CN114306203A - 一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法及应用，包括以下步骤：S1.准备实验室；S2.进行生物多肽的制备；S3.进行干细胞外泌体的制备；S4.将步骤S2和S3中制备得到的生物多肽与干细胞外泌体进行混合的到产品A；S5.将产品A进行称重计量并密封包装；本方法制备的产品A中，干细胞外泌体有效的改善病灶处血液的微循环，重建毛细血管网，减少闭塞血管再狭窄，是修复受损组织的重要原料物质，可滋润肌肤，赋予其平滑的感觉；生物多肽具有安全稳定、易溶于水、易吸收、分子量小等优点，同时具有清除自由基、抗氧化、抗衰老等多种生物活性，不仅能够促进皮肤细胞的增殖，还可以为皮肤提供营养，延缓皮肤老化，且刺激性小，药物副作用更低。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法及应用。
背景技术
当今社会老龄化程度加重以及消费者对年轻美丽的不断追求，随着年龄的增长，机体的骨骼、软组织和皮肤会出现改变，而面部老化首当其中；老化是一个动态而复杂的过程，包括生物功能逐渐减退，对代谢应激的耐受力也逐渐减弱。面部是衰老最初的受累部位，涉及结构、功能和美学层面的改变，甚至伴发各种良性或恶性皮肤病；老化表现有皮肤干燥/透亮，伴香烟纸样皱纹，皮肤弹性部分丧失、松弛，毛囊、汗腺和皮脂腺稀少；抗衰老护肤品和药物在市场中所占的比例也在逐年提升。
目前，现有的皮肤抗衰老化妆品和药物种类繁多，部分为化学成分对人体有一定的损害，消费者对抗衰老化妆品和药物的安全性和有效性有了更严格的要求，部分皮肤受损患者也需要一种安全可靠的修复药剂，传统的食补疗效慢，吸收率低，功效不够显著。为解决上述问题，本申请中提出一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法及应用。
发明内容
(一)发明目的
为解决背景技术中存在的技术问题，本发明提出一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法及应用，本方法制备的产品A中，干细胞外泌体有效的改善病灶处血液的微循环，重建毛细血管网，减少闭塞血管再狭窄，是修复受损组织的重要原料物质，可滋润肌肤，赋予其平滑的感觉；生物多肽具有安全稳定、易溶于水、易吸收、分子量小等优点，同时具有清除自由基、抗氧化、抗衰老等多种生物活性，不仅能够促进皮肤细胞的增殖，还可以为皮肤提供营养，延缓皮肤老化，且刺激性小，药物副作用更低，功效更显著。
(二)技术方案
为解决上述问题，本发明提出了一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法及应用，包括以下步骤：
S1.准备实验室；
S2.进行生物多肽的制备；
S3.进行干细胞外泌体的制备；
S4.将步骤S2和S3中制备得到的生物多肽与干细胞外泌体进行混合的到产品A；
S5.将产品A进行称重计量并密封包装。
优选的，所述步骤S1中，实验室可选用化学实验室或生物实验室中的一种，且实验室的等级至少为P2实验室，所述实验室环境需要恒定范围的温度、湿度以及压差。
优选的，所述步骤S2中，生物多肽的制备步骤：
S21.选取鲜海洋生物、乳清粉、乳粉、康动物的大脑、肝脏、脾脏、鱼粉、或鲜牛乳中的一种作为生物多肽的制备原料；
S22.选取S21中的一种或多种原料进行粉碎和混合，然后进行混料输送；
S23.选取胰蛋白酶、胃蛋白酶和凝乳酶组合作为制备生物多肽的生物酶，并进行酶溶解和输送；
S24.将S22和S23的原料加入恒温振荡器进行酶解，再在50℃恒温振荡器中酶解4-8h，待酶解完成后，升温至95℃，灭酶10min，冷却至室温；
S25.再将原料加入管式离心装置中离心后，进行油相液相固相分离，再进行过滤和脱色；
S26.再通过超滤膜进行超滤，将获得的超滤液冷冻干燥后得到生物多肽干粉，定量封装后低温储存备用。
优选的，所述步骤S3中，干细胞外泌体的制备步骤：
S31.进行干细胞的培养，收取培养后的上清液；
S32.进行外泌体的提取，并经过离心法进行收集。
优选的，所述干细胞的种类可选用胚胎干细胞、诱导性多潜能分化细胞、成肌细胞、问充质干细胞、脂肪干细胞、羊膜干细胞、肌肉干细胞、表皮层干细胞、心脏干细胞、皮肤干细胞、血管内皮祖细胞、神经干细胞或造血干细胞中的一种。
优选的，所述离心法通过使用通过超速离心机以30000-50000r/min超速离心100-200分钟来分离干细胞外泌体，离心温度为1～6℃。
优选的，所述该制备方法所得的产品A在制备皮肤抗老化、抗皱纹和抗凹陷的药物中应用。
本发明的上述技术方案具有如下有益的技术效果：干细胞外泌体在皮肤抗老化、抗皱纹和抗凹陷的药物中应用时，干细胞外泌体时具有多向分化潜能和自我复制能力的原始未分化物质，该外泌体新应用能准确、有效的改善病灶处血液的微循环，促进血管生成，重建毛细血管网，减少闭塞血管再狭窄，是修复受损组织的重要原料物质，可滋润肌肤，赋予其平滑的感觉；生物多肽具有安全稳定、易溶于水、易吸收、分子量小等优点，同时具有清除自由基、抗氧化、抗衰老等多种生物活性，不仅能够促进皮肤细胞的增殖，还可以为皮肤提供营养，延缓皮肤老化，促进皮肤创伤修复，且天然活性成分生物多肽和干细胞外泌体刺激性小，药物副作用更低。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。
实施例一
本发明提出的一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法及应用，包括以下步骤：
S1.准备实验室；
S2.进行生物多肽的制备；
S3.进行干细胞外泌体的制备；
S4.将步骤S2和S3中制备得到的生物多肽与干细胞外泌体进行混合的到产品A；
S5.将产品A进行称重计量并密封包装。
在一个可选的实施例中，所述步骤S1中，实验室可选用化学实验室或生物实验室中的一种，且实验室的等级至少为P2实验室，所述实验室环境需要恒定范围的温度、湿度以及压差。
在一个可选的实施例中，所述步骤S2中，生物多肽的制备步骤：
S21.选取鲜海洋生物、乳清粉、乳粉、康动物的大脑、肝脏、脾脏、鱼粉、或鲜牛乳中的一种作为生物多肽的制备原料；
S22.选取S21中的一种或多种原料进行粉碎和混合，然后进行混料输送；
S23.选取胰蛋白酶、胃蛋白酶和凝乳酶组合作为制备生物多肽的生物酶，并进行酶溶解和输送；
S24.将S22和S23的原料加入恒温振荡器进行酶解，再在50℃恒温振荡器中酶解5h，待酶解完成后，升温至95℃，灭酶10min，冷却至室温；
S25.再将原料加入管式离心装置中离心后，进行油相液相固相分离，再进行过滤和脱色；
S26.再通过超滤膜进行超滤，将获得的超滤液冷冻干燥后得到生物多肽干粉，定量封装后低温储存备用。
在一个可选的实施例中，所述步骤S3中，干细胞外泌体的制备步骤：
S31.进行干细胞的培养，收取培养后的上清液；
S32.进行外泌体的提取，并经过离心法进行收集。
在一个可选的实施例中，所述干细胞的种类可选用胚胎干细胞、诱导性多潜能分化细胞、成肌细胞、问充质干细胞、脂肪干细胞、羊膜干细胞、肌肉干细胞、表皮层干细胞、心脏干细胞、皮肤干细胞、血管内皮祖细胞、神经干细胞或造血干细胞中的一种。
在一个可选的实施例中，所述离心法通过使用通过超速离心机以40000r/min超速离心160分钟来分离干细胞外泌体，离心温度为1℃。
在一个可选的实施例中，所述该制备方法所得的产品A在制备皮肤抗老化、抗皱纹和抗凹陷的药物中应用。
实施例二
本发明提出的一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法及应用，包括以下步骤：
S1.准备实验室；
S2.进行生物多肽的制备；
S3.进行干细胞外泌体的制备；
S4.将步骤S2和S3中制备得到的生物多肽与干细胞外泌体进行混合的到产品A；
S5.将产品A进行称重计量并密封包装。
在一个可选的实施例中，所述步骤S1中，实验室可选用化学实验室或生物实验室中的一种，且实验室的等级至少为P2实验室，所述实验室环境需要恒定范围的温度、湿度以及压差。
在一个可选的实施例中，所述步骤S2中，生物多肽的制备步骤：
S21.选取鲜海洋生物、乳清粉、乳粉、康动物的大脑、肝脏、脾脏、鱼粉、或鲜牛乳中的一种作为生物多肽的制备原料；
S22.选取S21中的一种或多种原料进行粉碎和混合，然后进行混料输送；
S23.选取胰蛋白酶、胃蛋白酶和凝乳酶组合作为制备生物多肽的生物酶，并进行酶溶解和输送；
S24.将S22和S23的原料加入恒温振荡器进行酶解，再在50℃恒温振荡器中酶解4h，待酶解完成后，升温至95℃，灭酶10min，冷却至室温；
S25.再将原料加入管式离心装置中离心后，进行油相液相固相分离，再进行过滤和脱色；
S26.再通过超滤膜进行超滤，将获得的超滤液冷冻干燥后得到生物多肽干粉，定量封装后低温储存备用。
在一个可选的实施例中，所述步骤S3中，干细胞外泌体的制备步骤：
S31.进行干细胞的培养，收取培养后的上清液；
S32.进行外泌体的提取，并经过离心法进行收集。
在一个可选的实施例中，所述干细胞的种类可选用胚胎干细胞、诱导性多潜能分化细胞、成肌细胞、问充质干细胞、脂肪干细胞、羊膜干细胞、肌肉干细胞、表皮层干细胞、心脏干细胞、皮肤干细胞、血管内皮祖细胞、神经干细胞或造血干细胞中的一种。
在一个可选的实施例中，所述离心法通过使用通过超速离心机以30000r/min超速离心120分钟来分离干细胞外泌体，离心温度为3℃。
在一个可选的实施例中，所述该制备方法所得的产品A在制备皮肤抗老化、抗皱纹和抗凹陷的药物中应用。
本方法制备的产品A中，干细胞外泌体在皮肤抗老化、抗皱纹和抗凹陷的药物中应用时，干细胞外泌体时具有多向分化潜能和自我复制能力的原始未分化物质，该外泌体新应用能准确、有效的改善病灶处血液的微循环，促进血管生成，重建毛细血管网，减少闭塞血管再狭窄，是修复受损组织的重要原料物质，可滋润肌肤，赋予其平滑的感觉；生物多肽具有安全稳定、易溶于水、易吸收、分子量小等优点，同时具有清除自由基、抗氧化、抗衰老等多种生物活性，不仅能够促进皮肤细胞的增殖，还可以为皮肤提供营养，延缓皮肤老化，促进皮肤创伤修复，且天然活性成分生物多肽和干细胞外泌体刺激性小，药物副作用更低，功效更显著。
应当理解的是，本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理，而不构成对本发明的限制。因此，在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。此外，本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。
Claims (7)
1.一种生物多肽与干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.准备实验室；
S2.进行生物多肽的制备；
S3.进行干细胞外泌体的制备；
S4.将步骤S2和S3中制备得到的生物多肽与干细胞外泌体进行混合的到产品A；
S5.将产品A进行称重计量并密封包装。
2.根据权利要求1所述的生物多肽与干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，实验室可选用化学实验室或生物实验室中的一种，且实验室的等级至少为P2实验室，所述实验室环境需要恒定范围的温度、湿度以及压差。
3.根据权利要求1所述的生物多肽与干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，生物多肽的制备步骤：
S21.选取鲜海洋生物、乳清粉、乳粉、康动物的大脑、肝脏、脾脏、鱼粉、或鲜牛乳中的一种作为生物多肽的制备原料；
S22.选取S21中的一种或多种原料进行粉碎和混合，然后进行混料输送；
S23.选取胰蛋白酶、胃蛋白酶和凝乳酶组合作为制备生物多肽的生物酶，并进行酶溶解和输送；
S24.将S22和S23的原料加入恒温振荡器进行酶解，再在50℃恒温振荡器中酶解4-8h，待酶解完成后，升温至95℃，灭酶10min，冷却至室温；
S25.再将原料加入管式离心装置中离心后，进行油相液相固相分离，再进行过滤和脱色；
S26.再通过超滤膜进行超滤，将获得的超滤液冷冻干燥后得到生物多肽干粉，定量封装后低温储存备用。
4.根据权利要求1所述的生物多肽与干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，干细胞外泌体的制备步骤：
S31.进行干细胞的培养，收取培养后的上清液；
S32.进行外泌体的提取，并经过离心法进行收集。
5.根据权利要求4所述的生物多肽与干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述干细胞的种类可选用胚胎干细胞、诱导性多潜能分化细胞、成肌细胞、问充质干细胞、脂肪干细胞、羊膜干细胞、肌肉干细胞、表皮层干细胞、心脏干细胞、皮肤干细胞、血管内皮祖细胞、神经干细胞或造血干细胞中的一种。
6.根据权利要求4所述的生物多肽与干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述离心法通过使用通过超速离心机以30000-50000r/min超速离心100-200分钟来分离干细胞外泌体，离心温度为1～6℃。
7.根据权利要求1所述的生物多肽与干细胞外泌体的应用，其特征在于，所述该制备方法所得的产品A在制备皮肤抗老化、抗皱纹和抗凹陷的药物中应用。
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