CN114315535A - 一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法。以(1R,3aR,7aR)‑7a‑甲基‑1‑((R)‑6‑甲基‑6‑((三乙基甲硅烷基)氧基)庚烷‑2‑基)八氢‑4氢‑茚‑4‑酮为起始物料，经异构化、对接、脱保护、重结晶等步骤获得高纯度的艾地骨化醇异构体杂质，属于化学及生物制药领域。该杂质可用于对艾地骨化醇成品检测分析过程中杂质的准确定位和定性，有利于加强对该杂质的控制，进而提高艾地骨化醇原料药和制剂的质量。

Description

一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法

技术领域

本发明属于化学及生物制药领域，具体涉及一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法。

背景技术

艾地骨化醇软胶囊是日本厚生省于2011年1月21日批准的骨质疏松症治疗药物。其有效物质艾地骨化醇是继阿法骨化醇后又一新的用于治疗骨质疏松症的活性维生素D3衍生物，作用靶点为维生素D3受体。艾地骨化醇是1a，25-二羟基维生素D3[1，25(OH)2D3]的类似物，在2b位带有羟丙氧基残基。它与维生素D受体(VDR)结合的亲和力较低，但与维生素D结合蛋白结合的亲和力高于1，25(OH)2D，在血浆中显示出较长的半衰期。艾地骨化醇能有效且安全地增加骨质疏松症患者的腰椎和髋骨矿物质密度(BMD)，并且还补充维生素D3。其结构式如式一所示：

艾地骨化醇性质不稳定，对光和热敏感，含有多个手性中心，且合成路线较长，在合成过程中不可避免的容易产生一些异构体杂质及其它有关物质，难以分离纯化，因而合成条件较难把握，合成工艺技术门槛高、难度大。同时，由于艾地骨化醇在制剂中的含量极低，属于低剂量药物，药物本身的理化性质又极其不稳定，因此对原料药和制剂产品的质量控制也提出了更高的要求。

其中，艾地骨化醇的异构体杂质，是成品艾地骨化醇C-14位差向异构体的前体，其结构式如下式1化合物所示，

经检索，尚未有关于该杂质合成的文献报道，因此提供了一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，用于艾地骨化醇杂质对照品的制备，具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种艾地骨化醇异构体杂质的合成方法，该合成方法具有合成路线短，操作简单，收率高，纯度高达98％以上等优点。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的。

本发明提供了一种艾地骨化醇异构体杂质，其结构式如化合物1所示：

优选的，其高效液相纯度大于等于96％，更加优选为大于98％；

本发明还提供了该杂质的用途，具体是利用上述杂质用于艾地骨化醇的有关物质对照品，或者是用于艾地骨化醇的杂质鉴定，在艾地骨化醇原料药和制剂的质量控制中的用途。

本发明还提供了一种制备上述艾地骨化醇异构体杂质的方法，包括以下步骤：

步骤一：异构化反应，即将化合物2与甲醇混合，加入甲醇钠，搅拌溶解后，20～30℃反应，反应时间为10～20h，控制温度至反应完全；反应毕，向反应液中加入水并用乙酸乙酯萃取，有机相经水洗，饱和食盐水洗，柱层析纯化得到无色至淡黄色油状物，即化合物3。

步骤二：对接反应，即反应体系中加入化合物4和无水四氢呋喃，降温至-75～-60℃，滴加正丁基锂/己烷溶液，加毕，保持反应2h，控制温度在-75～-60℃之间加入化合物3的无水四氢呋喃溶液，滴毕升温至0～10℃反应，反应完毕，体系中加水，并加入乙酸乙酯萃取，有机相经水洗，饱和食盐水洗，柱层析纯化得到无色胶状物，即化合物5。

步骤三：脱保护反应，即将化合物5与四丁基氟化铵溶液加入到反应瓶中，升温至60℃反应，3～5h反应完全，浓缩至干，柱层析纯化得到淡黄色固体，即得到化合物1的粗品。

步骤四：重结晶精制，即将化合物1与乙酸乙酯加入到反应瓶中，升温至回流溶清，自然降至室温析晶，抽滤，减压干燥得到白色固体，即化合物1的精制品。

进一步地，化合物2是采用市售的化学品即艾地骨化醇CD环，与羟基保护基试剂三乙基氯硅烷反应所得，其中所述艾地骨化醇CD环的结构式如下所示，CAS号：70550-73-1。

更进一步地，化合物2的制备方法如下：将艾地骨化醇CD环和三乙胺、DMAP溶于二氯甲烷中，降温至-10℃～10℃以下，缓慢加入三乙基氯硅烷，反应结束，抽滤，滤液经过常规处理后，经柱层析纯化，即得到化合物2。

本发明取得的有益的技术效果是：

1、本发明条件易控，路线简单，原料易得，制造成本低；

2、本发明制备的艾地骨化醇异构体杂质可达98％以上纯度，可作为对照品使用，从而提高艾地骨化醇成品检测分析中对杂质的准确性定位和定性，有利于加强对该杂质的控制，进而对艾地骨化醇原料药及其制剂的质量标准的提高以及产品的质量控制提供有益参考，也为同类化合物核磁提供借鉴；

3、经过工艺摸索，我们发现，式2化合物在甲醇钠的作用下，延长反应时间，可以将式2化合物的手性氢逐步由R转化为S，直至转化完全，最后通过柱层析纯化，可以得到满足纯度要求的式3，投入后续反应。并且，此反应只存在于以式2化合物为中间体时才会发生，其他结构反应均不能进行，这与邻位的羰基在碱性条件下会发生烯醇互变有关。

附图说明

图1是本发明艾地骨化醇异构体杂质制备路线。

图2是本发明化合物3的核磁图。

图3是本发明化合物1的核磁图。

具体实施方式

下面结合附图并以具体实施例，进一步阐明本发明。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域的技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

本发明使用的原料化合物2，是市售化学品，其别名是艾地骨化醇CD环，CAS号是70550-73-1，其他原料试剂均市售可得。

本发明要制备的艾地骨化醇异构体杂质，其结构式如1化合物所示：

合成路线如图1所示。

一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，包括以下步骤：

异构化反应：将化合物2与甲醇混合，加入甲醇钠，搅拌溶解，在20～30℃下反应制得化合物3；

对接反应：反应物3中加入化合物4和无水四氢呋喃，降温至-75～-60℃，滴加正丁基锂/己烷溶液，加毕，保持反应2h，控制温度在-75～-60℃之间加入化合物3的无水四氢呋喃溶液，滴毕升温0～10℃反应，制得化合物5；

脱保护反应：将化合物5与四丁基氟化铵溶液在60℃反应完全，浓缩至干，柱层析纯化得到淡黄色固体，即得到化合物1

所述异构化反应时间为10～20h。

所述异构化反应中化合物3的提取：向反应液中加入水并用乙酸乙酯萃取，有机相经水洗，饱和食盐水洗，柱层析纯化得到无色至淡黄色油状物；提取的化合物3用于对接反应。

所述对接反应中化合物5的提取：在反应完毕后，体系中加水，并加入乙酸乙酯萃取，有机相经水洗，饱和食盐水洗，柱层析纯化得到无色胶状物，即为化合物5。

所述脱保护反应时间为3-5h。

化合物1的精制：将化合物1与乙酸乙酯加入到反应瓶中，升温回流至溶清，自然降至室温析晶，抽滤，减压干燥得到白色固体，即化合物1的精制品。

化合物2的制备方法如下：将艾地骨化醇CD环和三乙胺、DMAP溶于二氯甲烷中，降温至-10℃～10℃，缓慢加入三乙基氯硅烷，反应结束，抽滤，滤液经过常规处理后，经柱层析纯化，即得到化合物2。

实施例1化合物3的制备

将化合物2约5g和甲醇50ml加入反应瓶中，分批加入甲醇钠2g，保持20～30℃反应10～20h，反应完毕后，向体系中加入水200ml，并用乙酸乙酯萃取两次，每次200ml，合并有机相，用水100ml、饱和食盐水100ml洗，浓缩至干，100-200目硅胶柱层析纯化，正己烷：乙酸乙酯＝80:1洗脱得到化合物3约4g。图2为化合物3和核磁图。

实施例2化合物5的制备

氮气保护下，反应瓶中加入6.5g化合物4和无水四氢呋喃50ml，搅拌下降温至-75～-60℃，控温滴加正丁基锂/己烷溶液6ml，滴毕保持反应2h，滴加化合物3约4g的无水四氢呋喃15ml溶液。滴毕，0～10℃反应，反应完毕，体系加水200ml淬灭，用乙酸乙酯300ml萃取，收集有机相，加200ml水洗，200ml饱和食盐水洗，浓缩至干，100-200目硅胶柱层析纯化，正己烷：乙酸乙酯＝100:1洗脱得到化合物5约3g。

实施例3式1化合物粗品的制备

将化合物5约3g，加至1M的四丁基氟化铵四氢呋喃溶液50ml中，升温至60℃反应，4h反应完毕，浓缩至干，100-200目硅胶柱层析纯化，二氯甲烷/甲醇＝30:1洗脱得到化合物1约3g。

实施例4式1化合物精制品的制备

将粗品1约500mg与乙酸乙酯20ml加入反应瓶中，升温至回流，滤除不溶物，自然降温至室温析晶，抽滤，减压干燥得到化合物1约300mg，收率：60％。图3为化合物1的核磁图。

实施例5

以艾地骨化醇异构体杂质作为杂质对照品，检查艾地骨化醇原料药中的有关物质，具体包括以下步骤：

1.下列色谱操作适合艾地骨化醇有关物质的含量测定。

2.色谱条件

色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm*250mm，5um)；

柱温：30℃；

流动相：以水/乙腈＝50:50为流动相，进行等度洗脱；

流速：1.0ml/min；

检测波长：265nm；

进样体积：50ul；

稀释剂：乙腈/水＝50:50。

3.供试品溶液

取艾地骨化醇异构体杂质约10mg，精密称量，置于10ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

4.艾地骨化醇有关物质对照品溶液

取艾地骨化醇有关物质对照品约10mg，精密称量，置于50ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1ml，置于100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，作为艾地骨化醇有关物质对照品溶液。

5.操作

取上述稀释剂、艾地骨化醇有关物质对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。按照各色谱图中艾地骨化醇有关物质峰峰面积，以外标法计算其在成品中的含量。

以上所揭示的仅为本发明的较佳实施例，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此，依本发明权利要求所做的等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。

Claims (7)

1.一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

异构化反应：将化合物2与甲醇混合，加入甲醇钠，搅拌溶解，在20～30℃下反应制得化合物3；

对接反应：反应物3中加入化合物4和无水四氢呋喃，降温至-75～-60℃，滴加正丁基锂/己烷溶液，加毕，保持反应2h，控制温度在-75～-60℃之间加入化合物3的无水四氢呋喃溶液，滴毕升温0～10℃反应，制得化合物5；

脱保护反应：将化合物5与四丁基氟化铵溶液在60℃反应完全，浓缩至干，柱层析纯化得到淡黄色固体，即得到化合物1

2.根据权利要求1所述的一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，其特征在于，所述异构化反应时间为10～20h。

3.根据权利要求1所述的一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，其特征在于，所述异构化反应中化合物3的提取：向反应液中加入水并用乙酸乙酯萃取，有机相经水洗，饱和食盐水洗，柱层析纯化得到无色至淡黄色油状物；提取的化合物3用于对接反应。

4.根据权利要求1所述的一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，其特征在于，所述对接反应中化合物5的提取：在反应完毕后，体系中加水，并加入乙酸乙酯萃取，有机相经水洗，饱和食盐水洗，柱层析纯化得到无色胶状物，即为化合物5。

5.根据权利要求1所述的一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，其特征在于，所述脱保护反应时间为3-5h。

6.根据权利要求1所述的一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，其特征在于，所述化合物1的精制：将化合物1与乙酸乙酯加入到反应瓶中，升温回流至溶清，自然降至室温析晶，抽滤，减压干燥得到白色固体，即化合物1的精制品。

7.根据权利要求1所述的一种艾地骨化醇异构体杂质的制备方法，其特征在于，所述化合物2的制备方法如下：将艾地骨化醇CD环和三乙胺、DMAP溶于二氯甲烷中，降温至-10℃～10℃，缓慢加入三乙基氯硅烷，反应结束，抽滤，滤液经过常规处理后，经柱层析纯化，即得到化合物2。

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