照射剂量和照射后分离外周血单个核细胞的时间对小鼠进行分组，每组10只，具体分组如表3所示。
表3照射剂量及小鼠分组
2、分离外周血单个核细胞
对小鼠眼眶进行取血，采用小鼠外周血淋巴细胞分离液试剂盒(品牌：TBD；货号：LTS1092-KIT)分离外周血单个核细胞。具体步骤如下：
1)取0.5mL抗凝血(血放置较长易分层，需预混)，加入0.5mL稀释液并混匀。取3mL分离液加入15mL离心管，将该离心管倾斜45°后，取稀释后的外周血缓慢沿管壁加入含分离液的离心管中。
2)将该离心管置于离心机，500g离心20min。血细胞在离心管中分为4层，小心地吸取白色的淋巴细胞层(上层不吸，下层可用)，移入新的离心管，加入清洗液或PBS至10mL，滴管混匀。
3)1100rpm离心15min，弃上清，用1mL清洗液或PBS重悬，取20μL进行细胞计数，剩余细胞加入到新的1.5mL EP管中，1100rpm离心15min后弃上清，用1mL的Trizol重悬。
3、外周血单个核细胞的RNA提取
苯酚氯仿法提取RNA，具体步骤如下：
1)向Trizol重悬的外周血单个核细胞中加入200μL氯仿，剧烈摇晃15s，静置5min至液体分层。
2)4℃，12000g离心15min。
3)尽量吸取上层上清液体(避免吸取到其它层面液体)至新EP管中，加入等体积异丙醇，摇晃混匀，放置于-20℃孵育1h。
4)4℃，14000rpm离心30min，弃上清。
5)加入1mL提前预冷的75％酒精，涡旋振荡，4℃、14000rpm离心3min，弃上清。
6)重复上述步骤。
7)将EP管倒扣于吸水纸上，室温晾干10min，加入50μLRNase free water重悬沉淀。
8)利用超微量分光光度计Nano-300测定总RNA浓度，以A260nm/A280nm比值评估纯度，对RNA定量。
4、RNA的片段化：
1)用RNase free water将上述RNA的浓度调至10ng/μL，并确保RNA总量至少达2μg。
2)吸取200μL上述RNA样品至新EP管中，加入2μL的RNA酶抑制剂，采用ThermoFisher Scientific LabServTMModel 120超声破碎仪进行超声破碎，设置为20％功率、超声1s、间隔2s，共超声15次。
3)吸取20μL上述超声后RNA样品至新EP管中，标记为Input，并储存于-80℃备用；
4)剩余的超声后RNA样品置于冰上，用于IP实验。
5、MeRIP实验
1)配制试剂
IP反应液：50mmol/L Tris-HCl(pH＝7.4)、150mmol/L NaCl、0.1％NP-40；
1×IP缓冲液：10mM Tris-HCl(pH＝7.4)、150mM NaCl、0.1％NP-40；
1×洗涤缓冲液：10mM Tris-HCl(pH＝7.4)、50mM NaCl、0.1％NP-40；
洗脱缓冲液：10mM Tris-HCl(pH＝7.4)、1mM EDTA、0.05％SDS。
(注：上述溶液均用RNase free water配制)
2)beads与抗体孵育
将实验分为m6A抗体IP组和用于对照的IgG IP组，标记所需1.5mLEP管，分别加入20μL的Protein A/G PLUS-Agarose，加入500μL的IP反应液，摇晃混匀后4℃，5000rpm离心2min清洗beads后弃上清，清洗2次后加入500μL的IP反应液，向m6A抗体IP组中加入1μg的m6A抗体，IgG IP组加入1μg的IgG抗体，4℃摇床旋转孵育4h，孵育完成后，4℃，5000rpm离心2min清洗beads后弃上清，加入500μL的IP反应液，重复清洗步骤，获得抗体藕联的beads。
3)RNA免疫沉淀
向抗体藕联的beads中加入500μL的IP反应液，分别向m6A抗体IP组和IgG IP组加入90μL片段化RNA，4℃旋转孵育过夜，4℃，5000rpm离心2min，弃上清，加入500μL的IP反应液清洗未结合beads的RNA，摇晃混匀后4℃，5000rpm离心2min，弃上清，共清洗3次，随后加入500μL洗涤缓冲液清洗beads，摇晃混匀后，4℃，5000rpm离心2min，弃上清，共清洗3次。
4)m6A修饰RNA的洗脱和纯化
向上述样品中加入100μL洗脱缓冲液，并加入3μL蛋白酶K，50℃旋转孵育30min，洗脱后的RNA再次使用苯酚氯仿法进行纯化，最后溶于20μLRNase free water。
6、外周血单个核细胞的RNA逆转录为cDNA
逆转录所用的试剂盒为MonScriptTM RTIII AII-in-One Mix逆转录试剂盒，具体步骤如下：
1)从试剂盒中取出各组分置于冰上溶化，混匀溶化后的各组分并短暂离心后放于冰上备用。
2)在200μL无RNase的进口PCR管中配制逆转录体系，如表4所示。
表4逆转录体系(20μL)
3)混匀后放入PCR仪，进行逆转录反应。设定PCR程序为：第一步55℃，15min；第二步85℃，5min；第三步4℃，10min。
4)取出逆转录后的cDNA产物，加入100μL RNase free water稀释。
7、qPCR
1)针对小鼠Ate1的RNA m6A修饰的潜在位点，其特异性引物序列如表5。
表5实时荧光定量PCR引物序列
2)实时定量PCR所用的试剂盒为KAPA
FAST qRT-PCR试剂盒，按照表6所示体系进行加样，分装至在96孔板中，每个样品做三个重复的反应体系，即三组平行试验。
表6 qPCR加样体系
3)将96孔板3000rpm离心5min，放入qPCR仪进行PCR反应，设定qPCR程序为：第一步95℃，5min；第二步95℃，5s；第三步60℃，30s；第二步至第三步共40个循环；第四步：溶解曲线；第五步：4℃保存。
4)分析数据，根据如下公式计算RNA的m6A修饰水平或相对修饰水平比较各组间％Input的差异。
计算公式：△Ct＝Ct(RIP)-[Ct(Input)-log2(稀释倍数)]，则RNA的m6A修饰水平％Input＝2-△Ct。
Ate1的RNA的m6A修饰水平或相对修饰水平在1次MeRIP-qPCR实验后三次平均数据如图1所示，图1中A不同RNA量(1μg、2μg、6μg)对MeRIP-qPCR结果的影响，说明m6A抗体IP所需RNA≥2μg时，照射组(6.5Gy照射剂量、照后1天)与正常组(未遭受γ射线辐射)比较Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，结果重复性较好。其中，****p＜0.0001。
B为Ate1的引物序列(711-834)检测在不同辐射剂量和时间点Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平变化，在同一时间点，照射组(0.2Gy、0.5Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6.5Gy、10Gy照射剂量)分别与正常组(未遭受γ射线辐射)比较Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，*p＜0.1，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001；C为Ate1的引物序列(1732-1878)检测在不同辐射剂量和时间点Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平变化，在同一时间点，照射组(0.2Gy、0.5Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6.5Gy、10Gy照射剂量)分别与正常组(未遭受γ射线辐射)比较Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001。
用于检测Ate1的RNA m6A修饰的两对引物均表明：Ate1的RNA m6A修饰伴随辐射剂量的增加显著升高，后随时间逐渐降低；当辐射剂量≥1Gy时，Ate1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在受辐射后1-7天内显著高于未遭受γ射线辐射组；当辐射剂量≥4Gy时，Ate1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在1-14天内均显著高于未遭受γ射线辐射组；当辐射剂量≥6.5Gy时，Ate1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在1-28天内均显著高于未遭受γ射线辐射组。Ate1基因的RNA m6A修饰既可以在短时间(1天)内对电离辐射刺激做出响应，适用于≥1Gy的照射剂量的检测；同时当照射剂量较高时，靶基因的RNA m6A修饰又可维持较长时间(28天)的高水平，适用于照后较长时间的剂量评估。
实施例四
利用MeRIP-qPCR实验验证人的Hela细胞中ATE1基因的RNA m6A修饰水平
1、细胞培养
Hela细胞为人的宫颈癌细胞，培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基中，置5％CO2的37℃培养箱中传代培养。
2、采用钴60-γ射线照射
将生长状态良好的Hela细胞给予钴60-γ射线照射。其中，钴60-γ射线照射的照射条件为室温，照射剂量为10Gy，照射距离为3米，剂量率为69.1cGy/min。收取对照组(未照射组，标记为Ctrl)细胞，依次收取10Gy辐照后1小时的细胞(标记为IR)。
3、Hela细胞的RNA提取
苯酚氯仿法提取RNA。
4、RNA的片段化
5、MeRIP实验
6、Hela细胞的RNA逆转录为cDNA
逆转录所用的试剂盒为MonScriptTM RTIII AII-in-One Mix逆转录试剂盒，逆转录体系，如表4所示。
7、qPCR
1)针对人的ATE1基因的RNA m6A修饰潜在的位点设计特异的引物，引物序列如表7。
表7实时荧光定量PCR引物序列
2)实时定量PCR所用的试剂盒为KAPA
FAST qRT-PCR试剂盒，按照表6所示体系进行加样，分装至在96孔板中，每个样品做三个重复的反应体系，即三组平行试验。
3)将96孔板3000rpm离心5min，放入qPCR仪进行PCR反应，设定qPCR程序为：第一步95℃，5min；第二步95℃，5s；第三步60℃，30s；第二步至第三步共40个循环；第四步：溶解曲线；第五步：4℃保存。
4)分析数据，根据如下公式计算RNA的m6A修饰水平或相对修饰水平比较各组间％Input的差异。
计算公式：△Ct＝Ct(RIP)-[Ct(Input)-log2(稀释倍数)]，则RNA的m6A修饰水平％Input＝2-△Ct。
ATE1的RNA的m6A修饰水平或相对修饰水平在3次MeRIP-qPCR实验后三次平均数据如图2所示，10Gy的照射剂量与不照射(0Gy)比较，ATE1的RNA的m6A修饰水平或相对修饰水平存在显著性的差异，说明通过检测ATE1的RNA的m6A修饰水平或相对修饰水平可检测待测对象是否遭受γ射线的辐射。
其中，A为ATE1的引物(1930-2032)检测ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，照射组(10Gy照射剂量、照后1小时)与正常组(未遭受γ射线辐射)比较ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，****p＜0.0001；
B为ATE1的引物(2011-2140)检测ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，照射组(10Gy照射剂量、照后1小时)与正常组(未遭受γ射线辐射)比较ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，****p＜0.0001；
C为ATE1的引物(3195-3312)检测ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，照射组(10Gy照射剂量、照后1小时)与正常组(未遭受γ射线辐射)比较ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，****p＜0.0001；
D为ATE1的引物(3902-4074)检测ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，照射组(10Gy照射剂量、照后1小时)与正常组(未遭受γ射线辐射)比较ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，****p＜0.0001；
E为ATE1的引物(4053-4155)检测ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，照射组(10Gy照射剂量、照后1小时)与正常组(未遭受γ射线辐射)比较ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，****p＜0.0001；
F为ATE1的引物(4226-4350)检测ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，照射组(10Gy照射剂量、照后1小时)与正常组(未遭受γ射线辐射)比较ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平，****p＜0.0001。
本发明通过对C57BL/6N小鼠进行辐射处理后，分离外周血单个核细胞并提取RNA，进行RNA m6A-seq、多种分析软件和算法分析辐射后RNA m6A修饰显著差异的基因，可检测到Ate1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平在辐射后的多个时间点均显著升高。
并且，在小鼠外周血单个核细胞样本队列中利用MeRIP-qPCR，发现γ射线辐射的剂量梯度及时间梯度队列，验证Ate1的RNA m6A修饰随γ射线辐照剂量的变化特征和相同的辐照剂量下Ate1的RNA m6A修饰随时间的变化特征。对人的Hela细胞进行辐射处理，发现与未遭受γ射线辐射的Hela细胞相比，与小鼠Ate1基因同源的ATE1基因的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平升高。
因此，本发明采用上述一种ATE1的RNA m6A修饰作为γ射线辐射标志物的应用，ATE1的RNA m6A修饰水平或相对修饰水平能检测到待测对象是否遭受γ射线辐射和受辐射剂量的评估，有助于及时进行事故救援和伤员处理，对辐射处理具有重要的意义。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。
Claims (7)
1.一种检测ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统在制备检测或辅助检测是否遭受γ射线辐射系统中的应用；
所述ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平为小鼠的外周血分离的外周血单个核细胞中Ate1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平，或，人的Hela细胞中ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平。
2.一种检测ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统，其特征在于：所述系统用于检测或辅助检测是否遭受γ射线辐射，所述检测ATE1的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统为利用RNAm6A芯片技术检测所述ATE1的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统或利用MeRIP-qPCR技术检测所述ATE1的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统；
所述ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平为小鼠的外周血分离的外周血单个核细胞中Ate1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平，或，人的Hela细胞中ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平。
3.根据权利要求2所述的一种检测ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统，其特征在于：检测所述ATE1的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统包括引物和/或试剂和/或试剂盒和/或仪器。
4.根据权利要求2所述的一种检测ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统，其特征在于：所述MeRIP-qPCR技术检测所述ATE1的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统包括引物、RNA模板量、试剂盒和/或进行定量PCR所需的试剂和/或仪器。
5.根据权利要求2所述的一种检测ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统，其特征在于：还包括数据处理系统，所述数据处理系统用于将来自待测对象的所述RNAm6A修饰水平或相对修饰水平转换为所述待测对象的检测结果。
6.根据权利要求2所述的一种检测ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统，其特征在于：扩增小鼠外周血单个核细胞的Ate1由两对引物对组组成，包括Seq IDNo.1和Seq ID No.2所示的两个单链DNA组成的引物对1、Seq ID No.3和Seq ID No.4所示的两个单链DNA组成的引物对2。
7.根据权利要求2所述的一种检测ATE1基因的RNAm6A修饰水平或相对修饰水平的系统，其特征在于：扩增Hela细胞的ATE1由六对引物对组成，包括Seq ID No.5和Seq ID No.6所示的两个单链DNA组成的引物对1、Seq IDNo.7和Seq ID No.8所示的两个单链DNA组成的引物对2、Seq ID No.9和Seq ID No.10所示的两个单链DNA组成的引物对3、Seq ID No.11和Seq ID No.12所示的两个单链DNA组成的引物对4、Seq ID No.13和Seq ID No.14所示的两个单链DNA组成的引物对5、Seq ID No.15和Seq ID No.16所示的两个单链DNA组成的引物对6。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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