CN114349864B - 抗前列腺酸性磷酸酶抗体及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药领域，更具体地，本发明提供了一种抗前列腺酸性磷酸酶(Prostatic acid phosphatase，PAP)抗体的序列及其用途。本发明公开的抗PAP抗体与PAP或前列腺酸性磷酸酶‑粒‑巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(Fusion Protein of Prostatic acid phosphatase‑Granulocyte‑macrophage colony‑stimulating factor,PAP‑GM‑CSF)具有较高的亲和力，可用于PAP或PAP‑GM‑CSF的纯化。同时，也可用于前列腺癌的诊断和治疗。

Description

抗前列腺酸性磷酸酶抗体及其用途

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地涉及一种抗前列腺酸性磷酸酶抗体、其制备方法和应用。

背景技术

前列腺癌是数十年来最常见的男性癌症之一，男性中每年新发病例仅次于肺癌，是导致男性癌症死亡的第二大原因。2018年，全球新诊断前列腺癌病例近130万例，359000例为前列腺癌相关死亡。从全球范围来看，发达国家的前列腺癌发病率高于发展中国家。随着发展中国家经济的高速增长，发展中国家近年来发病率也在快速提升。据统计，从1998到2008年，我国前列腺癌患者以每年12.07%的增长率逐年递增；在近10年，我国男性前列腺癌患者人数持续上升，在2016年新增前列腺癌患者12万人；预计2030年，我国前列腺癌新发患者数量将达到23.7万人，新发患者数量的年复合增长率达5%。同时，由于我国早期筛查渗透率低，因此死亡率高于发达国家。前列腺癌严重困扰了我国男性的健康和生活质量。然而，前列腺癌发病隐匿，晚期易转移、易耐药，前列腺癌确诊时往往已达中后期。因此，寻求一种合适的治疗方式至关重要。

前列腺酸性磷酸酶(Prostatic acid phosphatase，PAP)在95%的前列腺癌细胞表面有特异性表达。PAP在体内有两种存在形式：分泌型PAP(Secreted prostatic acidphosphatase, S-PAP)和跨膜型PAP(Transmembrane prostatic acid phosphatase,TM-PAP)。S-PAP由前列腺上皮细胞合成和分泌，贮存于精囊，参与精液液化与生殖，其产生和分泌受雄激素的调节，具有组织特异性。正常状态下，S-PAP在血中含量极低，只有在疾病状态（如前列腺癌）下才大量进入血液。因此，PAP一直被作为前列腺癌的肿瘤标志物及特异性免疫治疗的靶点，用于临床诊断和治疗。

Johnson等成功构建了编码人PAP的质粒DNA疫苗(Ptvg．HP)和病毒载体疫苗(VV-HP)，并将其分别免疫Lewis大鼠，结果证实编码人PAP的质粒DNA疫苗能够诱导PAP特异性CD4和CD8细胞反应，主要是Thl型免疫反应，PAP特异性IgG抗体反应呈剂量依赖性，抗体滴度随免疫的次数而增加。2010年4月，Sipuleucel-T作为首个肿瘤免疫治疗药物获得了FDA的批准，至今仍是FDA唯一批准的、针对Mcrpc的自体细胞免疫疗法，是美国市场前列腺癌主要治疗药物之一。Sipuleucel-T是一种针对前列腺癌的特异性肿瘤抗原——前列腺酸性磷酸化酶(Prostatic acid phosphatase,PAP)的树突状细胞疫苗。Sipuleucel-T所使用的抗原PA2024是由完整的前列腺酸性磷酸酶通过羧基端与完整的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)的氨基端相连而成的融合蛋白(PAP-GM-CSF)。然而，本领域仍然没有一种能够高效生产此融合蛋白PAP-GM-CSF的方法。

因此，本领域迫切需要开发一种能够高特异性地结合前列腺酸性磷酸酶(PAP)或前列腺酸性磷酸酶-人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(PAP-GM-CSF)的抗体。

发明内容

本发明的目的就是提供一种抗PAP抗体，该抗体可与PAP或PAP-GM-CSF高亲和力结合，可广泛应用于前列腺癌的诊断和相关治疗中。

在本发明的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区具有如下所示的互补决定区CDR：

SEQ ID NO: 2所示的VH-CDR1、SEQ ID NO: 3所示的VH-CDR2，和SEQ ID NO: 4所示的VH-CDR3；

其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留与前列腺酸性磷酸酶(PAP)或前列腺酸性磷酸酶-粒-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(PAP-GM-CSF)的结合亲和力的衍生序列。

在另一优选例中，所述重链可变区还具有如下所示的框架区FR：

SEQ ID NO: 5所示的VH-FR1、SEQ ID NO: 6所示的VH-FR2、SEQ ID NO: 7所示的VH-FR3，和如SEQ ID NO: 8所示的VH-FR4；

在另一优选例中，所述重链可变区具有如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列。

在本发明的第二方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有如本发明第一方面所述的重链可变区。

在另一优选例中，所述重链还包括重链恒定区。

在另一优选例中，所述重链恒定区为人源或鼠源的。

在另一优选例中，所述重链恒定区为人源抗体重链IgG恒定区。

在本发明的第三方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述的轻链可变区具有如下所示的互补决定区CDR：

SEQ ID NO: 10所示的VL-CDR1、SEQ ID NO: 11所示的VL-CDR2，和SEQ ID NO: 12所示的VL-CDR3；

其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留与前列腺酸性磷酸酶(PAP)或前列腺酸性磷酸酶-粒-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(PAP-GM-CSF)的结合亲和力的衍生序列。

在另一优选例中，所述轻链可变区还具有如下所示的框架区FR：

SEQ ID NO: 13所示的VL-FR1、SEQ ID NO: 14所示的VL-FR2、SEQ ID NO: 15所示的VL-FR3，和如SEQ ID NO: 16所示的VL-FR4；

在另一优选例中，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列。

在本发明的第四方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有如本发明第三方面所述的轻链可变区。

在另一优选例中，所述轻链还包括轻链恒定区。

在另一优选例中，所述轻链恒定区为人源或鼠源的。

在另一优选例中，所述轻链恒定区为人源抗体轻链λ和κ恒定区。

在本发明的第五方面，提供了一种抗前列腺酸性磷酸酶(PAP)的抗体，所述抗体具有如本发明第一方面所述的重链可变区，和/或如本发明第三方面所述的轻链可变区；

或者，所述抗体具有如本发明第二方面所述的重链，和/或如本发明第四方面所述的轻链；

其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留与PAP或PAP-GM-CSF的结合亲和力的衍生序列。

在另一优选例中，所述抗体的重链可变区具有如下所示的互补决定区CDR：

SEQ ID NO: 2所示的VH-CDR1、SEQ ID NO: 3所示的VH-CDR2，和SEQ ID NO: 4所示的VH-CDR3；

所述抗体的轻链可变区具有如下所示的互补决定区CDR：

SEQ ID NO: 10所示的VL-CDR1、SEQ ID NO: 11所示的VL-CDR2，和SEQ ID NO: 12所示的VL-CDR3。

在另一优选例中，所述添加、缺失、修饰和/或取代的氨基酸数量为1-5个（如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个）。

在另一优选例中，所述的经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留与PAP或PAP-GM-CSF的结合亲和力的衍生序列为同源性或序列相同性为至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述的抗体还包括重链恒定区和/或轻链恒定区。

在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源的，和/或所述的轻链恒定区为人源的。

在另一优选例中，所述重链恒定区为人源抗体重链IgG-恒定区，且所述轻链恒定区为人源抗体轻链λ和κ恒定区。

在另一优选例中，所述抗体的重链可变区还包括人源的框架区，和/或所述抗体的轻链可变区还包括人源的框架区。

在另一优选例中，所述抗体的重链可变区还包括鼠源的框架区，和/或所述抗体的轻链可变区还包括鼠源的框架区。

在另一优选例中，所述抗体选自下组：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、全人抗体，或其组合。

在另一优选例中，所述的抗体是部分或全人源化、或全人的单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体。

在另一优选例中，所述抗体为抗体全长蛋白、或抗原结合片段。

在另一优选例中，所述抗体为双特异性抗体、或多特异性抗体。

在另一优选例中，所述的抗体为药物偶联物形式。

在另一优选例中，所述的所述抗体具有如本发明第一方面所述的重链可变区和如本发明第三方面所述的轻链可变区；

其中，所述的重链可变区和所述的轻链可变区包括选自下组的CDR：

(1)如SEQ ID NO: 2所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO: 3所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO: 4所示的VH-CDR3、如SEQ ID NO: 10所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO: 11所示的VL-CDR2，和如SEQ ID NO: 12所示的VL-CDR3。

在另一优选例中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，并且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO: 9所示。

在另一优选例中，所述重链可变区的氨基酸序列与如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列至少有80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同源性或序列相同性。

在另一优选例中，所述轻链可变区的氨基酸序列与如SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列至少有80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同源性或序列相同性。

在本发明的第六方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：

(i) 如本发明第五方面所述的抗体；以及

(ii) 任选的协助表达和/或纯化的标签序列。

在另一优选例中，所述的标签序列包括6His标签、GGGS序列、FLAG标签、HA标签、Myc标签，或其组合。

在另一优选例中，所述的重组蛋白（或多肽）包括融合蛋白。

在另一优选例中，所述的重组蛋白为单体、二聚体，或多聚体。

在另一优选例中，所述的重组蛋白特异性结合PAP-GM-CSF。

在另一优选例中，所述的标签序列是信号肽。

在本发明的第七方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码选自下组的多肽：如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、如本发明第五方面所述的抗体，或如本发明第六方面所述的重组蛋白。

在另一优选例中，编码所述重链可变区的多核苷酸如SEQ ID NO: 17所示；和/或，编码所述轻链可变区的多核苷酸如SEQ ID NO: 18所示。

在本发明的第八方面，提供了一种载体，所述载体含有如本发明第七方面所述的多核苷酸。

在另一优选例中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒等。

在本发明的第九方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，所述宿主细胞含有如本发明第八方面所述的载体或基因组中整合有如本发明第七方面所述的多核苷酸。

在另一优选例中，所述的宿主细胞是真核细胞，优选地为CHO细胞。

在本发明的第十方面，提供了如本发明第五方面所述的抗体和/或如本发明第六方面所述的重组蛋白的用途，用于前列腺酸性磷酸酶-人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(PAP-GM-CSF)的纯化或分离方法。

在另一优选例中，所述的前列腺酸性磷酸酶-人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(PAP-GM-CSF)的氨基酸序列如SEQ ID NO: 19所示。

在本发明的第十一方面，提供了一种纯化分离前列腺酸性磷酸酶-人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(PAP-GM-CSF)的方法，包括步骤：

(i)制备一含有如本发明第五方面所述的抗体或如本发明第六方面所述的重组蛋白的亲和填料；和

(ii)使用(i)中所述的亲和填料对所述PAP-GM-CSF进行亲和纯化和收集。

在另一优选例中，所述步骤(i)中，所述亲和填料制备包括：

a. 使用1mM HCl溶液洗涤琼脂糖凝胶，得到活化的凝胶；

b. 将活化后的凝胶与PAP/GM-CSF抗体在偶联缓冲液(0.2M NaHCO₃、0.5M NaCl,pH 8.3)中充分混匀；

c. 离心收集凝胶，并将凝胶转移至阻断缓冲液(0.1M Tris/HCl, pH 8.0)中进行阻断。

d. 依次交替使用洗涤液A（0.1M 乙酸钠、0.5M NaCl,pH 4.0）和洗涤液B(0.1MTris/HCl、0.5M NaCl，pH 8.0)冲洗凝胶，即得到所述亲和填料。

在另一优选例中，步骤a中所用HCl体积与凝胶体积比为10:1至15:1。

在另一优选例中，步骤b中所述反应条件为室温混合2小时，凝胶与抗体的比例为2:1至5:1。

在另一优选例中，步骤c所述反应条件为低温过夜,或者室温2h。

在另一优选例中，步骤d中交替冲洗重复次数为3-6次。

在另一优选例中，所述的琼脂糖凝胶选自下组：NHS-activated Sepharose 4Fast Flow、CNBr-activated Sepharose 4 Fast Flow、CNBr-activated Bestarose4FastFlow，或Epoxy-activatedBestarose 6B。

在本发明的第十二方面，提供了一种重组多肽的制备方法，所述的重组多肽是如本发明第五方面所述的抗体或如本发明第六方面所述的重组蛋白，所述的方法包括：

(a) 在适合表达的条件下，培养如本发明第九方面所述的宿主细胞；和

(b) 从培养物中分离出所述的重组多肽。

在另一优选例中，步骤(b)中，所述的分离包括：亲和柱纯化、阳离子交换柱纯化，或其组合。

在另一优选例中，所述亲和柱纯化包括通过ProteinA或ProteinG层析柱对所述抗体进行纯化。

在另一优选例中，所述阳离子交换柱纯化包括通过Source 15S或HiTrapSPFF或HiTrapCaptoS层析柱对所述抗体进行纯化。

在本发明的第十三方面，提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物含有：

(a) 抗体部分，所述抗体部分选自下组：如本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白，或其组合；和

(b) 与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶、金纳米颗粒/纳米棒、纳米磁粒、病毒外壳蛋白或VLP，或其组合。

在另一优选例中，所述的抗体部分与所述的偶联部分通过化学键或接头进行偶联。

在另一优选例中，所述的放射性核素包括：

(i) 诊断用同位素，所述的诊断用同位素选自下组：Tc-99m、Ga-68、F-18、I-123、I-125、I-131、In-111、Ga-67、Cu-64、Zr-89、C-11、Lu-177、Re-188，或其组合；和任选的

(ii) 治疗用同位素，所述的治疗用同位素选自下组：Lu-177、Y-90、Ac-225、As-211、Bi-212、Bi-213、Cs-137、Cr-51、Co-60、Dy-165、Er-169、Fm-255、Au-198、Ho-166、I-125、I-131、Ir-192、Fe-59、Pb-212、Mo-99、Pd-103、P-32、K-42、Re-186、Re-188、Sm-153、Ra223、Ru-106、Na24、Sr89、Tb-149、Th-227、Xe-133 Yb-169、Yb-177，或其组合。

在另一优选例中，所述偶联部分为药物或毒素。

在另一优选例中，所述的药物为靶向治疗前列腺癌的药物。

在另一优选例中，所述的药物为细胞毒性药物。

在另一优选例中，所述的细胞毒性药物选自下组：抗微管蛋白药物、DNA小沟结合试剂、DNA复制抑制剂、烷化试剂、抗生素、叶酸拮抗物、抗代谢药物、化疗增敏剂、拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱，或其组合。

特别有用的细胞毒性药物类的例子包括，例如，DNA小沟结合试剂、DNA烷基化试剂、和微管蛋白抑制剂、典型的细胞毒性药物包括、例如奥瑞他汀(Auristatins)、喜树碱(Camptothecins)、多卡霉素/倍癌霉素(Duocarmycins)、依托泊甙(Etoposides)、美登木素(Maytansines)和美登素类化合物(Maytansinoids)（例如DM1和DM4）、紫杉烷(Taxanes)、苯二氮卓类(Benzodiazepines)或者含有苯二氮卓的药物(Benzodiazepine containingdrugs)（例如吡咯并[1,4]苯二氮卓类(PBDs)，吲哚啉苯并二氮卓类(Indolinobenzodiazepines)和噁唑烷并苯并二氮卓类(Oxazolidinobenzodiazepines)）、长春花生物碱(Vinca alkaloids)，或其组合。

在另一优选例中，所述的毒素选自下组：

耳他汀类（例如，耳他汀E、耳他汀F、MMAE和MMAF）、金霉素、类美坦西醇、蓖麻毒素、蓖麻毒素A-链、考布他汀、多卡米星、多拉司他汀、阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、顺铂、cc1065、溴化乙锭、丝裂霉素、依托泊甙、替诺泊甙(Tenoposide)、长春新碱、长春碱、秋水仙素、二羟基炭疽菌素二酮、放线菌素、白喉毒素、假单胞菌外毒素(PE)A、PE40、相思豆毒素、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌、白树毒素、迈托毒素(Mitogellin)、局限曲菌素(Retstrictocin)、酚霉素、依诺霉素、麻疯树毒蛋白(Curicin)、巴豆毒素、卡奇霉素、肥皂草(Sapaonaria officinalis)抑制剂、糖皮质激素，或其组合。

在另一优选例中，所述偶联部分为可检测标记物。

在另一优选例中，所述偶联物选自：荧光或发光标记物、放射性标记物、MRI（磁共振成像）或CT（电子计算机X射线断层扫描技术）造影剂、或能够产生可检测产物的酶、放射性核素、生物毒素、细胞因子（如IL-2）、抗体、抗体Fc片段、抗体scFv片段、金纳米颗粒/纳米棒、病毒颗粒、脂质体、纳米磁粒、前药激活酶（如DT-心肌黄酶(DTD)或联苯基水解酶-样蛋白质(BPHL)）。

在另一优选例中，所述免疫偶联物含有：多价（如二价）的(a)。

在另一优选例中，所述多价是指在所述免疫偶联物的氨基酸序列中包含多个重复的(a)。

在本发明的第十四方面，提供了一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或如本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白、如本发明第十三方面所述的抗体偶联物，或其组合，所述活性成分被用于(a)制备前列腺癌的诊断试剂或试剂盒；和/或(b)制备预防和/或治疗前列腺癌的药物。

在另一优选例中，所述的诊断试剂为检测片或检测板。

在另一优选例中，所述诊断试剂或试剂盒用于：检测样品中的前列腺酸性磷酸酶(PAP)或其片段。

在另一优选例中，所述的抗体为药物偶联物(ADC)形式。

在本发明的第十五方面，提供了一种体外检测样品中前列腺酸性磷酸酶(PAP)或其片段的方法，所述方法包括步骤：

(1) 在体外，将所述样品与如本发明第五方面所述的抗体、本发明第六方面所述的重组蛋白或本发明第十三方面所述的抗体偶联物接触；

(2) 检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在前列腺酸性磷酸酶(PAP)或其片段。

在另一优选例中，所述的检测包括诊断性的或非诊断性的。

在本发明的第十六方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒中包括：

(1) 第一容器，所述第一容器中含有如本发明第五方面的抗体或本发明第六方面所述的重组蛋白；和/或

(2) 第二容器，所述第二容器中含有抗所述抗体或重组蛋白的二抗；

或者，

所述试剂盒含有一检测板，所述检测板包括：基片（支撑板）和测试条，所述的测试条含有如本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白、如本发明第十三方面所述的抗体偶联物，或其组合。

在另一优选例中，所述试剂盒中还含有一说明书，根据所述的说明书记载，所述的试剂盒用于非侵入性地检测待测对象的PAP表达。

在另一优选例中，所述的试剂盒用于表达PAP蛋白（即PAP阳性）的肿瘤的检测。

在本发明的第十七方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有：

(i) 活性成分，所述活性成分选自下组：如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或如本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白、如本发明第十三方面所述的抗体偶联物，或其组合；以及

(ii)药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的药物组合物为液态制剂。

在另一优选例中，所述的药物组合物为注射剂。

在另一优选例中，所述的药物组合物包括0.01～99.99%的如本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白、如本发明第十三方面所述的抗体偶联物或其组合和0.01～99.99%的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了本发明所述抗PAP抗体分子的结构示意图。

图2是通过ELISA法对表达PAP抗体的不同杂交瘤细胞筛选检测结果，数字为不同细胞株的编号。

图3显示了不同细胞株PAP抗体亲和力比较图。

图4显示了在本发明具体实施方案中，按照本发明所述序列制备的抗PAP抗体SDS-PAGE电泳图。

图5为本发明所述抗PAP抗体与PAP或GM-CSF结合研究。

图6显示了在本发明具体实施方案中，按照本发明提供的亲和填料和所述的纯化方法纯化PAP-GM-CSF的层析图谱。

图7显示了在本发明具体实施方案中，使用本发明提供的抗PAP抗体纯化得到的PAP-GM-CSF的SDS-PAGE电泳图。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，经过大量的筛选，首次开发了一种针对前列腺酸性磷酸酶(PAP)或前列腺酸性磷酸酶-人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(PAP-GM-CSF)的抗体，并验证了使用其纯化制备PAP-GM-CSF的效率。实验结果表明，通过使用本发明提供的抗PAP抗体纯化制备PAP-GM-CSF，可一步得到纯度较高的PAP-GM-CSF融合蛋白。在此基础上完成了本发明。本发明的抗PAP抗体对PAP或PAP-GM-CSF或其融合蛋白具有较高的亲和力，可用于PAP或PAP-GM-CSF或其融合蛋白的纯化。同时，本发明的抗PAP抗体特异性好、安全性高、批间一致性稳定等优点也为发展前列腺癌的更高效诊断及治疗作出了贡献。

术语

为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。在描述本发明之前，应当理解本发明不限于所述的具体方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变动。还应当理解本文所用的术语其目的仅在于描述具体实施方案，并且不意图是限制性的，本发明的范围将仅由所附的权利要求书限制。

除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1%。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值（例如，99.1、99.2、99.3、99.4等）。

本发明所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。

如本文所用，术语“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或情况可以发生但不是必须发生。例如，“任选包含1-3个抗体重链可变区”是指特定序列的抗体重链可变区可以有但不是必须有，可以是1个、2个或3个。

本发明所述的“序列同一性”表示当具有适当的替换、插入或缺失等突变的情况下最佳比对和比较时，两个核酸或两个氨基酸序列之间的同一性程度。本发明中所述的序列和其具有同一性的序列之间的序列同一性可以至少为85%、90%或95%，优选至少为95%。非限制性实施例包括85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%。

如本文所用，术语“前列腺酸性磷酸酶-人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白”、“前列腺酸性磷酸酶-粒-巨噬细胞集落刺激因子”和“PAP-GM-CSF”可互换使用，均是指本发明抗体所特异性结合的将前列腺酸性磷酸酶通过羧基端与完整的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的氨基端相连而成的融合蛋白(PAP-GM-CSF)。

优选地，本发明融合蛋白PAP-GM-CSF的氨基酸序列如SEQ ID NO: 19所示。

MRAAPLLLARAASLSLGFLFLLFFWLDRSVLAKELKFVTLVFRHGDRSPIDTFPTDPIKESSWPQGFGQLTQLGMEQHYELGEYIRKRYRKFLNESYKHEQVYIRSTDVDRTLMSAMTNLAALFPPEGVSIWNPILLWQPIPVHTVPLSEDQLLYLPFRNCPRFQELESETLKSEEFQKRLHPYKDFIATLGKLSGLHGQDLFGIWSKVYDPLYCESVHNFTLPSWATEDTMTKLRELSELSLLSLYGIHKQKEKSRLQGGVLVNEILNHMKRATQIPSYKKLIMYSAHDTTVSGLQMALDVYNGLLPPYASCHLTELYFEKGEYFVEMYYRNETQHEPYPLMLPGCSPSCPLERFAELVGPVIPQDWSTECMTTNSHQGTEDSTDGSAPARSPSPSTQPWEHVNAIQEARRLLNLSRDTAAEMNETVEVISEMFDLQEPTCLQTRLELYKQGLRGSLTKLKGPLTMMASHYKQHCPPTPETSCATQIITFESFKENLKDFLLVIPFDCWEPVQE (SEQ IDNO: 19)

抗体

如本文所用，术语“抗体”或“免疫球蛋白”是有相同结构特征的约150000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是多个恒定区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。

如本文所用，术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个抗体可变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR)或超变区中的三个片段中。可变区中较保守的部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区，它们大致上呈b-折叠构型，由形成连接环的三个CDR相连，在某些情况下可形成部分b折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR一起形成了抗体的抗原结合部位（参见Kabat等，NIH Publ. No. 91-3242，卷I，647-669页(1991)）。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。

脊椎动物抗体（免疫球蛋白）的“轻链”可根据其恒定区的氨基酸序列归为明显不同的两类（称为κ和λ）中的一类。根据其重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分为不同的种类。主要有5类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些还可进一步分成亚类（同种型），如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定区分别称为a、d、e、g、和m。不同类免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是本领域人员所熟知的。

一般，抗体的抗原结合特性可由位于重链和轻链可变区的3个特定的区域来描述，称为可变区域(CDR)，将该段间隔成4个框架区域(FR)，4个FR的氨基酸序列相对比较保守，不直接参与结合反应。这些CDR形成环状结构，通过其间的FR形成的β折叠在空间结构上相互靠近，重链上的CDR和相应轻链上的CDR构成了抗体的抗原结合位点。可以通过比较同类型的抗体的氨基酸序列来确定是哪些氨基酸构成了FR或CDR区域。

本发明中，“VH-CDR1”与“CDR-H1”可互换使用，均指重链可变区的CDR1；“VH-CDR2”与“CDR-H2”可互换使用，均指重链可变区的CDR2；“VH-CDR3”与“CDR-H3”可互换使用，均指重链可变区的CDR3。“VL-CDR1”与“CDR-L1”可互换使用，均指轻链可变区的CDR1；“VL-CDR2”与“CDR-L2”可互换使用，均指轻链可变区的CDR2；“VL-CDR3”与“CDR-L3”可互换使用，均指轻链可变区的CDR3。本发明不仅包括完整的抗体，还包括具有免疫活性的抗体的片段或抗体与其他序列形成的融合蛋白。因此，本发明还包括所述抗体的片段、衍生物和类似物。

术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗体特异性结合的部位。表位通常以独特的空间构象包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续或非连续的氨基酸。

术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10^-7M，例如大约小于10^-8M、10^-9M或10^-10M或更小的亲和力(KD)结合。

如本文所用，术语“抗原决定簇”指抗原上不连续的，由本发明抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

在本发明中，所述抗体能够特异性地识别PAP，而与融合蛋白的GM-CSF无结合。

在本发明中，抗体包括用本领域技术人员熟知技术所制备的鼠的、嵌合的、人源化的或者全人的抗体。重组抗体，例如嵌合的和人源化的单克隆抗体，包括人的和非人的部分，可以通过标准的DNA重组技术获得，它们都是有用的抗体。嵌合抗体是一个分子，其中不同的部分来自不同的动物种，例如具有来自鼠的单克隆抗体的可变区，和来自人免疫球蛋白的恒定区的嵌合抗体（见例如美国专利4,816,567和美国专利4,816,397，在此通过引用方式整体引入本文）。人源化的抗体是指来源于非人物种的抗体分子，具有一个或多个来源于非人物种的互补决定区(CDRs)和来源于人免疫球蛋白分子的框架区域（见美国专利5,585,089，在此通过引用方式整体引入本文）。这些嵌合和人源化的单克隆抗体可以采用本领域熟知的DNA重组技术制备。

在本发明中，抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性、或者更多的多重特异性。

在本发明中，本发明的抗体还包括其保守性变异体，指与本发明抗体的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表A进行氨基酸替换而产生。

表A

本发明中，所述抗体为特异性结合PAP或PAP-GM-CSF的抗体。本发明提供一种针对PAP或PAP-GM-CSF的高特异性和高亲和力的抗体，其包括重链和轻链，所述重链含有重链可变区(VH)氨基酸序列，所述轻链含有轻链可变区(VL)氨基酸序列。

优选地，

所述的重链可变区(VH)具有选自下组的互补决定区CDR：

SEQ ID NO: 2所示的VH-CDR1，

SEQ ID NO: 3所示的VH-CDR2，和

SEQ ID NO: 4所示的VH-CDR3；

所述的轻链可变区(VL)具有选自下组的互补决定区CDR：

SEQ ID NO: 10所示的VL-CDR1，

SEQ ID NO: 11所示的VL-CDR2，和

SEQ ID NO: 12所示的VL-CDR3；其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留与PAP或PAP-GM-CSF的结合亲和力的衍生序列。

在另一优选例中，所述经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸序列所形成的序列优选为同源性或序列相同性为至少80%，较佳地至少85%，更佳地至少为90%，最佳地至少95%的氨基酸序列。

本领域普通技术人员公知的测定序列同源性或相同性的方法包括但不限于：计算机分子生物学(Computational Molecular Biology),Lesk,A.M.编，牛津大学出版社，纽约，1988；生物计算：信息学和基因组项目(Biocomputing:Informatics and GenomeProjects),Smith,D.W.编，学术出版社，纽约，1993；序列数据的计算机分析(ComputerAnalysis of Sequence Data)，第一部分，Griffin,A.M.和Griffin，H.G.编，HumanaPress，新泽西，1994；分子生物学中的序列分析(Sequence Analysis in MolecularBiology),von Heinje,G.，学术出版社，1987和序列分析引物(Sequence AnalysisPrimer),Gribskov,M.与Devereux,J.编M Stockton Press，纽约，1991和Carillo,H.与Lipman,D.,SIAM J. Applied Math.,48:1073(1988)。测定相同性的优选方法要在测试的序列之间得到最大的匹配。测定相同性的方法编译在公众可获得的计算机程序中。优选的测定两条序列之间相同性的计算机程序方法包括但不限于：GCG程序包（Devereux,J.等，1984）、BLASTP、BLASTN和FASTA（Altschul,S,F.等，1990）。公众可从NCBI和其它来源得到BLASTX程序（BLAST手册，Altschul, S.等，NCBI NLM NIH Bethesda,Md.20894;Altschul,S.等，1990）。熟知的Smith Waterman算法也可用于测定相同性。

较佳地，本文所述抗体为抗体全长蛋白、抗原抗体结合域蛋白质片段、双特异性抗体、多特异性抗体、单链抗体(Single chain antibody fragment,scFv)、单域抗体(Singledomain antibody,sdAb)和单区抗体(Signle-domain antibody)中的一种或多种，以及上述抗体所制得的单克隆抗体或多克隆抗体。所述单克隆抗体可以由多种途径和技术进行研制，包括杂交瘤技术、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术等，主流是通过杂交瘤技术从野生型或转基因小鼠制备单克隆抗体。

所述的抗体全长蛋白为本领域常规的抗体全长蛋白，其包括重链可变区、轻链可变区、重链恒定区和轻链恒定区。所述的蛋白质的重链可变区和轻链可变区与人源重链恒定区和人源轻链恒定区构成全人源抗体全长蛋白。较佳地，所述的抗体全长蛋白为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；更佳地为IgG1。

本发明的抗体可以是双链或单链抗体，并且可以是选自动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，更优选为人源化抗体、人-动物嵌合抗体，更优选为全人源化抗体。

本发明所述抗体衍生物可以是单链抗体、和/或抗体片段，如：Fab、Fab’、(Fab’)₂或该领域内其他已知的抗体衍生物等，以及IgA、IgD、IgE、IgG以及IgM抗体或其他亚型的抗体中的任意一种或几种。

所述的单链抗体为本领域常规的单链抗体，其包括重链可变区、轻链可变区和15～20个氨基酸的短肽。

其中，所述动物优选为哺乳动物，如鼠。

本发明抗体可以是靶向PAP-GM-CSF的嵌合抗体、人源化抗体、CDR嫁接和/或修饰的抗体。

本发明上述内容中，所述添加、缺失、修饰和/或取代的氨基酸数量，优选为不超过初始氨基酸序列总氨基酸数量的40%，更优选为不超过35%，更优选为1-33%，更优选为5-30%，更优选为10-25%，更优选为15-20%。

本发明上述内容中，更优选地，所述添加、缺失、修饰和/或取代的氨基酸数量，可以是1-7个，更优选为1-5个，更优选为1-3个，更优选为1-2个。

在另一优选例中，所述抗体的重链可变区含有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列。

在一个更加优选的实施方式中，本发明各抗体或重组蛋白具体地包括以下各VL和VH序列，以及CDR和FR序列。

表B 本发明抗体序列总结

编码的多核苷酸

本发明还提供一种多核苷酸，其编码上述的抗体或包含其的重组蛋白或其重链可变区或轻链可变区。

较佳地，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO: 17所示；和/或，编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO: 18所示。

更佳地，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO: 17所示；且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO: 18所示。

所述核酸的制备方法为本领域常规的制备方法，较佳地，包括以下的步骤：通过基因克隆技术获得编码上述蛋白质的核酸分子，或者通过人工全序列合成的方法得到编码上述蛋白质的核酸分子。

本领域技术人员知晓，编码上述蛋白质的氨基酸序列的碱基序列可以适当引入替换、缺失、改变、插入或增加来提供一个多聚核苷酸的同系物。本发明中多聚核苷酸的同系物可以通过对编码该蛋白序列基因的一个或多个碱基在保持抗体活性范围内进行替换、缺失或增加来制得。

载体

本发明还提供一种包含所述核酸的重组表达载体。

其中所述重组表达载体可通过本领域常规方法获得，即：将本发明所述的核酸分子连接于各种表达载体上构建而成。所述的表达载体为本领域常规的各种载体，只要其能够容载前述核酸分子即可。所述载体较佳地包括：各种质粒、粘粒、噬菌体或病毒载体等。

本发明还提供一种包含上述重组表达载体的重组表达转化体。

其中，所述重组表达转化体的制备方法为本领域常规的制备方法，较佳地为：将上述重组表达载体转化至宿主细胞中制得。所述的宿主细胞为本领域常规的各种宿主细胞，只要能满足使上述重组表达载体稳定地自行复制，且所携带所述的核酸可被有效表达即可。较佳地，所述宿主细胞为E.coli TG1或E.coli BL21细胞（表达单链抗体或Fab抗体），或者HEK293或CHO细胞（表达全长IgG抗体）。将前述重组表达质粒转化至宿主细胞中，即可得本发明优选的重组表达转化体。其中所述转化方法为本领域常规转化方法，较佳地为化学转化法，热激法或电转法。

抗体的制备

本发明抗体或其片段的DNA分子的序列可以用常规技术，比如利用PCR扩增或基因组文库筛选等方法获得。此外，还可将轻链和重链的编码序列融合在一起，形成单链抗体。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码所述的本发明的抗体（或其片段，或其衍生物）的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子（或如载体）和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

本发明还涉及包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体。这些载体可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。优选的动物细胞包括（但并不限于）：CHO细胞、HEK-293细胞。

通常，在适合本发明抗体表达的条件下，培养转化所得的宿主细胞。然后用常规的免疫球蛋白纯化步骤，如蛋白A-Sepharose、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析、离子交换层析、疏水层析、分子筛层析或亲和层析等本领域技术人员熟知的常规分离纯化手段纯化得到本发明的抗体。

所得单克隆抗体可用常规手段来鉴定。比如，单克隆抗体的结合特异性可用免疫沉淀或体外结合试验（如放射性免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)）来测定。单克隆抗体的结合亲和力例如可用Munson等, Anal. Biochem.,107:220(1980)的Scatchard分析来测定。

本发明的抗体可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化抗体。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理（盐析方法）、离心、渗透破菌、超声处理、超离心、分子筛层析（凝胶过滤）、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

抗体-药物偶联物(ADC)

本发明还提供了基于本发明抗体的抗体偶联药物(Antibody-drug conjugate,ADC)。

典型地，所述抗体偶联药物包括所述抗体、以及效应分子，所述抗体与所述效应分子偶联，并优选为化学偶联。其中，所述效应分子优选为具有治疗活性的药物。此外，所述效应分子可以是毒蛋白、化疗药物、小分子药物或放射性核素中的一种或多种。

本发明抗体与所述效应分子之间可以是通过偶联剂进行偶联。所述偶联剂的例子可以是非选择性偶联剂、利用羧基的偶联剂、肽链、利用二硫键的偶联剂中的任意一种或几种。所述非选择性偶联剂是指使效应分子和抗体形成共价键连接的化合物，如戊二醛等。所述利用羧基的偶联剂可以是顺乌头酸酐类偶联剂（如顺乌头酸酐）、酰基腙类偶联剂（偶联位点为酰基腙）中的任意一种或几种。

抗体上某些残基（如Cys或Lys等）用于与多种功能基团相连，其中包括成像试剂（例如发色基团和荧光基团），诊断试剂（例如MRI对比剂和放射性同位素），稳定剂（例如乙二醇聚合物）和治疗剂。抗体可以被偶联到功能剂以形成抗体-功能剂的偶联物。功能剂（例如药物，检测试剂，稳定剂）被偶联（共价连接）至抗体上。功能剂可以直接地、或者是通过接头间接地连接于抗体。

抗体可以偶联药物从而形成抗体药物偶联物(ADC)。典型地，ADC包含位于药物和抗体之间的接头。接头可以是可降解的或者是不可降解的接头。可降解的接头典型地在细胞内环境下容易降解，例如在目标位点处接头发生降解，从而使药物从抗体上释放出来。合适的可降解的接头包括，例如酶降解的接头，其中包括可以被细胞内蛋白酶（例如溶酶体蛋白酶或者内体蛋白酶）降解的含有肽基的接头，或者糖接头例如，可以被葡糖苷酸酶降解的含葡糖苷酸的接头。肽基接头可以包括，例如二肽，例如缬氨酸-瓜氨酸，苯丙氨酸-赖氨酸或者缬氨酸-丙氨酸。其它合适的可降解的接头包括，例如，pH敏感接头（例如pH小于5.5时水解的接头，例如腙接头）和在还原条件下会降解的接头（例如二硫键接头）。不可降解的接头典型地在抗体被蛋白酶水解的条件下释放药物。

连接到抗体之前，接头具有能够和某些氨基酸残基反应的活性反应基团，连接通过活性反应基团实现。巯基特异性的活性反应基团是优选的，并包括：例如马来酰亚胺类化合物，卤代酰胺（例如碘、溴或氯代的）；卤代酯（例如碘、溴或氯代的）；卤代甲基酮（例如碘、溴或氯代），苄基卤代物（例如碘、溴或氯代的）；乙烯基砜，吡啶基二硫化物；汞衍生物例如3,6-二-（汞甲基）二氧六环，而对离子是醋酸根、氯离子或者硝酸根；和聚亚甲基二甲基硫醚硫代磺酸盐。接头可以包括，例如，通过硫代丁二酰亚胺连接到抗体上的马来酰亚胺。

药物可以是任何细胞毒性，抑制细胞生长或者免疫抑制的药物。在实施方式中，接头连接抗体和药物，而药物具有可以和接头成键的功能性基团。例如，药物可以具有可以和连接物成键的氨基，羧基，巯基，羟基，或者酮基。在药物直接连接到接头的情况下，药物在连接到抗体之前，具有反应的活性基团。

在本发明中，药物-接头可以用于在一个简单步骤中形成ADC。在其它实施方式中，双功能连接物化合物可以用于在两步或多步方法中形成ADC。例如，半胱氨酸残基在第一步骤中与接头的反应活性部分反应，并且在随后的步骤中，接头上的功能性基团与药物反应，从而形成ADC。

通常，选择接头上功能性基团，以利于特异性地与药物部分上的合适的反应活性基团进行反应。作为非限制性的例子，基于叠氮化合物的部分可以用于特异性地与药物部分上的反应性炔基基团反应。药物通过叠氮和炔基之间的1,3-偶极环加成，从而共价结合于接头。其它的有用的功能性基团包括，例如酮类和醛类（适合与酰肼类和烷氧基胺反应），膦（适合与叠氮反应）；异氰酸酯和异硫氰酸酯（适合与胺类和醇类反应）；和活化的酯类，例如N-羟基琥珀酰亚胺酯（适合与胺类和醇类反应）。这些和其它的连接策略，例如在《生物偶联技术》，第二版(Elsevier)中所描述的，是本领域技术人员所熟知的。本领域技术人员能够理解，对于药物部分和接头的选择性反应，当选择了一个互补对的反应活性功能基团时，该互补对的每一个成员既可以用于接头，也可以用于药物。

本发明还提供了制备ADC的方法，可进一步地包括：将抗体与药物-接头化合物，在足以形成抗体偶联物(ADC)的条件下进行结合。

在某些实施方式中，本发明方法包括：在足以形成抗体-接头偶联物的条件下，将抗体与双功能接头化合物进行结合。在这些实施方式中，本发明方法还进一步地包括：在足以将药物部分通过接头共价连接到抗体的条件下，将抗体接头偶联物与药物部分进行结合。

在一些实施方式中，抗体药物偶联物ADC如下分子式所示：

其中：

Ab是抗体，

LU是接头；

D是药物；

而且下标p是选自1到8的值。

应用

本发明还提供了本发明抗体、抗体偶联物ADC、重组蛋白、和/或免疫细胞的用途，例如用于制备诊断制剂或制备药物。

较佳地，所述的药物是用于预防和/或治疗前列腺癌的药物。

检测用途和试剂盒

本发明的抗体或其ADC可用于检测应用，例如用于检测样本，从而提供诊断信息。

本发明中，所采用的样本（样品）包括细胞、组织样本和活检标本。

较佳地，所述的样本是来自于检测对象的血液样本。

本发明使用的术语“活检”应包括本领域技术人员已知的所有种类的活检。因此本发明中使用的活检可以包括例如肿瘤的切除样本、通过内窥镜方法或器官的穿刺或针刺活检制备的组织样本。

本发明中使用的样本包括固定的或保存的细胞或组织样本。

本发明还提供了一种指含有本发明的抗体（或其片段）的试剂盒，在本发明的一个优选例中，所述的试剂盒还包括容器、使用说明书、缓冲剂等。在优选例中，本发明的抗体可以固定于检测板。

药物组合物

本发明还提供了一种组合物。在优选例中，所述的组合物是药物组合物，它含有上述的抗体或其活性片段或其融合蛋白或其ADC或相应的免疫细胞，以及药学上可接受的载体。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。

配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括（但并不限于）：瘤内、腹膜内、静脉内、或局部给药。典型地，本发明所述的药物组合物的给药途径较佳地为注射给药或口服给药。所述注射给药较佳地包括静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射等途径。所述的药物组合物为本领域常规的各种剂型，较佳地为固体、半固体或液体的形式，可以为水溶液、非水溶液或混悬液，更佳地为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂或输注剂等。

本发明所述抗体也可以是由核苷酸序列在细胞内表达用于的细胞治疗，比如，所述抗体用于嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR-T)等。

本发明所述的药物组合物是用于预防和/或治疗前列腺癌的药物组合物。

本发明的药物组合物可直接用于结合PAP-GM-CSF或其片段，因而可用于预防和治疗前列腺癌。

本发明的药物组合物含有安全有效量（如0.001-99wt%,较佳地0.01-90wt%，更佳地0.1-80wt%）的本发明上述的单克隆抗体（或其偶联物）以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括（但并不限于）：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明的多肽还可与其他治疗剂一起使用。

本发明中，较佳地，本发明所述的药物组合物还包括一种或多种药用载体。所述的药用载体为本领域常规药用载体，所述的药用载体可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料。所述的药物辅料为本领域常规的药物辅料，较佳的包括药学上可接受的赋形剂、填充剂或稀释剂等。更佳地，所述的药物组合物包括0.01～99.99%的上述蛋白质和0.01～99.99%的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。

本发明中，较佳地，所述的药物组合物的施用量为有效量，所述有效量为能够缓解或延迟疾病、退化性或损伤性病症进展的量。所述有效量可以以个体基础来测定，并将部分基于待治疗症状和所寻求结果的考虑。本领域技术人员可以通过使用个体基础等上述因素和使用不超过常规的实验来确定有效量。

使用药物组合物时，是将安全有效量的免疫偶联物施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约50毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约20毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明提供上述药物组合物在制备预防和/或治疗前列腺癌的药物中的应用。

本发明的主要优点包括：

1)特异性。抗体能与PAP蛋白特异性结合。

2)安全性。通过基因重组技术表达抗体，质量可控，批间一致性稳定。

3)技术成熟。基因重组表达抗体的技术路线比较成熟，便于后续生产。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York: Cold Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

实施例1：抗PAP抗体单克隆细胞株的制备和筛选

将PAP-GM-CSF蛋白（制备方法参照本发明人申请专利：前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬细胞集落刺激因子制备方法，专利申请号：201810073775.X）通过多次免疫BalB/c小鼠，将免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合，制备杂交瘤细胞，用ELISA法和单克隆化等方法，最后筛选到9株单克隆细胞株，并测定了其ELISA结合曲线和ED50值。

(一)材料和仪器

1. 小鼠：BalB/c

2.骨髓瘤细胞：SP2/0(ATCC)

3.免疫原：PAP-GM-CSF蛋白（上海惠盾生物技术有限公司，1mg/ml）

4. 细胞生长培养基：1640+10%FBS(Gibco)+OPI Media Supplement(Sigma)

5.检测抗体：M-HRP-anti-mouse IgG

6.细胞融合仪：BTX公司ECM 2001多功能细胞融合仪

(二)动物免疫方法

1. 小鼠淋巴结免疫：采用腹股沟淋巴结注射方式，将PAP-GM-CSF按50μg/只进行淋巴结注射，每二周一次，共免疫三次，最后一次取尾静脉血，测定滴度，滴度在1:10万以上进行杂交瘤制备。

2. 杂交瘤细胞制备：用ECM2001多功能细胞融合仪制备杂交瘤细胞

(三)ELISA检测方法(间接法)

1.PAP-GM-CSF以PBS稀释至1μg/ml，100μl/孔包被，4℃，过夜；

2.PBST洗板1次，200μl/孔3%BSA-PBS，封闭，37℃，1小时；

3. PBST洗板1次；

4. 以1%BSA-PBS稀释各个抗体至1μg/ml，5倍比稀释共8各个梯度，100μl/孔加入，37℃，1小时；

5. PBST洗板3次；

6. 以1%BSA-PBS稀释抗小鼠IgG二抗，100μl/孔加入，37℃，1小时；

7. PBST洗板5次；

8. TMB显色，OD值=OD450-OD630

(四)结果：

筛选到生长状态最佳和滴度最高的杂交瘤细胞株9株，其ELISA结合曲线见图2。

进一步地，将上述9株杂交瘤细胞与PAP-GM-CSF亲和力进行比较，结果如图3，可以看出1号细胞株产生的PAP抗体与PAP-GM-CSF蛋白亲和力最佳，于是选取此细胞株作为制备PAP抗体的细胞株。

实施例2：本发明所述PAP抗体制备

实验方法：

经实施例1得到的高表达抗PAP抗体的细胞株，于是通过复苏培养、转接，最终获得高表达抗PAP抗体的培养上清。

离心收集细胞培养上清，使用缓冲液A(20mM PBS，pH 7.0)调节pH，上样至已经用缓冲液A平衡的亲和层析柱上。上样结束后使用缓冲液A冲洗柱子至A280值及电导回到基线，采用100%缓冲液B（20mM柠檬酸，pH 2.7）一步洗脱，监测洗脱液A280值，收集洗脱组分即为抗PAP-GM-CSF抗体初步纯化产物。

使用缓冲液C（10mM柠檬酸，pH 5.5）将初步纯化产物的pH调至5.0-6.0，上样至已经平衡的阳离子交换层析柱上，之后线性增加NaCl浓度直至40%洗脱，收集最大的洗脱组分即为抗PAP抗体。

实验结果：

SDS-PAGE电泳分析纯化得到的PAP抗体，结果如图4，显示两条蛋白条带，分子量约为50kD和25kD，含有典型的重链及轻链结构，其纯度达95%以上。

实施例3：本发明PAP抗体可以特异性结合PAP蛋白

实验方法：

取市售Prostatic Acid Phosphatase(PAP)蛋白和Granulocyte-macrophagecolony-stimulating factor(GM-CSF)蛋白进行SDS-PAGE电泳，将凝胶上的蛋白转印至硝酸纤维素膜上，使用10%脱脂奶粉进行封闭。实施例2中制备的PAP抗体作为一抗孵育硝酸纤维素膜（0.1mg/ml，1:1000稀释）；使用TTBS洗去膜上未结合的一抗后，加入抗小鼠IgG二抗（1mg/ml，1:10000稀释）孵育。孵育结束后，再次用TTBS洗去未结合抗体，加入底物缓冲液显色。

实验结果：

结果如图5所示，膜上可见清晰的PAP蛋白条带，而无GM-CSF条带。说明，抗PAP抗体可识别PAP上的某一位点，与PAP蛋白特异性结合，而无GM-CSF识别位点。

实施例4：采用本发明提供的抗体纯化PAP-GM-CSF

实验方法：

将实施例1中纯化制备得到的PAP抗体交联至NHS-activated Sepharose 4 FastFlow或CNBr-activated Sepharose 4 Fast Flow或CNBr-activated Bestarose4FastFlow或Epoxy-activatedBestarose 6B。

离心收集细胞培养上清，使用缓冲液D(20mM Tris/HCl,pH 8.0)调节pH，上样至已经用缓冲液D平衡的亲和层析柱上。上样结束后使用缓冲液D冲洗柱子至A280值及电导回到基线，采用100%缓冲液E（20 mM柠檬酸，pH 3.0）一步洗脱，监测洗脱液A280值，收集洗脱组分即为PAP-GM-CSF融合蛋白。

实验结果：

从图6可以看出，PAP-GM-CSF可以与PAP抗体有效结合，且在酸性条件下完成解离。将洗脱得到的样品进行电泳分析，纯度可达95%。通过使用本发明提供的抗PAP抗体纯化制备PAP-GM-CSF，可一步得到纯度高达95%的PAP-GM-CSF融合蛋白，如图7所示。

讨论：

免疫亲和层析主要是利用抗原、抗体之间高特异的亲和力特点。将抗体固定于固定相上，当将含有抗原的混合物通过色谱柱时即可被特异性捕获，而其他的物质因不会被捕获而流穿，从而有效地分离出目的蛋白。抗原与抗体结合具有可逆性，即抗原抗体结合形成复合物后，在一定条件下又可解离。解离后的抗原和抗体仍可保持原来的理化特性和生物学活性。PAP-GM-CSF与其抗体在酸性条件下可发生解离。因此，本发明使用的缓冲液E为酸性缓冲液。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表

<110> 上海惠盾因泰生物科技有限公司

<120> 抗前列腺酸性磷酸酶抗体及其用途

<130> P2021-0033

<160> 19

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH

<400> 1

Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Gly Asn Pro Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 2

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH CDR1

<400> 2

Ser Phe Gly Met His

1 5

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH CDR2

<400> 3

Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH CDR3

<400> 4

Gly Asp Gly Asn Pro Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 5

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH FR1

<400> 5

Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser

20 25 30

<210> 6

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH FR2

<400> 6

Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala

1 5 10

<210> 7

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH FR3

<400> 7

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln

1 5 10 15

Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 8

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH FR4

<400> 8

Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 9

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL

<400> 9

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Gly

20 25 30

Ser Asn Gln Lys Asn Cys Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ile Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Phe Ser Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 10

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL CDR1

<400> 10

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Gly Ser Asn Gln Lys Asn Cys Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 11

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL CDR2

<400> 11

Trp Ala Ile Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL CDR3

<400> 12

Gln Gln Tyr Phe Ser Tyr Pro Trp Thr

1 5

<210> 13

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL FR1

<400> 13

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys

20

<210> 14

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL FR2

<400> 14

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 15

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL FR3

<400> 15

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 16

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL FR4

<400> 16

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 17

<211> 417

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VH编码序列

<400> 17

atggactcca ggctcaattt agttttcctt gtccttattt taaaaggtgt ccagtgtgat 60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtcccg gaaactctcc 120

tgtgcagcct ctggattcac tttcagtagc tttggaatgc actgggttcg tcaggctcca 180

gagaaggggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggca gtagtaccat ctactatgca 240

gacacagtga agggccgatt caccatctcc agagacaatc ccaagaacac cctgttcctg 300

caaatgacca gtctaaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcaag aggggatggt 360

aacccttact atggtatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 417

<210> 18

<211> 399

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VL编码序列

<400> 18

atggattcac aggcccaggt tcttatgtta ctgctgctat gggtatctgg tacctgtggg 60

gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 120

atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatggtagca atcaaaagaa ctgcttggcc 180

tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc aatcactagg 240

gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 300

atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttttagctat 360

ccgtggacgt tcggtggagg caccaagctg gaaatcaaa 399

<210> 19

<211> 515

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 融合蛋白PAP-GM-CSF的氨基酸序列

<400> 19

Met Arg Ala Ala Pro Leu Leu Leu Ala Arg Ala Ala Ser Leu Ser Leu

1 5 10 15

Gly Phe Leu Phe Leu Leu Phe Phe Trp Leu Asp Arg Ser Val Leu Ala

20 25 30

Lys Glu Leu Lys Phe Val Thr Leu Val Phe Arg His Gly Asp Arg Ser

35 40 45

Pro Ile Asp Thr Phe Pro Thr Asp Pro Ile Lys Glu Ser Ser Trp Pro

50 55 60

Gln Gly Phe Gly Gln Leu Thr Gln Leu Gly Met Glu Gln His Tyr Glu

65 70 75 80

Leu Gly Glu Tyr Ile Arg Lys Arg Tyr Arg Lys Phe Leu Asn Glu Ser

85 90 95

Tyr Lys His Glu Gln Val Tyr Ile Arg Ser Thr Asp Val Asp Arg Thr

100 105 110

Leu Met Ser Ala Met Thr Asn Leu Ala Ala Leu Phe Pro Pro Glu Gly

115 120 125

Val Ser Ile Trp Asn Pro Ile Leu Leu Trp Gln Pro Ile Pro Val His

130 135 140

Thr Val Pro Leu Ser Glu Asp Gln Leu Leu Tyr Leu Pro Phe Arg Asn

145 150 155 160

Cys Pro Arg Phe Gln Glu Leu Glu Ser Glu Thr Leu Lys Ser Glu Glu

165 170 175

Phe Gln Lys Arg Leu His Pro Tyr Lys Asp Phe Ile Ala Thr Leu Gly

180 185 190

Lys Leu Ser Gly Leu His Gly Gln Asp Leu Phe Gly Ile Trp Ser Lys

195 200 205

Val Tyr Asp Pro Leu Tyr Cys Glu Ser Val His Asn Phe Thr Leu Pro

210 215 220

Ser Trp Ala Thr Glu Asp Thr Met Thr Lys Leu Arg Glu Leu Ser Glu

225 230 235 240

Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Gly Ile His Lys Gln Lys Glu Lys Ser

245 250 255

Arg Leu Gln Gly Gly Val Leu Val Asn Glu Ile Leu Asn His Met Lys

260 265 270

Arg Ala Thr Gln Ile Pro Ser Tyr Lys Lys Leu Ile Met Tyr Ser Ala

275 280 285

His Asp Thr Thr Val Ser Gly Leu Gln Met Ala Leu Asp Val Tyr Asn

290 295 300

Gly Leu Leu Pro Pro Tyr Ala Ser Cys His Leu Thr Glu Leu Tyr Phe

305 310 315 320

Glu Lys Gly Glu Tyr Phe Val Glu Met Tyr Tyr Arg Asn Glu Thr Gln

325 330 335

His Glu Pro Tyr Pro Leu Met Leu Pro Gly Cys Ser Pro Ser Cys Pro

340 345 350

Leu Glu Arg Phe Ala Glu Leu Val Gly Pro Val Ile Pro Gln Asp Trp

355 360 365

Ser Thr Glu Cys Met Thr Thr Asn Ser His Gln Gly Thr Glu Asp Ser

370 375 380

Thr Asp Gly Ser Ala Pro Ala Arg Ser Pro Ser Pro Ser Thr Gln Pro

385 390 395 400

Trp Glu His Val Asn Ala Ile Gln Glu Ala Arg Arg Leu Leu Asn Leu

405 410 415

Ser Arg Asp Thr Ala Ala Glu Met Asn Glu Thr Val Glu Val Ile Ser

420 425 430

Glu Met Phe Asp Leu Gln Glu Pro Thr Cys Leu Gln Thr Arg Leu Glu

435 440 445

Leu Tyr Lys Gln Gly Leu Arg Gly Ser Leu Thr Lys Leu Lys Gly Pro

450 455 460

Leu Thr Met Met Ala Ser His Tyr Lys Gln His Cys Pro Pro Thr Pro

465 470 475 480

Glu Thr Ser Cys Ala Thr Gln Ile Ile Thr Phe Glu Ser Phe Lys Glu

485 490 495

Asn Leu Lys Asp Phe Leu Leu Val Ile Pro Phe Asp Cys Trp Glu Pro

500 505 510

Val Gln Glu

515

Claims (10)

1.一种抗前列腺酸性磷酸酶抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区具有如下所示的互补决定区CDR：

SEQ ID NO: 2所示的VH-CDR1、SEQ ID NO: 3所示的VH-CDR2，和SEQ ID NO: 4所示的VH-CDR3；

所述抗体的轻链可变区具有如下所示的互补决定区CDR：

SEQ ID NO: 10所示的VL-CDR1、SEQ ID NO: 11所示的VL-CDR2，和SEQ ID NO: 12所示的VL-CDR3。

2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO: 1所示。

3.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO: 9所示。

4.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体是部分或全人源化、或全人的单克隆抗体。

5.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：

(i) 如权利要求1所述的抗体；以及

(ii) 任选的协助表达和/或纯化的标签序列。

6.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的抗体，或如权利要求5所述的重组蛋白。

7.一种载体，其特征在于，所述载体含有如权利要求6所述的多核苷酸。

8.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求7所述的载体或基因组中整合有如权利要求6所述的多核苷酸。

9.一种抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物含有：

(a) 抗体部分，所述抗体部分选自下组：如权利要求1所述的抗体、如权利要求5所述的重组蛋白，或其组合；和

(b) 与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、酶、金纳米颗粒或纳米棒、纳米磁粒、病毒外壳蛋白或VLP，或其组合。

10.一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如权利要求1所述的抗体、如权利要求5所述的重组蛋白、如权利要求9所述的抗体偶联物，或其组合，其特征在于，所述活性成分被用于(a)制备前列腺癌的诊断试剂或试剂盒；和/或(b)制备预防和/或治疗前列腺癌的药物。

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