CN114324201A - 基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，该方法包括先制备BNQDs/CeO2纳米酶，然后利用核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶，将其分别加入到多个含有不同浓度抗生素的醋酸钠‑醋酸缓冲液样品中孵育，加入H2O2和显色底物3,3',5,5'‑四甲基联苯胺进行反应，记录反应后各样品在652nm波长处的吸光度值A，得到抗生素浓度与吸光度值A的检测线性关系，根据检测线性关系以及含抗生素的待测样品的吸光度值，得到待测样品中抗生素的浓度。该比色检测方法具有操作简单迅速、成本低、灵敏度高、特异性强、抗干扰能力强、检测范围宽、检测限低等优点。
Description
技术领域
本发明属于生物传感技术领域，涉及一种抗生素的比色检测方法，具体涉及一种基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法。
背景技术
抗生素是一类具有抗菌活性的药物，由于滥用引起抗生素耐药性的增加引起人们的重视。卡那霉素(KAN)作为一种广谱抗生素，因其成本低、抗菌性强，被广泛应用于畜牧业和水产养殖业，但其对人体具有毒性和严重副作用。目前测定KAN的方法包括：高效液相色谱、液相色谱-质谱联用或酶联免疫分析法等等，这些方法中存在仪器设备复杂、操作繁琐、检测成本较高或检测周期长等问题。因此，迫切需要开发一种简单、高灵敏度和高选择性的方法来定量检测环境中的卡那霉素。
基于纳米酶的比色分析由于其简单、成本效益、可视化以及现场应用等优点引起了人们广泛的关注。而纳米酶是一种具有类酶特性的纳米材料，成本低、制备简便、稳定性高。尤其是具有类过氧化物酶活性的纳米酶，包括重金属、金属氧化物、碳材料等，可以在H2O2存在下催化一些显色底物氧化，如3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)等，并且它们已经被用于开发一些比色生物传感器。但是，获得高催化活性以及高底物选择性的纳米酶仍然是一个挑战，这极大限制了它们的广泛应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种操作简单迅速、成本低、灵敏度高、特异性强的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，该方法具有抗干扰能力强、检测范围宽、检测限低等优点。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案。
一种基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，包括以下步骤：
(1)BNQDs/CeO2纳米酶的制备：
(1.1)将硝酸铈、氢氧化钠和水混合并搅拌，在80℃～100℃下进行水热反应，得到CeO2纳米棒前驱体；
(1.2)将CeO2纳米棒前驱体重新分散到水中，然后加入氮化硼量子点的水溶液，经搅拌，得到混合溶液；
(1.3)将上述所得混合溶液于150℃～180℃下进行水热反应，得到氮化硼量子点负载的多孔CeO2纳米棒，即BNQDs/CeO2纳米酶；
(2)利用核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶：将上述所得BNQDs/CeO2纳米酶加入醋酸钠-醋酸缓冲液中，然后将核酸适配体加入含有BNQDs/CeO2纳米酶的醋酸钠-醋酸缓冲液中进行混合孵育，得到核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶；
(3)将上述所得核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶分别加入到多个含有不同浓度抗生素的醋酸钠-醋酸缓冲液样品中进行孵育，然后加入H2O2和显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺进行反应，得到混合体系，记录反应后各样品在652nm波长处的吸光度值A，得到抗生素浓度与吸光度值A的检测线性关系；
(4)根据上述所得抗生素浓度与吸光度值A的检测线性关系以及含抗生素的待测样品的吸光度值，得到待测样品中抗生素的浓度。
上述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，优选的，步骤(3)中，当核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶加入到不含抗生素的醋酸钠-醋酸缓冲液样品中进行孵育，然后加入H2O2和显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺进行反应，得到混合体系时，混合体系呈深蓝色，步骤(4)中，当加入含抗生素的待测样品时，混合体系蓝色变浅，由此定性检测待测样品中是否含有抗生素。
上述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，优选的，所述抗生素为卡那霉素，所述核酸适配体具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述卡那霉素浓度与吸光度值A的检测线性回归方程为：
A＝-0.15lg CKAN+1.09 (1)
式(1)中，A表示吸光度值，CKAN为待测溶液中卡那霉素的浓度值，该浓度值对应的单位为nM，式(1)的相关系数R2＝0.995，卡那霉素的检测线性范围为0.01nM～100nM，检测限为4.6pM。
所述核酸适配体的核苷酸序列SEQ ID No.1具体为：
TGGGG GTTGA GGCTA AGCCG A
上述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，优选的，步骤(1.1)中，所述硝酸铈与氢氧化钠的质量比为1∶10～15，所述搅拌的时间为1h～2h。
上述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，优选的，步骤(1.2)中，所述氮化硼量子点与CeO2纳米棒前驱体的质量比为1∶20～30，所述氮化硼量子点的水溶液中，氮化硼量子点的浓度为0.1mg/mL～0.5mg/mL，所述搅拌的时间为2h～4h。
上述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，优选的，步骤(2)中，所述核酸适配体在醋酸钠-醋酸缓冲液中的浓度为0.5μM～1μM，所述混合孵育是在室温下孵育0.5h～1h。
上述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，优选的，步骤(3)中，所述孵育是在室温下孵育1h～2h，所述反应是在室温下反应10min～30min，所述混合体系中，所述核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶的浓度为50μg/mL～100μg/mL，所述H2O2的浓度为5mM～50mM，所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.05mM～2mM。
上述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，优选的，步骤(2)和步骤(3)中，所述醋酸钠-醋酸缓冲液的浓度为0.1M～0.2M。
上述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，优选的，步骤(3)中的所述混合体系与步骤(4)中的所述含抗生素的待测样品pH值控制在4。
本发明中，单位M指mol/L。
本发明中，硝酸铈、氢氧化钠在水中的浓度不做限定，溶解于水中即可。
本发明中，氮化硼量子点可根据文献方法制备得到，例如，One-Step Synthesisof Fluorescent Boron Nitride Quantum Dots via a Hydrothermal Strategy UsingMelamine as Nitrogen Source for the Detection of Ferric Ions.AppliedCatalysis B:Environmental 245(2019)87–99。
本发明中，醋酸钠-醋酸缓冲液主要由醋酸钠与醋酸按照一定比例配制而成，优选醋酸钠与醋酸的摩尔浓度比为1∶5～6，但不限于此，该醋酸钠-醋酸缓冲液也可商购。
本发明的检测原理主要在于：本发明制备的BNQDs/CeO2纳米酶表现出优异的类过氧化物酶活性，能够在H2O2存在下催化TMB氧化显色为蓝色。申请人发现，利用核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶提高其对目标物的选择性，核酸适配体的吸附能够显著增强BNQDs/CeO2纳米酶的催化活性，表现为产生一个更深的蓝色，并且使吸光度明显增强。在抗生素(如卡那霉素)存在时，由于核酸适配体与抗生素的亲和性更高，从而使适配体脱离BNQDs/CeO2纳米酶的表面，导致一个减弱的颜色信号，并且随着抗生素浓度增加而减弱。基于核酸适配体调控酶催化活性策略，从而实现达到比色检测抗生素的目的。本发明中，核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶能够显著增强其类过氧化物酶活性，提高了检测的灵敏度。本发明的比色传感策略具有简单、响应迅速、抗干扰能力强、检测范围宽以及检测限低等优点，可实现对水体和动物源性食品中的痕量污染物抗生素的特异性检测，利用率高，且有着很好的使用价值和应用前景。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明提供了一种基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，申请人发现，CeO2由于其具有Ce3+/Ce4+的可逆氧化状态和丰富的氧空位，赋予了其具有多种类酶活性的性质，采用多孔棒状的CeO2表现出更高的催化能力，而氮化硼量子点(BNQDs)具有独特的量子效应和尺寸效应、高分散性和化学稳定性，耦合BNQDs与多孔CeO2纳米棒将是一种经济的方法得到高催化活性的纳米酶。BNQDs/CeO2纳米酶具有大的比表面积和丰富的催化位点，同时BNQDs和CeO2的协同效应促进了其高的催化活性。另外，BNQDs/CeO2纳米酶制备方法具有制备工艺简单、成本低、稳定性高、环境友好等优点，适合于大规模制备。本发明中，BNQDs/CeO2纳米酶表现出优异的类过氧化物酶活性，远远高于天然辣根过氧化物酶以及其他贵金属修饰CeO2的纳米材料，并且对底物的亲和性比天然辣根过氧化物酶更高，可以作为有潜力的天然酶替代者。BNQDs/CeO2纳米酶能够在H2O2存在下催化TMB氧化显色，可应用于比色检测。
核酸适配体作为生物识别元件，容易合成和修饰，对目标物具有高的特异性和亲和性。本发明中，利用核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶可明显提高对抗生素的特异性，解决了纳米酶选择性差的问题。另外，核酸适配体与BNQDs/CeO2纳米酶结合，无需要对核酸适配体进行标记，仅仅通过与CeO2的配位作用以及物理吸附作用，降低了合成核酸适配体的成本以及繁琐的材料修饰步骤。
本发明中，核酸适配体的引入显著增强了BNQDs/CeO2纳米酶的催化活性，由于核酸适配体对显色底物TMB的静电作用以及TMB与适配体碱基的π-π共轭与氢键作用，增加了纳米酶对显色底物的亲和性，从而提高了BNQDs/CeO2纳米酶催化TMB氧化的能力，产生更深的颜色，提高比色检测的灵敏度。另外，核酸适配体对于目标物的亲和性更高，能够在目标物存在时，适配体从BNQDs/CeO2纳米酶表面脱落，从而影响BNQDs/CeO2纳米酶的催化活性，使颜色信号发生变化，实现目标物的定性检测。
本发明基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法具有简单、低成本、可视化和现场应用等优点，通过在比色传感体系中加入不同浓度的抗生素，建立抗生素浓度与吸光度值的检测线性关系，根据该检测线性回归方程计算待测溶液中抗生素的浓度。该比色检测方法能够检测动物尿液、污水和动物源性食品中的抗生素，具有检测灵敏度高、检测范围宽、检测限低、抗干扰能力强的优势。
附图说明
图1为本发明实施例1中制备的BNQDs/CeO2纳米酶的透射电镜图。
图2为本发明实施例1制备的BNQDs/CeO2纳米酶以及核酸适配体功能化后的BNQDs/CeO2纳米酶活性的UV-vis图。其中，a为H2O2与TMB溶液的UV-vis吸收曲线(TMB-H2O2)，b为BNQDs/CeO2纳米酶加入到H2O2与TMB溶液的UV-vis吸收曲线(TMB-H2O2-BNQDs/CeO2)，c为核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶加入到H2O2与TMB溶液的UV-vis吸收曲线(TMB-H2O2-BNQDs/CeO2@Apt)。
图3为本发明实施例1中不同浓度卡那霉素与吸光度值变化的检测线性回归图。
图4为采用实施例1制备的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法检测不同抗生素时对应的吸光度图，其中，A为卡那霉素，B为卡那霉素与链霉素，C为卡那霉素与妥布霉素，D为卡那霉素与氯霉素，E为卡那霉素与氧氟沙星，F为卡那霉素与土霉素。
图5为本发明实施例1制备的核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶的稳定性评估图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。以下实施例中，若无特别说明，所采用的原料和仪器均为市售。
实施例1
一种本发明的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，包括以下步骤：
(1)BNQDs/CeO2纳米酶的制备：
(1.1)将硝酸铈与氢氧化钠分别溶于水中并混合，搅拌1h，硝酸铈与氢氧化钠的质量比为1∶10，在100℃下进行水热反应，得到CeO2纳米棒前驱体；
(1.2)将制备的CeO2纳米棒前驱体重新分散到水中，随后加入浓度为0.1mg/mL的氮化硼量子点(BNQDs)水溶液，氮化硼量子点与CeO2纳米棒前驱体的质量比为1∶20，持续搅拌2h，得到混合溶液；
(1.3)将步骤(1.2)得到的混合溶液置于反应釜中，于180℃下进行水热反应，得到氮化硼量子点负载的多孔CeO2纳米棒，即BNQDs/CeO2纳米酶。如图1所示，对BNQDs/CeO2纳米酶进行电镜成像分析，其结果表明，BNQDs/CeO2纳米酶呈现纳米棒状，长度大约为60～80nm，直径6～8nm左右，且可以看到有许多的小孔，这些孔将增大其比表面积，提供更多的活性位点，棒上均匀分布的一些黑点为BNQDs。由此说明，BNQDs/CeO2纳米酶制备成功。
(2)利用核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶：将核酸适配体加入含有BNQDs/CeO2纳米酶的醋酸钠-醋酸缓冲液中在室温下混合孵育0.5h，核酸适配体在缓冲液中的浓度为0.5μM。
(3)将步骤(2)得到的核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶分别加入到多个含有不同浓度抗生素的醋酸钠-醋酸缓冲液中，抗生素具体为卡那霉素，卡那霉素的浓度分别为0nM、0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、10nM、30nM和100nM，室温下混合并孵育1h，然后加入H2O2和显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺反应10min，得到混合体系。混合体系中，核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶的浓度为100μg/mL，H2O2的浓度为30mM，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为1Mm，混合体系的pH值控制在4，在该pH值下核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶的活性最强。记录反应后各样品在652nm波长处的吸光度值A，得到卡那霉素浓度与吸光度值A的检测线性关系。
(4)根据上述所得卡那霉素浓度与吸光度值A的检测线性关系以及含卡那霉素的待测样品的吸光度值，优选含卡那霉素的待测样品的pH值控制在4，得到待测样品中卡那霉素的浓度。
本实施例中，核酸适配体具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，具体为：
TGGGG GTTGA GGCTA AGCCG A
本实施例中，步骤(2)和步骤(3)采用的醋酸钠-醋酸缓冲液的浓度均为0.2M，优选pH值为4。
本实施例中，吸光度的测定方法为：将样品放置于紫外可见分光光度计中，测定652nm处的吸光度值。
如图2所示，评估了本实施例中BNQDs/CeO2纳米酶以及核酸适配体功能化后的BNQDs/CeO2纳米酶活性。其结果表明，核酸适配体功能化之后，其活性显著增强，大约为纯BNQDs/CeO2纳米酶的2倍，说明核酸适配体促进了纳米酶与显色底物的反应。
图3为本实施例中不同浓度卡那霉素与吸光度值的检测线性回归图。由图3可知，吸光度值随着卡那霉素浓度的增加而减小，且吸光度值与卡那霉素浓度的对数值呈现良好的线性关系。检测线性回归方程为：
A＝-0.15lg CKAN+1.09 (1)
式(1)中，A表示吸光度值，CKAN为待测溶液中卡那霉素的浓度值，该浓度值对应的单位为nM，式(1)的相关系数R2＝0.995，卡那霉素的检测线性范围为0.01nM～100nM，检测限为4.6pM。
本实施例中，在进行步骤(3)时，当核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶加入到不含卡那霉素的醋酸钠-醋酸缓冲液样品中进行孵育，然后加入H2O2和显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺进行反应，得到混合体系时，混合体系呈深蓝色，在进行步骤(4)时，当加入含卡那霉素的待测样品时，混合体系蓝色变浅，由此可定性检测待测样品中是否含有卡那霉素，且由混合体系蓝色变浅的程度可定性判断卡那霉素的浓度变化趋势。
由此可见，本发明的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法可以用来定性和定量检测卡那霉素，并可根据检测线性回归方程计算待测卡那霉素的浓度。
恢复性实验
评估实施例1的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法的检测精度，采用标准添加法，利用该比色检测方法检测实际样品中的目标物，进行回收率实验。
(1)采用实施例1的比色检测方法分别检测牛奶和废水样品中卡那霉素的浓度，具体步骤为：将不同样品经过滤等预处理后，取上清液用醋酸钠-醋酸缓冲溶液调节pH至4.0，采用实施例1的比色检测方法测定待测溶液中的卡那霉素，测定结果列于表1中。样品中卡那霉素的加入浓度参照表1。
表1待测溶液的回收率验证结果
从表1中可以看出，本发明的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法在可测定的浓度范围内，回收率基本在100.70％～101.22％之间，测定结果理想。相比传统的检测技术，采用本发明的比色检测方法操作简单快速，准确率高。由表1可知，本发明的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法可用于检测实际样品中的卡那霉素，能够获得优异的检测精度。
特异性考察
评估实施例1的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法的抗干扰能力，核酸适配体具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，对应的抗生素为卡那霉素，用实施例1中的比色检测方法对卡那霉素溶液、卡那霉素分别与链霉素、妥布霉素、氯霉素、氧氟沙星和土霉素的混合溶液进行吸光度测定，分别编号为A、B、C、D、E和F，检测结果如图4所示。
图4为本实施例的比色检测方法测定不同抗生素时对应的吸光度图。由图4可知，本发明的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法对卡那霉素具有强的特异性，加入其它干扰抗生素吸光度几乎不发生变化，这说明本发明的比色检测方法具有良好的抗干扰能力。
稳定性考察
评估实施例1的核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶的稳定性，将实施例1的核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶在室温(25℃)以及冰箱(4℃)储存4周，并隔周按照实施例1中的方法测定吸光度，结果如图5所示。由图5可知，储存4周吸光度几乎没有发生明显变化，说明本发明的核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶具有高稳定性。
由上述检测结果表明，本发明的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法具有稳定性高、抗干扰能力强、检测范围宽、检测限低等优点。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。
序列表
<110> 湖南大学
<120> 基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 根据实验要求而设计，以作为核酸适配体的核苷酸序列
<400> 1
tgggggttga ggctaagccg a 21
Claims (9)
1.一种基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)BNQDs/CeO2纳米酶的制备：
(1.1)将硝酸铈、氢氧化钠和水混合并搅拌，在80℃～100℃下进行水热反应，得到CeO2纳米棒前驱体；
(1.2)将CeO2纳米棒前驱体重新分散到水中，然后加入氮化硼量子点的水溶液，经搅拌，得到混合溶液；
(1.3)将上述所得混合溶液于150℃～180℃下进行水热反应，得到氮化硼量子点负载的多孔CeO2纳米棒，即BNQDs/CeO2纳米酶；
(2)利用核酸适配体功能化BNQDs/CeO2纳米酶：将上述所得BNQDs/CeO2纳米酶加入醋酸钠-醋酸缓冲液中，然后将核酸适配体加入含有BNQDs/CeO2纳米酶的醋酸钠-醋酸缓冲液中进行混合孵育，得到核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶；
(3)将上述所得核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶分别加入到多个含有不同浓度抗生素的醋酸钠-醋酸缓冲液样品中进行孵育，然后加入H2O2和显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺进行反应，得到混合体系，记录反应后各样品在652nm波长处的吸光度值A，得到抗生素浓度与吸光度值A的检测线性关系；
(4)根据上述所得抗生素浓度与吸光度值A的检测线性关系以及含抗生素的待测样品的吸光度值，得到待测样品中抗生素的浓度。
2.根据权利要求1所述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，步骤(3)中，当核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶加入到不含抗生素的醋酸钠-醋酸缓冲液样品中进行孵育，然后加入H2O2和显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺进行反应，得到混合体系时，混合体系呈深蓝色，步骤(4)中，当加入含抗生素的待测样品时，混合体系蓝色变浅，由此定性检测待测样品中是否含有抗生素。
3.根据权利要求1所述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，所述抗生素为卡那霉素，所述核酸适配体具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述卡那霉素浓度与吸光度值A的检测线性回归方程为：
A＝-0.15lg CKAN+1.09 (1)
式(1)中，A表示吸光度值，CKAN为待测溶液中卡那霉素的浓度值，该浓度值对应的单位为nM，式(1)的相关系数R2＝0.995，卡那霉素的检测线性范围为0.01nM～100nM，检测限为4.6pM。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，步骤(1.1)中，所述硝酸铈与氢氧化钠的质量比为1∶10～15，所述搅拌的时间为1h～2h。
5.根据权利要求1～3中任一项所述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，步骤(1.2)中，所述氮化硼量子点与CeO2纳米棒前驱体的质量比为1∶20～30，所述氮化硼量子点的水溶液中，氮化硼量子点的浓度为0.1mg/mL～0.5mg/mL，所述搅拌的时间为2h～4h。
6.根据权利要求1～3中任一项所述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述核酸适配体在醋酸钠-醋酸缓冲液中的浓度为0.5μM～1μM，所述混合孵育是在室温下孵育0.5h～1h。
7.根据权利要求1～3中任一项所述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述孵育是在室温下孵育1h～2h，所述反应是在室温下反应10min～30min，所述混合体系中，所述核酸适配体功能化的BNQDs/CeO2纳米酶的浓度为50μg/mL～100μg/mL，所述H2O2的浓度为5mM～50mM，所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.05mM～2mM。
8.根据权利要求1～3中任一项所述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中，所述醋酸钠-醋酸缓冲液的浓度为0.1M～0.2M。
9.根据权利要求1～3中任一项所述的基于核酸适配体调控纳米酶催化活性对抗生素的比色检测方法，其特征在于，步骤(3)中的所述混合体系与步骤(4)中的所述含抗生素的待测样品pH值控制在4。
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