CN114349638A - 一种乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法 - Google Patents
一种乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于物质分离纯化技术领域,提供了一种乙酯型鱼油中欧米伽‑3‑酸乙酯的纯化方法。本发明提供的纯化方法包括以下步骤:将乙酯型鱼油进行顺序式模拟移动床色谱纯化,得到欧米伽‑3‑酸乙酯粗品;将所述欧米伽‑3‑酸乙酯粗品进行超临界流体色谱分离,得到高纯欧米伽‑3‑酸乙酯。本发明的纯化方法,首先利用顺序式模拟移动床色谱对乙酯型鱼油进行纯化,能够除去乙酯型鱼油中的乙酯型DHA,得到欧米伽‑3‑酸乙酯粗品;再利用超临界流体色谱对欧米伽‑3‑酸乙酯粗品进行分离,能够除去二十一碳酸和山嵛酸,得到高纯欧米伽‑3‑酸乙酯。实施例的数据表明:本发明提供的纯化方法所得高纯欧米伽‑3‑酸乙酯的纯度为98~99.5%。
Description
技术领域
本发明涉及物质分离纯化技术领域,尤其涉及一种乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法。
背景技术
20世纪60年代,对格陵兰岛的爱斯基摩人调查发现,大量食入海产动物使得当地5年内无人死于心肌梗塞,也无人死于心脏局部缺血。后对爱斯基摩人的血液分析发现,血液中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)含量远高于其他地区,这些EPA和DHA来源于食物-鱼油。进一步研究发现EPA和DHA属于ω-3型多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)。ω-3型多不饱和脂肪酸是人体不可合成的必需脂肪酸,具有独特的生理和保健功能,可以预防高血脂和动脉粥样硬化、中风,减少心血管疾病的发生。最近几年的研究发现ω-3型多不饱和脂肪酸还可以抑制肿瘤、减慢哮喘病的发展和增强免疫力。
高纯度欧米伽-3-酸乙酯(EPA-EE)可以作为原材料,应用于医药领域。欧米伽-3-酸乙酯软胶囊主要和低脂饮食一起用于降低高甘油三酯血症。美国Amarin公司研制的用于治疗高甘油三酯血症和血脂异常症的药物,就是采用高纯度大于96%的二十碳五烯酸乙酯,目前已经进入三期临床,将成为美国唯一治疗高甘油三酯血症和血脂异常症的欧米伽-3-酸乙酯处方药。
高纯度欧米伽-3-酸乙酯主要通过纯化乙酯型鱼油得到,传统的乙酯型鱼油纯化方法包括低温结晶法,低温结晶法是利用物质在溶剂中的溶解度不同而实现纯化的方法,该方法操作简单,设备投入小,但得到的欧米伽-3-酸乙酯纯度非常低,无法实现高纯欧米伽-3-酸乙酯的纯化。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法。本发明提供的纯化方法能够获得高纯度欧米伽-3-酸乙酯。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法,包括以下步骤:
将乙酯型鱼油进行顺序式模拟移动床色谱纯化,得到欧米伽-3-酸乙酯粗品;
将所述欧米伽-3-酸乙酯粗品进行超临界流体色谱分离,得到高纯欧米伽-3-酸乙酯。
优选地,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的参数包括:所述顺序式模拟移动床色谱含有6根色谱柱;每根色谱柱含有1个进料口,1个流动相口,1个萃取口和1个萃余口;所述色谱柱的填料独立地包括C4~C30烷基硅胶。
优选地,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的参数还包括:流动相为体积浓度为94%的甲醇溶液,所述流动相的流速为12mL/min。
优选地,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的过程包括:
所述乙酯型鱼油通过进料口进入第1号色谱柱,流动相通过流动相口进入第1号色谱柱,进行第一萃取,得到第一萃取液和第一萃余液;
所述第一萃取液通过进料口进入第2号色谱柱,流动相通过流动相口进入第2号色谱柱,进行第二萃取,得到第二萃取液和第二萃余液;
所述第二萃取液通过进料口进入第3号色谱柱,流动相通过流动相口进入第3号色谱柱,进行第三萃取,得到第三萃取液和第三萃余液;
所述第三萃取液通过进料口进入第4号色谱柱,流动相通过流动相口进入第4号色谱柱,进行第四萃取,得到第四萃取液和第四萃余液;
所述第四萃取液通过进料口进入第5号色谱柱,流动相通过流动相口进入第5号色谱柱,进行第五萃取,得到第五萃取液和第五萃余液;
所述第五萃取液通过进料口进入第6号色谱柱,流动相通过流动相口进入第6号色谱柱,进行第六萃取,得到第六萃取液和第六萃余液;
所述第六萃取液依次重复第一萃取~第六萃取的过程;所述第6号色谱柱得到的萃取液作为欧米伽-3-酸乙酯粗品。
优选地,所述超临界流体色谱分离的参数包括:流动相体系包括流动相A和流动相B;所述流动相A为超临界二氧化碳,所述流动相B为低级醇;所述流动相A和流动相B的体积比为(100~97):(0~3)。
优选地,所述低级醇包括甲醇或乙醇。
优选地,所述超临界流体色谱分离的参数还包括:色谱柱的固定相为NuciferaC18或者聚合物填料时,所述聚合物填料包括Nucifera聚合物。
优选地,所述色谱柱的固定相为Nucifera C18时,梯度洗脱程序为:
0min:流动相A的体积分数为97%,流动相B的体积分数为3%;
0~15min:流动相A的体积分数维持97%。
优选地,所述色谱柱的固定相为Nucifera聚合物时,梯度洗脱程序为:
0min:流动相A的体积分数为97%,流动相B的体积分数为3%;
0~15min:流动相A的体积分数维持97%。
优选地,所述色谱柱的固定相为Nucifera聚合物时,梯度洗脱程序为:
0min:流动相A的体积分数为100%;
0~30min:流动相A的体积分数维持100%。
本发明提供了一种乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法,包括以下步骤:将乙酯型鱼油进行顺序式模拟移动床色谱纯化,得到欧米伽-3-酸乙酯粗品;将所述欧米伽-3-酸乙酯粗品进行超临界流体色谱分离,得到高纯欧米伽-3-酸乙酯。本发明提供的纯化方法首先利用顺序式模拟移动床色谱对乙酯型鱼油进行纯化,能够除去乙酯型鱼油中的乙酯型DHA,得到欧米伽-3-酸乙酯粗品;再利用超临界流体色谱对欧米伽-3-酸乙酯粗品进行分离,能够除去二十一碳酸和山嵛酸,得到高纯欧米伽-3-酸乙酯。实施例的数据表明:本发明提供的纯化方法得到的高纯欧米伽-3-酸乙酯的纯度为98~99.5%。
附图说明
图1为实施例1中乙酯型鱼油的分离谱图;
图2为实施例2中乙酯型鱼油的分离谱图;
图3为实施例3中乙酯型鱼油的分离谱图;
图4为实施例4中乙酯型鱼油的分离谱图;
图5为实施例5中乙酯型鱼油的分离谱图;
图6为实施例5得到的高纯EPA-EE的气相检测谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法,包括以下步骤:
将乙酯型鱼油进行顺序式模拟移动床色谱纯化,得到欧米伽-3-酸乙酯粗品;
将所述欧米伽-3-酸乙酯粗品进行超临界流体色谱分离,得到高纯欧米伽-3-酸乙酯。
在本发明中,如无特殊说明,本发明所用原料均优选为市售产品。
本发明将乙酯型鱼油进行顺序式模拟移动床色谱纯化,得到欧米伽-3-酸乙酯粗品。
在本发明中,所述乙酯型鱼油优选为市售产品。
在本发明中,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的参数包括:所述顺序式模拟移动床色谱优选含有6根色谱柱;每根色谱柱优选含有1个进料口,1个流动相口,1个萃取口和1个萃余口。在本发明中,所述色谱柱的固定相优选独立地包括C4~C30烷基硅胶,进一步优选为C18烷基硅胶。
在本发明中,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的参数优选还包括:所述色谱柱的尺寸优选包括20mm×250mm。
在本发明中,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的参数优选还包括:流动相优选为体积浓度为94%的甲醇溶液;所述流动相的流速优选为12mL/min。
在本发明中,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的过程优选包括:
所述乙酯型鱼油通过进料口进入第1号色谱柱,流动相通过流动相口进入第1号色谱柱,进行第一萃取,得到第一萃取液和第一萃余液;
所述第一萃取液通过进料口进入第2号色谱柱,流动相通过流动相口进入第2号色谱柱,进行第二萃取,得到第二萃取液和第二萃余液;
所述第二萃取液通过进料口进入第3号色谱柱,流动相通过流动相口进入第3号色谱柱,进行第三萃取,得到第三萃取液和第三萃余液;
所述第三萃取液通过进料口进入第4号色谱柱,流动相通过流动相口进入第4号色谱柱,进行第四萃取,得到第四萃取液和第四萃余液;
所述第四萃取液通过进料口进入第5号色谱柱,流动相通过流动相口进入第5号色谱柱,进行第五萃取,得到第五萃取液和第五萃余液;
所述第五萃取液通过进料口进入第6号色谱柱,流动相通过流动相口进入第6号色谱柱,进行第六萃取,得到第六萃取液和第六萃余液;
所述第六萃取液依次重复第一萃取~第六萃取的过程;所述第6号色谱柱得到的萃取液作为欧米伽-3-酸乙酯粗品。
在本发明中,所述顺序式模拟移动床色谱的设备优选江苏汉邦科技有限公司SSMB001002型。
本发明利用顺序式模拟移动床色谱对乙酯型鱼油进行纯化,能够除去乙酯型鱼油中的乙酯型DHA,得到欧米伽-3-酸乙酯粗品。
得到欧米伽-3-酸乙酯粗品后,本发明将所述欧米伽-3-酸乙酯粗品进行超临界流体色谱分离,得到高纯欧米伽-3-酸乙酯。
在本发明中,所述超临界流体色谱分离的参数包括:流动相体系优选包括流动相A和流动相B;所述流动相A优选为超临界二氧化碳,所述流动相B优选为低级醇;所述低级醇优选包括甲醇或乙醇,进一步优选为乙醇。在本发明中,所述流动相体系中流动相A和流动相B的体积比优选为(100~97):(0~3)。
在本发明中,所述超临界流体色谱分离的参数还包括:色谱柱的固定相优选包括Nucifera C18或者聚合物填料;所述聚合物填料优选包括Nucifera聚合物。
在本发明中,所述色谱柱的固定相为Nucifera C18时,梯度洗脱程序优选为:
0min:流动相A的体积分数为97%,流动相B的体积分数为3%;
0~15min:流动相A的体积分数维持97%。
在本发明中,所述色谱柱的固定相为Nucifera聚合物时,梯度洗脱程序优选为:
0min:流动相A的体积分数为97%,流动相B的体积分数为3%;
0~15min:流动相A的体积分数维持97%。
在本发明中,所述色谱柱的固定相为Nucifera聚合物时,梯度洗脱程序优选为:
0min:流动相A的体积分数为100%;
0~30min:流动相A的体积分数维持100%。
在本发明中,所述超临界流体色谱分离的参数还包括:色谱柱的温度优选为30~35℃,进一步优选为30℃。
在本发明中,所述色谱柱的规格优选包括4.6×250mm或10×250mm。在本发明中,当所述色谱柱的规格优选为4.6×250mm时,所述流动相体系的流速优选为3mL/min。在本发明中,当所述色谱柱的规格优选为10×250mm时,所述流动相体系的流速优选为10mL/min。
在本发明中,所述超临界流体色谱分离的参数还包括:进样体积优选为1~100μL;背压力优选为12MPa。
在本发明中,所述超临界流体色谱分离的参数还包括:检测器优选为UV检测器;所述UV检测器的检测波长优选为210nm。
在本发明中,超临界流体色谱能够除去欧米伽-3-酸乙酯粗品中的乙酯型DHA,得到高纯欧米伽-3-酸乙酯。
下面结合实施例对本发明提供的乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
以下实施例采用的顺序式模拟移动床色谱设备为江苏汉邦科技有限公司SSMB001002型,含有6根色谱柱,色谱柱的固定相为C18烷基硅胶;色谱柱的尺寸为20mm×250mm,最大流速50mL/min柱塞泵4台,阀门采用气动放大气动球阀。
超临界流体色谱仪为江苏汉邦科技有限公司超临界流体色谱仪SFC-Lab20。
上机样品的制备方法包括:
量取1体积鱼油和6体积无水乙醇加入反应釜,在反应釜中搅拌加热至75℃;然后加入0.8mol/L的氢氧化钠至体系pH值为10~12,搅拌加热2h进行酯化反应,得到的酯化反应料液静置2h,除去底部甘油,将上层用0.5wt%的氯化钠水溶液洗三次,去除水层,得到乙酯型鱼油;
将乙酯型鱼油使用体积浓度为94%的甲醇溶液稀释10倍,得到上机样品。
实施例1
顺序式模拟移动床色谱的流动相为体积浓度为94%的甲醇溶液,流动相的流速为12mL/min。
双进双出:上机样品经进料口、流动相经流动相口进入第1号色谱柱,第1号色谱柱下端作为萃余口间歇式收集富含DHA-EE鱼油,切换时长为5min。
内循环:系统不进不出,第1号色谱柱到第6号色谱柱串联运行,液体由第1号色谱柱到第6号色谱柱移动,然后由第6色谱号柱下端进入到第1号色谱柱上端,循环运行,切换时长为12min。
收集萃取液:由第2号柱进入流动相,第6号柱下端作为萃取口间歇式收集EPA-EE粗品,切换时长1.5min。
第1号色谱柱运行结束后,按照顺序重复以上三步,并各进出口由第1号色谱柱至第6号色谱柱方向依次移动至下一柱。
以后按照此程序循环运行,在第6号色谱柱萃取口收集萃取液得到EPA-EE粗品;所述EPA-EE粗品的纯度为90.3%,收率98%。
超临界流体色谱:色谱柱规格为4.6×250mm,流动相体系的流速为3mL/min,背压设定为12MPa,进样体积为2μL,紫外检测器的检测波长为210nm。
表1为实施例1使用超临界流体色谱(SFC)分离的条件。
表1实施例1中SFC分离条件
所得分离效果如图1所示,从图1可以看出:其中保留时间为2.74min,对应的物质为EPA-EE,EPA-EE的纯度为98%。
实施例2
顺序式模拟移动床色谱的流动相为体积浓度为94%的甲醇溶液,流动相的流速为12mL/min。
双进双出:上机样品经进料口、流动相经流动相口进入第1号色谱柱,第1号色谱柱下端作为萃余口间歇式收集富含DHA-EE鱼油,切换时长为6min。
内循环:系统不进不出,第1号色谱柱到第6号色谱柱串联运行,液体由第1号色谱柱到第6号色谱柱移动,然后由第6色谱号柱下端进入到第1号色谱柱上端,循环运行,切换时长为10min。
收集萃取液:由第2号柱进入流动相,第6号柱下端作为萃取口间歇式收集EPA-EE粗品,切换时长3.5min。
第1号色谱柱运行结束后,按照顺序重复以上三步,并各进出口由第1号色谱柱至第6色谱号柱方向依次移动至下一柱。
以后按照此程序循环运行,在第6号色谱柱萃取口收集萃取液得到EPA-EE粗品;所述EPA-EE粗品的纯度为94.2%,收率97%。
超临界流体色谱:色谱柱规格为4.6×250mm,流动相流速为3mL/min,背压设定为12MPa,进样体积为2μL,检测波长为210nm。
表2为实施例2的超临界流体色谱(SFC)分离的条件。
表2实施例2中SFC分离条件
所得分离效果图如图2所示,从图2可以看出:其中保留时间为4.99min,对应的物质为EPA-EE,EPA-EE的纯度为98%。
实施例3
顺序式模拟移动床色谱的流动相为体积浓度为94%的甲醇溶液,流动相的流速为12mL/min。
双进双出:上机样品经进料口、流动相经流动相口进入第1号色谱柱,第1号色谱柱下端作为萃余口间歇式收集富含DHA-EE鱼油,切换时长为3min。
内循环:系统不进不出,第1号色谱柱到第6号色谱柱串联运行,液体由第1号色谱柱到第6号色谱柱移动,然后由第6色谱号柱下端进入到第1号色谱柱上端,循环运行,切换时长为15min。
收集萃取液:由第2号柱进入流动相,第6号柱下端作为萃取口间歇式收集EPA-EE粗品,切换时长2.5min。
第1号色谱柱运行结束后,按照顺序重复以上三步,并各进出口由第1号色谱柱至第6号色谱柱方向依次移动至下一柱。
以后按照此程序循环运行,在第6号色谱柱萃取口收集萃取液得到EPA-EE粗品;所述EPA-EE粗品的纯度为95.1%,收率97%。
超临界流体色谱:色谱柱规格为4.6×250mm,流动相体系的流速为3mL/min,背压设定12MPa,进样体积为2μL,检测波长为210nm。
表3为实施例3的超临界流体色谱(SFC)分离的条件。
表3实施例3中SFC分离条件
所得分离效果图如图3所示,从图3可以看出:其中保留时间为5min,对应的物质为EPA-EE,EPA-EE的纯度为98%。
实施例4
顺序式模拟移动床色谱的流动相为体积浓度为94%的甲醇溶液,流动相的流速为12mL/min。
双进双出:上机样品经进料口、流动相经流动相口进入第1号色谱柱,第1号色谱柱下端作为萃余口间歇式收集富含DHA-EE鱼油,切换时长为4min。
第二步:内循环,流速12mL/min,系统不进不出,第1号柱到第6号柱串联运行,液体由第1号柱到第6号柱移动,然后又第6号柱下端进入到第1号柱上端,循环运行,切换时长为11min。
第三步:收集萃取液:由第2号柱进入流动相,第6号柱下端作为萃取口间歇式收集EPA-EE粗品,流速12mL/min,切换时长1.3min。
1号柱运行结束后,按照顺序重复以上三步,并各进出口由第1号柱至第6号柱方向依次移动至下一柱。
以后按照此程序循环运行。
采用顺序式模拟移动方法纯化得到的EPA-EE组分纯度为92.3%,收率99%。
超临界流体色谱:色谱柱规格为10×250mm,流动相体系的流速为10mL/min,背压设定为12MPa,进样体积为2μL,检测波长为210nm。
表4为实施例4的超临界流体色谱(SFC)分离的条件。
表4实施例4中SFC分离条件
所得分离效果图如图4所示,从图4可以看出:其中保留时间为22.52min,对应的物质为EPA-EE,EPA-EE的纯度为98%。
实施例5
顺序式模拟移动床色谱的流动相为体积浓度为94%的甲醇溶液,流动相的流速为12mL/min。
双进双出:上机样品经进料口、流动相经流动相口进入第1号色谱柱,第1号色谱柱下端作为萃余口间歇式收集富含DHA-EE鱼油,切换时长为7min。
内循环:系统不进不出,第1号色谱柱到第6号色谱柱串联运行,液体由第1号色谱柱到第6号色谱柱移动,然后由第6色谱号柱下端进入到第1号色谱柱上端,循环运行,切换时长为14min。
收集萃取液:由第2号柱进入流动相,第6号柱下端作为萃取口间歇式收集EPA-EE粗品,切换时长2.5min。
第1号色谱柱运行结束后,按照顺序重复以上三步,并各进出口由第1号色谱柱至第6号色谱柱方向依次移动至下一柱。
以后按照此程序循环运行,在第6号色谱柱萃取口收集萃取液得到EPA-EE粗品;所述EPA-EE粗品的纯度为93.3%,收率96%。
超临界流体色谱:色谱柱规格为10×250mm,流动相体系的流速为10mL/min,背压设定为12MPa,进样体积为50μL,检测波长为210nm。
表5为实施例5的超临界流体色谱(SFC)分离的条件。
表5实施例5中SFC分离条件
所得分离效果其分离效果图如图5所示,从图5可以看出:其中红框中对应的物质为EPA-EE。对所得EPA-EE进行气相色谱检测,结果如图6所示,从图6可以看出:EPA-EE的纯度为99%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种乙酯型鱼油中欧米伽-3-酸乙酯的纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:
将乙酯型鱼油进行顺序式模拟移动床色谱纯化,得到欧米伽-3-酸乙酯粗品;
将所述欧米伽-3-酸乙酯粗品进行超临界流体色谱分离,得到高纯欧米伽-3-酸乙酯。
2.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的参数包括:所述顺序式模拟移动床色谱含有6根色谱柱;每根色谱柱含有1个进料口,1个流动相口,1个萃取口和1个萃余口;所述色谱柱的填料独立地包括C4~C30烷基硅胶。
3.根据权利要求2所述的纯化方法,其特征在于,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的参数还包括:流动相为体积浓度为94%的甲醇溶液,所述流动相的流速为12mL/min。
4.根据权利要求2或3所述的纯化方法,其特征在于,所述顺序式模拟移动床色谱纯化的过程包括:
所述乙酯型鱼油通过进料口进入第1号色谱柱,流动相通过流动相口进入第1号色谱柱,进行第一萃取,得到第一萃取液和第一萃余液;
所述第一萃取液通过进料口进入第2号色谱柱,流动相通过流动相口进入第2号色谱柱,进行第二萃取,得到第二萃取液和第二萃余液;
所述第二萃取液通过进料口进入第3号色谱柱,流动相通过流动相口进入第3号色谱柱,进行第三萃取,得到第三萃取液和第三萃余液;
所述第三萃取液通过进料口进入第4号色谱柱,流动相通过流动相口进入第4号色谱柱,进行第四萃取,得到第四萃取液和第四萃余液;
所述第四萃取液通过进料口进入第5号色谱柱,流动相通过流动相口进入第5号色谱柱,进行第五萃取,得到第五萃取液和第五萃余液;
所述第五萃取液通过进料口进入第6号色谱柱,流动相通过流动相口进入第6号色谱柱,进行第六萃取,得到第六萃取液和第六萃余液;
所述第六萃取液依次重复第一萃取~第六萃取的过程;所述第6号色谱柱得到的萃取液作为欧米伽-3-酸乙酯粗品。
5.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述超临界流体色谱分离的参数包括:流动相体系包括流动相A和流动相B;所述流动相A为超临界二氧化碳,所述流动相B为低级醇;所述流动相A和流动相B的体积比为(100~97):(0~3)。
6.根据权利要求5所述的纯化方法,其特征在于,所述低级醇包括甲醇或乙醇。
7.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述超临界流体色谱分离的参数还包括:色谱柱的固定相为Nucifera C18或者聚合物填料;所述聚合物填料包括Nucifera聚合物。
8.根据权利要求7所述的纯化方法,其特征在于,所述色谱柱的固定相为Nucifera C18时,梯度洗脱程序为:
0min:流动相A的体积分数为97%,流动相B的体积分数为3%;
0~15min:流动相A的体积分数维持97%。
9.根据权利要求7所述的纯化方法,其特征在于,所述色谱柱的固定相为Nucifera聚合物时,梯度洗脱程序为:
0min:流动相A的体积分数为97%,流动相B的体积分数为3%;
0~15min:流动相A的体积分数维持97%。
10.根据权利要求7所述的纯化方法,其特征在于,所述色谱柱的固定相为Nucifera聚合物时,梯度洗脱程序为:
0min:流动相A的体积分数为100%;
0~30min:流动相A的体积分数维持100%。
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