CN114324518B

CN114324518B - 一种微电极及芦丁与槲皮素的检测方法和应用

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Publication number: CN114324518B
Application number: CN202111499228.6A
Authority: CN
Inventors: 秦俊青; 李爱学; 王成; 王晓冬; 董宏图; 张晗; 高权; 陈泉; 康凯; 黄硕
Original assignee: Intelligent Equipment Technology Research Center of Beijing Academy of Agricultural and Forestry Sciences
Current assignee: Intelligent Equipment Technology Research Center of Beijing Academy of Agricultural and Forestry Sciences
Priority date: 2021-12-09
Filing date: 2021-12-09
Publication date: 2024-02-06
Anticipated expiration: 2041-12-09
Also published as: CN114324518A

Abstract

本发明提供一种微电极及芦丁与槲皮素的检测方法和应用，该微电极由微电极前体经钯金双金属、聚苯乙烯磺酸钠和还原氧化石墨烯修饰得到；所述微电极前体包括工作电极、对电极和参比电极；所述工作电极为刻孔碳纤维电极。本发明弥补了现有技术中复杂的样品前处理、只能体外检测等缺陷，本发明还首次制备了刻孔碳纤维微电极，并应用于活体检测。

Description

一种微电极及芦丁与槲皮素的检测方法和应用

技术领域

本发明涉及生物传感器技术领域，尤其涉及一种微电极及芦丁与槲皮素的检测方法和应用。

背景技术

黄酮醇类化合物是植物体内次生代谢的产物。而芦丁与槲皮素是分布最广的黄酮醇类化合物，在植物体内起着相当重要的作用。当黄酮醇与花青素苷的比例发生改变时，可使花朵及果实的颜色改变。另一方面，黄酮醇参与植物激素的调控。

目前，植物中的芦丁与槲皮素的测定方法主要是依赖于液相色谱、毛细管电泳法、光度法等。这些方法样品前处理复杂，分析仪器昂贵，待测样品需要离体，尤其是对珍贵的植物损坏过大；传统的方法只能获得静态的浓度数据，提取纯化等步骤复杂周期较长，不利于研究黄酮醇类化合物这类活性成分在植物激素调控机制。电化学技术活体检测技术，可实现田间现场检测，操作简单，检测限低。活体检测不仅使珍贵样品免于受损，而且随时随地得到植物应对环境、栽培技术等真实的反应，动态检测植物体内的芦丁与槲皮素浓度，对于帮助完善植物分子机制研究具有重要意义。目前对于提供一种基于生物传感技术的原位实时监测植物中的芦丁与槲皮素的检测方法是本领域亟待解决的重要课题。

发明内容

本发明提供一种微电极及芦丁与槲皮素的检测方法和应用，本发明弥补了现有技术中复杂的样品前处理、只能体外检测等缺陷，本发明还首次制备了刻孔碳纤维微电极，并应用于活体检测。

本发明提供一种微电极，所述微电极由微电极前体经钯金双金属、聚苯乙烯磺酸钠和还原氧化石墨烯修饰得到；所述微电极前体包括工作电极、对电极和参比电极；所述工作电极为刻孔碳纤维电极。本发明中，首次提出刻孔碳纤维作为衍生材料，具有纳米孔，提高电化学性能，增加比表面积，在生物传感技术方面具有巨大潜力。本发明提供的微电极由微电极前体经钯金双金属、聚苯乙烯磺酸钠和还原氧化石墨烯修饰，实现了植物如波姬红A132无花果中芦丁、槲皮素的检测，相对于其他传统的检测手段，本发明的微电极不会对植物造成实质性损伤，并且具有响应信号快速，检测限低。

根据本发明提供的微电极，所述工作电极包括刻孔碳纤维和铜丝，所述刻孔碳纤维与铜丝通过导电凝胶连接；优选的，所述工作电极的总长度为3～7cm优选5cm，所述刻孔碳纤维的长度为5～10mm优选8mm。

根据本发明提供的微电极，所述对电极为铂对电极，所述参比电极为Ag/AgCl参比电极；和/或，所述微电极还包括聚四氟乙烯管和环氧树脂。

本发明中，传感器通过采用上述具有多孔的刻孔碳纤维的结构及钯金双金属纳米粒子结构的微电极，增加了电极比表面积，具有更优的电催化与放大电流的性能，解决了碳纤维电极的刻孔技术，提供了钯金双金属新的制备工艺，实现了结构十分相似的植物小分子-槲皮素与芦丁在植物体内实时监测能够更好的进行槲皮素与芦丁在植物中的活体监测。

本发明还提供所述微电极的制备方法，包括：

1)刻孔碳纤维的制备，对碳纤维清洗、干燥，进行金属盐刻蚀处理，干燥；然后进行高温热处理、退火处理，再进行酸处理，过滤、干燥，得到刻孔碳纤维；

2)电极的组装，将所述刻孔碳纤维与铜丝连接作为工作电极，将铂丝与铜丝粘连作为对电极，将Ag/AgCl与铜丝连接作为参比电极，将工作电极、对电极和参比电极穿入聚四氟乙烯管中，得到微电极前体；

3)PSS-rGO/PCF电极的制备，将GO纳米片在水中进行超声处理，加入PSS进行超声处理，得到PSS-GO；将所述PSS-GO与PBS混合，进行超声处理，得到PSS-GO分散液；在所述PSS-GO分散液中对所述微电极前体进行电沉积，得到PSS-rGO/PCF电极；

4)PdAu/PSS-rGO/PCF电极的制备，以PdCl₂、HAuCl₄·3H₂O和HCl为电解质，对所述PSS-rGO/PCF电极进行电沉积。

根据本发明提供的微电极的制备方法，步骤1)中，将碳纤维依次用酒精、超纯水超声2～8min，真空干燥15～30min，采用硝酸镍溶液对所述碳纤维浸泡20～40min，然后真空干燥20～24h；然后在氩气气氛下，在400～600℃温度下保温60～80min，然后退火1～1.5h，冷却后取出；然后浸入稀盐酸中处理50～72h，过滤，冷冻干燥20～24h，得到刻孔碳纤维；优选的，步骤2)中，用导电银胶分别将所述刻孔碳纤维与铜丝粘连作为工作电极、将铂丝与铜丝粘连作为对电极、将Ag/AgCl丝与铜丝粘连作为参比电极，真空干燥18～24h，将工作电极、对电极和参比电极穿入聚四氟乙烯管中；使用环氧树脂填充空隙，得到微电极前体；优选的，步骤3)中，PSS-rGO/PCF电极的制备，将GO纳米片在水中进行超声处理1～2h，得到悬浮液，再加入PSS，超声处理1～2h优选1h，离心洗涤，得到PSS-GO；将所述PSS-GO加入PBS中，超声处理1～2h优选1h，得到PSS-GO分散液；采用循环伏安法在所述PSS-GO分散液中对所述微电极前体进行电沉积，得到PSS-rGO/PCF电极；优选的，步骤4)中，以0.001M PdCl₂、0.001M HAuCl₄·3H₂O和0.1M HCl为电解质，采用0.05V/s扫描速率，在-0.35V～+1.4V之间利用循环伏安法，连续循环15～45圈，用超纯水冲洗，用氮气吹干，得到所述微电极。

本发明所提供的刻孔碳纤维通过采用上述步骤1)工艺能够在碳纤维上形成许多孔，尤其在优选条件下得到的碳纤维微电极多孔结构，进一步提高其电催化性能，进行槲皮素与芦丁的活体监测效果更佳。

根据本发明提供的微电极的制备方法，步骤1)中，所述碳纤维的直径6μm，长度8mm，所述硝酸镍溶液的浓度为0.1M，所述稀盐酸的浓度为0.2M；和/或，步骤2)中，所述铜丝的直径为0.1mm，长度为4cm，所述聚四氟乙烯管的内径为5mm，长度为3cm，工作电极、对电极和参比电极的铜丝端在聚四氟乙烯管外暴露长度1cm，工作电极、对电极和参比电极的另一端在聚四氟乙烯管外暴露长度8mm；和/或，步骤3)中，所述GO纳米片与所述PSS的质量比为1:8～12优选1:10，所述悬浮液的浓度为0.8～1.5mg·mL^-1优选1mg·mL^-1，所述PSS-GO与所述PBS的质量体积比为1mg：0.5～2mL优选1mg：1mL，所述PBS的浓度为0.05～0.5M优选0.1M，所述PSS-GO分散液的浓度为0.5～2mg/mL优选1mg/mL；所述电沉积的电压范围设置在0～1V，扫速0.1V/s，电沉积70～75圈。

本发明中，PSS与还原氧化石墨烯复合膜一步制备法通过采用上述循环伏安电沉积法参数，电沉积法修饰到刻孔碳纤维电极得到的微电极进一步提高电子传输能力，能够更好的槲皮素与芦丁的活体监测。

本发明还提供一种芦丁与槲皮素的检测方法，采用所述微电极或所述的微电极制备方法得到的微电极对目标植物进行电化学分析，得出芦丁和槲皮素的浓度；优选的，包括：用标准浓度的芦丁、槲皮素溶液对碳纤维微电极和系统进行校正；将所述碳纤维微电极置于目标植物的待测部位，连接电化学工作站，通过电流-时间法得到工作曲线；得出目标植物待测部位的芦丁和槲皮素的浓度。

根据本发明提供的芦丁与槲皮素的检测方法，检测芦丁的工作电压为0.6V，检测槲皮素的工作电压为0.48V。

根据本发明提供的芦丁与槲皮素的检测方法，所述目标植物选自农作物、中草药、花卉和蔬菜中的一种或多种，优选为无花果；和/或，对所述目标植物的根、茎、叶和果实中的一种或多种进行检测；和/或，对不同生长时期和/或不同生长环境的所述目标植物进行检测；和/或，所述目标植物的被检测部位无离体和微创性损伤。

本发明还提供所述的微电极或所述的微电极制备方法得到的微电极在在线分析植物体内芦丁与槲皮素的动态实时浓度中的应用。

本发明的有益效果至少在于：本发明实现了植物如波姬红A132无花果中芦丁与槲皮素两种植物小分子的检测，相对于其他传统的检测手段，本发明的微电极不会对植物造成实质性损伤，实现了对植株的原位实时监测，并且具有响应信号快速，检测限低。本发明另一方面提供的制备刻孔碳纤维的方法，使碳纤维微电极具有的多孔结构，提高了电催化性能，更好地进行槲皮素与芦丁的活体监测。

附图说明

为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例中微电极的结构示意图；

图2为本发明实施例中微电极的结构示意图；

图3为本发明实施例中刻孔碳纤维修饰示意图；

图4为本发明实施例中0.7μmol/L槲皮素的电流-时间曲线；

图5为本发明实施例中0.1μmol/L芦丁的电流-时间曲线。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用仪器等未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。所述方法如无特别说明均为常规方法，所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径而得。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。

本发明实施例中，所用Ag/AgCl丝、GO纳米片等原料均为本领域常用材料；PdAu/PSS-rGO/PCF电极是指钯金/聚苯乙烯磺酸钠-还原氧化石墨烯/刻孔碳纤维微电极，PSS指聚苯乙烯磺酸钠，rGO指还原氧化石墨烯，PCF指刻孔碳纤维。

本发明实施例中，选择波姬红A132无花果作为实验材料，以芦丁、槲皮素作为研究对象。使用瑞士万通Autolab电化学工作站、自制微电极，通过电化学分析技术对波姬红A132无花果中的芦丁、槲皮素进行原位实时监测。

实施例1

本实施例提供一种钯金/聚苯乙烯磺酸钠-还原氧化石墨烯/刻孔碳纤维微电极(PdAu/PSS-rGO/PCF电极)，如图1-2所示，包括：三电极：PdAu/PSS/rGO/PCF工作电极、铂对电极、Ag/AgCl参比电极，聚四氟乙烯管和环氧树脂；三电极中包含导电银胶和铜丝。如图3所示，微电极的制备包括碳纤维的刻孔、聚苯乙烯磺酸钠功能化的还原氧化石墨烯修饰、钯金粒子修饰。

本实施例还提供上述PdAu/PSS-rGO/PCF电极的制备，包括：

1)刻孔碳纤维(PCF)的制备

碳纤维(直径6μm，长度8mm)依次用酒精、超纯水超声5min清洗干净后，在真空干燥箱干燥15～30min，取一定量的0.1M的金属盐刻蚀剂-硝酸镍溶液浸泡碳纤维20～40min后，将混合溶液放入冷冻干燥箱，真空干燥20～24h。将样品取出置于管式炉中，氩气作为保护气体，温度慢慢升至400～600℃，保持此温度60～80min，然后进行退火1～1.5h，待管式炉温度恢复至室温取出，将Ni/CF浸入稀盐酸(0.2M)50～72h，过滤后冷冻干燥20～24h，得到刻孔碳纤维。

2)电极的组装

用导电银胶分别将刻孔碳纤维与一根铜丝(直径0.1mm，长度4cm)粘连作为工作电极、铂丝与一根铜丝(直径0.1mm，长度4cm)粘连作为对电极、Ag/AgCl丝与一根铜丝(直径0.1mm，长度4cm)粘连作为参比电极。在真空干燥箱烘干18～24h，三根电极全部穿入聚四氟乙烯管(内径5mm，长度3cm)中，使微电极在外暴露出8±1mm的长度。再使用环氧树脂填充聚四氟乙烯管与电极的空隙，即得到微电极。

3)聚苯乙烯磺酸钠-还原氧化石墨烯/刻孔碳纤维微电极(PSS-rGO/PCF电极)的制备

将0.2g GO纳米片在超纯水中，超声处理1～2小时使其充分分散，得到1mg·mL^-1的黑色悬浮液，再加入2g PSS，超声处理1h，离心洗涤，得到的黑色固体即为PSS-GO。5mg PSS-GO加入5mL 0.1M PBS(pH7)中超声1h，得到1mg/mL均匀的PSS-GO分散液。由自制的CF电极、Ag/AgCl参比电极、铂电极构成的体系，利用循环伏安法，电压范围设置在0V～1V，扫速0.1V/s，电沉积70-75圈，得到PSS-rGO/PCF电极。

4)PdAu/PSS-rGO/PCF电极的制备

将上述得到的PSS-rGO/PCF电极，以PdCl₂(0.001M)、HAuCl₄·3H₂O(0.001M)及0.1MHCl为电解质，采用0.05V/s扫描速率，在-0.35V～+1.4V之间利用循环伏安法，连续循环15～45圈，用超纯水冲洗，用氮气吹干待用，制备出PdAu/PSS-rGO/PCF电极。

本实施例1还提供一种利用碳纤维微电极生物传感器技术检测波姬红A132无花果样品中芦丁与槲皮素的含量，包括：

(1)待测物为波姬红A132无花果果实，将微电极插入无花果内，开始进行电化学测试。

(2)标准曲线的绘制：用0.1M(pH3.8)的PB缓冲溶液配制标准溶液。芦丁标准溶液浓度分别为：0.001、0.003、0.005、0.007、0.009、0.01、0.03、0.05、0.07、0.09、0.1μmol/L，槲皮素标准溶液浓度分别为：0.01、0.03、0.05、0.07、0.09、0.1、0.3、0.5、0.7μmol/L。选择电流-时间法，芦丁与槲皮素分别进行测试，时间设置为600s，芦丁的工作电压恒定在0.6V，槲皮素的工作电压恒定在0.48V。分别得到芦丁、槲皮素电流与时间的关系曲线，由此制作芦丁、槲皮素关于电流与浓度的标准曲线。如图4和图5分别为0.7μmol/L槲皮素的电流-时间曲线和0.1μmol/L芦丁的电流-时间曲线。

(3)活体在线检测：连接电化学工作站，利用自制的碳纤维微电极，首先检测六份标准溶液(0.004、0.02、0.04μmol/L芦丁，与0.04、0.08、0.2μmol/L槲皮素)进行电化学校准，计算的工作曲线与标准曲线斜率在15％以内(认为电极能正常工作)，校正后先在0.1MPB缓冲溶液中连续扫DPV曲线20次稳定后，将微电极随机插入无花果果实内，进行电流-时间扫描(芦丁的电位为0.6V，槲皮素电压为0.48V，静止时间20s)，获得的电流信号通过校正后的工作曲线，计算出样品的实时浓度。

对比例1

本对比例采用常规高效液相色谱法(HPLC)检测，流动相:100％甲醇:0.2％甲酸＝55∶45，C18(Agilent Poroshell 120EC-C18柱,250mm×4.6mm,孔径4μm)色谱柱。选择相同部位的无花果先后进行实施例1中电化学法(微电极)与对比例1中液相色谱分析方法，分析结果对比见表1。

表1实施例1与对比例1测试结果对比

结果表明，采用本发明提供的传感器进行测试更可靠。实施例1芦丁的工作曲线：I(μA)＝0.0328C(μM)+0.01075R²＝0.99，检测限(LOD，S/N＝3)为0.03μM；槲皮素的工作曲线：I(μA)＝0.00369C(μM)+0.0023R²＝0.98，检测限(LOD，S/N＝3)为0.0032μM。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims

1.一种微电极的制备方法，其特征在于，包括：

1）刻孔碳纤维的制备，对碳纤维清洗、干燥，进行金属盐刻蚀处理，干燥；然后进行高温热处理、退火处理，再进行酸处理，过滤、干燥，得到刻孔碳纤维；

2）电极的组装，将所述刻孔碳纤维与铜丝连接作为工作电极，将铂丝与铜丝粘连作为对电极，将Ag/AgCl与铜丝连接作为参比电极，将工作电极、对电极和参比电极穿入聚四氟乙烯管中，得到微电极前体；

3）PSS-rGO/PCF电极的制备，将GO纳米片在水中进行超声处理，加入PSS进行超声处理，得到PSS-GO；将所述PSS-GO与PBS混合，进行超声处理，得到PSS-GO分散液；在所述PSS-GO分散液中对所述微电极前体进行电沉积，得到PSS-rGO/PCF电极；

4）PdAu/PSS-rGO/PCF电极的制备，以PdCl₂、HAuCl₄·3H₂O和HCl为电解质，对所述PSS-rGO/PCF电极进行电沉积。

2.根据权利要求1所述的微电极的制备方法，其特征在于，所述工作电极包括刻孔碳纤维和铜丝，所述刻孔碳纤维与铜丝通过导电凝胶连接；所述工作电极的总长度为3~7 cm，所述刻孔碳纤维的长度为5~10 mm。

3.根据权利要求2所述的微电极的制备方法，其特征在于，所述工作电极的总长度为5cm，所述刻孔碳纤维的长度为8mm。

4.根据权利要求1所述的微电极的制备方法，其特征在于，所述对电极为铂对电极，所述参比电极为Ag/AgCl参比电极；和/或，所述微电极还包括聚四氟乙烯管和环氧树脂。

5.根据权利要求4所述微电极的制备方法，其特征在于，

步骤1）中，将碳纤维依次用酒精、超纯水超声2~8min，真空干燥15~30min，采用硝酸镍溶液对所述碳纤维浸泡20~40min，然后真空干燥20~24h；然后在氩气气氛下，在400~600 °C温度下保温60~80min，然后退火1~1.5h，冷却后取出；然后浸入稀盐酸中处理50~72h，过滤，冷冻干燥20~24h，得到刻孔碳纤维；和/或

步骤2）中，用导电银胶分别将所述刻孔碳纤维与铜丝粘连作为工作电极、将铂丝与铜丝粘连作为对电极、将Ag/AgCl丝与铜丝粘连作为参比电极，真空干燥18~24h，将工作电极、对电极和参比电极穿入聚四氟乙烯管中；使用环氧树脂填充空隙，得到微电极前体；和/或

步骤3）中，PSS-rGO/PCF电极的制备，将GO纳米片在水中进行超声处理1~2h，得到悬浮液，再加入PSS，超声处理1~2 h，离心洗涤，得到PSS-GO；将所述PSS-GO加入PBS中，超声处理1~2 h，得到PSS-GO分散液；采用循环伏安法在所述PSS-GO分散液中对所述微电极前体进行电沉积，得到PSS-rGO/PCF电极；和/或

步骤4）中，以0.001 M PdCl₂、0.001 M HAuCl₄·3H₂O和0.1 M HCl为电解质，采用0.05V/s扫描速率，在-0.35 V~+1.4 V之间利用循环伏安法，连续循环15~45圈，用超纯水冲洗，用氮气吹干，得到所述微电极。

6.根据权利要求5所述微电极的制备方法，其特征在于，步骤3）中，PSS-rGO/PCF电极的制备，将GO纳米片在水中进行超声处理1~2h，得到悬浮液，再加入PSS，超声处理1 h，离心洗涤，得到PSS-GO；将所述PSS-GO加入PBS中，超声处理1 h，得到PSS-GO分散液；采用循环伏安法在所述PSS-GO分散液中对所述微电极前体进行电沉积，得到PSS-rGO/PCF电极。

7.根据权利要求5所述微电极的制备方法，其特征在于，步骤1）中，所述碳纤维的直径6μm，长度8mm，所述硝酸镍溶液的浓度为0.1M，所述稀盐酸的浓度为0.2M；和/或，步骤2）中，所述铜丝的直径为0.1mm，长度为4cm，所述聚四氟乙烯管的内径为5mm，长度为3cm，工作电极、对电极和参比电极的铜丝端在聚四氟乙烯管外暴露长度1cm，工作电极、对电极和参比电极的另一端在聚四氟乙烯管外暴露长度8mm；和/或，步骤3）中，所述GO纳米片与所述PSS的质量比为1:8~12，所述悬浮液的浓度为0.8~1.5mg·mL^-1，所述PSS-GO与所述PBS的质量体积比为1mg：0.5~2mL，所述PBS的浓度为0.05~0.5M，所述PSS-GO分散液的浓度为0.5~2 mg/mL；所述电沉积的电压范围设置在0~1 V，扫速0.1V/s，电沉积70~75圈。

8.根据权利要求7所述微电极的制备方法，其特征在于，步骤3）中，所述GO纳米片与所述PSS的质量比为1:10，所述悬浮液的浓度为1 mg·mL^-1，所述PSS-GO与所述PBS的质量体积比为1mg：1mL，所述PBS的浓度为0.1M，所述PSS-GO分散液的浓度为1 mg/mL；所述电沉积的电压范围设置在0~1 V，扫速0.1V/s，电沉积70~75圈。

9.一种芦丁与槲皮素的检测方法，其特征在于，采用权利要求1~8任一项所述的微电极的制备方法得到的微电极对目标植物进行电化学分析，得出芦丁和槲皮素的浓度。

10.根据权利要求9所述的芦丁与槲皮素的检测方法，其特征在于，包括：用标准浓度的芦丁、槲皮素溶液对微电极和系统进行校正；将所述微电极置于目标植物的待测部位，连接电化学工作站，通过电流-时间法得到工作曲线；得出目标植物待测部位的芦丁和槲皮素的浓度。

11.根据权利要求10所述的芦丁与槲皮素的检测方法，其特征在于，检测芦丁的工作电压为0.6V，检测槲皮素的工作电压为0.48V。

12.根据权利要求9~11任一项所述的芦丁与槲皮素的检测方法，其特征在于，所述目标植物选自农作物、中草药、花卉和蔬菜中的一种或多种；和/或，对所述目标植物的根、茎、叶和果实中的一种或多种进行检测；和/或，对不同生长时期和/或不同生长环境的所述目标植物进行检测；和/或，所述目标植物的被检测部位无离体和微创性损伤。

13.根据权利要求12所述的芦丁与槲皮素的检测方法，其特征在于，所述目标植物为无花果。

14.权利要求1~8任一项所述的微电极的制备方法得到的微电极在线分析植物体内芦丁与槲皮素的动态实时浓度中的应用。