CN114304511B - 一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用 - Google Patents
一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114304511B CN114304511B CN202111677511.3A CN202111677511A CN114304511B CN 114304511 B CN114304511 B CN 114304511B CN 202111677511 A CN202111677511 A CN 202111677511A CN 114304511 B CN114304511 B CN 114304511B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- natto
- bacillus subtilis
- hau
- weight
- sdz6
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
- Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及微生物及发酵技术领域，具体公开一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用。所述纳豆由沧豆13经枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HAU‑SDZ6发酵得到，枯草芽孢杆菌HAU‑SDZ6的保藏编号为CGMCC NO.24151。本发明所提供的纳豆在低浓度下也可显著减少供试小鼠的脂肪积累，减少小鼠血清中甘油三酯水平和总胆固醇水平，缓解由肥胖引起的炎症反应，即本发明提供的纳豆在低剂量使用时也能发挥较好的降脂抗炎作用，在制备减肥保健食品领域具有较高的应用前景，且可有效降低使用成本，无毒副作用，安全性高，具有较高的市场前景和应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及微生物及发酵技术领域，尤其涉及一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用。
背景技术
肥胖是21世纪医学的一个热门词汇，长时间食用高脂肪饮食和缺乏运动会使能量摄入大于能量消耗，导致脂肪堆积，最终导致肥胖。目前肥胖已经成为全球性的健康问题，肥胖可导致代谢紊乱和并发症，如高血压、Ⅱ型糖尿病和心血管疾病等。摄入过多高脂肪食物会使血液中脂质代谢发生异常，引起高血脂症，同时还会增加患癌风险。而且，肥胖本身也是一种慢性炎性状态，研究发现，肥胖患者血浆中的炎性细胞因子，如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)等浓度升高。脂肪组织不仅是能量储存器官，同时也是重要的内分泌组织，可分泌多种脂肪细胞因子来调节机体的能量平衡，也在与肥胖相关的炎症和代谢紊乱方面具有显著影响。目前，多数减肥药物为化学合成药物，经常因药物引起的副作用而被停用，因此，研究人员尝试开发天然源的减肥产品。
纳豆是蒸煮后的大豆接种枯草芽孢杆菌发酵制成的一种功能性食品。纳豆初为豆豉，起源于我国的秦汉时期，唐朝时由鉴真和尚传至日本的寺庙，由于日本的寺庙又称作“纳所”，故日本人将大豆发酵物起名纳豆。纳豆中含有异黄酮、纳豆激酶、超氧化物歧化酶等多种生理活性物质，还具有溶解血栓、抗癌、降血脂、抗氧化、防治骨质疏松症、预防和缓解更年期综合征等多种生理保健功能。2018年，日本学者发表了发酵大豆对小鼠具有降脂作用的文章，研究表明，在高脂饲料中添加2.5％和5％的纳豆饲喂小鼠，试验干预组的小鼠显著降低了内脏脂肪，抑制脂肪细胞肥大，改善了碳水化合物代谢，降低了氧化应激，并呈剂量依赖性。
虽然目前国内外对纳豆及其生物活性物质的应用非常广泛，但是，目前的纳豆产品需要较高的剂量才能达到更好的降脂效果，因此，成本较高。研发一种可以在低剂量使用且具有较高降脂功效的纳豆或纳豆衍生产品对于扩大纳豆的应用范围具有十分重要的意义。
发明内容
针对现有纳豆产品需要较高的剂量才能达到更好的降脂效果，成本较高的问题，本发明提供一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆，由沧豆13经枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HAU-SDZ6发酵得到，所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的保藏编号为CGMCC NO.24151。
相对于现有技术，本发明所提供的纳豆以沧豆13为原料，经自主筛选的枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6发酵制成，其在低浓度下也可显著减少供试小鼠的脂肪积累，减少小鼠血清中甘油三酯水平和总胆固醇水平，缓解由肥胖引起的炎症反应，也即本发明提供的纳豆在低剂量使用时也能发挥较好的降脂抗炎作用，在制备减肥降脂抗炎保健食品领域具有较高的应用前景，且可有效降低使用成本，无毒副作用，安全性高，具有较高的市场前景和应用价值。
所述沧豆13是沧州市农林科学院2018年育成的丰产、稳产、抗倒、抗病夏大豆新品种，产量3105～3270kg/hm2，抗SC3和SC7，抗倒伏，中熟，子粒商品性好，2018年通过河北省农作物品种审定委员会审定(审定编号：冀审豆20180003)，适宜在河北省中南部夏播区种植。2016年经农业部谷物品质监督检验测试中心测定，沧豆13粗蛋白(干基)含量41.19％，粗脂肪(干基)含量20.92％。
所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6是从自制发酵酸豆汁中分离得到，对该菌株进行分离鉴定，该菌株分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其16S rRNA的基因序列如SEQ ID NO.1，已于2021年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，菌种保藏号为CGMCC No.24151，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
所述自制酸豆汁的制备方法为：
绿豆除去杂质，流洗干净后用清水浸泡至豆粒无硬芯，用手可轻易捻碎为准，以质量体积比1g:8mL的豆水比例加入清水打浆，用滤网将豆渣过滤除去，过滤后的液体沉淀2h～3h，去除底部沉淀的淀粉，将上层的浆水和中层的豆汁转移至新的容器中，32℃发酵1.5天～2.5天，液体有浓郁的酸臭味，除去上层浮沫，得到自制酸豆汁。
本发明中所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的分类学特征为：
革兰氏阳性，接触酶阴性，菌落圆形边缘不整齐，在LB固体培养基上呈白色，菌落直径2.5mm～4.5mm，在LB液体培养基中，菌体为杆状，有单个芽孢，芽孢端生。
在糖发酵方面，能发酵利用葡萄糖、蔗糖、木糖、果糖和麦芽糖，不能发酵利用乳糖、山梨醇、阿拉伯糖、甘露糖和纤维二塘。另外，该菌株过氧化氢酶阳性、V.P.试验阳性，明胶液化阳性，酪蛋白水解酶阳性，硝酸盐还原试验阳性；产吲哚能力阴性、淀粉水解酶阴性、M.R.阴性、亚硝酸盐还原试验阴性、H2S试验阴性。
本发明还提供了上述具有减肥降脂抗炎功效的纳豆的制备方法，包括如下步骤：将培养至对数生长期的枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液接种至蒸熟沧豆13中，39℃～44℃发酵18h～22h，得纳豆。
本发明中上述对数生长期的枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液的OD值为4.0以上。
示例性的，本发明中还可将枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液制成冻干菌粉后用于发酵制备纳豆，冻干菌粉的加入量为大豆质量的0.5％-1.0％。
优选的，所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液的接种量与蒸熟沧豆13的体积质量比为(8～12)mL:100g。
优选的，所述蒸熟沧豆13是由沧豆13与水按照重量体积比为1:2.5～1:3.5在18℃～20℃浸泡12h～14h，然后于115℃～125℃蒸制30min～35min得到的；其中，重量的单位是克，体积的单位是毫升。
优选的，所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液的制备方法包括如下步骤：将所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的活化菌液按1％～2％(v/v)的接种量接种至LB液体培养基中，37℃～40℃培养12h～15h，得所述草芽孢杆菌HAU-SDZ6的培养液；将所述培养液离心所得菌泥重悬在灭菌后的蒸馏水中，得所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液。
本发明中上述对数生长期的枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的培养液的OD值为4.0以上。
优选的，所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的活化菌液是将枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的甘油管冷冻保藏菌种融化，并按1％～2％(v/v)接种量接种到LB液体培养基中，37℃～40℃下培养24h～36h得到的。
本发明还提供了上述纳豆在制备减肥、降脂或抗炎保健食品中的应用。
附图说明
图1为本发明实施例4中10种不同大豆品种用枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6发酵制备为纳豆冻干粉的低剂量灌胃小鼠四周后的体重增重对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
图2为本发明实施例4中10种不同大豆品种用枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6发酵制备为纳豆冻干粉的高剂量灌胃小鼠四周后的体重增重对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；**：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.01；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
图3为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃处理四周的小鼠体重变化趋势图，其中，**：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.01；***：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.001；###：与空白对照组相比具有极显著差异p<0.001；
图4为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后的小鼠总增重对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；**：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.01；***：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.001；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；##：与空白对照组相比具有极显著差异p<0.01；
图5为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后的小鼠肝脏与肾脏重量对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
图6为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后的附睾脂肪重量对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
图7为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后小鼠肝脏组织切片的油红-O染色图；
图8为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后小鼠肝脏组织切片的油红-O染色图中阳性面积比率对比图，其中，***：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.001；###：与空白对照组相比具有极显著差异p<0.001；
图9为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后小鼠血清甘油三酯水平对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
图10为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后小鼠血清总胆固醇水平对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
图11为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后小鼠血清中脂多糖水平对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
图12为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)水平对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
图13为本发明实施例5中不同试验组(空白对照组、高脂模型组、沧豆13低剂量组、沧豆13高剂量组)灌胃四周后小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平对比图，其中，*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6发酵大豆制备纳豆的方法：
将枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的甘油管冷冻保藏菌种融化，并按1％(v/v)接种量接种到LB液体培养基中，37℃下培养48h，得活化菌液；将上述活化菌液按1％(v/v)的接种量接种至LB液体培养基中，放入摇床180r/min、37℃培养12h，得所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的培养液；将所述培养液于8000r/min离心，去除上清液，所得菌泥重悬在灭菌后的蒸馏水中，得所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液(OD值4.0以上)。
挑选颗粒饱满、无明显虫蛀损坏的沧豆13，清洗干净，将沧豆13置于纳豆机中，加入沧豆13体积3倍量的水，于20℃浸泡12h，将浸泡好的沧豆13放入高压蒸汽灭菌锅内121℃蒸煮30min，冷却至50℃以下，按照每100g蒸熟沧豆13接种10mL上述生长至对数生长期的枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6菌液的比例进行接种，在恒温恒湿培养箱内39℃发酵18h，得纳豆。
实施例2
冻干菌粉的制备：
保护剂溶液的配制：蔗糖7.5％，脱脂奶粉10％，余量去离子水，115℃高压蒸汽灭菌锅中灭菌15min；麦芽糊精12.5％，余量去离子水，121℃高压蒸汽灭菌锅中灭菌15min，混匀使用。
取处于稳定期的枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6培养液(OD值7.0以上)放置在4℃低温离心机中，8000r/min离心10min，弃去上清液，收集菌泥，向菌泥中加入1mL保护剂溶液，混合均匀，放入-80℃冰箱预冻2h，提前打开真空冷冻干燥机预冷30min，将预冻好的菌泥与保护剂溶液的混合溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥24h，得冻干菌粉。
冻干菌粉发酵纳豆的方法：
挑选颗粒饱满、无明显虫蛀损坏的沧豆13，清洗干净，将沧豆13置于纳豆机中，加入沧豆13体积3倍量的水，于20℃浸泡12h，将浸泡好的沧豆13放入高压蒸汽灭菌锅内121℃蒸煮30min，冷却至50℃以下；
将冻干菌粉加入适量无菌水混匀，按照每200g蒸熟的沧豆13加入1g冻干菌粉的比例进行接种，搅拌均匀，搅拌时用力需轻，避免戳破豆子，将接种后的大豆于39℃发酵18h，得纳豆。
实施例3
纳豆冻干粉的制作：
将发酵好的纳豆室温冷却后，放入-80℃冰箱预冻2h，提前打开真空冷冻干燥机预冷30min，将预冻好的纳豆放入真空冷冻干燥机中冻干24h，取出用粉碎机磨粉后转入真空袋抽真空，得纳豆冻干粉。
实施例4
挑选6种在河北省有较大种植面积、且已通过河北省审定的优质高产大豆品种(沧豆13、邯豆11、邯豆13、邯豆15、石豆8、冀黑豆1)和4种张家口地区农户一直种植的当地优良大豆品种(猫眼豆、绿仁黑豆、黄仁大黑豆、小扁黑豆)，以枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6为菌源，按照实施例1的方法制备纳豆，并按照实施例3的方法将纳豆制备成纳豆冻干粉。
购买7周龄雄性ICR小鼠，体重在30g～35g，将小鼠随机分成4组，每组6只小鼠。空白对照组饲喂基础维持饲料，不灌胃纳豆冻干粉；高脂模型组饲喂肥胖模型饲料(饲料配方：70％基础饲料+15％猪油+15％蔗糖)，保证小鼠每日食物及饮水充足；处理组除饲喂上述肥胖模型饲料外，每天灌胃一次纳豆冻干粉，处理组分为低剂量组和高剂量组。试验期间，每天上午对空白对照组和模型组灌胃等量蒸馏水，对处理组小鼠灌胃纳豆冻干粉溶液(用蒸馏水配制200mg/mL纳豆冻干粉溶液，根据小鼠体重计算灌胃量，低剂量组灌胃2g/kg，高剂量组灌胃4g/kg)，试验进行4周，每隔7天上午进行小鼠体重称重，第4周称重结果减去初始小鼠体重为四周小鼠增重。动物实验分组情况如表1所示。小鼠体重增加的试验结果如表2、图1-图2所示
表1动物实验分组情况
| 组别 | 试验动物数量 | 饲料类型 | 灌胃制剂 |
| 空白对照组 | 6只 | 基础维持饲料 | 蒸馏水 |
| 高脂模型组 | 6只 | 高脂饲料 | 蒸馏水 |
| 低剂量组 | 6只 | 高脂饲料 | 2g/kg纳豆冻干粉溶液 |
| 高剂量组 | 6只 | 高脂饲料 | 4g/kg纳豆冻干粉溶液 |
表2
| 组别 | 低剂量增重/g | 高剂量增重/g |
| 空白对照组 | 2.95±0.67* | 2.95±0.67* |
| 高脂模型组 | 6.7±0.51# | 6.7±0.51# |
| 沧豆13 | 3.23±0.57* | 2.35±0.77** |
| 邯豆11 | 4.47±0.59 | 6.17±0.83# |
| 邯豆13 | 5.22±0.73 | 4.69±0.41 |
| 邯豆15 | 5.3±1.2 | 3.63±1.2 |
| 石豆8 | 4.22±0.71 | 3.49±1.19 |
| 冀黑豆1 | 4.48±0.67 | 6.08±0.27# |
| 猫眼豆 | 4.64±0.35 | 4.55±0.57 |
| 绿仁黑豆 | 5.96±0.7 | 5.26±0.32 |
| 黄仁大黑豆 | 4.68±0.51 | 3.65±0.76* |
| 小扁黑豆 | 5.39±0.56 | 3.17±0.73* |
注：*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；
**：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.01；
#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05。
试验结果证明，高脂模型组四周增重显著高于空白对照组(p<0.05)，表明饲喂高脂食物的高脂模型小鼠造模成功。使用低剂量处理的小鼠中，仅灌胃用沧豆13制备的纳豆冻干粉时，处理组小鼠的体重显著低于高脂模型组(p<0.05)，灌胃用其他大豆品种(邯豆11、邯豆13、邯豆15、石豆8、冀黑豆1、猫眼豆、绿仁黑豆、黄仁大黑豆、小扁黑豆)制备的纳豆冻干粉时，处理组小鼠的体重与空白对照组和高脂模型组均无显著差异。
使用高剂量处理的小鼠中，除灌胃用沧豆13制备的纳豆冻干粉的处理组小鼠的体重极显著低于高脂模型组(p<0.01)外，灌胃用黄仁大黑豆和小扁黑豆这两种大豆制备的纳豆冻干粉时，处理组小鼠体重也均显著低于高脂模型组(p<0.05)。
以上试验结果证明，只有沧豆13制备的纳豆在低剂量使用时才具有显著降低高脂模型小鼠体重的作用，其余大豆制备的纳豆在低剂量时均不具有显著降低高脂模型小鼠体重的作用。
实施例5
本实施例考察了高脂模型小鼠在食用沧豆13制备的纳豆冻干粉后其血清甘油三酯水平、总胆固醇水平以及脂多糖、炎症因子表达量以及脂肪累积情况。
将7周龄体重在30g～35g的雄性ICR小鼠随机分成4组，饲料配方以及灌胃剂量与实施例4中方法相同，试验分组如表3所示。
表3动物实验分组情况
| 组别 | 试验动物数量 | 饲料类型 | 灌胃制剂 |
| 空白对照组 | 6只 | 基础维持饲料 | 蒸馏水 |
| 高脂模型组 | 6只 | 高脂饲料 | 蒸馏水 |
| 沧豆13低 | 6只 | 高脂饲料 | 2g/kg纳豆冻干粉溶液 |
| 沧豆13高 | 6只 | 高脂饲料 | 4g/kg纳豆冻干粉溶液 |
试验四周小鼠的体重变化趋势如表4和图3所示，各组小鼠的初始体重都保持相同水平，随着高脂饲料饲喂时间的增加，高脂模型组小鼠的体重上升趋势较为明显，空白对照组与灌胃沧豆13纳豆的处理组小鼠体重增长较为缓慢。在第四周高脂模型组小鼠体重极显著高于空白对照组(p<0.001)，灌胃低剂量沧豆13纳豆组小鼠的体重极显著低于高脂模型组(p<0.01)，灌胃高剂量沧豆13纳豆组的小鼠体重也极显著低于高脂模型组(p<0.001)，且灌胃低剂量沧豆13纳豆组小鼠和灌胃高剂量沧豆13纳豆组小鼠的体重均与空白对照组无显著差异。
表4
注：*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；
**：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.01；
***：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.001；
#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
##：与空白对照组相比具有极显著差异p<0.01；
###：与空白对照组相比具有极显著差异p<0.001。
试验四周后小鼠增加总体重结果如图4所示。与空白对照组相比，高脂模型组小鼠的体重极显著升高(p<0.01)，灌胃低剂量沧豆13纳豆组小鼠的体重增加极显著低于高脂模型组(p<0.01)，灌胃高剂量沧豆13纳豆组小鼠的体重增加极显著低于高脂模型组(p<0.001)，两组均与空白对照组无显著差异。另外，灌胃高剂量沧豆13纳豆组与灌胃低剂量沧豆13纳豆组的小鼠间体重也无显著差异。
四周后，所有小鼠禁食不禁水12h，对小鼠进行麻醉后，采用眼球取血，取血后脱颈处死小鼠。取小鼠的肝脏、肾脏以及附睾脂肪进行称重记录。试验结果如表5所示，其中，肝脏和肾脏试验结果对比图如图5所示，附睾脂肪重量的试验结果对比图如图6所示。
表5
| 重量/g | 空白对照组 | 高脂模型组 | 沧豆13低 | 沧豆13高 |
| 肝脏 | 1.42±0.12* | 1.68±0.16# | 1.46±0.13* | 1.42±0.09* |
| 肾脏 | 0.54±0.05* | 0.66±0.06# | 0.53±0.05* | 0.50±0.09* |
| 附睾脂肪 | 0.58±0.19* | 0.98±0.14# | 0.73±0.13 | 0.54±0.13* |
注：*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；
#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
试验结果证明，高脂模型组小鼠相比于空白对照组，其肝脏和肾脏的重量显著增加(p<0.05)；灌胃沧豆13纳豆组的小鼠，其肝脏和肾脏重量则可以恢复到正常水平。
高脂模型组的附睾脂肪重量显著高于空白对照组(p<0.05)，用高剂量沧豆13纳豆灌胃处理的小鼠，其附睾脂肪积累量显著减少(p<0.05)，与空白对照组无差异。
据相关文献报道，饲喂高脂饲料会导致小鼠肝脏细胞脂肪滴增加。为了解本发明建立的高脂小鼠模型的肝脏细胞是否有脂肪滴积累，以及灌胃沧豆13纳豆冻干粉后的小鼠肝脏细胞中脂肪滴多少以及分布情况，对试验小鼠进行解剖，肝脏称重后，取出一叶完整没有任何破损的肝叶放入加满组织固定液的10mL试管中保存，采用油红-O染色法制作组织切片，其中，油红O-染料可将肝脏细胞中的脂肪滴染成红色，试验结果如图7所示。由图7可以看出，高脂模型组中肝脏脂肪滴数目显著高于空白对照组和灌胃沧豆13纳豆高剂量组的小鼠肝脏中脂肪滴数。
阳性面积比率结果如表8和图8所示，结果表明，空白对照组小鼠和灌胃沧豆13纳豆高剂量组的小鼠，其肝脏细胞中的脂肪滴数量比高脂模型组极显著减少(p<0.001)，而沧豆13纳豆低剂量组的小鼠肝脏中仍可见到脂肪滴积累，阳性面积比率与高脂模型组小鼠无显著差异。该实验结果表明，在喂食高脂食物的小鼠灌胃沧豆13纳豆冻干粉时，仅高剂量能显著降低小鼠肝脏细胞的脂肪积累，低剂量则无效。
表8
| 组别 | 阳性面积比率％ |
| 空白对照组 | 0.017±0.005*** |
| 高脂模型组 | 0.138±0.03### |
| 沧豆13低 | 0.113±0.02### |
| 沧豆13高 | 0.030±0.01*** |
注：***：与高脂模型组相比具有极显著差异p<0.001；
###：与空白对照组相比具有极显著差异p<0.001。
4周后，小鼠禁食不禁水12h，取小鼠血液，4℃，3000rpm/min离心20min，取血清分装，-20℃冰箱保存。购买甘油三脂(TG)和总胆固醇(TC)的试剂盒，按照试剂盒说明书所述的方法进行反应，用酶标仪对样本进行检测。
小鼠血清甘油三酯和总胆固醇的试验结果如表9所示，其中，血清甘油三酯的试验结果对比图如图9所示，小鼠血清总胆固醇水平的试验结果对比图如图10所示。
表9
| 指标 | 空白对照组 | 高脂模型组 | 沧豆13低 | 沧豆13高 |
| 甘油三酯(mmol/L) | 0.75±0.06* | 1.5±0.18# | 1.07±0.17*# | 0.96±0.14* |
| 总胆固醇(mmol/L) | 4.05±0.48* | 5.31±0.36# | 4.36±0.44* | 4.46±0.34* |
注：*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；
#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05；
*#：与空白对照组、高脂模型组相比均具有极显著差异p<0.01；
试验结果证明，高脂模型组小鼠的血清甘油三酯水平显著高于空白对照组(p<0.05)。灌胃低剂量沧豆13纳豆冻干粉的小鼠，相比高脂模型组血清甘油三酯水平显著降低(p<0.05)，但仍显著高于空白对照组(p<0.05)，表明灌胃低剂量的沧豆13纳豆冻干粉时可有效干预高脂饲料喂食小鼠的血清甘油三酯的水平，但是不能使其恢复到正常水平。灌胃高剂量沧豆13纳豆冻干粉的小鼠，其血清甘油三酯水平显著低于高脂模型组小鼠(p<0.05)，且与空白对照组小鼠无显著差异，表明给喂食高脂食物的小鼠灌胃高剂量沧豆13纳豆冻干粉时，可显著降低小鼠血清中的甘油三酯水平，并能使其恢复到空白对照组的水平。
高脂模型组小鼠的血清总胆固醇水平显著高于空白对照组(p<0.05)，同时也显著高于灌胃低剂量或灌胃高剂量沧豆13纳豆冻干粉的小鼠血清总胆固醇水平(p<0.05)。该结果表明，给喂食高脂饲料的小鼠灌胃沧豆13纳豆冻干粉时，无论灌胃高剂量还是低剂量，均能显著降低小鼠血清中的总胆固醇水平。
为了解沧豆13纳豆冻干粉对喂食高脂食物小鼠炎症因子的影响，采用ELISA的方法用酶联免疫试剂盒检测血清中的脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)、促炎因子白细胞介素6(interleukin 6，IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor，TNF)水平。LPS是一种内毒素，当其作用于人类或其他动物细胞时会表现出多种生物活性。脱落的LPS通过存在于目标细胞的细胞膜中的Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)来表现其作用。TLR家族与炎性细胞因子的表达有关，在自然免疫中起着重要作用。试验结果如表10所示，其中，脂多糖检测的试验结果对比图如图11所示，IL-6测定结果对比图如图12所示，TNF-α测定结果对比图如图13所示。
表10
| 指标 | 空白对照组 | 高脂模型组 | 沧豆13低 | 沧豆13高 |
| 脂多糖(EU/L) | 27.91±1.20* | 30.09±2.03# | 26.67±1.29* | 25.92±1.89* |
| 白细胞介素6(pg/mL) | 89.74±1.71* | 100.64±5.48# | 89.09±6.64* | 92.25±2.71* |
| 肿瘤坏死因子α(pg/mL) | 474.32±11.57* | 534.66±18.64# | 480.83±14.9* | 484.5±9.1* |
注：*：与高脂模型组相比具有显著差异p<0.05；
#：与空白对照组相比具有显著差异p<0.05。
试验结果表明，空白对照组小鼠的LPS显著低于高脂模型组(p<0.05)，灌胃低剂量和灌胃高剂量沧豆13纳豆冻干粉的小鼠的LPS均显著低于高脂模型组(p<0.05)，且灌胃高剂量与灌胃低剂量沧豆13纳豆冻干粉的小鼠体内的LPS无显著差异。
促炎因子是一类由机体的免疫和非免疫细胞合成和分泌的小分子多肽类物质，它们调节多种细胞生理功能，并在创伤、疼痛、感染等应激过程中发挥重要作用，白细胞介素-6和肿瘤坏死因子α均为促炎因子。本发明对试验小鼠IL-6和TNF-α分别进行测定，IL-6测定结果如图12所示，TNF-α测定结果如图13所示。
试验结果表明，与高脂模型组小鼠相比，空白对照组小鼠、灌胃高剂量和灌胃低剂量沧豆13纳豆冻干粉的小鼠体内IL-6和TNF-α水平均显著降低(p<0.05)，且灌胃高剂量和灌胃低剂量小鼠间无显著差异，灌胃高剂量和灌胃低剂量小鼠也与空白对照组小鼠间无显著差异。该结果表明，给喂食高脂饲料的小鼠灌胃沧豆13纳豆冻干粉时，无论灌胃低剂量还是高剂量，均能显著降低小鼠体内的炎症因子IL-6和TNF-α的水平，且高剂量与低剂量之间无显著性差异。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 河北农业大学
<120> 一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用
<130> 2021.12.30
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1451
<212> DNA
<213> 16S rDNA
<400> 1
cctggcgggc gtgctataca tgcaagtcga gcggacagat gggagcttgc tccctgatgt 60
tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt aacctgcctg taagactggg ataactccgg 120
gaaaccgggg ctaataccgg atggttgttt gaaccgcatg gttcaaacat aaaaggtggc 180
ttcggctacc acttacagat ggacccgcgg cgcattagct agttggtgag gtaacggctc 240
accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca 300
cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga 360
cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggtt ttcggatcgt aaagctctgt tgttagggaa 420
gaacaagtac cgttcgaata gggcggtacc ttgacggtac ctaaccagaa agccacggct 480
aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg aattattggg 540
cgtaaagggc tcgcaggcgg tttcttaagt ctgatgtgaa agcccccggc tcaaccgggg 600
agggtcattg gaaactgggg aacttgagtg cagaagagga gagtggaatt ccacgtgtag 660
cggtgaaatg cgtagagatg tggaggaaca ccagtggcga aggcgactct ctggtctgta 720
actgacgctg aggagcgaaa gcgtggggag cgaacaggat tagataccct ggtagtccac 780
gccgtaaacg atgagtgcta agtgttaggg ggtttccgcc ccttagtgct gcagctaacg 840
cattaagcac tccgcctggg gagtacggtc gcaagactga aactcaaagg aattgacggg 900
ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag 960
gtcttgacat cctctgacaa tcctagagat aggacgtccc cttcgggggc agagtgacag 1020
gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 1080
gcaacccttg atcttagttg ccagcattca gttgggcact ctaaggtgac tgccggtgac 1140
aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac 1200
acgtgctaca atggacagaa caaagggcag cgaaaccgcg aggttaagcc aatcccacaa 1260
atctgttctc agttcggatc gcagtctgca actcgactgc gtgaagctgg aatcgctagt 1320
aatcgcggat cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1380
caccacgaga gtttgtaaca cccgaagtcg gtgaggtaac cttttaggag ccagccgccg 1440
aaggtaccag a 1451
Claims (7)
1.一种具有减肥、辅助降脂功效的纳豆，其特征在于，由沧豆13经枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HAU-SDZ6发酵得到，所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的保藏编号为CGMCCNO. 24151。
2.如权利要求1所述的具有减肥、辅助降脂功效的纳豆的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将培养至对数生长期的枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液接种至蒸熟沧豆13中，39℃-44℃发酵18h-22h，得纳豆。
3.如权利要求2所述的具有减肥、辅助降脂功效的纳豆的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液的接种量与蒸熟沧豆13的体积质量比为（8-12）mL:100g。
4.如权利要求2所述的具有减肥、辅助降脂功效的纳豆的制备方法，其特征在于，所述蒸熟沧豆13是由沧豆13与水按照重量体积比为1:2.5-1:3.5在18℃-20℃浸泡12h-14h，然后于115℃-125℃蒸制30min-35min得到的；其中，重量的单位是克，体积的单位是毫升。
5.如权利要求2所述的具有减肥、辅助降脂功效的纳豆的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液的制备方法包括如下步骤：将所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的活化菌液按1%-2%（v/v）的接种量接种至LB液体培养基中，37℃-40℃培养12h-15h，得所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的培养液；将所述培养液离心所得菌泥重悬在灭菌后的蒸馏水中，得所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的菌液。
6.如权利要求5所述的具有减肥、辅助降脂功效的纳豆的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的活化菌液是将枯草芽孢杆菌HAU-SDZ6的甘油管冷冻保藏菌种融化，并按1%-2%(v/v)接种量接种到LB液体培养基中，37℃-40℃下培养24h-36h得到的。
7.权利要求1所述的纳豆在制备减肥或辅助降脂保健食品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111677511.3A CN114304511B (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111677511.3A CN114304511B (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114304511A CN114304511A (zh) | 2022-04-12 |
| CN114304511B true CN114304511B (zh) | 2023-06-09 |
Family
ID=81021961
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111677511.3A Active CN114304511B (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114304511B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007209285A (ja) * | 2006-02-10 | 2007-08-23 | Miki Kiuchi | バチルス・ズブチリス菌株およびこれを用いた納豆の製造方法 |
| CN103243040A (zh) * | 2012-02-13 | 2013-08-14 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种枯草芽孢杆菌lsse-22及其应用 |
| CN109251877A (zh) * | 2018-10-13 | 2019-01-22 | 北京首佳利华科技有限公司 | 一种具有减脂等功能的纳豆芽孢杆菌Bn-SJLH001益生作用及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170296608A1 (en) * | 2016-04-19 | 2017-10-19 | Hsiu-Hsia Lin | Composition of decreasing the accumulation of fat and use thereof |
-
2021
- 2021-12-31 CN CN202111677511.3A patent/CN114304511B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007209285A (ja) * | 2006-02-10 | 2007-08-23 | Miki Kiuchi | バチルス・ズブチリス菌株およびこれを用いた納豆の製造方法 |
| CN103243040A (zh) * | 2012-02-13 | 2013-08-14 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种枯草芽孢杆菌lsse-22及其应用 |
| CN109251877A (zh) * | 2018-10-13 | 2019-01-22 | 北京首佳利华科技有限公司 | 一种具有减脂等功能的纳豆芽孢杆菌Bn-SJLH001益生作用及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114304511A (zh) | 2022-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109666615A (zh) | 一种益生菌组合物及其应用 | |
| CN112244299B (zh) | 一种具有缓解非酒精性脂肪肝功能的益生菌组合物及其制备方法 | |
| CN109628358A (zh) | 一种复合益生菌及其应用 | |
| KR101507470B1 (ko) | 유용 미생물을 이용한 곡물의 고상 발효 방법 및 이로부터 얻어지는 기능성 발효 조성물 | |
| CN112586744B (zh) | 一种可控制体重的益生菌片剂及其制备方法 | |
| CN112535700B (zh) | 一种基于乳杆菌的减肥粉剂及其制备方法 | |
| CN113337430A (zh) | 一株新型的副干酪乳杆菌nsl0201及其应用 | |
| CN109593678B (zh) | 长双歧杆菌yh295及其在制备降低腹型肥胖风险产品中的应用 | |
| CN110521785A (zh) | 益生菌发酵功能性食品及其制备 | |
| CN117264829A (zh) | 一种用于防治高胆固醇血症的植物乳杆菌及其发酵制品与应用 | |
| CN110538199A (zh) | 一种含有枯草芽孢杆菌的减肥组合物及其制备方法和应用 | |
| CN105132310B (zh) | 一株冷水鱼益生菌芽孢杆菌菌株及其用途 | |
| CN114304511B (zh) | 一种具有减肥降脂抗炎功效的纳豆及其制备方法与应用 | |
| CN116555075B (zh) | 一株植物乳植杆菌jf1及其在制备抗衰老食品药品中的应用 | |
| CN104975051A (zh) | 一种富集桑叶中gaba的方法 | |
| CN112515077A (zh) | 功能性黑枸杞发酵饮品及其制备方法和应用 | |
| CN105274032B (zh) | 一种拮抗空肠弯曲杆菌及抑制其flaA基因表达的罗伊氏乳杆菌 | |
| CN114921361B (zh) | 具有改善酒精性肝损伤的植物乳杆菌zy08及其应用 | |
| KR100910657B1 (ko) | 신규한 락토바실러스 브츠네리 및 이의 용도 | |
| CN102919956A (zh) | 调理人体消化系统的营养液及其制备方法 | |
| CN114424815B (zh) | 一种具有解酒护肝功效的发酵黑豆芽粉及其制备方法 | |
| KR100606241B1 (ko) | 항당뇨의 효과가 증강된 홍삼청국장 제조방법 | |
| CN114533768A (zh) | 乳酸杆菌益生菌CGMCC No.1.13855在制备糖尿病治疗药物中的应用 | |
| KR102414355B1 (ko) | 김치로부터 분리된 유산균을 이용한 미강 발효물 제조방법 및 그로부터 제조된 미강 발효물 | |
| CN113287699A (zh) | 一种沙枣酵素及其制备工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |